AVALIAÇÃO DA FOTOBIOMODULAÇÃO COM LASER AsGaAl (670nm) SOBRE CULTIVO DE FIBROBLASTO EQUINO

A fotobiomodulação é uma terapia não invasiva, de baixo custo que envolve o uso de luz no espectro infravermelho próximo ou vermelho, com baixa potência de energia para promover ativação e modulação de mecanismos celulares. Nos últimos anos, o interesse pelo emprego dessa ferramenta na medicina veterinária tem crescido. Entre os efeitos clínicos já conhecidos tem-se a produção de analgesia, redução de processo inflamatório e edema, e, regeneração tecidual. Objetiva-se neste trabalho avaliar a concentração, viabilidade, mutagenicidade e genotoxicidade de fibroblasto equino oriundo do tecido cutâneo, expostos a irradiação laser de AsGaAl, comprimento de onda de 670 nm e potência de 30 mW, analisadas 24 horas após uma e duas irradiações, com densidades de energia de 0,5, 2, 5, 10 J/cm². Para tanto, foram empregados os testes de contagem direta em câmara de Neubauer, teste de micronúcleo e ensaio cometa. Os dados referentes a concentração e viabilidade e celular ensaio cometa foram analisados pela comparação de médias por ANOVA, seguida do teste de Tukey quando necessário e aos dados do teste de micronúcleo aplicou-se o Qui-quadrado, todos testes aplicados ao nível de significância de 5%. Conclui-se que o laser nos parâmetros ópticos e densidades de energia selecionas possui característica antimutagênica, e a depender da densidade de energia selecionada pode induzir a viabilidade e proliferação celular, e, comportar-se como agente citoprotetor, reduzindo danos na molécula de DNA.

The photobiomodulation is a non-invasive therapy, with low cost, using the laser or led light, under the infrared near or red spectrum in low potency densities, in order to promote the activation and modulation of some cellular mechanisms. The laser therapy is commonly used to induce analgesia, reduce inflammatory process and edema, and, to hasten the regeneration of injured tissues as, skin wounds, tendon and bones lesions. The present study aimed to investigate the effects of the photobiomodulation at equine fibroblast primary culture. The fibroblast culture cells were divided in 5 groups (10000 cells/each): control, and irradiated groups with different energy densities 0.5J/cm², 2J/cm², 5J/cm² and 10J/cm². The cells were cultured in a 24 well dish plate, and the groups received one or two laser irradiation 24 hours apart. The samples were obtained after 24h of each irradiation, and before for control. To proceed the cell concentration were used the direct counting with the NeuBauer chamber, trypan blue were applied to access the cellular viability, also was performed the DNA integrity test using the comet assay and, for nuclear alterations were made the Micronucleus test. The viability, concentration and Comet data were analyzed with ANOVA, followed by Tukey test when necessary, and, the chi-square test was used to the micronucleus data, the significance level was 5% in all statistical tests applied. Was concluded that the laser used in the presented optical and energy density parameters had shown some anti-mutagenic effect, and, according the energy density, can interfere at the cellular viability and proliferation. In this way, the laser act as a citoprotector agent, by the reduced DNA damage observed at the laser irradiated equine fibroblast cultured cells.

Low-level laser on femoral growth plate in rats / Laser terapêutico de baixa potência na placa de crescimento de ratos

PURPOSE: To determine the influence of low-level laser therapy on femoral growth plate in rats. METHODS: Thirty male Wistar rats aged 40 days were divided into two groups, G1 and G2. In G1 the area of the distal growth plate of the right femur was irradiated at one point using GaAlAs laser 830 nm wavelength, output power of 40 mW, at an energy density of 10 J/cm². The irradiation was performed daily for a maximum of 21 days. The same procedure was done in G2, but the probe was turned off. Five animals in each group were euthanized on days 7, 14 and 21 and submitted to histomorphometric analysis. RESULTS: In both groups the growth plate was radiographically visible at all moments from both craniocaudal and mediolateral views. On the 21st day percentage of femoral longitudinal length was higher in G2 than G1 compared to basal value while hypertrophic zone chondrocyte numbers were higher in G1 than G2. Calcified cartilage zone was greater in G1 than in G2 at all evaluation moments. Angiogenesis was higher in G1 than in G2 at 14th and 21st days. CONCLUSION: The low-level laser therapy negatively influenced the distal femoral growth plate.(AU)

OBJETIVO: Determinar a influência do Laser Terapêutico de Baixa Potência sobre a placa de crescimento de ratos. MÉTODOS: Trinta ratos Wistar machos com 40 dias de idade foram divididos em dois grupos, G1 e G2. O grupo G1 foi submetido à irradiação com laser GaAlAs 830 nm, potência de saída de 40 mW, e densidade de energia de 10 J/cm2. A irradiação foi aplicada diariamente por um período máximo de 21 dias. O mesmo procedimento foi realizado no grupo G2, com a probe desativada. Cinco animais em cada grupo foram sacrificados nos dias 7, 14 e 21 e submetidas à análise histomorfométrica. RESULTADOS: Em ambos os grupos, o disco fisário esteve radiograficamente visível em todos os momentos nas incidências craniocaudal e médio-lateral. No 21º dia a porcentagem de comprimento longitudinal do fêmur foi maior em G1 que em G2 em relação ao valor basal, e o número de condrócitos da zona hipertrófica foi maior em G1 que em G2. A zona de cartilagem calcificada estava maior em G1 em relação a G2 em todos os momentos de avaliação. A angiogênese foi maior em G1 que em G2 nos 14º e 21º dias. CONCLUSÃO: A terapia com laser terapêutico de baixa potência influenciou negativamente o disco fisário distal do fêmur de ratos.(AU)

The effects of different doses of 670 nm diode laser on skin flap survival in rats / O efeito de diferentes doses de laser de diodo 670 nm na viabilidade de retalho cutâneo randômico em ratos

PURPOSE: To investigate the effects of different low-level laser therapy (LLLT) doses on random skin flap rats. METHODS: Forty Wistar rats were randomly divided in four groups. The control group (CG) was not irradiated. The experimental groups were irradiated with a diode laser 670 nm with different energies per point: group 2 (G2) with 0.06 J; group 3 (G3) 0.15 J and group 4 (G4) 0.57 J. The three groups were irradiated in 12 equally distributed points in the cranial skin flap portion. They were submitted to the irradiation during the immediate, first and second postoperative days. The necrosis area was evaluated in the seventh postoperative day. RESULTS: The CG shows 49.35 percent of necrosis area in the skin flap; G2, 39.14 percent; G3, 47.01 percent and G4, 29.17 percent respectively. There was a significantly difference when G4 was compared with CG`s skin flap necrosis area. CONCLUSION: The low-level laser therapy diode 670 nm with 0.57 J energy per point increases the survival in randomic skin flap rats.(AU)

OBJETIVO: Investigar os efeitos de diferentes doses de laserterapia de baixa intensidade na viabilidade de retalhos cutâneos randômicos em ratos. MÉTODOS: Quarenta ratos Wistar foram randomizadamente distribuídos em quatro grupos. O grupo controle (GC) não foi irradiado. Os animais dos grupos experimentais foram irradiados por laser de diodo (670 nm) com as seguintes energias ofertadas por ponto: grupo 2 (G2) 0,06J; grupo 3 (G3) 0,15 J e grupo 4 (G4) 0,57 J. Os três grupos foram irradiados em 12 pontos igualmente distribuídos na porção cranial do retalho cutâneo. Todos os animais dos grupos 2, 3 e 4 foram submetidos ao protocolo de irradiação por três dias consecutivos, iniciando no pós-operatório imediato. A área necrótica foi avaliada no sétimo dia pós-operatório. RESULTADOS: A porcentagem de área necrótica apresentou-se da seguinte forma, nos diferentes grupos: GC= 49,35 por cento, G2= 39,14 por cento, G3= 47,01 e G4= 29,17 por cento. Foi encontrada diferença estatisticamente significante quando se compararam os dados entre GC e G4. CONCLUSÃO: A irradiação com laser de diodo (670 nm) de baixa intensidade, com oferta de 0,57 J de energia por ponto influenciou positivamente a viabilidade de retalhos cutâneos randômicos em ratos.(AU)

Healing activity of laser InGaAlP (660nm) in rats / Atividade cicatrizante do laser AlGaInP (660nm) em ratos

PURPOSE: To evaluate the effect the healing activity of diode laser Indium Gallium Aluminum Phosphorus (InGaAlP) ë660nm on healing of surgical wounds in rats. METHODS: Fifty-four female Wistar rats were used, divided into three groups (n=18) and subdivided into three subgroups (n=6) to be studied in 5, 10 and 15th days after surgical procedures. The wound was induced in the dorsal-cervical using punch. The lesions were irradiated on alternate days with InGaAlP laser, the energy densities of 3J/cm2 (L3) or 6J/cm2 (L6). The control group received no irradiation. At 5, 10 and 15th days after surgery the animals were euthanized and the repair area was removed and histological sections were stained with hematoxylin-eosin and picrossírius. We evaluated macroscopic and histological lesions in the times cited, as well as morphometric analysis of angiogenesis and collagen content. RESULTS: The wound healing activity InGaAlP laser was evidenced by increased angiogenesis group L3 and L6 in relation to control group (CG) at the 5th day (p=0.0001) and decreased polymorphonuclear infiltrate and hemorrhage (p=0.045 and p=0.07 respectively) in the groups L3 and L6 in relation to control group (GC). On the 10 and 15th days was also observed in groups treated with laser L3 and L6 stimulation was pronounced fibroplasia (p=0.0003 and p=0.034 respectively) when compared with the control group (CG). CONCLUSION: The InGaAlP laser acted positively on the healing of skin wounds in rats.(AU)

OBJETIVO: Avaliar a atividade cicatrizante do laser diodo Alumínio Gálio Índio Fósforo (AlGaInP), ë660nm em feridas cutâneas induzida em ratos. MÉTODOS: Foram utilizados 54 ratos Wistar, fêmeas, divididos em três grupos (n=18) e subdivididos em três subgrupos (n=6) animais para serem estudados no 5, 10 e 15º dias após o procedimento cirúrgico. A ferida foi induzida em região dorso-cervical utilizando punch. As lesões foram irradiadas em dias alternados com laser AlGaInP, nas densidades de energia de 3J/cm2 (L3) ou 6J/cm2(L6). O grupo controle não recebeu irradiação. No 5,10 e 15º dia após o procedimento cirúrgico os animais foram eutanasiados e a área de reparo foi removida e os cortes histológicos foram corados com hematoxilina-eosina e picrossírius. Foram avaliados aspectos macroscópicos e histológicos das lesões nos tempos citados, bem como análises morfométricas da angiogênese e do conteúdo de colágeno. RESULTADOS: A atividade cicatrizante do laser AlGaInP foi evidenciada pelo aumento da angiogênese do grupo L3 e L6 em relação ao grupo controle (GC) no 5º dia (p=0,0001) e diminuição do infiltrado de polimorfonucleares e hemorragia (p=0,045 e p=0,007 respectivamente) dos grupos L3 e L6 em relação ao controle. No 10 e 15ºdias observou-se também que nos grupos tratados com laser L3 e L6 houve estimulo acentuado a fibroplasia(p=0,0003 e p=0,034 respectivamente), quando comparados ao grupo controle (GC). CONCLUSÃO: O laser AlGaInP atuou de forma positiva sobre a cicatrização de feridas cutâneas em ratos.(AU)

In vitro effect of 470 nm LED (Light Emitting Diode) in keloid fibroblasts / Efeito in vitro do LED (Light Emitting Diode) de 470 nm em fibroblastos de queloide

Purpose: To quantify keloid fibroblasts after irradiation with 470nm blue LED, in vitro. Methods: Fibroblasts from keloid and adjacent skin have been obtained from 6 patients. Cells have been cultivated and maintained in DMEM culture medium. In Petri dishes, they were irradiated with energy doses of 6J, 12J and 18J. After 24 h, counting was done by the average of the triplicates for each sample. Results: There were no significant differences in the number of irradiated keloid fibroblasts at the studied doses (p=0.261). In adjacent skin fibroblasts, differences were observed (p=0.025) concerning the doses of 18 J and 6 J (p=0.03). Conclusions: There was a reduction in the number of adjacent skin fibroblasts irradiated with 470nm blue LED at the energy dose of 18 J compared to the ones irradiated at the energy dose of 6 J. There were no changes in keloid fibroblasts counting at any of the doses applied, 24 h after irradiation.(AU)

Objetivo: Quantificar fibroblastos de queloide apos irradiacao com LED azul de 470nm, in vitro. Metodos: Foram obtidos fibroblastos de queloide e pele adjacente, de seis pacientes. As celulas foram cultivadas e mantidas em meio de cultura DMEM. Em placas de Petri, receberam irradiacao com doses de energia de 6J, 12J e 18J. Apos 24 horas a contagem foi feita pela media da triplicata para cada amostra. Resultados: Nao houve diferenca na quantidade de fibroblastos de queloide irradiados nas doses estudadas (p=0,261). Observou-se diferenca nos fibroblastos de pele adjacente (p=0,025), com relacao as doses de 18 J e 6 J (p=0,03). Conclusoes: Houve reducao dos fibroblastos de pele adjacente irradiados com LED azul de 470 nm na dose de energia de 18 J em relacao a dose de 6 J. Nao houve alteracao na quantidade de fibroblastos de queloide nas doses aplicadas apos 24 horas da irradiacao.(AU)

Histological analysis of low-intensity laser therapy effects in peripheral nerve regeneration in Wistar rats / Avaliacao histologica dos efeitos da laserterapia de baixa potencia sobre os processos de regeneracao nervosa periferica em ratos Wistar

Purpose: Analyze the influence of low-intensity laser therapy in the sciatic nerve regeneration of rats submitted to controlled crush through histological analysis. Methods: Were used 20 Wistar rats, to analyze the influence of low-intensity laser therapy in the sciatic nerve regeneration, where the injury of the type axonotmesis was induced by a haemostatic clamp Crile (2nd level of the rack). The animals were randomly distributed in 2 groups. Control group (CG n = 10) and Laser group (LG n = 10). These were subdivided in 2 subgroups each, according to the euthanasia period: (CG14 _ n = 5 and CG21 _ n = 5) and (LG14 _ n = 5 and LG21 _ n = 5). At the end of treatment, the samples were removed and prepared for histological analysis, where were analyzed and quantified the following findings: Schwann cells, myelinic axons with large diameter and neurons. Results: In the groups submitted to low-intensity laser therapy, were observed an increase in the number of all analyzed aspects with significance level. Conclusion: The irradiation with low intensity laser (904nm) influenced positively the regeneration of the sciatic nerve in Wistar rats after being injured by crush (axonotmesis), becoming the nerve recovery more rapid and efficient.(AU)

Objetivo: Verificar a influencia da terapia com laser de baixa potencia na regeneracao histologica do nervo ciatico de ratos submetidos a neuropraxia controlada. Metodos: Foi utilizada a amostra de 20 ratos da linhagem Wistar, para verificar a influencia da terapia com laser de baixa intensidade na regeneracao nervosa periferica, onde a lesao do tipo axoniotmese foi induzida por meio de preensao com pinca hemostatica de Crile. Os animais foram distribuidos randomicamente dois grupos. Grupo controle (CG n = 10), e Grupo laser (LG n = 10). Cada um destes grupos foi subdividido em dois subgrupos dependendo do periodo da eutanasia: (CG14 - n = 5 e CG21 - n = 5) e (LG14 - n = 5 e LG21 - n = 5). Ao final do tratamento, amostras do nervo foram retiradas e analisadas histologicamente, nas quais foi adotado na pesquisa a analise do numero de neuronios, de celulas de Schwann (CS) e de axonios mielinicos de grande diametro. Resultados: Nos grupos submetidos a terapia com laser de baixa potencia foi observado aumento do numero de todos os aspectos analisados com diferenca estatisticamente significante. Conclusao: A irradiacao com o laser de baixa intensidade (904nm) influenciou positivamente na regeneracao do nervo ciatico de ratos da linhagem Wistar pos neuropraxia controlada (axonotmese), tornando a recuperacao nervosa mais rapida e eficiente.(AU)

Influence of ingaalp laser (660nm) on the healing of skin wounds in diabetic rats / Influência do laser ingaalp (660nm) na cicatrização de feridas cutâneas em ratos diabéticos

PURPOSE: To determine the influence of low-power laser (660 nm) on the collagen percentage and macrophages in skin wounds in diabetic rats. METHODS: 30 male Wistar rats were used, distributed in two groups: laser treated diabetic (n= 15); untreated diabetic (n = 15). The diabetes was induced by intravenous injection of alloxan into the dorsal vein of the penis, at a rate of 0.1 ml of solution per 100 g of body weight. A wound was made on the back of all the animals. Groups 2 were treated with Aluminium Gallium Indium Phosphide - InGaAlP type diode laser (Photon Laser III DMC®) with a continuous output power of 100 mW and wavelength (?) of 660 nm (4 J/cm²) for 24 s. five animal from each group was sacrificed on the 3rd, 7th and 14th days after wounding. Samples were taken, embedded in paraffin, stained with hematoxylin-eosin, Masson's trichrome, and immunohistochemical macrophage. morphometrically analyzed using the Image Pro Plus 4.5 software. The percentages of collagen fibers and macrophages were determined from the samples from the euthanasia animals. RESULTS: The data were treated statistically using analysis of variance (ANOVA) and the Post-hocTukey test. The significance level was set at 0.05 or 5 percent. CONCLUSION: The low-power laser (660 nm) was shown to be capable of influencing the collagen percentage in skin wounds by increasing the mean quantity of collagen fibers and macrophages.(AU)

OBJETIVO: Determinar a influência do diodo laser InGaAlP (660 nm) sobre o percentual de colágeno e macrófagos em feridas cutâneas de ratos diabéticos. MÉTODOS: Para tanto 30 ratos machos Wistar foram distribuídos em dois grupos: diabético tratado com laser (n=15), diabético não tratado (n = 15). O diabetes foi induzido por injeção intravenosa de aloxana na veia dorsal do pênis, a uma taxa de 0,1 ml de solução por 100 g de peso corporal. A lesão foi confeccionada no dorso de todos os animais utilizando um punch de 8mm. 2 grupos foram tratados com o diodo laser arsenieto de gálio e alumínio dopado com, fosforeto de índio - InGaAlP (tipo Photon Laser III DMC®) com uma potência contínua de 100 mW e comprimento de onda (?) de 660 nm (4 J/cm²) por 24 s. cinco animais de cada grupo foi sacrificado no 3, 7 e 14 dias após a lesão. As amostras obtidas foram emblocadas em parafina, coradas com hematoxilina-eosina, tricrômico de Masson, e para a analise dos macrófagos foi realizado um imunohistoquímico. Os resultados foram avaliados morfometricamente pelo programa Image Pro Plus 4.5. RESULTADOS: Os dados foram tratados estatisticamente pela análise de variância (ANOVA) e pós-teste de Tukey. O nível de significância foi fixado em 0,05 ou 5 por cento. CONCLUSÃO: O laser de baixa potência (660 nm) mostrou-se capaz de influenciar o percentual de colágeno em feridas cutâneas, aumentando a quantidade média de fibras colágenas e macrófagos.(AU)

Evaluation of low intensity laser's action on silicone mammary implant pseudocapsules in rats / Avaliação do laser de baixa intensidade sobre a pseudocápsula de implantes mamários de silicone em ratos

PURPOSE: To evaluate the effect of low intensity laser on the pseudocapsula contraction that occurs around silicone implants. METHODS: 60 male rats divided in two experimental groups received a silicone implant in the subcutaneous of the dorsal region. Group I: animals received implants in the subcutaneous dorsal region and did not receive any treatment; Group II: animals received seven irradiation sessions with low intensity laser after they had received subcutaneous implants. Thirty, 60 and 180 days after the surgery, tonometric evaluation of the implants was conducted. After that, the animals were sacrificed, study material was removed and prepared for histological examination. The thickness of the pseudocapsule and the inflammatory reaction were morphometrically quantified. Data obtained were statistically analyzed using the Variance method, and Tukey's Test(P<0.0 5). RESULTS: Group II animals had significant lower pressure. The histological study did not show a significant difference between the groups, but only a higher number of swollen vessels in Group II. The thickness of pseudocapsule around Group II's implants lower than in Group I. CONCLUSION: The low intensity laser modify tissue's reparation process around the implants suggesting it may be useful to model contractures that are formed around silicone implants.(AU)

OBJETIVO: Avaliar o efeito do laser de baixa intensidade sobre a contração da pseudocápsula que ocorre ao redor de implantes de silicone. MÉTODOS: 60 ratos machos divididos em dois grupos receberam implante de silicone. Grupo I: implante no subcutâneo da região dorsal, sem tratamento após a cirurgia; Grupo II: animais receberam sete sessões de irradiação com laser de baixa intensidade após o implante. Trinta, 60 e 180 dias após a cirurgia, foi feita a tonometria dos implantes, Em seguida, os animais foram sacrificados, removendo-se o material de estudo que foi preparado para exame histológico, avaliando-se morfometricamente a espessura da pseudocápsula e a reação inflamatória. A análise estatistica pela técnica da Análise de Variância e Teste de Tukey (P<0.0 5). RESULTADOS: Pressões significativamente menores foram encontradas nos animais do grupo Grupo II. O estudo histológico não mostrou diferença significativa entre os grupos, destacando-se apenas maior quantidade de vasos intumescidos no Grupo II. A espessura da pseudocápsula foi menor no Grupo II. CONCLUSÃO: O laser de baixa intensidade altera o processo de reparação tecidual ao redor dos implantes, sugerindo que o mesmo possa ser útil para a modelação das contraturas que se estabelecem ao redor dos implantes de silicone.(AU)

Experimental model for low level laser therapy on ischemic random skin flap in rats / Modelo experimental para laserterapia de baixa intensidade em retalho cutâneo randômico isquêmico em ratos

OBJETIVO: Propor o desenvolvimento de um modelo experimental para verificar o efeito da laserterapia de baixa intensidade na viabilidade do retalho cutâneo randômico em ratos. MÉTODOS: A amostra constituiu-se de 24 ratos, da linhagem Wistar-EPM. O retalho cutâneo randômico foi realizado com dimensões de 10x4 cm e uma barreira plástica foi interposta entre o mesmo e o leito doador. O Grupo 1 (controle), foi submetido a uma simulação de tratamento com a irradiação laser de diodo (830 nm). O Grupo 2 foi submetido à irradiação laser de diodo (830 nm). Os animais foram submetidos a terapia a laser com densidade de energia de 36 J/cm2 (72 segundos) imediatamente após a operação e nos outros quatros dias subseqüentes. A caneta do laser foi posicionada a 90 graus em contato com o retalho cutâneo em um ponto a 2,5 cm da base cranial do retalho. No sétimo dia pós-operatório foram calculadas as porcentagens da área de necrose. RESULTADOS: O Grupo 1 apresentou média da área de necrose de 48,86% e o Grupo 2 û 23,14%. Após a análise estatística, os resultados mostraram que o Grupo 2 foi mais eficaz, quando comparado ao controle (p<0,001).CONCLUSÃO: O modelo experimental mostrou-se factível para estudos dos efeitos da terapia a laser de baixa intensidade em retalho cutâneo randômico em ratos.(AU)

PURPOSE: To develop an experimental model to be used in the study of low level Laser therapy on viability of random skin flap in rats. METHODS: The sample was 24 Wistar-EPM rats. The random skin flap measured 10 x 4 cm and a plastic sheet was interposed between the flap and donor site. Group 1 (control) underwent sham irradiation with diode laser (830 nm). Group 2 was submitted to laser irradiation with diode laser (830 nm). The animals were submitted to Laser therapy with 36 J/cm2 energy density (72 seconds) immediately after the surgery and on the four subsequent days. The probe was usually held in contact with the skin flap surface on a point at 2.5 cm cranial from the flap base. On the seventh postoperative day, the percentage of necrotic area was measured and calculated. RESULTS: Group 1 reached an average necrotic area of 48.86%, Group 2 23.14%. After the statistic analysis, compared with the control group, Group 2 showed a statistically significant increase in survival area (p<0.001). CONCLUSION: The experimental model proved to be reliable to be used in the study of effects of low level laser therapy in random skin flap in rats.(AU)