In vitro evaluation of ivermectin, moxidectin, albendazole and pyrantel against cyathostomins of horses

Cyathostomins are the most prevalent nematodes of horses, and multidrug resistance has been reported worldwide. There is a need to implement alternative drug monitoring analytical tests. The objective of this study was to determine the consistency (5 repetitions) of the larval migration on agar test (LMAT) using ivermectin, moxidectin, pyrantel or albendazole against cyathostomin infective-stage larvae in eight different concentrations. LMAT showed a strong coefficient of determination (R2 > 0.91), between the test repetitions (n=5). The average 50% effective concentration (EC50) for ivermectin, moxidectin, pyrantel and albendazole were 0.0404, 0.0558, 0.0864 and 0.0988 nMol, respectively. The results of the EC50 for albendazole showed the greatest range of concentration. Ivermectin and moxidectin had the lowest in between-test variation. In the future, internationally certified susceptible isolates could be used for screening new drug candidates, or to follow up the pattern of drug efficacy from field populations.(AU)

Ciatostomíneos são os nematodas mais prevalentes em equinos e a resistência múltipla foi relatada em todo o mundo. Existe a necessidade de implementar o monitoramento dos produtos com testes analíticos alternativos. O objetivo deste estudo foi determinar a consistência (5 repetições) do teste de migração larval em ágar (TMLA) usando ivermectina, moxidectina, pirantel e albendazole contra larvas infectantes de ciatostomíneos em oito concentrações diferentes. O TMLA demonstrou um coeficiente de determinação (R2) acima de 0,91 entre as repetições do teste. A concentração efetiva para 50% (CE50) para ivermectina, moxidectina, pirantel e albendazole foi de 0,0404; 0,0558; 0,0864 e 0,0988 nMol, respectivamente. A CE50 do albendazole demonstrou a maior amplitude entre os testes. A ivermectina e a moxidectina tiveram as menores variações das doses entre as repetições. No futuro, isolados certificados susceptíveis poderão ser testados com o TMLA para indicação de novos produtos e mesmo para acompanhar o perfil de eficácia de populações do campo.(AU)

In vitro evaluation of ivermectin, moxidectin, albendazole and pyrantel against cyathostomins of horses / Avaliação in vitro da ivermectina, moxidectina, albendazole e pirantel contra ciatostomíneos de equinos

Cyathostomins are the most prevalent nematodes of horses, and multidrug resistance has been reported worldwide. There is a need to implement alternative drug monitoring analytical tests. The objective of this study was to determine the consistency (5 repetitions) of the larval migration on agar test (LMAT) using ivermectin, moxidectin, pyrantel or albendazole against cyathostomin infective-stage larvae in eight different concentrations. LMAT showed a strong coefficient of determination (R2 > 0.91), between the test repetitions (n=5). The average 50% effective concentration (EC50) for ivermectin, moxidectin, pyrantel and albendazole were 0.0404, 0.0558, 0.0864 and 0.0988 nMol, respectively. The results of the EC50 for albendazole showed the greatest range of concentration. Ivermectin and moxidectin had the lowest in between-test variation. In the future, internationally certified susceptible isolates could be used for screening new drug candidates, or to follow up the pattern of drug efficacy from field populations.(AU)

Ciatostomíneos são os nematodas mais prevalentes em equinos e a resistência múltipla foi relatada em todo o mundo. Existe a necessidade de implementar o monitoramento dos produtos com testes analíticos alternativos. O objetivo deste estudo foi determinar a consistência (5 repetições) do teste de migração larval em ágar (TMLA) usando ivermectina, moxidectina, pirantel e albendazole contra larvas infectantes de ciatostomíneos em oito concentrações diferentes. O TMLA demonstrou um coeficiente de determinação (R2) acima de 0,91 entre as repetições do teste. A concentração efetiva para 50% (CE50) para ivermectina, moxidectina, pirantel e albendazole foi de 0,0404; 0,0558; 0,0864 e 0,0988 nMol, respectivamente. A CE50 do albendazole demonstrou a maior amplitude entre os testes. A ivermectina e a moxidectina tiveram as menores variações das doses entre as repetições. No futuro, isolados certificados susceptíveis poderão ser testados com o TMLA para indicação de novos produtos e mesmo para acompanhar o perfil de eficácia de populações do campo.(AU)

In vitro evaluation of ivermectin, moxidectin, albendazole and pyrantel against cyathostomins of horses / Avaliação in vitro da ivermectina, moxidectina, albendazole e pirantel contra ciatostomíneos de equinos

Cyathostomins are the most prevalent nematodes of horses, and multidrug resistance has been reported worldwide. There is a need to implement alternative drug monitoring analytical tests. The objective of this study was to determine the consistency (5 repetitions) of the larval migration on agar test (LMAT) using ivermectin, moxidectin, pyrantel or albendazole against cyathostomin infective-stage larvae in eight different concentrations. LMAT showed a strong coefficient of determination (R2 > 0.91), between the test repetitions (n=5). The average 50% effective concentration (EC50) for ivermectin, moxidectin, pyrantel and albendazole were 0.0404, 0.0558, 0.0864 and 0.0988 nMol, respectively. The results of the EC50 for albendazole showed the greatest range of concentration. Ivermectin and moxidectin had the lowest in between-test variation. In the future, internationally certified susceptible isolates could be used for screening new drug candidates, or to follow up the pattern of drug efficacy from field populations.(AU)

Ciatostomíneos são os nematodas mais prevalentes em equinos e a resistência múltipla foi relatada em todo o mundo. Existe a necessidade de implementar o monitoramento dos produtos com testes analíticos alternativos. O objetivo deste estudo foi determinar a consistência (5 repetições) do teste de migração larval em ágar (TMLA) usando ivermectina, moxidectina, pirantel e albendazole contra larvas infectantes de ciatostomíneos em oito concentrações diferentes. O TMLA demonstrou um coeficiente de determinação (R2) acima de 0,91 entre as repetições do teste. A concentração efetiva para 50% (CE50) para ivermectina, moxidectina, pirantel e albendazole foi de 0,0404; 0,0558; 0,0864 e 0,0988 nMol, respectivamente. A CE50 do albendazole demonstrou a maior amplitude entre os testes. A ivermectina e a moxidectina tiveram as menores variações das doses entre as repetições. No futuro, isolados certificados susceptíveis poderão ser testados com o TMLA para indicação de novos produtos e mesmo para acompanhar o perfil de eficácia de populações do campo.(AU)

In vitro evaluation of ivermectin, moxidectin, albendazole and pyrantel against cyathostomins of horses

Abstract Cyathostomins are the most prevalent nematodes of horses, and multidrug resistance has been reported worldwide. There is a need to implement alternative drug monitoring analytical tests. The objective of this study was to determine the consistency (5 repetitions) of the larval migration on agar test (LMAT) using ivermectin, moxidectin, pyrantel or albendazole against cyathostomin infective-stage larvae in eight different concentrations. LMAT showed a strong coefficient of determination (R2 > 0.91), between the test repetitions (n=5). The average 50% effective concentration (EC50) for ivermectin, moxidectin, pyrantel and albendazole were 0.0404, 0.0558, 0.0864 and 0.0988 nMol, respectively. The results of the EC50 for albendazole showed the greatest range of concentration. Ivermectin and moxidectin had the lowest in between-test variation. In the future, internationally certified susceptible isolates could be used for screening new drug candidates, or to follow up the pattern of drug efficacy from field populations.

Resumo Ciatostomíneos são os nematodas mais prevalentes em equinos e a resistência múltipla foi relatada em todo o mundo. Existe a necessidade de implementar o monitoramento dos produtos com testes analíticos alternativos. O objetivo deste estudo foi determinar a consistência (5 repetições) do teste de migração larval em ágar (TMLA) usando ivermectina, moxidectina, pirantel e albendazole contra larvas infectantes de ciatostomíneos em oito concentrações diferentes. O TMLA demonstrou um coeficiente de determinação (R2) acima de 0,91 entre as repetições do teste. A concentração efetiva para 50% (CE50) para ivermectina, moxidectina, pirantel e albendazole foi de 0,0404; 0,0558; 0,0864 e 0,0988 nMol, respectivamente. A CE50 do albendazole demonstrou a maior amplitude entre os testes. A ivermectina e a moxidectina tiveram as menores variações das doses entre as repetições. No futuro, isolados certificados susceptíveis poderão ser testados com o TMLA para indicação de novos produtos e mesmo para acompanhar o perfil de eficácia de populações do campo.

In vitro evaluation of ivermectin, moxidectin, albendazole and pyrantel against cyathostomins of horses

Abstract Cyathostomins are the most prevalent nematodes of horses, and multidrug resistance has been reported worldwide. There is a need to implement alternative drug monitoring analytical tests. The objective of this study was to determine the consistency (5 repetitions) of the larval migration on agar test (LMAT) using ivermectin, moxidectin, pyrantel or albendazole against cyathostomin infective-stage larvae in eight different concentrations. LMAT showed a strong coefficient of determination (R2 > 0.91), between the test repetitions (n=5). The average 50% effective concentration (EC50) for ivermectin, moxidectin, pyrantel and albendazole were 0.0404, 0.0558, 0.0864 and 0.0988 nMol, respectively. The results of the EC50 for albendazole showed the greatest range of concentration. Ivermectin and moxidectin had the lowest in between-test variation. In the future, internationally certified susceptible isolates could be used for screening new drug candidates, or to follow up the pattern of drug efficacy from field populations.

Resumo Ciatostomíneos são os nematodas mais prevalentes em equinos e a resistência múltipla foi relatada em todo o mundo. Existe a necessidade de implementar o monitoramento dos produtos com testes analíticos alternativos. O objetivo deste estudo foi determinar a consistência (5 repetições) do teste de migração larval em ágar (TMLA) usando ivermectina, moxidectina, pirantel e albendazole contra larvas infectantes de ciatostomíneos em oito concentrações diferentes. O TMLA demonstrou um coeficiente de determinação (R2) acima de 0,91 entre as repetições do teste. A concentração efetiva para 50% (CE50) para ivermectina, moxidectina, pirantel e albendazole foi de 0,0404; 0,0558; 0,0864 e 0,0988 nMol, respectivamente. A CE50 do albendazole demonstrou a maior amplitude entre os testes. A ivermectina e a moxidectina tiveram as menores variações das doses entre as repetições. No futuro, isolados certificados susceptíveis poderão ser testados com o TMLA para indicação de novos produtos e mesmo para acompanhar o perfil de eficácia de populações do campo.

TOXICIDADE DOS EXTRATOS VEGETAIS DE JATOBÁ E CHAPÉU-DE-SOL AO OOMICETO PATÓGENO Saprolegnia ferax

A utilização de quimioterápicos auxilia no controle e profilaxia de patógenos na aquicultura, mas o uso e o descarte incorretos podem apresentar perigo aos usuários e ao meio ambiente. Compostos secundários de plantas vêm despertando o interesse devido apresentarem menor risco de seleção artificial de cepas de resistência e diminuírem a exposição a agentes químicos. O presente estudo verificou a ação oomiceticida dos extratos aquosos das folhas de Terminalia sp. (EAT) e, da casca do caule de Jatobá (EAJ), e dos extratos hidroalcoólicos da casca do caule (EPCA) e do exocarpo de jatobá (EPEJ) no desenvolvimento micelial e viabilidade dos zoósporos do oomiceto Saprolegnia ferax. O cobre foi usado como substância de referência junto aos ensaios realizados em meio Maltose-Peptona (MP5) com inoculo de 0,5 cm para o micélio, enquanto que nos ensaios de viabilidade foram inoculados 2000 zoósporos ao centro das placas com meio de cultura. A avaliação do crescimento das colônias durou 72h, em triplicata. Foram realizadas análises quantitativas de fenóis para os extratos, e para análise estatística utilizou-se o programa CIp para determinar a Concentração Inibitória de 50% do crescimento micelial e viabilidade dos zoósporos, e análise de variância seguida do teste de Dunnet para a determinação da Concentração Inibitória Mínima (CIM) de 100% para ambas as estruturas. A menor concentração de fenóis, presentes nos extratos, responsáveis pela inibição de 100% (CIM100; 72h) do crescimento micelial e da viabilidade dos zoósporos foram iguais a 0,745mg.mL-1, para o EPEJ, 1,78mg.mL-1 no EPCA e 3,029mg.mL-1 para o EAJ em ambas as estruturas testadas. No EAT a CIM100 ao fenol foi de 1,651mg.mL-1 para o micélio e 0,826mg.mL-1 para zoósporo em 72h. E concentrações de fenol inferiores a 0,052mg.mL-1 no EAT e 0,006mg.mL-1 para o EAJ apresentaram maior crescimento que as culturas do grupo controle em 24h.

The use of chemotherapy aid in the control and prophylaxis of pathogens in aquaculture, but the incorrect use and disposal may present a danger to users and the environment. Secondary plant compounds have been arousing interest because they present a lower risk of artificial selection of resistance strains and decrease exposure to chemical agents. The present study verified the oomyceticidal action of the aqueous extracts of the leaves of Terminalia sp. (EAT) and, from the bark of the Jatobá tree (EAJ), and from the hydroalcolic extracts of the tree bark (EPCA) and from the Jatobá exocarp (EPEJ) in the mycelial development and viability of the zoospores of the oomycete Saprolegnia ferax. Copper was used as a reference substance in the tests, which proceeded in a Maltose-Peptone (MP5) medium with a 0.5 cm inoculum for the mycelium, while the viability tests were inoculated with 2000 zoospores in the center of the plates with culture. Colony growth assessment lasted 72 hours, in triplicate. Quantitative analyzes of phenols were performed for the extracts, and for statistical analysis, the CIp program was used to identify the inhibitory concentration of 50% of the mycelial growth and viability of the zoospores, and the minimum inhibitory concentration (MIC) of 100% for both structures. S. ferax presented CIM100 in 72h at phenol concentrations of 0.745mg.mL-1, for EPEJ, 1.78mg.mL-1 in EPCA and 3.029mg.mL-1 for EAJ in both tested structures. In the EAT, the CIM100 for phenol was 1.651mg.mL-1 for the mycelium and 0.826mg.mL-1 for the zoospore in 72h. The phenol concentrations less than 0.052mg.mL-1 in the EAT and 0.006mg.mL-1 for the EAJ showed greater growth the cultures of the control group in 24 hours.

In vitro ovicidal and larvicidal activity of condensed tannins on gastrointestinal nematode infestations in sheep (Ovis aries) / Atividade ovicida e larvicida in vitro de taninos condensados em nematódeos gastrintestinais de ovinos (Ovis aries)

Infestations of gastrointestinal parasitic nematodes in sheep result in significant costs to farmers. These infestations are controlled using synthetic anthelmintic treatments, which can result in the development of anthelmintic resistance in nematodes. The use of plants rich in condensed tannins (CTs) is a promising alternative for controlling infestations of harmful parasites in sheep, and could allow reduction of the chemical products used. This study investigated the in vitro effect of CTs from Acacia mearnsii extract (AE) on egg hatching and motility of third-stage larvae. Egg-hatching rate was measured after incubation with extracts for 48 h at 27 °C. The egg hatch test was performed with dilutions of 0.09, 0.19, 0.39, 0.78, 1.56, 3.12, 6.25, 12.5, 25, 50, and 100 mg mL-1. Distilled water was used as the negative control. The corresponding egg hatching inhibition percentages were 22.3, 32.3, 39.2, 49.1, 56.7, 59.0, 62.3, 77.3, 92.7, 98.3, and 100%. The concentration required to inhibit egg hatching in 50% of eggs (LC50) was 2.85 mg mL-1. The inhibition achieved with the negative control was 7.06%. A larval migration inhibition test was carried out after incubation with the extracts for 48 h at 27 oC, with AE and distilled water used in dilutions of 3.12, 6.25, 12.5, 25, 50, and 100 mg mL-1. The corresponding percentages of migration inhibition were 16.5, 37.0, 56.3, 79.4, 91.8, and 97.1%. The concentration required to inhibit migration of 50% of larvae (LC50) was 12.45 mg mL-1. The inhibition achieved with the negative control was 8.53%. The in vitro ovicidal and larvicidal activity of CTs from AE indicate the anthelmintic effect of AE, suggesting the potential of CT extracts to be used as alternatives for controlling gastrointestinal nematode infestations in small ruminants.(AU)

O parasitismo gastrintestinal em ovinos acarreta inúmeros prejuízos aos produtores rurais. O controle é realizado basicamente através da administração de anti-helmínticos sintéticos o que estimula a seleção de parasitas resistentes. O uso de plantas ricas em taninos condensados (TC) apresenta-se como uma alternativa promissora no controle de helmintos em ovinos, reduzindo o uso de produtos químicos. Esse estudo avaliou o efeito in vitro dos TC provenientes da acácia (Acacia mearnsii) sobre a eclosão de ovos e a motilidade de larvas de terceiro estágio de nematódeos gastrintestinais de ovinos. A taxa de eclosão foi avaliada após incubação com o extrato por um período de 48 h a 27 °C. A eclodibilidade foi avaliada nas concentrações de 0,09; 0,19; 0,39; 0,78; 1,56; 3,12; 6,25; 12,5; 25; 50 e 100 mg mL-1. No controle negativo utilizou-se água destilada. As inibições das eclosões foram 22,3; 32,3; 39,3; 49,1; 56,7; 59; 62,3; 77,3; 92,7; 98,3 e 100%, respectivamente. Para a inibição de 50% da eclosão de ovos (CL50) o valor foi de 2,85 mg mL-1. No controle negativo a inibição foi de 7,1%. A inibição da migração larval foi avaliada após incubação com o extrato por um período de 3 h a 27 °C, nas concentrações de 3,12; 6,25; 12,5; 25; 50 e 100 mg mL-1. As porcentagens de inibição foram: 16,5; 37; 56,3; 79,4; 91,8 e 97,1% respectivamente. Para a inibição de 50% da migração larval (CL50), o valor da concentração foi de 12,45 mg mL-1. No controle negativo a inibição foi de 8,5%. A ação ovicida e larvicida in vitro do tanino condensado do extrato de Acacia mearnsii encontrada no presente trabalho indica uma ação anti-helmíntica, apresentando potencial para sua aplicação no controle alternativo de nematódeos gastrintestinais de pequenos ruminantes.(AU)

Teste in vitro do efeito acaricida do óleo essencial de Melaleuca alternifolia sobre Otodectes cynotis In vitro test of the acaricide effect of the Melaleuca alternifolia essential oil on Otodectes cynotis

A otocariose é uma doença parasitária causada pelo ácaro Otodectes cynotis, sendo frequentemente observado no ouvido de cães e gatos, como um dos principais causadores de otite externa. Para o tratamento da otocariose é necessário o uso de substâncias acaricidas. No entanto é crescente o número de relatos sobre a resistência parasitária, sendo este um motivo de preocupação por parte de clínicos e proprietários. Este trabalho teve por objetivo testar o efeito acaricida, in vitro, do óleo essencial de melaleuca (Melaleuca alternifolia) contra o ácaro Otodectes cynotis. Foram selecionados ácaros coletados do conduto auditivo de cães, tendo como critério a integridade estrutural e a ativa movimentação.  Estes ácaros foram mantidos em placas de Petri e distribuídos em três grupos, correspondendo a três tratamentos diferentes: loção a 5% de óleo essencial de melaleuca; loção a 5% de tiabendazol e loção não-iônica, veículo utilizado nas duas loções anteriores. Foram realizados exames com intervalos regulares de uma hora após o início do experimento, até o total de 5 horas, utilizando a motilidade e integridade estrutural como parâmetros de avaliação. O óleo essencial de melaleuca apresentou propriedade acaricida, in vitro, desde a primeira hora de tratamento, podendo vir a ser uma opção de tratamento eficiente para a otocariose.

Susceptibility of Rhipicephalus (Boophilus) microplus (Acari: Ixodidae) to pyrethroids and their associations in Pernambuco, Brazil / Susceptibilidade de Rhipicephalus (Boophilus) microplus (Acari: Ixodidae) a piretróides e suas associações em Pernambuco, Brasil

The synthetic pyrethroids and their associations have been widely used for controlling Rhipicephalus (Boophilus) microplus. The frequent use of acaricides has been inducing the development of resistance in the tick populations. The aim of this study was to assess the susceptibility of R. (B.) microplus populations to pyrethroids and their associations in the region of Garanhuns, Pernambuco, Brazil. In addition, the level of information among farm owners regarding tick control measures was investigated. Ticks were collected directly from naturally infested dairy cattle in the region and were exposed to pyrethroids and their associations. At the same time, an epidemiological questionnaire was applied with the aim of investigating the level of information among the farmers. The results reported here indicate that R. (B.) microplus populations in the dairy region of Garanhuns show resistance to pyrethroids and their associations, except when the product is associated with piperonyl butoxide. Regarding the results from the epidemiological survey, it was seen that there is a considerable lack of information among the farmers in relation to ixodid control measures. The level of ticks resistance to acaricides varied widely across the region studied. No alternative control programs have been implemented among these farms, thus demonstrating that there is a need for more information relating to the biology and control of R. (B.) microplus.

Os piretróides sintéticos e associações são acaricidas amplamente utilizados para o controle do Rhipicephalus (Boophilus) microplus. O uso frequente destes fármacos tem induzido o surgimento de populações de carrapatos resistentes. Objetivou-se neste estudo avaliar a susceptibilidade de populações de R. (B.) microplus aos piretróides e associações. Além disso, investigou-se o nível de informações dos proprietários com relação ás medidas de controle utilizadas. Os carrapatos foram coletados diretamente de bovinos naturalmente infestados na região leiteira de Garanhuns, Pernambuco e expostos a piretróides e suas associações. Contemporaneamente, foi aplicado um questionário epidemiológico com o objetivo de avaliar o nível de informação dos produtores. Os resultados aqui obtidos demonstram que populações de R. (B.) microplus provenientes da região leiteira de Garanhuns apresentam resistência aos piretróides, exceto quando o produto está associado com butóxido de piperonila. Em se tratando dos resultados referentes ao inquérito epidemiológico, verificou-se considerável falta de informação por parte dos produtores com relação ás medidas de controle de ixodídeos. Assim, verifica-se que o nível de resistência aos acaricidas é muito variável na região estudada e que não há, nas propriedades, a adoção de programas alternativos de controle, demonstrando a necessidade de maiores informações relacionadas á biologia e ao controle do R. (B.) microplus.

Susceptibility of Rhipicephalus(Boophilus) microplus (Acari: Ixodidae) to pyrethroids and their associations in Pernambuco, Brazil

The synthetic pyrethroids and their associations have been widely used for controlling Rhipicephalus (Boophilus)microplus. The frequent use of acaricides has been inducing the development of resistance in the tick populations. The aim of this study was to assess the susceptibility of R. (B.)microplus populations to pyrethroids and their associations in the region of Garanhuns, Pernambuco, Brazil. In addition, the level of information among farm owners regarding tick control measures was investigated. Ticks were collected directly from naturally infested dairy cattle in the region and were exposed to pyrethroids and their associations. At the same time, an epidemiological questionnaire was applied with the aim of investigating the level of information among the farmers. The results reported here indicate thatR. (B.) micropluspopulations in the dairy region of Garanhuns show resistance to pyrethroids and their associations, except when the product is associated with piperonyl butoxide. Regarding the results from the epidemiological survey, it was seen that there is a considerable lack of information among the farmers in relation to ixodid control measures. The level of ticks resistance to acaricides varied widely across the region studied. No alternative control programs have been implemented among these farms, thus demonstrating that there is a need for more information relating to the biology and control of R.(B.) microplus.

Os piretróides sintéticos e associações são acaricidas amplamente utilizados para o controle do Rhipicephalus (Boophilus) microplus. O uso frequente destes fármacos tem induzido o surgimento de populações de carrapatos resistentes. Objetivou-se neste estudo avaliar a susceptibilidade de populações de R. (B.) microplus aos piretróides e associações. Além disso, investigou-se o nível de informações dos proprietários com relação ás medidas de controle utilizadas. Os carrapatos foram coletados diretamente de bovinos naturalmente infestados na região leiteira de Garanhuns, Pernambuco e expostos a piretróides e suas associações. Contemporaneamente, foi aplicado um questionário epidemiológico com o objetivo de avaliar o nível de informação dos produtores. Os resultados aqui obtidos demonstram que populações de R. (B.) microplus provenientes da região leiteira de Garanhuns apresentam resistência aos piretróides, exceto quando o produto está associado com butóxido de piperonila. Em se tratando dos resultados referentes ao inquérito epidemiológico, verificou-se considerável falta de informação por parte dos produtores com relação ás medidas de controle de ixodídeos. Assim, verifica-se que o nível de resistência aos acaricidas é muito variável na região estudada e que não há, nas propriedades, a adoção de programas alternativos de controle, demonstrando a necessidade de maiores informações relacionadas á biologia e ao controle do R. (B.) microplus.

Concentração de lactato de cálcio e tempo de incubação sobre a capacidade de adesão e penetração de espermatozoides suínos na membrana perivitelina do ovo da galinha

This study tested the effect of different calcium lactate concentrations and incubation periods on the binding and penetration capacity of swine sperm to the perivitelline layers (PL) of chicken eggs, with the expectation of developing a test to estimate the potential fertility of boars used as sperm donors. In the first experiment, semen samples (n=12) were incubated with TCM medium ant two calcium lactate levels: 1.1 and 2.2µg mL-1. After the set up of fixed calcium lactate level (1.1µg mL-1), the second experiment compared three incubation periods: 10, 15 and 20min. The observed variables were binding rate (BR) and number of bound sperm (NB) in the outer PL, and penetration rate (PR) and number of holes (NH) in the inner PL. The BR to the outer MP was 100%, regardless of the tested concentrations and incubation periods. The NB to the outer perivitelline layer and the PR and the NH in the inner perivitelline layer were greater with 1.1µg mL-1 calcium lactate than 2.2µg mL-1. The NB in the outer PL was greater with 20min incubation than with shorter period (P 0.05). Using 10min incubation, there was no penetration in the inner PL, but, with incubation for 20min, the PR and the NH in the inner PL were greater than those with incubation for 15 min (P 0.05). Using 1.1µg mL-1 calcium lactate and incubation for 20min, the in vitro test using PL can be efficiently conducted to assess important steps of the fertilization process.

Este estudo testou o efeito de diferentes concentrações de lactato de cálcio e tempos de incubação sobre a capacidade de adesão e a penetração dos espermatozoides suínos nas membranas perivitelinas (MP) de ovos de galinhas, na expectativa de desenvolver um teste para estimar o potencial de fertilidade de machos doadores de sêmen. No primeiro experimento, amostras de sêmen (n=12) foram incubadas em meio TCM com lactato de cálcio a 1,1 e 2,2µg mL-1. Posteriormente, após definida a concentração de 1,1µg mL-1 de lactato de cálcio, um segundo experimento comparou três períodos de incubação a 39°C: 10, 15 e 20min. As respostas testadas foram: a taxa de adesão (TA) e o número de espermatozoides aderidos (NA) na MP externa, e a taxa de penetração (TP) e o número de orifícios (NO) na MP interna. A TA na MP externa foi de 100%, independentemente da concentração e dos períodos testados. Com a concentração de lactato de cálcio de 1,1µg mL-1, o NA na membrana perivitelina externa e TP e NO na membrana perivitelina interna foram superiores (P 0,05) aos com 2,2µg mL-1. O NA foi superior com incubação por 20min, em comparação aos períodos mais curtos (P 0,05). No período de incubação por 10min, não houve penetração na MP interna. Porém, com 20min de incubação, a TP na MP interna e o NO foram superiores aos obtidos com a incubação por 15min (P 0,05). A concentração de 1,1µg mL-1 de lactato de cálcio e o perídodo de incubação por 20min permitem a execução eficiente de testes in vitro usando MP para verificar etapas importantes do processo de fertilização.

Concentração de lactato de cálcio e tempo de incubação sobre a capacidade de adesão e penetração de espermatozoides suínos na membrana perivitelina do ovo da galinha

This study tested the effect of different calcium lactate concentrations and incubation periods on the binding and penetration capacity of swine sperm to the perivitelline layers (PL) of chicken eggs, with the expectation of developing a test to estimate the potential fertility of boars used as sperm donors. In the first experiment, semen samples (n=12) were incubated with TCM medium ant two calcium lactate levels: 1.1 and 2.2µg mL-1. After the set up of fixed calcium lactate level (1.1µg mL-1), the second experiment compared three incubation periods: 10, 15 and 20min. The observed variables were binding rate (BR) and number of bound sperm (NB) in the outer PL, and penetration rate (PR) and number of holes (NH) in the inner PL. The BR to the outer MP was 100%, regardless of the tested concentrations and incubation periods. The NB to the outer perivitelline layer and the PR and the NH in the inner perivitelline layer were greater with 1.1µg mL-1 calcium lactate than 2.2µg mL-1. The NB in the outer PL was greater with 20min incubation than with shorter period (P 0.05). Using 10min incubation, there was no penetration in the inner PL, but, with incubation for 20min, the PR and the NH in the inner PL were greater than those with incubation for 15 min (P 0.05). Using 1.1µg mL-1 calcium lactate and incubation for 20min, the in vitro test using PL can be efficiently conducted to assess important steps of the fertilization process.

Este estudo testou o efeito de diferentes concentrações de lactato de cálcio e tempos de incubação sobre a capacidade de adesão e a penetração dos espermatozoides suínos nas membranas perivitelinas (MP) de ovos de galinhas, na expectativa de desenvolver um teste para estimar o potencial de fertilidade de machos doadores de sêmen. No primeiro experimento, amostras de sêmen (n=12) foram incubadas em meio TCM com lactato de cálcio a 1,1 e 2,2µg mL-1. Posteriormente, após definida a concentração de 1,1µg mL-1 de lactato de cálcio, um segundo experimento comparou três períodos de incubação a 39°C: 10, 15 e 20min. As respostas testadas foram: a taxa de adesão (TA) e o número de espermatozoides aderidos (NA) na MP externa, e a taxa de penetração (TP) e o número de orifícios (NO) na MP interna. A TA na MP externa foi de 100%, independentemente da concentração e dos períodos testados. Com a concentração de lactato de cálcio de 1,1µg mL-1, o NA na membrana perivitelina externa e TP e NO na membrana perivitelina interna foram superiores (P 0,05) aos com 2,2µg mL-1. O NA foi superior com incubação por 20min, em comparação aos períodos mais curtos (P 0,05). No período de incubação por 10min, não houve penetração na MP interna. Porém, com 20min de incubação, a TP na MP interna e o NO foram superiores aos obtidos com a incubação por 15min (P 0,05). A concentração de 1,1µg mL-1 de lactato de cálcio e o perídodo de incubação por 20min permitem a execução eficiente de testes in vitro usando MP para verificar etapas importantes do processo de fertilização.

Proposta para teste carrapaticida por imersão de larvas de Rhipicephalus (Boophilus) microplus: avaliação em cipermetrina e amitraz

The aim of this work was to develop a technique of acaricides evaluation by immersion of larvae. Larvae were obtained from 30 engorged females of Riphicephalus (Boophilus) microplus were collected in a ranch in Lages, Santa Catarina state, Brazil. Larvae were obtained from 10mg of eggs placed into 5ml disposable syringes, previously prepared and kept under controlled conditions of laboratory, and collected between the third and the twelfth day of oviposition. Seven to ten days old larvae were submitted to the acaricide laboratory test, in ten replications, by their immersion in eight dilutions of commercial acaricides (amitraz or cypermethrin), for 30 seconds; for each replication and commercial product, a control group was immersed in distilled water. Results were evaluated 24 hours after each treatment by counting the number of live and dead larvae. The mean LD50 values and standard error of the mean for cypermethrin and amitraz were 2.99 ± 0.36 and 17.22 ± 4.20 ppm, respectively, for a confidence interval of 95%. The proposed acaricide laboratory test procedures by larvae immersion offered promising results for the evaluation of acaricides.

Objetivou-se desenvolver uma técnica de avaliação de carrapaticidas por imersão de larvas de Riphicephalus (Boophilus) microplus. As larvas foram obtidas a partir de ovos de 30 teleóginas coletadas em bovinos de uma propriedade rural do município de Lages, SC, Brasil, os quais foram acondicionados em alíquotas de 10mg por seringa descartável de 5ml, previamente preparadas e mantidas em câmara climatizada até a eclosão. Larvas com sete a dez dias de idade foram submetidas à imersão por 30 segundos em oito diluições de produtos carrapaticidas comerciais à base de amitraz e de cipermetrina, cada uma com dez repetições, sendo mantido um grupo controle para cada repetição e produto, o qual foi imerso em água destilada. A leitura foi realizada 24 horas após o tratamento com a contagem de larvas vivas e mortas. A média de DL50 para cipermetrina foi de 2,99ppm e o erro padrão de 0,36 e para o amitraz foi de 17,22ppm e o erro padrão de 4,20, com intervalo de confiança (IC) 95%.

Teste in vitro do efeito acaricida do óleo essencial de Melaleuca alternifolia sobre Otodectes cynotis In vitro test of the acaricide effect of the Melaleuca alternifolia essential oil on Otodectes cynotis

A otocariose é uma doença parasitária causada pelo ácaro Otodectes cynotis, sendo frequentemente observado no ouvido de cães e gatos, como um dos principais causadores de otite externa. Para o tratamento da otocariose é necessário o uso de substâncias acaricidas. No entanto é crescente o número de relatos sobre a resistência parasitária, sendo este um motivo de preocupação por parte de clínicos e proprietários. Este trabalho teve por objetivo testar o efeito acaricida, in vitro, do óleo essencial de melaleuca (Melaleuca alternifolia) contra o ácaro Otodectes cynotis. Foram selecionados ácaros coletados do conduto auditivo de cães, tendo como critério a integridade estrutural e a ativa movimentação.  Estes ácaros foram mantidos em placas de Petri e distribuídos em três grupos, correspondendo a três tratamentos diferentes: loção a 5% de óleo essencial de melaleuca; loção a 5% de tiabendazol e loção não-iônica, veículo utilizado nas duas loções anteriores. Foram realizados exames com intervalos regulares de uma hora após o início do experimento, até o total de 5 horas, utilizando a motilidade e integridade estrutural como parâmetros de avaliação. O óleo essencial de melaleuca apresentou propriedade acaricida, in vitro, desde a primeira hora de tratamento, podendo vir a ser uma opção de tratamento eficiente para a otocariose.

In vitro ovicidal and larvicidal activity of condensed tannins on gastrointestinal nematode infestations in sheep (Ovis aries) / Atividade ovicida e larvicida in vitro de taninos condensados em nematódeos gastrintestinais de ovinos (Ovis aries)

Infestations of gastrointestinal parasitic nematodes in sheep result in significant costs to farmers. These infestations are controlled using synthetic anthelmintic treatments, which can result in the development of anthelmintic resistance in nematodes. The use of plants rich in condensed tannins (CTs) is a promising alternative for controlling infestations of harmful parasites in sheep, and could allow reduction of the chemical products used. This study investigated the in vitro effect of CTs from Acacia mearnsii extract (AE) on egg hatching and motility of third-stage larvae. Egg-hatching rate was measured after incubation with extracts for 48 h at 27 °C. The egg hatch test was performed with dilutions of 0.09, 0.19, 0.39, 0.78, 1.56, 3.12, 6.25, 12.5, 25, 50, and 100 mg mL-1. Distilled water was used as the negative control. The corresponding egg hatching inhibition percentages were 22.3, 32.3, 39.2, 49.1, 56.7, 59.0, 62.3, 77.3, 92.7, 98.3, and 100%. The concentration required to inhibit egg hatching in 50% of eggs (LC50) was 2.85 mg mL-1. The inhibition achieved with the negative control was 7.06%. A larval migration inhibition test was carried out after incubation with the extracts for 48 h at 27 oC, with AE and distilled water used in dilutions of 3.12, 6.25, 12.5, 25, 50, and 100 mg mL-1. The corresponding percentages of migration inhibition were 16.5, 37.0, 56.3, 79.4, 91.8, and 97.1%. The concentration required to inhibit migration of 50% of larvae (LC50) was 12.45 mg mL-1. The inhibition achieved with the negative control was 8.53%. The in vitro ovicidal and larvicidal activity of CTs from AE indicate the anthelmintic effect of AE, suggesting the potential of CT extracts to be used as alternatives for controlling gastrointestinal nematode infestations in small ruminants.

O parasitismo gastrintestinal em ovinos acarreta inúmeros prejuízos aos produtores rurais. O controle é realizado basicamente através da administração de anti-helmínticos sintéticos o que estimula a seleção de parasitas resistentes. O uso de plantas ricas em taninos condensados (TC) apresenta-se como uma alternativa promissora no controle de helmintos em ovinos, reduzindo o uso de produtos químicos. Esse estudo avaliou o efeito in vitro dos TC provenientes da acácia (Acacia mearnsii) sobre a eclosão de ovos e a motilidade de larvas de terceiro estágio de nematódeos gastrintestinais de ovinos. A taxa de eclosão foi avaliada após incubação com o extrato por um período de 48 h a 27 °C. A eclodibilidade foi avaliada nas concentrações de 0,09; 0,19; 0,39; 0,78; 1,56; 3,12; 6,25; 12,5; 25; 50 e 100 mg mL-1. No controle negativo utilizou-se água destilada. As inibições das eclosões foram 22,3; 32,3; 39,3; 49,1; 56,7; 59; 62,3; 77,3; 92,7; 98,3 e 100%, respectivamente. Para a inibição de 50% da eclosão de ovos (CL50) o valor foi de 2,85 mg mL-1. No controle negativo a inibição foi de 7,1%. A inibição da migração larval foi avaliada após incubação com o extrato por um período de 3 h a 27 °C, nas concentrações de 3,12; 6,25; 12,5; 25; 50 e 100 mg mL-1. As porcentagens de inibição foram: 16,5; 37; 56,3; 79,4; 91,8 e 97,1% respectivamente. Para a inibição de 50% da migração larval (CL50), o valor da concentração foi de 12,45 mg mL-1. No controle negativo a inibição foi de 8,5%. A ação ovicida e larvicida in vitro do tanino condensado do extrato de Acacia mearnsii encontrada no presente trabalho indica uma ação anti-helmíntica, apresentando potencial para sua aplicação no controle alternativo de nematódeos gastrintestinais de pequenos ruminantes.

Study on the thyroid function of thoroughbred horses by means of "in vitro" 125I-T3 modified and 125I-T4 tests / Estudo da função tiróidea em equinos Puro Sangue Inglês, machos e fêmeas, mediante utilização dos testes in vitro" 125I-T3 modificado e 125I-T4

Sera of 71 animals, divided in groups of males and females, in repose and after activity were studied. The method to establish the percentage of the 125I-lyothyronine retention resin (Test 125I-T3 or T3 ) was modified by the use of 0.2 ml of serum on the resin column, after addition of the marked hormone. This modification served to prove that thoroughbred equines show binding of the I -lyothyronine to the serum four times reduced, indicating, therefore, that these animals have four times more ligation sites of triidothyronin saturation in the serum, when compared with the results obtained from human beings. The variance analysis applied to the T3 Test showed no significant results at the 95% level as regards to activity. For the 71 animals, the author has found an average of 50.30% of the 125I-lyothyronine in resin retention, being the confidence interval for this group between 48.75% and 51.85% to a 95% confidence coefficient. Evaluating the results of the T4 Test by means of the variance analysis, we noticed that the male and female groups in repose differed statistically from the groups after activity to a 95% confidence coefficient. The author has grouped the results of the T4 Test of 32 equines, 18 males and 14 females, in repose, obtaining an average of 0.61 meg and 0.51 meg and 0.71 meg T4 /IOO ml as confidence interval to a 95% confidence coefficient. We have listed 39

Foram estudados soros de 71 animais, divididos em lotes de machos e fêmeas, em descanso e em trabalho. O método de determinação da porcentagem de retenção da 125I-liotironina em resina (Teste 125I -T 3 ou T3) modificado pela utilização de 0,2 ml de soro sobre a coluna de resina, após a colocação do hormônio marcado. Esta modificação veio demonstrar que os equinos Puro Sangue Inglês apresentam ligação de 125I-liotironina ao soro diminuído de quatro vezes, sugerindo, portanto, que estes animais têm quatro vezes mais lugares saturados por triiodotironina no soro, se compararmos os resultados com os obtidos para o homem. A análise de variância aplicada aos resultados do Teste T3 revelou não serem significantes ao nível de 95% para sexo e quanto à atividade. Para os 71 animais, encontramos como média, 50,30% de retenção da 125I-liotironinaem resina, estando o intervalo de confiança para este grupo, entre 48,75% e 51,85% para 95%.Avaliando os resultados dos Testes T4, através da análise da variância, verificamos que os lotes de machos e fêmeas em descanso diferiam estatisticamente dos lotes em trabalho, para 95% de confiança. Agrupamos os resultados do Teste T4 , de 32 equinos, 18 machos e 14 fêmeas, em descanso, obtendo-se como média 0,61 mcg e como intervalo de confiança para 95%, 0,51 mcg e 0,71 mcg T4 /I00ml. Relacionamos 39 resultados do Teste T4, sendo 23 machos e 16 fêmeas em

Study on the thyroid function of thoroughbred females in varying stages of pregnancy, using "in vitro tests 125I-T3 and 125I-T-4 / Estudo da função tiróidea em fêmeas de equinos Puro Sangue Inglês em diferentes tempos de gestação, mediante a utilização dos testes "in vitro" 125I-T3 e 125I-T4

The author has studied sera of 26 thoroughbred female equines, aged between five through 12 years, collected in five different pregnancy stages. We have performed five bleedings: the first from the group between 49 and 90 days pregnancy; the second between 103 and 167; the third between 158 and 222; the fourth between 216 and 280; and the last between 271 and 335 days of pregnancy. As average results of T3 and T4 for 125I-lyothyronine retention in resin and of thyroxin per 100 ml of serum, We found 44.22% and 2.13 meg in the first collection; 44.02% and 2.21 mcg in the second; 46.67% and 2.60 mcg in the third; 43.51 % and 2.56 mcg in the fourth; and, finally, 41.14% and 1.94 mcg in the fifth collection. A sixth group was formed, composed of females from the first group that were between 49 and 55 days pregnant, for which we registered values 46.27% for T3 Test and 0.93 mcg of T4 Test. We have also performed the variance analysis of the results obtained in tests T3 and T4 in the six groups, the first with females between 49 and 55 days of pregnancy and the others, each represented by six animals choosen by allotment, with 62 through 90, 138 through 167, 193 through 222, 251 through 280, and 306 through 335 days of pregnancy. Analysing the results of T3 Test we have found statistical significance for the animal group and verified, by Tukeys test that only one animal was responsi

Foram estudados soros de 26 fêmeas de equinos Puro Sangue Inglês com idades entre 5 a 12 anos, colhidos em 5 diferentes períodos de gestação. Realizamos 5 colheitas de sangue, a primeira com o lote entre 103 e 167,a terceira entre 158 e 222, a quarta entre 216 e 280 e a última entre271 e 335 dias de gestação. Com resultados médios de T3 e T4, para retenção de 125I-liotironina em resina e de tiroxina por 100 ml de soro, obtivemos, na primeira colheita 44,22 e 2,13 mcg; na segunda 44,02% e 2,21mcg; na terceira, 46,67% e 2,60 mcg; na quarta, 43,51% e 2,56 mcg e, finalmente, na quinta, 41,14 e 1,94 mcg. Constitui-se um 6. grupo, formado com éguas do 1. lote e que se encontravam entre 49 e 55 dias de gestação, para o qual registramos valores de 46,27% para o Teste T3 e 0,93 mcg para o Teste T4.Procedemos também a análise de variância dos resultados obtidos nos Testes T3 e T4 em 6 lotes, sendo o primeiro entre 49 e 85 dias de gestação e os demais, representados cada um por 6 animais escolhidos por sorteio, com 62 a 90, 138 a 167, 193 a 222, 251 a 280 e 306 a 335 dias de gestação. Analisamos os dados referentes aos resultados do Teste T3 e encontramos significância estatística para o grupo animal, tendo o Teste de Tukey esclarecido que apenas um animal foi o responsável pela significância. Os dados referentes à análise de variância aplicados aos resultados obtidos com o auxílio do T

Study on the thyroid function of thoroughbred females in varying stages of pregnancy, using "in vitro tests 125I-T3 and 125I-T-4 / Estudo da função tiróidea em fêmeas de equinos Puro Sangue Inglês em diferentes tempos de gestação, mediante a utilização dos testes "in vitro" 125I-T3 e 125I-T4

The author has studied sera of 26 thoroughbred female equines, aged between five through 12 years, collected in five different pregnancy stages. We have performed five bleedings: the first from the group between 49 and 90 days pregnancy; the second between 103 and 167; the third between 158 and 222; the fourth between 216 and 280; and the last between 271 and 335 days of pregnancy. As average results of T3 and T4 for 125I-lyothyronine retention in resin and of thyroxin per 100 ml of serum, We found 44.22% and 2.13 meg in the first collection; 44.02% and 2.21 mcg in the second; 46.67% and 2.60 mcg in the third; 43.51 % and 2.56 mcg in the fourth; and, finally, 41.14% and 1.94 mcg in the fifth collection. A sixth group was formed, composed of females from the first group that were between 49 and 55 days pregnant, for which we registered values 46.27% for T3 Test and 0.93 mcg of T4 Test. We have also performed the variance analysis of the results obtained in tests T3 and T4 in the six groups, the first with females between 49 and 55 days of pregnancy and the others, each represented by six animals choosen by allotment, with 62 through 90, 138 through 167, 193 through 222, 251 through 280, and 306 through 335 days of pregnancy. Analysing the results of T3 Test we have found statistical significance for the animal group and verified, by Tukeys test that only one animal was responsi

Foram estudados soros de 26 fêmeas de equinos Puro Sangue Inglês com idades entre 5 a 12 anos, colhidos em 5 diferentes períodos de gestação. Realizamos 5 colheitas de sangue, a primeira com o lote entre 103 e 167,a terceira entre 158 e 222, a quarta entre 216 e 280 e a última entre271 e 335 dias de gestação. Com resultados médios de T3 e T4, para retenção de 125I-liotironina em resina e de tiroxina por 100 ml de soro, obtivemos, na primeira colheita 44,22 e 2,13 mcg; na segunda 44,02% e 2,21mcg; na terceira, 46,67% e 2,60 mcg; na quarta, 43,51% e 2,56 mcg e, finalmente, na quinta, 41,14 e 1,94 mcg. Constitui-se um 6. grupo, formado com éguas do 1. lote e que se encontravam entre 49 e 55 dias de gestação, para o qual registramos valores de 46,27% para o Teste T3 e 0,93 mcg para o Teste T4.Procedemos também a análise de variância dos resultados obtidos nos Testes T3 e T4 em 6 lotes, sendo o primeiro entre 49 e 85 dias de gestação e os demais, representados cada um por 6 animais escolhidos por sorteio, com 62 a 90, 138 a 167, 193 a 222, 251 a 280 e 306 a 335 dias de gestação. Analisamos os dados referentes aos resultados do Teste T3 e encontramos significância estatística para o grupo animal, tendo o Teste de Tukey esclarecido que apenas um animal foi o responsável pela significância. Os dados referentes à análise de variância aplicados aos resultados obtidos com o auxílio do T

Study on the thyroid function of thoroughbred horses by means of "in vitro" 125I-T3 modified and 125I-T4 tests / Estudo da função tiróidea em equinos Puro Sangue Inglês, machos e fêmeas, mediante utilização dos testes in vitro" 125I-T3 modificado e 125I-T4

Sera of 71 animals, divided in groups of males and females, in repose and after activity were studied. The method to establish the percentage of the 125I-lyothyronine retention resin (Test 125I-T3 or T3 ) was modified by the use of 0.2 ml of serum on the resin column, after addition of the marked hormone. This modification served to prove that thoroughbred equines show binding of the I -lyothyronine to the serum four times reduced, indicating, therefore, that these animals have four times more ligation sites of triidothyronin saturation in the serum, when compared with the results obtained from human beings. The variance analysis applied to the T3 Test showed no significant results at the 95% level as regards to activity. For the 71 animals, the author has found an average of 50.30% of the 125I-lyothyronine in resin retention, being the confidence interval for this group between 48.75% and 51.85% to a 95% confidence coefficient. Evaluating the results of the T4 Test by means of the variance analysis, we noticed that the male and female groups in repose differed statistically from the groups after activity to a 95% confidence coefficient. The author has grouped the results of the T4 Test of 32 equines, 18 males and 14 females, in repose, obtaining an average of 0.61 meg and 0.51 meg and 0.71 meg T4 /IOO ml as confidence interval to a 95% confidence coefficient. We have listed 39

Foram estudados soros de 71 animais, divididos em lotes de machos e fêmeas, em descanso e em trabalho. O método de determinação da porcentagem de retenção da 125I-liotironina em resina (Teste 125I -T 3 ou T3) modificado pela utilização de 0,2 ml de soro sobre a coluna de resina, após a colocação do hormônio marcado. Esta modificação veio demonstrar que os equinos Puro Sangue Inglês apresentam ligação de 125I-liotironina ao soro diminuído de quatro vezes, sugerindo, portanto, que estes animais têm quatro vezes mais lugares saturados por triiodotironina no soro, se compararmos os resultados com os obtidos para o homem. A análise de variância aplicada aos resultados do Teste T3 revelou não serem significantes ao nível de 95% para sexo e quanto à atividade. Para os 71 animais, encontramos como média, 50,30% de retenção da 125I-liotironinaem resina, estando o intervalo de confiança para este grupo, entre 48,75% e 51,85% para 95%.Avaliando os resultados dos Testes T4, através da análise da variância, verificamos que os lotes de machos e fêmeas em descanso diferiam estatisticamente dos lotes em trabalho, para 95% de confiança. Agrupamos os resultados do Teste T4 , de 32 equinos, 18 machos e 14 fêmeas, em descanso, obtendo-se como média 0,61 mcg e como intervalo de confiança para 95%, 0,51 mcg e 0,71 mcg T4 /I00ml. Relacionamos 39 resultados do Teste T4, sendo 23 machos e 16 fêmeas em