Correlation between clinical findings, mast cell count and interleukin 31 immunostaining in the skin of dogs with atopic dermatitis / Correlação entre achados clínicos, contagem de mastócitos e imunomarcação de interleucina 31 na pele de cães com dermatite atópica

In this study the correlation between the clinical score, mast cell count and interleukin 31 (IL-31) immunostaining in the skin of dogs with atopic dermatitis was determined. A total of 31 dogs of different breeds, from one to eight years of age, were chosen for the study. The 20 females and 11 males were categorized based on the CADESI-4 system, as having discrete, moderate or marked atopic dermatitis. Skin samples were collected from the axillary and interdigital regions and stained with hematoxylin and eosin for cytohistomorphological analyses and toluidine blue to evaluate the mast cell counts, and immunohistochemistry for the IL-31 immunostaining. Animals revealing higher atopic dermatitis scores had greater numbers of mast cells and IL-31 immunolabeled cells. More numbers of cells immunolabeled for IL-31 were evident in the axillary skin compared with the interdigital skin in dogs having this condition. A correlation was identified between the clinical scores and mast cell numbers in the interdigital region, as well as between the clinical scores and number of cells immunolabeled for IL-31 in the axillary area. A correlation was also reported between the mast cell numbers and IL-31 immunolabeled cells only in the axillary skin, and none in the interdigital regions. It was thus concluded that the mast cells and IL-31 are involved in the pathogenesis of the canine atopic dermatitis (CAD), as well as lymphocytes and plasma cells. It was also observed that the higher the degree of clinical severity of the disease, the more the numbers of mast cells and IL-31 in the skin of those animals suffering from CAD, which implies the influence of these immunological constituents on the genesis of pruritus and disease progression.(AU)

Este estudo avaliou a correlação entre o escore clínico, a contagem de mastócitos e a imunomarcação de interleucina 31 (IL-31) na pele de cães com dermatite atópica. Foram selecionados 31 cães de diferentes raças, com idade entre um e oito anos, sendo 20 fêmeas e 11 machos, divididos em discretamente, moderadamente e acentuadamente acometidos por dermatite atópica segundo o sistema CADESI-4. Amostras da pele das regiões axilar e interdigital foram colhidas e submetidas às colorações de hematoxilina e eosina para a avaliação cito-histomorfológica e azul de toluidina para a contagem de mastócitos, bem como a técnica de imunoistoquímica para a imunomarcação de IL-31. Os animais com maior escore de dermatite atópica apresentaram maior número de mastócitos e de células imunomarcadas para IL-31. Houve maior número de células imunomarcadas para IL-31 na pele da axila em relação à interdigital nos cães com a doença. Foi constatada correlação entre o escore clínico e a quantidade de mastócitos no interdígito, bem como entre o escore clínico e a quantidade de células imunomarcadas para IL-31 na axila. Também foi verificada correlação entre a quantidade de mastócitos e células imunomarcadas para IL-31 na pele da região axilar, mas não da interdigital. Conclui-se que mastócitos e a IL-31 estão envolvidos na patogenia da DAC, assim como linfócitos e plasmócitos. Também, quanto maior o grau de severidade clínica da doença, maior a quantidade de mastócitos e IL-31 na pele dos animais com DAC, o que remete à influência desses componentes imunológicos na gênese do prurido e progressão da doença.(AU)

Caracterização histoquímica no diagnóstico da babesiose bovina por Babesia bovis / Histochemical characterization in the diagnosis of bovine babesiosis by Babesia bovis

A babesiose é uma doença hemolítica transmitida por carrapatos e causada por protozoários intraeritrocitários do gênero Babesia. Esta é uma doença de incidência elevada na Região Sul do Brasil e responsável por perdas econômicas consideráveis. O diagnóstico clínico-patológico pode ser feito através da demonstração do parasito pelo exame de esfregaços sanguíneos ou de tecidos frescos. Entretanto, com frequência, somente órgãos fixados em formol são remetidos para laboratórios de patologia, o que impossibilita a realização do esfregaço. O principal objetivo deste estudo foi encontrar técnicas histoquímicas alternativas e capazes de aprimorar a evidenciação de Babesia bovis intraeritrocitária em tecidos fixados em formol. Para este estudo, foram analisadas retrospectivamente amostras de tecidos de 50 casos de necropsias de bovinos, as quais haviam sido fixadas em formol e processadas rotineiramente para histopatologia. Os casos foram divididos em um grupo controle, constituído por 12 casos de babesiose cerebral com substância cinzenta encefálica róseo-cereja característica (grupo A), e 38 casos sugestivos de tristeza parasitária bovina (grupo B), conforme os protocolos de necropsias. Foram testadas as técnicas histoquímicas de Azul Alciano, Azul de Metileno, Azul de Toluidina, Giemsa, Gram (método de McCallum-Goodpasture), Grocott, Ácido Periódico de Schiff e Ziehl-Neelsen. Dentre estas, observou-se que as técnicas de Azul de Metileno e Azul de Toluidina permitiram observar características morfológicas e tintoriais de maneira mais nítida, auxiliando na identificação de B. bovis. Adicionalmente, foram estabelecidos vários parâmetros clínico-epidemiológicos e anatomopatológicos da babesiose por B. bovis.(AU)

Babesiosis is a hemolytic tick-borne disease caused by intraerythrocytic protozoal parasites of the genus Babesia. This is a disease of high incidence in the southern Brazil and responsible for considerable economic losses. Clinical-pathological diagnosis can be made by demonstrating the parasite by examining blood smears or fresh tissues. However, frequently, only formalin-fixed organs are sent to pathology laboratories, which makes it impossible to perform the smears. The main objective of this study was to find alternative histochemical techniques capable to improve the identification of intraerythrocytic Babesia bovis in histological sections. For this study, tissue samples from 50 bovine necropsy cases were retrospectively analyzed, which had been fixed in formalin and routinely processed for histopathology. The cases were divided into a control group, consisting of 12 cases of cerebral babesiosis with characteristic pink-cherry gray matter (group A), and 38 cases suggestive of cattle tick fever (group B), according to necropsy protocols. Histochemical techniques of Alcian Blue, Methylene Blue, Toluidine Blue, Giemsa, Gram (McCallum-Goodpasture method), Grocott, Periodic Acid of Schiff and Ziehl-Neelsen were tested. Among these, it was observed that the techniques of Methylene Blue and Toluidine Blue allowed to observe morphological and dye characteristics in a clearer way, aiding in the identification of B. bovis. In addition, several clinical-epidemiological and anatomopathological parameters of babesiosis caused by B. bovis were established.(AU)

Caracterização histoquímica no diagnóstico da babesiose bovina por Babesia bovis / Histochemical characterization in the diagnosis of bovine babesiosis by Babesia bovis

A babesiose é uma doença hemolítica transmitida por carrapatos e causada por protozoários intraeritrocitários do gênero Babesia. Esta é uma doença de incidência elevada na Região Sul do Brasil e responsável por perdas econômicas consideráveis. O diagnóstico clínico-patológico pode ser feito através da demonstração do parasito pelo exame de esfregaços sanguíneos ou de tecidos frescos. Entretanto, com frequência, somente órgãos fixados em formol são remetidos para laboratórios de patologia, o que impossibilita a realização do esfregaço. O principal objetivo deste estudo foi encontrar técnicas histoquímicas alternativas e capazes de aprimorar a evidenciação de Babesia bovis intraeritrocitária em tecidos fixados em formol. Para este estudo, foram analisadas retrospectivamente amostras de tecidos de 50 casos de necropsias de bovinos, as quais haviam sido fixadas em formol e processadas rotineiramente para histopatologia. Os casos foram divididos em um grupo controle, constituído por 12 casos de babesiose cerebral com substância cinzenta encefálica róseo-cereja característica (grupo A), e 38 casos sugestivos de tristeza parasitária bovina (grupo B), conforme os protocolos de necropsias. Foram testadas as técnicas histoquímicas de Azul Alciano, Azul de Metileno, Azul de Toluidina, Giemsa, Gram (método de McCallum-Goodpasture), Grocott, Ácido Periódico de Schiff e Ziehl-Neelsen. Dentre estas, observou-se que as técnicas de Azul de Metileno e Azul de Toluidina permitiram observar características morfológicas e tintoriais de maneira mais nítida, auxiliando na identificação de B. bovis. Adicionalmente, foram estabelecidos vários parâmetros clínico-epidemiológicos e anatomopatológicos da babesiose por B. bovis.(AU)

Babesiosis is a hemolytic tick-borne disease caused by intraerythrocytic protozoal parasites of the genus Babesia. This is a disease of high incidence in the southern Brazil and responsible for considerable economic losses. Clinical-pathological diagnosis can be made by demonstrating the parasite by examining blood smears or fresh tissues. However, frequently, only formalin-fixed organs are sent to pathology laboratories, which makes it impossible to perform the smears. The main objective of this study was to find alternative histochemical techniques capable to improve the identification of intraerythrocytic Babesia bovis in histological sections. For this study, tissue samples from 50 bovine necropsy cases were retrospectively analyzed, which had been fixed in formalin and routinely processed for histopathology. The cases were divided into a control group, consisting of 12 cases of cerebral babesiosis with characteristic pink-cherry gray matter (group A), and 38 cases suggestive of cattle tick fever (group B), according to necropsy protocols. Histochemical techniques of Alcian Blue, Methylene Blue, Toluidine Blue, Giemsa, Gram (McCallum-Goodpasture method), Grocott, Periodic Acid of Schiff and Ziehl-Neelsen were tested. Among these, it was observed that the techniques of Methylene Blue and Toluidine Blue allowed to observe morphological and dye characteristics in a clearer way, aiding in the identification of B. bovis. In addition, several clinical-epidemiological and anatomopathological parameters of babesiosis caused by B. bovis were established.(AU)

Caracterização histoquímica no diagnóstico da babesiose bovina por Babesia bovis

ABSTRACT: Babesiosis is a hemolytic tick-borne disease caused by intraerythrocytic protozoal parasites of the genus Babesia. This is a disease of high incidence in the southern Brazil and responsible for considerable economic losses. Clinical-pathological diagnosis can be made by demonstrating the parasite by examining blood smears or fresh tissues. However, frequently, only formalin-fixed organs are sent to pathology laboratories, which makes it impossible to perform the smears. The main objective of this study was to find alternative histochemical techniques capable to improve the identification of intraerythrocytic Babesia bovis in histological sections. For this study, tissue samples from 50 bovine necropsy cases were retrospectively analyzed, which had been fixed in formalin and routinely processed for histopathology. The cases were divided into a control group, consisting of 12 cases of cerebral babesiosis with characteristic pink-cherry gray matter (group A), and 38 cases suggestive of cattle tick fever (group B), according to necropsy protocols. Histochemical techniques of Alcian Blue, Methylene Blue, Toluidine Blue, Giemsa, Gram (McCallum-Goodpasture method), Grocott, Periodic Acid of Schiff and Ziehl-Neelsen were tested. Among these, it was observed that the techniques of Methylene Blue and Toluidine Blue allowed to observe morphological and dye characteristics in a clearer way, aiding in the identification of B. bovis. In addition, several clinical-epidemiological and anatomopathological parameters of babesiosis caused by B. bovis were established.

RESUMO: A babesiose é uma doença hemolítica transmitida por carrapatos e causada por protozoários intraeritrocitários do gênero Babesia. Esta é uma doença de incidência elevada na Região Sul do Brasil e responsável por perdas econômicas consideráveis. O diagnóstico clínico-patológico pode ser feito através da demonstração do parasito pelo exame de esfregaços sanguíneos ou de tecidos frescos. Entretanto, com frequência, somente órgãos fixados em formol são remetidos para laboratórios de patologia, o que impossibilita a realização do esfregaço. O principal objetivo deste estudo foi encontrar técnicas histoquímicas alternativas e capazes de aprimorar a evidenciação de Babesia bovis intraeritrocitária em tecidos fixados em formol. Para este estudo, foram analisadas retrospectivamente amostras de tecidos de 50 casos de necropsias de bovinos, as quais haviam sido fixadas em formol e processadas rotineiramente para histopatologia. Os casos foram divididos em um grupo controle, constituído por 12 casos de babesiose cerebral com substância cinzenta encefálica róseo-cereja característica (grupo A), e 38 casos sugestivos de tristeza parasitária bovina (grupo B), conforme os protocolos de necropsias. Foram testadas as técnicas histoquímicas de Azul Alciano, Azul de Metileno, Azul de Toluidina, Giemsa, Gram (método de McCallum-Goodpasture), Grocott, Ácido Periódico de Schiff e Ziehl-Neelsen. Dentre estas, observou-se que as técnicas de Azul de Metileno e Azul de Toluidina permitiram observar características morfológicas e tintoriais de maneira mais nítida, auxiliando na identificação de B. bovis. Adicionalmente, foram estabelecidos vários parâmetros clínico-epidemiológicos e anatomopatológicos da babesiose por B. bovis.

CARACTERÍSTICAS DE CONDENSAÇÃO DA CROMATINA E MORFOMETRIA ESPERMÁTICA DE TOUROS DA RAÇA GIR

O objetivo deste estudo foi avaliar a qualidade espermática, compactação/integridade e deficiência de protamina da cromatina de espermatozoides, somado às características reprodutivas de acordo com a idade. Procurou-se avaliar a interferência da idade nas variáveis analisadas e a evolução das mesmas ao longo de quatro coletas mensais. Foram selecionados 43 touros de elite Bos taurus indicus da raça Gir com idades iniciais entre 18 e 42 meses e divididos em três grupos: jovens (18,5-24,7 meses de idade, n=15), jovens adultos (25,2-28,6 meses de idade, n=16) e adultos (29,1-42,0 meses de idade, n=12). Nessa primeira avaliação as características reprodutivas foram incluídas (Fertilidade, Classificação Andrológica por Pontos e Índice de Classificação de Touros). Em seguida 38 dos 43 touros foram divididos em 3 grupos (mesmas faixas etárias): jovens (n=12), jovens adultos (n=13) e adultos (n=13). Após descongelamento, as amostras foram submetidas às técnicas de coloração do azul de toluidina, para avaliar concomitantemente condensação/integridade da cromatina e morfometria da cabeça espermática, e coloração pela cromomicina A3 (CMA3), para investigar deficiência de protamina espermática. Animais do grupo jovem apresentaram espermatozoides com maior heterogeneidade da compactação da cromatina (CV) (2,52±0,31%) que animais do grupo jovem adulto (1,75±0,10 %). Além disso, o grupo jovem apresentou alteração de cromatina em todas as coletas (Dif > 2 e/ou CV > 5%). O grupo jovem adulto apresentou maior índice de fertilidade (87,27±2,05) (exame andrológico, qualidade espermática a fresco e pós-descongelamento, circunferência escrotal e libido) e melhor nota de classificação andrológica por pontos (83,64±3,92) que animais do grupo adulto (77,60±2,74; 76,82±3,16, respectivamente) (P<0,05). No teste do CMA3, espermatozoides de touros jovens apresentaram maior deficiência de protamina na primeira e quarta coletas (C1= 5.111±619; C4= 4.3880±171; (P<0,05)), possivelmente devido a influência de estresse, tanto do transporte e adaptação a novo manejo quanto estresse térmico. Resultados de morfometria não diferiram ao longo das coletas (P>0,05). Como conclusão, os resultados desse estudo mostram que a idade teve influência quanto as avaliações da cromatina, tendo os animais do grupo jovem apresentado-se imaturos nessas análises. Testes de investigação apresentaram perfil dinâmico de acordo com as diferentes faixas etárias, indicando não existir teste único para avaliar capacidade reprodutiva.

The aim of this study was to evaluate sperm quality, condensation/integrity and protamine deficiency of sperms chromatin packaging, as well as the behavior of reproductive characteristics according to age. For that, two approaches were done: 1st) evaluate how age would interfere in the analyzed variables, 2nd) evaluate how the variables would evolve along four monthly collections. On the 1st approach, 43 elite Gir bulls (Bos taurus indicus) with initial ages between 18 and 42 months were divided into three groups: young (18.5-24.7 months, n=15), young adult (25.2-28.6 months, n=16) and adult (29.1-42.0 months, n=12). Results of reproductive characteristics evaluation (Fertility, Andrological Classification by Points and Bull Classification Index) were included in this first approach. For the 2nd approach, 38 of the 43 bulls were divided into three groups (using the same criteria described before): young (n=12), young adult (n=13) and adult (n=13). After thawing, semen samples were evaluated trough the toluidine blue method, for chromatin condensation/integrity and sperm head morphometry assessment and chromomicin A3 (CMA3) to analyze protamine deficiency. Animals from the young group presented spermatozoa with higher heterogeneity of chromatin compaction (CV) (2.52±0.31 %) than animals from the young adult group (1.75±0.10 %). Young bulls also presented chromatin alteration in all the four collections ((Dif > 2 and/or CV > 5%). The young adult group showed higher fertility index (andrological examination, fresh and thawed sperm quality, scrotal circumference and libido) (87.27±2.05) and better score at bull soundness evaluation (83.64±3.92) than animals from the adult group (77.60±2.74; 76.82±3.16, respectively) (P < 0.05). Young bulls CMA3 results showed higher protamine deficiency in the first and fourth collections (C1= 5.111±619; C4= 4.388±171; (P<0,05)), possibly due to stress of transportation and adaptation to the new environment as well as heat stress. Results of morphometry and compaction evaluated trough the toluidine blue method didn`t differ along collections (P > 0,05). From our results, it can be concluded that age had an influence in chromatin evaluations, as bulls from the young group showed immaturity in these analyses. Investigative tests presented a dynamic profile according to the different age groups, indicating that there is not a single test for reproductive capacity.

AVALIAÇÃO DA COMPACTAÇÃO DA CROMATINA DURANTE A MATURAÇÃO EPIDIDIMÁRIA DO ESPERMATOZÓIDE DE TOURO

Os exames andrológicos atuais avaliam a concentração, vigor, motilidade, turbilhonamento e patologias morfológicas dos espermatozoides; porém, mesmo aprovados em exames andrológicos, alguns touros não respondem de maneira eficaz, seja na monta natural ou em processos de fertilização in vitro. Alterações na cromatina dos espermatozoides pode ser um fator que influência o desempenho dos touros e que geralmente não é avaliada em exames andrológicos. O presente trabalho tem por objetivo avaliar a compactação da cromatina durante a maturação do espermatozoide no epidídimo, correlacionando características morfométricas da cabeça dos espermatozoides, a compactação da cromatina e a maturação epididimária. Para isso foram coletados espermatozoides do túbulo seminífero, cabeça, corpo e cauda do epidídimo, além do ducto deferente de cinco touros. Esses espermatozoides foram avaliados por análise de imagem computacional de esfregaços corados com azul de toluidina. No geral, espermatozoides do túbulo seminífero apresentaram menor área, perímetro, largura, comprimento, elipsidade, e harmônicas Fourier (F0, F1 e F2) quando comparados aos do epidídimo (cabeça, corpo e cauda) e ducto deferente. A análise da descompactação e heterogeneidade da cromatina demonstrou que ambos os parâmetros decresceram no decorrer do processo de maturação espermática. A proporção de espermatozoides normais (com ausência de áreas de descompactação de cromatina) foi menor nos túbulos seminíferos em relação às demais regiões. Além disso, porcentagem superior de espermatozoides com descompactação de cromatina na base (DB), metade basal (DMB) e no eixo central (DEC) da cabeça foi observado nos túbulos seminíferos quando comparado as outras regiões analisadas. Observou-se que o tipo de descompactação da cromatina influencia parâmetros morfométricos da cabeça de espermatozoide. Cabeças que possuem descompactação total apresentam menor área quando avaliada por análise de imagem bidimensional, por outro lado, os que apresentam descompactação dispersas têm uma área maior, pois as cabeças com maior descompactação tendem a ser esféricas, com maior volume, mas com menor área quando observado bidimensionalmente e as de maior compactação são muito achatadas, com menor volume, mas com maior área. Foi possível verificar que na maturação espermática, inicialmente os espermatozoides apresentam descompactação cromatínica total, em seguidas as bordas laterais iniciam o processo de compactação, logo após, temos compactação da região apical, depois da central e finalmente da região basal da cabeça. Enfim, ficou demonstrado que a maturação epididimária é importante para a compactação da cromatina e consequentemente, para a morfologia final dos espermatozoides.

The current andrological exams evaluate the concentration, vigor, motility, swirling and morphological pathologies of spermatozoa. However, even when approved for andrological examinations, some bulls do not respond effectively, either in natural mating or in vitro fertilization processes. Alterations in the sperm chromatin can be a factor that influence the performance of bulls and is usually not evaluate in andrological exams. This study aims to evaluate the condensation of chromatin during sperm maturation in the epididymis, correlating morphometric characteristics of spermatozoa, chromatin condensation and epididymal maturation. For this, spermatozoa were collected from the seminiferous tubule, head, body and tail of the epididymis, as well as the ductus deferens of five bulls. These spermatozoa were evaluated by computational image analysis of toluidine blue stained smears. In general, spermatozoa of the seminiferous tubule presented smaller area, perimeter, width, length, ellipticity, and Fourier harmonics (F0, F1 and F2) when compared to the epididymis (head, body and tail) and ductus deferens. The analysis of decondensation and heterogeneity of chromatin showed that both parameters decreased during the process of sperm maturation. The proportion of normal spermatozoa (with absence of chromatin decondensation areas) was lower in the seminiferous tubules in relation to the other regions. In addition, superior percentage of spermatozoa with chromatin decondensation in the base (DB), basal half (DBH) and central axis (DCA) of the head was observed in the seminiferous tubules when compared to the other analyzed regions. The type of chromatin decondensation influences morphometric parameters of the spermatozoa head. Heads that possess total decondensation have smaller area when evaluated by two-dimensional image analysis, conversely, heads with disperse decondensation have a larger area. Heads with larger decondensation tend to be spherical, with greater volume, but with smaller area when observed two-dimensionally, and those with dsipersed decondensation are quite flattened, with smaller volume, but larger area. During sperm maturation, the spermatozoa initially present total chromatin decondensation. Then, the lateral borders begin the condensation process, followed by condensation of the apical region, central region, and the basal region of the head, respectively. Therefore, it has been demonstrated that epididymal maturation is important for the chromatin condensation, consequently, for the final morphology of the spermatozoa.

MORFOLOGIA, MORFOMETRIA E INTEGRIDADE DA CROMATINA DE ESPERMATOZOIDES EPIDIDIMÁRIOS DE GATOS

A avaliação de espermatozoides em tecnologias de reprodução assistida raramente analisa a integridade do DNA, crucial para o desenvolvimento embrionário. A técnica do azul de toluidina permite identificar alterações da cromatina com avaliação concomitante da morfometria espermática. O método foi descrito em diversas espécies, mas ao conhecimento dos autores, ainda não foi relatado em gatos. O objetivo deste estudo foi verificar a aplicabilidade da técnica de coloração de azul de toluidina em avaliar as anormalidades de DNA de espermatozoides epididimários (cabeça, corpo e cauda) de gatos. Investigar ainda se houve correlação entre as variáveis: condensação do DNA, morfologia e morfometria da cabeça espermática. Para este propósito, os índices de alteração de DNA obtidos pela técnica de azul de toluidina e laranja de acridina foram comparados, observando correlação de 65,38% (p<0,001). A estabilidade da cromatina aumentou significativamente da região da cabeça (92,06%) do epidídimo para a cauda (97,94%, p=0,0023), mas não houve diferença entre as regiões do corpo e da cauda, demonstrando que os espermatozoides provenientes destas regiões já possuem maturidade reprodutiva. Não houve correlação entre a anormalidade do DNA e a morfologia espermática como nas demais espécies, mas sim com a morfometria. Observou-se diminuição significativa do tamanho da cabeça do espermatozoide durante a passagem pelas três regiões epididimárias (p < 0,0001). A porcentagem de espermatozoides com cromatina descondensada diminuiu significativamente da região da cabeça até a cauda do epidídimo (26,36%, 15,69%, 3,38%, respectivamente, p<0,0001). Assim, concluímos que existe correlação entre área da cabeça do espermatozoide felino e condensação da cromatina.

Sperm selection in assisted reproductive technologies rarely evaluates the DNA integrity, which is crucial to the embryos development. The toluidine blue technique allows identification of chromatin alterations, simultaneously with evaluation of sperm morphometry. The method has been described in many species, but to the authors knowledge, it has yet to be described in cats. The objective of this study was to verify the applicability of the toluidine blue technique in analyzing DNA abnormalities of epididymal sperm (caput, corpus and cauda) in cats and further investigating if there was correlation between the variables: DNA condensation, morphology and morphometry of the sperm head. For this purpose, the DNA alteration indexes obtained by both toluidine blue and acridine orange techniques were compared and a 65.38% (p < 0.001) correlation was observed. The chromatin stability increased significantly in the head region of the epididymis (92.06%) in relation to the cauda (97.94%, p = 0.0023), however there was no difference between the caput and cauda regions, which demonstrates that sperm coming from these region are already mature. There was no correlation between the DNA abnormality and the sperm morphology as observed in other species, however there was correlation to morphometry. A significant decrease of the sperm head size was observed during the passage of the three epididymal regions (p < 0.0001). The percentage of sperm with deficient chromatin condensation decreased significantly from caput region to cauda of the epididymis (26.36%, 15.69%, 3.38%, respectively, p < 0.0001). Therefore, the evaluation of sperm head size can predict the quality of chromatin condensation.

CARACTERIZAÇÃO HISTOQUÍMICA NO DIAGNÓSTICO DA BABESIOSE BOVINA POR Babesia bovis.

A babesiose é uma doença hemolítica transmitida por carrapatos e causada por protozoários intraeritrocitários do gênero Babesia. Esta é uma doença de incidência elevada na Região Sul do Brasil e responsável por perdas econômicas consideráveis. O diagnóstico clínico-patológico pode ser feito através da demonstração do parasita pelo exame de esfregaços sanguíneos ou de tecidos frescos. Entretanto, com frequência, somente órgãos fixados em formol são remetidos para laboratórios de patologia, o que impossibilita a realização do esfregaço. O principal objetivo deste estudo foi encontrar técnicas histoquímicas alternativas e capazes de aprimorar a evidenciação de B. bovis intraeritrocitária. Para este estudo, foram analisadas, retrospectivamente, amostras de tecidos de 50 casos de necropsias de bovinos, as quais haviam sido fixadas em formol e processadas rotineiramente para histopatologia. Os casos foram divididos em um grupo controle, constituído por 12 casos de babesiose cerebral com substância cinzenta encefálica róseo-cereja característica (grupo A), e 38 casos sugestivos de tristeza parasitária bovina (grupo B), conforme os protocolos de necropsias. Foram testadas as técnicas histoquímicas de Azul Alciano, Azul de Metileno, Azul de Toluidina, Giemsa, Gram (método de McCallum-Goodpasture), Grocott, Ácido Periódico de Schiff e Ziehl-Neelsen. Dentre estas, observou-se que as técnicas de Azul de Metileno e Azul de Toluidina permitiram observar características morfológicas e tintoriais de maneira mais nítida, auxiliando na identificação de B. bovis. Adicionalmente, foram estabelecidos vários parâmetros clínico-epidemiológicos e anatomopatológicos da babesiose por B. bovis.

Babesiosis is a hemolytic tick-borne disease caused by intraerythrocytic protozoal parasites of the genus Babesia. This is a disease of high incidence in the South region of Brazil and responsible for considerable economic losses. Clinical-pathological diagnosis can be made by demonstrating the parasite by examining blood smears or fresh tissues. However, frequently, only formalin-fixed organs are sent to pathology laboratories, which makes it impossible to perform the smears. The main objective of this study was to find alternative histochemical techniques capable to improve the identification of intraerythrocytic B. bovis in histological sections. For this study, tissue samples from 50 bovine necropsy cases were retrospectively analyzed, which had been fixed in formalin and routinely processed for histopathology. The cases were divided into a control group, consisting of 12 cases of cerebral babesiosis with characteristic pink-cherry gray matter (group A), and 38 cases suggestive of cattle tick fever (group B), according to necropsy protocols. Histochemical techniques of Alcian Blue, Methylene Blue, Toluidine Blue, Giemsa, Gram (McCallum-Goodpasture method), Grocott, Periodic Acid of Schiff and Ziehl-Neelsen were tested. Among these, it was observed that the techniques of Methylene Blue and Toluidine Blue allowed to observe morphological and dye characteristics in a clearer way, aiding in the identification of B. bovis. In addition, several clinical-epidemiological and anatomopathological parameters of babesiosis caused by B. bovis were established.

Avaliação computacional da compactação da cromatina e de características morfométricas da cabeça de espermatozoides de coelho (Oryctolagus cuniculus) / Computational evaluation of chromatin condensation and morphometric characteristics of rabbit (Oryctolagus cuniculus) sperm head

Investigou-se a correlação entre a morfometria da cabeça e a intensidade da condensação e heterogeneidade da cromatina em espermatozoides de coelho (Oryctolagus cuniculus). Para tal, utilizaram-se 35 esfregaços de sêmen de coelhos da raça Nova Zelândia, corados com azul de toluidina e avaliados por análise de imagem computacional. As imagens foram obtidas digitalmente em tons de cinza e avaliadas por algoritmos desenvolvidos em ambiente de programação Scilab. As mensurações obtidas da cabeça dos espermatozoides foram área, perímetro, comprimento, largura, relação comprimento largura, elipsidade, fator de forma, descritores Fourier e simetria lateral e anteroposterior. Também foram avaliadas a intensidade da compactação e a heterogeneidade da cromatina espermática. Os espermatozoides de coelho apresentaram compactação e heterogeneidade cromatínica mais intensas do que os de touro e observou-se correlação significativa entre características morfométricas da cabeça e compactação e heterogeneidade cromatínica. Conclui-se que a cromatina é importante para a constituição morfológica da cabeça de espermatozoides de coelho e que a cromatina espermática de coelho é naturalmente mais heterogênea e menos compactada que a de touro.(AU)

The correlation between the head morphometry and the intensity of condensation and heterogeneity of sperm chromatin were investigated in rabbit (Oryctolagus cuniculus). To this, 35 semen smears from New Zealand rabbits were stained with toluidine blue and evaluated by computer image analysis. The images were obtained in digital grayscale and analyzed by algorithms developed in the Scilab programming environment. The measurements obtained from the sperm heads were area, perimeter, length, width, length:width ratio, ellipticity, shape factor, lateral and anterior-posterior symmetries, and Fourier descriptors. The intensity and heterogeneity of the compaction of sperm chromatin was also evaluated. The rabbit spermatozoa showed chromatin heterogeneity and condensation more intense than the bull spermatozoa, and it was observed correlation between morphometric characteristics of the head and chromatin compaction and heterogeneity. The results suggest that chromatin is important for the morphological constitution of the head morphology spermatozoa head, as well as, rabbit sperm chromatin is inherently more heterogeneous and less condensed than the bull sperm chromatin.(AU)

IMPORTÂNCIA DOS MASTÓCITOS NA PATOGÊNESE DA DISTROFIA MUSCULAR DE DUCHENNE EM CÃES GOLDEN RETRIEVER

IMPORTÂNCIA DOS MASTÓCITOS NA PATOGÊNESE DA DISTROFIA MUSCULAR DE DUCHENNE EM CÃES GOLDEN RETRIEVER RESUMO - O cão Golden Retriever Muscular Dystrophy (GRMD) é o melhor modelo natural da distrofia muscular de Duchenne (DMD) com manifestações genotípicas e fenotípicas semelhantes à doença humana. Como nos afetados pela DMD, a proliferação progressiva de tecido conectivo no endomísio das fibras musculares ocorre em paralelo ao curso clínico da doença nos animais GRMD. Estudos indicam a relação dos mastócitos com a deposição de tecido fibroso devido a liberação de seus mediadores que ativam os fibroblastos. O objetivo desse trabalho foi o de avaliar a expressão dos mastócitos e sua possível relação com as lesões musculares e fibrose em cães GRMD de diferentes idades. Foram utilizados fragmentos de quatro grupos musculares esqueléticos (masseter, diafragma, tríceps braquial e bíceps femoral) de dez cães entre dois a oito meses de idade sendo seis afetados e quatro controles. As amostras foram processadas por técnicas usuais de histologia, coradas com hematoxilina e eosina, azul de toluidina para verificar a expressão dos mastócitos e tricrômio de Azan para a evidenciação e quantificação da fibrose. Em todos os grupos musculares dos cães GRMD o infiltrado de mastócitos apresentou aumento significativo comparado ao grupo controle. O número médio de mastócitos diminuiu com a idade dos cães GRMD. Todos os grupos musculares apresentaram aumento significativo na quantidade de tecido colagenoso em relação ao grupo controle. A deposição de tecido fibroso diminuiu de acordo com a idade dos animais. Dos resultados afere-se que o aumento da degranulação dos mastócitos ocorreu em cães GRMD mais jovens (2 meses) fato que potencializou o aumento na deposição de tecido fibroso nas fibras musculares que foi diminuindo gradativamente com o tempo e a idade dos animais. Outros estudos são necessários para esclarecer o papel dos mastócitos na patogênese da fibrose, a fim de contribuir no desenvolvimento de novas abordagens terapêuticas e melhorar a expectativa de vida de humanos e cães afetados pela distrofia muscular.

IMPORTANCE OF MAST CELLS IN PATHOGENESIS OF DUCHENNE MUSCULAR DYSTROPHY IN GOLDEN RETRIEVER DOGS ABSTRACT - Golden Retriever Muscular Dystrophy (GRMD) is the best natural model of Duchenne muscular dystrophy (DMD) with genotypic and phenotypic manifestations similar the human disease. As in to DMD patients, the progressive proliferation of connective tissue in the endomysium of the muscle fibers is parallel to the clinical course of disease in GRMD animals. Studies indicate the relationship of mast cells with the deposition of fibrous tissue due to the release of mediators that activate fibroblasts. The aim of this study was to evaluate the expression of mast cells and its possible relation with muscle injury and fibrosis in GRMD dogs at different ages. It was used fragments of four skeletal muscle groups (masseter, diaphragm, triceps brachial and biceps femoris) of ten dogs between two and eight months age, six affected and four controls. Samples were processed by usual techniques of histology, stained with hematoxylin-eosin and toluidine blue, to verify the expression of mast cells, and Azan trichrome for evaluation and quantification of fibrous. In all muscle groups of dogs GRMD the infiltration of mast cells increased significantly compared to control group. The average number of mast cells decreased with the age of GRMD dogs. All muscle groups showed a significant increase in the amount of collagenous tissue in the control group. The deposition of fibrous tissue decreased with the age of the animals. Possibly, the increase of mast cell degranulation and mediator release would occur in younger GRMD dogs (2 months), fact that potentiated the increase deposition of fibrous tissue in muscle fibers which was gradually decreasing over time and age of the animals. Other studies are needed to clarify the role of mast cells in the pathogenesis of fibrosis in order to contribute to the development of new therapeutic approaches and improve the life expectancy of humans and dogs affected by muscular dystrophy.

Análise computacional da compactação da cromatina de espermatozoides de galo / Computational analysis of chromatin condensation of rooster spermatozoa

Testaram-se variantes metodológicas utilizando azul de toluidina (AT), até se estabelecer um protocolo confiável para a avaliação computacional da compactação da cromatina em espermatozoides de galo. Para tal, foram utilizados sêmen de 10 galos com 35 semanas de idade e sêmen de 10 galos com 60 semanas de idade. O melhor método foi o de hidrólise com ácido clorídrico 1N por 10 minutos, coloração em cubeta com AT 0,025 por cento, pH 4,0, por 20 minutos, desidratação em álcool, diafanização em xilol e montagem com bálsamo do Canadá. Todas as amostras de sêmen foram submetidas a este protocolo e posteriormente avaliadas por análise de imagem computacional, em que foram feitas mensurações da área, comprimento, largura, perímetro, homogeneidade da compactação da cromatina dentro de cada cabeça e intensidade de compactação da cromatina. Os espermatozoides de galos velhos apresentaram mais alterações na cromatina que os de galos jovens. Os galos jovens apresentaram cabeça dos espermatozoides maior que os galos mais velhos. A análise computacional da compactação da cromatina mostrou-se um método menos subjetivo e mais preciso que a avaliação visual das cabeças dos espermatozoides.(AU)

The methodological variants using toluidina blue (AT) to establish a trustworthy protocol for the computational analysis of chromatin condensation of rooster spermatozoa were studied. Twenty semen samples were used: ten from 35-week-old roosters and ten from 60-week-old roosters. Different methods of denaturation and staining were tested. The best method was hydrolysis with 1N HCl for 10 minutes, staining in bucket with 0.025 percent AT, pH 4.0, for 20 minutes, dehydration in alcohol, clearing in xylol, and mounted with Canada balsam. All the semen samples were submitted to this protocol and later evaluated by computational image analysis. Area, length, width, perimeter, and chromatin compaction homogeneity of head spermatozoa were measured. The sperm of older roosters presented more chromatin changes than the ones of younger ones. The spermatozoa of younger roosters presented bigger heads than the ones of older roosters. The computational analysis of chromatin compaction showed to be less subjective and more precise than the visual evaluation for identification of chromatin alterations of rooster spermatozoa.(AU)

Compactação da cromatina e morfometria da cabeça de espermatozoides na produção de embriões in vitro utilizando touros zebuínos / Chromatin packaging and sperm head morphometry on "in vitro" fertilization programs with zebu bulls

O objetivo deste trabalho foi avaliar a relacao entre a morfometria da cabeca do espermatozoide e a compactacao da cromatina com as taxas de clivagem e formacao de blastocisto em programas de producao de embrioes in vitro (PIV). Neste estudo foram utilizados dados de 38 rotinas de PIVs com semen de touros zebuinos com espermograma de rotina normal, realizadas em dois diferentes laboratorios de Uberaba, Minas Gerais, Brasil. Para avaliar a morfometria e compactacao da cromatina, foram usados esfregacos de semen corados com azul de toluidina e avaliados por analise de imagem computacional. A cromatina foi avaliada quanto a intensidade de compactacao e homogeneidade. Os resultados permitem concluir que pequenas variacoes na morfometria da cabeca e na compactacao da cromatina espermatica pouco influenciam a clivagem e o numero de blastocistos morfologicamente normais na PIV. (AU)

The objective of this work was to evaluate the relationship between sperm head morphometry and chromatin packaging with the cleavage ratio and blastocyst formation during in vitro fertilization programs (IVF). Data of 38 IVFs using semen of zebu bulls with normal spermogram, carried out at two laboratories in Uberaba, Minas Gerais, Brazil, were used in this study. Sperm smears stained with toluidine blue and analyzed by computer image analysis were used to evaluate the morphometry and chromatin packaging. The packaging intensity and homogeneity of sperm chromatin were evaluated. The results made it possible to conclude that light variations in the head morphometry and chromatin packaging had little influence on the cleavage and number of morphologically normal blastocysts during IVF. (AU)

Compactação da cromatina e morfometria da cabeça de espermatozoides na produção de embriões in vitro utilizando touros zebuínos / Chromatin packaging and sperm head morphometry on "in vitro" fertilization programs with zebu bulls

O objetivo deste trabalho foi avaliar a relacao entre a morfometria da cabeca do espermatozoide e a compactacao da cromatina com as taxas de clivagem e formacao de blastocisto em programas de producao de embrioes in vitro (PIV). Neste estudo foram utilizados dados de 38 rotinas de PIVs com semen de touros zebuinos com espermograma de rotina normal, realizadas em dois diferentes laboratorios de Uberaba, Minas Gerais, Brasil. Para avaliar a morfometria e compactacao da cromatina, foram usados esfregacos de semen corados com azul de toluidina e avaliados por analise de imagem computacional. A cromatina foi avaliada quanto a intensidade de compactacao e homogeneidade. Os resultados permitem concluir que pequenas variacoes na morfometria da cabeca e na compactacao da cromatina espermatica pouco influenciam a clivagem e o numero de blastocistos morfologicamente normais na PIV.

The objective of this work was to evaluate the relationship between sperm head morphometry and chromatin packaging with the cleavage ratio and blastocyst formation during in vitro fertilization programs (IVF). Data of 38 IVFs using semen of zebu bulls with normal spermogram, carried out at two laboratories in Uberaba, Minas Gerais, Brazil, were used in this study. Sperm smears stained with toluidine blue and analyzed by computer image analysis were used to evaluate the morphometry and chromatin packaging. The packaging intensity and homogeneity of sperm chromatin were evaluated. The results made it possible to conclude that light variations in the head morphometry and chromatin packaging had little influence on the cleavage and number of morphologically normal blastocysts during IVF.

Efeitos de diferentes diluidores sobre a cinética, membranas, morfologia e cromatina espermáticas durante a refrigeração de sêmen equino / Effects of different extenders on sperm kinetic, membranes, morphology, and chromatin during equine semen cooling

Incrementar a eficiência do processo de refrigeração do sêmen é de grande interesse na reprodução da espécie equina, à medida que a população de equinos cresce, também aumenta a demanda para a comercialização e transporte de sêmen refrigerado. Esse trabalho foi realizado para verificar os efeitos de diferentes diluidores para refrigeração de sêmen equino a 5°C sobre a cinética, membranas, morfologia e cromatina espermáticas durante 12 horas de armazenagem. Foram utilizados quatro ejaculados de quatro garanhões de diferentes raças, colhidos em intervalos semanais. Imediatamente após a colheita, o sêmen in natura foi avaliado quanto ao movimento espermático utilizando-se o sistema computadorizado de análise espermática (CASA), integridade das membranas plasmática e acrossomal e o potencial de membrana mitocondrial, utilizando-se sondas fluorescentes (PI, H342, FITCPSA e JC-1, por microscopia de epifluorescência), morfologia espermática por microscopia de contraste de interferência diferencial (DIC) e desnaturação da cromatina pela coloração de Azul de Toluidina. Logo após as análises, o sêmen foi diluído usando-se três diluidores diferentes: SMT, à base de leite desnatado e meio de Tyrode (adaptado de: PADILLA; FOOTE, 1991), BSAG, diluidor contendo BSA (adaptado de: GIBB et al., 2011) e SMK, à base de leite desnatado (KENNEY et al., 1975; controle), em seguida foi envasado em bisnagas na concentração de 50 x 106 sptz/mL e refrigerado a 5°C em caixas BotuFLEX® (Botupharma, Botucatu-SP), durante um período de 12 horas. [...] Conclui-se que a refrigeração do sêmen equino a 5ºC altera a cinética espermática de forma oscilante entre os diluidores no decorrer do tempo até 12 horas. Os diluidores SMT e o SMK preservam melhor a cinética, integridade de membranas e morfologia espermática do que o diluidor BSAG.

To develop the efficiency of cooling semen is the great advantage in the equine reproduction, as according to the equine population to grow up, too increase the demand to market and transport of cooling semen. This experiment was performed to verify the effects of different extenders to equine cooling semen at 5°C on the sperm kinetic, membranes, morphology and chromatin during 12 hours of storage. Were utilized four ejaculates from four stallions of different breeds, collected a week. Immediately after the collection, the in natura semen was evaluated as the sperm movement using the Computer-Assisted Semen Analysis (CASA), integrity of plasma and acrossomal membranes and mitochondrial membrane potential, using the fluorescent probes (PI, H342, FITC-PSA and JC-1, by epifluorescência microscopy), sperm morphology by microscopy of differential interference contrast (DIC) and chromatin denaturation by Toluidine blue. As soon as finished the analyses, the semen was diluted using three different extenders: SMT, skim milk based and Tyrode medium (adapted from PADILLA; FOOTE, 1991), BSAG, extender containing BSA (adapted from GIBB et al., 2011) and SMK, skim milk based (KENNEY et al., 1975; control), following was packed in flasks at 50 x 106sperm/mL concentration and cooling at 5°C in BotuFLEX® (Botupharma, Botucatu-SP) box, during 12 hours. The semen was analyzed 5 minutes after dilution (T0), 4 (T4), 8 (T8) and 12 hours (T12) after cooling about sperm movement, plasma and acrossomal membranes integrity and mitochondrial membrane potential sperm morphology and chromatin denaturation. The statistical analysis was performed using Statistical Analysis System (SAS inst. Inc.) software. [...] It was concluded that the equine semen cooling at 5ºC change the sperm kinetic oscillating way among extenders during the time until 12 hours. The SMT and SMK extenders are better to preserve the sperm kinetic, membranes integrity and morphology than BSAG extender.

Efeitos de diferentes diluidores sobre a cinética, membranas, morfologia e cromatina espermáticas durante a refrigeração de sêmen equino / Effects of different extenders on sperm kinetic, membranes, morphology, and chromatin during equine semen cooling

Incrementar a eficiência do processo de refrigeração do sêmen é de grande interesse na reprodução da espécie equina, à medida que a população de equinos cresce, também aumenta a demanda para a comercialização e transporte de sêmen refrigerado. Esse trabalho foi realizado para verificar os efeitos de diferentes diluidores para refrigeração de sêmen equino a 5°C sobre a cinética, membranas, morfologia e cromatina espermáticas durante 12 horas de armazenagem. Foram utilizados quatro ejaculados de quatro garanhões de diferentes raças, colhidos em intervalos semanais. Imediatamente após a colheita, o sêmen in natura foi avaliado quanto ao movimento espermático utilizando-se o sistema computadorizado de análise espermática (CASA), integridade das membranas plasmática e acrossomal e o potencial de membrana mitocondrial, utilizando-se sondas fluorescentes (PI, H342, FITCPSA e JC-1, por microscopia de epifluorescência), morfologia espermática por microscopia de contraste de interferência diferencial (DIC) e desnaturação da cromatina pela coloração de Azul de Toluidina. Logo após as análises, o sêmen foi diluído usando-se três diluidores diferentes: SMT, à base de leite desnatado e meio de Tyrode (adaptado de: PADILLA; FOOTE, 1991), BSAG, diluidor contendo BSA (adaptado de: GIBB et al., 2011) e SMK, à base de leite desnatado (KENNEY et al., 1975; controle), em seguida foi envasado em bisnagas na concentração de 50 x 106 sptz/mL e refrigerado a 5°C em caixas BotuFLEX® (Botupharma, Botucatu-SP), durante um período de 12 horas. [...] Conclui-se que a refrigeração do sêmen equino a 5ºC altera a cinética espermática de forma oscilante entre os diluidores no decorrer do tempo até 12 horas. Os diluidores SMT e o SMK preservam melhor a cinética, integridade de membranas e morfologia espermática do que o diluidor BSAG. (AU)

To develop the efficiency of cooling semen is the great advantage in the equine reproduction, as according to the equine population to grow up, too increase the demand to market and transport of cooling semen. This experiment was performed to verify the effects of different extenders to equine cooling semen at 5°C on the sperm kinetic, membranes, morphology and chromatin during 12 hours of storage. Were utilized four ejaculates from four stallions of different breeds, collected a week. Immediately after the collection, the in natura semen was evaluated as the sperm movement using the Computer-Assisted Semen Analysis (CASA), integrity of plasma and acrossomal membranes and mitochondrial membrane potential, using the fluorescent probes (PI, H342, FITC-PSA and JC-1, by epifluorescência microscopy), sperm morphology by microscopy of differential interference contrast (DIC) and chromatin denaturation by Toluidine blue. As soon as finished the analyses, the semen was diluted using three different extenders: SMT, skim milk based and Tyrode medium (adapted from PADILLA; FOOTE, 1991), BSAG, extender containing BSA (adapted from GIBB et al., 2011) and SMK, skim milk based (KENNEY et al., 1975; control), following was packed in flasks at 50 x 106sperm/mL concentration and cooling at 5°C in BotuFLEX® (Botupharma, Botucatu-SP) box, during 12 hours. The semen was analyzed 5 minutes after dilution (T0), 4 (T4), 8 (T8) and 12 hours (T12) after cooling about sperm movement, plasma and acrossomal membranes integrity and mitochondrial membrane potential sperm morphology and chromatin denaturation. The statistical analysis was performed using Statistical Analysis System (SAS inst. Inc.) software. [...] It was concluded that the equine semen cooling at 5ºC change the sperm kinetic oscillating way among extenders during the time until 12 hours. The SMT and SMK extenders are better to preserve the sperm kinetic, membranes integrity and morphology than BSAG extender. (AU)

Avaliação da integridade cromatínica de espermatozóides de galos (Gallus gallus, Linnaeus, 1758) de linhagem pesada em duas idades / Evaluation of chromatin integrity of fowl spermatozoa (Gallus gallus, Linnaeus, 1758) from meat chicken in two ages

Na avicultura, a avaliação de fertilidade em machos é de extrema importância, para garantir uma melhor produção de ovos férteis. As técnicas para avaliação de fertilidade em galos são pouco exploradas, sendo que na maioria das vezes, a avaliação é feita por amostragem e levando em consideração, apenas fatores morfofisiológicos, diretamente relacionados com o espermatozóide. Mas é sabido que, em outras espécies, além dos fatores morfofisiológicos, existem problemas intrínsecos ao espermatozóide, como a baixa compactação da cromatina, que pode levar a distúrbios de fertilidade, que na maioria das vezes não são diagnosticados. O objetivo desse trabalho foi a adaptação de técnicas de avaliação da cromatina, já descritas em outras espécies, para aves de linhagem pesada (Gallus gallus, Linnaeus, 1758), correlacionando as alterações cromatínicas com as alterações morfológicas e com a fertilidade. Para tanto, sêmen de galo com diferentes níveis de fertilidade, foram utilizados em diferentes métodos para identificação de alterações na cromatina, utilizando os corantes azul de toluidina e alaranjado de acridina. As avaliações demonstraram que esfregaços de sêmen fresco de galo com posterior fixação geram artefatos que levam a alterações na forma da cabeça e na integridade da cromatina, não sendo indicados em métodos de avaliação de fertilidade. Apesar de todos os métodos testados apresentarem falhas metodológicas e um certo grau de subjetividade, o método que gerou melhores resultados foi a mistura de uma gota de sêmen conservado em formol salina e uma gota do alaranjado de acridina sobre lâmina de microscopia, com posterior secagem e observação em microscopia de fluorescência com filtro de excitação azul. (AU)

In poultry breeding, male fertility has extreme importance to assure a better production of fertile eggs. Evaluation techniques for fertility of fowls are not well explored and in most cases, the evaluation is done through sampling considering only morphophysiological factors directly related with the spermatozoon. It's known that in other species, besides morphophysiological factors, there are intrinsic problems to the spermatozoon such as less chromatin condensation that can lead to fertility problems that in most cases are not diagnosised. The purpose of this work was the adaptation of techniques of chromatin evaluation for chicken (Gallus Gallus, Linnaeus, 1758) which have already been described in other species, correlating the chromatin alterations with the morphological alterations and the fertility. Fowl semen samples with different levels of fertility were used for test different methods to identify chromatin alterations using toluidine blue and acridine orange die. Evaluations have shown that smears of fresh semen with posterior fixation generate artfacts that change the head shape and the chromatin integrity not being indicated in methods of fertility evaluation. Although all the tested methods have presented methodology imperfections and some certain degree of subjectivity, the method that has generated best results was the mixture of one semen drop conserved in buffered phormol and a drop of acridine orange on microscopy slide with posterior staining and observation in fluorescence microscopy with blue excitation filter. Through this method it was verified that alterations in the chromatin condensation of fowl spermatozoa are generally not followed by morphological alterations and that generally the morphologic alterations of fowl spermatozoa are generally followed by alterations in chromatin condensation. This is an important factor in the determination of the fowl fertility.(AU)