Indirect ELISA as a complementary diagnostic method of bovine tuberculosis / ELISA indreto como método complementar de diagnóstico da tuberculose bovina

Bovine tuberculosis is an economic and health problem, requiring precise diagnostic methods for its control and eradication. The aim of this study was to evaluate the performance of a commercial enzyme-linked immunosorbent assay (ELISA) test for the diagnosis of bovine tuberculosis. A total of 1,644 cattle from eight dairy herds were evaluated using the comparative cervical tuberculin test (CCTT). Three of the herds had no recent tuberculosis infection, and the other five had shown positive results in a previous tuberculin test. For the serological diagnosis of tuberculosis, a commercial ELISA antibody test kit for Mycobacterium bovis was used. Serum samples from 846 cattle from the eight herds were evaluated using ELISA for M. bovis. Animals that were positive based on either CCTT or ELISA for M. bovis or both were sent to slaughter. Samples of their lungs, livers, and lymph nodes were collected and stored under refrigeration for microbiological culture and subsequent confirmation by polymerase chain reaction. Samples from the same tissues were also fixed with 10% formaldehyde in bottles for histopathological examination and stained with hematoxylin and eosin (HE). Of the 1,644 cattle, 61 were considered positive and 65 inconclusive based on CCTT. Retesting of the inconclusive samples identified an additional 19 positive cases, totaling 80 (4.8%) CCTT-positive animals from five herds. ELISA for M. bovis identified 4.2% (36/846) positive cattle, of which 35 were considered negative and one inconclusive based on CCTT. Of the 36 positive cases identified by ELISA for M. bovis, 27 were euthanized, 11% (3/27) showed suggestive lesions of tuberculosis on macroscopic examination, and two were confirmed by histological, microbiological, and PCR methods. The weak association of ELISA for M. bovis with the results obtained by macroscopic, histological, and microbiological isolation indicates the fragility of ELISA performance in field conditions. Therefore, it is suggested that its use as a complementary method for herd sanitation be based on the local epidemiological situation.

A tuberculose bovina é um problema econômico mundial e de saúde, que requer métodos de diagnóstico precisos para controle e erradicação. Objetivou-se com este estudo avaliar o desempenho de um teste comercial de ELISA no diagnóstico da tuberculose bovina. Foram avaliados pelo teste cervical comparativo (TCC) 1644 bovinos, provenientes de oito rebanhos de exploração leiteira, sendo três deles sem histórico recente da doença, e outros cinco com resultados positivos no último exame de tuberculinização. Para o diagnóstico sorológico da tuberculose utilizou-se um kit comercial de ELISA Mycobacterium bovis antibody test (ELISA M. bovis). Amostras de soro sanguíneo de 846 bovinos provenientes dos mesmos rebanhos foram também avaliadas no ELISA M. bovis. Os bovinos positivos no TCC e/ou ELISA M. bovis foram encaminhados para o abate sanitário. Dos positivos no ELISA para M. bovis foi realizado o exame macroscópico das carcaças e classificação das mesmas em: com presença ou ausência de lesões. Amostras de pulmão, fígado, e linfonodos, foram colhidas em duplicata para realização dos exames de cultivo microbiológico com posterior confirmação por PCR, e exame histopatológico com coloração de hematoxilina e eosina (HE). Dos 1,644 bovinos, 61 foram considerados positivos e 65 inconclusivos no TCC. O reteste dos inconclusivos identificou mais 19 positivos. No total, 80 (4,8%) bovinos positivos no TCC, provenientes de 5 rebanhos foram encaminhados para abate. O ELISA para M. bovis identificou 4,2% (36/846) de bovinos positivos, sendo 36 considerados negativos e um inconclusivo no exame de tuberculinização. Dos positivos no ELISA para M. bovis, 27 foram eutanasiados, e no exame macroscópico das carcaças 11% (3/27) dos animais apresentaram lesões sugestivas de tuberculose, e em apenas dois houve confirmação da doença pelos métodos histológico, microbiológico e PCR. A baixa associação dos resultados obtidos no ELISA para M. bovis com os exames macroscópico, histológico e isolamento microbiológico apontam para a fragilidade do desempenho do ELISA para o diagnóstico de tuberculose. Sugere-se assim que seu uso como método complementar para saneamento de rebanhos, seja adotado com cautela e considere a situação epidemiológica local.

Diagnostic performance of a commercial ELISA used as a complementary test for bovine tuberculosis in two bovine herds with different disease status / Desempenho diagnóstico de um ELISA comercial usado como teste complementar para tuberculose bovina em dois rebanhos bovinos com diferentes estágios de controle da doença

Bovine tuberculosis is a worldwide spread zoonotic disease. Intradermal tuberculinizations are the most used diagnostic tests in the world. Serological tests can be an ancillary diagnosis for bovine tuberculosis. The objective of this study was to evaluate the diagnostic performance of the ELISA Mycobacterium Bovis Antibody Test Kit IDEXX ™ in infected herds, which were in different disease control stages. One hundred and twenty animals from two dairy herds of Minas Gerais state, Brazil, were subjected to the ELISA serological test and the comparative cervical tuberculin test (CCT). Diagnostic test parameters were estimated using Bayesian latent class models and concordance between tests estimated by the frequentist approach. The ELISA test presented lower sensitivity than CCT in both herds. Its sensitivity was higher in the herd in sanitation process. Specificity estimates were above 95% in both herds. Kappa index indicated low concordance or even disagreement between tests. According to the results, the ELISA IDEXX should not be used as substitution for CCT. The tests must not be associated in series. Parallel association increased diagnostic sensitivity in the herd which was in the process of sanitation.(AU)

A tuberculose bovina é uma zoonose de distribuição mundial cujos testes mais utilizados para o diagnóstico são as tuberculinizações intradérmicas, simples e compartivas. Contudo, testes sorológicos podem constituir diagnósticos auxiliares. O objetivo deste estudo foi avaliar o desempenho diagnóstico do teste ELISA Mycobacterium Bovis Antibody Test Kit IDEXX ® em rebanhos bovinos infectados, que se encontravam em diferentes estágios de controle da doença. Cento e vinte animais de dois rebanhos leiteiros provenientes do estado de Minas Geais-Brasil foram submetidos ao ELISA e à tuberculinização cervical compartiva (TCC). Avaliou-se o desempenho dos testes por meio de modelos Bayesianos de classe latente e a concordância entre os eles, por meio de estatística frequentista. Uma maior sensibilidade do teste foi observada no rebanho previamente tuberculinizado. Em ambos os rebanhos o TCC foi mais sensível que o ELISA. Especificidade acima de 95% foi encontrada em ambos os rebanhos. Foram observadas baixa concordância ou mesmo discordância entre os testes. De acordo com os resultados obtidos, o teste ELISA-IDEXX não deve ser utilizado em substituição à TCC, tampouco devem ser associados em série. Houve aumento da sensibilidade quando os testes foram associados em paralelo no rebanho que já se encontrava em processo de saneamento.(AU)

Diagnostic performance of a commercial ELISA used as a complementary test for bovine tuberculosis in two bovine herds with different disease status / Desempenho diagnóstico de um ELISA comercial usado como teste complementar para tuberculose bovina em dois rebanhos bovinos com diferentes estágios de controle da doença

Bovine tuberculosis is a worldwide spread zoonotic disease. Intradermal tuberculinizations are the most used diagnostic tests in the world. Serological tests can be an ancillary diagnosis for bovine tuberculosis. The objective of this study was to evaluate the diagnostic performance of the ELISA Mycobacterium Bovis Antibody Test Kit IDEXX ™ in infected herds, which were in different disease control stages. One hundred and twenty animals from two dairy herds of Minas Gerais state, Brazil, were subjected to the ELISA serological test and the comparative cervical tuberculin test (CCT). Diagnostic test parameters were estimated using Bayesian latent class models and concordance between tests estimated by the frequentist approach. The ELISA test presented lower sensitivity than CCT in both herds. Its sensitivity was higher in the herd in sanitation process. Specificity estimates were above 95% in both herds. Kappa index indicated low concordance or even disagreement between tests. According to the results, the ELISA IDEXX should not be used as substitution for CCT. The tests must not be associated in series. Parallel association increased diagnostic sensitivity in the herd which was in the process of sanitation.(AU)

A tuberculose bovina é uma zoonose de distribuição mundial cujos testes mais utilizados para o diagnóstico são as tuberculinizações intradérmicas, simples e compartivas. Contudo, testes sorológicos podem constituir diagnósticos auxiliares. O objetivo deste estudo foi avaliar o desempenho diagnóstico do teste ELISA Mycobacterium Bovis Antibody Test Kit IDEXX ® em rebanhos bovinos infectados, que se encontravam em diferentes estágios de controle da doença. Cento e vinte animais de dois rebanhos leiteiros provenientes do estado de Minas Geais-Brasil foram submetidos ao ELISA e à tuberculinização cervical compartiva (TCC). Avaliou-se o desempenho dos testes por meio de modelos Bayesianos de classe latente e a concordância entre os eles, por meio de estatística frequentista. Uma maior sensibilidade do teste foi observada no rebanho previamente tuberculinizado. Em ambos os rebanhos o TCC foi mais sensível que o ELISA. Especificidade acima de 95% foi encontrada em ambos os rebanhos. Foram observadas baixa concordância ou mesmo discordância entre os testes. De acordo com os resultados obtidos, o teste ELISA-IDEXX não deve ser utilizado em substituição à TCC, tampouco devem ser associados em série. Houve aumento da sensibilidade quando os testes foram associados em paralelo no rebanho que já se encontrava em processo de saneamento.(AU)

First record of bovine tuberculosis in the State of Acre, Brazil / Primeiro registro da tuberculose bovina no Estado do Acre, Brasil

Bovine tuberculosis is an infectious disease caused by the bacterium Mycobacterium bovis. It has great health and economic relevance for dairy herds, in addition to being a zoonosis. Therefore, the aim of this study was to check the frequency of bovine tuberculosis in dairy herds in the microregion of Rio Branco, Acre. For diagnosis, the tuberculin skin test wasused through the comparative technique. Of 527 cattle subjected to testing, one animal (0.2%) tested positive for the reagent. According to the results of this preliminary study, which reports the first record of bovine tuberculosis in Acre, it can be seen that the frequency of this disease in the microregion of Rio Branco indicates a low spread of M. bovis in dairy herds. This condition can assist with elimination of possible outbreakswithout incurring high costs to producers and, subsequently, help Acre achieve a tuberculosis-free status through the process of eradication.

A tuberculose bovina é uma doença infectocontagiosa ocasionada pelo Mycobacterium bovis, a qual possui grande relevância sanitária e econômica para rebanhos leiteiros, além de ser uma zoonose. Objetivou-se verificar a freqüência da tuberculose bovina em rebanhos leiteiros da microrregião de Rio Branco, Acre. Para o diagnóstico, foi utilizado o teste tuberculínico pela técnica comparativa. Dos 527 bovinos submetidos ao teste, um animal (0,2%) foi reagente positivo. Conforme os resultados deste estudo preliminar, que se configura o primeiro registro da tuberculose bovina no Acre, observa-se que a frequência da enfermidade na microrregião de Rio Branco denota uma baixa propagaçãodo M. bovis nos rebanhos leiteiros. Esta condição é favorável para eliminar possíveis focos sem elevados custos ao produtor e, posteriormente, alcançar o status de estado livre pelo processo de erradicação.

First record of bovine tuberculosis in the State of Acre, Brazil / Primeiro registro da tuberculose bovina no Estado do Acre, Brasil

Bovine tuberculosis is an infectious disease caused by the bacterium Mycobacterium bovis. It has great health and economic relevance for dairy herds, in addition to being a zoonosis. Therefore, the aim of this study was to check the frequency of bovine tuberculosis in dairy herds in the microregion of Rio Branco, Acre. For diagnosis, the tuberculin skin test wasused through the comparative technique. Of 527 cattle subjected to testing, one animal (0.2%) tested positive for the reagent. According to the results of this preliminary study, which reports the first record of bovine tuberculosis in Acre, it can be seen that the frequency of this disease in the microregion of Rio Branco indicates a low spread of M. bovis in dairy herds. This condition can assist with elimination of possible outbreakswithout incurring high costs to producers and, subsequently, help Acre achieve a tuberculosis-free status through the process of eradication.(AU)

A tuberculose bovina é uma doença infectocontagiosa ocasionada pelo Mycobacterium bovis, a qual possui grande relevância sanitária e econômica para rebanhos leiteiros, além de ser uma zoonose. Objetivou-se verificar a freqüência da tuberculose bovina em rebanhos leiteiros da microrregião de Rio Branco, Acre. Para o diagnóstico, foi utilizado o teste tuberculínico pela técnica comparativa. Dos 527 bovinos submetidos ao teste, um animal (0,2%) foi reagente positivo. Conforme os resultados deste estudo preliminar, que se configura o primeiro registro da tuberculose bovina no Acre, observa-se que a frequência da enfermidade na microrregião de Rio Branco denota uma baixa propagaçãodo M. bovis nos rebanhos leiteiros. Esta condição é favorável para eliminar possíveis focos sem elevados custos ao produtor e, posteriormente, alcançar o status de estado livre pelo processo de erradicação.(AU)

False-negative reactions to the comparative intradermal tuberculin test for bovine tuberculosis / Reações falso-negativas ao teste cervical comparativo para tuberculose bovina

According to the Brazilian National Program for the Control and Eradication of Animal Brucellosis and Tuberculosis (PNCEBT), the routine tests for the diagnosis of bovine tuberculosis in the country are the simple intradermal tuberculin test (SITT) of the Ministry of Agriculture, Livestock and Food Supply (MAPA), the caudal fold test and the comparative intradermal tuberculin test (CITT). The latter is also used as a confirmatory test. A group of 53 animals from three dairy herds in a focal area for bovine tuberculosis, that were submitted to depopulation in the state of Rio Grande do Sul, were submitted to the CITT. Tissues were cultured and the resulting colonies were confirmed by PCR and DNA sequencing. Among the 53 animals analyzed using the CITT, 32 (60.4%) were negative, 14 (26.4%) were positive and seven (13.2%) results were inconclusive. The CITT detected 11 of the 39 animals with culture-confirmed M. bovis infection as positive. Among the total of 14 uninfected animals based on cultures, the CBT detected eight as negative. Thus, the CITT demonstrated sensitivity of 28.2% and specificity of 57.1% for the population sampled. A total of 24/32 (75.0%) of the animals with negative CITT results were culture positive (confirmed by PCR) and were considered false negatives based on the CITT. The maintenance of these false-negative animals in herds has serious implications for the control of the disease, since they can be a source of infection. The addition of complementary tests could help identify such animals and increase the odds of diagnostic success.(AU)

No Brasil, segundo o Programa Nacional de Controle e Erradicação da Brucelose e Tuberculose Animal (PNCEBT), do Ministério da Agricultura, Pecuária e Abastecimento (MAPA), os testes de rotina para o diagnóstico de tuberculose bovina são o teste cervical simples (TCC), o teste da prega caudal (TPC) e o teste cervical comparativo (TCC), sendo que o último também é utilizado como teste confirmatório. Um grupo de 53 animais oriundos de três rebanhos leiteiros de área de foco para tuberculose bovina que foram submetidos a vazio sanitário no Rio Grande do Sul foi submetido ao TCC. Os tecidos destes animais foram cultivados e as colônias resultantes confirmadas por PCR e sequenciamento de DNA. Dos 53 animais analisados no TCC, 32 (60,4%) foram negativos, 14 (26,4%) positivos e sete (13,2%) inconclusivos, com base no PNCEBT. O TCC detectou como positivos 11 dos 39 animais com infecção por M. bovis confirmada por cultivo. Do total de 14 animais não infectados, baseado na cultura, o TCC detectou oito como negativos. Assim, o TCC apresentou, para a população amostrada, sensibilidade de 28,2% e especificidade de 57,1%. Um total de 24/32 (75,0%) dos animais negativos ao TCC foi positivo no cultivo (confirmado por PCR), sendo considerados falso-negativos ao TCC. A manutenção destes animais falso-negativos nos rebanhos tem sérias implicações para o controle da enfermidade, já que os mesmos podem ser fonte de infecção. A adição de testes complementares poderia auxiliar na identificação destes animais, aumentando a cobertura diagnóstica.(AU)

False-negative reactions to the comparative intradermal tuberculin test for bovine tuberculosis / Reações falso-negativas ao teste cervical comparativo para tuberculose bovina

According to the Brazilian National Program for the Control and Eradication of Animal Brucellosis and Tuberculosis (PNCEBT), the routine tests for the diagnosis of bovine tuberculosis in the country are the simple intradermal tuberculin test (SITT) of the Ministry of Agriculture, Livestock and Food Supply (MAPA), the caudal fold test and the comparative intradermal tuberculin test (CITT). The latter is also used as a confirmatory test. A group of 53 animals from three dairy herds in a focal area for bovine tuberculosis, that were submitted to depopulation in the state of Rio Grande do Sul, were submitted to the CITT. Tissues were cultured and the resulting colonies were confirmed by PCR and DNA sequencing. Among the 53 animals analyzed using the CITT, 32 (60.4%) were negative, 14 (26.4%) were positive and seven (13.2%) results were inconclusive. The CITT detected 11 of the 39 animals with culture-confirmed M. bovis infection as positive. Among the total of 14 uninfected animals based on cultures, the CBT detected eight as negative. Thus, the CITT demonstrated sensitivity of 28.2% and specificity of 57.1% for the population sampled. A total of 24/32 (75.0%) of the animals with negative CITT results were culture positive (confirmed by PCR) and were considered false negatives based on the CITT. The maintenance of these false-negative animals in herds has serious implications for the control of the disease, since they can be a source of infection. The addition of complementary tests could help identify such animals and increase the odds of diagnostic success.(AU)

No Brasil, segundo o Programa Nacional de Controle e Erradicação da Brucelose e Tuberculose Animal (PNCEBT), do Ministério da Agricultura, Pecuária e Abastecimento (MAPA), os testes de rotina para o diagnóstico de tuberculose bovina são o teste cervical simples (TCC), o teste da prega caudal (TPC) e o teste cervical comparativo (TCC), sendo que o último também é utilizado como teste confirmatório. Um grupo de 53 animais oriundos de três rebanhos leiteiros de área de foco para tuberculose bovina que foram submetidos a vazio sanitário no Rio Grande do Sul foi submetido ao TCC. Os tecidos destes animais foram cultivados e as colônias resultantes confirmadas por PCR e sequenciamento de DNA. Dos 53 animais analisados no TCC, 32 (60,4%) foram negativos, 14 (26,4%) positivos e sete (13,2%) inconclusivos, com base no PNCEBT. O TCC detectou como positivos 11 dos 39 animais com infecção por M. bovis confirmada por cultivo. Do total de 14 animais não infectados, baseado na cultura, o TCC detectou oito como negativos. Assim, o TCC apresentou, para a população amostrada, sensibilidade de 28,2% e especificidade de 57,1%. Um total de 24/32 (75,0%) dos animais negativos ao TCC foi positivo no cultivo (confirmado por PCR), sendo considerados falso-negativos ao TCC. A manutenção destes animais falso-negativos nos rebanhos tem sérias implicações para o controle da enfermidade, já que os mesmos podem ser fonte de infecção. A adição de testes complementares poderia auxiliar na identificação destes animais, aumentando a cobertura diagnóstica.(AU)

Nasal swab real-time PCR is not suitable for in vivo diagnosis of bovine tuberculosis / A PCR em tempo real de swab nasal não é adequada para o diagnóstico in vivo de tuberculose bovina

Bovine tuberculosis (bTB) is a zoonosis causing economic losses and public health risks in many countries. The disease diagnosis in live animals is performed by intradermal tuberculin test, which is based on delayed hypersensitivity reactions. As tuberculosis has complex immune response, this test has limitations in sensitivity and specificity. This study sought to test an alternative approach for in vivo diagnosis of bovine tuberculosis, based on real-time polymerase chain reaction (PCR). DNA samples, extracted from nasal swabs of live cows, were used for SYBR® Green real-time PCR, which is able to differentiate between Mycobacterium tuberculosis and Mycobacterium avium complexes. Statistical analysis was performed to compare the results of tuberculin test, the in vivo gold standard bTB diagnosis method, with real-time PCR, thereby determining the specificity and sensitivity of molecular method. Cervical comparative test (CCT) was performed in 238 animals, of which 193 had suitable DNA from nasal swabs for molecular analysis, as indicated by amplification of glyceraldehyde-3-phosphate dehydrogenase (GAPDH) gene, and were included in the study. In total, 25 (10.5%) of the animals were CCT reactive, of which none was positive in the molecular test. Of the 168 CCT negative animals, four were positive for M. tuberculosis complex at real time PCR from nasal swabs. The comparison of these results generated values of sensitivity and specificity of 0% and 97.6%, respectively; moreover, low coefficients of agreement and correlation (-0.029 and -0.049, respectively) between the results obtained with both tests were also observed. This study showed that real-time PCR from nasal swabs is not suitable for in vivo diagnosis of bovine tuberculosis; thus tuberculin skin test is still the best option for this purpose.(AU)

A tuberculose bovina (bTB) é uma zoonose que causa perdas econômicas e riscos à saúde pública em muitos países. O diagnóstico da doença em animais vivos é realizado pelo teste intradérmico da tuberculina, que é baseado em reações de hipersensibilidade tardia. Como a tuberculose tem resposta imunológica complexa, este teste tem limitações em termos de sensibilidade e especificidade. Este estudo procurou desenvolver uma abordagem alternativa para o diagnóstico in vivo da tuberculose bovina, com base na reação em cadeia da polimerase (PCR) em tempo real. As amostras de DNA, extraídas de suabes nasais de vacas vivas, foram usadas para PCR em tempo real com SYBR® Green, capaz de diferenciar os complexos Mycobacterium tuberculosis e Mycobacterium avium. A análise estatística foi realizada para comparar os resultados de teste de tuberculina, padrão ouro para o diagnóstico in vivo da bTB, com PCR em tempo real, determinando-se assim a especificidade e sensibilidade do método molecular. O teste cervical comparativo (TCC) foi realizado em 238 animais, dos quais 193 tiveram DNA dos suabes nasais adequados para análise molecular, como indicado pela amplificação do gene gliceraldeído-3-fosfato-desidrogenase (GAPDH), e foram incluídos no estudo. No total, 25 (10,5%) animais foram reativos no TCC, dos quais nenhum foi positivo no teste molecular. Dos 168 animais negativos no TCC, quatro foram positivos para o complexo M. tuberculosis na PCR em tempo real a partir dos suabes nasais. A comparação destes resultados gerou valores de sensibilidade e especificidade de 0% e 97,6%, respectivamente; além disso, baixos coeficientes de concordância e correlação (-0,029 e -0,049, respectivamente) entre os resultados obtidos com ambos os testes também foram observados. Este estudo mostrou que a PCR em tempo real a partir de suabes nasais não é adequada para o diagnóstico in vivo da tuberculose bovina; portanto, o teste da tuberculina ainda é a melhor opção para este fim.(AU)

Nasal swab real-time PCR is not suitable for in vivo diagnosis of bovine tuberculosis / A PCR em tempo real de swab nasal não é adequada para o diagnóstico in vivo de tuberculose bovina

Bovine tuberculosis (bTB) is a zoonosis causing economic losses and public health risks in many countries. The disease diagnosis in live animals is performed by intradermal tuberculin test, which is based on delayed hypersensitivity reactions. As tuberculosis has complex immune response, this test has limitations in sensitivity and specificity. This study sought to test an alternative approach for in vivo diagnosis of bovine tuberculosis, based on real-time polymerase chain reaction (PCR). DNA samples, extracted from nasal swabs of live cows, were used for SYBR® Green real-time PCR, which is able to differentiate between Mycobacterium tuberculosis and Mycobacterium avium complexes. Statistical analysis was performed to compare the results of tuberculin test, the in vivo gold standard bTB diagnosis method, with real-time PCR, thereby determining the specificity and sensitivity of molecular method. Cervical comparative test (CCT) was performed in 238 animals, of which 193 had suitable DNA from nasal swabs for molecular analysis, as indicated by amplification of glyceraldehyde-3-phosphate dehydrogenase (GAPDH) gene, and were included in the study. In total, 25 (10.5%) of the animals were CCT reactive, of which none was positive in the molecular test. Of the 168 CCT negative animals, four were positive for M. tuberculosis complex at real time PCR from nasal swabs. The comparison of these results generated values of sensitivity and specificity of 0% and 97.6%, respectively; moreover, low coefficients of agreement and correlation (-0.029 and -0.049, respectively) between the results obtained with both tests were also observed. This study showed that real-time PCR from nasal swabs is not suitable for in vivo diagnosis of bovine tuberculosis; thus tuberculin skin test is still the best option for this purpose.(AU)

A tuberculose bovina (bTB) é uma zoonose que causa perdas econômicas e riscos à saúde pública em muitos países. O diagnóstico da doença em animais vivos é realizado pelo teste intradérmico da tuberculina, que é baseado em reações de hipersensibilidade tardia. Como a tuberculose tem resposta imunológica complexa, este teste tem limitações em termos de sensibilidade e especificidade. Este estudo procurou desenvolver uma abordagem alternativa para o diagnóstico in vivo da tuberculose bovina, com base na reação em cadeia da polimerase (PCR) em tempo real. As amostras de DNA, extraídas de suabes nasais de vacas vivas, foram usadas para PCR em tempo real com SYBR® Green, capaz de diferenciar os complexos Mycobacterium tuberculosis e Mycobacterium avium. A análise estatística foi realizada para comparar os resultados de teste de tuberculina, padrão ouro para o diagnóstico in vivo da bTB, com PCR em tempo real, determinando-se assim a especificidade e sensibilidade do método molecular. O teste cervical comparativo (TCC) foi realizado em 238 animais, dos quais 193 tiveram DNA dos suabes nasais adequados para análise molecular, como indicado pela amplificação do gene gliceraldeído-3-fosfato-desidrogenase (GAPDH), e foram incluídos no estudo. No total, 25 (10,5%) animais foram reativos no TCC, dos quais nenhum foi positivo no teste molecular. Dos 168 animais negativos no TCC, quatro foram positivos para o complexo M. tuberculosis na PCR em tempo real a partir dos suabes nasais. A comparação destes resultados gerou valores de sensibilidade e especificidade de 0% e 97,6%, respectivamente; além disso, baixos coeficientes de concordância e correlação (-0,029 e -0,049, respectivamente) entre os resultados obtidos com ambos os testes também foram observados. Este estudo mostrou que a PCR em tempo real a partir de suabes nasais não é adequada para o diagnóstico in vivo da tuberculose bovina; portanto, o teste da tuberculina ainda é a melhor opção para este fim.(AU)

Nasal swab real-time PCR is not suitable for in vivo diagnosis of bovine tuberculosis

ABSTRACT: Bovine tuberculosis (bTB) is a zoonosis causing economic losses and public health risks in many countries. The disease diagnosis in live animals is performed by intradermal tuberculin test, which is based on delayed hypersensitivity reactions. As tuberculosis has complex immune response, this test has limitations in sensitivity and specificity. This study sought to test an alternative approach for in vivo diagnosis of bovine tuberculosis, based on real-time polymerase chain reaction (PCR). DNA samples, extracted from nasal swabs of live cows, were used for SYBR® Green real-time PCR, which is able to differentiate between Mycobacterium tuberculosis and Mycobacterium avium complexes. Statistical analysis was performed to compare the results of tuberculin test, the in vivo gold standard bTB diagnosis method, with real-time PCR, thereby determining the specificity and sensitivity of molecular method. Cervical comparative test (CCT) was performed in 238 animals, of which 193 had suitable DNA from nasal swabs for molecular analysis, as indicated by amplification of glyceraldehyde-3-phosphate dehydrogenase (GAPDH) gene, and were included in the study. In total, 25 (10.5%) of the animals were CCT reactive, of which none was positive in the molecular test. Of the 168 CCT negative animals, four were positive for M. tuberculosis complex at real time PCR from nasal swabs. The comparison of these results generated values of sensitivity and specificity of 0% and 97.6%, respectively; moreover, low coefficients of agreement and correlation (-0.029 and -0.049, respectively) between the results obtained with both tests were also observed. This study showed that real-time PCR from nasal swabs is not suitable for in vivo diagnosis of bovine tuberculosis; thus tuberculin skin test is still the best option for this purpose.

RESUMO: A tuberculose bovina (bTB) é uma zoonose que causa perdas econômicas e riscos à saúde pública em muitos países. O diagnóstico da doença em animais vivos é realizado pelo teste intradérmico da tuberculina, que é baseado em reações de hipersensibilidade tardia. Como a tuberculose tem resposta imunológica complexa, este teste tem limitações em termos de sensibilidade e especificidade. Este estudo procurou desenvolver uma abordagem alternativa para o diagnóstico in vivo da tuberculose bovina, com base na reação em cadeia da polimerase (PCR) em tempo real. As amostras de DNA, extraídas de suabes nasais de vacas vivas, foram usadas para PCR em tempo real com SYBR® Green, capaz de diferenciar os complexos Mycobacterium tuberculosis e Mycobacterium avium. A análise estatística foi realizada para comparar os resultados de teste de tuberculina, padrão ouro para o diagnóstico in vivo da bTB, com PCR em tempo real, determinando-se assim a especificidade e sensibilidade do método molecular. O teste cervical comparativo (TCC) foi realizado em 238 animais, dos quais 193 tiveram DNA dos suabes nasais adequados para análise molecular, como indicado pela amplificação do gene gliceraldeído-3-fosfato-desidrogenase (GAPDH), e foram incluídos no estudo. No total, 25 (10,5%) animais foram reativos no TCC, dos quais nenhum foi positivo no teste molecular. Dos 168 animais negativos no TCC, quatro foram positivos para o complexo M. tuberculosis na PCR em tempo real a partir dos suabes nasais. A comparação destes resultados gerou valores de sensibilidade e especificidade de 0% e 97,6%, respectivamente; além disso, baixos coeficientes de concordância e correlação (-0,029 e -0,049, respectivamente) entre os resultados obtidos com ambos os testes também foram observados. Este estudo mostrou que a PCR em tempo real a partir de suabes nasais não é adequada para o diagnóstico in vivo da tuberculose bovina; portanto, o teste da tuberculina ainda é a melhor opção para este fim.

Padronização do teste imunoalérgico aplicado ao diagnóstico da tuberculose e micobacterioses em suínos (Sus scrofa) experimentalmente sensibilizados com suspensões oleosas de Mycobacterium bovis ou M. avium inativados / Standardization of the immunoallergic skin test applied for the diagnosis of tuberculosis and mycobacterioses in swine (Sus scrofa) experimentally sensitized with oil suspensions of inactivated Mycobacterium bovis or M. avium

Foi investigado o valor diagnóstico da resposta alérgica cutânea em leitões experimentalmente sensibilizados, pela via intramuscular, com suspensões oleosas de Mycobacterium bovis ou M. avium inativados pelo calor.Foram utilizados 91 animais, divididos em quatro grupos: grupos A e B, cada um com 25 indivíduos, grupos C e D com 21 e 20 indivíduos respectivamente, balanceando-se as características de raça, linhagem, faixa etária e sexo. Aos 30 dias de idade, todos os animais foram submetidos a uma triagem com a aplicação de tuberculina PPD bovina, pela via intradérmica na base da orelha e não houve qualquer tipo de reação. Decorridos 60 dias do teste tuberculínico de triagem, o grupo A recebeu injeção intramuscular de 0,5 mL de uma suspensão oleosa de M. avium estirpe D4; o grupo B recebeu 0,5 mL de uma suspensão oleosa de M. bovis estirpe AN5; o grupo C (controle I), recebeu 0,5 mL do adjuvante oleoso; e o grupo D (controle II), recebeu 0,5 mL de solução fisiológica. Após 30 dias da sensibilização foi realizada a prova de tuberculinização comparativa com reação medida pela variação da espessura da pele com cutímetro de mola às 0h, 24h, 48h e 72h, após a aplicação das tuberculinas. No teste comparativo, lido às 48 ou 72 horas, a reação foi considerada negativa quando a diferença das reações entre o PPD bovino e o PPD aviário foi menor que 6,7 mm; suspeito ou inconclusivo quando a diferença se situou na faixa de 6,7 a 7,5 mm; e positiva de acordo com o tipo de PPD, considerando-se tuberculose para PPD M. bovis e micobacteriose para PPD M. avium, quando a diferença da reação foi superior a 7,5 mm.(AU)

The diagnostic value of the cutaneous allergic response to tuberculin in piglets experimentally sensitized intramuscularly with the oily suspensions of heat inactivated M. bovis or M. avium was investigated. Ninety-one animals were used and divided into four groups: groups A and B were formed each with 25 individuals, and groups C and D, with 21 and 20 individuals, respectively, balancing the characteristics of race, ancestry, age and sex. At the age of 30 days, all the animals were submitted to the screening test with the use of M. bovis PPD, by the intradermal route at the base of the ear and no reaction was detected. Sixty days after the screening tuberculin test, animals of the group A were injected intramuscularly with 0.5 mL of oily suspension of M. avium D4 strain; animals of the group B received 0.5 mL of an oily suspension of M. bovis, AN5 strain; group C (control I) received 0.5 mL of an oily adjuvant; and the individuals of the group D (control II) received 0.5 mL of saline solution. Following 30 days of sensitization, comparative skin reactions were measured by the variation in skin thickness with a caliper at 0h, 24h, 48h an 72h after applications of tuberculins. In the comparative test measured at 48 or 72h, the reaction was considered negative when the difference of the reactions between bovine PPD and avian PPD was less than 6.7 mm; suspected or inconclusive, when the difference stood in the range of 6.7 to 7.5 mm; and positive according to the type of PPD, considering tuberculosis the M. bovis PPD and mycobacteriosis the M. avium PPD, when the difference of the reaction was greater than 7.5 mm.(AU)

DIAGNÓSTICO DE TUBERCULOSE EM BOVINOS LEITEIROS

A tuberculose é uma antropozoonose crônica de ocorrência mundial, cujo agente etiológico pertence ao gênero Mycobacterium. Nos animais, a enfermidade gera grandes prejuízos econômicos à cadeia produtiva da carne e do leite. A infecção humana se dá, principalmente, através do contato direto com animais contaminados e pela ingestão de leite cru e derivados fabricados com leite cru, tal como os queijos. No Brasil, existe o Programa Nacional de Controle e Erradicação da Brucelose e Tuberculose e, também, o Serviço de Inspeção Sanitária e a Vigilância Sanitária, os quais estabelecem medidas e critérios que visam resguardar a saúde animal e pública. Entretanto, o maior desafio para o controle da tuberculose humana está na sensibilização da população quanto aos riscos de infecção ao adquirirem carne ou leite cru e seus derivados, como os queijos, diretamente de produtores, feiras e/ou locais ao ar livre, sem controle higiênico-sanitário e de inspeção. O presente trabalho descreve a utilização de quatro ferramentas para o diagnóstico de micobactérias, compreendendo o teste tuberculínico cervical comparativo, os achados macroscópicos durante o abate sanitário, histopatologia dos tecidos lesados seguido de histoquímica. O estudo avaliou um total de 211 bovinos leiteiros, onde 74 (35%) apresentaram reatividade no teste tuberculínico cervical comparativo, considerando os resultados positivos e inconclusivos. Do total de animais, 143 (67,8%) foram encaminhados para abate sanitário devido a questões legais e de controle nos focos da doença. No acompanhamento do abate e inspeção sanitária de vísceras e carcaças foi verificado que 74 (51,8%) apresentavam lesões macroscópicas compatíveis com tuberculose bovina, enquanto 69 (48,2%) não apresentavam alterações visíveis. Durante a inspeção foram coletadas amostras teciduais de cinco bovinos tuberculinapositivos e com lesões macroscópicas, e de cinco tuberculina-positivos sem lesões. Na análise histopatológica todos apresentaram numerosas áreas de necrose caseosa e reação inflamatória crônica com ou sem calcificação central e, na coloração especial de Ziehl-Neelsen foram evidenciados numerosos bacilos álcool-ácido resistentes em todos os casos examinados. Assim, diante dos resultados obtidos, as quatro ferramentas de análise empregadas no presente estudo se mostraram muito uteis para o diagnóstico definitivo de tuberculose bovina. Os achados no rebanho leiteiro estudado também demonstrou que a doença está circulando entre essa categoria de animais, representando uma séria ameaça aos demais bovinos, aos seres humanos que entram em contato direto com esses bovinos e/ou que consomem ou manuseiam produtos de origem animal infectados.

Tuberculosis is a chronic anthropozoonosis of worldwide occurrence, whose etiological agent belongs to the genus Mycobacterium. In animals, the disease generates great economic damages to the productive chain of meat and milk. The human infection occurs mainly through direct contact with contaminated animals and by the ingestion of raw milk and derivatives made from raw milk, such as cheeses. In Brazil, there is the National Program for the Control and Eradication of Brucellosis and Tuberculosis, as well as the Sanitary Inspection Service and Sanitary Surveillance, which establish measures and criteria to protect animal and public health. However, the greatest challenge for the control of human tuberculosis is in the population's awareness of the risks of infection when purchasing meat or raw milk and its derivatives, such as cheeses, directly from producers, fairs and / or outdoors, without control hygienic-sanitary and inspection. The present work describes the use of four tools for the diagnosis of mycobacteria, including the comparative cervical tuberculin test, macroscopic findings during sanitary slaughter, histopathology of injured tissues followed by histochemistry. The study evaluated a total of 211 dairy cattle, where 74 (35%) showed reactivity in the comparative cervical tuberculin test, considering the positive and inconclusive results. Of the total number of animals, 143 (67,8%) were referred for sanitary slaughter due to legal and control issues in the foci of the disease. In the follow up of slaughtering and inspection of viscera and carcasses, 74 (51,8%) had macroscopic lesions compatible with bovine tuberculosis, while 69 (48,2%) showed no visible changes. During the inspection tissue samples were collected from five tuberculin-positive bovines with macroscopic lesions and five tuberculin-positive without lesions. In the histopathological analysis, all of them presented numerous areas of caseous necrosis and chronic inflammatory reaction with or without central calcification and in the special staining of Ziehl-Neelsen, numerous alcohol-acid resistant bacilli were evidenced in all the cases examined. Thus, given the results obtained, the four analysis tools used in the present study proved to be very useful for the definitive diagnosis of bovine tuberculosis. The findings in the dairy herd also showed that the disease is circulating among this category of animals, posing a serious threat to the other cattle, to humans that come in direct contact with these cattle and / or who consume or handle infected animal products.

Parameter estimation and use of gamma interferon assay for the diagnosis of bovine tuberculosis in Brazil / Estimação dos parâmetros e uso do teste do interferon gama para o diagnóstico da tuberculose bovina no Brasil

This study aimed to evaluate the interference of tuberculin test on the gamma-interferon (INFg) assay, to estimate the sensitivity and specificity of the INFg assay in Brazilian conditions, and to simulate multiple testing using the comparative tuberculin test and the INFg assay. Three hundred-fifty cattle from two TB-free and two TB-infected herds were submitted to the comparative tuberculin test and the INFg assay. The comparative tuberculin test was performed using avian and bovine PPD. The INFg assay was performed by the BovigamTM kit (CSL Veterinary, Australia), according to the manufacturer's specifications. Sensitivity and specificity of the INFg assay were assessed by a Bayesian latent class model. These diagnostic parameters were also estimate for multiple testing. The results of INFg assay on D0 and D3 after the comparative tuberculin test were compared by the McNemar's test and kappa statistics. Results of mean optical density from INFg assay on both days were similar. Sensitivity and specificity of the INFg assay showed results varying (95% confidence intervals) from 72 to 100% and 74 to 100% respectively. Sensitivity of parallel testing was over 97.5%, while specificity of serial testing was over 99.7%. The INFg assay proved to be a very useful diagnostic method.(AU)

O presente estudo avalia a interferência do teste de tuberculinização no teste do interferon gama (INFg), estima a sensibilidade e a especificidade do INFg em condições brasileiras e simula a utilização dos testes múltiplos usando a tuberculinização comparada e o teste do INFg. Trezentos e cinquenta animais oriundos de dois rebanhos livres e dois rebanhos positivos foram submetidos à tuberculinização comparada e ao teste de INFg. A tuberculinização comparada foi realizada utilizando PPD aviária e bovina. O teste de INFg foi realizado utilizando o kit Bovigam® (CSL Veterinary, Austrália) de acordo com as especificações do fabricante. A sensibilidade e especificidade do teste de INFg foram calculadas pelo Modelo Bayesiano de Classe Latente. Esses parâmetros foram também estimados para os testes múltiplos. Os resultados do teste de INFg no D0 e D3 após o teste de tuberculinização foram comparados pelos testes estatísticos de McNemar e kappa. Os resultados das médias de densidade ótica do teste de INFg em ambos os dias foram similares. A sensibilidade e a especificidade do teste de INFg apresentaram resultados variando (95% intervalo de confiança) de 72 a 100% e 74 a 100%, respectivamente. A sensibilidade do teste em paralelo foi acima de 97,5% enquanto a especificidade do teste em série foi acima de 99,7%. O teste do INFg provou ser um método de diagnóstico muito útil.(AU)

Parameter estimation and use of gamma interferon assay for the diagnosis of bovine tuberculosis in Brazil / Estimação dos parâmetros e uso do teste do interferon gama para o diagnóstico da tuberculose bovina no Brasil

This study aimed to evaluate the interference of tuberculin test on the gamma-interferon (INFg) assay, to estimate the sensitivity and specificity of the INFg assay in Brazilian conditions, and to simulate multiple testing using the comparative tuberculin test and the INFg assay. Three hundred-fifty cattle from two TB-free and two TB-infected herds were submitted to the comparative tuberculin test and the INFg assay. The comparative tuberculin test was performed using avian and bovine PPD. The INFg assay was performed by the BovigamTM kit (CSL Veterinary, Australia), according to the manufacturer's specifications. Sensitivity and specificity of the INFg assay were assessed by a Bayesian latent class model. These diagnostic parameters were also estimate for multiple testing. The results of INFg assay on D0 and D3 after the comparative tuberculin test were compared by the McNemar's test and kappa statistics. Results of mean optical density from INFg assay on both days were similar. Sensitivity and specificity of the INFg assay showed results varying (95% confidence intervals) from 72 to 100% and 74 to 100% respectively. Sensitivity of parallel testing was over 97.5%, while specificity of serial testing was over 99.7%. The INFg assay proved to be a very useful diagnostic method.(AU)

O presente estudo avalia a interferência do teste de tuberculinização no teste do interferon gama (INFg), estima a sensibilidade e a especificidade do INFg em condições brasileiras e simula a utilização dos testes múltiplos usando a tuberculinização comparada e o teste do INFg. Trezentos e cinquenta animais oriundos de dois rebanhos livres e dois rebanhos positivos foram submetidos à tuberculinização comparada e ao teste de INFg. A tuberculinização comparada foi realizada utilizando PPD aviária e bovina. O teste de INFg foi realizado utilizando o kit Bovigam® (CSL Veterinary, Austrália) de acordo com as especificações do fabricante. A sensibilidade e especificidade do teste de INFg foram calculadas pelo Modelo Bayesiano de Classe Latente. Esses parâmetros foram também estimados para os testes múltiplos. Os resultados do teste de INFg no D0 e D3 após o teste de tuberculinização foram comparados pelos testes estatísticos de McNemar e kappa. Os resultados das médias de densidade ótica do teste de INFg em ambos os dias foram similares. A sensibilidade e a especificidade do teste de INFg apresentaram resultados variando (95% intervalo de confiança) de 72 a 100% e 74 a 100%, respectivamente. A sensibilidade do teste em paralelo foi acima de 97,5% enquanto a especificidade do teste em série foi acima de 99,7%. O teste do INFg provou ser um método de diagnóstico muito útil.(AU)

REAÇÕES FALSO-NEGATIVAS AO TESTE CERVICAL COMPARATIVO PARA TUBERCULOSE BOVINA

RODRIGUES, R.A. Reações falso-negativas ao Teste Cervical Comparativo para tuberculose bovina. 2017. Dissertação de Mestrado Faculdade de Medicina Veterinária e Zootecnia, Universidade Federal de Mato Grosso do Sul, Campo Grande, MS, 2017. No Brasil, segundo o Programa Nacional de Controle e Erradicação da Brucelose e Tuberculose Animal (PNCEBT), do Ministério da Agricultura, Pecuária e Abastecimento (MAPA), os testes de rotina para o diagnóstico de tuberculose bovina são o teste cervical simples (TCC), o teste da prega caudal (TPC) e o teste cervical comparativo (TCC), sendo que o último também é utilizado como teste confirmatório. Um grupo de 53 animais oriundos de três rebanhos leiteiros de área de foco para tuberculose bovina que foram submetidos a vazio sanitário no Rio Grande do Sul foi submetido ao TCC. Os tecidos destes animais foram cultivados e as colônias resultantes confirmadas por PCR e sequenciamento de DNA. Dos 53 animais analisados no TCC, 32 (60,4%) foram negativos, 14 (26,4%) positivos e sete (13,2%) inconclusivos, com base no PNCEBT. O TCC detectou como positivos 11 dos 39 animais com infecção por M. bovis confirmada por cultivo. Do total de 14 animais não infectados, baseado na cultura, o TCC detectou oito como negativos. Assim, o TCC apresentou, para a população amostrada, sensibilidade de 28,2% e especificidade de 57,1%. Um total de 24/32 (75,0%) dos animais negativos ao TCC foi positivo no cultivo (confirmado por PCR), sendo considerados falso-negativos ao TCC. A manutenção destes animais falso-negativos nos rebanhos tem sérias implicações para o controle da enfermidade, já que os mesmos podem ser fonte de infecção. A adição de testes complementares poderia auxiliar na identificação destes animais, aumentando a cobertura diagnóstica.

In Brazil, according to the National Program for the Control and Eradication of Animal Brucellosis and Tuberculosis (PNCEBT) of the Ministry of Agriculture, Livestock and Food Supply (MAPA), the routine tests for the diagnosis of bovine tuberculosis (bTB) are the simple intradermal tuberculin test (SITT), the caudal fold test (CFT) and the comparative intradermal tuberculin test (CITT). The latter is also used as a confirmatory test. A group of 53 animals from three dairy herds of an outbreak area for bTB that were submitted to depopulation in the State of Rio Grande do Sul, Brazil, were submitted to CITT. The tissues of these animals were cultured and the resulting colonies confirmed by PCR and DNA sequencing. Of the 53 animals analyzed in the CITT, 32 (60.4%) were negative, 14 (26.4%) positive and seven (13.2%) inconclusive. The CITT detected 11 out of the 39 animals with culture-confirmed M. bovis infection as positive. From the total of 14 uninfected animals, based on culture, the CITT detected eight as negative. Thus, the CITT showed a sensitivity of 28.2% and a specificity of 57.1% for the sampled population. A total of 24/32 (75.0%) of the animals negative to CITT were culture positive (confirmed by PCR) and were considered false negative. The maintenance of these false-negative animals in the herds has serious implications for the control of the disease, since they can be a source of infection. The addition of complementary tests could help to identify these animals, increasing the diagnostic coverage.

Padronização do teste imunoalérgico e de reação imunoenzimática aplicados ao diagnóstico da tuberculose e micobacterioses em suínos (Sus scrofa) experimentalmente sensibilizados com suspensões oleosas de M. bovis ou M. avium inativados / Standardization of the immunoallergic skin test and immunoenzymatic assay test applied for the diagnosis of tuberculosis and mycobacteriosis in swine (Sus scrofa) experimentally sensitized with oily suspensions of inactivated M. bovis or M. avium

Foi investigado o valor diagnóstico da resposta alérgica cutânea à tuberculina e do ELISA indireto, com antígeno recombinante MPB 70, em leitões experimentalmente sensibilizados, pela via intramuscular, com suspensões oleosas de M. bovis ou M. avium inativados. Foram utilizados 91 animais divididos em quatro grupos. Os grupos A e B, cada um com 25 indivíduos, grupos C e D com 21 e 20 indivíduos respectivamente, balanceando-se as características de raça, linhagem, faixa etária e sexo. [...] Nos exames histopatológicos, foi observado intenso infiltrado inflamatório linfocitário no local das reações intradérmicas dos animais testados com o PPD homologo ao tipo de micobactéria utilizada na suspensão oleosa sensibilizante. O ensaio de ELISA com antígeno, MPB 70 recombinante, foi capaz de revelar a presença de anticorpos contra o M. bovis, porém não revelou anticorpos para M. avium

The diagnostic value of the cutaneous allergic response to tuberculin and Indirect ELISA test was investigated using MPB 70 recombinant antigen, in piglets experimentally sensitized intramuscularly with the oily suspensions of inactivated M. bovis or M. avium. The ninety-one animals used were divided into four groups. The groups A and B were formed each with 25 individuals, and groups C and D, with 21 and 20 individuals, respectively, balancing the characteristics of race, ancestry, age and sex. [...] In histopathological examinations, intense lymphocytic inflammatory infiltrate were observed at the site of intradermal reactions of the animals tested with PPD homologous to the type of mycobacteria used in sensitizing oil suspension. The ELISA assay with MPB 70 recombinant antigen was able to reveal the presence of antibodies against M. bovis, but did not reveal antibodies to M. avium

Padronização do teste imunoalérgico e de reação imunoenzimática aplicados ao diagnóstico da tuberculose e micobacterioses em suínos (Sus scrofa) experimentalmente sensibilizados com suspensões oleosas de M. bovis ou M. avium inativados / Standardization of the immunoallergic skin test and immunoenzymatic assay test applied for the diagnosis of tuberculosis and mycobacteriosis in swine (Sus scrofa) experimentally sensitized with oily suspensions of inactivated M. bovis or M. avium

Foi investigado o valor diagnóstico da resposta alérgica cutânea à tuberculina e do ELISA indireto, com antígeno recombinante MPB 70, em leitões experimentalmente sensibilizados, pela via intramuscular, com suspensões oleosas de M. bovis ou M. avium inativados. Foram utilizados 91 animais divididos em quatro grupos. Os grupos A e B, cada um com 25 indivíduos, grupos C e D com 21 e 20 indivíduos respectivamente, balanceando-se as características de raça, linhagem, faixa etária e sexo. [...] Nos exames histopatológicos, foi observado intenso infiltrado inflamatório linfocitário no local das reações intradérmicas dos animais testados com o PPD homologo ao tipo de micobactéria utilizada na suspensão oleosa sensibilizante. O ensaio de ELISA com antígeno, MPB 70 recombinante, foi capaz de revelar a presença de anticorpos contra o M. bovis, porém não revelou anticorpos para M. avium (AU)

The diagnostic value of the cutaneous allergic response to tuberculin and Indirect ELISA test was investigated using MPB 70 recombinant antigen, in piglets experimentally sensitized intramuscularly with the oily suspensions of inactivated M. bovis or M. avium. The ninety-one animals used were divided into four groups. The groups A and B were formed each with 25 individuals, and groups C and D, with 21 and 20 individuals, respectively, balancing the characteristics of race, ancestry, age and sex. [...] In histopathological examinations, intense lymphocytic inflammatory infiltrate were observed at the site of intradermal reactions of the animals tested with PPD homologous to the type of mycobacteria used in sensitizing oil suspension. The ELISA assay with MPB 70 recombinant antigen was able to reveal the presence of antibodies against M. bovis, but did not reveal antibodies to M. avium (AU)

Teste de tuberculinização em caprinos (Capra hircus) experimentalmente sensibilizados

The tuberculin skin test was established with the aim to be applied in the diagnosis of tuberculosis in experimentally sensitized goats. Thirty goats were alocated into three groups with ten animals each. The animals in group A were sensitized with Mycobacterium avium sample D4; group B with Mycobacterium bovis sample AN5; and group C (control) was inoculated with saline solution. The results of the simple cervical test after 72h of bovine tuberculin inoculation was interpreted as follow: positive reaction, when there was an increase in the skin fold thickness greater than 3.9mm; suspicious, when from 1.8 to 3.8mm; and negative when less than 1.7mm. The analysis of the results of the comparative cervical test between M. avium and M. bovis and analysed, 72h after tuberculin, indicated positive reactions, when the increase in skin fold thickness induced by M. bovis was greater than that one induced by the avian tuberculin at least 2.5mm; it was considered suspicious when the difference between the bovine and avian tuberculin reactions was from 1.9 to 2.4mm; and negative when this difference was smaller than 1.8mm. The histological evaluation of the local specific tuberculin response, were performed in skin samples collected from five goats in group A, five in group B, and four in group C, the results were the presence of mononuclear inflammatory infiltrate at 96h after tuberculin inoculation.

Foram estabelecidos critérios de interpretação do teste de tuberculinização aplicado ao diagnóstico da tuberculose em grupos de caprinos experimentalmente sensibilizados. Dos 30 animais utilizados, dez foram sensibilizados com Mycobacterium avium - amostra D4 (grupo A) e dez com Mycobacterium bovis - amostra AN5 (grupo B). Dez caprinos não foram sensibilizados e constituíram o grupo controle (grupo C). No teste cervical simples, realizado com tuberculina bovina (M. bovis) e lido às 72 horas pós-tuberculinização (p.t.), as reações positivas foram aquelas em que houve aumento da espessura da dobra de pele igual ou superior a 3,9mm; reações inconclusivas, quando situadas entre 1,8 e 3,8mm, e negativas quando iguais ou menores que 1,7mm. A análise dos resultados do teste cervical comparativo, realizado com o M. avium e M. bovis e lido às 72 horas p.t., indicou reação positiva quando o aumento da espessura da dobra da pele induzida pela tuberculina bovina superou a reação à aviária em pelo menos 2,5mm; reação inconclusiva quando a diferença entre a reação à tuberculina bovina e à tuberculina aviária ficou situada entre 1,9 e 2,4mm; e negativa quando a reação bovina ultrapassou a aviária em até 1,8mm. Às 96 horas após a injeção da tuberculina, foi efetuada a avaliação histológica do local das reações tuberculínicas colhendo-se amostras de pele de cinco caprinos dos grupos A e B e de quatro animais do grupo controle; os resultados confirmaram a presença, nos grupos sensibilizados, de infiltrado inflamatório, constituído, preferencialmente, por células mononucleares.

Teste de tuberculinização em caprinos (Capra hircus) experimentalmente sensibilizados

The tuberculin skin test was established with the aim to be applied in the diagnosis of tuberculosis in experimentally sensitized goats. Thirty goats were alocated into three groups with ten animals each. The animals in group A were sensitized with Mycobacterium avium sample D4; group B with Mycobacterium bovis sample AN5; and group C (control) was inoculated with saline solution. The results of the simple cervical test after 72h of bovine tuberculin inoculation was interpreted as follow: positive reaction, when there was an increase in the skin fold thickness greater than 3.9mm; suspicious, when from 1.8 to 3.8mm; and negative when less than 1.7mm. The analysis of the results of the comparative cervical test between M. avium and M. bovis and analysed, 72h after tuberculin, indicated positive reactions, when the increase in skin fold thickness induced by M. bovis was greater than that one induced by the avian tuberculin at least 2.5mm; it was considered suspicious when the difference between the bovine and avian tuberculin reactions was from 1.9 to 2.4mm; and negative when this difference was smaller than 1.8mm. The histological evaluation of the local specific tuberculin response, were performed in skin samples collected from five goats in group A, five in group B, and four in group C, the results were the presence of mononuclear inflammatory infiltrate at 96h after tuberculin inoculation.

Foram estabelecidos critérios de interpretação do teste de tuberculinização aplicado ao diagnóstico da tuberculose em grupos de caprinos experimentalmente sensibilizados. Dos 30 animais utilizados, dez foram sensibilizados com Mycobacterium avium - amostra D4 (grupo A) e dez com Mycobacterium bovis - amostra AN5 (grupo B). Dez caprinos não foram sensibilizados e constituíram o grupo controle (grupo C). No teste cervical simples, realizado com tuberculina bovina (M. bovis) e lido às 72 horas pós-tuberculinização (p.t.), as reações positivas foram aquelas em que houve aumento da espessura da dobra de pele igual ou superior a 3,9mm; reações inconclusivas, quando situadas entre 1,8 e 3,8mm, e negativas quando iguais ou menores que 1,7mm. A análise dos resultados do teste cervical comparativo, realizado com o M. avium e M. bovis e lido às 72 horas p.t., indicou reação positiva quando o aumento da espessura da dobra da pele induzida pela tuberculina bovina superou a reação à aviária em pelo menos 2,5mm; reação inconclusiva quando a diferença entre a reação à tuberculina bovina e à tuberculina aviária ficou situada entre 1,9 e 2,4mm; e negativa quando a reação bovina ultrapassou a aviária em até 1,8mm. Às 96 horas após a injeção da tuberculina, foi efetuada a avaliação histológica do local das reações tuberculínicas colhendo-se amostras de pele de cinco caprinos dos grupos A e B e de quatro animais do grupo controle; os resultados confirmaram a presença, nos grupos sensibilizados, de infiltrado inflamatório, constituído, preferencialmente, por células mononucleares.