Long term classical methods for the preservation of xanthan gum-producing Xanthomonas arboricola pathovar pruni strains / Métodos clássicos de longo prazo parapreservação e produção de gomaxantana por cepas de Xanthomonas arborícola patovar pruni

The maintenance of viable and stable Xanthomonascells is crucial for the xanthan reliable research and industrial production. The method, storage and recovery conditions should preserve bothviability and phenotypical and genotypical features. Here, the effectiveness classical methods on the long-term preservation of different Xanthomonas arboricola pathovar pruni strains was to determine.Strains were preserved by monthly sub-culturing in solid medium and lyophilization. After 12 years the viability of the strains, was assessed, as well as their productive capacity and the viscosity of the xanthan gum produced by these strains kept by lyophilization and sub-culturing. Among the lyophilized strains, only those stored at -18 °C were viable after 12 years. The productive capacity of the strains were poorly affected by lyophilization, the passage of the cultures into a solid nutrition medium being sufficient for them to return to their normal metabolism. The viscosity of the synthesized xanthan gum was method-dependent and higher for the lyophilized strains. The work and its findings arenew and original because a work on this topic has never been published before. The results obtained allow the breaking of paradigms regarding the preservation of Xanthomonas.(AU)

A manutenção de células de Xanthomonas viáveis e estáveis é crucial para se obter uma pesquisa confiável e para a produção de xantana industrial.O método, o armazenamento eascondições de recuperação devem preservar tanto a viabilidade quanto as características fenotípicas e genotípicas. O objetivo do estudo foi determinar a eficácia dos métodos clássicos na preservação a longo prazo de diferentes cepas de Xanthomonas arboricolapatovarpruni. As cepas foram preservadas por subcultivo mensal em meio sólido e liofilização. Após 12 anos,avaliou-se a viabilidade das linhagens, bem como a capacidade produtiva e a viscosidade da goma xantana produzida por essas linhagens mantidas por liofilização e subcultivo. Entre as cepas liofilizadas, somente foram viáveis, após 12 anos, as armazenadas a -18°C. A capacidade produtiva das cepas foi pouco afetada pela liofilização, sendo suficiente a passagem das culturas para um meio de cultivosólido para que elas voltassem ao seu metabolismo normal. A viscosidade da goma xantana sintetizada foi dependente do método e maior para as cepas liofilizadas. O estudo e suas descobertas sãonovos e originais porque um trabalho sobre este tópico nunca foi publicado antes. Os resultados obtidos permitem quebrar paradigmas quanto à preservação de Xanthomonas.(AU)

Evaluation of equine (Equus cabbalus) corneal endothelium stored in EUSOL-C® preservation medium / Avaliação do endotélio da córnea de equinos (Equus cabbalus) acondicionado em meio de preservação de córnea Eusol-C®

The objective of this study was evaluate the maintenance of the corneal endothelium of horses in cold EUSOL-C® preservation medium over different periods (seven and 14 days) using scanning electron microscopy. A total of 20 pairs of eyes from horses were analysed. The corneas were divided into four groups of 10 corneas each (G1, G2, G3 and G4): G1 - the samples were kept in the preservation medium for seven days; G3 - the samples were kept in the preservation medium for for 14 days; G2 and G4 were formed by the control corneal buttons of G1 and G3, respectively. The average cell loss observed in G1 was 7.62%, in G2 it was 7.04%, in G3 9.12% and in G4 7.16%. No statistically significant differences were observed between the four groups. It was concluded that the Eusol-C® hypothermic preservation medium provided satisfactory preservation of the corneal endothelium in equine species for up to 14 days.

Objetivou-se avaliar a manutenção do endotélio da córnea de equinos em meio de preservação a frio EUSOL-C® em diferentes períodos de acondicionamento (sete e 14 dias) utilizando microscopia eletrônica de varredura. Foram avaliados 40 bulbos oculares de 20 equinos. Os bulbos oculares foram divididos em quatro grupos (G1, G2, G3 e G4), nos quais: G1 foi composto por 10 botões corneais acondicionados em meio de preservação para córnea Eusol-C® durante sete dias; o G3 foi formado por 10 botões corneais acondicionados em meio de preservação para córnea Eusol-C® durante 14 dias. O G2 e G4 foram formados pelas córneas controle armazenadas imediatamente em glutaraldeído. A média da perda celular observada no G1 foi de 7,62%, no G2 foi de 7,04 %, no G3 foi de 9,12% e o no G4 foi de 7,16%. Não foram observadas diferenças estatisticamente significativas entre os quatro grupos. Foi possível concluir que o meio de preservação hipotérmico Eusol-C® proporcionou de forma satisfatória a preservação do endotélio da córnea na espécie equina durante o período de até 14 dias.

Peritoneal fluid collection in healthy cattle and evaluation of changes in cell morphology during storage in refrigerated and non-refrigerated samples / Colheita do fluido peritoneal de bovinos sadios e verificação das alterações na morfologia celular quando mantido refrigerado ou à temperatura ambiente

This study aimed to evaluate the appropriate sites of abdominocentesis for peritoneal fluid collection in cattle and to investigate the time of cell viability in vitro, comparing three methods of sample conservation. Twenty-one healthy cattle (19 females and 2 males) were subjected to a laparocentesis procedure to obtain peritoneal fluid, with punctures in three defined sites: left cranial, right cranial, and right caudal. The total peritoneal fluid collected was divided into three aliquots and maintained under three preservation conditions: room temperature (26°C), refrigeration (4°C), and room temperature (26°C) with the addition of 1µL of 10% formaldehyde per 1mL of peritoneal fluid. The peritoneal fluid analysis performed immediately after collection consisted of: physical examination (color, appearance, volume, and specific gravity), biochemical measures (pH, total protein, fibrinogen, creatinine, and glucose), and cellularity (total and differential counts). The determination of proteins and the examination of cells were repeated in each separate aliquot at two, four, six, and eight hours after harvest. Data were analyzed through repeated measures ANOVA or Friedman test. The harvest was productive in 67% of cattle. The left cranial and the right cranial puncture sites were the most appropriate. Peritoneal fluid analyzed after collection, the total protein concentration ranged from 1.4 to 3.6g/dL, and number of leukocytes ranged from 54 to 1,322 cells/µL; 60 to 95% of leukocytes were lymphocytes. The protein concentration decreased, but the absolute values of leukocytes, lymphocytes, and segmented neutrophils did not change up to eight hours after collection, independent of the maintenance method. Cell lysis was delayed by cooling, and the addition of formaldehyde did not help preserve the integrity of cellular morphology. Laparocentesis is a safe and secure procedure in cattle and maybe more productive when performed in specific sites on the left or right sides of the cranial abdominal wall. Peritoneal fluid samples may be analyzed with reliable results for up to eight hours after collection when kept refrigerated and for up to six hours when kept at room temperature.(AU)

O estudo teve como objetivo avaliar os locais adequados de laparocentese para a colheita de fluido peritoneal de bovinos e estabelecer o tempo de viabilidade celular in vitro, comparando três métodos de conservação. Vinte e um bovinos hígidos (19 fêmeas e 2 machos) foram submetidos ao procedimento de laparocentese para obtenção de fluido peritoneal, com punção em três pontos definidos: cranial esquerdo, cranial direito e caudal direito. O volume total do líquido peritoneal foi dividido em três alíquotas mantidas sob três métodos de conservação: temperatura ambiente (26°C); refrigeração (4°C); e temperatura ambiente (26°C) com adição de 1µL de formol 10% para cada 1mL de líquido peritonial. A análise do líquido peritoneal realizada imediatamente após sua obtenção consistiu em: exames físico (cor, aspecto, volume e densidade); bioquímicos (pH, proteína total, fibrinogênio, creatinina e glicose); e da celularidade (contagens total e diferencial). A determinação de proteínas e o exame da celularidade foram repetidos, em cada alíquota separada, as duas, quatro, seis e oito horas após a colheita. Análise de variâncias de medidas repetidas ou teste de Friedman foram empregados para avaliação ao longo do tempo. A colheita foi produtiva em 67% dos bovinos e os locais de punção craniais esquerdo e direito foram os mais adequados. A concentração de proteína total variou de 1,4 a 3,6g/dL e o número de leucócitos de 54 a 1.322 células/µL, com predomínio de linfócitos (60 a 95% das células) no fluido peritoneal analisado logo após a colheita. A concentração de proteínas diminuiu, mas os valores absolutos de leucócitos, de linfócitos e de neutrófilos segmentados não se modificaram até oito horas após a colheita, independente do método de manutenção das amostras. A lise celular foi retardada pela refrigeração e a adição de formol não contribuiu para preservar a integridade da morfologia celular. A laparocentese é um procedimento seguro e de execução fácil em bovinos sendo mais produtiva quando realizada em locais específicos à esquerda ou à direita craniais da parede abdominal. Amostras de fluido peritoneal podem ser analisadas com resultados confiáveis quando mantidas refrigeradas por até oito horas após a colheita e quando mantidas à temperatura ambiente por até seis horas.(AU)

Peritoneal fluid collection in healthy cattle and evaluation of changes in cell morphology during storage in refrigerated and non-refrigerated samples / Colheita do fluido peritoneal de bovinos sadios e verificação das alterações na morfologia celular quando mantido refrigerado ou à temperatura ambiente

This study aimed to evaluate the appropriate sites of abdominocentesis for peritoneal fluid collection in cattle and to investigate the time of cell viability in vitro, comparing three methods of sample conservation. Twenty-one healthy cattle (19 females and 2 males) were subjected to a laparocentesis procedure to obtain peritoneal fluid, with punctures in three defined sites: left cranial, right cranial, and right caudal. The total peritoneal fluid collected was divided into three aliquots and maintained under three preservation conditions: room temperature (26°C), refrigeration (4°C), and room temperature (26°C) with the addition of 1µL of 10% formaldehyde per 1mL of peritoneal fluid. The peritoneal fluid analysis performed immediately after collection consisted of: physical examination (color, appearance, volume, and specific gravity), biochemical measures (pH, total protein, fibrinogen, creatinine, and glucose), and cellularity (total and differential counts). The determination of proteins and the examination of cells were repeated in each separate aliquot at two, four, six, and eight hours after harvest. Data were analyzed through repeated measures ANOVA or Friedman test. The harvest was productive in 67% of cattle. The left cranial and the right cranial puncture sites were the most appropriate. Peritoneal fluid analyzed after collection, the total protein concentration ranged from 1.4 to 3.6g/dL, and number of leukocytes ranged from 54 to 1,322 cells/µL; 60 to 95% of leukocytes were lymphocytes. The protein concentration decreased, but the absolute values of leukocytes, lymphocytes, and segmented neutrophils did not change up to eight hours after collection, independent of the maintenance method. Cell lysis was delayed by cooling, and the addition of formaldehyde did not help preserve the integrity of cellular morphology...(AU)

O estudo teve como objetivo avaliar os locais adequados de laparocentese para a colheita de fluido peritoneal de bovinos e estabelecer o tempo de viabilidade celular in vitro, comparando três métodos de conservação. Vinte e um bovinos hígidos (19 fêmeas e 2 machos) foram submetidos ao procedimento de laparocentese para obtenção de fluido peritoneal, com punção em três pontos definidos: cranial esquerdo, cranial direito e caudal direito. O volume total do líquido peritoneal foi dividido em três alíquotas mantidas sob três métodos de conservação: temperatura ambiente (26°C); refrigeração (4°C); e temperatura ambiente (26°C) com adição de 1µL de formol 10% para cada 1mL de líquido peritonial. A análise do líquido peritoneal realizada imediatamente após sua obtenção consistiu em: exames físico (cor, aspecto, volume e densidade); bioquímicos (pH, proteína total, fibrinogênio, creatinina e glicose); e da celularidade (contagens total e diferencial). A determinação de proteínas e o exame da celularidade foram repetidos, em cada alíquota separada, as duas, quatro, seis e oito horas após a colheita. Análise de variâncias de medidas repetidas ou teste de Friedman foram empregados para avaliação ao longo do tempo. A colheita foi produtiva em 67% dos bovinos e os locais de punção craniais esquerdo e direito foram os mais adequados. A concentração de proteína total variou de 1,4 a 3,6g/dL e o número de leucócitos de 54 a 1.322 células/µL, com predomínio de linfócitos (60 a 95% das células) no fluido peritoneal analisado logo após a colheita. A concentração de proteínas diminuiu, mas os valores absolutos de leucócitos, de linfócitos e de neutrófilos segmentados não se modificaram até oito horas após a colheita, independente do método de manutenção das amostras. A lise celular foi retardada pela refrigeração e a adição de formol não contribuiu para preservar a integridade da morfologia celular...(AU)

Evaluation of equine (Equus cabbalus) corneal endothelium stored in EUSOL-C® preservation medium / Avaliação do endotélio da córnea de equinos (Equus cabbalus) acondicionado em meio de preservação de córnea Eusol-C®

The objective of this study was evaluate the maintenance of the corneal endothelium of horses in cold EUSOL-C® preservation medium over different periods (seven and 14 days) using scanning electron microscopy. A total of 20 pairs of eyes from horses were analysed. The corneas were divided into four groups of 10 corneas each (G1, G2, G3 and G4): G1 - the samples were kept in the preservation medium for seven days; G3 - the samples were kept in the preservation medium for for 14 days; G2 and G4 were formed by the control corneal buttons of G1 and G3, respectively. The average cell loss observed in G1 was 7.62%, in G2 it was 7.04%, in G3 9.12% and in G4 7.16%. No statistically significant differences were observed between the four groups. It was concluded that the Eusol-C® hypothermic preservation medium provided satisfactory preservation of the corneal endothelium in equine species for up to 14 days.(AU)

Objetivou-se avaliar a manutenção do endotélio da córnea de equinos em meio de preservação a frio EUSOL-C® em diferentes períodos de acondicionamento (sete e 14 dias) utilizando microscopia eletrônica de varredura. Foram avaliados 40 bulbos oculares de 20 equinos. Os bulbos oculares foram divididos em quatro grupos (G1, G2, G3 e G4), nos quais: G1 foi composto por 10 botões corneais acondicionados em meio de preservação para córnea Eusol-C® durante sete dias; o G3 foi formado por 10 botões corneais acondicionados em meio de preservação para córnea Eusol-C® durante 14 dias. O G2 e G4 foram formados pelas córneas controle armazenadas imediatamente em glutaraldeído. A média da perda celular observada no G1 foi de 7,62%, no G2 foi de 7,04 %, no G3 foi de 9,12% e o no G4 foi de 7,16%. Não foram observadas diferenças estatisticamente significativas entre os quatro grupos. Foi possível concluir que o meio de preservação hipotérmico Eusol-C® proporcionou de forma satisfatória a preservação do endotélio da córnea na espécie equina durante o período de até 14 dias.(AU)

Peritoneal fluid collection in healthy cattle and evaluation of changes in cell morphology during storage in refrigerated and non-refrigerated samples

ABSTRACT: This study aimed to evaluate the appropriate sites of abdominocentesis for peritoneal fluid collection in cattle and to investigate the time of cell viability in vitro, comparing three methods of sample conservation. Twenty-one healthy cattle (19 females and 2 males) were subjected to a laparocentesis procedure to obtain peritoneal fluid, with punctures in three defined sites: left cranial, right cranial, and right caudal. The total peritoneal fluid collected was divided into three aliquots and maintained under three preservation conditions: room temperature (26°C), refrigeration (4°C), and room temperature (26°C) with the addition of 1L of 10% formaldehyde per 1mL of peritoneal fluid. The peritoneal fluid analysis performed immediately after collection consisted of: physical examination (color, appearance, volume, and specific gravity), biochemical measures (pH, total protein, fibrinogen, creatinine, and glucose), and cellularity (total and differential counts). The determination of proteins and the examination of cells were repeated in each separate aliquot at two, four, six, and eight hours after harvest. Data were analyzed through repeated measures ANOVA or Friedman test. The harvest was productive in 67% of cattle. The left cranial and the right cranial puncture sites were the most appropriate. Peritoneal fluid analyzed after collection, the total protein concentration ranged from 1.4 to 3.6g/dL, and number of leukocytes ranged from 54 to 1,322 cells/L; 60 to 95% of leukocytes were lymphocytes. The protein concentration decreased, but the absolute values of leukocytes, lymphocytes, and segmented neutrophils did not change up to eight hours after collection, independent of the maintenance method. Cell lysis was delayed by cooling, and the addition of formaldehyde did not help preserve the integrity of cellular morphology. Laparocentesis is a safe and secure procedure in cattle and maybe more productive when performed in specific sites on the left or right sides of the cranial abdominal wall. Peritoneal fluid samples may be analyzed with reliable results for up to eight hours after collection when kept refrigerated and for up to six hours when kept at room temperature.

RESUMO: O estudo teve como objetivo avaliar os locais adequados de laparocentese para a colheita de fluido peritoneal de bovinos e estabelecer o tempo de viabilidade celular in vitro, comparando três métodos de conservação. Vinte e um bovinos hígidos (19 fêmeas e 2 machos) foram submetidos ao procedimento de laparocentese para obtenção de fluido peritoneal, com punção em três pontos definidos: cranial esquerdo, cranial direito e caudal direito. O volume total do líquido peritoneal foi dividido em três alíquotas mantidas sob três métodos de conservação: temperatura ambiente (26°C); refrigeração (4°C); e temperatura ambiente (26°C) com adição de 1L de formol 10% para cada 1mL de líquido peritonial. A análise do líquido peritoneal realizada imediatamente após sua obtenção consistiu em: exames físico (cor, aspecto, volume e densidade); bioquímicos (pH, proteína total, fibrinogênio, creatinina e glicose); e da celularidade (contagens total e diferencial). A determinação de proteínas e o exame da celularidade foram repetidos, em cada alíquota separada, as duas, quatro, seis e oito horas após a colheita. Análise de variâncias de medidas repetidas ou teste de Friedman foram empregados para avaliação ao longo do tempo. A colheita foi produtiva em 67% dos bovinos e os locais de punção craniais esquerdo e direito foram os mais adequados. A concentração de proteína total variou de 1,4 a 3,6g/dL e o número de leucócitos de 54 a 1.322 células/L, com predomínio de linfócitos (60 a 95% das células) no fluido peritoneal analisado logo após a colheita. A concentração de proteínas diminuiu, mas os valores absolutos de leucócitos, de linfócitos e de neutrófilos segmentados não se modificaram até oito horas após a colheita, independente do método de manutenção das amostras. A lise celular foi retardada pela refrigeração e a adição de formol não contribuiu para preservar a integridade da morfologia celular. A laparocentese é um procedimento seguro e de execução fácil em bovinos sendo mais produtiva quando realizada em locais específicos à esquerda ou à direita craniais da parede abdominal. Amostras de fluido peritoneal podem ser analisadas com resultados confiáveis quando mantidas refrigeradas por até oito horas após a colheita e quando mantidas à temperatura ambiente por até seis horas.

Comparação de dois métodos de colheita de medula óssea de equinos e de dois meios de diluição para o isolamento de células mononucleares / Comparison of two methods of equine bone marrow aspiration and two solutions for mononuclear cell isolation

O objetivo do presente estudo foi avaliar a concentração e viabilidade da fração de células mononucleares (FCM) a partir de diferentes técnicas de colheita e processamento de medula óssea (MO) em equinos. Foram avaliados cinco equinos adultos, hígidos e sem raça definida. Obtiveram-se frações de medula óssea (MO) do osso esterno, de acordo com dois protocolos: na colheita A, utilizou-se 10mL de solução de heparina dentro da seringa e em seguida, aspirou-se a MO; na colheita B, 10mL de solução de heparina foi injetada na MO e a aspiração foi realizada após 20 segundos. Todos os animais foram submetidos aos dois protocolos de colheitas, realizadas em sequência, sem intervalo entre os dois procedimentos. Após isolamento da fração de células mononucleares (FCM), das amostras de MO obtidas nas colheitas A e B, cada amostra foi dividida em dois tubos, um contendo solução de DMEM e outro contendo PBS. Assim, alternando-se o tipo de colheita e a solução diluidora, obteve-se quatro tubos de amostras por animal. Os tubos foram centrifugados e os sedimentos foram homogeneizados nos respectivos meios obtendo-se o volume final de 100μL. Realizou-se determinação da concentração e viabilidade celular, obtendo-se as concentrações médias de FCM. Para ambos os meios de diluição, a colheita B apresentou valor numérico maior em comparação à colheita A, porém não foi significativo (p>0,05). Atribui-se tal tendência à menor ocorrência de coagulação da MO no momento da colheita B, sugerindo-se melhor aproveitamento da FCM. Não houve diferença (p>0,05) entre os meios DMEM ou PBS, indicando que os mesmos não alteraram a viabilidade celular. Os protocolos utilizados para colheita de MO e separação da FCM se mostraram eficientes, para o uso em terapia celular em equinos.(AU)

The aim of this study was to evaluate mononuclear cells fraction (MCF) concentration and viability from different techniques of bone marrow (BM) aspiration and processing in horses. Five adult horses, healthy and of unknown breed were evaluated. BM was obtained from sternum bone, according two protocols: in aspiration A, 10mL of heparin solution was used inside the syringe and BM was aspirated; in aspiration B, 10mL of heparin solution was injected into the BM, and aspiration was done after 20 seconds. All the animals were submitted by both protocols realized in sequence, without a gap between the procedures. After MCF isolation, of BM samples obtained from A and B aspiration, each sample was divided into two tubes; one contained DMEM solution and the other with PBS solution. Therefore, interchanging the aspiration protocol and the dilution solution, four sample tubes were obtained for each horse. The tubes were centrifuged and the pellet was homogenized with the respectively solution to obtain the final volume of 100μL. Cellular concentration and viability were determined to obtain the FCM medium concentration. For both solutions, the aspiration B had higher numeric values comparing with aspiration A; however, it was not significant (p>0.05). This tendency is attribute for the less BM coagulation observed in the aspiration B, suggesting greater improvement of MCF. No difference (p>0.05) was found between DMEM and PBS solution, indicating that both do not alter the cell viability. The protocols used for BM aspiration and MCF isolation were efficient for application in equine cellular therapy.(AU)

w-conotoxin MVIIA intralesional injection in spinal cord injury in rats / Aplicação intralesional da w-conotoxina MVIIA no trauma medular em ratos

This study aimed to investigate the neuroprotective effect of -conotoxin MVIIA (MVIIA) intralesional application in rats submitted to spinal cord injury. Male Wistar rats, weighing 300g±23.4, were distributed in five groups: negative control (SHAM), placebo (PLA), 5M MVIIA, 10M MVIIA and 20M MVIIA MVIIA. After laminectomy of the 12th thoracic vertebra (SHAM), the PLA, 5M MVIIA, 10M MVIIA and 20M MVIIA groups were subjected to acute compressive spinal cord trauma for five minutes, and then five minutes later, the animals received specific treatment in a standard total volume of 2µL, by intralesional route, using sterile PBS as placebo. Locomotor activity was assayed using Basso Beattie Bresnahan (BBB) scale to show the patterning of SCI. With 48 hours of injury, the animals were euthanized, the liquor sample was collected in atlantooccipital space, and also the spinal segment, including the epicenter and caudal region to injury. Assays were performed for mitochondrial viability, serum glutamate, production of reactive oxygen species(ROS) and lipid peroxidation (LP) were performed. The study design was randomized and the data submitted to ANOVA and comparison of means by SNK test, and data from BBB scale were evaluated using Kruskal-Wallis test (P 0.05). There was no significant difference between groups in BBB scores. The MVIIA did not promote decrease in the levels of(AU)

Objetivou-se investigar o efeito neuroprotetor da aplicação intralesional da MVIIA em ratos submetidos ao trauma medular. Foram utilizados ratos Wistar, machos, com peso entre 300g±23.4, distribuídos em cinco grupos: controle negativo (SHAM), placebo (PLA), 5µM MVIIA, 10µM MVIIA e 20µM MVIIA. Após a laminectomia da vértebra torácica 12 (SHAM), os grupos PLA, 5µM MVIIA, 10µM MVIIA e 20µM MVIIA foram submetidos ao trauma medular agudo compressivo por cinco minutos e, cinco minutos após o trauma, receberam o tratamento específico em volume total padrão de 2µL, pela via intralesional, sendo utilizado como placebo o PBS estéril. A atividade locomotora foi avaliada pela escala proposta por Basso Beattie Bresnahan (BBB), com intuito de mostrar a padronização do trauma medular. Com 48 horas do trauma, os animais foram submetidos à eutanásia, coletou-se amostra do líquor no espaço atlantooccipital e um segmento medular, incluindo o epicentro e região caudal à lesão. Foram realizados ensaios de viabilidade mitocondrial, dosagem de glutamato, produção de espécies reativas de oxigênio (ERO) e peroxidação lipídica (PL). O delineamento do estudo foi inteiramente casualizado e os dados submetidos ao ANOVA, com comparação de médias pelo teste de SNK e os dados do teste BBB foram comparados utilizando o teste Kruskal-Wallis (P 0.05). Em relação aos escores do BBB, não houve diferença entre o(AU)

Toxicity and oxidative stress of canine mesenchymal stromal cells from adipose tissue in different culture passages / Toxicidade e estresse oxidativo das células mesenquimais estromais do tecido adiposo de cão em diferentes passagens de cultura

Stem cells in regenerative therapy have received attention from researchers in recent decades. The culture of these cells allows studies about their behavior and metabolism. Thus, cell culture is the basis for cell therapy and tissue engineering researches. A major concern regarding the use of cultivated stem cell in human or veterinary clinical routine is the risk of carcinogenesis. Cellular activities require a balanced redox state. However, when there is an imbalance in this state, oxidative stress occurs. Oxidative stress contributes to cytotoxicity, which may result in cell death or genomic alterations, favoring the development of cancer cells. The aim of this study was to determine whether there are differences in the behavior of cultured mesenchymal stem cells from canine adipose tissue according to its site of collection (omentum and subcutaneous) evaluating the rate of proliferation, viability, level of oxidative stress and cytotoxicity over six passages. For this experiment, two samples of adipose tissue from subcutaneous and omentum where taken from a female dog corpse, 13 years old, Pitbull. The results showed greater levels of oxidative stress in the first and last passages of both groups, favoring cytotoxicity and cell death.(AU)

O uso de células-tronco como terapia regenerativa tem recebido atenção de pesquisadores nas últimas décadas. A possibilidade de cultivá-las permite o estudo de seu comportamento e metabolismo. Assim, o cultivo celular representa a base para pesquisas de terapia celular e engenharia de tecidos. Uma das principais preocupações relativa ao uso de células-tronco cultivas na rotina clínica humana ou veterinária é a reprogramação dessas células em tumores benignos ou malignos. As atividades celulares necessitam de um estado redox balanceado e quando há algum desequilíbrio nessas reações ocorre o estresse oxidativo. O quadro de estresse oxidativo contribui pra a citotoxicidade podendo resultar em morte celular e até mesmo em alterações genômicas e ocorrência de células cancerígenas. O objetivo deste trabalho foi verificar se há diferenças no comportamento de células-tronco mesenquimais estromais de tecido adiposo de cão de acordo com o seu tecido de coleta (omento e subcutâneo) avaliando o cultivo dessas células quanto a sua taxa de proliferação, viabilidade, estresse oxidativo e citotoxicidade ao longo de seis passagens. Para a execução deste experimento foram utilizadas duas amostras de tecido adiposo coletas do subcutâneo e omento do cadáver de um cão, fêmea, 13 anos de idade, da raça Pitbull. O cadáver era oriundo do Hospital Veterinário Universitário e sofreu eutanásia devido a complicações no seu quadro de cardiomiopatia. As duas amostras foram encaminhadas para o isolamento e cultura celular. Os resultados mostraram que a primeira e última passagem em ambos os grupos são as passagens mais submetidas ao estresse oxidativo ficando mais sujeitas à citotoxicidade.(AU)

Toxicity and oxidative stress of canine mesenchymal stromal cells from adipose tissue in different culture passages

Abstract: Stem cells in regenerative therapy have received attention from researchers in recent decades. The culture of these cells allows studies about their behavior and metabolism. Thus, cell culture is the basis for cell therapy and tissue engineering researches. A major concern regarding the use of cultivated stem cell in human or veterinary clinical routine is the risk of carcinogenesis. Cellular activities require a balanced redox state. However, when there is an imbalance in this state, oxidative stress occurs. Oxidative stress contributes to cytotoxicity, which may result in cell death or genomic alterations, favoring the development of cancer cells. The aim of this study was to determine whether there are differences in the behavior of cultured mesenchymal stem cells from canine adipose tissue according to its site of collection (omentum and subcutaneous) evaluating the rate of proliferation, viability, level of oxidative stress and cytotoxicity over six passages. For this experiment, two samples of adipose tissue from subcutaneous and omentum where taken from a female dog corpse, 13 years old, Pitbull. The results showed greater levels of oxidative stress in the first and last passages of both groups, favoring cytotoxicity and cell death.

Resumo: O uso de células-tronco como terapia regenerativa tem recebido atenção de pesquisadores nas últimas décadas. A possibilidade de cultivá-las permite o estudo de seu comportamento e metabolismo. Assim, o cultivo celular representa a base para pesquisas de terapia celular e engenharia de tecidos. Uma das principais preocupações relativa ao uso de células-tronco cultivas na rotina clínica humana ou veterinária é a reprogramação dessas células em tumores benignos ou malignos. As atividades celulares necessitam de um estado redox balanceado e quando há algum desequilíbrio nessas reações ocorre o estresse oxidativo. O quadro de estresse oxidativo contribui pra a citotoxicidade podendo resultar em morte celular e até mesmo em alterações genômicas e ocorrência de células cancerígenas. O objetivo deste trabalho foi verificar se há diferenças no comportamento de células-tronco mesenquimais estromais de tecido adiposo de cão de acordo com o seu tecido de coleta (omento e subcutâneo) avaliando o cultivo dessas células quanto a sua taxa de proliferação, viabilidade, estresse oxidativo e citotoxicidade ao longo de seis passagens. Para a execução deste experimento foram utilizadas duas amostras de tecido adiposo coletas do subcutâneo e omento do cadáver de um cão, fêmea, 13 anos de idade, da raça Pitbull. O cadáver era oriundo do Hospital Veterinário Universitário e sofreu eutanásia devido a complicações no seu quadro de cardiomiopatia. As duas amostras foram encaminhadas para o isolamento e cultura celular. Os resultados mostraram que a primeira e última passagem em ambos os grupos são as passagens mais submetidas ao estresse oxidativo ficando mais sujeitas à citotoxicidade.

Toxicity and oxidative stress of canine mesenchymal stromal cells from adipose tissue in different culture passages

Abstract: Stem cells in regenerative therapy have received attention from researchers in recent decades. The culture of these cells allows studies about their behavior and metabolism. Thus, cell culture is the basis for cell therapy and tissue engineering researches. A major concern regarding the use of cultivated stem cell in human or veterinary clinical routine is the risk of carcinogenesis. Cellular activities require a balanced redox state. However, when there is an imbalance in this state, oxidative stress occurs. Oxidative stress contributes to cytotoxicity, which may result in cell death or genomic alterations, favoring the development of cancer cells. The aim of this study was to determine whether there are differences in the behavior of cultured mesenchymal stem cells from canine adipose tissue according to its site of collection (omentum and subcutaneous) evaluating the rate of proliferation, viability, level of oxidative stress and cytotoxicity over six passages. For this experiment, two samples of adipose tissue from subcutaneous and omentum where taken from a female dog corpse, 13 years old, Pitbull. The results showed greater levels of oxidative stress in the first and last passages of both groups, favoring cytotoxicity and cell death.

Resumo: O uso de células-tronco como terapia regenerativa tem recebido atenção de pesquisadores nas últimas décadas. A possibilidade de cultivá-las permite o estudo de seu comportamento e metabolismo. Assim, o cultivo celular representa a base para pesquisas de terapia celular e engenharia de tecidos. Uma das principais preocupações relativa ao uso de células-tronco cultivas na rotina clínica humana ou veterinária é a reprogramação dessas células em tumores benignos ou malignos. As atividades celulares necessitam de um estado redox balanceado e quando há algum desequilíbrio nessas reações ocorre o estresse oxidativo. O quadro de estresse oxidativo contribui pra a citotoxicidade podendo resultar em morte celular e até mesmo em alterações genômicas e ocorrência de células cancerígenas. O objetivo deste trabalho foi verificar se há diferenças no comportamento de células-tronco mesenquimais estromais de tecido adiposo de cão de acordo com o seu tecido de coleta (omento e subcutâneo) avaliando o cultivo dessas células quanto a sua taxa de proliferação, viabilidade, estresse oxidativo e citotoxicidade ao longo de seis passagens. Para a execução deste experimento foram utilizadas duas amostras de tecido adiposo coletas do subcutâneo e omento do cadáver de um cão, fêmea, 13 anos de idade, da raça Pitbull. O cadáver era oriundo do Hospital Veterinário Universitário e sofreu eutanásia devido a complicações no seu quadro de cardiomiopatia. As duas amostras foram encaminhadas para o isolamento e cultura celular. Os resultados mostraram que a primeira e última passagem em ambos os grupos são as passagens mais submetidas ao estresse oxidativo ficando mais sujeitas à citotoxicidade.

EFFECTS OF LONG COOLING PERIODS OF THE EAR SKIN ON THE ISOLATION AND CULTIVATION OF BOVINE FIBROBLASTS FOR USE IN NUCLEAR TRANSFER TECHNIQUE.

O armazenamento e transporte de amostras de animais que vieram a óbito ou estão localizados em fazendas distantes de laboratórios por longos períodos de tempo constitui uma realidade. A necessidade de um protocolo eficiente de armazenamento e transporte destas amostras para a manutenção da viabilidade tecidual do animal de interesse existe, e para tal, as orelhas de oito fêmeas bovinas foram coletadas no momento do óbito, lavadas, tricotomizadas e armazenadas por 30 dias a 5C. Nos dias 0, 2, 4, 7, 14, 21 e 30, o cultivo de explantes de pele foi realizado. Em comparação aos diferentes períodos de refrigeração, o tempo para o aparecimento das primeiras células ao redor dos explantes, tempo até confluência, concentração celular no momento do congelamento, taxa de contaminação e viabilidade celular foram observados. Um aumento no tempo de aparecimento dos primeiros fibroblastos foi observado com o aumento do tempo de refrigeração, onde no dia 0, as células levaram 4±0 para aparecer ao redor dos explantes enquanto no dia 30, elas cresceram apenas com 33.5±1.5 dias. Um aumento também ocorreu no tempo até confluência celular com períodos de refrigeração mais longos. Células do dia 0 levaram 24±2 dias para atingir confluência enquanto células do dia 30 atingiram confluência com 31±0 dias. Contaminação foi mais prevalente em períodos posteriores (14, 21 e 30) e a concentração celular caiu drasticamente com o aumento do período de resfriamento, caindo de 1.334.375±131.375cel/mL no dia 0 para 311.250±0cell/mL no dia 30. De igual maneira, a viabilidade celular diminuiu de 85,6±1,7% no dia 0 para apenas 28,72±4,81% no dia 30. Quando células refrigeradas a 5°C por 30 dias foram utilizadas como doadoras de núcleo a técnica de transferência nuclear, uma taxa de blastocisto de 26.05% em D7 foi obtida, uma boa taxa de blastocisto para um longo períodos de refrigeração. Foi observado que a refrigeração de tecido viabiliza a cultura celular para transferência nuclear por longos períodos de refrigeração de amostra. No entanto, o aumento no tempo de armazenamento acarreta danos celulares, dificultando o cultivo, diminuindo consideravelmente a viabilidade celular pósdescongelamento e a concentração celular, mas mantendo a capacidade celular como doadora de núcleo para a produção de embriões clones.

Storage and transportation for long periods of time of samples from animals that died or are housed in properties located far away from laboratories is a reality. The need for an efficient protocol of storage and transportation of such samples for maintenance of the animal of interests tissue viability exists, and for such, ears of eight bovine females were collected on the moment of death, washed, trichotomized and stored for 30 days at 5C. On days 0, 2, 4, 7, 14, 21 and 30, skin explant culture was performed. In comparison between the different time points, the time for the first fibroblasts to outgrow skin explants, time to confluence, cell concentration on freezing moment, contamination rates and cell viability were observed. An increase in fibroblast outgrowth time was observed with increased storage time, where on day 0, cells took 4±0 days in order to outgrow explants while on day 30, they outgrew with 33.5±1.5 days. An increase also occurred on time to confluence with longer refrigeration periods. Cells from day 0 reached confluence in 24±2 days while day 30 cells took 31±0 days in order to reach confluence. Contamination was more prevalent in posterior periods (14, 21 and 30 days) and cell concentration dropped drastically with increased storage time, reducing from 1.334.375±131.375cell/mL on day 0 to 311.250±0cell/mL on day 30. Likewise, cell viability was reduced with increased time, dropping from 85.6±1.7% on day 0 to only 28.72±4.81% on day 30. When cells cooled at 5°C for 30 days were used as nuclei donors in nuclear transfer technique, a blastocyst rate of 26.05% at D7 was obtained, a good embryonic development rate for a long period of storage. It was found that tissue refrigeration enables viable cell culture for nuclear transfer use for long periods of sample cooling. However, increase in sample storage time brings cell damage, making cultivation more difficult, lowering considerably cell viability post thawing and cell concentration, but maintaining cell capacity as nuclei donor for cloned embryo production.

Efeito neuroprotetor do suco de uva branco sobre a viabilidade celular do córtex cerebral de ratos / Neuroprotective effect of white grape juice on cellular viability in cerebral cortex of rats

Objetivo: Avaliar o efeito do tratamento in vitro com suco de uva branco, convencional e orgânico, na viabilidade celular sobre o dano induzido pela azida sódica, em homogeneizado e fatias de córtex cerebral de ratos Wistar. Métodos: Foram utilizados ratos de 10 dias de idade, divididos em 6 grupos (n=6): salina 0,9%; azida sódica; suco de uva branco convencional; suco de uva branco orgânico; azida sódica + suco de uva branco convencional; azida sódica + suco de uva branco orgânico. Realizou-se incubações com os sucos de uva 40% (p/v) associados ou não a azida sódica (5 mM) na fatia e no homogeneizado de córtex cerebral. Foi realizada a análise química dos sucos e foi verificado a viabilidade celular através do ensaio da enzima lactato desidrogenase (LDH) e do ensaio do sal de metiltiotetrazol (MTT). Resultados: Observamos que o suco orgânico possuiu maior quantidade de compostos fenólicos comparado ao suco convencional. Foi possível verificar que a azida sódica aumentou os níveis de LDH no homogeneizado, mas não alterou na fatia, sendo este aumento de LDH prevenido pelos sucos de uva convencional e orgânico. No ensaio de MTT podemos observar que a azida sódica não alterou os níveis de MTT no homogeneizado, mas reduziu na fatia. O suco orgânico aumentou a viabilidade celular (MTT) com ou sem azida sódica no homogeneizado e na fatia. Conclusões: Observamos que a condução na cultura da videira modificou a síntese de compostos fenólicos e por consequência sua atividade biológica. Isto é observado pelo fato do suco de uva orgânico ter maior eficácia do que o suco de uva convencional, de modo que este foi capaz de reduzir os danos provocados pela azida sódica, bem como aumentar a viabilidade celular. Portanto, o suco de uva branco poderia ser um adjuvante na terapia de pacientes portadores de doenças cerebrais.

Objective: To evaluate the effect of in vitro treatment with white grape juice, organic and conventional, on cell viability on the damage induced by sodium azide in homogenized and in slices of cerebral cortex of rats. Methods: We used 10-day-old rats, divided into 6 groups (n = 6): 0.9% saline, sodium azide; conventional white grape juice, organic white grape juice, sodium azide + conventional white grape juice, sodium azide + organic white grape juice. Incubations took place with 40% (w/v) of the grape juice with or without sodium azide (5 mM) and the slices or homogenate of the cerebral cortex. We performed the chemical analysis of the juices and verified cell viability by assaying the enzyme lactate dehydrogenase (LDH) and methyltiotetrazol salt assay (MTT). Results: We observed that the organic juice has the greatest amount of phenolic compounds compared to conventional juice. We found that sodium azide increased LDH levels in the homogenized, but did not change it in the slices, and this increase was prevented by conventional and organic grape juices. In the MTT assay we observed that sodium azide did not affect the levels of MTT in the homogenized, but reduced in the slices. The organic juice increased the cell viability (MTT) with or without sodium azide in the homogenized and in the slices. Conclusions: We observed that the cultivation of the vineyards modified the synthesis of phenolic compounds and therefore its biological activity. This is observed because the organic grape juice have greater efficacy than the conventional grape juice, because it was able to reduce the damage caused by sodium azide as well as increase cell viability. Therefore, the white grape juice could be an adjuvant therapy in patients with brain diseases.

Efeito neuroprotetor do suco de uva branco sobre a viabilidade celular do córtex cerebral de ratos / Neuroprotective effect of white grape juice on cellular viability in cerebral cortex of rats

Objetivo: Avaliar o efeito do tratamento in vitro com suco de uva branco, convencional e orgânico, na viabilidade celular sobre o dano induzido pela azida sódica, em homogeneizado e fatias de córtex cerebral de ratos Wistar. Métodos: Foram utilizados ratos de 10 dias de idade, divididos em 6 grupos (n=6): salina 0,9%; azida sódica; suco de uva branco convencional; suco de uva branco orgânico; azida sódica + suco de uva branco convencional; azida sódica + suco de uva branco orgânico. Realizou-se incubações com os sucos de uva 40% (p/v) associados ou não a azida sódica (5 mM) na fatia e no homogeneizado de córtex cerebral. Foi realizada a análise química dos sucos e foi verificado a viabilidade celular através do ensaio da enzima lactato desidrogenase (LDH) e do ensaio do sal de metiltiotetrazol (MTT). Resultados: Observamos que o suco orgânico possuiu maior quantidade de compostos fenólicos comparado ao suco convencional. Foi possível verificar que a azida sódica aumentou os níveis de LDH no homogeneizado, mas não alterou na fatia, sendo este aumento de LDH prevenido pelos sucos de uva convencional e orgânico. No ensaio de MTT podemos observar que a azida sódica não alterou os níveis de MTT no homogeneizado, mas reduziu na fatia. O suco orgânico aumentou a viabilidade celular (MTT) com ou sem azida sódica no homogeneizado e na fatia. Conclusões: Observamos que a condução na cultura da videira modificou a síntese de compostos fenólicos e por consequência sua atividade biológica. Isto é observado pelo fato do suco de uva orgânico ter maior eficácia do que o suco de uva convencional, de modo que este foi capaz de reduzir os danos provocados pela azida sódica, bem como aumentar a viabilidade celular. Portanto, o suco de uva branco poderia ser um adjuvante na terapia de pacientes portadores de doenças cerebrais. (AU)

Objective: To evaluate the effect of in vitro treatment with white grape juice, organic and conventional, on cell viability on the damage induced by sodium azide in homogenized and in slices of cerebral cortex of rats. Methods: We used 10-day-old rats, divided into 6 groups (n = 6): 0.9% saline, sodium azide; conventional white grape juice, organic white grape juice, sodium azide + conventional white grape juice, sodium azide + organic white grape juice. Incubations took place with 40% (w/v) of the grape juice with or without sodium azide (5 mM) and the slices or homogenate of the cerebral cortex. We performed the chemical analysis of the juices and verified cell viability by assaying the enzyme lactate dehydrogenase (LDH) and methyltiotetrazol salt assay (MTT). Results: We observed that the organic juice has the greatest amount of phenolic compounds compared to conventional juice. We found that sodium azide increased LDH levels in the homogenized, but did not change it in the slices, and this increase was prevented by conventional and organic grape juices. In the MTT assay we observed that sodium azide did not affect the levels of MTT in the homogenized, but reduced in the slices. The organic juice increased the cell viability (MTT) with or without sodium azide in the homogenized and in the slices. Conclusions: We observed that the cultivation of the vineyards modified the synthesis of phenolic compounds and therefore its biological activity. This is observed because the organic grape juice have greater efficacy than the conventional grape juice, because it was able to reduce the damage caused by sodium azide as well as increase cell viability. Therefore, the white grape juice could be an adjuvant therapy in patients with brain diseases. (AU)

Viabilidade celular da fração mononuclear da medula óssea e fração vascular estromal do tecido adiposo de equinos após o processo de congelamento e descongelamento / Viability of equine bone marrow mononuclear fraction and adipose tissue-derived stromal vascular fraction after freezing and thawing process

Cinco cavalos adultos foram submetidos à coleta de medula óssea do esterno e de tecido adiposo da região glútea. As amostras foram processadas para obtenção da fração mononuclear da medula óssea e fração vascular estromal do tecido adiposo, o número de células obtidas e a viabilidade celular foram determinados. Em seguida, realizou-se o congelamento das amostras em solução contendo 20% de soro fetal bovino e 10% de dimetilsulfóxido. Depois de um mês, realizou-se o descongelamento das amostras e a viabilidade celular foi novamente mensurada. Os resultados revelaram que as técnicas utilizadas tanto para coleta de medula óssea quanto de tecido adiposo em equinos são simples, rápidas e seguras. As metodologias adotadas para o processamento das amostras foram eficientes, obtendo-se aproximadamente 95% de viabilidade celular. Após o descongelamento, a viabilidade média das amostras de células mononucleares da medula óssea foi de 86% e da fração vascular estromal do tecido adiposo de 64%. Frente à importância da terapia celular na clínica médica de equinos, concluiu-se que é necessária a realização de mais estudos, visando padronizar uma técnica de criopreservação que mantenha a integridade das células da fração mononuclear da medula óssea e da fração vascular estromal do tecido adiposo de equinos.(AU)

In five adult horses, bone marrow was aspirated from the sternum and adipose tissue extracted from the gluteal region. The samples were processed to obtain the mononuclear fraction of bone marrow and stromal vascular fraction of adipose tissue, and the number of cells obtained and cell viability were determined. Next, the cell samples were frozen in medium containing 20% fetal bovine serum and 10% dimethylsulfoxide. After one month, the cells were thawed and cell viability was again determined. The results revealed that the techniques for collecting both bone marrow and adipose tissue in horses are simple, rapid and safe. The methods used for processing the samples were efficient, yielding about 95% cell viability. After freezing, mean viability of the mononuclear cells of bone marrow was 86%, and 64% for the stromal vascular cells of adipose tissue. In view of the importance of cell therapy in equine clinical medicine, it is concluded that further studies are needed for the standardization of a cryopreservation technique to maintain the integrity for the mononuclear fraction of bone marrow and the stromal vascular fraction of adipose tissue in horses.(AU)

Viabilidade celular da fração mononuclear da medula óssea e fração vascular estromal do tecido adiposo de equinos após o processo de congelamento e descongelamento / Viability of equine bone marrow mononuclear fraction and adipose tissue-derived stromal vascular fraction after freezing and thawing process

Cinco cavalos adultos foram submetidos à coleta de medula óssea do esterno e de tecido adiposo da região glútea. As amostras foram processadas para obtenção da fração mononuclear da medula óssea e fração vascular estromal do tecido adiposo, o número de células obtidas e a viabilidade celular foram determinados. Em seguida, realizou-se o congelamento das amostras em solução contendo 20% de soro fetal bovino e 10% de dimetilsulfóxido. Depois de um mês, realizou-se o descongelamento das amostras e a viabilidade celular foi novamente mensurada. Os resultados revelaram que as técnicas utilizadas tanto para coleta de medula óssea quanto de tecido adiposo em equinos são simples, rápidas e seguras. As metodologias adotadas para o processamento das amostras foram eficientes, obtendo-se aproximadamente 95% de viabilidade celular. Após o descongelamento, a viabilidade média das amostras de células mononucleares da medula óssea foi de 86% e da fração vascular estromal do tecido adiposo de 64%. Frente à importância da terapia celular na clínica médica de equinos, concluiu-se que é necessária a realização de mais estudos, visando padronizar uma técnica de criopreservação que mantenha a integridade das células da fração mononuclear da medula óssea e da fração vascular estromal do tecido adiposo de equinos.(AU)

In five adult horses, bone marrow was aspirated from the sternum and adipose tissue extracted from the gluteal region. The samples were processed to obtain the mononuclear fraction of bone marrow and stromal vascular fraction of adipose tissue, and the number of cells obtained and cell viability were determined. Next, the cell samples were frozen in medium containing 20% fetal bovine serum and 10% dimethylsulfoxide. After one month, the cells were thawed and cell viability was again determined. The results revealed that the techniques for collecting both bone marrow and adipose tissue in horses are simple, rapid and safe. The methods used for processing the samples were efficient, yielding about 95% cell viability. After freezing, mean viability of the mononuclear cells of bone marrow was 86%, and 64% for the stromal vascular cells of adipose tissue. In view of the importance of cell therapy in equine clinical medicine, it is concluded that further studies are needed for the standardization of a cryopreservation technique to maintain the integrity for the mononuclear fraction of bone marrow and the stromal vascular fraction of adipose tissue in horses.(AU)

ATIVIDADE CITOTÓXICA DO EXTRATO ETANÓLICO DA CASCA DE PEQUI (Caryocar brasiliense) EM CÉLULAS DE OSTEOSSARCOMA CANINO IN VITRO

O osteossarcoma é uma neoplasia de origem mesenquimal de elevada mortalidade em cães e no homem. Ensaios de citotoxicidade com plantas tropicais têm sido realizados para identificar possíveis princípios ativos medicinais capazes de inibir a proliferação de células tumorais. O cerrado é a vegetação predominante da região Centro-Oeste do Brasil, rico em biodiversidade, no qual frutos, como o pequi (Caryocar brasilense) são amplamente conhecidos, porém pouco explorados quanto a suas propriedades farmacológicas. Neste contexto, o objetivo deste estudo foi verificar a atividade citotóxica do extrato etanólico da casca de pequi em células de osteossarcoma canino em cultura estabelecida, obtidas do banco de linhagens celulares, subcultivadas e submetidas ao tratamento com o EECP em três diferentes concentrações e três diferentes tempos de exposição. O tratamento que inibiu de forma mais eficiente o crescimento celular foi o grupo no qual foram adicionados 10µl do EECP por 72 horas, resultando em crescimento de 28,20% em relação ao controle, ou seja, uma inibição de 71,80%. A menor média do IC50 foi de 155,2 µg/mL, no tratamento que recebeu 10µl do EECP por 72 horas. Com o cálculo das frações de sobrevivência presumiu-se que o crescimento celular, após o tratamento, foi menor (3,33 %) no grupo tratado por 72 horas com a concentração de 10 µl. Com base nos resultados obtidos, concluiu-se que o extrato etanólico da casca de pequi (Caryocar brasiliense) possui efeito citotóxico sobre as células de osteossarcoma canino, promovendo redução da viabilidade celular de forma dependente do tempo de exposição e da concentração do extrato utilizada.

AVALIAÇÃO IN VITRO DAS PROPRIEDADES ANTITUMORAIS DO EXTRATO ETANÓLICO DE TRÊS TIPOS DE PRÓPOLIS DO NORDESTE DO BRASIL SOBRE CÉLULAS DE MELANOMA K1735

O extrato de própolis, uma substância resinosa coletada pelas abelhas através de fontes botânicas, tem sido bastante utilizado em estudos in vitro, devido à conhecida atividade citotóxica que a própolis possui, inibindo o crescimento de células tumorais e sua proliferação e afetando a viabilidade celular através da indução da morte celular. Não existem relatos sobre o efeito in vitro anti-melanoma de extrato etanólico de própolis ou os seus mecanismos funcionais na linhagem de células de melanoma murino K1735. Investigou-se o efeito antitumoral de três amostras de própolis do nordeste brasileiro, duas amostras de apiários distintos de Ilhéus-BA e uma amostra de João Pessoa-PB. A avaliação da citotoxicidade/viabilidade celular, através do ensaio MTT e do método de exclusão do corante azul de tripan, revelou que a própolis do nordeste do Brasil inibiu significativamente o crescimento de células de melanoma K1735, de forma tempo e dose dependente in vitro. A amostra 3 de própolis de Ilhéus-BA foi a mais citotóxica apresentando diminuição do IC50 de forma tempo-dependente, reduzindo 84,5% (95- 14,7µg/mL) em 24h e 72h de tratamento, respectivamente. A análise morfológica das células através de microscópio óptico e de contraste de fase revelou que a própolis induz alterações como presença de grânulos em volta do núcleo e no centro dele, fragmentação nuclear, intensa formação de vacúolos citoplasmáticos, surgimento de blebbings de membrana e as células se tornam arredondadas e individualmente separadas. Além disso, a própolis induz a morte celular por apoptose tardia e por necrose, analisado por Citometria de fluxo. Os nossos resultados indicam que a própolis do nordeste brasileiro inibe a viabilidade de células de melanoma murino K1735 e que constitui uma excelente fonte de agente natural anti-tumoral.

Efeitos da água do mar dessalinizada, purificada e potável em sistemas biológicos.

Dados da ONU, de 2014, preveem que em 2025 mais da metade da população mundial não terá acesso à água potável. De toda a água disponível na Terra, 97,2% é concentrada nos oceanos e apenas 0,02% está disponível em rios e lagos, sob a forma de água doce para consumo. Hoje, é possível coletar a água do mar e torná-la potável, por meio de tecnologia já disponível em vários países do Oriente Médio e Norte da África, onde a água doce de rios, lagos e reservatórios é escassa. O processo de dessalinização da água não é usado em larga escala no Brasil, devido aos enormes recursos hídricos do país. Comparativamente, as águas minerais oferecem, em média, cerca de 12 minerais, enquanto a água dessalinizada e nanofiltrada do mar, tema deste estudo, oferece 63 minerais, que são importantes para a função celular adequada. Baseado nessa evidência, este projeto resulta da investigação dos possíveis efeitos da água do mar para as células e funções celulares e a saúde, em geral, utilizando modelos experimentais in vitro.

2014 ONU data reveal that by 2025 over half of world population will not have access to clean water. Of all the water available on earth 97.2% is concentrated in the oceans and only 0.02% is available from rivers and lakes in the form of fresh water for consumption. Today it is possible to remove the sea water and make it drinkable and this technology already occurs in several countries in the Middle East and North Africa where freshwater rivers, lakes and reservoirs is scarce. The process of water desalination is not done on a large scale in Brazil, given the vast water resources of the country. Mineral waters, mostly offer on average, about 12 minerals, while the desalinated and nanofiltraded water from sea that will be used in this study offers 63 minerals, important for proper cell function. Thus, this design results in the investigation of the possible effects of the sea water to cells and cellular functions and overall health using experimental models in vitro.

Efeitos do ácido ursólico in vitro em células satélites musculares de cães afetados e portadoras de GRMD

A Distrofia Muscular de Duchenne (DMD) é uma doença hereditária ligada ao cromossomo X que tem como principais características a atrofia e fraqueza muscular progressiva, chegando até mesmo ao comprometimento da musculatura cardíaca e respiratória. A ausência e/ou disfunção da proteína distrofina na DMD faz com que qualquer esforço muscular contribua para deterioração do tecido muscular. Portanto, presente estudo avaliou pela primeira vez os niveis de metilação e hidroximetilação global no músculo esquelético de animais portadores e afetados pela DMD e analisou os efeitos do acido ursólico sobre a viabilidade e producao proteina de linhagens celulas musculares isoladas de animais portadores e afetados pela GRMD. As análises dos niveis de metilação e hidroximetilação sugerem que as células musculares de caes portadores apresentam maiores níveis de hidroximetilação, em geral, o que pode estar associado com a estabilidade e capacidade de reparo celular; o tratamento com ácido ursólico in vitro, aumentou a concentração de proteinas sobre as células cultivadas;no entanto apresentou-se tóxico às células cultivadas in vitro quando em baixas concentrações, para animais portadores e afetados com 6 meses de idade. Ainda que ensaio de viabilidade celular demonstrou que o ácido ursólico pode ser tóxico em determinada concentração, quando comparado com o controle, entretanto, a utilização deste componente parece ser favorável às células.

The Duchenne muscular dystrophy (DMD) is a hereditary 'X'-linked wasting muscle disease which is characterized by atrophy and progressive muscle weakness that in later stages affects cardiac and respiratory muscles leading to death. The lack and/or dysfunction of dystrophin in DMD induces muscle injury after each muscles contraction leading severe wasting of the muscle tissue. Therefore, for the first time this study assessed the global levels of methylation levels and hydroxymethylation in skeletal muscle of carrier and affected dogs by DMD. Also, we assessed the effects of ursolic acid on the cell viability and protein production of muscle cells lineages isolated from carrier and affected dogs by DMD. The analysis of global levels of methylation and hydroxymethylation showed that muscle cells from carrier dogs had higher levels of global hydroxymethylation when compared to heir affected counterparts, which may be associated with the cellular stability and repair capacity. Taken together, our results showed that there is a difference on global methylation of DNA the skeletal muscle between carrier and affected dogs by DMD, which can be a new prognostic tool for disease progression. Also, the treatment with ursolic acid in vitro increased protein concentration in cultured cells, however ursolic acid showed to be toxic to muscle cells lineages isolated from carrier and affected dogs by DMD at low concentrations. Although cell viability assay showed that ursolic acid may be toxic in certain concentrations, when compared with the control, however, the use of this component appears to be favorable to the cells.