Virulence genotyping and antimicrobial resistance profiles of Yersinia enterocolitica isolated from meat and meat products in Egypt / Genotipagem de virulência e perfis de resistência antimicrobiana de Yersinia enterocolitica isolados de carne e derivados no Egito

Pathogenic Yersinia enterocolitica (Y. enterocolitica) is one of the food-borne entero-pathogen responsible for yersiniosis in humans. The purpose of this research was to survey the prevalence, virulence-associated genes, and antimicrobial resistance of Y. enterocolitica isolated from meat and meat product samples in Egypt. Forty-one (5.9%) out of 700- samples of chicken meat, beef, ground beef, and sausage were positive Y. enterocolitica with a high prevalence in chicken meat (12%). Five virulence genes (ail, inv, ystA, ystB, and yadA) were characterized among 41 Y. enterocolitica isolates with variable frequencies. Among the strains tested, the ystB gene was detected with a high percentage (78.1%), followed by inv gene (70.7%), ail gene (14.6%), ystA gene (12.2%), and yadA gene (2.4%). A high resistance rate was estimated to amoxicillin-clavulanic acid (100%), followed by cefazolin (95%), ampicillin (65.9%), and doxycycline (51.2%), whilst a high sensitivity rate was observed to gentamicin and ciprofloxacin (97.6% each). Interestingly, the multidrug resistance was specified in the 70.7% of strains and showing 13 resistance patterns. Based on nucleotide sequence analysis of the 16s rRNA gene, the phylogenetic tree showed the genetic relatedness amongst Y. enterocolitica isolates. These findings highlighted the emergence of virulent and multidrug-resistant pathogenic Y. entrocolitica in retailed meat and meat products in Egypt.

A Yersinia enterocolitica patogênica (Y. enterocolitica) é um dos enteropatógenos de origem alimentar responsáveis pela yersiniose no ser humano. O objetivo desta pesquisa foi avaliar a prevalência, genes associados à virulência e resistência antimicrobiana de Y. enterocolitica isolada de amostras de carne e produtos à base de carne no Egito. Quarenta e um (5,9%) de 700 amostras de carne de frango, carne bovina, moída e linguiça foram Y. enterocolitica positivas, com alta prevalência em carne de frango (12%). Cinco genes de virulência (ail, inv, ystA, ystB e yadA) foram caracterizados entre 41 isolados de Y. enterocolitica com frequências variáveis. Entre as cepas testadas, o gene ystB foi detectado com uma alta porcentagem (78,1%), seguido pelo gene inv (70,7%), ail genes (14,6%), gene ystA (12,2%) e gene yadA (2,4%). Foi estimada uma alta taxa de resistência ao ácido amoxicilina-clavulânico (100%), seguida de cefazolina (95%), ampicilina (65,9%) e doxiciclina (51,2%), enquanto uma alta taxa de sensibilidade foi observada para gentamicina e ciprofloxacina (97,6% cada). Curiosamente, a resistência a múltiplas drogas foi especificada em 70,7% das cepas e mostrando 13 padrões de resistência. Com base na análise da sequência nucleotídica do gene rRNA 16s, a árvore filogenética mostrou a relação genética entre isolados de Y. enterocolitica. Esses achados destacaram o surgimento de Y. entrocolitica patogênica virulenta e multirresistente em carnes e produtos à base de carne no Egito.

Virulence genotyping and antimicrobial resistance profiles of Yersinia enterocolitica isolated from meat and meat products in Egypt / Genotipagem de virulência e perfis de resistência antimicrobiana de Yersinia enterocolitica isolados de carne e derivados no Egito

Pathogenic Yersinia enterocolitica (Y. enterocolitica) is one of the food-borne entero-pathogen responsible for yersiniosis in humans. The purpose of this research was to survey the prevalence, virulence-associated genes, and antimicrobial resistance of Y. enterocolitica isolated from meat and meat product samples in Egypt. Forty-one (5.9%) out of 700- samples of chicken meat, beef, ground beef, and sausage were positive Y. enterocolitica with a high prevalence in chicken meat (12%). Five virulence genes (ail, inv, ystA, ystB, and yadA) were characterized among 41 Y. enterocolitica isolates with variable frequencies. Among the strains tested, the ystB gene was detected with a high percentage (78.1%), followed by inv gene (70.7%), ail gene (14.6%), ystA gene (12.2%), and yadA gene (2.4%). A high resistance rate was estimated to amoxicillin-clavulanic acid (100%), followed by cefazolin (95%), ampicillin (65.9%), and doxycycline (51.2%), whilst a high sensitivity rate was observed to gentamicin and ciprofloxacin (97.6% each). Interestingly, the multidrug resistance was specified in the 70.7% of strains and showing 13 resistance patterns. Based on nucleotide sequence analysis of the 16s rRNA gene, the phylogenetic tree showed the genetic relatedness amongst Y. enterocolitica isolates. These findings highlighted the emergence of virulent and multidrug-resistant pathogenic Y. entrocolitica in retailed meat and meat products in Egypt.(AU)

A Yersinia enterocolitica patogênica (Y. enterocolitica) é um dos enteropatógenos de origem alimentar responsáveis pela yersiniose no ser humano. O objetivo desta pesquisa foi avaliar a prevalência, genes associados à virulência e resistência antimicrobiana de Y. enterocolitica isolada de amostras de carne e produtos à base de carne no Egito. Quarenta e um (5,9%) de 700 amostras de carne de frango, carne bovina, moída e linguiça foram Y. enterocolitica positivas, com alta prevalência em carne de frango (12%). Cinco genes de virulência (ail, inv, ystA, ystB e yadA) foram caracterizados entre 41 isolados de Y. enterocolitica com frequências variáveis. Entre as cepas testadas, o gene ystB foi detectado com uma alta porcentagem (78,1%), seguido pelo gene inv (70,7%), ail genes (14,6%), gene ystA (12,2%) e gene yadA (2,4%). Foi estimada uma alta taxa de resistência ao ácido amoxicilina-clavulânico (100%), seguida de cefazolina (95%), ampicilina (65,9%) e doxiciclina (51,2%), enquanto uma alta taxa de sensibilidade foi observada para gentamicina e ciprofloxacina (97,6% cada). Curiosamente, a resistência a múltiplas drogas foi especificada em 70,7% das cepas e mostrando 13 padrões de resistência. Com base na análise da sequência nucleotídica do gene rRNA 16s, a árvore filogenética mostrou a relação genética entre isolados de Y. enterocolitica. Esses achados destacaram o surgimento de Y. entrocolitica patogênica virulenta e multirresistente em carnes e produtos à base de carne no Egito.(AU)

Investigation of Listeria monocytogenes, Salmonella enterica and Yersinia enterocolitica in pig carcasses in Southern Brazil / Pesquisa de Listeria monocytogenes, Salmonella enterica and Yersinia enterocolitica em carcaças de suínos no sul do Brasil

The intensification of pig production and advances in the sanitary control of herds profoundly changed the profile of risk attributed to pork consumption. In the actual scenario, most microorganisms related to macroscopic lesions observed in the post mortem inspection are not transmitted by food, while foodborne bacteria of importance to consumer health do not cause macroscopic lesions. In Brazil, the "Ministério da Agricultura, Pecuária e Abastecimento" requested a scientific opinion on the prioritizing of pathogens potentially transmitted by unprocessed pork. After conducting a qualitative risk assessment, only Salmonella enterica was classified as of high risk to consumers. The present study was part of the validation step of the risk assessment and aimed to investigate the frequency of S. enterica, Yersinia enterocolitica and Listeria monocytogenes and hygienic-sanitary indicators in pig carcasses of pigs rose under intensive production and slaughtered under the Federal Inspection System in three slaughterhouses located in Southern Brazil. Additionally, the antimicrobial resistance profile of the isolated pathogens was also investigated. A total of 378 carcasses were sampled by superficial sponges before the chilling step in three slaughterhouses. Samples were investigated for the presence of the three aforementioned pathogens and subjected to enumeration of Colony Formation Units (log CFU.cm-1) of total aerobic mesophiles (TAM) and Enterobacteriaceae. Salmonella strains were tested by disc diffusion test for resistance to eleven antimicrobials. There were significantly statistical differences (p<0.0001) on the median counts of both indicators between the slaughterhouses. The median of TAM was very close for Slaughterhouses A and B: 1.573 log CFU.cm-1 and 1.6014 log CFU.cm-1, respectively. While in Slaughterhouse C, a higher TAM median was detected (2.216 log CFU.cm-1). A similar profile was observed regarding to Enterobacteriaceae, and medians were calculated as follow: -0.426 log CFU.cm-1 in Slaughterhouse A; 0.2163 log CFU.cm-1 in B; and 0.633 log CFU.cm-1 in C. Regarding the pathogens investigated, L. monocytogenes was not detected and only one carcass from Slaughterhouse C was positive for Y. enterocolitica. Thus, the results suggest a very low prevalence of L. monocytogenes and Y. enterocolitica in the sampled population. A total of 65 (17.2%) carcasses were positive for S. enterica, with a difference in frequencies between slaughterhouses and slaughter days. The prevalence of Salmonella positive carcasses was higher in the Slaughterhouse C (25.4%; CI 95% 19-32%) in comparison with A (9.5%; CI 95% 9-14%) and B (18.3%; CI 95% 12-24%). There was no significantly statistical association between Enterobacteriaceae counts and Salmonella isolation on carcass surface (p=0.69). The slaughtering day, nested within the slaughterhouse, explains 31.3% of Salmonella prevalence variability. S. Typhimurium (38.1%) was the most prevalent, followed by S. Infantis (30.1%). Among the 61 Salmonella strains tested for resistance to antimicrobials, 18 (31.6%) were full-susceptible. No strain displayed resistance to azithromycin, ceftazidime, cefotaxime and meropenem. The highest resistance frequency was displayed to tetracycline (54.1%), followed by ampicillin (50.82%), nalidixic acid (42.62%) and chloramphenicol (42.62). Multi-resistance was detected in 52.54% of the, strains. In conclusion, S. enterica is more prevalent in pre-chill pig carcasses than Y. enterocolitica and L. monocytogenes and thus should be prioritized in monitoring and control programs at slaughter. Salmonella serovars varied among slaughterhouses and present significant differences in their resistance to antimicrobials. Slaughterhouses that present higher medians of TAM or Enterobacteriaceae in a monitoring period may have higher S. enterica prevalences as well. However, there is a high variation of S. enterica prevalence among slaughter days, which cannot be always related to the hygienic indicators counts observed on a given day.(AU)

A intensificação da produção de suínos e os avanços no controle sanitário dos rebanhos alterou de forma importante o perfil de risco do consumo de carne suína. No cenário atual, a maioria dos microrganismos causadores de lesões macroscópicas detectáveis na inspeção post mortem não são transmissíveis por alimentos, enquanto bactérias de importância como causadoras de doenças transmitidas por alimentos não causam lesões macroscópicas. No Brasil, o Ministério da Agricultura, Pecuária e Abastecimento solicitou uma opinião científica sobre a priorização de patógenos potencialmente transmitidos pela carne suína in natura. Após conduzir uma avaliação de risco qualitativa, apenas Salmonella enterica foi classificada como de alto risco para o consumidor. O presente estudo foi parte da etapa de validação da avaliação de risco e objetivou: investigar a frequência de S. enterica, Yersinia enterocolitica e Listeria. monocytogenes; e enumerar indicadores higiênico-sanitários em carcaças de suínos abatidos sob inspeção federal em frigoríficos dedicados ao abate de suínos sob sistema intensivo de criação no sul do Brasil. Além disso, o perfil de resistência a antimicrobianos dos patógenos isolados foi investigado. A superfície de um total de 378 carcaças foi amostrada por esponjas, na etapa de pré-resfriamento em três matadouros frigoríficos (A, B, C). As amostras foram investigadas quanto à presença dos três patógenos acima mencionados e quanto à enumeração de Unidades Formadoras de Colônia (log UFC.cm-1) de mesófilos aeróbios totais (MAT) e Enterobacteriaceae. As cepas isoladas de Salmonella foram testadas quanto à resistência a onze antimicrobianos pela técnica de disco difusão. As medianas de contagem de ambos os indicadores apresentaram diferença significativa (p<0,0001) entre matadouros-frigoríficos. A mediana de MAT foi bastante próxima para A e B (1,573 log UFC.cm-1 e 1,6014 log UFC.cm-1, respectivamente), enquanto em C uma mediana de MAT mais elevada foi determinada (2,216 log CFU.cm-1). Um perfil semelhante foi observado em relação a Enterobacteriaceae, sendo as medianas calculadas para A, B e C, respectivamente: -0,426 log CFU.cm-1; 0,2163 log UFC.cm-1; e 0,633 log UFC.cm-1. Em relação aos patógenos investigados, L. monocytogenes não foi detectada e apenas uma carcaça, do Matadouro C, foi positiva para Y. enterocolitica. Portanto, os resultados sugerem uma prevalência muito baixa desses patógenos na população amostrada. Em um total de 65 (17,2%) carcaças houve isolamento de S. enterica, com diferença nas frequências observadas entre matadouros e dias de abate. A prevalência de carcaças positivas para S. enterica foi maior no Matadouro C (25,4%; IC95% 19-32%) em comparação com A (9,5%; IC95% 9-14%) e B (18,3%; IC95% 12-24%). Não houve associação estatística entre o número de Enterobacteriaceae e o isolamento de S. enterica na superfície das carcaças (p=0,69). O dia de abate agrupado por frigorífico explica 31,3% da variação na prevalência de Salmonella. O sorovar mais frequente de S. enterica foi Typhimurium (38,1%) seguido de S. Infantis (30,1%). Entre as 61 cepas de S. enterica testadas quanto à resistência a antimicrobianos, 18 (31,6%) foram totalmente suscetíveis aos antimicrobianos testados. Nenhuma cepa apresentou resistência a azitromicina, ceftazidima, cefotaxima e meropenem. As maiores frequências de resistência foram demonstradas contra tetraciclina (54,1%), ampicilina (50,8%), ácido nalidíxico (42,62%) e cloranfenicol (42,62%). Em 52,54% das cepas foi detectada multi-resistência. Em conclusão, S. enterica é mais prevalente em carcaças suínas no pré-resfriamento do que Y. enterocolitica e L. monocytogenes. Portanto, S. enterica deve ser priorizada em programas de monitoramento e controle ao abate. Os sorovares de Salmonella variam entre matadouros e apresentam diferenças significativas na resistência a antimicrobianos. Matadouros de suínos que apresentam medianas de MAT e Enterobacteriaceae num período de monitoramento podem apresentar também prevalências mais de altas de presença de S. enterica. Entretanto, há uma alta variabilidade na frequência de S. enterica entre dias de abate, e nem sempre há relação entre essa frequência e a contagem de indicadores higiênico-sanitários determinados num determinado dia.(AU)

Virulence genotyping and antimicrobial resistance profiles of Yersinia enterocolitica isolated from meat and meat products in Egypt

Abstract Pathogenic Yersinia enterocolitica (Y. enterocolitica) is one of the food-borne entero-pathogen responsible for yersiniosis in humans. The purpose of this research was to survey the prevalence, virulence-associated genes, and antimicrobial resistance of Y. enterocolitica isolated from meat and meat product samples in Egypt. Forty-one (5.9%) out of 700- samples of chicken meat, beef, ground beef, and sausage were positive Y. enterocolitica with a high prevalence in chicken meat (12%). Five virulence genes (ail, inv, ystA, ystB, and yadA) were characterized among 41 Y. enterocolitica isolates with variable frequencies. Among the strains tested, the ystB gene was detected with a high percentage (78.1%), followed by inv gene (70.7%), ail gene (14.6%), ystA gene (12.2%), and yadA gene (2.4%). A high resistance rate was estimated to amoxicillin-clavulanic acid (100%), followed by cefazolin (95%), ampicillin (65.9%), and doxycycline (51.2%), whilst a high sensitivity rate was observed to gentamicin and ciprofloxacin (97.6% each). Interestingly, the multidrug resistance was specified in the 70.7% of strains and showing 13 resistance patterns. Based on nucleotide sequence analysis of the 16s rRNA gene, the phylogenetic tree showed the genetic relatedness amongst Y. enterocolitica isolates. These findings highlighted the emergence of virulent and multidrug-resistant pathogenic Y. entrocolitica in retailed meat and meat products in Egypt.

Resumo A Yersinia enterocolitica patogênica (Y. enterocolitica) é um dos enteropatógenos de origem alimentar responsáveis pela yersiniose no ser humano. O objetivo desta pesquisa foi avaliar a prevalência, genes associados à virulência e resistência antimicrobiana de Y. enterocolitica isolada de amostras de carne e produtos à base de carne no Egito. Quarenta e um (5,9%) de 700 amostras de carne de frango, carne bovina, moída e linguiça foram Y. enterocolitica positivas, com alta prevalência em carne de frango (12%). Cinco genes de virulência (ail, inv, ystA, ystB e yadA) foram caracterizados entre 41 isolados de Y. enterocolitica com frequências variáveis. Entre as cepas testadas, o gene ystB foi detectado com uma alta porcentagem (78,1%), seguido pelo gene inv (70,7%), ail genes (14,6%), gene ystA (12,2%) e gene yadA (2,4%). Foi estimada uma alta taxa de resistência ao ácido amoxicilina-clavulânico (100%), seguida de cefazolina (95%), ampicilina (65,9%) e doxiciclina (51,2%), enquanto uma alta taxa de sensibilidade foi observada para gentamicina e ciprofloxacina (97,6% cada). Curiosamente, a resistência a múltiplas drogas foi especificada em 70,7% das cepas e mostrando 13 padrões de resistência. Com base na análise da sequência nucleotídica do gene rRNA 16s, a árvore filogenética mostrou a relação genética entre isolados de Y. enterocolitica. Esses achados destacaram o surgimento de Y. entrocolitica patogênica virulenta e multirresistente em carnes e produtos à base de carne no Egito.

Investigation of Listeria monocytogenes, Salmonella enterica and Yersinia enterocolitica in pig carcasses in Southern Brazil / Pesquisa de Listeria monocytogenes, Salmonella enterica and Yersinia enterocolitica em carcaças de suínos no sul do Brasil

The intensification of pig production and advances in the sanitary control of herds profoundly changed the profile of risk attributed to pork consumption. In the actual scenario, most microorganisms related to macroscopic lesions observed in the post mortem inspection are not transmitted by food, while foodborne bacteria of importance to consumer health do not cause macroscopic lesions. In Brazil, the "Ministério da Agricultura, Pecuária e Abastecimento" requested a scientific opinion on the prioritizing of pathogens potentially transmitted by unprocessed pork. After conducting a qualitative risk assessment, only Salmonella enterica was classified as of high risk to consumers. The present study was part of the validation step of the risk assessment and aimed to investigate the frequency of S. enterica, Yersinia enterocolitica and Listeria monocytogenes and hygienic-sanitary indicators in pig carcasses of pigs rose under intensive production and slaughtered under the Federal Inspection System in three slaughterhouses located in Southern Brazil. Additionally, the antimicrobial resistance profile of the isolated pathogens was also investigated. A total of 378 carcasses were sampled by superficial sponges before the chilling step in three slaughterhouses. Samples were investigated for the presence of the three aforementioned pathogens and subjected to enumeration of Colony Formation Units (log CFU.cm-1) of total aerobic mesophiles (TAM) and Enterobacteriaceae. Salmonella strains were tested by disc diffusion test for resistance to eleven antimicrobials. There were significantly statistical differences (p<0.0001) on the median counts of both indicators between the slaughterhouses. The median of TAM was very close for Slaughterhouses A and B: 1.573 log CFU.cm-1 and 1.6014 log CFU.cm-1, respectively. While in Slaughterhouse C, a higher TAM median was detected (2.216 log CFU.cm-1)...(AU)

A intensificação da produção de suínos e os avanços no controle sanitário dos rebanhos alterou de forma importante o perfil de risco do consumo de carne suína. No cenário atual, a maioria dos microrganismos causadores de lesões macroscópicas detectáveis na inspeção post mortem não são transmissíveis por alimentos, enquanto bactérias de importância como causadoras de doenças transmitidas por alimentos não causam lesões macroscópicas. No Brasil, o Ministério da Agricultura, Pecuária e Abastecimento solicitou uma opinião científica sobre a priorização de patógenos potencialmente transmitidos pela carne suína in natura. Após conduzir uma avaliação de risco qualitativa, apenas Salmonella enterica foi classificada como de alto risco para o consumidor. O presente estudo foi parte da etapa de validação da avaliação de risco e objetivou: investigar a frequência de S. enterica, Yersinia enterocolitica e Listeria. monocytogenes; e enumerar indicadores higiênico-sanitários em carcaças de suínos abatidos sob inspeção federal em frigoríficos dedicados ao abate de suínos sob sistema intensivo de criação no sul do Brasil. Além disso, o perfil de resistência a antimicrobianos dos patógenos isolados foi investigado. A superfície de um total de 378 carcaças foi amostrada por esponjas, na etapa de pré-resfriamento em três matadouros frigoríficos (A, B, C). As amostras foram investigadas quanto à presença dos três patógenos acima mencionados e quanto à enumeração de Unidades Formadoras de Colônia (log UFC.cm-1) de mesófilos aeróbios totais (MAT) e Enterobacteriaceae. As cepas isoladas de Salmonella foram testadas quanto à resistência a onze antimicrobianos pela técnica de disco difusão. As medianas de contagem de ambos os indicadores apresentaram diferença significativa (p<0,0001) entre matadouros-frigoríficos. A mediana de MAT foi bastante próxima para A e B (1,573 log UFC.cm-1 e 1,6014 log UFC.cm-1, respectivamente),...(AU)

Queijo artesanal produzido no sul do Rio Grande do Sul: avaliação físico-química, microbiológica e suscetibilidade a antimicrobianos de isolados de Staphylococcus coagulase positiva / Artisanal cheese produced in the south of Rio Grande do Sul: physical-chemical, microbiological assessment and susceptibility of antimicrobials from Staphylococcus coagulase positive isolates

Objetivando o conhecimento do queijo colonial artesanal produzido na região Sul do Rio Grande do Sul, foram analisadas 30 amostras adquiridas no comércio local e feiras quanto às características físico-químicas, além das análises microbiológicas exigidas pela Agência Nacional de Vigilância Sanitária (ANVISA), isolamento de Yersinia enterocolitica e resistência aos antimicrobianos de isolados de Staphylococcus coagulase positiva, obtidos a partir destas amostras. Os valores medianos resultantes das análises físico-químicas foram: pH 5,81, acidez titulável de 0,44 g de ácido lático/100g, umidade de 48,55%, atividade de água de 0,973, proteína de 19,36%, gordura de 14,54%, teor de cinzas de 2,88% e teor de cloretos 0,51 gNaCl/100g. Quanto às análises exigidas pela ANVISA, 86,66% das amostras estavam fora dos padrões exigidos e nenhuma foi positiva para Salmonella e Listeria monocytogenes. Houve também isolamento de Yersinia enterocolitica em 3,33% das amostras. A maior taxa de resistência dos isolados de Staphylococcus coagulase positiva ocorreu frente à Penicilina G com 100% dos isolados resistentes e a menor contra Ciprofloxacina com nenhum isolado resistente. 65,00% dos isolados foram resistentes a, pelo menos, seis antimicrobianos e 86,95% demostraram resistência à Cefoxitina, resultados preocupantes, especialmente quanto aos isolados Meticilina Resistentes. Além disso, o queijo produzido e comercializado informalmente no Sul do Rio Grande do Sul apresenta grande variação nas características físico-químicas e, em geral, alta contaminação microbiana, podendo representar risco à saúde do consumidor.(AU)

Aiming the knowledge of the artisanal colonial cheese produced in the south of the Rio Grande do Sul, were analyzed 30 samples purchased in the local trade and fairs for physicochemical characteristics, the microbiological analyzes required by the National Agency of Sanitary Surveillance (ANVISA), Yersinia enterocolitica isolation and antimicrobial resistance of Staphylococcus coagulase positive isolates obtained from these samples. The median values resulting from the physicochemical analyzes were, pH 5,86, titratable acidity of 0,49 g of lactic acid/100 g, humidity of 49,12%, water activity of 0,973, protein of 19,14%, fat of 14,71% Ash content of 2,93% and chloride content 0,63 gNaCl/100g. Regarding the analysis required by ANVISA 86,66% of the samples were outside the required standards and no samples were positive for Salmonella and Listeria monocytogenes, there was also isolation to isolate Yersinia enterocolitica from 3,33% of the samples. The highest resistance rate of the isolates of Staphylococcus coagulase positive was compared to Penicillin G with 100% of the resistant isolates, and the lowest against Ciprofloxacin with no resistant isolates. 65.00% of the isolates were resistant to at least six antimicrobials and 86,95% demonstrated resistance to Cefoxitin, a troubling result, especially in Methicillin Resistant isolates. The cheese produced and marketed informally in South of Rio Grande do Sul presents a great variation in the physicochemical characteristics and in general high microbial contamination wich may represent a risk to consumer health.(AU)

Queijo artesanal produzido no sul do Rio Grande do Sul: avaliação físico-química, microbiológica e suscetibilidade a antimicrobianos de isolados de Staphylococcus coagulase positiva / Artisanal cheese produced in the south of Rio Grande do Sul: physical-chemical, microbiological assessment and susceptibility of antimicrobials from Staphylococcus coagulase positive isolates

Objetivando o conhecimento do queijo colonial artesanal produzido na região Sul do Rio Grande do Sul, foram analisadas 30 amostras adquiridas no comércio local e feiras quanto às características físico-químicas, além das análises microbiológicas exigidas pela Agência Nacional de Vigilância Sanitária (ANVISA), isolamento de Yersinia enterocolitica e resistência aos antimicrobianos de isolados de Staphylococcus coagulase positiva, obtidos a partir destas amostras. Os valores medianos resultantes das análises físico-químicas foram: pH 5,81, acidez titulável de 0,44 g de ácido lático/100g, umidade de 48,55%, atividade de água de 0,973, proteína de 19,36%, gordura de 14,54%, teor de cinzas de 2,88% e teor de cloretos 0,51 gNaCl/100g. Quanto às análises exigidas pela ANVISA, 86,66% das amostras estavam fora dos padrões exigidos e nenhuma foi positiva para Salmonella e Listeria monocytogenes. Houve também isolamento de Yersinia enterocolitica em 3,33% das amostras. A maior taxa de resistência dos isolados de Staphylococcus coagulase positiva ocorreu frente à Penicilina G com 100% dos isolados resistentes e a menor contra Ciprofloxacina com nenhum isolado resistente. 65,00% dos isolados foram resistentes a, pelo menos, seis antimicrobianos e 86,95% demostraram resistência à Cefoxitina, resultados preocupantes, especialmente quanto aos isolados Meticilina Resistentes. Além disso, o queijo produzido e comercializado informalmente no Sul do Rio Grande do Sul apresenta grande variação nas características físico-químicas e, em geral, alta contaminação microbiana, podendo representar risco à saúde do consumidor.

Aiming the knowledge of the artisanal colonial cheese produced in the south of the Rio Grande do Sul, were analyzed 30 samples purchased in the local trade and fairs for physicochemical characteristics, the microbiological analyzes required by the National Agency of Sanitary Surveillance (ANVISA), Yersinia enterocolitica isolation and antimicrobial resistance of Staphylococcus coagulase positive isolates obtained from these samples. The median values resulting from the physicochemical analyzes were, pH 5,86, titratable acidity of 0,49 g of lactic acid/100 g, humidity of 49,12%, water activity of 0,973, protein of 19,14%, fat of 14,71% Ash content of 2,93% and chloride content 0,63 gNaCl/100g. Regarding the analysis required by ANVISA 86,66% of the samples were outside the required standards and no samples were positive for Salmonella and Listeria monocytogenes, there was also isolation to isolate Yersinia enterocolitica from 3,33% of the samples. The highest resistance rate of the isolates of Staphylococcus coagulase positive was compared to Penicillin G with 100% of the resistant isolates, and the lowest against Ciprofloxacin with no resistant isolates. 65.00% of the isolates were resistant to at least six antimicrobials and 86,95% demonstrated resistance to Cefoxitin, a troubling result, especially in Methicillin Resistant isolates. The cheese produced and marketed informally in South of Rio Grande do Sul presents a great variation in the physicochemical characteristics and in general high microbial contamination wich may represent a risk to consumer health.

Virulence genotyping and antimicrobial resistance profiles of Yersinia enterocolitica isolated from meat and meat products in Egypt

Abstract Pathogenic Yersinia enterocolitica (Y. enterocolitica) is one of the food-borne entero-pathogen responsible for yersiniosis in humans. The purpose of this research was to survey the prevalence, virulence-associated genes, and antimicrobial resistance of Y. enterocolitica isolated from meat and meat product samples in Egypt. Forty-one (5.9%) out of 700- samples of chicken meat, beef, ground beef, and sausage were positive Y. enterocolitica with a high prevalence in chicken meat (12%). Five virulence genes (ail, inv, ystA, ystB, and yadA) were characterized among 41 Y. enterocolitica isolates with variable frequencies. Among the strains tested, the ystB gene was detected with a high percentage (78.1%), followed by inv gene (70.7%), ail gene (14.6%), ystA gene (12.2%), and yadA gene (2.4%). A high resistance rate was estimated to amoxicillin-clavulanic acid (100%), followed by cefazolin (95%), ampicillin (65.9%), and doxycycline (51.2%), whilst a high sensitivity rate was observed to gentamicin and ciprofloxacin (97.6% each). Interestingly, the multidrug resistance was specified in the 70.7% of strains and showing 13 resistance patterns. Based on nucleotide sequence analysis of the 16s rRNA gene, the phylogenetic tree showed the genetic relatedness amongst Y. enterocolitica isolates. These findings highlighted the emergence of virulent and multidrug-resistant pathogenic Y. entrocolitica in retailed meat and meat products in Egypt.

Resumo A Yersinia enterocolitica patogênica (Y. enterocolitica) é um dos enteropatógenos de origem alimentar responsáveis pela yersiniose no ser humano. O objetivo desta pesquisa foi avaliar a prevalência, genes associados à virulência e resistência antimicrobiana de Y. enterocolitica isolada de amostras de carne e produtos à base de carne no Egito. Quarenta e um (5,9%) de 700 amostras de carne de frango, carne bovina, moída e linguiça foram Y. enterocolitica positivas, com alta prevalência em carne de frango (12%). Cinco genes de virulência (ail, inv, ystA, ystB e yadA) foram caracterizados entre 41 isolados de Y. enterocolitica com frequências variáveis. Entre as cepas testadas, o gene ystB foi detectado com uma alta porcentagem (78,1%), seguido pelo gene inv (70,7%), ail genes (14,6%), gene ystA (12,2%) e gene yadA (2,4%). Foi estimada uma alta taxa de resistência ao ácido amoxicilina-clavulânico (100%), seguida de cefazolina (95%), ampicilina (65,9%) e doxiciclina (51,2%), enquanto uma alta taxa de sensibilidade foi observada para gentamicina e ciprofloxacina (97,6% cada). Curiosamente, a resistência a múltiplas drogas foi especificada em 70,7% das cepas e mostrando 13 padrões de resistência. Com base na análise da sequência nucleotídica do gene rRNA 16s, a árvore filogenética mostrou a relação genética entre isolados de Y. enterocolitica. Esses achados destacaram o surgimento de Y. entrocolitica patogênica virulenta e multirresistente em carnes e produtos à base de carne no Egito.

Bactérias patogênicas importantes em saúde única isoladas de animais 18 silvestres e animais domésticos: similaridade molecular, formação de biofilme 19 e resistência a antimicrobianos

Dados sobre animais silvestres portadores e disseminadores de patógenos 11 bacterianos são escassos pela dificuldade de se obter amostras, sendo necessários 12 mais levantamentos para determinação da importância das bactérias veiculadas por 13 estes animais em saúde única. Nesta tese, objetivou-se determinar a ocorrência 14 destas bactérias no trato gastrintestinal de aves silvestres de vida livre e animais 15 domésticos da mesma propriedade, animais silvestres em reabilitação e morcegos 16 que habitam construções humanas bem como analisar algumas características dos 17 isolados. No primeiro estudo, foram coletadas amostras das fezes de aves silvestres 18 de vida livre e de até cinco exemplares de cada espécie doméstica em uma 19 propriedade pluriativa. No segundo, foram coletadas amostras de animais recebidos 20 em um centro de reabilitação da fauna silvestre. No terceiro, foram amostrados 21 morcegos de diferentes abrigos em construções humanas no extremo sul do Brasil. 22 Foram realizadas as pesquisas de S. aureus, Y. enterocolitica, Salmonella e 23 Campylobacter (apenas dos animais em reabilitação), por técnicas microbiológicas 24 convencionais seguidas de confirmação por PCR, teste de resistência à cefoxitina dos 25 isolados S. aureus, formação de biofilme (S. aureus isolados dos animais em 26 reabilitação), pesquisa de genes enterotoxigênicos (S. aureus isolados de animais das 27 propriedades) e comparação dos perfis moleculares (isolados S. aureus obtidos das 28 propriedades e dos morcegos e Y. enterocolitica obtidas de morcegos) por rep-PCR. 29 O percentual total de amostras das quais foi obtido algum isolado foi 13,2 % (93/703). 30 S. aureus estava presente em 7,5 % (12/160) dos animais domésticos e em 11,4 % 31 (62/543) dos animais silvestres. S. aureus resistente à meticilina (MRSA) foi isolado 32 de 3,7% (6/160) dos animais domésticos e de 8,8 % (48/543) dos animais silvestres. 33 Já Y. enterocolitica foi isolada de 2,4 % (17/703) dos animais, Salmonella de 0,3 % 34 (2/703) e Campylobacter de 0,3 % (1/324). Dos S. aureus obtidos dos animais das 35 propriedades 35,3% (6/17) possuíam algum gene enterotoxigênico. De 40 isolados 36 obtidos de animais silvestres em reabilitação identificados como S. aureus, 72,5% 37 foram capazes de formar biofilme. Foram encontrados isolados indistinguíveis e 38 intimamente relacionados em animais domésticos e silvestres na mesma propriedade. 39 Cepas indistinguíveis pela rep-PCR também indicaram que há transmissão intra e 40 interespecífica de S. aureus entre os morcegos e entre os abrigos. Os resultados 41 destacam o importante papel dos animais silvestres na perpetuação e transmissão de 42 bactérias patogênicas, especialmente S. aureus, incluindo MRSA. Considerando-se a 43 variedade de espécies, que podem ser portadoras destas bactérias torna-se 44 necessário que medidas higiênico-sanitárias sejam adotadas, a fim de minimizar a 45 possibilidade de transmissão desses microrganismos e de diminuir o risco de infecção.

Data on wild animals carrying and spreading bacterial pathogens are scarce 12 due to the difficulty of obtaining samples, and further surveys are necessary to 13 determine the importance of the bacteria transmitted by these animals in public health. 14 In this thesis, the objective was to determine the occurrence of these bacteria in the 15 gastrointestinal tract of free-living wild birds and domestic animals of the same farm, 16 wild animals in rehabilitation and bats that inhabit building as well as to analyze some 17 characteristics of the isolates. In the first study, samples of free-living wild birds feces 18 and up to five specimens of each domestic species were collected on a pluriactive 19 farm. In the second, samples of animals received at a wildlife rehabilitation center were 20 collected. In the third, bats from different roosts were sampled in buildings in the 21 extreme south of Brazil. Investigation were carried out for S. aureus, Y. enterocolirtica, 22 Salmonella and Campylobacter (only for animals undergoing rehabilitation), by 23 conventional microbiological techniques followed by PCR confirmation, resistance test 24 to cefoxitin from S. aureus isolates, biofilm formation (S aureus isolated from animals 25 under rehabilitation), search for enterotoxigenic genes (S. aureus isolated from animal 26 of the farms) and comparison of the molecular profiles (isolates S. aureus obtained 27 from the farms and bats and Y. enterocolitica obtained from bats) by rep- PCR. The 28 total percentage of samples from which some isolate was obtained was 13.2% 29 (93/703). S. aureus was present in 7.5% (12/160) of domestic animals and in 11.4% 30 (62/543) of wild animals. Methicillin-resistant S. aureus (MRSA) was isolated from 31 3.7% (6/160) of domestic animals and 8.8% (48/543) from wild animals. Y. 32 enterocolitica was isolated from 2.4% (17/703) of the animals, Salmonella from 0.3% 33 (2/703) and Campylobacter from 0.3% (1/324). Of the S. aureus obtained from animals 34 on the farms 35.3% (6/17) had some enterotoxigenic gene. Of 40 isolates obtained 35 from wild animals in rehabilitation identified as S. aureus, 72.5% were able to form 36 biofilm. Indistinguishable and closely related isolates were found in domestic and wild 37 animals in the same property. Strains indistinguishable by rep-PCR also indicated that 38 there is intra and interspecific transmission of S. aureus between bats and roosts. The 39 results highlight the important role of wild animals in the perpetuation and transmission 40 of pathogenic bacteria, especially S. aureus, including MRSA. Considering the variety 41 of species, which may be carriers of these bacteria, it is necessary that hygienic-42 sanitary measures be adopted, in order to minimize the possibility of transmission of 43 these microorganisms and to reduce the risk of infection.

Clonalidade e perfis de resistência a antibióticos em Yersinia enterocolitica de suínos e humanos no Brasil

Yersinia enterocolitica é um patógeno associado usualmente a produtos derivados de suínos, seu principal reservatório. Esse patógeno é frequentemente isolado em tecidos linfáticos de suínos, em especial tonsilas palatinas e linfonodos mesentéricos. Por estar intimamente associada a cadeia produtiva de suínos, Y. enterocolitica está sujeita a todos os efeitos derivados dos procedimentos de manejo usualmente aplicados aos animais, como o desenvolvimento de resistência devido a aplicação preventiva ou terapêutica de antibióticos. Em um estudo prévio de nosso grupo, Y. enterocolitica foi identificada em uma cadeia produtiva de suínos e os isolados apresentaram alta similaridade de seus perfis de macro-restrição por XbaI. Assim, esse estudo teve como objetivo avaliar a persistência de Y. enterocolitica nessa cadeia produtiva de suínos, além de verificar a similaridade e potencial clonalidade dos isolados do bio-sorotipo 4/O:3 com isolados obtidos de casos de yersiniose humana, além de seus perfis de resistência a antibióticos. Amostras de tonsilas palatinas (n = 100), palatos (n = 30) e carne de cabeça (n = 17) foram obtidas durante o abate de suínos provenientes da mesma cadeia produtiva de suínos em que o estudo prévio de nosso grupo foi conduzido; as amostras foram submetidas a pesquisa de Y. enterocolitica, e os isolados obtidos submetidos a identificação de seus bio-sorotipos, pesquisa de genes de virulência (ail, ystB, virF, myfA, ystA, ystC, fepA, fepD, fes, tccC, ymoA, hreP e sat) e resistência múltipla a antibióticos (emrD, yfhD e marC). Parte desses isolados (n = 24) e isolados obtidos no estudo anterior de nosso grupo (n = 13) foram selecionados e caracterizados quanto aos seus perfis de macro-restrição com XbaI e NotI. Entre as amostras analisadas, 14 (9,5%) foram positivas para Y. enterocolitica, e os isolados obtidos (n = 24) foram identificados como pertencentes ao bio-sorotipo 4/O:3. Todos os isolados apresentaram resultados positivos para os genes de virulência e resistência múltipla a antibióticos pesquisados. Os isolados selecionados apresentaram alta similaridade após análise de seus perfis de macro-restrição, sendo agrupados em dois clusters com 33 (similaridade entre 82,4 e 100,0%) e 4 (similaridade entre 83,3 e 100,0%) isolados. Em seguida, parte desses isolados (n = 24) e isolados de Y. enterocolitica 4/O:3 obtidos de casos de yersiniose humana (n = 3) foram submetidos a sequenciamento completo de seus genomas e análises de similaridade, além de serem caracterizados quanto aos seus perfis de resistência a antibióticos pelo método de difusão em disco (14 antibióticos). Pela análise de polimorfismo de nucleotídeo único (SNP), os isolados foram agrupados em dois grandes clados, sendo apenas um isolado (R31) no Clado A e os demais no Clado B, e um total de sete grupos clonais. As diferenças marcantes observadas no genoma do isolado R31 foram determinadas pela presença de vários genes associados a fagos, o que determinou a sua identificação como pertencente ao sorotipo O:5. Treze isolados apresentaram resistência a antibióticos de três ou mais classes, sendo caracterizados como multidroga resistentes. A análise dos genomas dos isolados permitiu a identificação de 17 genes associados a resistência a antibióticos. A maioria dos isolados apresentou resistência a cefalosporinas, porém sem a presença de genes correspondentes a esse grupo de antibiótico. O estudo permitiu identificar a persistência de Y. enterocolitica do bio-sorotipo 4/O:3 na cadeia produtiva de suínos analisada, além de uma alta similaridade genética entre isolados obtidos nessa cadeia produtiva com isolados obtidos de casos de yersiniose humana, confirmando a relevância de suínos na manutenção e transmissão desse patógeno.

Yersinia enterocolitica is a foodborne pathogen usually associated to pork products, once pigs are their main reservoirs. This pathogen is often isolated from swine lymphatic tissues, especially tonsils and mesenteric lymph-nodes. Once it is close related to swine production, Y. enterocolitica is subjected to all effects resulted from the usual handling of pigs, such as the developing of antibiotic resistance as a consequence of preventive or therapeutic use of antimicrobials. Y. enterocolitica was previously identified by our group in a swine production chain and the obtained isolates presented high matching of band profiles after macro-restriction with XbaI. Thus, this study we aimed to evaluate the persistence of Y. enterocolitica in this swine production chain, the genetic similarity and potential clonality of the bio-serotype 4/O:3 isolates from this production chain with human yersiniosis isolates and their antibiotic resistance profiles. Samples of palatine tonsils (n = 100), palates (n = 30) and head meat (n = 17) were obtained from slaughtered pigs from the same production chain included in our previous study; samples were subjected to isolation of Y. enterocolitica and the isolates subjected to identification of their bio-serotypes, research of virulence genes (ail, ystB, virF, myfA, ystA, ystC, fepA, fepD, fes, tccC, ymoA, hreP and sat) and multidrug resistance related genes (emrD, yfhD and marC). A subset of these isolates (n = 24) and isolates obtained in our previous study (n = 13) were selected and characterized based on their band profiles after macro-restriction with XbaI and NotI. Y. enterocolitica was isolated in 14 (9.5%) of the analyzed samples, and the obtained isolates (n = 24) were identified as bio-serotype 4/O:3. All isolates presented the researched virulence and multidrug resistance related genes. The selected isolates presented high band matching after macro-restriction analysis, being grouped in two clusters with 33 (82.4 to 100.0% of band matching) and 4 (83.3 to 100.0% band matching) isolates. Then, a subset of these isolates (n = 24) and Y. enterocolitica 4/O:3 isolates obtained from human yersiniosis (n = 3) were subjected to whole genome sequencing, checked for genetic similarity and antibiotic resistance through the disk diffusion assay (14 antibiotics). Based on Single Nucleotide Polymorphism (SNP) analysis, isolates were grouped in two major clades: a single isolate (R31) was included in Clade A and other in Clade B, with a total of seven clonal groups. R31 presented several phage related genes, explaining its genetic differences when compared to other isolates. Thirteen isolates were characterized as multidrug resistant, once they presented resistance to three or more antibiotic classes. Genome analysis revealed the presence of 17 antibiotic resistance related genes among Y. enterocolitica isolates, and most of the isolates presented resistance to cephalosporins, despite the absence of the related genes. We were able to demonstrate the persistence of Y. enterocolitica 4/O:3 in the studied swine production chain, despite a high genetic similarity among the obtained isolates and human yersiniosis isolates, confirming the relevance of the swine in the maintenance and transmission of this pathogen.

Similaridade genética entre cepas de micro-organismos patogênicos isolados de leitarias e de aves silvestres capturadas nestes estabelecimentos

Vacas podem entrar em contato com micro-organismos patogênicos através das mais diversas fontes, como água contaminada, alimentos, humanos e outros animais, e podem eliminar esses patógenos no leite. As aves silvestres encontram-se nos mais diversos habitats, podendo facilmente dispersar micro-organismos, sejam patogênicos ou não, no ambiente ou mesmo transmiti-los para animais domésticos e humanos, bem como podem ser contaminadas por estes. O objetivo deste estudo foi verificar a similaridade genética entre cepas patogênicas isoladas de fezes de vacas em lactação, leite destes mesmos animais, fezes de aves silvestres capturadas no entorno das propriedades leiteiras e amostras de superfície da mão dos ordenhadores. A captura das aves foi feita com redes de neblina, colocadas em locais estratégicos nas propriedades. As amostras de fezes foram obtidas através da inserção de zaragatoas estéreis no reto das vacas e na cloaca das aves capturadas. As amostras de leite foram coletadas no início da ordenha e a coleta de amostras da superfície das mãos dos ordenadores se deu durante este processo. Os microorganismos estudados foram Staphylococcus aureus, Yersinia enterocolitica, Salmonella enterica e Listeria monocytogenes. A resistência de S. aureus à meticilina foi testada. A similaridade entre os perfis moleculares dos isolados da mesma espécie foi verificada por rep-PCR. Foram feitas coletas em seis propriedades leiteiras, obtendo-se 88 amostras de fezes de vaca e o mesmo número de amostras de leite das mesmas vacas, 11 amostras de superfície de mão de ordenhador e amostras de fezes de 106 aves silvestres. S. aureus foi isolado de quatro Turdus rufiventris e de um Cyanoloxia brissonii, dos quais quatro eram MRSA. Y. enterocolitica foi isolada de dois T. rufiventris e um Columbina picui. Estes micro-organismos, inclusive MRSA, também foram isolados de fezes e leite das vacas em lactação. Não houve isolamento de Salmonella e Listeria. Em uma mesma propriedade, S. aureus isolados de fezes de um T. rufiventris e de amostras de leite e fezes de duas vacas apresentaram perfis moleculares idênticos, indicando a ocorrência de contaminação entre os animais domésticos e as aves silvestres. No caso específico de MRSA, considerando a origem da resistência desenvolvida por estas cepas, pode-se concluir que a contaminação inicial partiu de humanos ou animais domésticos para os silvestres, embora estes possam posteriormente servir de disseminadores. Os resultados ressaltam a importância do leite ser produzido com rigoroso protocolo de higiene, em salas de ordenha que não permitam o ingresso de animais estranhos ao processo, que o rebanho leiteiro seja constantemente monitorado quanto aos patógenos presentes e também que o leite sofra tratamento térmico antes do seu consumo.

Cows may come in contact with pathogenic microorganisms from a variety of sources, such as contaminated water, food, humans, and other animals, and can eliminate these pathogens in milk. Wild birds are found in the most diverse habitats and can easily disperse micro-organisms, whether pathogenic or not, into the environment or even transmit them to domestic and human animals, as well as contaminated by them. The objective of this study was to verify the genetic similarity between pathogenic strains isolated from feces of lactating cows, milk from these same animals, feces from wild birds captured around dairy farms and surface samples from the hand of milkers. The capture of the birds was done with mist nets, placed in strategic places in the properties. Fecal samples were obtained by inserting sterile swabs into the rectum of the cows and into the sewer of the captured birds. The milk samples were collected at the beginning of the milking and samples were taken from the hands surface of the computers during this process. The microorganisms studied were Staphylococcus aureus, Yersinia enterocolitica, Salmonella enterica, and Listeria monocytogenes. S. aureus resistance to methicillin was tested. The similarity between the molecular profiles of the isolates of the same species was verified by rep-PCR. Samples were collected at six dairy farms, yielding 88 cow feces samples and the same number of milk samples from the same cows, 11 milking hand surface samples and feces samples from 106 wild birds. S. aureus was isolated from four Turdus rufiventris and a Cyanoloxia brissonii, of which four were MRSA. Y. enterocolitica was isolated from two T. rufiventris and one Columbina picui. These microorganisms, including MRSA, were also isolated from feces and milk from lactating cows. There was no isolation of Salmonella and Listeria. In the same property, S. aureus isolated from feces of a T. rufiventris and samples of milk and feces from two cows presented identical molecular profiles, indicating the occurrence of contamination between the domestic animals and the wild birds. In the specific case of MRSA, considering the origin of the resistance developed by these strains, it can be concluded that the initial contamination started from humans or domestic animals to the wild, although these could later serve as disseminators. The results highlight the importance of milk being produced with a strict hygiene protocol, in milking parlors that do not allow animals to enter the process, that the dairy herd is constantly monitored for the pathogens present and also that the milk undergoes heat treatment before of its consumption.

Infecção sistêmica por Yersinia enterocolitica em chinchilas (Chinchilla laniger) / Systemic infection by Yersinia enterocolitica in chinchillas (Chinchilla laniger)

Yersinia enterocolitica é uma bactéria Gram-negativa que causa infecções em diversas espécies de mamíferos. O agente, geralmente, provoca infecções restritas ao intestino e linfonodos mesentéricos, porém a infecção pode se tornar sistêmica ocasionando lesões em outros órgãos como fígado e baço. Neste trabalho descrevem-se dois surtos de infecções sistêmicas causadas pela Yersinia enterocolitica em criatórios comerciais de chinchilas no Rio Grande do Sul (Brasil). Os proprietários relatavam que os animais acometidos apresentavam apatia, anorexia e morte. Foram encaminhados 13 animais para a realização de necropsia. No exame post mortem dos animais observou-se esplenomegalia, hepatomegalia e áreas multifocais esbranquiçadas no fígado, baço, pulmões, rins e intestino. No exame microscópico visualizou-se infiltrado inflamatório de neutrófilos e macrófagos, necrose, deposição de fibrina e ocasionalmente pode ser observado coco-bacilos no centro das áreas de necrose. No cultivo bacteriológico obteve-se o crescimento de Yersinia enterocolitica nos animais provenientes dos dois criatórios. O agente foi isolado de amostras no fígado, baço, intestino e pulmões dos animais necropsiados, além do cultivo de fezes de animais de uma das propriedades acometidas. A yersiniose, portanto, é uma patologia que deve ser investigada em casos de mortalidade de chinchilas.(AU)

Yersinia enterocolitica is a Gram-negative bacterium, which causes infections in several mammalian species. It is often recognized as an agent causing intestinal and mesenteric lymph nodes lesions. However, Yersinia enterocolitica infection may also become systemic, with lesions in others organs such as liver and spleen. This paper describes outbreaks of systemic infection due to Yersinia enterocolitica in two commercial chinchilla breeders in Rio Grande do Sul (Brazil). Owners reported that affected animals showed apathy, anorexia prior to death. Macroscopic examination performed in 13 animals revealed splenomegaly, hepatomegaly and multifocal whitish pinpoint foci in liver, spleen, lung, kidney and intestine. Microscopically, the affected tissues had infiltration of neutrophils and macrophages, as well as fibrin and necrosis with central areas containing cocobacilli bacteria. Yersinia enterocolitica was isolated from liver, spleen, lung and intestine samples from animals of both breeders, and from feces of chinchillas of one of the breeders. Therefore, yersiniosis is a disease to be investigated in cases of mortality of chinchillas.(AU)

Rastreamento da contaminação por Yersinia enterocolitica na cadeia produtiva de carne suína

A carne suína é um dos produtos de origem animal mais consumido no mundo. O Brasil tem destaque nesse cenário, já que está entre os principais países produtores de suínos e com grande potencial de exportação dos produtos derivados da carne suína, além de um grande mercado interno para ser explorado. A pesquisa de Yersinia enterocolitica é extremamente importante nessa cadeia produtiva, por estar frequentemente associada a esses animais. No homem, Y. enterocolitica causa uma gastroenterite denominada yersiniose, que se caracteriza por diarreia aguda e febre (principalmente em crianças), dor abdominal, linfadenite mesentérica aguda simulando apendicite, com complicações em alguns casos como eritema nodoso, artrite pós-infecciosa e infecção sistêmica. O objetivo desse trabalho foi realizar o rastreamento da contaminação por Y. enterocolitica na cadeia produtiva de carne suína, assim como caracterizar o potencial patogênico e perfil de resistência a antimicrobianos dos isolados. Amostras das baias e de diferentes etapas do abate de suínos e do processamento de carne suína (ambiente, carcaças, tonsilas palatinas, linfonodos mesentéricos, utensílios, equipamentos e produtos finais; n = 870) foram obtidas de duas granjas de criação de suínos em fase de terminação e de um matadouro-frigorífico localizados na região de Viçosa, Minas Gerais, Brasil. As amostras foram submetidas à detecção de Y. enterocolitica conforme ISO 10273:2003 e os isolados obtidos foram submetidos a testes fenotípicos e moleculares para identificação e sorotipagem. Os isolados identificados como Y. enterocolitica foram submetidos a macro-restrição com XbaI e eletroforese em gel de campo pulsado (PFGE), a reações de PCR para detecção de genes associados a patogenicidade, e caracterizados quanto ao seu perfil de resistência a 17 antimicrobianos, pela técnica do breakpoint e por PCR. Y. enterotocolitica foi identificado em 8 amostras, sendo cinco de tonsilas palatinas, duas de linfonodos mesentéricos e uma de carcaça suína após a sangria, das quais foram obtidos 16 isolados. Todos os isolados foram identificados como pertencentes ao bio-sorotipo 4/O:3, envolvido em vários surtos de yersiniose pelo mundo. Considerando os perfis genéticos obtidos por PFGE, os isolados apresentaram identidade entre 60% e 80%, demonstrando o alto grau de indentidade, além de identificação de tonsilas palatinas como potencial fonte de contaminação. Vários genes de virulência relevantes para a patogenicidade de Y. enterotocolitica foram detectados nos isolados. Todos os isolados apresentaram altas frequências de resistência a antimicrobianos (15 substâncias), além da presença dos genes emrD, yfhD e marC, relacionados a resistência múltipla a antimicrobianos. Os isolados apresentaram sensibilidade apenas a ciprofloxacina e kanamicina. Esse estudo demonstrou a importância dos suínos na disseminação de Y. enterotocolitica na cadeia produtiva de carne suína, ressaltando a importância do controle e monitoramento desse patógeno nas etapas iniciais da produção, que deve ser realizado com auxílio das ferramentas disponíveis atualmente, para a garantia de um alimento inócuo e de qualidade.

Pork is the main animal origin protein consumed around the world, and Brazil is one of the main world producer of swines, presenting a large potential for exportation and consumption of pork products. Yersinia enterocolitica is a relevant foodborne pathogen in pork products, once swines are reservoirs of this pathogen and work as sources of contamination in slaughterhouses. Y. enterocolitica is responsible for human yersiniosis, a gastroenteritis that causes acute diarrhea and fever (especially in children), abdominal pain, acute mesenteric lymphadenitis, mimicking appendicitis, with complications in some cases as erythema nodosum, post-infectious arthritis and septicemia. This study aimed the tracking of Y. enterocolitica contamination in the pork production chain, and to characterize the pathogenic potential and antimicrobial resistance profiles of isolates. Samples from different steps of pork production (environment, carcasses, palatine tonsils, mesenteric lymph nodes, utensils, equipment, and end products; n = 870) were obtained from two finishing pig farms and one slaughterhouse located in Viçosa region, Minas Gerais, Brazil. Samples were subjected to Y. enterocolitica detection according ISO 10273:2003, and the obtained isolates were subjected to phenotypical and molecular analysis for identification and serotyping. Y. enterocolitica isolates were subjected to XbaI macrorestriction and pulsed filed gel electrophoresis (PFGE), PCR to detect virulence related genes, and to breakpoint and PCR to characterize their antimicrobial resistance profiles against 17 substances. Y. enterocolitica was isolated in 8 samples, specifically palatine tonsils (5), mesenteric lymph nodes (2) and carcasses after bleeding (1), and 16 isolates were obtained. All isolates were identified as belonging to bio-serotype 4/O:3, associated to various yersiniosis cases and outbreaks around the world. PFGE demonstrated 60 to 80% identify indexes among isolates, and alloed the identification of palatine tonsils as relevant contamination sources in the pork production chain. The isolates presented different virulence related genes, demonstrating the pathogenic potential of Y. enterocolitica. All isolates presented high frequencies of antimicrobial resistance (to 15 substances), despite the presence of emrD, yfhD and marC, related to multi-drug resistance. Only ciprofloxacin and kanamicin were effective agains all isolates. The present study demonstrated the relevance of swines in the distribuiton of Y. enterocolitica in the pork production chain, highlighting the need for proper control of contamination and tracking of this foodborne pathogen in the initial steps of production, what must be conducted with the support for available tools to assure the quality and safety of pork products.

Aplicação da técnica de PCR na detecção de Yersinia enterocolitica em suínos abatidos sem inspeção / PCR technique application in Yersinia enterocolitica detection in non-inspected swine

Avaliou-se a contaminação de carcaças e tonsilas de suínos por Y. enterocolitica em estabelecimentos de abate não inspecionados, comparando a pesquisa microbiológica convencional com a técnica da reação em cadeia de polimerase (PCR) e o tipo de amostra analisada (de tonsila ou de carcaça), como subsídio ao monitoramento microbiano em sistemas de análise de perigos e pontos críticos de controle. Calcularam-se os custos dos dois testes. Não se detectou Y. enterocolitica pela técnica microbiológica convencional, mas, pela técnica de PCR foi possível detectar a bactéria em 40 por cento das carcaças e em 43 por cento das tonsilas, incluindo cepas patogênicas nas tonsilas. Não houve diferença entre os resultados positivos para as amostras de tonsilas e esfregaços de superfície das carcaças. A PCR apresentou-se como uma alternativa na detecção do agente e uma técnica aparentemente mais eficaz, econômica e rápida. Os resultados indicam a PCR como um importante recurso para o controle de qualidade da carne suína.(AU)

The contamination of swine carcasses and tonsils by Yersinia enterocolitica in slaughterhouses without inspection was evaluated. The conventional microbiological analysis was compared with the PCR technique of carcass or tonsil swabs, as a subsidy to the microbiological evaluation in the HACCP system. The costs of the two techniques were also calculated. Y. enterocolitica was not detected by the conventional microbiological analysis. Using the PCR, it was possible to detect this bacterium in carcass (40 percent) and tonsil (43 percent) samples. There was no difference between the positive results for the carcass and tonsil samples. The PCR showed to be a more effective, fast and economic alternative for the Y. enterocolitica detection, as compared to the conventional microbiological analysis.(AU)

ANTI-Yersinia enterocolitica SEROTYPE 3 AGGLUTININS IN SWINE SERA FROM RIO DE JANEIRO

The slow serum agglutination test was applied to 119 healthy pigs for the determination of the possible presence of anti-Yersinia enterocolitica 0:3 agglutinins. Of the 63.9% reactive animals ( FONT FACE="Symbol">³ /FONT>1:20), 8.4% presented positive titers ( FONT FACE="Symbol">³ /FONT>1:80), suggesting the presence of this pathogen among swine and consequently an additional public health problem.

Aglutininas anti-Yersinia enterocolitica 0:3 em soros de suínos do Rio de Janeiro. A pesquisa de aglutininas anti-Yersinia enterocolitica 0:3 foi realizada em 119 suínos sadios, através da prova de soro-aglutinação lenta. Dos 63,9% animais reagentes ( FONT FACE="Symbol">³ /FONT>1:20), 8,4% apresentaram títulos a nível de positivo ( FONT FACE="Symbol">³ /FONT>1:80) sugerindo a presença deste patógeno em nossos rebanhos suínos constituindo-se consequentemente em mais um problema de saúde pública.

MARCADORES DE PATOGENICIDADE EM Yersinia enterocolitica O: 3 ISOLADAS DE SUÍNOS DO RIO DE JANEIRO

Sixteen Yersinia enterocolitica serotype O:3 strains, isolated from pigs from Rio de Janeiro, have been analyzed for genetic and phenotypic markers of pathogenicity. It was observed that only 6 strains harbored the pYV (+70 kb) plasmid and one strain harbored a small cryptic plasmid of about 8.6 kb. Accordingly only strains harboring pYV were calcium dependent in the MOX medium at 370C. Twelve strains showed pesticin sensitivity and the esculin reaction was negative in 13 strains. PCR analysis of pathogenicity genes using specific primers showed the presence of the ail gene in 14 strains, the irp2 gene in one and the psaA in none. Most of the strains were resistant to ampicillin and carbenicillin, although they were susceptible to sulfazotrin and cefoxitin. For chloramphenicol, tetracycline, kanamycin, gentamicin and nalidixic acid the results varied among the strains.

Foi realizada a caracterização genotípica e fenotípica de fatores de patogenicidade em 16 amostras de Yersinia enterocolitica O:3 isoladas de suínos sadios do Rio de Janeiro. Foi observado que apenas 6 cepas possuíam o plasmídio de virulência, pYV (+ 70 kb) e apresentavam dependência ao cálcio no meio MOX a 37C. Um plasmídio críptico de cerca de 8,6 kb foi encontrado em uma cepa. Doze cepas revelaram sensibilidade à pesticina enquanto que apenas três se revelaram capazes de hidrolisar a esculina. Através de PCR com "primers" específicos, foi constatada a presença dos genes ail em 14 cepas, irp2, em 1 cepa e a ausência de psaA em todas as cepas analisadas. Quanto aos quimioterápicos, a quase totalidade das cepas mostrou-se ao mesmo tempo resistente à ampicilina e carbenicilina e sensível ao sulfazotrin e à cefoxitina. As respostas foram variadas frente ao cloranfenicol, tetraciclina, kanamicina, gentamicina e ácido nalidíxo.

Pesquisa de Yersinia enterocolitica em lingüiças frescas de porco em Porto Alegre, RS

In this study 96 samples of fresh sausage containing only pork and sold in Porto Alegre were investigated for the presence of Yersinia enterocolitica. Each sample was incubated in phosphate buffer saline at 4°C for cold-enrichment and plated onto yersinia selective agar (cefsulodin-irgasan-novobiocin agar). Y. enterocolitica could not be isolated from any of the sausage samples used in this study. Furthermore, the effectiveness of the method was tested by recoverying of Y. enterocolitica from fresh pork sausage that were artificially contaminated with different levels of inoculum. The method showed a good sensitivity but a low reproductibility in the recovery asssays. Only samples containing at least 6,3x10(4)CFU/ml resulted in good recovery patterns. Other enrichment and selective steps must be added to the method to provide a better yersinia isolation from low contaminated pork sausage.

Foram analisadas 96 amostras de lingüiça fresca preparadas unicamente com carne suína adquiridas no comércio de Porto Alegre, com o objetivo de determinar a presença de Yersinia enterocolitica. A metodologia empregada baseou-se na incubação em salina fosfatada tamponada a 4°C como enriquecimento e isolamento em ágar seletivo para yersinias (ágar cefsulodina-irgasan-novobiocina). Em nenhuma das amostras de lingüiça analisadas no presente estudo, foi encontrada a Y. enterocolitica. A mesma metodologia foi testada em ensaios de recuperação de Y. enterocolitica de amostras de lingüiça contaminadas artificialmente com diferentes inóculos da bactéria. O método apresentou boa sensibilidade, mas baixa reprodutibilidade nos ensaios de recuperação, onde apenas inóculos de 6,3x10(4)UFC/ml puderam ser sempre recuperados. A partir destes resultados, conclui-se que novas etapas de enriquecimento e seleção devem ser adicionadas à metodologia testada para garantir uma maior reprodutibilidade, principalmente em níveis de contaminação mais baixos.

Pesquisa de Yersinia enterocolitica em lingüiças frescas de porco em Porto Alegre, RS

In this study 96 samples of fresh sausage containing only pork and sold in Porto Alegre were investigated for the presence of Yersinia enterocolitica. Each sample was incubated in phosphate buffer saline at 4°C for cold-enrichment and plated onto yersinia selective agar (cefsulodin-irgasan-novobiocin agar). Y. enterocolitica could not be isolated from any of the sausage samples used in this study. Furthermore, the effectiveness of the method was tested by recoverying of Y. enterocolitica from fresh pork sausage that were artificially contaminated with different levels of inoculum. The method showed a good sensitivity but a low reproductibility in the recovery asssays. Only samples containing at least 6,3x10(4)CFU/ml resulted in good recovery patterns. Other enrichment and selective steps must be added to the method to provide a better yersinia isolation from low contaminated pork sausage.

Foram analisadas 96 amostras de lingüiça fresca preparadas unicamente com carne suína adquiridas no comércio de Porto Alegre, com o objetivo de determinar a presença de Yersinia enterocolitica. A metodologia empregada baseou-se na incubação em salina fosfatada tamponada a 4°C como enriquecimento e isolamento em ágar seletivo para yersinias (ágar cefsulodina-irgasan-novobiocina). Em nenhuma das amostras de lingüiça analisadas no presente estudo, foi encontrada a Y. enterocolitica. A mesma metodologia foi testada em ensaios de recuperação de Y. enterocolitica de amostras de lingüiça contaminadas artificialmente com diferentes inóculos da bactéria. O método apresentou boa sensibilidade, mas baixa reprodutibilidade nos ensaios de recuperação, onde apenas inóculos de 6,3x10(4)UFC/ml puderam ser sempre recuperados. A partir destes resultados, conclui-se que novas etapas de enriquecimento e seleção devem ser adicionadas à metodologia testada para garantir uma maior reprodutibilidade, principalmente em níveis de contaminação mais baixos.