The use of sugar beet pulp in pig diet to control skatole analysed by HPLC quantification method

This study aimed to determine the efficacy of a finishing diet added with sugar beet pulp to reduce backfat skatole of entire male pigs, using the optimised high-performance liquid chromatographic (HPLC) method. The study comprised 72 males Pietrain (Large White × Landrace), divided into two groups of 36 animals each. Pigs in group A (treatment) were fed a supplemented formula (addition of 10 % beet pulp). while animals in group B (control) received a commercial feed, both for a period of 14 days before slaughter. The isocratic HPLC method achieved the chromatographic separation of indolic compounds in approximately 3 min. Skatole was significantly lower ( p = 0.002) in group A, showing that beet root supplementation reduced skatole levels in pig fat. In addition, the optimised HPLC method was reliable, less time-consuming, and showed a resolution suitable for small amounts of skatole.(AU)

Dependence between behavioural acts and sperm parameters of boars of modern and local breeds of Ukraine

This study aimed to investigate the relationship between behavioural activities and sperm parameters in modern and local breeds of Ukrainian boars. Visual observations were conducted on 30 boars, aged 12 and 24 months, with five boars from each of the following breeds: Large White, Landrace, Ukrainian Meat, Pietrain, intrabreed type of Duroc breed of Ukrainian selection "Steppovyi", and the terminal line "Maxter". Behaviours such as rest, movement, feed, and water intake during 24 hours were recorded. Semen samples were manually collected from each boar and evaluated for quantitative and qualitative indicators of sperm quality and fertilizing capacity according to the "Instructions for Artificial Insemination of Pigs", which included parameters such as ejaculate volume, sperm concentration in the ejaculate, percentage of correctly motile spermatozoa, survival of spermatozoa, and fertilizing ability of boars. The study found that certain behavioural activities significantly influenced the qualitative and quantitative indicators of sperm parameters in boars of different breeds. Specifically, time spent on rest and movement, as well as the index of movement activity (at 12 months of age), significantly (P < 0.05) influenced ejaculate volume, sperm concentration, and the percentage of correctly motile spermatozoa. Moreover, the effect of these behavioural acts on ejaculate volume had a curvilinear character. On the other hand, the survival of spermatozoa and fertilizing ability of boars were mainly determined by their time spent on feed and water intake (at 24 months of age), and the relationship detected in this case was asymptotic.

Criopreservação do sêmen suíno: desafios a serem superados que auxiliam a identificação de espermatozoides mais férteis / Boar semen cryopreservation: challenges to be overcome that help the identification of more fertile spermatozoa

A criopreservação é o melhor método de armazenamento de sêmen por período indeterminado, conferindo alta flexibilidade de uso. Além disso, é o principal meio para formação de banco de germoplasma. No entanto, congelar sêmen suíno ainda é um desafio a ser enfrentado. Isso porquê, além das características de membrana espermática que ocasionam maiores efeitos deletérios às células durante os processos de congelação e descongelação, ainda é preciso lidar com a grande variabilidade de resultados, seja entre indivíduos, ejaculados de um mesmo indivíduo ou ainda, frações de um mesmo ejaculado. Frente a isso, diferentes estratégias têm sido investigadas a fim de obter melhores resultados e assim, aumentar a aplicabilidade do sêmen congelado suíno a nível comercial. Além disso, acreditamos que haja a possibilidade de se relacionar a capacidade de criotolerância de um determinado espermatozoide a sua maior ou menor capacidade de fertilizar o oócito.(AU)

Cryopreservation is the best method of storing semen indefinitely, providing high flexibility of use. In addition, it is the primary means for forming a germplasm bank. However, freezing boar semen is still a challenge to be faced because, in addition to the characteristics of the spermatic membrane that cause deleterious effects to the cells during the freezing and thawing processes, it is still necessary to deal with the significant variability of results, whether between individuals, ejaculates from the same individual or even fractions of an even ejaculated. Because of this, different strategies have been investigated to obtain better results and thus increase the applicability of frozen boar semen at a commercial level. Furthermore, we believe it is possible to relate the cryotolerance capacity of a given sperm to its greater or lesser capacity to fertilize the oocyte.(AU)

Cooling of porcine semen in an extender supplemented with isoespintanol / Resfriamento de sêmen suíno em um diluente suplementado com isoespintanol

ABSTRACT: Spermatozoa experience oxidative, osmotic, chemical, and thermal stresses when cooled, which degrade the quality and fertilizing capacity of the cells. Adding antioxidants to the sperm extender mitigates these alterations. This study evaluated the effect of isoespintanol (ISO) on boar semen subjected to cooling. Fifteen ejaculates from five boars (Susscrofadomestica) were extended in Beltsville thawing solution (BTS) supplemented with 0 µM (control), 5 µM (ISO5), 10 µM (ISO10), 15 µM (ISO15), 20 µM (ISO20), 25 µM (ISO25), and 30 µM (ISO30) of ISO, which were then cooled for five days at 16 °C. Sperm kinetics, total motility (TM), and progressive motility (PM) were evaluated every 24 h using an IVOS computer-assisted sperm analysis (CASA) system. On day 1 and day 5 of cooling, a hypoosmotic test, spectrofluorometry, and flow cytometry were performed to evaluate the following: membrane functionality, measured as a function of hypoosmotic swelling (HOS); total antioxidant capacity (TAC); reactive oxygen species (ROS); and mitochondrial membrane potential (Δ¥M). Regression analysis and comparison of means using the Duncan test were performed. The ISO added had a slight impact on sperm motility, as evidenced by a reduction in TM at 24 h of cooling (but not prior) with the addition of 20 µM of ISO. Similarly, no effect of the ISO on the kinetics and functional integrity of the sperm membrane was observed at 96 h of cooling; however, the regression coefficients indicated that the ISO lowered the rate of decrease in sperm motility and the proportion of rapid spermatozoa relative to the concentration of ISO used. The ISO did not affect the TAC of the cooled semen; however, different concentrations of ISO lowered ROS production in the semen after 96 h of cooling. ISO also impacted the Δ¥M of the spermatozoa at 0 h of cooling, increasing the proportion of low Δ¥M cells and decreasing the proportion of high Δ¥M cells. In conclusion, ISO can reduce the loss of quality and oxidative stress occurring in boar semen during cooling and can modulate the mitochondrial activity of sperm.

RESUMO: Durante a refrigeração, os espermatozoides sofrem estresse oxidativo, osmótico, químico e térmico, que diminuem sua qualidade e afetam sua capacidade de fertilização. A adição de antioxidantes ao diluente espermático é uma alternativa para mitigar essas alterações. O objetivo desta pesquisa foi avaliar o efeito do isospintanol (ISO) na refrigeração do sêmen suíno. Quinze ejaculados de cinco varrascos (Sus scrofa domestica) foram diluídos em BTS suplementado com ISO a 0 (controle), 5 (ISO5), 10 (ISO10), 15 (ISO15), 20 (ISO20), 25 (ISO25) e 30 (ISO30) µM e foram refrigerados por cinco dias a 16 °C. A motilidade total (MT), motilidade progressiva (MP) e cinética dos espermatozóides foram avaliadas a cada 24 h com um sistema CASA IVOS. Nos dias um e cinco de refrigeração, foram avaliadas a funcionalidade da membrana, a capacidade antioxidante total (CAT), as espécies reativas de oxigênio (ROS) e o potencial de membrana mitocondrial (Δ¥M), através do teste hiposmótico (HOS), espectrofluorimetría e citometria de fluxo. Foram realizadas análises de regressão e comparação de médias, pelo teste de Duncan. A adição de ISO teve pouca influência na motilidade espermática, apresentando apenas redução na MT em 24 h de refrigeração, devido à adição de 20 µM. Da mesma forma, não foi observada influência de ISO na cinética e integridade funcional da membrana em 96 horas de refrigeração; porém, os coeficientes de regressão mostraram que ISO produziu menor taxa de diminuição da motilidade e proporção de espermatozoides rápidos dependendo da concentração utilizada. ISO não influenciou significativamente na CAT do sêmen refrigerado; entretanto, diferentes concentrações de ISO reduziram a produção de EROs a partir do sêmen após de 96 h de refrigeração. ISO também influenciou o Δ¥M dos espermatozóides em 0 h de refrigeração, com aumento das células de baixo Δ¥M e diminuição das células de alto Δ¥M. Em conclusão, o isospintanol pode reduzir a perda da qualidade e o estresse oxidativo do sêmen suíno durante a refrigeração e pode modular a atividade mitocondrial do esperma.

Supplementation of two sources of selenium at different levels in diet of boars and this effect on the seminal quality / Suplementação de duas fontes de selênio em diferentes níveis na dieta de cachaços e seu efeito sobre a qualidade seminal

The spermatic membrane is rich in polyunsaturated fatty acids, which makes it sensitive to the action of reative species of oxygen, which can damage the seminal quality of the scraps. The purpose of this study was to evaluate the effect of the supplementation of two selenium sources at different doses. Third five scraps were allocated in four groups: (INOR30) 0.30 ppm sodium selenite; (COMP30) 0.30 ppm selenium metal-amino acid; (MIXED15+15) 0.15 ppm sodium selenite + 0.15 ppm selenium metal-amino acid and (COMP15) 0.15 ppm selenium metal-amino acid. The ejaculates of the scraps were evaluated over 22 weeks, resulting in 210 samples evaluated for volume, motility, pH, presence of agglutination and morphological changes, and 140 samples for spermatic concentration. The data was analyzed with repeated measures in time in a mixed model with type of selenium supplementation, periods of evaluation (one period of two weeks + five periods of four weeks) and their interactions as fixed effects, and animal and the worker that collected the ejaculates as random effects. Results showed no difference in selenium supplementation with the sources and doses used. In this way, it was possible to verify that the metal amino acid of selenium at the dose of 0.15 ppm promotes the same effect as the diets formulated with 0.30 ppm of sodium selenite.(AU)

A membrana espermática é rica em ácidos graxos poliinsaturados, o que a torna sensível à ação de espécies reativas de oxigênio, que podem prejudicar a qualidade seminal dos cachaços. O objetivo do presente estudo foi avaliar o efeito da suplementação de duas fontes de selênio em diferentes doses. Trinta e cinco cachaços foram distribuídos em quatro grupos: (INOR30) 0,30 ppm de selenito de sódio; (COMP30) 0,30 ppm de metal-aminoácido de selênio; (MISTO15+15) 0,15 ppm de selenito de sódio + 0,15 ppm de metal-aminoácido de selênio e (COMP15) 0,15 ppm de metal-aminoácido de selênio. Os ejaculados dos cachaços foram avaliados durante 22 semanas, resultando em 210 amostras avaliadas para volume, motilidade, pH, presença de aglutinação e alterações morfológicas, e 140 amostras para concentração espermática. Os dados foram analisados com medidas repetidas no tempo em modelo misto, em que o tipo de suplementação de selênio, os períodos de avaliação (um período de duas semanas + cinco períodos de quatro semanas) e suas interações foram os efeitos fixos, e o animal e o funcionário que coletou os ejaculados foram os efeitos aleatórios. Os resultados obtidos demonstraram não haver diferença na suplementação de selênio com as fontes e doses utilizadas. Com isso, foi possível verificar que o metal-aminoácido de selênio na dose de 0,15 ppm promove o mesmo efeito das dietas formuladas com 0,30 ppm de selenito de sódio.(AU)

Incubação e conservação: efeito sobre a motilidade espermática do sêmen suíno / Incubation and conservation: effect on sperm motility of swine semen

Visando aumentar a resistência espermática ao abaixamento de temperatura, foram utilizados ejaculados de três reprodutores coletados pela técnica da mão enluvada. Após a coleta, uma alíquota de sêmen foi diluída em BTS e distribuída, em partes iguais, em cinco tratamentos que diferiam entre si quanto às temperaturas (37 e 25 °C) e aos tempos de equilíbrio (6 e 24 horas) antes da conservação a 17 °C por sete dias. Os tratamentos foram: T1: sêmen sem nenhum tempo ou temperatura de equilíbrio; T2 e T3: sêmen incubado a 37 °C por 6 e 24 horas., respectivamente; T4 e T5: sêmen incubado a 25 °C por 6 e 24 horas., respectivamente. O sêmen foi avaliado nos dias D1 a D4 e no D7 quanto ao vigor e motilidade espermática aos cinco minutos, e duas horas após reaquecimento a 37 °C. O sêmen incubado a 37 °C/24 horas apresentou valores de vigor e motilidade muito inferiores aos dos demais tratamentos (p<0,05), enquanto o sêmen submetido à temperatura de equilíbrio de 25 °C por 6 horas anteriores à diluição destacou-se ao conservar a motilidade espermática após duas horas de incubação a 37 °C (p<0,05). Concluiu-se que as diferentes temperaturas e tempos de equilíbrio utilizadas, influenciaram na conservação do sêmen. A temperatura de incubação mais elevada (37 °C) na pré-diluição, por período prolongado (24 horas), reduziu a resistência espermática ao abaixamento da temperatura. Já, a combinação temperatura/tempo de 25 °C/6 horas, favoreceu a manutenção da motilidade espermática em teste de termorresistência.

Aiming to increase the spermatic resistance to lowering of temperature, ejaculates from three boars collected through the technique of the glove hand were used. After collection, an aliquot of semen was diluted in the BTS and distributed, in equal parts, in 5 treatments that differed in terms of temperatures (37 and 25 °C) and balance period (6 and 24 hours) before conservation at 17 °C for 7 days. The treatments were: T1: semen not subjected to any time or equilibrium temperature; T2 and T3: semen incubated at 37 °C for 6 and 24 hours, respectively; T4 and T5: to semen incubated at 25 °C for 6 and 24 hours, respectively. The semen was evaluated on days D1 to D4 and on D7 for vigor and sperm motility at five minutes, and two hours after rewarming at 37 °C. The semen incubated at 37 °C/24 hours presented values of vigor and motility much lower than those of the other treatments (p<0.05, while the semen submitted to the equilibrium temperature of 25 °C for 6 hours prior to dilution stood out by conserving sperm motility after 2 hours of incubation at 37 °C (p<0.05). In conclusion, the different temperatures and times of equilibrium used influenced the semen conservation, in which a higher pre-dilution incubation temperature (37 °C) for a prolonged period (24 hours) reduced the sperm resistance to a lowering of temperature, while the combination 25 °C/6 hours favored the maintenance of sperm motility in a thermoresistance test.

Porcine circovirus 2 and 3 in wild boars in Southern Brazil / Circovírus suíno 2 e 3 em javalis no Sul do Brasil

Porcine circovirus 2 (PCV2) has a considerable economic impact on the pork industry worldwide for more than two decades. In 2016, a new circovirus, porcine circovirus 3 (PCV3), was described; since then, it has been reported to be associated with diseased or even in clinically healthy swine in several countries. Considering the importance of wild boars as reservoirs of swine pathogens and the extensive distribution of these animals in Rio Grande do Sul and throughout the national territory, we searched for PCV2 and PCV3 in twenty-six wild boars coupled with necropsy and histologic examination of the sampled animals. Using PCR, 182 tissue samples were analyzed, including the heart, kidneys, liver, lung, lymph nodes, spleen, and tonsils. PCV2 and PCV3 were detected in 57.7% (15/26) and 15.4% (4/26) of wild boars, respectively. Furthermore, co-infection with PCV2 and PCV3 was detected in one of these animals, with PCV2 or PCV3 DNA detection in multiple organs. Histological examination showed mild to moderate and multifocal lymphoplasmacytic interstitial nephritis distributed randomly throughout the renal cortex, apparently unrelated to PCV2 or PCV3 detection. The wild boar population in Brazil is extensive, indicating the presence of a larger number of swine pathogen hosts. In the present study, more than half of the wild boars harbored PCV2; and although less frequently, PCV3 was also detected. Therefore, free-living wild boars can serve as reservoirs of swine circoviruses in southern Brazil.

O circovírus suíno 2 (PCV2) tem causado impacto econômico na indústria suína em todo o mundo por mais de duas décadas. Em 2016, um novo circovírus foi descrito - circovírus suíno 3 (PCV3) - e desde então tem sido relatado em vários países associado a doenças ou mesmo suínos saudáveis. Diante da importância dos javalis como reservatórios de patógenos suínos, e da ampla distribuição desses animais no Rio Grande do Sul e em todo o território nacional, foi realizada pesquisa de PCV2 e PCV3 em vinte e seis javalis (10 fêmeas e 16 machos). Necropsia e exame histológico foram realizados. Utilizando PCR, foram analisadas 182 amostras de tecidos incluindo: coração, rins, fígado, pulmão, linfonodos, baço e tonsila. PCV2 e PCV3 foram detectados por PCR em 57,7% (15/26) e 15,4% (4/26) dos javalis, respectivamente. Um destes animais estava co-infectado por PCV2 e PCV3. O DNA do PCV2 ou PCV3 foi detectado em multiplos órgãos. No exame histológico foi observada nefrite intersticial linfoplasmocitária multifocal leve a moderada, distribuída aleatoriamente pelo córtex renal, aparentemente sem relação com a detecção de DNA viral. A população de javalis no Brasil é extensa, resultando em maior número de hospedeiros para patógenos de suínos. No presente estudo, mais da metade dos javalis capturados abrigavam PCV2 e, embora menos frequente, PCV3 também foi detectado. Os javalis de vida livre podem servir como reservatórios de circovírus suínos no sul do Brasil.

Possibilidades do uso do RNA espermático como ferramenta na suinocultura / Possibilities of using sperm's RNA as a tool in pig farming

A seleção de macho mais férteis é essencial para a suinocultura moderna, a análise do transcriptoma espermático tem se mostrado como uma ferramenta interessante para podermos escolher animais com maior potencial de fertilidade ou congelabilidade de sêmen. O objetivo da presente revisão foi caracterizar os RNA encontrados em espermatozoides suínos e apresentar possíveis finalidades de seu uso na suinocultura. Por sofrer mudanças estruturais significativas, como meiose, compactação do DNA e perda de parte do citoplasma, as linhagens celulares que dão origem aos espermatozoides também apresentam uma população singular na população RNA. Os espermatozoides carregam um transcriptoma heterogêneo, com mRNA e muitos pequenos RNA truncados e de difícil avaliação. Eventos como congelamento, capacitação e estresse térmico causam alteração nos perfis de RNA espermático. Existem RNA que podemos relacionar como marcadores moleculares para diversas funções, além disso, há muitas evidências de que o RNA espermático contribua na modulação gênica durante a fertilização e desenvolvimento embrionário inicial, tornando estes em um importante alvo para estudos futuros.

The selection of fertile males is essential for modern pig farming, the sperm transcriptome analysis has been shown to be an interesting tool to be able to choose animals with greater fertility potential or semen freezeability. The aim of this review was to characterize the RNA found in boar spermatozoa and to present possible purposes for its use in pig farming. By undergoing significant structural changes, such as meiosis, DNA compaction and loss of part of the cytoplasm, spermatic cells also have a unique population in the RNA population. Sperm carry a heterogeneous transcriptome, with mRNA and many small and truncated RNAs. Events such as freezing, capacitation and heat stress cause changes in sperm RNA profiles. There are RNAs that we can relate as molecular markers for several functions, in addition, there is evidence that sperm RNA contributes to gene modulation during fertilization and early embryonic development, making these an important target for future studies.

Criopreservação e crioprotetores na proteção do espermatozoide suíno / Cryopreservation and cryoprotectors in protection of the swine sperm

O uso de sêmen congelado apresenta menores índices de concepção e menor número de leitões nascidos por parto. Isso ocorre porque a criopreservação acarreta variações de temperatura, alteração da permeabilidade espermática e processos oxidativos, sendo que o sêmen suíno apresenta, naturalmente, baixa capacidade antioxidante e sofre estresse oxidativo. No entanto, vários crioprotetores são utilizados para diversas espécies e já é descrito o uso de colesterol, carreado com ciclodextrina, e de aminoácidos, visando a melhoria do sêmen após o descongelamento. A adição de colesterol ao sêmen, previamente à criopreservação, mantém a integridade da membrana acrossomal e retarda a capacitação espermática, feito que pode ser facilitado com o carreamento por ciclodextrina. Em paralelo, pesquisas apontam a importância do uso de aminoácidos no sêmen, que formam uma camada de proteção térmica que preserva a integridade da célula espermática, além de apresentarem função osmorregulativa. Nesse sentido, a viabilização da criopreservação do sêmen suíno favorece o melhoramento genético, minimiza a transmissão de patógenos e possibilita a formação de um banco de germoplasma. Para tanto, faz-se necessário o aprimoramento do uso de crioprotetores em uma proporção ideal, que mantenha a integridade da membrana espermática e não prejudique a capacitação espermática e a reação acrossomal, necessárias para a fecundação.

The use of frozen semen presents lower conception rates and fewer piglets born per birth. This is due to the fact that cryopreservation causes variations in temperature, changes in sperm permeability and oxidative processes, and the swine semen naturally presents low antioxidant capacity and undergoes oxidative stress. However, several cryoprotectants are used for several species, and the use of cyclodextrin and amino acid-loaded cholesterol is already described, aiming to improve the semen after thawing. The addition of cholesterol to the semen prior to cryopreservation maintains the integrity of the acrosomal membrane and slows sperm capacitation, which can be facilitated by cyclodextrin loading. In parallel, research indicates the importance of the use of amino acids in the semen, which form a layer of thermal protection that preserves the integrity of the sperm cell, in addition to presenting osmorregulatory function. In this sense, the viability of the cryopreservation of the swine semen favors the genetic improvement, minimizes the transmission of pathogens and allows the formation of a germplasm bank. Therefore, it is necessary to improve the use of cryoprotectants in an ideal proportion, which maintains the integrity of the sperm membrane and does not detract from the sperm capacitation and acrosomal reaction required for fertilization.

Criopreservação e crioprotetores na proteção do espermatozoide suíno / Cryopreservation and cryoprotectors in protection of the swine sperm

O uso de sêmen congelado apresenta menores índices de concepção e menor número de leitões nascidos por parto. Isso ocorre porque a criopreservação acarreta variações de temperatura, alteração da permeabilidade espermática e processos oxidativos, sendo que o sêmen suíno apresenta, naturalmente, baixa capacidade antioxidante e sofre estresse oxidativo. No entanto, vários crioprotetores são utilizados para diversas espécies e já é descrito o uso de colesterol, carreado com ciclodextrina, e de aminoácidos, visando a melhoria do sêmen após o descongelamento. A adição de colesterol ao sêmen, previamente à criopreservação, mantém a integridade da membrana acrossomal e retarda a capacitação espermática, feito que pode ser facilitado com o carreamento por ciclodextrina. Em paralelo, pesquisas apontam a importância do uso de aminoácidos no sêmen, que formam uma camada de proteção térmica que preserva a integridade da célula espermática, além de apresentarem função osmorregulativa. Nesse sentido, a viabilização da criopreservação do sêmen suíno favorece o melhoramento genético, minimiza a transmissão de patógenos e possibilita a formação de um banco de germoplasma. Para tanto, faz-se necessário o aprimoramento do uso de crioprotetores em uma proporção ideal, que mantenha a integridade da membrana espermática e não prejudique a capacitação espermática e a reação acrossomal, necessárias para a fecundação.(AU)

The use of frozen semen presents lower conception rates and fewer piglets born per birth. This is due to the fact that cryopreservation causes variations in temperature, changes in sperm permeability and oxidative processes, and the swine semen naturally presents low antioxidant capacity and undergoes oxidative stress. However, several cryoprotectants are used for several species, and the use of cyclodextrin and amino acid-loaded cholesterol is already described, aiming to improve the semen after thawing. The addition of cholesterol to the semen prior to cryopreservation maintains the integrity of the acrosomal membrane and slows sperm capacitation, which can be facilitated by cyclodextrin loading. In parallel, research indicates the importance of the use of amino acids in the semen, which form a layer of thermal protection that preserves the integrity of the sperm cell, in addition to presenting osmorregulatory function. In this sense, the viability of the cryopreservation of the swine semen favors the genetic improvement, minimizes the transmission of pathogens and allows the formation of a germplasm bank. Therefore, it is necessary to improve the use of cryoprotectants in an ideal proportion, which maintains the integrity of the sperm membrane and does not detract from the sperm capacitation and acrosomal reaction required for fertilization.(AU)

Desafios e estratégias para identificação de machos subférteis em rebanhos suínos / Challenges and strategies for identification of subfertile boars

A subfertilidade de reprodutores suínos pode alcançar até 15% dos machos em um plantel, gerando perdas econômicas pela menor taxa de parto e menor número de leitões nascidos totais. O uso de doses ou inseminações heterospérmicas e o elevado número de espermatozoides para compensar características espermáticas do ejaculado, dificultam o diagnóstico desses machos na rotina produtiva. Além disso, há uma baixa associação dos exames espermáticos realizados nas centrais de produção de sêmen com os resultados in vivo. Ao longo dos anos, avaliações com a implementação dos sistemas computadorizados de análise de sêmen, proteômica do plasma seminal ou célula espermática, inseminação artificial em tempo fixo e a classificação dos machos pela capacidade de preservação das doses de sêmen durante o armazenamento foram metodologias utilizadas para classificar e identificar machos subférteis. O conhecimento de estratégias para classificação dos machos quanto a fertilidade pode auxiliar na tomada de decisão dos reprodutores a serem descartados e otimização dos melhores machos, proporcionando melhorias no desempenho reprodutivo.

Boar subfertility reach up to 15% of the males in a herd, which represent economic losses due to the lower farrowing rate, and fewer total piglets born. The use of heterospermic semen doses, heterospermic inseminations and the high number of sperm cells is used to compensate sperm characteristics of the ejaculates making difficult to identify these males in the productive routine. Furthermore, there is a low association of sperm analysis performed in the boar studs with in vivo results. Over the years, with the implementation of computerized systems for semen analysis, proteomics of seminal plasma or sperm cell, fixed-time artificial insemination, and classification of boars based on capacity for semen preservation during storage, were methodologies used to classify and identify subfertile boars. The knowledge of strategies for classification of boars regarding fertility aid the decision for culling or for optimizing the best boars allow an improvement on the reproductive performance. can help in the decision-making of breeders to be discarded and those where the user should be optimized, thus providing improvements in reproductive performance.

Diferentes tipos de embalagens e qualidade do sêmen suíno criopreservado / Different types of packaging and quality of cryopreserved swine semen

Devido à alta sensibilidade do espermatozoide suíno à criopreservação, torna-se importante o estudo acerca dos danos provocados à célula, pela agressão térmica ocasionada durante este processo. Sendo assim, avaliou-se neste trabalho, a influência de diferentes embalagens, utilizadas para o armazenamento de sêmen suíno, sobre a qualidade do espermatozoide criopreservado. Foram utilizados animais híbridos, a coleta do sêmen foi feita pela técnica da mão enluvada. Foram analisados o vigor (0 a 5), a motilidade (0 a 100%), a taxa de degradação da motilidade e a integridade acrossomal. O sêmen foi congelado em palhetas de 0,5mL, criotubos de 2,0mL e macrotubos de 4 e 5mL. As amostras de sêmen suíno congelado em palhetas apresentaram os melhores resultados de vigor espermático (2,3), de motilidade (45,4%), de taxa de degradação da motilidade (56,5%) e de integridade acrossomal (60,6%), quando comparadas às amostras criopreservadas nos demais tipos de embalagens avaliadas (p<0,05). Somente para o parâmetro taxa de degradação da motilidade, o sêmen conservado em palhetas apresentou resultados similares ao conservado em macrotubo de 4mL (54,1%). Os resultados pós-descongelação indicaram que o sêmen envasado nas palhetas foi o que apresentou características condizentes com a possibilidade de serem utilizados nos protocolos de inseminação artificial, com possibilidades de bons resultados de fertilidade. Concluiu-se que embalagens que permitam uma maior velocidade de trocas de temperatura entre as células encontradas no bordo e no centro, favorecem a uma melhor qualidade do sêmen descongelado.

Due to high sensitivity of the swine spermatozoa to cryopreservation, it is important to study the damage caused to the cell by thermal aggression during this process. Thus, this study evaluated the influence of different packages used for the storage of swine semen on the quality of cryopreserved spermatozoa. Hybrid animals were used, and semen collection was made by the gloved hand technique. The vigor (0 the 5), motility (0 the 100%), rate of motility degradation and acrosome integrity were analyzed. The semen was frozen in straws of 0.5mL, cryotubes of 2.0mL and macrotubes of 4 and 5mL. The swine semen samples frozen in straws showed the best results in sperm vigor (2.3), motility (45.4%), motility degradation rate (56.5%) and acrosomal integrity (60.6%), when compared to the cryopreserved samples in the other types of packaging evaluated (p<0.05). Only for the motility degradation rate parameter, the semen preserved in straws showed results similar to the one conserved in a 4 mL macrotube (54.1%). The results after thawing indicated that the semen packed in straws was the one that presented consistent characteristics with the possibility of being used in artificial insemination protocols with possibilities of good fertility results. It was concluded that packages that allow a higher speed of temperature changes between the cells found on the edge and in the center of them, favor a better quality of the thawed semen.

Sperm filtration as an alternative technique for seminal plasma separation in boars / Filtração de ejaculados suínos como alternativa para a separação do plasma seminal

The present study aimed to evaluate the filtration for separating seminal plasma of boars' ejaculate by means of sperm viability and the occurrence of hyperactivation and lipid peroxidation in fresh semen and after cooling for up to 96 hours. The ejaculate of eight healthy boars of different breeds was collected and the gelatinous portion was separated and discarded. In the laboratory, the semen was fractioned into three aliquots (groups G1, G2 and G3) as follows: G1: semen with plasma diluted in BTS (TOTAL BTS); G2: semen centrifuged at 600G/10' (BTS CEN); and G3: semen filtered with the Sperm-filter® following dilution of the retained cells with BTS (BTS FIL). The analyses were performed at three moments: with fresh samples (D0) and after 48 (D2) and 96 hours (D4) of cooling at 17ºC. The kinetic evaluation was performed using the CASA system, which provided data for the classification of sperm hyperactivity. For lipid stress analysis, the TBARS (thiobarbituric acid reactive substance) test was performed. The variance analysis test was conducted to compare the results between the groups and moments analyzed. The results showed better total motility values (%) for G1 at D0 (67.9, P= 0.001), D2 (36.6, P= 0.004) and D4 (26.1, P= 0.003). The occurrence of hyperactivity was observed in G2 and G3 at moments D2 and D4. In addition, TBARS showed higher peroxidation levels for G1 at D0 (8.1 mM MDA/ml, P= 0.01), D2 (7.4 mM MDA/ml, P= 0.02), and D4 (6.41mMol MDA/ml, P= 0.008) when compared to G2 and G3. Since the filtration method did not demonstrate any damage to the sperm viability, the study concluded that sperm filtration is an accessible and valid tool to replace centrifugation.(AU)

O presente estudo objetivou avaliar a filtração como alternativa para a separação do plasma seminal de ejaculados suínos, ao considerar a viabilidade espermática por meio da ocorrência de hiperativação e peroxidação lipídica no sêmen fresco e após refrigeração por até 96 horas. O ejaculado, de oito cachaços saudáveis de diferentes raças, foram colhidos por meio da técnica da mão enluvada e porção gelatinosa foi separada e descartada. Em laboratório, o sêmen foi fracionado em três alíquotas (grupos G1, G2 e G3) da seguinte forma: G1: sêmen e plasma seminal, diluído em BTS (TOTAL BTS); G2: ejaculado centrifugado a 600G/10' para separação do plasma seminal, e o pellet de espermatozoides formados foram ressuspensos em BTS (BTS CEN); e G3: sêmen filtrado com Sperm-filter®, e espermatozoides retidos foram diluídos em BTS (BTS FIL). As análises foram realizadas em três momentos: amostras frescas (D0), após 48 horas (D2) e seguidas 96 horas (D4) de refrigeração a 17ºC. A avaliação cinética foi realizada pelo sistema CASA, que forneceu dados para a classificação da hiperatividade espermática. Para análise de estresse lipídico, foi realizado o teste TBARS (substâncias reagente ao ácido barbitúrico). Um teste de análise de variâncias foi feito para detectar diferenças entre os grupos e momentos avaliados. Os resultados mostraram melhores valores de motilidade total (%) para G1 em D0 (67,9, P = 0,001), D2 (36,6, P = 0,004) e D4 (26,1, P = 0,003). A ocorrência de hiperatividade foi observada em G2 e G3 nos momentos D2 e D4. Além disso, o TBARS mostrou níveis de peroxidação lipídica mais elevados para G1 em D0 (8,1 mM MDA / ml, P = 0,01), D2 (7,4 mM MDA/ml, P = 0,02) e D4 (6,41 mMol MDA / ml, P = 0,008) quando comparado com G2 e G3. Como a filtração não induziu a danos na viabilidade espermática, o estudo concluiu que a filtração espermática é uma ferramenta acessível e válida para substituir a centrifugação com intuito de separar o plasma seminal.(AU)

Reproductive performance of sows inseminated with semen doses stored for up to seven days in long-term extender in a field condition

This study aimed to evaluate the reproductive performance of sows inseminated with semen doses preserved at 15-18 °C for up to seven days in long-term extender (Duragen®). Parity one (PO1) to PO7 sows were randomly assigned to the following groups: AI1-3 (n=190), insemination with semen doses stored between one and three days; and AI5-7 (n=124), insemination with semen doses stored between five and seven days. Sows were submitted to estrus detection twice a day. Post-cervical insemination according to weaning-to-estrus interval was performed. The farrowing rate (FR) did not differ between the groups (AI1-3=83.2%; AI5-7=82.2%; p>0.05) nor did the total number of piglets born (TPB; AI1-3=14.2±0.3; AI5-7=14.5±0.3; p>0.05). Considering the semen dose most likely responsible for fertilization according to its storage time (1, 2-3, 5, and 6-7 days), the FR (72.7%, 87.8%, 85.7%, and 79%, respectively) and TPB (14.4, 14.0, 14.9, and 13.5, respectively) were similar among the groups (p>0.05). In conclusion, the use of semen doses extended with long-term extender stored for up to seven days did not impair the reproductive performance of sows. Therefore, it’s using could optimize production efficiency and logistics of semen dose deliveries to sow farms.

Reproductive performance of sows inseminated with semen doses stored for up to seven days in long-term extender in a field condition

This study aimed to evaluate the reproductive performance of sows inseminated with semen doses preserved at 15-18 °C for up to seven days in long-term extender (Duragen®). Parity one (PO1) to PO7 sows were randomly assigned to the following groups: AI1-3 (n=190), insemination with semen doses stored between one and three days; and AI5-7 (n=124), insemination with semen doses stored between five and seven days. Sows were submitted to estrus detection twice a day. Post-cervical insemination according to weaning-to-estrus interval was performed. The farrowing rate (FR) did not differ between the groups (AI1-3=83.2%; AI5-7=82.2%; p>0.05) nor did the total number of piglets born (TPB; AI1-3=14.2±0.3; AI5-7=14.5±0.3; p>0.05). Considering the semen dose most likely responsible for fertilization according to its storage time (1, 2-3, 5, and 6-7 days), the FR (72.7%, 87.8%, 85.7%, and 79%, respectively) and TPB (14.4, 14.0, 14.9, and 13.5, respectively) were similar among the groups (p>0.05). In conclusion, the use of semen doses extended with long-term extender stored for up to seven days did not impair the reproductive performance of sows. Therefore, its using could optimize production efficiency and logistics of semen dose deliveries to sow farms.(AU)

Uso do DMSO a 3% e diferentes concentrações de glicerol na curva de resfriamento do sêmen suíno / Use of 3% DMSO and different glycerol concentrations in the swine semen cooling curve

Este trabalho teve como objetivo testar o crioprotetor Dimetilsulfóxido (DMSO-3%) e o glicerol, em cinco concentrações (0,5%, 1%, 3%, 5% e 7%) em uma nova curva de resfriamento. Foram feitas sete coletas de sete varrões (n=49) através da técnica da mão enluvada. O DMSO (3%) e o glicerol foram adicionados separadamente ao diluente de congelação. Durante a análise da curva, a menor média de vigor espermático foi observada à concentração de 7% de glicerol. Na concentração de 1% de glicerol obteve-se maior média de motilidade espermática (72±12,3), sem diferença em relação à concentração de 5%. Maiores médias de vigor e motilidade espermática pós-descongelação foram observadas a3% de glicerol, diferindo das concentrações de 0,5% de glicerol e 3% de DMSO quanto ao vigor e dos demais tratamentos quanto à motilidade espermática. No teste de resistência osmótica o glicerol a 3% como diluente de congelação proporcionou melhor proteção à membrana espermática, diferindo dos demais tratamentos, exceto do DMSO a 3% e glicerola 1%. Observou-se maior porcentagem de células vivas na concentração de 5% e 7% de glicerol, diferindo das demais concentrações. Já o maior percentual de espermatozoides com acrossomas intactos foi observado quando se utilizou o diluente de congelação contendo glicerol a 3% (73,8±11,9). Os resultados do presente estudo, sugeriram que o glicerol, ainda é a melhor opção de crioprotetor a ser utilizada nos processos de criopreservação do espermatozoide suíno.

This study aimed to test the cryoprotectant Dimethylsulfoxide (DMSO-3%) and glycerol, in five concentrations (0.5%, 1%, 3%, 5% and 7%) in a new cooling curve. Seven collections from seven boars (n=49) through the gloved hand technique were made. DMSO (3%) and glycerol were added separately to the freezing diluent. During the analysis of the curve, the lowest mean sperm count was observed at a concentration of 7% glycerol. The concentration of 1% glycerol obtained more sperm motility (72±12.3) but, did not differ in concentrations of 5% glycerol. Higher mean sperm motility and vigor after thawing were observed at 3%glycerol, differing from 0.5% glycerol and 3% DMSO concentrations regarding vigor and other treatments regarding sperm motility. In the osmotic resistance test, 3% glycerol as a freezing agent provided better protection to the spermatic membrane, differing from the other treatments except for 3% DMSO and 1% glycerol. A higher percentage of living cells was observed in the 5% and 7% glycerol concentration, differing from the other concentrations. The highest percentage of spermatozoa with intact acrosomes was observed when the freezing diluent containing 3% glycerol (73.8±11.9) was used. The results of this study suggested that glycerol is still the best cryoprotective option to be used in cryopreservation processes of swine sperm.

Uso do DMSO a 3% e diferentes concentrações de glicerol na curva de resfriamento do sêmen suíno / Use of 3% DMSO and different glycerol concentrations in the swine semen cooling curve

Este trabalho teve como objetivo testar o crioprotetor Dimetilsulfóxido (DMSO-3%) e o glicerol, em cinco concentrações (0,5%, 1%, 3%, 5% e 7%) em uma nova curva de resfriamento. Foram feitas sete coletas de sete varrões (n=49) através da técnica da mão enluvada. O DMSO (3%) e o glicerol foram adicionados separadamente ao diluente de congelação. Durante a análise da curva, a menor média de vigor espermático foi observada à concentração de 7% de glicerol. Na concentração de 1% de glicerol obteve-se maior média de motilidade espermática (72±12,3), sem diferença em relação à concentração de 5%. Maiores médias de vigor e motilidade espermática pós-descongelação foram observadas a3% de glicerol, diferindo das concentrações de 0,5% de glicerol e 3% de DMSO quanto ao vigor e dos demais tratamentos quanto à motilidade espermática. No teste de resistência osmótica o glicerol a 3% como diluente de congelação proporcionou melhor proteção à membrana espermática, diferindo dos demais tratamentos, exceto do DMSO a 3% e glicerola 1%. Observou-se maior porcentagem de células vivas na concentração de 5% e 7% de glicerol, diferindo das demais concentrações. Já o maior percentual de espermatozoides com acrossomas intactos foi observado quando se utilizou o diluente de congelação contendo glicerol a 3% (73,8±11,9). Os resultados do presente estudo, sugeriram que o glicerol, ainda é a melhor opção de crioprotetor a ser utilizada nos processos de criopreservação do espermatozoide suíno.(AU)

This study aimed to test the cryoprotectant Dimethylsulfoxide (DMSO-3%) and glycerol, in five concentrations (0.5%, 1%, 3%, 5% and 7%) in a new cooling curve. Seven collections from seven boars (n=49) through the gloved hand technique were made. DMSO (3%) and glycerol were added separately to the freezing diluent. During the analysis of the curve, the lowest mean sperm count was observed at a concentration of 7% glycerol. The concentration of 1% glycerol obtained more sperm motility (72±12.3) but, did not differ in concentrations of 5% glycerol. Higher mean sperm motility and vigor after thawing were observed at 3%glycerol, differing from 0.5% glycerol and 3% DMSO concentrations regarding vigor and other treatments regarding sperm motility. In the osmotic resistance test, 3% glycerol as a freezing agent provided better protection to the spermatic membrane, differing from the other treatments except for 3% DMSO and 1% glycerol. A higher percentage of living cells was observed in the 5% and 7% glycerol concentration, differing from the other concentrations. The highest percentage of spermatozoa with intact acrosomes was observed when the freezing diluent containing 3% glycerol (73.8±11.9) was used. The results of this study suggested that glycerol is still the best cryoprotective option to be used in cryopreservation processes of swine sperm.(AU)

Characterization of boar studs in Brazil / Caracterização das centrais de coleta e processamento de sêmen no Brasil

Understanding the flow of processes in swine production systems and how they work is fundamental to improving reproductive performance. We surveyed 32 boar studs in Brazil, representing 61.53% of the total in the country. Commercial lines were the most common breed (59.38%) used in the studs. Individual pens and stalls were the most commonly used as housing system (71.9%), and 81.25% of the studs reported having some form of thermal control system. For most of the studs (62.51%), average weekly sperm concentration was higher than 200 million cells per mL. Also, for most studs (71.88%) average weekly ejaculate volume was more than 250 mL. In 46.88% of the studs each ejaculate yielded 26 to 40 semen doses. In 6.25% of the studs, 3.5 billion sperm cells per dose were used for artificial, intracervical insemination. Sperm concentration in 46.88% of the studs was determined using a computer-assisted system analysis. The assessment of sperm quality was conducted using morphology, concentration, and microbiological testing. Employees working on semen collection had formal education of elementary/middle school (34.38%) and high school (37.5%). Most of the laboratory technicians had frequented high school (75%). The most time-consuming task was semen processing, taking 16 to 25 h a week (46.8%) and 6 to 10 h was allotted for the cleaning of stud facilities (46.8%). The data collected in the present study allow greater knowledge of this important part in the pig production chain in Brazil.(AU)

O entendimento dos processos na suinocultura e como estes funcionam é fundamental para o incremento da performance reprodutiva. Por via eletrônica, foi realizada uma investigação com 32 centrais de coleta e processamento de sêmen no Brasil, representando 61,53% do total no país. O número médio de reprodutores por central foi de 122. Reprodutores da linhagem comercial foram os mais frequentemente (59,38%) utilizados nas centrais. As baias para alojamento individual dos reprodutores foram as mais comuns (71,9%) e 81,25% das centrais relataram possuir algum sistema de climatização. Na maioria das centrais (62,51%), a média da concentração espermática foi maior que 200 milhões de espermatozoides/mL. Da mesma forma, a maioria das centrais (71,88%) apresentaram um volume do ejaculado superior a 250 mL. Em 46,88% das centrais um ejaculado produziu de 26 a 40 doses inseminantes. Em 6,25% das centrais eram utilizadas uma concentração de 3,5 bilhões de espermatozoides por dose inseminante na inseminação intracervical. A concentração espermática em 46,88% das centrais era determinada através do sistema CASA. A avaliação da qualidade espermática era realizada através da análise de morfologia, concentração e exame microbiológico das doses inseminantes. Os colaboradores envolvidos com a coleta de sêmen tinham nível de instrução fundamental (43,38%) e médio (37,5%). A maioria dos técnicos no laboratório das centrais tinham ensino médio (75%). A atividade que mais consumia tempo foi o processamento do sêmen, com 16 a 25 horas/semana (46,8%) e 6 a 10 horas era utilizada na limpeza das instalações (46,8%). Os dados coletados no presente estudo permitem um maior conhecimento desse elo da cadeia produtiva da suinocultura no Brasil.(AU)

Pestivirus spillover effect: molecular detection of bovine viral diarrhea virus in domestic and feral pigs / Efeito spillover de pestivírus: detecção molecular do vírus da diarreia viral bovina em suínos domésticos e javalis

Pestivirus infections are important in the livestock industries, with infection occurring in cattle, sheep and pigs. The Pestivirus genus of the family Flaviviridae, includes four recognized species: bovine viral diarrhea virus 1 (BVDV-1), bovine viral diarrhea virus 2 (BVDV-2), border disease virus (BDV), and classical swine fever virus (CSFV). All pestivirus species can infect pigs, therefore accurate and specific pestivirus detection and differentiation is of great importance to assure control measures in swine populations. The aim of the study was the molecular detection of different pestiviruses in domestic and feral pigs. A total of 527 samples (92 pigs and 435 wild boars) were tested for pestiviruses detection using molecular assays. Eleven positive samples (6 wild boars and 5 domestic pigs) were identified using panpestivirus primers targeting the 5'- UTR region of the pestivirus RNA genome. Further all the positive samples were sequentially tested for detection of CSFV, BVDV-1 and BVDV-2 using specific primers. All RNAs were identified as positives for BVDV-1 and no amplification signals were obtained from BVDV-2 and CSFV. The current detection of BVDV-1 in clinical swine specimens highlights the important risk factor of swine population as reservoir and consequently carrier for BVDV.(AU)

As infecções por pestivírus são importantes nas indústrias pecuárias, com infecções em bovinos, ovinos e suínos. O gênero Pestivirus da família Flaviviridae inclui quatro espécies reconhecidas: vírus da diarreia viral bovina 1 (BVDV-1), vírus da diarreia viral bovina 2 (BVDV-2), vírus da doença de fronteira (VDF) e vírus da peste suína clássica (VPSC). Todas as espécies de pestivírus podem infectar porcos, portanto a detecção e diferenciação precisas e específicas de pestivírus são de grande importância para garantir medidas de controle nas populações suínas. O objetivo do estudo foi a detecção molecular de diferentes pestivírus em suínos domésticos e javali. Um total de 527 amostras (92 porcos e 435 javalis) foram testados para detecção de pestivírus usando ensaios moleculares. Onze amostras positivas (6 javalis e 5 porcos domésticos) foram identificadas usando iniciadores de panpestivírus visando a região 5'-UTR do genoma do RNA do pestivírus. Além disso, todas as amostras positivas foram testadas sequencialmente para detecção de VPSC, BVDV-1 e BVDV-2 usando iniciadores específicos. Todos os RNAs foram identificados como positivos para BVDV-1 e nenhum sinal de amplificação foi obtido do BVDV-2 e CSFV. A detecção atual do BVDV-1 em amostras clínicas de suínos destaca o importante fator de risco da população suína como reservatório e consequentemente portador do BVDV.(AU)

Pestivirus spillover effect: molecular detection of bovine viral diarrhea virus in domestic and feral pigs / Efeito spillover de pestivírus: detecção molecular do vírus da diarreia viral bovina em suínos domésticos e javalis

Pestivirus infections are important in the livestock industries, with infection occurring in cattle, sheep and pigs. The Pestivirus genus of the family Flaviviridae, includes four recognized species: bovine viral diarrhea virus 1 (BVDV-1), bovine viral diarrhea virus 2 (BVDV-2), border disease virus (BDV), and classical swine fever virus (CSFV). All pestivirus species can infect pigs, therefore accurate and specific pestivirus detection and differentiation is of great importance to assure control measures in swine populations. The aim of the study was the molecular detection of different pestiviruses in domestic and feral pigs. A total of 527 samples (92 pigs and 435 wild boars) were tested for pestiviruses detection using molecular assays. Eleven positive samples (6 wild boars and 5 domestic pigs) were identified using panpestivirus primers targeting the 5'- UTR region of the pestivirus RNA genome. Further all the positive samples were sequentially tested for detection of CSFV, BVDV-1 and BVDV-2 using specific primers. All RNAs were identified as positives for BVDV-1 and no amplification signals were obtained from BVDV-2 and CSFV. The current detection of BVDV-1 in clinical swine specimens highlights the important risk factor of swine population as reservoir and consequently carrier for BVDV.(AU)

As infecções por pestivírus são importantes nas indústrias pecuárias, com infecções em bovinos, ovinos e suínos. O gênero Pestivirus da família Flaviviridae inclui quatro espécies reconhecidas: vírus da diarreia viral bovina 1 (BVDV-1), vírus da diarreia viral bovina 2 (BVDV-2), vírus da doença de fronteira (VDF) e vírus da peste suína clássica (VPSC). Todas as espécies de pestivírus podem infectar porcos, portanto a detecção e diferenciação precisas e específicas de pestivírus são de grande importância para garantir medidas de controle nas populações suínas. O objetivo do estudo foi a detecção molecular de diferentes pestivírus em suínos domésticos e javali. Um total de 527 amostras (92 porcos e 435 javalis) foram testados para detecção de pestivírus usando ensaios moleculares. Onze amostras positivas (6 javalis e 5 porcos domésticos) foram identificadas usando iniciadores de panpestivírus visando a região 5'-UTR do genoma do RNA do pestivírus. Além disso, todas as amostras positivas foram testadas sequencialmente para detecção de VPSC, BVDV-1 e BVDV-2 usando iniciadores específicos. Todos os RNAs foram identificados como positivos para BVDV-1 e nenhum sinal de amplificação foi obtido do BVDV-2 e CSFV. A detecção atual do BVDV-1 em amostras clínicas de suínos destaca o importante fator de risco da população suína como reservatório e consequentemente portador do BVDV.(AU)