Hibridização in situ fluorescente para diagnóstico de Brachyspira hyodysenteriae e B. pilosicoli ­em suínos / Fluorescence in situ hybridization for diagnosis of Brachyspira hyodysenteriae e B. pilosicoli in swine

Disenteria Suína e Colite Espiroquetal são duas enfermidades importantes em suínos causados pela Brachyspira hyodysenteriae e Brachyspira pilosicoli, respectivamente. O diagnóstico eficaz dessas espécies é extremamente importante para a adoção de estratégias adequadas para o controle. Propõe-se avaliar a técnica de hibridização in situ de fluorescência (FISH) para detecção de B. hyodysenteriae e B. pilosicoli em fragmentos histopatológicos de intestino de suínos e compará-la ao PCR duplex. Foram analisadas amostras de fezes e intestinos de suínos de terminação com histórico de diarreia pelas técnicas de reação em cadeia da polimerase duplex (dPCR), hibridização in situ fluorescente (FISH) para diagnóstico dessas bactérias. Foram utilizadas 34 amostras de intestino de suínos de campo positivos para alguma das duas espécies de Brachyspira sp. nos testes de FISH ou PCR. Das 34 amostras analisadas, foram detectadas 28 (82,35%) positivas na PCR e no FISH. Dentre as 29 amostras positivas para B. hyodysenteriae, 23 (79,3%) foram positivas à PCR e 21 (72,4%) no FISH. Os resultados de FISH e PCR não diferiram estatisticamente entre si. Baseado no fato dessa técnica poder ser realizada em tecidos formolizados, ser prática, rápida e associar a marcação especifica do agente com lesões histológicas, o FISH demonstrou ser mais uma alternativa no diagnóstico de Brachyspira hyodysenteriae e B. pilosicoli.(AU)

Growing and finishing pigs are affected by pathogenic spirochetes of the genus Brachyspira sp., which cause a significant economic impact due to direct and indirect losses. Thus, efficient diagnosis of these species enables better technical intervention to prevent or treat diseases. This study aimed to evaluate the fluorescent in situ hybridization (FISH) for the diagnosis of B. hyodysenteriae and B. pilosicoli in histopathologic fragments of pig's intestine and compare it to the duplex PCR. Thirty-four samples collected from pigs positive for these species in at least one of the tests were used in the study. Out of the 34 analyzed intestine samples, 28 (82.35%) were positive by PCR and FISH. Among the 29 B. hyodysenteriae positive samples, 23 (79.3%) were positive by PCR and 21 (72.4%) by FISH. There was no statistical difference among the detection rate of the used tests. Based on the fact this technique can be performed in formalin fixed tissue samples, it is practical, fast and allows the association of labeling a specific agent with histological lesions, FISH has become an alternative diagnostic method for Brachyspira hyodysenteriae and B. pilosicoli.(AU)

Hibridização in situ fluorescente para diagnóstico de Brachyspira hyodysenteriae e B. pilosicoli ­em suínos / Fluorescence in situ hybridization for diagnosis of Brachyspira hyodysenteriae e B. pilosicoli in swine

Disenteria Suína e Colite Espiroquetal são duas enfermidades importantes em suínos causados pela Brachyspira hyodysenteriae e Brachyspira pilosicoli, respectivamente. O diagnóstico eficaz dessas espécies é extremamente importante para a adoção de estratégias adequadas para o controle. Propõe-se avaliar a técnica de hibridização in situ de fluorescência (FISH) para detecção de B. hyodysenteriae e B. pilosicoli em fragmentos histopatológicos de intestino de suínos e compará-la ao PCR duplex. Foram analisadas amostras de fezes e intestinos de suínos de terminação com histórico de diarreia pelas técnicas de reação em cadeia da polimerase duplex (dPCR), hibridização in situ fluorescente (FISH) para diagnóstico dessas bactérias. Foram utilizadas 34 amostras de intestino de suínos de campo positivos para alguma das duas espécies de Brachyspira sp. nos testes de FISH ou PCR. Das 34 amostras analisadas, foram detectadas 28 (82,35%) positivas na PCR e no FISH. Dentre as 29 amostras positivas para B. hyodysenteriae, 23 (79,3%) foram positivas à PCR e 21 (72,4%) no FISH. Os resultados de FISH e PCR não diferiram estatisticamente entre si. Baseado no fato dessa técnica poder ser realizada em tecidos formolizados, ser prática, rápida e associar a marcação especifica do agente com lesões histológicas, o FISH demonstrou ser mais uma alternativa no diagnóstico de Brachyspira hyodysenteriae e B. pilosicoli.(AU)

Growing and finishing pigs are affected by pathogenic spirochetes of the genus Brachyspira sp., which cause a significant economic impact due to direct and indirect losses. Thus, efficient diagnosis of these species enables better technical intervention to prevent or treat diseases. This study aimed to evaluate the fluorescent in situ hybridization (FISH) for the diagnosis of B. hyodysenteriae and B. pilosicoli in histopathologic fragments of pig's intestine and compare it to the duplex PCR. Thirty-four samples collected from pigs positive for these species in at least one of the tests were used in the study. Out of the 34 analyzed intestine samples, 28 (82.35%) were positive by PCR and FISH. Among the 29 B. hyodysenteriae positive samples, 23 (79.3%) were positive by PCR and 21 (72.4%) by FISH. There was no statistical difference among the detection rate of the used tests. Based on the fact this technique can be performed in formalin fixed tissue samples, it is practical, fast and allows the association of labeling a specific agent with histological lesions, FISH has become an alternative diagnostic method for Brachyspira hyodysenteriae and B. pilosicoli.(AU)

INVESTIGAÇÃO DE Brachyspira hyodysenteriae E Brachyspira pilosicoli EM SUÍNOS COM DIARRÉIA NO ESTADO DO ESPÍRITO SANTO

Distúrbios entéricos em suínos são mais frequentemente observados na recria e terminação provocando perdas econômicas. No Espírito Santo (ES) são escassas as pesquisas sobre identificação de patógenos que são responsáveis por doenças entéricas em suínos. Objetivou-se nesse estudo determinar a presença de Brachyspira hyodysenteriae e Brachyspira pilosicoli em suínos com sinais clínicos de diarreia, na região Centro-Serrana do Espírito Santo (ES) através da técnica da reação em cadeia da polimerase em tempo real qPCR e avaliar as condições epidemiológicas das propriedades estudadas. Amostras foram coletadas em granjas com histórico de diarreia e com suspeita clínica de infecção por Brachyspiras spp. patogênicas, sendo obtido 30 amostras constituídas por pool de fezes de suínos com diarreia, provenientes de 30 granjas em 10 diferentes municípios do ES. B. hyodysenteriae e B. pilosicoli não foram detectadas em nenhuma das 30 propriedades analisadas (0/30), mesmo com condições propícias de baixa biosseguridade das suinoculturas, indicando que estes agentes não são importantes causadores de diarreia nesta região. O pequeno porte dessas granjas e a baixa densidade de unidades produtoras no ES, aliados ao uso de antimicrobianos na ração podem ter interferido na identificação dos agentes investigados.

Enteric disorders in pigs are more frequently observed in growing and finishing stages causing economic losses. In Espírito Santo (ES) there is a few research about pathogens that are responsible for enteric diseases in pigs. The objective of this study was to determine the presence of Brachyspira hyodysenteriae and Brachyspira pilosicoli in pigs with clinical signs of diarrhea, in the Espírito Santo (ES) state by real time polymerase chain reaction technique qPCR and evaluate epidemiological conditions of the properties. Samples were collected in farms with historic of diarrhea and clinical suspicion of infection with pathogenic Brachyspira ssp. We obtained 30 samples that contain a pool of pig feces with diarrhea, from 30 farms in 10 different counties of ES. B. hyodysenteriae and B. pilosicoli were not detected in any of the 30 properties analyzed (0/30), even with favorable conditions of low biosecurity of swine production farms, indicating that these agents are not important cause of diarrhea in this region. The small size of these farms and the low density of production units in ES, combined with the use of antimicrobials in feed may have interfered in identifying agents investigated.

FREQUÊNCIA DE Brachiyspira hyobysenteriae Brachiyspira pilosicoli EM SUÍNOS DE TERMINAÇÃO NA MESORREGIÃO OESTE DO ESTADO DO PARANÁ, BRASIL

RESUMO As bactérias do gênero Brachyspira estão entre as principais causas de diarreia em suínos de recria e terminação. Apesar da sua relevância são raros os estudos de frequência e prevalência desses agentes no rebanho nacional. Este estudo tem por objetivo avaliar a frequência de Brachyspira hyodysenteriae e Brachyspira pilosicoli por meio da técnica do isolamento bacteriano e da reação em cadeia da polimerase (PCR) de cepas cultivadas de amostras de fezes oriundas de rebanhos comerciais de suínos da mesorregião Oeste do estado do Paraná. Foram coletadas fezes em 15 granjas de terminação, com histórico de diarreia, em três municípios distintos. Foram coletados 15 animais por granja totalizando 225 amostras. O cultivo bacteriano objetivando o isolamento microbiológico de bactérias do gênero Brachyspira sp. resultou positivo em 97,7% (n=225) das amostras. Foram selecionadas 100 amostras positivas no cultivo bacteriano para a PCR duplex para B. hyodysenteriae e B. pilosicoli que resultou em 39% (n=100) amostras positivas, sendo 61,5% (n=39) positivas para B. hyodysenteriae, 28,2% (n=39) para B. pilosicoli e 10,3% (n=39) amostras foram positivas para ambos os agentes. Observou-se que 61% (n=100) amostras foram negativas na PCR. Foram realizadas avaliações necroscópicas e histopatológicas de três animais, que revelaram lesões compatíveis com B. hyodysenteriae e B. pilosicoli. O diagnóstico das infecções foi firmado com base nas observações epidemiológica e clínica, lesões macroscópicas e histopatológicas, cultivo bacteriano e PCR duplex. A associação cultivo bacteriano e PCR duplex demonstrou ser eficiente na identificação de B. hyodysenteriae e B. pilosicoli. O isolamento bacteriano evidenciou que existe um grande número de bactérias do gênero Brachyspira sp. na microbiota intestinal dos suínos estudados. A frequência de B. hyodysenteriae foi de 24% (n=100), de B. pilosicoli foi 11% (n=100) e 4% (n=100) com detecção de ambas bactérias em suínos comerciais da mesorregião Oeste do estado do Paraná.

Brachyspira sp. genus bacteria are among the main causes of diarrhea in growing and finishing pigs. Despite its relevance, the frequency and prevalence studies are uncommon in the brazilian herd. This study aims to assess the frequency of Brachyspira hyodysenteriae and Brachyspira pilosicoli by bacterial isolation and polymerase chain reaction (PCR) of faeces stool obtained from commercial swines farms in the western region of Paraná state. Stool from 15 finishing farms, with diarrhea history, were collected of three distinct municipalities. Were collected 15 animals per farm totaling 225 samples. The bacterial culture aiming microbiologic isolation of bacteria of the genus Brachyspira sp. were positive in 97.7% (n=225) of the samples. Of the amount of positive bacterial culture, 100 samples were selected for duplex PCR aiming B. hyodysenteriae and B. pilosicoli, resulting in 39% (n=100) positive samples. Of these 61.5% (n=39) were positive for B. hyodysenteriae, 28.2% (n=39) positive for B. pilosicoli, and 10 3% (n=39) samples were positive for both agents. It was observed that 61% (n=100) samples were negative in the PCR. Necropsy and histological results of three animals were held, which identified lesions compatible with B. hyodysenteriae and B. pilosicoli. The diagnosis of infections were signed based on epidemiological and clinical observations, gross and histopathological lesions, bacterial culture and duplex PCR. The bacterial culture in association with duplex PCR proved to be efficient in identifying B. hyodysenteriae and B. pilosicoli. The bacterial culture revealed that there is a large number of bacteria of the genus Brachyspira sp. present in the intestinal tract of studied swines. The frequency of B. hyodysenteriae was 24% (n=100), of B. pilosicoli was 11% (n=100) and 4% (n=100) indicated the presence of both agents in the western region of Paraná state.

Avaliação da transmissão da Brachyspira pilosicoli através da infecção experimental em pintos de um dia

A Brachyspira pilosicoli é uma causa reconhecida de diarréia em diversas espécies animais e no homem. A transmissão ocorre principalmente pelas fezes, alimentos ou água contaminada. A bactéria tem boa capacidade de sobrevivência no meio ambiente, o que gera amplas oportunidades de transmissão. Este trabalho avaliou a capacidade de difusão horizontal de diferentes cepas de B. pilosicoli. Foram usadas 2 cepas de referência e 19 cepas de campo da bactéria, isoladas de casos de diarréia em suínos no Estado do Rio Grande do Sul, usando um modelo de infecção oral de pintos de um dia. Para cada cepa, 4 animais foram inoculados com uma suspensão de bactérias vivas e mantidos em gaiola com outros dois animais não inoculados (contatos). Decorridos 21 dias foram sacrificados e os cecos examinados por histopatologia, através da imuno-histoquímica. Foi observado que 73,68% das cepas de B. pilosicoli foram capazes de colonizar o epitélio do ceco. Houve diferenças no tipo de colonização, ocorrendo aderência contínua, focal ou presença de bactérias livres na luz intestinal. Com relação à capacidade de transmissão horizontal da infecção por B. pilosicoli, 57,89% das cepas foram capazes de aderir e/ou serem detectadas livres na luz intestinal dos animais contatos. A conclusão desse experimento foi de que algumas das cepas de campo mostraram alta capacidade de difusão horizontal.

Estudo sorológico de isolados de Brachyspira pilosicoli de suínos da região sul do Brasil

A colite espiroquetal, doença infecciosa causada pela Brachyspira pilosicoli, foi recentemente descrita no Brasil e causa significativas perdas à produção suinícola por diarréia, perda de peso e piora da conversão alimentar. O agente é anaeróbico, fastidioso e a infecção causada pelo mesmo de difícil diagnóstico laboratorial. Dessa forma, o desenvolvimento de técnicas de diagnóstico nessa área apresenta particular relevância. No presente trabalho buscou-se analisar isolados da bactéria através da técnica sorológica da microaglutinação. Foram produzidos em coelhos soros hiperimunes contra duas amostras de referência de B. pilosicoli, 20 amostras da bactéria isoladas no Estado do Rio Grande do Sul e uma cepa de referência de outra espiroqueta patogênica (B. hyodysenteriae). Reagindo todas as cepas contra todos os soros, foram detectados vários padrões de reatividade cruzado. Pela grande variabilidade dos títulos, não houve possibilidade estabelecer um padrão sorológico capaz de permitir um agrupamento das bactérias analisadas em sorotipos. A existência dessa discrepância nas aglutinações realizadas com soros homólogos e heterólogos sugere compartilhamento de antígenos (cadeias laterais de açúcares) entre as amostras ou diferenças de quantidade dos açúcares na membrana celular externa. Por reagir contra todas as cepas de B. pilosicoli com título superiores a 1:1120, o antissoro pr

Estudo sorológico de isolados de Brachyspira pilosicoli de suínos da região sul do Brasil

A colite espiroquetal, doença infecciosa causada pela Brachyspira pilosicoli, foi recentemente descrita no Brasil e causa significativas perdas à produção suinícola por diarréia, perda de peso e piora da conversão alimentar. O agente é anaeróbico, fastidioso e a infecção causada pelo mesmo de difícil diagnóstico laboratorial. Dessa forma, o desenvolvimento de técnicas de diagnóstico nessa área apresenta particular relevância. No presente trabalho buscou-se analisar isolados da bactéria através da técnica sorológica da microaglutinação. Foram produzidos em coelhos soros hiperimunes contra duas amostras de referência de B. pilosicoli, 20 amostras da bactéria isoladas no Estado do Rio Grande do Sul e uma cepa de referência de outra espiroqueta patogênica (B. hyodysenteriae). Reagindo todas as cepas contra todos os soros, foram detectados vários padrões de reatividade cruzado. Pela grande variabilidade dos títulos, não houve possibilidade estabelecer um padrão sorológico capaz de permitir um agrupamento das bactérias analisadas em sorotipos. A existência dessa discrepância nas aglutinações realizadas com soros homólogos e heterólogos sugere compartilhamento de antígenos (cadeias laterais de açúcares) entre as amostras ou diferenças de quantidade dos açúcares na membrana celular externa. Por reagir contra todas as cepas de B. pilosicoli com título superiores a 1:1120, o antissoro pr

Estudo sorológico de isolados de Brachyspira pilosicoli de suínos da região sul do Brasil

A colite espiroquetal, doença infecciosa causada pela Brachyspira pilosicoli, foi recentemente descrita no Brasil e causa significativas perdas à produção suinícola por diarréia, perda de peso e piora da conversão alimentar. O agente é anaeróbico, fastidioso e a infecção causada pelo mesmo de difícil diagnóstico laboratorial. Dessa forma, o desenvolvimento de técnicas de diagnóstico nessa área apresenta particular relevância. No presente trabalho buscou-se analisar isolados da bactéria através da técnica sorológica da microaglutinação. Foram produzidos em coelhos soros hiperimunes contra duas amostras de referência de B. pilosicoli, 20 amostras da bactéria isoladas no Estado do Rio Grande do Sul e uma cepa de referência de outra espiroqueta patogênica (B. hyodysenteriae). Reagindo todas as cepas contra todos os soros, foram detectados vários padrões de reatividade cruzado. Pela grande variabilidade dos títulos, não houve possibilidade estabelecer um padrão sorológico capaz de permitir um agrupamento das bactérias analisadas em sorotipos. A existência dessa discrepância nas aglutinações realizadas com soros homólogos e heterólogos sugere compartilhamento de antígenos (cadeias laterais de açúcares) entre as amostras ou diferenças de quantidade dos açúcares na membrana celular externa. Por reagir contra todas as cepas de B. pilosicoli com título superiores a 1:1120, o antissoro pr

Avaliação da transmissão da Brachyspira pilosicoli através da infecção experimental em pintos de um dia

A Brachyspira pilosicoli é uma causa reconhecida de diarréia em diversas espécies animais e no homem. A transmissão ocorre principalmente pelas fezes, alimentos ou água contaminada. A bactéria tem boa capacidade de sobrevivência no meio ambiente, o que gera amplas oportunidades de transmissão. Este trabalho avaliou a capacidade de difusão horizontal de diferentes cepas de B. pilosicoli. Foram usadas 2 cepas de referência e 19 cepas de campo da bactéria, isoladas de casos de diarréia em suínos no Estado do Rio Grande do Sul, usando um modelo de infecção oral de pintos de um dia. Para cada cepa, 4 animais foram inoculados com uma suspensão de bactérias vivas e mantidos em gaiola com outros dois animais não inoculados (contatos). Decorridos 21 dias foram sacrificados e os cecos examinados por histopatologia, através da imuno-histoquímica. Foi observado que 73,68% das cepas de B. pilosicoli foram capazes de colonizar o epitélio do ceco. Houve diferenças no tipo de colonização, ocorrendo aderência contínua, focal ou presença de bactérias livres na luz intestinal. Com relação à capacidade de transmissão horizontal da infecção por B. pilosicoli, 57,89% das cepas foram capazes de aderir e/ou serem detectadas livres na luz intestinal dos animais contatos. A conclusão desse experimento foi de que algumas das cepas de campo mostraram alta capacidade de difusão horizontal.

Avaliação da transmissão da Brachyspira pilosicoli através da infecção experimental em pintos de um dia

A Brachyspira pilosicoli é uma causa reconhecida de diarréia em diversas espécies animais e no homem. A transmissão ocorre principalmente pelas fezes, alimentos ou água contaminada. A bactéria tem boa capacidade de sobrevivência no meio ambiente, o que gera amplas oportunidades de transmissão. Este trabalho avaliou a capacidade de difusão horizontal de diferentes cepas de B. pilosicoli. Foram usadas 2 cepas de referência e 19 cepas de campo da bactéria, isoladas de casos de diarréia em suínos no Estado do Rio Grande do Sul, usando um modelo de infecção oral de pintos de um dia. Para cada cepa, 4 animais foram inoculados com uma suspensão de bactérias vivas e mantidos em gaiola com outros dois animais não inoculados (contatos). Decorridos 21 dias foram sacrificados e os cecos examinados por histopatologia, através da imuno-histoquímica. Foi observado que 73,68% das cepas de B. pilosicoli foram capazes de colonizar o epitélio do ceco. Houve diferenças no tipo de colonização, ocorrendo aderência contínua, focal ou presença de bactérias livres na luz intestinal. Com relação à capacidade de transmissão horizontal da infecção por B. pilosicoli, 57,89% das cepas foram capazes de aderir e/ou serem detectadas livres na luz intestinal dos animais contatos. A conclusão desse experimento foi de que algumas das cepas de campo mostraram alta capacidade de difusão horizontal.