Synchronization with estradiol benzoate in the presence of the corpus luteum in Wagyu cows increases the number of medium follicles but does not interfere with in vitro production of embryos / Sincronização com benzoato de estradiol na presença do corpo lúteo em vacas de Wagyu aumenta o número de folículos médios, mas não interfere com a produção in vitro de embriões

Reproductive biotechnologies are emerging as an important element for livestock; however, some strategies must be modified to adapt to different breeding systems, such as the use of follicular synchronization protocols. This study aimed to evaluate follicular synchronization using estradiol benzoate (EB), in the presence of the corpus luteum (CL) from Wagyu oocyte donors in in vitro embryo production (IVEP). Rounds of IVEP were performed in heifers and cows (n=19) that were classified into three groups: G1/CL - animals with CL, G2/WCL - animals without CL, and G3/CL + EB - animals with CL that were subjected to follicular synchronization with EB at D0. The groups G1/CL and G2/WCL were considered the control and undertook the natural process of follicular dynamics. The results showed that the synchronization of the follicular wave with the application of EB in the presence of CL, presented a smaller number of small (6.05 ± 0.55) and large follicles (0.45 ± 0.15), but increased (P < 0.05) the number of medium-sized follicles (16.20 ± 0.90). However, the results of ovum pick up showed that regardless of whether or not EB was applied, and regardless of the presence or absence of CL in the Wagyu donor, there was no difference among the groups (P > 0.05) concerning the number of viable oocytes and the viability rate. It was concluded that follicular synchronization using EB in Wagyu oocyte donors that presented a CL, increased the number of medium-sized follicles. However, there was no improvement in the efficiency of ovum pick up, in vitro embryo production, and pregnancy rate.(AU)

As biotecnologias reprodutivas estão emergindo como um elemento importante para a pecuária, entretanto, algumas estratégias devem ser modificadas para se adaptar a diferentes sistemas de criação, como o uso de protocolos de sincronização folicular. Este estudo teve como objetivo avaliar a sincronização folicular utilizando benzoato de estradiol (BE), na presença do corpo lúteo (CL) de doadoras de oócitos Wagyu na produção in vitro de embriões (PIVE). Sessões de PIVE foram realizadas em novilhas e vacas (n=19) que foram classificadas em três grupos: G1/CL - animais com CL, G2/SCL - animais sem CL e G3/CL+BE - animais com CL que foram submetidos para sincronização folicular com BE em D0. Os grupos G1/CL e G2/ SCL foram considerados o controle e realizaram o processo natural da dinâmica folicular. Os resultados mostraram que a sincronização da onda folicular com a aplicação de BE na presença de CL, apresentou um menor número de folículos pequenos (6,05 ± 0,55) e grandes (0,45 ± 0,15), mas aumentou (P < 0,05) o número de folículos de tamanho médio (16,20 ± 0,90). No entanto, os resultados da ovum pick up mostraram que independente da aplicação ou não de BE, e independente da presença ou ausência de CL na doadora Wagyu, não houve diferença entre os grupos (P > 0,05) quanto ao número de oócitos viáveis e a taxa de viabilidade. Concluiu-se que a sincronização folicular por meio de BE em doadoras de oócitos Wagyu que apresentaram CL, aumentou o número de folículos de tamanho médio. No entanto, não houve melhora na eficiência da ovum pick up, na produção in vitro de embriões e na taxa de prenhez.(AU)

Use of melatonin in the in vitro production of bovine embryos / Uso da melatonina na produção in vitro de embriões bovinos

We aimed to assess the effects of melatonin in the in vitro production of bovine embryos. Our experiment was conducted at the Laboratório de Reprodução Animal of the Universidade Estadual do Maranhão. The cumulus-oocyte complexes (COCs) were distributed among treatments at concentrations of 0, 10-1, 10-3 and 10-5 µMol/L melatonin. Our experiment was further divided into two: the first was to assess the effect of different concentrations of melatonin (treatments) on the maturation rate of COCs, and the second was to assess the effects of melatonin treatments on the in vitro production of bovine embryos. The results from the first experiment demonstrated no significant difference between the in vitro maturation rate of the cultivated COCs in treatments with melatonin. In the second experiment, however, melatonin treatments yielded statistically higher cleavage, morula and blastocyst rates in the 10-5 µM group (52.9%, 52.9%, and 35.3%, respectively), and lower rates in the 10-1 µM group (19.5%, 19.5% and 7.8%, respectively), compared to the others. The control group (no melatonin) and the 10-3 µM group showed similar results. We concluded that supplementation of melatonin in the in vitro maturation medium resulted in no improvement in the oocyte maturation rate, but in the in vitro production of embryos at different concentrations, the 10-5 µM group displayed better results, but with no improvement in the variables (P < 0.05).(AU)

Objetivou-se avaliar os efeitos da melatonina na produção in vitro de embriões bovinos. O experimento foi conduzido no Laboratório de Reprodução Animal da Universidade Estadual do Maranhão. Os complexos cumulus-oócitos (CCOs) foram distribuídos entre os tratamentos 0, 10-1, 10-3 e 10-5 µmol/L de melatonina. A avaliação foi dividida em dois experimentos, onde o primeiro avaliou o efeito dessas diferentes concentrações de melatonina (tratamentos) sobre a taxa de maturação dos CCOs e o segundo, o efeito desses tratamentos com melatonina sobre a produção in vitro de embriões bovinos. Os resultados no primeiro experimento demonstraram não haver diferença significativa na taxa de maturação in vitro dos CCOs cultivados no tratamento com melatonina. No entanto, o tratamento com melatonina no segundo experimento, as taxas de clivagens, mórulas e blastocistos, o grupo 10-5 µM foi estatisticamente superior (52,9%, 52,9% e 35,3%, respectivamente) e o grupo 10-1 µM inferior (19,5%, 19,5% e 7,8%, respectivamente) aos outros grupos. O grupo controle (sem melatonina) e o grupo 10-3 µM obtiveram resultados semelhantes. Concluiu-se que a suplementação da melatonina no meio de maturação in vitro não evidenciou melhoras na taxa de maturação dos oócitos, porém na produção in vitro de embriões em diferentes concentrações, o grupo 10-5 µM apresentou melhores resultados mesmo não havendo melhorias nas variáveis (P<0,05).(AU)

Use of melatonin in the in vitro production of bovine embryos / Uso da melatonina na produção in vitro de embriões bovinos

We aimed to assess the effects of melatonin in the in vitro production of bovine embryos. Our experiment was conducted at the Laboratório de Reprodução Animal of the Universidade Estadual do Maranhão. The cumulus-oocyte complexes (COCs) were distributed among treatments at concentrations of 0, 10-1, 10-3 and 10-5 µMol/L melatonin. Our experiment was further divided into two: the first was to assess the effect of different concentrations of melatonin (treatments) on the maturation rate of COCs, and the second was to assess the effects of melatonin treatments on the in vitro production of bovine embryos. The results from the first experiment demonstrated no significant difference between the in vitro maturation rate of the cultivated COCs in treatments with melatonin. In the second experiment, however, melatonin treatments yielded statistically higher cleavage, morula and blastocyst rates in the 10-5 µM group (52.9%, 52.9%, and 35.3%, respectively), and lower rates in the 10-1 µM group (19.5%, 19.5% and 7.8%, respectively), compared to the others. The control group (no melatonin) and the 10-3 µM group showed similar results. We concluded that supplementation of melatonin in the in vitro maturation medium resulted in no improvement in the oocyte maturation rate, but in the in vitro production of embryos at different concentrations, the 10-5 µM group displayed better results, but with no improvement in the variables (P < 0.05).

Objetivou-se avaliar os efeitos da melatonina na produção in vitro de embriões bovinos. O experimento foi conduzido no Laboratório de Reprodução Animal da Universidade Estadual do Maranhão. Os complexos cumulus-oócitos (CCOs) foram distribuídos entre os tratamentos 0, 10-1, 10-3 e 10-5 µmol/L de melatonina. A avaliação foi dividida em dois experimentos, onde o primeiro avaliou o efeito dessas diferentes concentrações de melatonina (tratamentos) sobre a taxa de maturação dos CCOs e o segundo, o efeito desses tratamentos com melatonina sobre a produção in vitro de embriões bovinos. Os resultados no primeiro experimento demonstraram não haver diferença significativa na taxa de maturação in vitro dos CCOs cultivados no tratamento com melatonina. No entanto, o tratamento com melatonina no segundo experimento, as taxas de clivagens, mórulas e blastocistos, o grupo 10-5 µM foi estatisticamente superior (52,9%, 52,9% e 35,3%, respectivamente) e o grupo 10-1 µM inferior (19,5%, 19,5% e 7,8%, respectivamente) aos outros grupos. O grupo controle (sem melatonina) e o grupo 10-3 µM obtiveram resultados semelhantes. Concluiu-se que a suplementação da melatonina no meio de maturação in vitro não evidenciou melhoras na taxa de maturação dos oócitos, porém na produção in vitro de embriões em diferentes concentrações, o grupo 10-5 µM apresentou melhores resultados mesmo não havendo melhorias nas variáveis (P<0,05).

Laparoscopic ovum pick-up in spotted paca (Cuniculus pacas) / Aspiração folicular por laparoscopia em paca (Cuniculus pacas)

The aim of this work is study the laparoscopic ovum pick-up (LapOPU) technique in spotted paca, describing surgery details, complications and oocyte recovery rate. Nine healthy adult non-pregnant captive females were used, in a total of 39 procedures. When the surgical plane of anaesthesia was achieved, the females were positioned at 20º Trendelenburg. Three 6mm trocars were placed on right and left inguinal and hypogastric regions. Abdomen was inflated with CO2 and the intra-abdominal pressure was stablished in 10mmHg. Follicular punctures were performed moving the ovaries with atraumatic forceps. For punctures, an 18-gauge 3.5 inch long needle attached to a vacuum system with pressure not exceeding 65mmHg was used. Oocytes were recovered into 50mL centrifuge tubes with media composed of PBS supplemented with 10 IU/mL of heparin and kept at 36°C. R Software was used for statistical analysis. Data normality distribution (Shapiro test) and variances homoscedasticity (Bartlett test) were tested and descriptive statistics (mean±SD) was used to present the results. It was only possible to perform LapOPU in 30 of 39 laparoscopies (76.92%). The surgical total time was 37.34 ± 18.53 minutes. The total number of visualized follicles, aspirated follicles, and retrieved oocytes were 502, 415, and 155, respectively. And the same parameters per animal were: 14.34 ± 12.23, 11.86 ± 10.03, and 4.43 ± 4.69 respectively. Oocyte recovery rate was 32.56 ± 27.32%. In conclusion, caudal positioning of portals with slight triangulation allows good viewing of the abdominal cavity and eases the manipulation of the ovaries. Thus this described LapOPU technique is feasible in spotted paca and easy to perform.(AU)

Objetiva-se, com este trabalho, estudar a técnica de aspiração folicular por videolaparoscopia (LapOPU) em pacas, descrevendo detalhes do procedimento cirúrgico, complicações e taxa de recuperação oocitária. Para isso, foram utilizadas nove fêmeas, saudáveis, adultas, não gestantes e mantidas em cativeiro, totalizando 39 procedimentos. Quandoo plano anestésico cirúrgico foi alcançado, as fêmeas foram posicionadas em Trendelenburg com 20º de angulação. Três trocáteres foram colocados nas regiões inguinais direita e esquerda e hipogástrica. O Abdômen foi insuflado com CO2, e a pressão intra-abdominal foi mantida em 10mmHg. Punções foliculares foram realizadas manipulando-se os ovários com pinças atraumáticas. Para aspirações foliculares, usou-se agulha de 18G com bisel curto acoplado ao sistema de vácuo com pressão não excedendo 65mmHg. Oócitos foram recuperados em tubos de centrifugação de 50mL contendo meio composto de PBS suplementado com 10UI/mL de heparina e mantidos a 36ºC. Usou-se software R para análise estatística. Testaram-se a distribuição normal dos dados (teste de Shapiro) e a homocedasticidade das variâncias (teste de Barlett) e se usaram estatísticas descritivas (média±DP) para apresentar os resultados. Das 39 videolaparoscopias, só foi possível realizar LapOPUem 30 delas (76,92%). O tempo cirúrgico total das LapOPU foi de 37,34 ± 18,53 minutos. Os números totais de folículos visualizados, folículos aspirados e oócitos recuperados foram: 502, 415 e 155, respectivamente. E os mesmos parâmetros por animal foram: 14,34 ± 12,23, 11,86 ± 10,03 e 4,43 ± 4,69, respectivamente. A taxa de recuperação foi de 32,56 ± 27,32%. Assim, conclui-se que o posicionamento caudal de portais, com ligeira triangulação, permite uma boa visualização da cavidade abdominal e facilita a manipulação dos ovários, sendo essa técnica de LapOPU viável em pacas e de fácil execução.(AU)

Laparoscopic ovum pick-up in spotted paca ( Cuniculus pacas ) / Aspiração folicular por laparoscopia em paca (Cuniculus pacas)

The aim of this work is study the laparoscopic ovum pick-up (LapOPU) technique in spotted paca, describing surgery details, complications and oocyte recovery rate. Nine healthy adult non-pregnant captive females were used, in a total of 39 procedures. When the surgical plane of anaesthesia was achieved, the females were positioned at 20º Trendelenburg. Three 6mm trocars were placed on right and left inguinal and hypogastric regions. Abdomen was inflated with CO2 and the intra-abdominal pressure was stablished in 10mmHg. Follicular punctures were performed moving the ovaries with atraumatic forceps. For punctures, an 18-gauge 3.5 inch long needle attached to a vacuum system with pressure not exceeding 65mmHg was used. Oocytes were recovered into 50mL centrifuge tubes with media composed of PBS supplemented with 10 IU/mL of heparin and kept at 36°C. R Software was used for statistical analysis. Data normality distribution (Shapiro test) and variances homoscedasticity (Bartlett test) were tested and descriptive statistics (mean±SD) was used to present the results. It was only possible to perform LapOPU in 30 of 39 laparoscopies (76.92%). The surgical total time was 37.34 ± 18.53 minutes. The total number of visualized follicles, aspirated follicles, and retrieved oocytes were 502, 415, and 155, respectively. And the same parameters per animal were: 14.34 ± 12.23, 11.86 ± 10.03, and 4.43 ± 4.69 respectively. Oocyte recovery rate was 32.56 ± 27.32%. In conclusion, caudal positioning of portals with slight triangulation allows good viewing of the abdominal cavity and eases the manipulation of the ovaries. Thus this described LapOPU technique is feasible in spotted paca and easy to perform.(AU)

Objetiva-se, com este trabalho, estudar a técnica de aspiração folicular por videolaparoscopia (LapOPU) em pacas, descrevendo detalhes do procedimento cirúrgico, complicações e taxa de recuperação oocitária. Para isso, foram utilizadas nove fêmeas, saudáveis, adultas, não gestantes e mantidas em cativeiro, totalizando 39 procedimentos. Quandoo plano anestésico cirúrgico foi alcançado, as fêmeas foram posicionadas em Trendelenburg com 20º de angulação. Três trocáteres foram colocados nas regiões inguinais direita e esquerda e hipogástrica. O Abdômen foi insuflado com CO2, e a pressão intra-abdominal foi mantida em 10mmHg. Punções foliculares foram realizadas manipulando-se os ovários com pinças atraumáticas. Para aspirações foliculares, usou-se agulha de 18G com bisel curto acoplado ao sistema de vácuo com pressão não excedendo 65mmHg. Oócitos foram recuperados em tubos de centrifugação de 50mL contendo meio composto de PBS suplementado com 10UI/mL de heparina e mantidos a 36ºC. Usou-se software R para análise estatística. Testaram-se a distribuição normal dos dados (teste de Shapiro) e a homocedasticidade das variâncias (teste de Barlett) e se usaram estatísticas descritivas (média±DP) para apresentar os resultados. Das 39 videolaparoscopias, só foi possível realizar LapOPUem 30 delas (76,92%). O tempo cirúrgico total das LapOPU foi de 37,34 ± 18,53 minutos. Os números totais de folículos visualizados, folículos aspirados e oócitos recuperados foram: 502, 415 e 155, respectivamente. E os mesmos parâmetros por animal foram: 14,34 ± 12,23, 11,86 ± 10,03 e 4,43 ± 4,69, respectivamente. A taxa de recuperação foi de 32,56 ± 27,32%. Assim, conclui-se que o posicionamento caudal de portais, com ligeira triangulação, permite uma boa visualização da cavidade abdominal e facilita a manipulação dos ovários, sendo essa técnica de LapOPU viável em pacas e de fácil execução.(AU)

Influência do método de recuperação oocitária sobre os parâmetros quanti-qualitativos de oócitos bovinos / Influence of the recovery method on the quanti-qualitative parameters of bovine oocytes

Os objetivos foram avaliar os parâmetros quanti-qualitativos de oócitos bovinos após recuperação usando diferentes métodos de colheita e tipos de êmbolo da seringa de aspiração. Assim, dois experimentos foram realizados usando ovários de fêmeas post-mortem. No primeiro experimento, duas técnicas de colheita oocitária foram empregadas: aspiração de folículos (2–8 mm) com agulha 21G e seringa de 5 mL e, fatiamento da superfície ovariana (slicing). No segundo experimento, folículos (2–8 mm) foram aspirados usando seringa com distintos êmbolos (borracha vs. plástico). Os complexos cumulus-oócito (CCOs) foram classificados por critérios morfológicos em viáveis e não viáveis. Em seguida, CCOs foram corados com o azul de cresil brilhante (ACB) (60 min; 26 μM) e classificados como ACB+ (viáveis) e ACB- (não viáveis). Um total de cinco repetições por experimento foi realizado e os dados analisados pelo teste exato de Fisher (P0,05) foi observada entre os tipos de êmbolos quanto aos parâmetros quantitativos. Quanto à qualidade oocitária avaliada por critérios morfológicos, um percentual maior de oócitos viáveis foi recuperado usando êmbolo de borracha (75,4% vs. 58,2%; P<0,05). Em conclusão, oócitos de melhor qualidade podem ser obtidos a partir da aspiração folicular, especialmente usando seringa com êmbolo de borracha.

The aims were to evaluate qualitative-quantitative parameters of bovine oocytes after recovery using different collectionmethods and piston type from the aspiration syringe. Thus, two experiments were performed using ovaries from postmortemfemales. In the first experiment, two techniques of oocyte recovery were used: aspiration of follicles (2–8 mm)with 21G needle and 5 mL syringe, and slicing of the ovarian surface. In the second experiment, follicles (2–8 mm)were aspirated using syringes with different pistons (rubber vs. plastic). The cumulus-oocyte complexes (COCs) wereclassified by morphological criteria as viable and non-viable. Then, COCs were stained with brilliant cresyl blue (BCB)(60 min, 26 µM) and categorized as BCB+(viable) and BCB-(non-viable). A total of five repetitions per experimentwas performed and the data analyzed by Fisher's exact test (P0.05) was observed the piston type as the quantitativeparameters. As the oocyte quality evaluated by morphological criteria, a higher percentage of viable oocytes wererecovered using rubber piston (75.4% vs. 58.2%; P<0.05). In conclusion, better quality oocytes can be obtained fromfollicular aspiration, especially by using a rubber piston syringe

Pregnancy rates in Criollo breed mares after ultrasound-guided follicular aspiration / Taxa de gestação em éguas da raça crioula após aspiração folicular guiada por ultrassom

There are few studies about transvaginal ultrasound-guided follicle aspiration in equine medicine regarding potential complications to future fertility of aspirated mares. In order to evaluate the effect of follicular aspiration on subsequent fertility in mares, two experiments were conducted. In Experiment I, fifteen Criollo mares were allocated to one of three groups according to the diameter of the aspirated follicle during estrus: 25-29mm (n=4; Group 1); 30-34mm (n=6; Group 2); > 35mm (n=5; Group 3) and control group (n=15; Group 4). In Experiment II, the follicular aspiration was attempted in twenty-five mares during diestrous, when at least four follicles (> 5mm) were seen in the transrectal ultrasonography of both ovaries. All visible follicles, between 4 and 8 mm, were aspirated. Thirty-one mares served as control. In Experiments I and II, the pregnancy rates in the following cycle after aspiration were 75.0% (Group 1), 83.3% (Group 2), 60.0% (Group 3), and 73.3% (Group 4 - Control); and 76.0% in the aspirated diestrous group and 77.4% in the control group (non aspirated), respectively. On both experiments, pregnancy rates were similar (P>0.05) in treated and control mares. The results of this study show that the conception rates of the first estrus period following follicular aspiration are not affected by the procedure.

Há poucos estudos sobre aspiração folicular transvaginal guiada por ultrassom na medicina equina abordando complicações futuras na fertilidade das éguas aspiradas. Com o objetivo de avaliar o efeito da aspiração folicular na fertilidade das éguas, foram conduzidos dois experimentos. No experimento I, 15 éguas da raça Crioula foram distribuídas em três grupos de acordo com o diâmetro do folículo aspirado durante o estro: 25-29mm (n=4; grupo 1); 30-34mm (n=6; grupo 2); > 35mm (n=5; grupo 3) e grupo controle (n=15; grupo 4). No experimento II, a aspiração folicular foi realizada em 25 éguas durante o diestro quando pelo menos 4 folículos (>5mm) foram observados na ultrassonografia transretal em ambos os ovários. Foram aspirados todos os folículos visíveis, entre 4 e 8 mm. Trinta e uma éguas serviram como controle. No experimento I, a taxa de prenhez no ciclo seguinte a aspiração foi de 75% (grupo 1), 83,3% (grupo 2), 60% (grupo 3), e 73,3% (grupo 4). No experimento II foi de 76% no grupo aspirado e 77,4% no grupo controle (não aspirado). Em ambos os experimentos, as taxas de prenhez foram similares (P>0,05). Os resultados mostram que a taxa de concepção no primeiro ciclo após a aspiração folicular não é afetada pelo procedimento.

Pregnancy rates in criollo breed mares after ultrasound-guided follicular aspiration

There are few studies about transvaginal ultrasound-guided follicle aspiration in equine medicine regarding potential complications to future fertility of aspirated mares. In order to evaluate the effect of follicular aspiration on subsequent fertility in mares, two experiments were conducted. In Experiment I, fifteen Criollo mares were allocated to one of three groups according to the diameter of the aspirated follicle during estrus: 25-29mm (n=4; Group 1); 30-34mm (n=6; Group 2); > 35mm (n=5; Group 3) and control group (n=15; Group 4). In Experiment II, the follicular aspiration was attempted in twenty-five mares during diestrous, when at least four follicles (> 5mm) were seen in the transrectal ultrasonography of both ovaries. All visible follicles, between 4 and 8 mm, were aspirated. Thirty-one mares served as control. In Experiments I and II, the pregnancy rates in the following cycle after aspiration were 75.0% (Group 1), 83.3% (Group 2), 60.0% (Group 3), and 73.3% (Group 4 - Control); and 76.0% in the aspirated diestrous group and 77.4% in the control group (non aspirated), respectively. On both experiments, pregnancy rates were similar (P>0.05) in treated and control mares. The results of this study show that the conception rates of the first estrus period following follicular aspiration are not affected by the procedure.

Há poucos estudos sobre aspiração folicular transvaginal guiada por ultrassom na medicina equina abordando complicações futuras na fertilidade das éguas aspiradas. Com o objetivo de avaliar o efeito da aspiração folicular na fertilidade das éguas, foram conduzidos dois experimentos. No experimento I, 15 éguas da raça Crioula foram distribuídas em três grupos de acordo com o diâmetro do folículo aspirado durante o estro: 25-29mm (n=4; grupo 1); 30-34mm (n=6; grupo 2); > 35mm (n=5; grupo 3) e grupo controle (n=15; grupo 4). No experimento II, a aspiração folicular foi realizada em 25 éguas durante o diestro quando pelo menos 4 folículos (>5mm) foram observados na ultrassonografia transretal em ambos os ovários. Foram aspirados todos os folículos visíveis, entre 4 e 8 mm. Trinta e uma éguas serviram como controle. No experimento I, a taxa de prenhez no ciclo seguinte a aspiração foi de 75% (grupo 1), 83,3% (grupo 2), 60% (grupo 3), e 73,3% (grupo 4). No experimento II foi de 76% no grupo aspirado e 77,4% no grupo controle (não aspirado). Em ambos os experimentos, as taxas de prenhez foram similares (P>0,05). Os resultados mostram que a taxa de concepção no primeiro ciclo após a aspiração folicular não é afetada pelo procedimento.

Pregnancy rates in Criollo breed mares after ultrasound-guided follicular aspiration / Taxa de gestação em éguas da raça crioula após aspiração folicular guiada por ultrassom

There are few studies about transvaginal ultrasound-guided follicle aspiration in equine medicine regarding potential complications to future fertility of aspirated mares. In order to evaluate the effect of follicular aspiration on subsequent fertility in mares, two experiments were conducted. In Experiment I, fifteen Criollo mares were allocated to one of three groups according to the diameter of the aspirated follicle during estrus: 25-29mm (n=4; Group 1); 30-34mm (n=6; Group 2); > 35mm (n=5; Group 3) and control group (n=15; Group 4). In Experiment II, the follicular aspiration was attempted in twenty-five mares during diestrous, when at least four follicles (> 5mm) were seen in the transrectal ultrasonography of both ovaries. All visible follicles, between 4 and 8 mm, were aspirated. Thirty-one mares served as control. In Experiments I and II, the pregnancy rates in the following cycle after aspiration were 75.0% (Group 1), 83.3% (Group 2), 60.0% (Group 3), and 73.3% (Group 4 - Control); and 76.0% in the aspirated diestrous group and 77.4% in the control group (non aspirated), respectively. On both experiments, pregnancy rates were similar (P>0.05) in treated and control mares. The results of this study show that the conception rates of the first estrus period following follicular aspiration are not affected by the procedure.(AU)

Há poucos estudos sobre aspiração folicular transvaginal guiada por ultrassom na medicina equina abordando complicações futuras na fertilidade das éguas aspiradas. Com o objetivo de avaliar o efeito da aspiração folicular na fertilidade das éguas, foram conduzidos dois experimentos. No experimento I, 15 éguas da raça Crioula foram distribuídas em três grupos de acordo com o diâmetro do folículo aspirado durante o estro: 25-29mm (n=4; grupo 1); 30-34mm (n=6; grupo 2); > 35mm (n=5; grupo 3) e grupo controle (n=15; grupo 4). No experimento II, a aspiração folicular foi realizada em 25 éguas durante o diestro quando pelo menos 4 folículos (>5mm) foram observados na ultrassonografia transretal em ambos os ovários. Foram aspirados todos os folículos visíveis, entre 4 e 8 mm. Trinta e uma éguas serviram como controle. No experimento I, a taxa de prenhez no ciclo seguinte a aspiração foi de 75% (grupo 1), 83,3% (grupo 2), 60% (grupo 3), e 73,3% (grupo 4). No experimento II foi de 76% no grupo aspirado e 77,4% no grupo controle (não aspirado). Em ambos os experimentos, as taxas de prenhez foram similares (P>0,05). Os resultados mostram que a taxa de concepção no primeiro ciclo após a aspiração folicular não é afetada pelo procedimento.(AU)

Efeito da melatonina na produção in vitro de embriões bovinos

OBJETIVO: Avaliar os efeitos da melatonina na produção in vitro de embriões bovinos. MATERIAIS E MÉTODO: O experimento foi conduzido no LABRA da UEMA. Os ovários foram coletados no matadouro municipal. Os complexos cumulus-oócitos (CCOs) foram distribuídos entre os tratamentos 0, 10-1, 10-3 e 10-5 µmol/L de melatonina. O experimento foi dividido em duas fases, onde a primeira avaliou o efeito de diferentes concentrações de melatonina (tratamentos) sobre a taxa de maturação dos CCOs e a segunda, o efeito dos tratamentos com melatonina sobre a produção in vitro de embriões bovinos. Foram utilizados 100 CCOs por tratamento, durante as duas fases. Somente os CCOs de Grau I e II, foram selecionados para maturação in vitro. RESULTADOS: Na primeira fase, observou-se que não houve diferença significativa na taxa de maturação in vitro dos CCOs cultivados. Na segunda fase, as taxas de clivagem dos grupos: controle, 10-3 M e 10-5 M obtiveram taxas semelhantes e não houve diferença entre os tratamentos. O grupo 10-1 foi estatisticamente inferior. Nas taxas de blastocistos, o grupo 10-5 M foi estatisticamente superior aos demais grupos em estudo, o restante dos grupos não houve diferença entre si. As taxas de desenvolvimento embrionário baseado no estádio de desenvolvimento in vitro observou-se que na proporção de mórulas, o grupo 10-3 M foi superior a taxa de obtida pelo grupo 10-5 M e semelhante aos grupos Controle e 10-1 M. Os grupos Controle, 10-1 M e 10-5 M foram semelhantes entre si (P<0,05). CONCLUSÃO: A suplementação da melatonina no meio de maturação in vitro não evidenciou melhoras na taxa de maturação dos oócitos. A suplementação de melatonina na produção in vitro de embriões em diferentes concentrações não foi capaz de melhorar a fase pós fecundação in vitro, no entanto o grupo 10-5 M apresentou maior taxa de clivagem, mórula e blastocistos durante o período de cultivo.

OBJECTIVE: To evaluate the effects of melatonin on the in vitro bovine embryos production. MATERIALS AND METHODS: The experiment was conducted at LABRA/UEMA. The ovaries were collected at the municipal slaughterhouse. The cumulus-oocyte complexes (COCs) were distributed among treatments 0, 10-1, 10-3 e 10-5 µmol/L of melatonin. The experiment was divided into two phases, which the first one was to evaluate the effect of different concentrations of melatonin (treatments) on the maturation rate of COCs and the second, the effect of melatonin treatments on the in vitro production of bovine embryos. 100 COCs were used per treatment during both phases of the experiment. Only the Grade I and II COCs were selected for in vitro maturation. RESULTS: In the first phase, it was observed that there was no significant difference in the in vitro maturation rate of the cultivated COCs. In the second phase, the cleavage rates of the control groups, 10-3 M and 10-5 M obtained similar rates and there was no difference between these treatments. The 10-1 group was statistically lower. Concerning the blastocyst rates, the 10-5 M treatment group was statistically superior to the other groups under study, the rest of the groups did not present significant difference among each other. Embryonic development rates based on in vitro developmental stage showed that in morulae ratio, the 10-3 M group was higher than the rate obtained by the 10-5 M group and similar to the Control and 10-1 M groups. Control groups, 10-1 M and 10-5 M were similar to each other (P <0.05). CONCLUSION: The supplementation of melatonin in the medium of in vitro maturation showed no improvement in oocyte maturation rate. Melatonin supplementation in the in vitro production of embryos at different concentrations was not able to improve the in vitro post-fertilization phase, however the 10-5 M group presented more cleavage, morula, blastocysts rate during the culture period.

Produção in vitro de embriões de bovinos da raça Nelore oriundos de ovócitos de ovários com e sem corpo lúteo / In vitro production of Nelore bovine embryos originated from oocytes from ovaries with and without corpus luteum

Comparou-se a produção de embriões a partir de ovócitos oriundos de ovários com e sem corpo lúteo de vacas da raça Nelore, em relação à qualidade e quantidade de ovócitos obtidos, embriões produzidos, taxa de prenhez e proporção dos sexos. Foram realizadas aspirações foliculares dos dois ovários de 219 vacas em 250 seções, igualmente distribuídas em cinco grupos, sendo G1=fêmeas gestantes; G2=não gestantes, com CL e submetidas a tratamento hormonal com progestágeno+BE+PGF2µ; G3=não gestantes, sem CL e com o mesmo tratamento de G2; G4=não gestantes, com presença de CL e sem tratamento; G5=não gestantes, sem presença de CL e sem tratamento. Os resultados foram avaliados pela análise de variância (ANOVA) e aplicado o Teste de Tukey para comparação entre médias, a 5% de significância, pelo programa SISVAR. Já para comparação de proporção de sexos dentro e entre os grupos, foi utilizado o teste de comparação múltipla de proporções. O G4 produziu maior média de ovócitos totais aspirados que G2 e G3. Comparando-se os três grupos que apresentavam CL (G1, G2, G4), o G4 foi superior a G1 e G2 em ovócitos totais, no ovário com e sem CL. Em ovócitos viáveis, G2 foi superior a G1 no ovário com CL. Os ovócitos obtidos de ovários com CL é que resultaram em melhores índices de produção de embriões. As vacas gestantes produziram melhor nos ovários sem CL, com mais ovócitos viáveis (p0,05), em relação ao ovário com CL. As taxas de prenhez e proporção dos sexos foram semelhantes entre os grupos (p>0,05). A concentração de progesterona (P4) foi diferente entre os grupos, mas não influenciou as variáveis analisadas. A utilização do tratamento hormonal não melhorou os resultados de nenhuma variável. Portanto, o melhor critério de escolha de doadoras Nelore para programas de Produção in vitro (PIV) de embriões é o conhecimento individual de cada animal ao longo das seções de aspiração folicular.

This study aimed to compare the quality and quantity of oocytes aspirated from ovaries containing or not corpus luteum (CL), the development of embryos, pregnancy rate and sex ratio among embryos after IVP in Nellore cows. Follicular aspirations were performed in both ovaries of 219 cows in 250 sections, and equally divided into five groups: G1 = pregnant, G2 = not pregnant, with CL and submitted to hormonal therapy with progestin+BE+PGF2µ; G3 = not pregnant, without CL and with the same treatment of G2; G4 = not pregnant, with the presence of CL and no treatment; G5 = not pregnant, without the presence of CL and no treatment. The statistical analysis was performed with analysis of variance (ANOVA) and Tukey Test was applied to compare means at 5% significance level, by SISVAR program. For the comparison of sex ratio within and between groups, the multiple comparison test of proportions was used. The G4 produced higher mean of total aspirated oocytes than G2 and G3. Comparing the three groups with CL, G4 showed higher number of oocytes than G1 and G2 in both ovaries. The G2 presented more viable oocytes than G1 in the CL-containing ovary. The ovaries without CL showed better production in pregnant cows despite of viable oocytes (p0.05) when compared with ovaries presenting CL. Oocytes obtained from ovaries with CL resulted in better rates of embryo production. Pregnancy rates and sex ratio were similar among groups (p>0.05). The P4 concentration was different between groups, but it did not influence any variable. The use of hormonal treatment did not improve the results of any variable. Therefore, choosing Nellore donors for IVP programs depends on knowing each animal individually along the sections of OPU.

Produção in vitro de embriões de bovinos da raça Nelore oriundos de ovócitos de ovários com e sem corpo lúteo / In vitro production of Nelore bovine embryos originated from oocytes from ovaries with and without corpus luteum

Comparou-se a produção de embriões a partir de ovócitos oriundos de ovários com e sem corpo lúteo de vacas da raça Nelore, em relação à qualidade e quantidade de ovócitos obtidos, embriões produzidos, taxa de prenhez e proporção dos sexos. Foram realizadas aspirações foliculares dos dois ovários de 219 vacas em 250 seções, igualmente distribuídas em cinco grupos, sendo G1=fêmeas gestantes; G2=não gestantes, com CL e submetidas a tratamento hormonal com progestágeno+BE+PGF2µ; G3=não gestantes, sem CL e com o mesmo tratamento de G2; G4=não gestantes, com presença de CL e sem tratamento; G5=não gestantes, sem presença de CL e sem tratamento. Os resultados foram avaliados pela análise de variância (ANOVA) e aplicado o Teste de Tukey para comparação entre médias, a 5% de significância, pelo programa SISVAR. Já para comparação de proporção de sexos dentro e entre os grupos, foi utilizado o teste de comparação múltipla de proporções. O G4 produziu maior média de ovócitos totais aspirados que G2 e G3. Comparando-se os três grupos que apresentavam CL (G1, G2, G4), o G4 foi superior a G1 e G2 em ovócitos totais, no ovário com e sem CL. Em ovócitos viáveis, G2 foi superior a G1 no ovário com CL. Os ovócitos obtidos de ovários com CL é que resultaram em melhores índices de produção de embriões. As vacas gestantes produziram melhor nos ovários sem CL, com mais ovócitos viáveis (p<0,05) e iguais em embriões (p>0,05), em relação ao ovário com CL. As taxas de prenhez e proporção dos sexos foram semelhantes entre os grupos (p>0,05). A concentração de progesterona (P4) foi diferente entre os grupos, mas não influenciou as variáveis analisadas. A utilização do tratamento hormonal não melhorou os resultados de nenhuma variável. Portanto, o melhor critério de escolha de doadoras Nelore para programas de Produção in vitro (PIV) de embriões é o conhecimento individual de cada animal ao longo das seções de aspiração folicular.(AU)

This study aimed to compare the quality and quantity of oocytes aspirated from ovaries containing or not corpus luteum (CL), the development of embryos, pregnancy rate and sex ratio among embryos after IVP in Nellore cows. Follicular aspirations were performed in both ovaries of 219 cows in 250 sections, and equally divided into five groups: G1 = pregnant, G2 = not pregnant, with CL and submitted to hormonal therapy with progestin+BE+PGF2µ; G3 = not pregnant, without CL and with the same treatment of G2; G4 = not pregnant, with the presence of CL and no treatment; G5 = not pregnant, without the presence of CL and no treatment. The statistical analysis was performed with analysis of variance (ANOVA) and Tukey Test was applied to compare means at 5% significance level, by SISVAR program. For the comparison of sex ratio within and between groups, the multiple comparison test of proportions was used. The G4 produced higher mean of total aspirated oocytes than G2 and G3. Comparing the three groups with CL, G4 showed higher number of oocytes than G1 and G2 in both ovaries. The G2 presented more viable oocytes than G1 in the CL-containing ovary. The ovaries without CL showed better production in pregnant cows despite of viable oocytes (p<0.05), and similar embryo production (p>0.05) when compared with ovaries presenting CL. Oocytes obtained from ovaries with CL resulted in better rates of embryo production. Pregnancy rates and sex ratio were similar among groups (p>0.05). The P4 concentration was different between groups, but it did not influence any variable. The use of hormonal treatment did not improve the results of any variable. Therefore, choosing Nellore donors for IVP programs depends on knowing each animal individually along the sections of OPU.(AU)

Efeitos da suplementação com fontes de ácidos graxos em doadoras da raça holandesa durante o pré e pós-parto sobre o retorno à ciclicidade e produção in vitro de embriões / Effects of fatty acid supplementation in Holstein cows at pre and postpartum period, on estrous cycle return and in vitro production of embryos

A suplementação de bovinos leiteiros com fontes de ácidos graxos poli-insaturados (AGPs) é uma prática utilizada para aumentar o nível energético das dietas, além de proporcionar efeitos positivos nas funções reprodutivas de importantes tecidos, incluindo hipotálamo, hipófise, ovários e útero. O trabalho foi conduzido com objetivo de avaliar as condições reprodutivas do pós-parto, número de folículos, presença de corpo lúteo (CL), concentração de progesterona (P), quantidade de oócitos viáveis e totais e a produção in vitro de embriões (PIVE) de doadoras multíparas da raça Holandesa suplementadas com dieta rica em AGPs protegido (principalmente ácido linoleico - n-6) e não protegido (principalmente ácido linolênico - n-3) durante o pré e pós-parto. As dietas foram fornecidas por 30 dias pré-parto e 60 dias pós-parto. As doadoras foram divididas aleatoriamente em 3 grupos: Controle (n=6), Megalac-E® (n=5; suplementados com fonte de gordura protegida 100 g/doadora/dia no pré-parto e 300 g/doadora/dia no pós-parto) e linhaça (n=5); fonte de gordura não protegida contendo 1 kg/doadora/dia no pré-parto e 1,5 kg/ doadora/dia no pós-parto). Os animais foram submetidos à aspiração folicular (OPU) nos dias 30, 45 e 60 pós-parto. Os oócitos recuperados foram selecionados e os viáveis submetidos aos procedimentos da PIVE. Os dados foram analisados pelo método dos quadrados mínimos utilizando análise de variância pelo procedimento GLM. As diferenças entre as médias foram comparadas pelo teste de Tukey com significância de 5%. Não foi detectado efeito de tratamento de suplementação, de dias de aspirações pós-parto e das interações sobre as variáveis: quantidade de oócitos viáveis, taxa de oócitos viáveis, número de clivagem, de PIVE, taxa de doadoras com CL concentração de P. (P>0,05). No entanto, foi observado maior número de folículos e de oócitos totais no grupo suplementado com linhaça em relação ao grupo Megalac-E® e Controle (P<0,05). A suplementação com AGPs não aumentou o número de oócitos viáveis, a PIVE e o retorno à ciclicidade.

The supplementation of dairy cattle with sources of polyunsaturated fatty acids (PUFA) can be used to increase the energy level of the diet in addition to having positive effects on reproductive functions of important tissues including the hypothalamus, pituitary, ovaries and uterus. The aims of this study were to evaluate the reproductive conditions of the postpartum, number of follicles, corpus luteum (CL) presence, concentration of progesterone (P4), aspirated oocytes, amount of viable oocytes and in vitro production of embryos (IVPE) of the Holstein multiparous donors supplemented with rich diet in protected PUFA (especially linoleic acid - n-6) and non-protected (especially linolenic acid - n-3) during pre and postpartum. The diets had been given for pre-partum during 30 d and postpartum 60 d. The donors were divided into three groups: Control (n=6), Megalac-E® (n=5; supplemented with protected fat source 100 g/donor/day in pre-partum and 300 g/donor/day in postpartum) and linseed (n=5; supplemented with fat source unprotected containing 1 kg/donor/day pre-partum and 1.5 kg/donor/day in postpartum). The animals were submitted to ovum pick-up (OPU) on days 30, 45 and 60 d postpartum. The recovered oocytes were selected and the viable ones were submitted to IVPE procedures. The data were analyzed by the method of least squares variance using the GLM protocol. The differences between averages were compared by Tukey test with 5% significance. There was no detectable effect of treatment, aspirations of postpartum days and interactions on variables: CL presence, concentration of P4, amount of viable oocytes, viable oocytes rate, IVPE and embryos production rate. However, was observed in the group supplemented with linseed more follicles and total oocytes than Megalac-E® and Control group. Supplementation with PUFA didn't increase the number of viable oocytes and IVPE.

Peculiaridades da coleta de oócitos para produção in vitro de embriões ovinos / Peculiarities of oocyte harvesting for in vitro production of sheep embryos

A expansão da ovinocultura brasileira impulsionou o desenvolvimento de novas biotécnicas de reprodução assistida visando ao aumento dos índices produtivos em concomitância com o acelerado progresso genético. Neste contexto, a produção in vitro de embriões (PIV) ovinos se intensificou, devido à possibilidade de otimização das fêmeas doadoras de oócitos e de incremento da quantidade de embriões produzidos. Entre os vários fatores implicados no sucesso dessa biotecnologia, a qualidade dos complexos cumulus-oophorus (COCs), caracterizada, principalmente, pela presença das células do cumulus, é considerada crucial. Deste modo, é imprescindível a ampliação do conhecimento referente aos diferentes métodos de coleta dos COCs e suas peculiaridades, visando a futuros aperfeiçoamentos biotecnológicos.(AU)

The expansion of Brazilian sheep rearing promoted the development of new biotechnologies of assisted reproduction in order to increase the production indices concomitantly with accelerated genetic progress. In this context, the in vitro production (IVP) of sheep embryos has intensified due to the possibility of optimization of the female oocytes donor and increase the number of embryos produced. Among the various factors involved in the success of this biotechnology, the cumulus-oophorus complexes (COCs) quality, characterized, mainly, by the presence of cumulus cells, is considered crucial. Thus, it is essential to increase the knowledge on the different methods of collection of COCs and their peculiarities, aiming for future biotechnological improvements. (AU)

Peculiaridades da coleta de oócitos para produção in vitro de embriões ovinos / Peculiarities of oocyte harvesting for in vitro production of sheep embryos

A expansão da ovinocultura brasileira impulsionou o desenvolvimento de novas biotécnicas de reprodução assistida visando ao aumento dos índices produtivos em concomitância com o acelerado progresso genético. Neste contexto, a produção in vitro de embriões (PIV) ovinos se intensificou, devido à possibilidade de otimização das fêmeas doadoras de oócitos e de incremento da quantidade de embriões produzidos. Entre os vários fatores implicados no sucesso dessa biotecnologia, a qualidade dos complexos cumulus-oophorus (COCs), caracterizada, principalmente, pela presença das células do cumulus, é considerada crucial. Deste modo, é imprescindível a ampliação do conhecimento referente aos diferentes métodos de coleta dos COCs e suas peculiaridades, visando a futuros aperfeiçoamentos biotecnológicos.

The expansion of Brazilian sheep rearing promoted the development of new biotechnologies of assisted reproduction in order to increase the production indices concomitantly with accelerated genetic progress. In this context, the in vitro production (IVP) of sheep embryos has intensified due to the possibility of optimization of the female oocytes donor and increase the number of embryos produced. Among the various factors involved in the success of this biotechnology, the cumulus-oophorus complexes (COCs) quality, characterized, mainly, by the presence of cumulus cells, is considered crucial. Thus, it is essential to increase the knowledge on the different methods of collection of COCs and their peculiarities, aiming for future biotechnological improvements.

Requirement of follicular estradiol for the onset of luteolysis in Bos indicus cows supplemented with progesterone at early diestrus

Em vacas de corte, a suplementação com progesterona injetável de longa ação (iP4) no diestro inicial tem efeitos paradoxais, uma vez que tanto aumenta a fertilidade a campo quanto induz a antecipação da luteólise em uma parte dos animais tratados. Considerando que o estradiol (E2) proveniente dos folículos ovarianos durante a fase luteal desempenha um papel central na indução da liberação de PGF2 uterina e regressão luteal, testou-se a hipótese central de que a ausência de folículos pós-desvio previne a antecipação do momento da luteólise e prolonga o ciclo estral em vacas Bos indicus suplementadas com iP4. Esta dissertação consiste em dois estudos. Um primeiro estudo foi realizado para validar a utilização de escovas citológicas (cytobrush) como uma ferramenta para coletar amostras sequenciais do endométrio para caracterizar as mudanças temporais no transcriptoma ao longo do ciclo estral. Concluiu-se que a técnica de cytobrush foi confirmada como um método confiável, repetível, e seguro para o estudo da biologia uterina bovina in vivo. No segundo estudo, vacas Nelore cíclicas foram sincronizadas e distribuídas em um arranjo fatorial 2 x 2 para receber tratamento com placebo ou 300 mg de iP4 três dias após a ovulação (D0), e serem submetidos ou não à aspiração folicular (AF) durante a fase lútea. Amostras endometriais foram coletadas no D15, D17 e D19 usando a técnica de cytobrush, e a abundância de transcritos foi medida por qPCR. A iP4 diminuiu o tamanho do maior folículo no D6 e a área do CL entre D8 e D10 comparado aos grupos placebo. Vacas submetidas à AF tiveram um ciclo mais longo, porém o momento da luteólise foi semelhante ao das vacas não aspiradas. O tratamento com iP4 e AF tendeu a adiantar o momento da regressão lútea estrutural ( D16). Além disso, nos momentos precedentes à luteólise (D11 ao D16), vacas desse grupo detectadas em luteólise antes ou no D16 apresentaram um CL menor em comparação com vacas do mesmo grupo em luteólise após o D16. Adicionalmente, vacas tratadas com iP4 com luteólise precoce apresentaram um menor CL ao longo da fase lútea. Não houve diferenças significativas na abundância de transcritos endometriais relacionados com a programação (PGR, ESR1) ou execução (OXTR, PTGS2) da liberação de PGF2. Em resumo, a suplementação com iP4 no início do diestro afetou o crescimento do CL mas não modulou os transcritos endometriais associados com a luteólise, sugerindo que o componente uterino pode não estar envolvido neste processo. Conclui-se que CLs comprometidos pela exposição à iP4 durante a luteogênese são mais susceptíveis à regredir antecipadamente, e isto pode ser exacerbado por baixas concentrações de E2 resultantes da AF. Em conclusão, rejeitamos a hipótese de que a redução do E2 folicular previne a antecipação da luteólise induzida pela iP4 em vacas Bos indicus.

In beef cows, long-acting injectable progesterone (iP4) supplementation in the early diestrus has paradoxical effects, as it both increases fertility in the field as well as induces anticipation of luteolysis in part of the treated animals. Considering that estradiol (E2) from the ovarian follicles during the luteal phase plays a central role in the induction of uterine PGF2 release and luteal regression, here we tested the central hypothesis that the absence of post-deviation follicles (i.e., a low E2 tone) delays the early onset of luteolysis and extends the estrous cycle in Bos indicus cows supplemented with iP4. This dissertation consists of two studies. A first study was carried out to validate the use of cytologic brushes (cytobrush) as a tool to collect sequential samples of endometrium to characterize temporal changes in the transcriptome along the estrous cycle. It was concluded that the cytobrush technique was confirmed as a reliable, repeatable, and safe method for studying bovine uterine biology in vivo. In the second study, cyclic Nelore cows were synchronized and distributed in a 2 x 2 factorial arrangement to receive treatment with placebo or 300 mg iP4 three days after ovulation (D0), and to be subjected or not to follicular aspiration (FA) during the luteal phase. Endometrial samples were collected on D15, D17 and D19 using the cytobrush technique, and abundance of transcripts was measured by qPCR. The iP4 decreased the size of the largest follicle on D6 and the area of the CL between D8 and 10 compared to the placebo groups. Cows submitted to FA had a longer cycle but timing of luteolysis was similar to non-FA cows. Treatment with iP4 and submitted to FA tended to advance the timing of structural luteal regression ( D16). Furthermore, in the moments preceding luteolysis (D11 to D16), cows from this group that underwent luteolysis before or at D16 presented a smaller CL compared with cows of the same group that underwent luteolysis after D16. In addition, cows treated with iP4 that presented early luteolysis had a smaller CL across the luteal phase. There were no significant differences in the abundance of endometrial transcripts related to programming (PGR, ESR1) or execution (OXTR, PTGS2) of PGF2 release. In summary, supplementation of P4 at early diestrus affected CL growth but did not modulate endometrial transcripts associated with luteolysis, suggesting that the uterine component might not be involved in this process. It is concluded that CLs impaired by exposure to iP4 during luteogenesis are most likely to undergo early luteal regression, and this may be exacerbated by low E2 concentrations resulting from FA. In conclusion, we rejected the hypothesis that reduced follicular E2 could prevent iP4-induced early onset of luteolysis in Bos indicus cows.

FATORES QUE INFLUENCIAM A PROBABILIDADE DE PRENHEZES DE EMBRIÕES PRODUZIDOS IN VITRO EM UM REBANHO DA RAÇA GIR

Diante da importância da raça Gir e das biotécnicas da reprodução animal para o melhoramento genético dessa raça, tornam-se necessários estudos que busquem melhorar os índices de eficiência da técnica e investigar fatores genéticos e não genéticos que possam influenciar positivamente a produção de embriões. A relação entre a eficiência dos sistemas de produção de embriões e os resultados de prenhez, no entanto, permanecem controversos. Além disso, a produção e a qualidade de oócitos recuperados por meio da aspiração folicular são influenciados por fatores genéticos, como a endogamia. O objetivo desse estudo foi avaliar a probabilidade de prenhez de embriões produzidos in vitro derivados de lotes de doadoras da raça Gir com diferentes índices de eficiência relativa e, em seguida, estimar parâmetros genéticos e avaliar os efeitos da endogamia sobre a quantidade e qualidade de oócitos obtidos de doadoras da raça Gir por meio de aspiração folicular guiada por ultrassonografia. Os resultados sugerem que não há nenhuma relação entre o número médio ou a qualidade do COC recuperado por OPU, a eficiência de PIVE e a probabilidade de prenhez de embriões produzidos in vitro. Também observou-se que é possível alcançar o progresso genético para as características reprodutivas em bovinos da raça Gir por meio da seleção.

Given the importance of Gir cattle and biotechnologies of animal reproduction for genetic improvement of the breed, studies are necessary to improve the efficiency indices of the technique and to investigate genetic and nongenetic factors that positively influence the production of embryos. The relationship between the efficiency of embryo production systems and the results of the pregnancy, however, remains controversial. Furthermore, the yield and quality of oocytes retrieved by follicular aspiration are influenced by genetic factors, such as inbreeding. The aim of this study was to evaluate the probability of pregnancy of in vitro produced embryos derived from lots of Gir donor with different levels of relative efficiency and then to estimate genetic parameters and to evaluate the effects of inbreeding on the quantity and quality oocytes from Gir donor by follicular aspiration guided by ultrasound. The results suggest that there is no relationship between the average number or quality of the COC recovered by OPU, the IVP efficiency and the probability of pregnancy in vitro produced embryos. It was also observed that it is possible to achieve genetic progress for reproductive traits in cattle Gir through the selection.

Enhancement of oocytes obtainment in Nelore heifers (Bos taurus indicus) treated with progesterone injection and benzoate of estradiol / Incremento na obtenção de oócitos em novilhas Nelore (Bos taurus indicus) tratadas com progesterona injetável e benzoato de estradiol

The aim of this study was to evaluate two pre-aspiration protocols associated with PGF2a. Nelore heifers (n=14), not pregnant, body score of 2.5 (scale of 1 to 5) were used. All animals were submitted to two treatments (cross over) to control the follicular wave of growth, one by follicular ablation 3 days before the aspiration (PAF) and another by hormonal control with estrogen and injectable progesterone (PCH). Data were analyzed by ANOVA and significant differences were compared by Tukey test, with significance level of 5%. The hormonal control protocol (PCH) provided advantages as higher average of follicles and oocytes, reduction in the number of corpus luteum and one procedure less the follicle ablation. We concluded that the hormone control protocol (PCH) is a viable alternative for pre-aspiration treatments, with additional benefits for the absence of corpus luteum at the time of follicular aspiration.

O objetivo deste estudo foi comparar dois protocolos pré-aspiração folicular associados com PGF2a. Foram utilizadas 14 novilhas da raça Nelore, não gestantes, com escore corporal de 2,5 (escala de 1 a 5). Todos os animais foram submetidos aos dois tratamentos (cross over) para controle da onda de crescimento folicular, um através da ablação de todos os folículos 3 dias antes da aspiração folicular (PAF) e outro por controle hormonal (PCH) com benzoato de estradiol e progesterona injetável. Os dados foram analisados pelo ANOVA e as diferenças significativas pelo teste de Tukey, com nível de significância de 5 %. O protocolo controle hormonal (PCH) mostrou-se vantajoso por propiciar maior média de folículos e oócitos, além de redução no número de corpos lúteos evitando também o procedimento extra de aspiração prévia para ablação dos folículos. Conclui-se que o protocolo hormonal (PCH) apresentado mostra-se uma alternativa viável para tratamentos pré-aspiração, havendo benefícios adicionais pela ausência de corpo lúteo no momento da aspiração folicular.

Efeito da pré-estimulação ovariana sobre características de oócitos após punção folicular em bovinos / Effect of ovarian pre-stimulation on the ultrasound-guided follicular puncture

Avaliaram-se os efeitos da pré-estimulação ovariana com FSH e da imunização ativa contra inibina suína sobre o número e classificação morfológica de oócitos recuperados por punção folicular. Catorze vacas da raça Gir, pluríparas e não-lactantes, foram distribuídas em: TI - submetidas a pré-estimulação com 250 UI de FSH (n=4), TII - submetidas a imunização ativa contra inibina suína (n=4) e TIII - não tratadas (n=6; controle). Todos os animais tiveram seus folículos com diâmetro superior a três milímetros aspirados uma vez por semana, durante 10 semanas consecutivas. O TI apresentou aumento na população folicular total (P<0,05) e no número de folículos puncionados (P<0,001), porém a taxa de recuperação foi inferior à dos tratamentos II e III (68,8 por cento vs. 78,4 por cento e 76,3 por cento, respectivamente; P<0,01). O TII não afetou as principais características ovarianas, exceto pelo aumento no número de folículos de tamanho médio (P<0,01). O TI produziu maior percentual de oócitos viáveis (77,2 por cento vs. 69,8 por cento; P<0,05) e de oócitos de Grau I (19,8 por cento vs. 11,6 por cento; P<0,001) do que o TIII. Os tratamentos I e II reduziram o percentual de oócitos degenerados (16,4 por cento e 16,8 por cento vs. 22,3 por cento; P<0,05). A pré-estimulação ovariana com FSH demonstrou ser a alternativa mais consistente para aumentar a qualidade dos oócitos recuperados de vacas zebuínas.(AU)

The aim of this study was to evaluate the effects of ovarian pre-stimulation with FSH and active immunization against swine inhibin on the number and quality of oocytes recovered by follicular puncture. Pluriparous, non-lactating Gir cows (n=14) were distributed as: TI - pre-treatment with 250 IU of FSH (n=4), TII - active immunization against swine inhibin (n=4) and TIII - not treated (n=6; control group). All animals had their ovarian follicles above three millimeters in diameter aspirated once a week during 10 consecutive weeks. The TI presented an increase in total follicular population (P<0.05) and in the number of punctured follicles (P<0.001), but reduced recovery rate when compared to treatments II and III (68.8% vs. 78.4% and 76.3%, respectively; P<0.01). The TII did not affect the main ovarian characteristics, except for an increase in the number of medium follicles (P<0.01). Treatment I yielded a higher percentage of viable oocytes (77.2% vs. 69.8%; P<0.05) and oocytes Grade I (19.8% vs. 11.6%; P<0.001) than TIII. Both treatments I and II resulted in reduction of the percentage of degenerated oocytes (16.4% and 16.8% vs. 22.3%; P<0.05). Ovarian pre-stimulation with FSH was the most consistent treatment for increasing quality of oocytes recovered from Zebu cattle.(AU)

Enhancement of oocytes obtainment in Nelore heifers (Bos taurus indicus) treated with progesterone injection and benzoate of estradiol / Incremento na obtenção de oócitos em novilhas Nelore (Bos taurus indicus) tratadas com progesterona injetável e benzoato de estradiol

The aim of this study was to evaluate two pre-aspiration protocols associated with PGF2a. Nelore heifers (n=14), not pregnant, body score of 2.5 (scale of 1 to 5) were used. All animals were submitted to two treatments (cross over) to control the follicular wave of growth, one by follicular ablation 3 days before the aspiration (PAF) and another by hormonal control with estrogen and injectable progesterone (PCH). Data were analyzed by ANOVA and significant differences were compared by Tukey test, with significance level of 5%. The hormonal control protocol (PCH) provided advantages as higher average of follicles and oocytes, reduction in the number of corpus luteum and one procedure less the follicle ablation. We concluded that the hormone control protocol (PCH) is a viable alternative for pre-aspiration treatments, with additional benefits for the absence of corpus luteum at the time of follicular aspiration.

O objetivo deste estudo foi comparar dois protocolos pré-aspiração folicular associados com PGF2a. Foram utilizadas 14 novilhas da raça Nelore, não gestantes, com escore corporal de 2,5 (escala de 1 a 5). Todos os animais foram submetidos aos dois tratamentos (cross over) para controle da onda de crescimento folicular, um através da ablação de todos os folículos 3 dias antes da aspiração folicular (PAF) e outro por controle hormonal (PCH) com benzoato de estradiol e progesterona injetável. Os dados foram analisados pelo ANOVA e as diferenças significativas pelo teste de Tukey, com nível de significância de 5 %. O protocolo controle hormonal (PCH) mostrou-se vantajoso por propiciar maior média de folículos e oócitos, além de redução no número de corpos lúteos evitando também o procedimento extra de aspiração prévia para ablação dos folículos. Conclui-se que o protocolo hormonal (PCH) apresentado mostra-se uma alternativa viável para tratamentos pré-aspiração, havendo benefícios adicionais pela ausência de corpo lúteo no momento da aspiração folicular.