Resumo
A oleuropeína é o composto fenólico mais abundante presente nas folhas da oliveira, sendo que muitos estudos vêm demonstrando que este composto apresenta importantes propriedades antimicrobiana, antioxidante, anti-inflamatória, entre outras, surgindo o interesse em estudos de métodos para sua extração e aplicação em produtos na área alimentícia, cosmética e farmacêutica. O objetivo deste estudo foi a extração da oleuropeína à partir de folhas de oliva, utilizando solvente não tóxico, para posterior aplicação dos extratos em óleos vegetais a fim de se verificar seu efeito sobre a estabilidade oxidativa dos mesmos. O solvente selecionado para o estudo foi uma mistura de etanol e água (70:30, em massa, condição obtida através de um trabalho prévio), na presença de 1 % de ácido acético. Em uma primeira etapa, foram realizados experimentos de extração utilizando-se as técnicas de maceração (tipo I) e ultrassom (tipo II), em diferentes condições de temperatura (20, 30, 40, 50 e 60°C). Em uma segunda etapa, através de experimentos com maceração à temperatura ambiente, estudou-se o efeito da razão folhas:solvente (1:8, 1:6 e 1:3) e a influência da presença de ácido acético sobre o processo de extração (tipo III). Por fim, realizando-se a maceração na presença de ácido acético, temperatura ambiente e proporção folhas: solvente igual a 1:3, realizaram-se extrações sequenciadas a partir de uma mesma matéria-prima (tipo IV). Os resultados desses experimentos foram expressos em rendimento de oleuropeína (RO), teor de oleuropeína nos extratos (TO) e rendimento global (RG). Analisando-se os experimentos I e II, verificou-se que a temperatura não exerceu influência significativa sobre as respostas RO, TO e RG. Além disso, verificou-se que os valores das respostas para os experimentos com a maceração foram um pouco maiores do que os valores obtidos para as extrações com o auxílio do ultrassom. Nos experimentos tipo III, em linhas gerais, observou-se a influência positiva da presença do ácido acético sobre as respostas estudadas. Verificou-se também que, na presença de ácido, o aumento da quantidade de solvente na extração conduz ao aumento de RO e RG, e à diminuição de TO. Através do experimento tipo IV, constatou-se que mesmo após quatro extrações sequenciadas, ainda não foi possível esgotar a oleuropeína da matéria-prima. Após a obtenção de todos os extratos hidroalcoólicos, selecionou-se um contendo aproximadamente 19 % de oleuropeína para o estudo da estabilidade oxidativa em óleos vegetais (oliva e girassol) utilizando o método Rancimat. A presença de extrato aumentou em 3 horas o tempo de indução do azeite de oliva extra-virgem, e em 2 horas o tempo de indução do azeite de oliva comum. Os óleos de girassol bruto e refinado não apresentaram melhora na estabilidade oxidativa quando adicionados dos extratos. Foram realizados também testes de estabilidade oxidativa através da adição direta de folhas de oliva em pó nos azeites de oliva extra-virgem e comum. Para o azeite extra-virgem, a adição das folhas não proporcionou melhora da estabilidade oxidativa, porém para o azeite comum, houve um aumento de mais de 2 horas no tempo de indução.Os resultados apresentados neste trabalho demonstraram que é possível obter extratos contendo teores significativos de oleuropeína utilizando-se um solvente renovável. Além disso, constatou-se que os mesmos podem ser utilizados como um antioxidante natural em azeite de oliva, melhorando sua estabilidade oxidativa.
Oleuropein is the most abundant phenolic compound present in the leaves of the olive tree, and many studies have shown that this compound has significant antimicrobial properties, antioxidant, anti-inflammatory, among others, emerging interest in studies of methods for extraction and use in products in the food industry, cosmetics and pharmaceuticals. The aim of this study was the extraction of oleuropein from the olive leaf, using non-toxic solvent, for further application of the extracts in vegetable oils in order to check its effect on their oxidative stability. The solvent selected for the study was a mixture of ethanol and water (70:30, % mass, condition obtained from a previous study), in the presence of 1 % acetic acid. In a first step, extraction experiments were conducted using maceration (type I) and ultrasound (type II) under different temperature conditions (20, 30, 40, 50 and 60 ° C). In a second step, through experiments with maceration at room temperature, the effect of the ratio olive leaves:solvent (1:8, 1:6 and 1:3) and the influence of the presence of acetic acid on the process of extraction (type III) was studied. Finally, using maceration in the presence of acetic acid at room temperature and proportion olive leaves:solvent of 1:3, sequencial extractions from the same raw material (type IV) were performed. The results of these experiments were expressed in oleuropein yield (RO), oleuropein content in extracts (TO) and global yield (RG). Analyzing the experiments I and II, it was found that the temperature did not have significant influence on the RO, TO and RG values. Furthermore, it was found the response values for the experiments with maceration was somewhat higher than values obtained for extractions using ultrasound. In type III trials, in general, a positive influence of the presence of acetic acid in the studied answers were observed. It was also found that in the presence of acid, higher amount of solvent leads to an increase of RO and RG values, and a decrease of TO value. Through the experiment type IV, it was found that even after four sequential extractions, it was not possible to exhaust oleuropein raw material. After obtaining all the hydroalcoholic extracts, na extract contanining approximately 19 % of oleuropein was selected for the study of oxidative stability of vegetable oils (olive and sunflower oil), using the Rancimat method. The presence of extract increased in 3 hours the induction time of extra-virgin olive oil, and in 2 hours the induction time of common olive oil. Crude and refined sunflower oils showed no improvement in the oxidative stability when added to the extracts. Oxidative stability tests were also performed by direct addition of olive leaf powder in extra virgin and common olive oil. For extra virgin olive oil, the addition of the powder leaves did not improve the oxidative stability, but for the common oil, an increase of more than 2 hours in induction time was observed. Results demonstrated that it is possible to obtain extracts containing significant concentrations of oleuropein using a renewable solvent. Furthermore, it was found that it can be used as a natural antioxidant in olive oil, improving its oxidative stability.
Resumo
O objetivo da pesquisa foi avaliar o potencial tóxico de Vitex gardneriana in vitro sobre o microcrustáceo Artemia salina utilizando extrato hidroalcóolico das folhas (EHF) com ensaios de toxicidade aguda (CL50) nas concentrações: 100, 500, 1.000, 10.000, 20.000, e 50.000 g/mL. Como controle positivo utilizou-se Hipoclorito de Sódio (NaClO) a 1%. Quanto ao controle negativo foi utilizado solução salina (pH 8-9) e DMSO a 1%. Os resultados demonstraram que houve letalidade em 50% da população de metanaúplios do microcrustáceo sobre a concentração 34.600 g/mL, demonstrando seu baixo potencial tóxico. Para a determinação da ação tóxica do extrato hidroalcóolico de V. gardneriana sobre ovos e larvas de Haemonchus contortus, foi adicionado 2,5mL do EHF da referida planta na concentração de 34.600 µg/mL adicionados em culturas fecais monoespecíficas do nematódeo, contendo aproximadamente 12.000 ovos. Os resultados demonstraram que o EHF permitiu apenas 26,6% de eclosão do total de 12.000 ovos, correspondendo a uma eficiência terapêutica de 73,3%. Para avaliação do EHF de V. gardneriana sobre o parasita em ovinos, teste in vivo, foram oferecidas duas doses nas concentrações de 34,600 µg/ml e 69,200 µg/ml, onde a menor dosagem revelou uma eficiência (49,6%) inferior ao grupo tratado com o fármaco (63,3%), porém para a maior dose o EHF apresentou uma eficácia de 63,33%, sendo igual ao do grupo tratado com o medicamento sintético (Ivermectina a 1%), revelando sua possível utilização como alternativa adicional ao controle do parasita. Durante o trabalho os animais mantiveram-se clinicamente saudáveis.
The objective of the research was to evaluate the toxic potential of Vitex gardneriana vitro on Artemia salina microcrustacean using hydroalcoholic extract of the leaves (EHF) with acute toxicity tests (LC50) at concentrations of 100, 500, 1,000, 10,000, 20,000, and 50,000 / mL. As positive control we used sodium hypochlorite (NaClO) to 1%. Was used as a negative control saline solution (pH 8-9) and 1% DMSO. The results showed lethality in 50% of the population metanaúplios microcrustacean concentration of 34,600 mg / mL, demonstrating their low toxic potential l. To determine the toxic action of the hydroalcoholic extract of V. gardneriana on eggs and larvae of Haemonchus contortus was added 2.5mL of said EHF plant at a concentration of 34,600 mg / ml added at the monospecific fecal nematode cultures containing approximately 12,000 eggs. The results demonstrated that EHF allowed only 26.6% of the total 12,000 hatching eggs, corresponding to a therapeutic efficiency of 73.3%. For EHF assessment V. gardneriana on the parasite in sheep in vivo test, two doses were offered at concentrations of 34,600 / ml and 69.200 g / ml, where the lower dose showed an efficiency (49.6%) lower than the drug-treated group (63.3%), however for the higher dose showed an efficacy of EHF 63.33%, being equal to the group treated with the synthetic drug (ivermectin 1%), showing their possible use in additional alternative to control the parasite. During the study, the animals remained clinically healthy.