Determinação de baixas concentrações de lítio em águas de abastecimento público por cromatografia de íons: validação de método / Determination of low concentrations of lithium in public water supply by the ion chromatography: method validation

Esta nota apresenta a validação de um método para realizar a determinação de lítio em concentrações menores do que 40 μg L-1 em amostras de águas de abastecimento público, utilizandose cromatografia de íons e calibração externa, com a curva analítica obtida por regressão linear (mínimos quadrados ordinários). O método é seletivo, e apresenta limite de detecção igual a 1,0 μg L-1 e limite de quantificação igual a 2,0 μg L-1 . Os ensaios de recuperação em três níveis de concentração apresentaram resultados entre 99,4 e 101,9%. Na avaliação da precisão nos mesmos três níveis de concentração, os coeficientes de variação exibiram valores entre 1,1 e 4,0%.

This note presents the validation of a method for determining the lithium at concentrations less than 40 μg L-1 in the public water supply, by using the ion chromatography and external calibration, and the analytical curve was obtained by the linear regression (ordinary least squares). The employed method is selective, showing the detection limit equal to 1.0 μg L-1 and the quantification limit equal to 2.0 μg L-1 . Recovery tests in three concentration levels presented results from 99.4 to 101.9%. On the precision evaluation in the same three concentration levels, the coefficients of variation exhibited values between 1.1 and 4.0%.

Determinação de baixas concentrações de lítio em águas de abastecimento público por cromatografia de íons: validação de método / Determination of low concentrations of lithium in public water supply by the ion chromatography: method validation

Esta nota apresenta a validação de um método para realizar a determinação de lítio em concentrações menores do que 40 μg L-1 em amostras de águas de abastecimento público, utilizandose cromatografia de íons e calibração externa, com a curva analítica obtida por regressão linear (mínimos quadrados ordinários). O método é seletivo, e apresenta limite de detecção igual a 1,0 μg L-1 e limite de quantificação igual a 2,0 μg L-1 . Os ensaios de recuperação em três níveis de concentração apresentaram resultados entre 99,4 e 101,9%. Na avaliação da precisão nos mesmos três níveis de concentração, os coeficientes de variação exibiram valores entre 1,1 e 4,0%.(AU)

This note presents the validation of a method for determining the lithium at concentrations less than 40 μg L-1 in the public water supply, by using the ion chromatography and external calibration, and the analytical curve was obtained by the linear regression (ordinary least squares). The employed method is selective, showing the detection limit equal to 1.0 μg L-1 and the quantification limit equal to 2.0 μg L-1 . Recovery tests in three concentration levels presented results from 99.4 to 101.9%. On the precision evaluation in the same three concentration levels, the coefficients of variation exhibited values between 1.1 and 4.0%.(AU)

Determination of fluoride at low concentrations: validation of method using ion selective electrode to analyze the water used in the preparation of dialysis solutions / Determinação de fluoreto em baixas concentrações: validação de método com eletrodo íon seletivo para análise da água utilizada na preparação de soluções de diálise

This paper describes the development and validation of an analytical methodology for determining the concentration of fluoride in water used for the preparation of dialysis solutions, by means of potentiometry with ion selective electrode. The investigated validation parameters were: selectivity, homoscedasticity, linearity, limit of detection, limit of quantification, reliability of measurement and precision. The optimized conditions of analysis were: HOAc/-OAc/NaCl/CDTA buffer (pH = 5.0 ± 0.1), in ratio of 10:1 (sample/buffer); concentrations of the standard solutions in the analytical curve: 0.05-0.80 mg/L. The evaluated method exhibited suitable validation parameters with detection and quantification limits equal to 0.020 and 0.050 mg/L, respectively. Also, an electronic spreadsheet was developed and validated for monitoring the quality of analytical curve of the methodology that calculates the decision limit to 0.20 mg/L.(AU)

Este trabalho descreve o desenvolvimento e validação de metodologia analítica para determinar a concentração de fluoreto em água empregada para a preparação de soluções de diálise, por meio de potenciometria com eletrodo íon seletivo. Os parâmetros de validação investigados foram: seletividade, homoscedasticidade, linearidade, limite de detecção, limite de quantificação, veracidade de medição e precisão. As condições otimizadas de análise foram: tampão HOAc/-OAc/NaCl/CDTA (pH = 5,0 ± 0,1), na proporção 10:1 (amostra/tampão); concentrações das soluções-padrão da curva analítica: 0,05 a 0,80 mg/L. O método avaliado exibiu parâmetros de validação adequados com limites de detecção e de quantificação, respectivamente, de 0,020 e 0,050 mg/L. Ademais, foi também desenvolvida e validada uma planilha eletrônica para efetuar o monitoramento da qualidade da curva analítica do método que calcula o limite de decisão para 0,20 mg/L.(AU)

Methods for detecting the Roundup Ready® soy in soybeans and soy products by polymerase chain reaction: a review and critical analysis of current practices of validation / Métodos para detecção de soja Roundup Ready® em grãos e produtos de soja por reação em cadeia da polimerase: revisão e análise crítica das práticas de validação

Information on the origin of transgenic foods is quite relevant. According to the Brazilian and other countries legislations, the consumer must be informed about the nature of transgenic foods and ingredients, which contain or being produced from genetically modified organisms (GMOs), in amount above the established limit. Thus, there is a growing need for evaluating the occurrence of GMOs, and to determine the percentage of them in food. This need has generated a demand for developing methods to detect, identify and quantify the exogenous DNA. However, these methods need to be validated to ensure reliability of the results. This review paper evaluated the validation of methodologies for detecting the Roundup Ready® soybean in grain and soybean products by polymerase chain reaction. Considering the current trends in method validation, the specific guides for validating GMOs do not include all of the parameters required to assess the fitness for its purpose, especially in the case of qualitative methods. The most frequent parameters reported in the literature were accuracy, precision (repeatability), linearity and sensitivity for quantitative methods, and rates of sensitivity and selectivity for qualitative methods. However, important parameters have been neglected in the validation procedures of this analytical scope.(AU)

A informação sobre a origem transgênica de alimentos é muito relevante. Conforme a legislação brasileira e de outros países, o consumidor deve ser informado da natureza transgênica dos alimentos ou ingredientes que contenham ou que sejam produzidos a partir de organismos geneticamente modificados (OGM), com presença acima de um limite estabelecido. A necessidade de monitorar a presença e determinar o percentual de OGM em alimentos tem gerado uma constante demanda pelo desenvolvimento de metodologias capazes de detectar, identificar e quantificar o DNA exógeno. Entretanto, esses métodos necessitam ser validados para garantir confiabilidade aos resultados. No presente trabalho, a validação de métodos para detecção de soja Roundup Ready® em grãos e produtos de soja por reação em cadeia de polimerase foi contextualizada. Considerando-se atuais tendências em validação de métodos, os guias para validação de métodos específicos para OGM não contemplam todos os parâmetros necessários para avaliar a adequação aos propósitos de uso dos métodos, principalmente no caso de métodos qualitativos. Os parâmetros de desempenho mais frequentemente citados na literatura foram precisão (repetitividade), sensibilidade, linearidade e veracidade para metodologias quantitativas e taxas de sensibilidade e seletividade para qualitativas. Contudo, importantes parâmetros têm sido negligenciados nos processos de validação de métodos deste escopo analítico.(AU)

Estudo de depleção de fluorquinolonas e tetraciclinas em frangos de corte empregando LC-MS/MS

Dentro da cadeia produtiva de frangos de corte, antibióticos têm sido empregados no tratamento profilático e terapêutico, visando melhorar o desempenho zootécnico dos animais. Porém, o uso indiscriminado desses fármacos pode acarretar a presença de resíduos na carne e, assim, representar riscos à saúde do consumidor. Fluorquinolonas e tetraciclinas são duas classes de antibióticos amplamente utilizadas na avicultura. Para tanto, neste trabalho, desenvolveu-se e validou-se uma metodologia analítica baseada em cromatografia líquida acoplada à espectrometria de massas (LC-MS/MS), a fim de analisar resíduos de 7 antibióticos das classes citadas, em músculo de frangos. Além disso, foram realizados estudos de depleção destes fármacos em frangos de corte, a fim de quantificar os resíduos na carne. Os resultados encontrados foram comparados com os limites máximos de resíduos (LMRs) estabelecidos pelas legislações brasileira e internacionais. Como método de extração, utilizou-se um procedimento com acetonitrila acidificada e purificação por centrifugação e precipitação a baixa temperatura, sem a necessidade de utilização da etapa de extração em fase sólida (SPE). O método foi validado de acordo com a diretiva 2002/657/CE da União Europeia, avaliando parâmetros de seletividade, linearidade, especificidade, limites de detecção e quantificação, exatidão, precisão, efeito matriz, limite de decisão (CC), capacidade de detecção (CC), robustez e aplicabilidade do método. Para os estudos de depleção, foram administrados, oralmente, clortetraciclina (CTC), doxiciclina (DOX) e oxitetraciclina (OTC) durante 5 dias consecutivos e ciprofloxacina (CIP), enrofloxacina (ENR) e norfloxacina (NOR) por 3 dias. Após 6, 12, 24, 48, 72, 96, 120, 144, 168, 192, 216 e 240 h da última dose administrada, foram coletadas amostras de músculo (peito) de 4 animais de cada grupo tratado e 2 do grupo controle, a fim de avaliar a concentração residual dos fármacos. O método validado apresentou-se dentro dos valores aceitáveis pela diretiva 2002/657/CE. Das 65 amostras de músculo de frango avaliadas para parâmetro de aplicabilidade, 3 apresentaram resíduos de ENR. No estudo de depleção das tetraciclinas, considerando as legislações brasileira e europeia, os resultados mostraram que foram encontrados resíduos abaixo dos LMRs após 1 dia para CTC e 3 dias para DOX. Para OTC, este período foi de 2 e 3 dias, respectivamente, de acordo com as legislações brasileira e europeia. Segundo a legislação japonesa, períodos de carência de 1, 5 e 2 dias, respectivamente, para CTC, DOX e OTC seriam necessários. No estudo das fluorquinolonas, foi possível detectar traços de ENR até 9 dias após o fim do tratamento, o que inviabilizaria a exportação desta carne para Estados Unidos e Canadá. Após 1 dia da última dose administrada, os resíduos de CIP ficaram abaixo do LMR estabelecido pelas legislações brasileira, europeia e japonesa e, após 4 dias, para Estados Unidos e Canadá. No caso da NOR, o período de carência seria de 1 dia para todos os países citados. Os resultados deste trabalho colaboram com a busca da inocuidade dos alimentos para os consumidores, bem como para a utilização de métodos analíticos capazes de serem aplicados na determinação de medicamentos a comporem estudos de depleção residual em frangos de corte.

Antibiotics have been widely used for prophylactic and therapeutic treatment within the broiler supply chain in order to improve animal production performance. The indiscriminate use of these drugs can, however, lead to the presence of residues in the meat and thus be a risk to the health of consumers. Fluoroquinolones and tetracyclines are two antibiotic classes that are commonly used in poultry. In this study, a liquid chromatography-based analytical method coupled with mass spectrometry was developed and validated in order to analyze residues of 7 antibiotics from the aforementioned classes in chicken muscle. Furthermore, antibiotic depletion studies were performed in broiler chickens in order to quantify the residues in the meat. The results were compared to maximum residue limits (MRLs) established by Brazilian and international laws. A procedure that employs acidified acetonitrile and purification by centrifugation and low temperature precipitation was used as the extraction method, with no need to perform a solid phase extraction (SPE) step. The method was validated in accordance with the Directive 2002/657/EC from the European Union by assessing selectivity, linearity and specificity parameters, detection and quantification limits, accuracy, precision, matrix effect, decision limit (CC), detection capability (CC), robustness and applicability of the technique. For depletion studies, chlortetracycline (CTC), doxycycline (DOX) and oxytetracycline (OTC) were administered orally for 5 consecutive days and ciprofloxacin (CIP), enrofloxacin (ENR) and norfloxacin (NOR) for 3 days. After 6, 12, 24, 48, 72, 96, 120, 144, 168, 192, 216 and 240 h after the last dose, muscle samples (chest) were collected from 4 animals from each treated group and from 2 from the control group in order to assess the residual concentration of the drugs. The validated method presented values within acceptable parameters according to Directive 2002/657/EC. From 65 chicken muscle samples evaluated for the applicability parameter, 3 presented residues of ENR. In the tetracyclines depletion studies, results showed that residues were under the MRLs considering Brazilian and European laws after 1 day for CTC and after 3 days for DOX. For OCT, this period was of 2 and 3 days according to Brazilian and European laws respectively. According to Japanese law, withdrawal time of 1, 5 and 2 days would be needed for CTC, DOX and OCT respectively. In the fluoroquinolones study, it was possible to detect traces of ENR even 9 days after treatment, which would make the export of meat to the United States and Canada infeasible. After 1 day at the last dose administrated, CIP residues were under MRLs established by Brazilian, European and Japanese laws, and after 4 days they were under limits determined by the Unites States and Canada. In the case of NOR, the withdrawal time would be of 1 day for all countries mentioned here. The results presented cooperate with the pursuit of food safety to consumers, as well as with the employment of analytical methods capable of determining drugs to comprise residue depletion studies in broilers.

DESENVOLVIMENTO, VALIDAÇÃO E APLICAÇÃO DE METODOLOGIA ANALÍTICA PARA DETERMINAÇÃO DE RESÍDUOS DE LACTONAS MACROCÍCLICAS EM MANTEIGA

Lactonas macrocíclicas (LM) são uma família de compostos que são normalmente utilizados em formulações de medicamentos para o tratamento de parasitas em bovinos. No Brasil, com exceção de formulações) com efeitos a longo prazo (longa meia-vida), as LM estão registradas para uso em bovinos. O uso indiscriminado de LM pode resultar na presença de resíduos no leite e produtos lácteos, devido às suas propriedades lipofílicas e estabilidade térmica. Um método analítico foi desenvolvido e validado para a determinação simultânea de quatro lactonas macrocíclicas (ML) (abamectina (ABA), doramectina (DOR), ivermectina (IVM) e moxidectina (MOX) na manteiga, utilizando cromatografia a líquido com detecção por fluorescência. O método extração empregada aquecida líquido-líquido e uma mistura de acetonitrila, acetato de etila e água, com pré-concentração e derivatização, para produzir derivados fluorescentes estáveis. O tempo de corrida cromatográfica foi <12,5 min, com excelente separação. A validação do método seguiu as orientações internacionais e empregou amostras fortificadas de manteiga. As figuras de mérito obtidas, como recuperação (72,4-106,5%), repetibilidade (8,8%), reprodutibilidade intralaboratorial (15,7%) e limites de quantificação (0,09-0,16 µg kg-1) foram satisfatórios para a aplicação desejada. O método também foi aplicado a 38 amostras de manteiga comercial adquirido na região metropolitana do Rio de Janeiro, RJ, Brasil, entre junho e setembro de 2013, analisadas em triplicata. IVM foi detectada em 89,5% das amostras, com concentrações entre 0,3 e 119,4 µg kg-1; 76,3% das amostras continha DOR (0,6-64,7 µg kg-1) e 55,2% continham ABA (0,7-4,5 µg kg-1). A maioria das amostras (76,3%) continham mais de um ML; não foram detectados resíduos de MOX. Os resultados mostraram que o método provou ser simples, fácil e adequado para a determinação simultânea de resíduos de ML em manteiga. No nosso conhecimento, este é o primeiro método descrito para a avaliação de LM em manteiga. Para amostras de manteiga comercial avaliados, os resultados mostraram uma alta incidência de avermectinas nas amostras, e indicam que a manteiga, um produto lácteo com elevado teor de gordura, que não está incluída no Plano Nacional de Controle de Resíduos e Contaminantes em Produtos de Origem Animal (PNCRC Animal), é uma matriz que poderia ser avaliada com relação a resíduos de LM, uma vez que concentra fortemente estas substâncias.

Macrocyclic lactones (ML) are a family of compounds that are commonly used in drug formulations for the treatment of parasites in cattle. In Brazil, except for drugs (or formulations) with long-term (half-life) effects, the ML are registered for use in bovines. Indiscriminate use of ML may result in the presence of residues in milk and dairy products, due to their lipophilic properties and thermal stability. An analytical method was developed and validated for the simultaneous determination of four macrocyclic lactones (ML) (abamectin (ABA), doramectin (DOR), ivermectin (IVM) and moxidectin (MOX) in butter, using liquid chromatography with fluorescence detection. The method employed heated liquid-liquid extraction and a mixture of acetonitrile, ethyl acetate and water, with preconcentration and derivatization, to produce stable fluorescent derivatives. The chromatographic run time was <12.5 min, with excellent separation. The method validation followed international guidelines and employed fortified butter samples. The figures of merit obtained, e.g. recovery (72.4 to 106.5%), repeatability (8.8%), within-laboratory reproducibility (15.7%) and limits of quantification (0.09 to 0.16 µg kg-1) were satisfactory for the desired application. The method was also applied to 38 samples of commercial butter purchased in the metropolitan area of Rio de Janeiro, RJ, Brazil between June and September 2013, analyzed in triplicate. IVM was detected in 89.5% of the samples, with concentrations between 0.3 and 119.4 µg kg-1; 76.3% of the samples contained DOR (0.6 to 64.7 µg kg-1) and 55.2% of them contained ABA (0.7 to 4.5 µg kg-1). Most samples (76.3 %) contained more than one ML; no residues of MOX were detected. The results showed that the method proved to be simple, easy and appropriate for simultaneous determination of ML residues in butter. To our knowledge, this is the first method described for the evaluation of ML in butter. For evaluated comercial butter samples, the results showed a high incidence of avermectins in the samples, and indicated that butter, a fatty dairy product that is not included in the Brazilian National Plan for Control of Residues and Contaminants in Animal Products (Animal PNCRC), is a matrix that should be screened for ML residues, because it strongly concentrates these compounds.

Single-laboratory validation of a quantitative methodology for determination of L-phenylalanine in wheat flour by second derivative spectrophotometry / Validação intralaboratorial de metodologia quantitativa para determinação de L-fenilalanina em farinha de trigo por espectrofotometria derivada segunda

The aim of this paper was the validation of a methodology for determination of L-phenylalanine (Phe) in wheat fl our by second derivative spectrophotometry. For this purpose, 0.525g of wheat flour was hydrolyzed with HCl 5.7 mol/L at 110C for 24 h. This material was diluted to 50 mL with 0.1 mol/L sodium phosphate buffer, pH 7.0. The solutions prepared from this hidrolyzed were measured on UV/VIS spectrophotometer at wavelength range from 230 nm to 280 nm. The second derivative spectrophotometrys spectra were plotted and the values of the negatives peaks areas were used for estimating the Phe contents. Linearity was demonstrated in the range of 0.010 mg/mL to 0.035 mg/mL (corresponding to 251 mg/100g to877 mg/100g of Phe in flour). Matrix effects were observed. The Phe determination was not affected by similar compounds such as L-tyrosine and L-tryptofan. The recoveries ranged from 81 % to 118 % and the relative standard deviation under repetitivity and within-reproducibility conditions were 11 % and 15 %, respectively, for samples at 354 mg/100g, showing the adequate recovery and precision of the methodology. The limits of detection and quantification were 63 mg/100gand 175 mg/100g, respectively. The studied parameters indicated that this methodology is suitable for monitoring and controlling of Phe contents in wheat flour.

O objetivo deste trabalho foi validar um método quantitativo para determinação de L-fenilalanina (Fen) em farinha de trigo por espectrofotometria derivada segunda. A amostra de farinha de trigo, na quantidade de 0,525g, foi submetida à hidrólise ácida com HCl a 5,7 mol/L, a 110 C, por 24 h. O material hidrolisado foi reconstituído para 50 mL com tampão fosfato de sódio a 0,1 mol/L, pH 7,0. As soluções preparadas a partir dessa amostra foram submetidas às leituras de absorvância, entre 230 nm e 280 nm, em espectrofotômetro UV/VIS. Os espectros de derivada segunda foram traçados e os valores das áreas dos picos negativos foram utilizados para estimar os teores de Fen. A linearidade do método foi demonstrada na faixa de 0,010 mg/mL a 0,035 mg/mL (correspondente a teores de 251 mg/100g a 877 mg/100g de Fen em farinha de trigo). Efeitos de matriz foram observados. A determinação de Fen não sofreu interferência de compostos como L-tirosinae L-triptofano. As porcentagens de recuperação variaram de 81 % a 118 % e os desvios padrão relativos de repetitividade e reprodutibilidade parcial foram respectivamente 11 % e 15 %, para amostras contendo 354 mg/100g, demonstrando adequada recuperação e precisão do método. Os limites de detecção e quantificação foram, respectivamente, 63 mg/100ge 175 mg/100g. Os parâmetros de desempenho estudados indicaram adequação do método para o monitoramento