Teofilina como agente capacitante do sêmen bovino / Theophylline as a capacitating agent of bovine semen

Objetivou-se avaliar a teofilina como agente capacitante substituto ou associado à heparina sobre a reação acrossômica dos espermatozoides e o desenvolvimento de embriões produzidos in vitro. O experimento foi realizado com quatro touros e três tratamentos, totalizando 12 grupos experimentais. O sêmen dos touros foi avaliado nos tratamentos descritos a seguir: tratamento 1 (HEP): heparina - 10µg/mL; tratamento 2 (TEO): teofilina - 5mM; tratamento 3 (HEP + TEO): heparina (10µg/mL) + teofilina (5mM), por zero, seis, 12 e 18 horas, corados com trypan blue/Giemsa para avaliação da reação acrossômica. Para a produção dos embriões, os agentes capacitantes foram adicionados aos meios de fertilização. Na análise espermática, a taxa de reação acrossômica verdadeira foi maior (P<0,05) no tempo zero hora, enquanto para espermatozoides mortos, as maiores taxas (P<0,05) foram nos tempos de 12h (84,46±5,82) e 18h (86,75±4,19). A taxa de embriões produzidos (37,97±13) e a taxa de eclosão (33,50±14) foram maiores (P<0,05) para o tratamento HEP. Não foi observada diferença (P>0,05) entre touros na análise de reação acrossômica nem na PIVE. A utilização da teofilina foi tão eficiente quanto a da heparina na indução da reação acrossômica, no entanto resultou em menores taxas de produção embrionária.(AU)

The sperm capacitating process should take special attention during in vitro embryo production (IVEP) once that affects the success of embryo production. The study aimed to evaluate theophylline as substitute capacitating agent or in combination with heparin on the sperm acrosome reaction and development of embryos produced in vitro. The experiment was carried out using 4 bulls and 3 treatments, establishing 12 experimental groups. Each bull was evaluated in the following treatments: Treatment 1 (HEP): Heparin - 10mg/mL; Treatment 2 (THEO): Theophylline - 5mM; Treatment 3 (HEP + THEO), Heparin (10mg/mL) + Theophylline (5mM). The semen of bulls was incubated in each treatment for 0, 6, 12 and 18h, stained with Trypan blue / Giemsa and analyzed by electron microscopy for assessment of acrosome reaction. Using sperm of same bulls, capacitating agents were added to the fertilization media, for IVEP. In sperm analysis, the true acrosome reaction rate was higher (P<0.05) in time 0h, while sperm dead rates were highest (P<0.05) at 12h (84.46±5, 82), and 18h (86.75±4.19). The produced embryos rate (37.97±13) and hatching rate (33.50±14) were larger (P<0.05) for HEP treatment. There was no difference (P>0.05) between bulls in acrosome reaction analysis neither for IVEP. The use of theophylline was as effective as heparin in the induction of the acrosome reaction, although it resulted in lower embryo production rates.(AU)

Teofilina como agente capacitante do sêmen bovino

ABSTRACT The sperm capacitating process should take special attention during in vitro embryo production (IVEP) once that affects the success of embryo production. The study aimed to evaluate theophylline as substitute capacitating agent or in combination with heparin on the sperm acrosome reaction and development of embryos produced in vitro. The experiment was carried out using 4 bulls and 3 treatments, establishing 12 experimental groups. Each bull was evaluated in the following treatments: Treatment 1 (HEP): Heparin - 10mg/mL; Treatment 2 (THEO): Theophylline - 5mM; Treatment 3 (HEP + THEO), Heparin (10mg/mL) + Theophylline (5mM). The semen of bulls was incubated in each treatment for 0, 6, 12 and 18h, stained with Trypan blue / Giemsa and analyzed by electron microscopy for assessment of acrosome reaction. Using sperm of same bulls, capacitating agents were added to the fertilization media, for IVEP. In sperm analysis, the true acrosome reaction rate was higher (P 0.05) in time 0h, while sperm dead rates were highest (P 0.05) at 12h (84.46±5, 82), and 18h (86.75±4.19). The produced embryos rate (37.97±13) and hatching rate (33.50±14) were larger (P 0.05) for HEP treatment. There was no difference (P>0.05) between bulls in acrosome reaction analysis neither for IVEP. The use of theophylline was as effective as heparin in the induction of the acrosome reaction, although it resulted in lower embryo production rates.

RESUMO Objetivou-se avaliar a teofilina como agente capacitante substituto ou associado à heparina sobre a reação acrossômica dos espermatozoides e o desenvolvimento de embriões produzidos in vitro. O experimento foi realizado com quatro touros e três tratamentos, totalizando 12 grupos experimentais. O sêmen dos touros foi avaliado nos tratamentos descritos a seguir: tratamento 1 (HEP): heparina - 10µg/mL; tratamento 2 (TEO): teofilina - 5mM; tratamento 3 (HEP + TEO): heparina (10µg/mL) + teofilina (5mM), por zero, seis, 12 e 18 horas, corados com trypan blue/Giemsa para avaliação da reação acrossômica. Para a produção dos embriões, os agentes capacitantes foram adicionados aos meios de fertilização. Na análise espermática, a taxa de reação acrossômica verdadeira foi maior (P 0,05) no tempo zero hora, enquanto para espermatozoides mortos, as maiores taxas (P 0,05) foram nos tempos de 12h (84,46±5,82) e 18h (86,75±4,19). A taxa de embriões produzidos (37,97±13) e a taxa de eclosão (33,50±14) foram maiores (P 0,05) para o tratamento HEP. Não foi observada diferença (P>0,05) entre touros na análise de reação acrossômica nem na PIVE. A utilização da teofilina foi tão eficiente quanto a da heparina na indução da reação acrossômica, no entanto resultou em menores taxas de produção embrionária.

Teofilina como agente capacitante do sêmen bovino / Theophylline as a capacitating agent of bovine semen

Objetivou-se avaliar a teofilina como agente capacitante substituto ou associado à heparina sobre a reação acrossômica dos espermatozoides e o desenvolvimento de embriões produzidos in vitro. O experimento foi realizado com quatro touros e três tratamentos, totalizando 12 grupos experimentais. O sêmen dos touros foi avaliado nos tratamentos descritos a seguir: tratamento 1 (HEP): heparina - 10µg/mL; tratamento 2 (TEO): teofilina - 5mM; tratamento 3 (HEP + TEO): heparina (10µg/mL) + teofilina (5mM), por zero, seis, 12 e 18 horas, corados com trypan blue/Giemsa para avaliação da reação acrossômica. Para a produção dos embriões, os agentes capacitantes foram adicionados aos meios de fertilização. Na análise espermática, a taxa de reação acrossômica verdadeira foi maior (P<0,05) no tempo zero hora, enquanto para espermatozoides mortos, as maiores taxas (P<0,05) foram nos tempos de 12h (84,46±5,82) e 18h (86,75±4,19). A taxa de embriões produzidos (37,97±13) e a taxa de eclosão (33,50±14) foram maiores (P<0,05) para o tratamento HEP. Não foi observada diferença (P>0,05) entre touros na análise de reação acrossômica nem na PIVE. A utilização da teofilina foi tão eficiente quanto a da heparina na indução da reação acrossômica, no entanto resultou em menores taxas de produção embrionária.(AU)

The sperm capacitating process should take special attention during in vitro embryo production (IVEP) once that affects the success of embryo production. The study aimed to evaluate theophylline as substitute capacitating agent or in combination with heparin on the sperm acrosome reaction and development of embryos produced in vitro. The experiment was carried out using 4 bulls and 3 treatments, establishing 12 experimental groups. Each bull was evaluated in the following treatments: Treatment 1 (HEP): Heparin - 10mg/mL; Treatment 2 (THEO): Theophylline - 5mM; Treatment 3 (HEP + THEO), Heparin (10mg/mL) + Theophylline (5mM). The semen of bulls was incubated in each treatment for 0, 6, 12 and 18h, stained with Trypan blue / Giemsa and analyzed by electron microscopy for assessment of acrosome reaction. Using sperm of same bulls, capacitating agents were added to the fertilization media, for IVEP. In sperm analysis, the true acrosome reaction rate was higher (P<0.05) in time 0h, while sperm dead rates were highest (P<0.05) at 12h (84.46±5, 82), and 18h (86.75±4.19). The produced embryos rate (37.97±13) and hatching rate (33.50±14) were larger (P<0.05) for HEP treatment. There was no difference (P>0.05) between bulls in acrosome reaction analysis neither for IVEP. The use of theophylline was as effective as heparin in the induction of the acrosome reaction, although it resulted in lower embryo production rates.(AU)

Acute exercise and caffeine improve insulin-induced hypoglycemia in normal and malnourished rats / Exercício agudo e cafeína melhoram a hipoglicemia induzida por insulina em ratos normais e desnutridos

In food restriction, hypoglycemic episodes can be more severe and persistent. This study assessed the influence of acute exercise and caffeine on the insulin-induced hypoglycemia in freely-fed or malnourished (50% food restriction) young rats. At the age of 60 days, rats under overnight fasting received an insulin injection to cause an episode of hypoglycemia. In some animals, hypoglycemia was preceded by an acute session of exercise, in others, caffeine was orally given 15 minutes after insulin injection; or exercise and caffeine were combined. Blood samples were collected at regular intervals for five hours after insulin injection. A beneficial effect of both exercise or caffeine on the hypoglycemic episode in the malnourished rats was found. In the control rats, the association of exercise+caffeine was more beneficial than either intervention alone. It is discussed that exercise and caffeine, alone or combined, can be used as exogenous anti-hypoglycemic resources, but considering the nutritional status of the subject.(AU)

Na restrição alimentar, os episódios de hipoglicemia podem ser mais severos e persistentes. Este trabalho avaliou a influência do exercício agudo e da cafeína sobre a hipoglicemia induzida por insulina em ratos jovens alimentados livremente ou desnutridos (50% de restrição alimentar) desde o nascimento. Aos 60 dias de idade, os ratos em jejum noturno receberam injeção de insulina para causar um episódio de hipoglicemia. Em alguns animais, a hipoglicemia foi precedida por sessão aguda de exercício; em outros foi administrada a cafeína via oral, 15 min. após a injeção de insulina; ou foi associada a exercício e cafeína. Amostras de sangue foram coletadas em intervalos regulares por 5h desde a aplicação da insulina. Registrou-se efeito benéfico do exercício e da cafeína isolados sobre o episódio hipoglicêmico nos ratos desnutridos. Nos ratos controle, a associação de exercício+cafeína teve efeito benéfico mais acentuado do que as intervenções separadas. É discutido que exercício físico e cafeína, isolados ou combinados, podem ser explorados como recursos anti-hipoglicêmicos exógenos, levando-se em consideração porém o estado nutricional do indivíduo.(AU)

COMPARAÇÃO DOS EFEITOS DA PENTOXIFILINA COM A CLORPROMAZINA E LOVASTATINA NA PROTEÇÃO RENAL DE RATOS WISTAR APÓS ISQUEMIA E REPERFUSÃO NOMOTÉRMICA

Pereira, Daniel Peixoto. Comparação da pentoxifilina com a clorpromazina e lovastatina na proteção renal de ratos wistar após isquemia e reperfusão normotérmica. 2019. Dissertação (Mestrado em Ciência Animal) Universidade de Franca, Franca - SP. Objetivou-se com esse estudo avaliar a capacidade da pentoxifilina (PTX) frente a lovastatina (LOV) e a clorpromazina (CLOR) como substâncias nefroprotetoras perante episódio da síndrome da isquemia e reperfusão renal (SIRR). Foram utilizados 36 animais, machos, adultos, distribuídos aleatoriamente em quatro grupos de nove indivíduos, todos submetidos experimentalmente à isquemia e reperfusão normotérmica, sendo o grupo controle (CT) sem tratamento, grupo PTX tratados previamente com pentoxifilina, grupo LOV tratados com lovastatina, e grupo CLOR com o uso de clorpromazina. Três animais de cada grupo foram avaliados nos tempos 24, 72 e 120 horas após a SIRR. As avaliações da função renal foram realizadas por exame físico, concentração sérica de ureia e creatinina e também foi avaliada a integridade morfológica do tecido renal por meio de análise histopatológica. Observou-se que 24 horas após a SIRR, apenas a clorpromazina apresentou eficácia no controle azotêmico. Com 72 horas, tanto a clorpromazina quanto a pentoxifilina foram eficazes. Após 120 horas, os três fármacos apresentaram capacidade renoprotetora. A pentoxifilina foi a mais efetiva contra necrose tubular, seguida da clorpromazina. Nas condições do presente estudo concluiu-se que os três tratamentos (PTX, CLOR e LOV) mostraram-se efetivos. A PTX mostrou-se promissora na resposta contra necrose tubular aguda, no entanto a clorpromazina demonstrou efeitos renoprotetores 2mais precoces.

Pereira, Daniel Peixoto. Comparative renoprotective effects of pentoxifiline with clorpromazine and lovastatin in wistar rats (Rattus novergicus) submitted to ischemia and renal reperfusion. 2019. Dissertation (Master in Animal Science) - University of Franca, Franca - SP. The aim of this study was to compare pentoxifylline (PTX), lovastatin (LOV) and chlorpromazine (CLOR) as nephroprotective agents during renal ischemia and reperfusion syndrome (RIRS). Thirty-six adult male rats submitted to ischemia and reperfusion and were randomly assigned to four groups, untreated (control group), thePTX group previously treated with pentoxifylline, the LOV group treated with lovastatin, and group with the use of chlorpromazine. Three animals from each group were evaluated at times 24, 72 and 120 hours after the ischemia and reperfusion procedure. Renal function assessments were performed by physical examination, serum urea and creatinine, and the morphological integrity of the renal tissue was also assessed by histopathological analysis. It was observed that 24 hours after the RIRS, only chlorpromazine showed efficacy in the azotemic control. At 72 hours, both chlorpromazine and pentoxifylline were effective. After 120 hours, all three drugs showed renoprotective capacity. Pentoxifylline and chlorpromazine were efetive in necrosis tubular damage. In conclusion the three treatments (PTX, CLOR and LOV) were effective. PTX was efeitive in acute tubular necrosis, however chlorpromazine demonstrated earlier renoprotective effects.

TEOFILINA ASSOCIADA OU NÃO A HEPARINA COMO AGENTE CAPACITANTE PARA PRODUÇÃO IN VITRO DE EMBRIÕES BOVINOS

A produção in vitro de embriões (PIVE) bovinos, apesar de já utilizada em escala comercial, apresenta elevada variabilidade em seus resultados, que pode frequentemente ser atribuída à etapa de fertilização. Sendo assim, torna-se importante o estudo dos fatores relacionados ao sêmen, como o processo de capacitação espermática. O objetivo do estudo foi avaliar a teofilina como agente de capacitação substituto ou associado à heparina no desenvolvimento de embriões produzidos in vitro e sobre a reação acrossômica das células espermáticas. O experimento foi realizado com 4 touros e 3 tratamentos, totalizando 12 grupos experimentais. Cada touro foi avaliado em cada tratamento descrito a seguir: Tratamento 1 (T1): Heparina - 10µg/mL; Tratamento 2 (T2): Teofilina 5 mM; Tratamento 3 (T3): Heparina (10µg/mL) + Teofilina (5mM). O sêmen dos touros foi descongelado e submetido à incubação com os três tratamentos por 0, 6, 12 e 18h, posteriormente corados com Trypan blue/ Giemsa e analisados em microscopia eletrônica para avaliação da reação acrossômica. Para a PIVE os agentes de capacitação adicionados aos meios de fertilização foram testados utilizando os mesmos touros. Na análise espermática a taxa de reação acrossômica verdadeira foi maior (p<0,05) no tempo 0h enquanto para os espermatozoides mortos foi observada maior taxa (p<0,05) nos tempos de 12h (84,46 ± 5,82) e 18h (86,75 ± 4,19). A taxa de embriões produzidos na PIVE (37,97 ± 13) e a taxa de eclosão (33,50 ± 14) foram maiores (p<0,05) para o tratamento heparina. Não houve influência de touro ou de tratamentos (p>0,05) na análise de reação acrossômica. A utilização da teofilina como agente de capacitação reduziu as taxas de produção embrionária na fertilização in vitro, no entanto foi tão eficiente quanto à heparina na indução da reação do acrossoma

The in vitro production (IVP) of bovine embryos despite already used on a commercial scale, presents high variability in the results, that can often be attributed to the fertilization step. Therefore, it is important to research factors related to semen, such as sperm capacitation process. The aim of the study was to evaluate theophylline or its combination with heparin as possible replacement capacitation agent in the development of in vitro produced embryos and in acrosome reaction of sperm cells. The experiment was carried out with 4 bulls and 3 treatments, with 12 experimental groups. Each bull was evaluated in all treatments as described below: Treatment 1 (T1): Heparin - 10mg / ml; Treatment 2 (T2): Theophylline - 5 mM; Treatment 3 (T3): Heparin (10 mg / ml) + theophylline (5mM). The bulls semen was thawed and exposed to incubation in three treatments for 0, 6, 12 and 18h, subsequently stained with Trypan blue / Giemsa and analyzed by electron microscopy for assessment of the acrosome reaction. For IVP of embryos capacitation agents added to fertilization medium were evaluated utilizing the same bulls. In sperm analysis, real acrosome reaction rate was higher (p<0,05) at 0h time while the higher dead spermatozoa rate (p<0,05) was observed at 12 h (84,46 ± 5,82 ) and 18h (86,75 ± 4,19). The IVP embryos rate (37,97 ± 13) and the hatching rate (33,50 ± 14) were higher (p<0,05) in heparin treatment. There was no influence of bull or treatments (p> 0.05) in the acrosome reaction analysis. The use of theophylline as a capacitation agent decreased embryo production rates in IVF, however was as efficient as heparin in acrosome reaction induction.