Essential oils isolated from popular medicinal plants and spices as alternative antimicrobial and antibiofilm compounds against the pig pathogen Actinobacilluspleuropneumoniae / Óleos essenciais isolados de plantas medicinais e temperos populares como compostos antimicrobianos e antibiofilme alternativos contra o patógeno de suínosActinobacillus pleuropneumoniae

ABSTRACT: Actinobacilluspleuropneumoniae is the causative agent of swine pleuropneumonia, a contagious respiratory disease associated with high morbidity and economic losses. While antibiotic therapy helps to control the spreading of the pathogen on the farm, resistance to several classes of antibiotics were reported, and treatment can be impaired by the bacterial ability to form biofilms. This increases the need for alternative therapy approaches, including the use of natural compounds with antimicrobial and/or antibiofilm activities. In this research we analyzed, by the broth microdilution method, the inhibitory and bactericidal activities of the essential oils obtained from eighteen Brazilian popular medicinal plants or spices against clinical isolates of Actinobacilluspleuropneumoniae. After that, sub-inhibitory concentrations of active oils were tested for their antibiofilm effects, analyzed by the crystal violet method. Among the eighteen oils tested, eight (extracted from cinnamon, coriander, peppermint, spearmint, thyme, marjoram, eucalyptus, and laurel) presented bacteriostatic and bactericidal activities against all isolates, and subinhibitory concentrations of five of them disrupted up to 80% preformed biofilms, and significantly inhibited biofilm formation. The chemical composition of such oils was assessed by gas chromatography/mass spectrometry (GC/MS) and is presented, indicating that their bactericidal and antibiofilm properties were mostly associated with the presence of monoterpenes and phenylpropanoids. To our knowledge, this is the first report of essential oils with potential to control environmental contamination and animal infection with A. pleuropneumoniae, representing an alternative to increasing levels of antibiotic resistance.

RESUMO: Actinobacillus pleuropneumoniae é o agente causador da pleuropneumonia suína, uma doença respiratória contagiosa associada à alta morbidade e perdas econômicas. Embora a antibioticoterapia ajude a controlar a disseminação do patógeno na fazenda, a resistência a várias classes de antibióticos tem sido relatada e o tratamento pode ser prejudicado pela capacidade bacteriana de formar biofilmes. Isso aumenta a necessidade de abordagens terapêuticas alternativas, que incluem o uso de compostos naturais com atividades antimicrobianas e/ou antibiofilme. Neste trabalho, analisamos, pelo método de microdiluição em caldo nutriente, os efeitos inibitórios e bactericidas dos óleos essenciais obtidos de dezoito plantas medicinais brasileiras populares e/ou temperos contra isolados clínicos de Actinobacillus pleuropneumoniae. Então, concentrações subinibitórias dos óleos ativos foram testados quanto a suas atividades antibiofilme, analisados pelo método do cristal violeta. Dentre os dezoito óleos testados, oito (extraídos da canela, coentro, hortelã-pimenta, hortelã, tomilho, manjerona, eucalipto e louro) apresentaram atividade bacteriostática e bactericida contra todos os isolados, e concentrações subinibitórias de cinco deles romperam biofilmes pré-formados em até 80%, além de inibirem fortemente a formação de biofilmes. A composição química desses óleos foi avaliada por cromatografia gasosa/espectrometria de massa (CG/MS) e é apresentada, indicando que suas propriedades bactericidas e antibiofilme estavam principalmente associadas à presença de monoterpenos e fenilpropanóides. Este é o primeiro relato de óleos essenciais com potencial para controlar a contaminação ambiental e infecção animal por A. pleuropneumoniae, representando uma alternativa contra o crescente aumento de resistência bacteriana aos antibióticos.

Essential oils isolated from popular medicinal plants and spices as alternative antimicrobial and antibiofilm compounds against the pig pathogen Actinobacilluspleuropneumoniae / Óleos essenciais isolados de plantas medicinais e temperos populares como compostos antimicrobianos e antibiofilme alternativos contra o patógeno de suínosActinobacillus pleuropneumoniae

Actinobacilluspleuropneumoniae is the causative agent of swine pleuropneumonia, a contagious respiratory disease associated with high morbidity and economic losses. While antibiotic therapy helps to control the spreading of the pathogen on the farm, resistance to several classes of antibiotics were reported, and treatment can be impaired by the bacterial ability to form biofilms. This increases the need for alternative therapy approaches, including the use of natural compounds with antimicrobial and/or antibiofilm activities. In this research we analyzed, by the broth microdilution method, the inhibitory and bactericidal activities of the essential oils obtained from eighteen Brazilian popular medicinal plants or spices against clinical isolates of Actinobacilluspleuropneumoniae. After that, sub-inhibitory concentrations of active oils were tested for their antibiofilm effects, analyzed by the crystal violet method. Among the eighteen oils tested, eight (extracted from cinnamon, coriander, peppermint, spearmint, thyme, marjoram, eucalyptus, and laurel) presented bacteriostatic and bactericidal activities against all isolates, and subinhibitory concentrations of five of them disrupted up to 80% preformed biofilms, and significantly inhibited biofilm formation. The chemical composition of such oils was assessed by gas chromatography/mass spectrometry (GC/MS) and is presented, indicating that their bactericidal and antibiofilm properties were mostly associated with the presence of monoterpenes and phenylpropanoids. To our knowledge, this is the first report of essential oils with potential to control environmental contamination and animal infection with A. pleuropneumoniae, representing an alternative to increasing levels of antibiotic resistance.

Actinobacillus pleuropneumoniae é o agente causador da pleuropneumonia suína, uma doença respiratória contagiosa associada à alta morbidade e perdas econômicas. Embora a antibioticoterapia ajude a controlar a disseminação do patógeno na fazenda, a resistência a várias classes de antibióticos tem sido relatada e o tratamento pode ser prejudicado pela capacidade bacteriana de formar biofilmes. Isso aumenta a necessidade de abordagens terapêuticas alternativas, que incluem o uso de compostos naturais com atividades antimicrobianas e/ou antibiofilme. Neste trabalho, analisamos, pelo método de microdiluição em caldo nutriente, os efeitos inibitórios e bactericidas dos óleos essenciais obtidos de dezoito plantas medicinais brasileiras populares e/ou temperos contra isolados clínicos de Actinobacillus pleuropneumoniae. Então, concentrações subinibitórias dos óleos ativos foram testados quanto a suas atividades antibiofilme, analisados pelo método do cristal violeta. Dentre os dezoito óleos testados, oito (extraídos da canela, coentro, hortelã-pimenta, hortelã, tomilho, manjerona, eucalipto e louro) apresentaram atividade bacteriostática e bactericida contra todos os isolados, e concentrações subinibitórias de cinco deles romperam biofilmes pré-formados em até 80%, além de inibirem fortemente a formação de biofilmes. A composição química desses óleos foi avaliada por cromatografia gasosa/espectrometria de massa (CG/MS) e é apresentada, indicando que suas propriedades bactericidas e antibiofilme estavam principalmente associadas à presença de monoterpenos e fenilpropanóides. Este é o primeiro relato de óleos essenciais com potencial para controlar a contaminação ambiental e infecção animal por A. pleuropneumoniae, representando uma alternativa contra o crescente aumento de resistência bacteriana aos antibióticos.

Turmeric ethanol extract (Curcuma longa L. ) reduces apoptosis and promotes canine osteosarcoma cell proliferation / Extrato etanólico de açafrão (Curcuma longa L. ) reduz apoptose e promove proliferação de células de osteossarcoma canino

Curcuma longa L., also known as turmeric, has been widely studied for its various therapeutic properties, including antineoplastic action. The ethanolic extract of the plant contains several phenolic compounds, especially curcumin. Osteosarcoma is a predominant bone tumor in dogs and humans, characterized by high metastatic potential and an unfavorable prognosis. The aim of this study was to investigate the effects of turmeric ethanol extract on canine osteosarcoma cells from established culture. The cells were cultured and treated with different curcumin concentrations (0, 10 µM, 20 µM, 50 µM, 100 µM, and 1000 µM) and exposure times (24h, 48h, and 72h). We first performed tetrazolium reduction technique (MTT) assay and calculated IC50. An immunocytochemistry assay was performed after extract treatment to verify the expression of mutated p53 and therefore study the proliferative potential of malignant cells; Bcl-2 and Ki-67 were used to assess apoptosis and the degree of malignancy, respectively. The extract enhanced the proliferation of canine osteosarcoma cells, reaching 3,819.74% at 50 µM of curcumin. The extract also significantly altered the expression of mutated p53 and Ki-67 proteins but not that of Bcl-2, suggesting that it did not induce this antiapoptotic pathway. Overall, these results are prerequisite to better understanding how natural compounds such as turmeric ethanolic extract affect cell proliferation and could be used to treat various diseases.

A Curcuma longa L., planta conhecida popularmente como açafrão, tem sido amplamente estudada por suas diversas propriedades terapêuticas, incluindo a ação antineoplásica. O extrato etanólico da planta contém diversos compostos fenólicos, com destaque para a curcumina. O osteossarcoma é um tumor ósseo predominante em cães e humanos, caracterizado por apresentar alto potencial metastático e prognóstico desfavorável. Procurou-se investigar os efeitos de diferentes concentrações de curcumina do extrato etanólico de açafrão sobre células de osteossarcoma canino de cultura estabelecida. As células foram cultivadas e submetidas ao tratamento com extrato com diferentes concentrações de curcumina (0, 10 µM, 20 µM, 50 µM, 100 µM e 1000 µM) e tempos de exposição (24h, 48h e 72h) pelo EEA. Inicialmente, foram realizados: técnica de redução do tetrazólio (MTT) e cálculo da IC50. Posteriormente, após o tratamento com o extrato, realizou-se o ensaio de imunocitoquímica para verificar a expressão de p53 mutada e estudar o potencial proliferativo das células malignas; Bcl-2, com intuito de averiguar o estímulo de via antiapoptótica; e o marcador Ki-67, que sinaliza aumento no grau de malignidade. O extrato promoveu proliferação de células de osteossarcoma canino, com incremento de até 3819,74% na concentração de 50µM de curcumina. O composto também alterou a expressão das proteínas p53 mutante e Ki-67 significativamente, mas não alterou a expressão de Bcl-2, mostrando que não induziu a via antiapoptótica mediada por esta. Estes resultados demonstram que o extrato etanólico do açafrão apresenta potencial proliferativo sobre células de osteossarcoma canino, sugerindo a necessidade de conscientização e conhecimento dos reais efeitos de determinados compostos naturais, considerados seguros ao serem utilizados como tratamento de diversas enfermidades.

Dehydrobufotenin extracted from the Amazonian toad Rhinella marina (Anura: Bufonidae) as a prototype molecule for the development of antiplasmodial drugs

he resistance against antimalarial drugs represents a global challenge in the fight and control of malaria. The Brazilian biodiversity can be an important tool for research and development of new medicinal products. In this context, toxinology is a multidisciplinary approach on the development of new drugs, including the isolation, purification, and evaluation of the pharmacological activities of natural toxins. The present study aimed to evaluate the cytotoxicity, as well as the antimalarial activity in silico and in vitro of four compounds isolated from Rhinella marina venom as potential oral drug prototypes. Methods: Four compounds were challenged against 35 target proteins from P. falciparum and screened to evaluate their physicochemical properties using docking assay in Brazilian Malaria Molecular Targets (BraMMT) software and in silico assay in OCTOPUS® software. The in vitro antimalarial activity of the compounds against the 3D7 Plasmodium falciparum clones were assessed using the SYBR Green I based assay (IC50). For the cytotoxic tests, the LD50 was determined in human pulmonary fibroblast cell line using the [3(4,5-dimethylthiazol-2-yl)-2,5-diphenyltetrazolium bromide] (MTT) assay. Results: All compounds presented a ligand-receptor interaction with ten Plasmodium falciparum-related protein targets, as well as antimalarial activity against chloroquine resistant strain (IC50 = 3.44 µM to 19.11 µM). Three of them (dehydrobufotenine, marinobufagin, and bufalin) showed adequate conditions for oral drug prototypes, with satisfactory prediction of absorption, permeability, and absence of toxicity. In the cell viability assay, only dehydrobufotenin was selective for the parasite. Conclusions: Dehydrobufotenin revealed to be a potential oral drug prototype presenting adequate antimalarial activity and absence of cytotoxicity, therefore should be subjected to further studies.(AU)

Dehydrobufotenin extracted from the Amazonian toad Rhinella marina (Anura: Bufonidae) as a prototype molecule for the development of antiplasmodial drugs

he resistance against antimalarial drugs represents a global challenge in the fight and control of malaria. The Brazilian biodiversity can be an important tool for research and development of new medicinal products. In this context, toxinology is a multidisciplinary approach on the development of new drugs, including the isolation, purification, and evaluation of the pharmacological activities of natural toxins. The present study aimed to evaluate the cytotoxicity, as well as the antimalarial activity in silico and in vitro of four compounds isolated from Rhinella marina venom as potential oral drug prototypes. Methods: Four compounds were challenged against 35 target proteins from P. falciparum and screened to evaluate their physicochemical properties using docking assay in Brazilian Malaria Molecular Targets (BraMMT) software and in silico assay in OCTOPUS® software. The in vitro antimalarial activity of the compounds against the 3D7 Plasmodium falciparum clones were assessed using the SYBR Green I based assay (IC50). For the cytotoxic tests, the LD50 was determined in human pulmonary fibroblast cell line using the [3(4,5-dimethylthiazol-2-yl)-2,5-diphenyltetrazolium bromide] (MTT) assay. Results: All compounds presented a ligand-receptor interaction with ten Plasmodium falciparum-related protein targets, as well as antimalarial activity against chloroquine resistant strain (IC50 = 3.44 µM to 19.11 µM). Three of them (dehydrobufotenine, marinobufagin, and bufalin) showed adequate conditions for oral drug prototypes, with satisfactory prediction of absorption, permeability, and absence of toxicity. In the cell viability assay, only dehydrobufotenin was selective for the parasite. Conclusions: Dehydrobufotenin revealed to be a potential oral drug prototype presenting adequate antimalarial activity and absence of cytotoxicity, therefore should be subjected to further studies.(AU)

Efficacy of extracts from plants of the Brazilian Pantanal against Rhipicephalus (Boophilus) microplus

This research evaluated the in vitro acaricidal activity of extracts from 21 plant species from the Pantanal of Mato Grosso do Sul. During stage I, a larval immersion test was performed using three extract concentrations (5%, 20%, and 40%). During stage II, we used only plants that showed over 95% efficiency at the 40% concentration in stage I in an amount sufficient for the adult immersion test. Aeschynomene denticulata, Angelonia hirta, Aspilia latissima, Caperonia castaneifolia, Centratherum punctatum, Crotalaria micans, Diodia kuntzei, Echinodorus paniculatus, Hyptis mutabilis, Lantana canescens, Melanthera latifolia, Ocotea diospyrifolia, Richardia grandiflora, Sebastiana hispida, Tocoyena formosa, Zanthoxylum rigidum, and Sesbania virgata (fruit extract) showed acaricidal activity against the larval stage of Rhipicephalus (Boophilus) microplus higher than 95% at a 40% (w/v) concentration, while Hippocratea volubilis and Randia armata showed moderate efficacy and Croton glandulosus and Senna obtusifolia had no effect. The M. latifolia, A. hirta, R. grandiflora, and A. latissima raw extracts were evaluated for their activity against adults, and only A. hirta showed an efficacy close to 90%. Eighteen extracts had an efficacy of up to 95% against larvae at a 40% concentration, seven extracts were effective at 20%, and only one (Sebastiana hispida) was effective at a 5% concentration.

Este trabalho avaliou a atividade acaricida in vitro de extratos de 21 espécies de plantas do Pantanal de Mato Grosso do Sul. Na etapa I, foi realizado um teste de imersão larval utilizando três concentrações de extrato (5%, 20% e 40%). Na etapa II, utilizou-se apenas as plantas que apresentaram eficácia superior a 95%, na concentração de 40% na etapa I e que apresentasse quantidade suficiente para o teste de imersão de adulto. Aeschynomene denticulata, Angelonia hirta, Aspilia latissima, Caperonia castaneifolia, Centratherum punctatum, Crotalaria micans, Diodia kuntzei, Echinodorus paniculatus, Hyptis mutabilis, Lantana canescens, Melanthera latifolia, Ocotea diospyrifolia, Richardia grandiflora, Sebastiana hispida, Tocoyena formosa, Zanthoxylum rigidum e Sesbania virgata (extrato do fruto) apresentaram atividade acaricida sobre larvas de Rhipicephalus (Boophilus) microplus superior a 95% na concentração de 40% (w/v), enquanto Hippocratea volubilis e Randia armata apresentaram eficácia moderada e Croton glandulosus e Senna obtusifolia não apresentaram efeito acaricida. Os extratos brutos de M. latifolia, A. hirta, R. grandiflora e A. latissima foram avaliados sobre adultos e A. hirta apresentou eficácia próxima de 90%. Dezoito extratos apresentaram eficácia de até 95%, contra larvas, na concentração de 40%, sete extratos foram eficazes a 20% e apenas um (Sebastiana hispida) foi eficaz na concentração de 5%.

COMBINAÇÃO DE COMPOSTOS DE ÓLEOS ESSENCIAIS E ÁCIDOS FENÓLICOS CONTRA Escherichia coli O157:H7 in vitro E NA PRODUÇÃO DE SALAME

A contaminação de alimentos por Escherichia coli (ECEH) é responsável por perdas econômicas significativas na indústria de alimentos, além de riscos à saúde pública pela produção de toxina shiga, que pode ocasionar o desenvolvimento de colite hemorrágica e a síndrome urêmico-hemolítica. Dentre os produtos com maior incidência deste patógeno, o salame foi relacionado com surtos em diferentes regiões, pela ausência de processo térmico antes ou após a sua elaboração. Compostos naturais, como óleos essenciais (COE) e ácidos fenólicos (AF), possuem ampla atividade antimicrobiana, com potencial aplicação em alimentos. O objetivo deste trabalho foi avaliar a capacidade anti-E. coli O157:H7 do isotiocianato de alila (ITCA) e/ou carvacrol (CARV) em combinação com ácido p-hidroxibenzóico (AHB), ácido ferúlico (AFE) e ácido -cumárico (AC), para posterior aplicação da melhor combinação na produção de salame contaminado com E. coli O157:H7. Inicialmente foi determinada a concentração inibitória mínima (CIM) dos compostos individuais e a concentração inibitória fracionada (CIF) das seis combinações de COE e AF contra um pool de cinco cepas de E. coli O157:H7. A combinação entre ITCA e AC apresentou efeito sinérgico de inibição (CIFindex=0,25) (CIF = 3,125 µL ITCA/L + 350 mg AC/kg), sendo posteriormente aplicado em salame. As concentrações avaliadas foram 10 x CIF e 20 x CIF, além de um controle preparado nas mesmas condições, mas sem o tratamento com os antimicrobianos. Os salames foram maturados e desidratados por 35 dias. A atividade de água (Aw), pH e o controle microbiano, incluindo contagem de E. coli O157:H7 e da cultura starter (Pediococcus Pentosaceus e Staphylococcus carnosus) foram monitorados nos dias 0, 7, 14, 21, 28 e 35. Um teste sensorial de escala hedônica de 9 pontos foi realizado por 56 avaliadores não treinados, abrangendo cinco atributos do salame (odor, cor, sabor, textura e avaliação global). O CIM do ITCA, CARV, AF, AC e AHB foram respectivamente 0,25; 1,30; 5,12; 18,27; e 37,00 mM. Os resultados de Aw não apresentaram diferença significativa, já o pH das amostras tratadas (10 x CIF e 20 x CIF) foi significativamente maior, mas ainda dentro dos limites aceitáveis para a produção de salame. A população de E. coli O157:H7 foi reduzida com tratamento 20 x CIF em > 5,00 log UFC/g em 21 dias; e com 10 x CIF a redução foi 2,82 log UFC/ g em 35 dias. As populações da cultura starter (P. pentosaceus e S. carnosus) se apresentaram dentro da normalidade para a produção de salame em todos os tratamentos. A aplicação da combinação de AITC com AC foi capaz de reduzir a população de E. coli O157:H7 em um período mais curto do que a produção de salame. No entanto, o tratamento de 20 x CIF também reduziu a aceitação sensorial do produto em relação ao controle. Novas doses da combinação de AITC e AC, visando um aumento da concentração do óleo essencial, deverão ser testadas para reduzir os efeitos do ácido no sabor e textura do salame.

Food contamination by Enterohemorrhagic Escherichia coli (EHEC) is responsible for significant financial losses to industries, as well as public health risks due to the production of Shiga toxin, which may cause hemorrhagic colitis and hemolytic-uremic syndrom. Among the foods of higher incidence, salami has been related in Escherichia coli O157:H7 outbreaks in different regions, since this product does not guarantee the the absence of this pathogen after manufacture. Natural compounds, including compounds of Essential Oils (EOC) and Phenolic Acids (PA) with wide antimicrobial activity can be used as alternative preservatives in food products. The aim of this study was to evaluate the application of allyl Isothiocyanate (AITC), carvacrol (CARV) in combination with p-hydroxybenzoic acid (HBA), ferulic acid (FA) and o-coumaric acid (CA) applied in salami. The Minimum Inhibitory Concentration (MIC) of the compounds and the fractional inhibitory concentration (FIC) of six combinations between COE and AF were determined in a pool of E. coli O157:H7. The combination of AITC and CA showed synergistic effect by the FIC test (FICindex=0.25) (3.125 µL/L AITC + 350 mg/L CA), and was later applied in salamis at concentrations of 10x FIC and 20x FIC, and compared to a control group. Sausages were ripened for 35 d. The water activity (Aw), pH and populations of E. coli O157:H7 and starter cultures (Pediococcus Pentosaceus and Staphylococcus carnosus) were examined on days 0, 7, 14, 21, 28 and 35. Sensory analysis comprised of a nine-points hedonic test was also performed by 56 panelists to evaluate five attributes of the salamis (appareance, odor, flavor, texture, overall evaluation). The MIC of the AITC, CARV, FA, CA and HBA were 0.25, 1.3, 5.12, 18.27 and 37.00 mM, respectively. Water activity data showed no difference between control and treatments. The pH of the treatments (10x FIC and 20x FIC) was significantly higher than the control, but still within the acceptable range for this type of product. P. pentosaceus and S. carnosus populations were also within the normal range for salami in all treatments, while E. coli O157:H7 was reduced by > 5 log CFU/g after 21 days with 20x FIC, and by 2.82 log CFU/g after 35 days with 10x FIC. Treatments with AITC + CA significantly altered the sensory charecteristics of salami in comparison to the control. Other combinatory doses of AITC + CA, increasing the levels of the essential oil, should be tested to reduce the effects of the acid in flavor and texture of salami.

Efeito de extratos aquosos de espécies vegetais sobre a multiplicação de Rotylenchulus reniformis Linford & Oliveira / The effect of aqueous extracts of plant species on the multiplication of Rotylenchulus reniformis Linford & Oliveira

A busca por medidas alternativas no controle de fitonematoides vem sendo estimulada, e a aplicação de extratos vegetais pode tornar-se uma medida viável para pequenas aéreas. Avaliou-se o efeito da adição ao solo de extratos aquosos de oito espécies vegetais sobre a multiplicação de Rotylenchulus reniformis. O experimento foi conduzido em condições de casa de vegetação com temperaturas máxima e mínima de 34,2º C e 25,6º C, respectivamente. Plantas de algodoeiro foram inoculadas com 4.000 ovos do nematoide e, em seguida, adicionou-se 20 mL dos extratos aquosos obtidos de folhas de Crotalaria spectabilis. Arctium lappa. Plectranthus barbatus. Rosmarinus officinalis. Origanum vulgare. Cajanus cajan. Mucuna aterrima e Momordica charantia. O inoculo foi obtido de populações puras, multiplicadas em plantas de algodoeiro, mantidas em casa de vegetação. Após 60 dias, avaliou-se o número de ovos, altura das plantas, diâmetro do caule e peso fresco da parte aérea e das raízes. Os extratos de C. cajan, O. vulgare, M. aterrima e M. charantia reduziram o número de ovos em 28, 28, 44 e 60%, respectivamente. Para o diâmetro do caule os extratos de M. aterrima e C. cajan diferiram da testemunha e demais tratamentos. Com relação ao peso da parte aérea, os extratos de C. cajan. P. barbatus. M. aterrima e C. spectabilis diferiram da testemunha e demais tratamentos. Portanto, os extratos de Mucuna aterrima. C. cajan. O. vulgare e M. charantia podem ser uma opção para o controle de R. reniformis.

The search for alternative measures for the control of nematodes has been stimulated, and the application of plant extracts can become a viable measure for small farmers. This study evaluated the effect on the multiplication of Rotylenchulus reniformis when aqueous extracts of eight plant species were added to the soil. The experiment was conducted under greenhouse conditions with maximum and minimum temperatures of 34.2 and 25.6° C, respectively. Cotton plants were inoculated with 4,000 nematode eggs and then a volume of 20 mL of aqueous extracts obtained from leaves of Crotalaria spectabilis, Arctium lappa, Plectranthus barbatus, Rosmarinus officinalis, Origanum vulgare, Cajanus cajan, Mucuna aterrima and Momordica charantia was added. The inoculum was obtained from pure populations multiplied in cotton plants, kept in a greenhouse. After 60 days the number of eggs, plant height, stem diameter and fresh weight of shoots and roots was evaluated. The extracts of Cajanus cajan, Origanum vulgare. Mucuna aterrima, and Momordica charantia reduced the number of eggs by 28, 28, 44 and 60% respectively. In relation to stem diameter, the extracts of M. aterrima and C. cajan differed from the control and the other treatments. In relation to the weight of the shoot, extracts of C. cajan. P. barbatus. M. aterrima and C. spectabilis differed from the control and the other treatments. Therefore, the extracts of M. aterrima. C. cajan. O. vulgare and M. charantia can serve as options for the control of R. reniformis.

EFEITO DE EXTRATOS AQUOSOS DE ESPÉCIES VEGETAIS SOBRE A MULTIPLICAÇÃO DE ROTYLENCHULUS RENIFORMIS LINFORD & OLIVEIRA

ABSTRACT The search for alternative measures for the control of nematodes has been stimulated, and the application of plant extracts can become a viable measure for small farmers. This study evaluated the effect on the multiplication of Rotylenchulus reniformis when aqueous extracts of eight plant species were added to the soil. The experiment was conducted under greenhouse conditions with maximum and minimum temperatures of 34.2 and 25.6° C, respectively. Cotton plants were inoculated with 4,000 nematode eggs and then a volume of 20 mL of aqueous extracts obtained from leaves of Crotalaria spectabilis, Arctium lappa, Plectranthus barbatus, Rosmarinus officinalis, Origanum vulgare, Cajanus cajan, Mucuna aterrima and Momordica charantia was added. The inoculum was obtained from pure populations multiplied in cotton plants, kept in a greenhouse. After 60 days the number of eggs, plant height, stem diameter and fresh weight of shoots and roots was evaluated. The extracts of Cajanus cajan, Origanum vulgare. Mucuna aterrima, and Momordica charantia reduced the number of eggs by 28, 28, 44 and 60% respectively. In relation to stem diameter, the extracts of M. aterrima and C. cajan differed from the control and the other treatments. In relation to the weight of the shoot, extracts of C. cajan. P. barbatus. M. aterrima and C. spectabilis differed from the control and the other treatments. Therefore, the extracts of M. aterrima. C. cajan. O. vulgare and M. charantia can serve as options for the control of R. reniformis.

RESUMO A busca por medidas alternativas no controle de fitonematoides vem sendo estimulada, e a aplicação de extratos vegetais pode tornar-se uma medida viável para pequenas aéreas. Avaliou-se o efeito da adição ao solo de extratos aquosos de oito espécies vegetais sobre a multiplicação de Rotylenchulus reniformis. O experimento foi conduzido em condições de casa de vegetação com temperaturas máxima e mínima de 34,2º C e 25,6º C, respectivamente. Plantas de algodoeiro foram inoculadas com 4.000 ovos do nematoide e, em seguida, adicionou-se 20 mL dos extratos aquosos obtidos de folhas de Crotalaria spectabilis. Arctium lappa. Plectranthus barbatus. Rosmarinus officinalis. Origanum vulgare. Cajanus cajan. Mucuna aterrima e Momordica charantia. O inoculo foi obtido de populações puras, multiplicadas em plantas de algodoeiro, mantidas em casa de vegetação. Após 60 dias, avaliou-se o número de ovos, altura das plantas, diâmetro do caule e peso fresco da parte aérea e das raízes. Os extratos de C. cajan, O. vulgare, M. aterrima e M. charantia reduziram o número de ovos em 28, 28, 44 e 60%, respectivamente. Para o diâmetro do caule os extratos de M. aterrima e C. cajan diferiram da testemunha e demais tratamentos. Com relação ao peso da parte aérea, os extratos de C. cajan. P. barbatus. M. aterrima e C. spectabilis diferiram da testemunha e demais tratamentos. Portanto, os extratos de Mucuna aterrima. C. cajan. O. vulgare e M. charantia podem ser uma opção para o controle de R. reniformis.

Evaluation of plant aqueous extracts, added into the soil, on Meloidogyne javanica (Treub, 1885) Chitwood, 1949 / Avaliação de extratos aquosos de várias espécies vegetais, aplicados ao solo, sobre Meloidogyne javanica (Treub, 1885) Chitwood, 1949

The use of plant extracts with nematicidal properties to control plant nematodes can be a useful alternative to small farmers, regarding its low cost and non-toxic effects. The effect of the addition into the soil of aqueous extracts of 20 plant species on Meloidogyne javanica in plants of tomato was studied at greenhouse conditions. These were divided into two groups and evaluated in two separate experiments.The soil in the 2.0 L pots was infested with 5,000 eggs and, in the same day, it was applied 20 mL of aqueous extracts of the 20 plant species (Chrysanthemum parthenium, Arctium lappa, Cymbopogon citratus, Bacharis trimera, Equisetum sp., Melia azedarach, Mentha sp., Ricinus communis, Ocimum basilicum, Momordica charantia, Ruta graveolens, Coleus barbatus, Symphitum officinalis, Polygonum acre, Canavalia ensiformis, Foeniculum vulgare, Petiveria alliacea, Ageratum conyzoides, Mucuna pruriens and Azadirachta indica). Distilled water was used as control. Sixty days later, were evaluated for plant height, the fresh weight of shoot and root and the numbers of galls and eggs per root system. The extracts of Mentha sp., Arctium lappa and Ricinus communis reduced the number of galls of M. javanica in 75.6%; 65.7% and 54.4%; and the number of eggs in 81.7%, 75.9% and 56.6%, respectively.

O uso de extratos vegetais com propriedades nematicidas no controle de fitonematóides representa mais uma alternativa para os pequenos produtores, com valor prático e econômico, e sem riscos de contaminação do ambiente. A adição ao solo dos extratos aquosos de 20 espécies de plantas foi avaliada sobre a população de Meloidogyne javanica em plantas de tomateiro, em casa de vegetação. Estas foram divididas em dois grupos e avaliadas em dois experimentos separados. No mesmo dia em que se infestou o solo com 5.000 ovos do nematóide, adicionou-se 20 mL dos extratos aquosos obtidos de folhas de artemísia (Chrysanthemum parthenium), bardana (Arctium lappa), capim cidreira (Cymbopogon citratus), carqueja (Bacharis trimera), cavalinha (Equisetum sp.), cinamomo (Melia azedarach), hortelã (Mentha sp.), mamona (Ricinus communis), manjericão (Ocimum basilicum), melão-de-São-Caetano (Momordica charantia), arruda (Ruta graveolens), falso-boldo (Coleus barbatus), confrei (Symphitum officinalis), erva-de-bicho (Polygonum acre), feijão-de-porco (Canavalia ensiformis), funcho (Foeniculum vulgare), guiné (Petiveria alliacea), mentrasto (Ageratum conyzoides), mucuna-cinza (Mucuna pruriens) e nim (Azadirachta indica). Água destilada foi adicionada ao solo como tratamento testemunha. Após 60 dias, avaliou-se a altura das plantas, o peso fresco da parte aérea e da raiz e os números de galhas e de ovos

Evaluation of plant aqueous extracts, added into the soil, on Meloidogyne javanica (Treub, 1885) Chitwood, 1949 / Avaliação de extratos aquosos de várias espécies vegetais, aplicados ao solo, sobre Meloidogyne javanica (Treub, 1885) Chitwood, 1949

The use of plant extracts with nematicidal properties to control plant nematodes can be a useful alternative to small farmers, regarding its low cost and non-toxic effects. The effect of the addition into the soil of aqueous extracts of 20 plant species on Meloidogyne javanica in plants of tomato was studied at greenhouse conditions. These were divided into two groups and evaluated in two separate experiments.The soil in the 2.0 L pots was infested with 5,000 eggs and, in the same day, it was applied 20 mL of aqueous extracts of the 20 plant species (Chrysanthemum parthenium, Arctium lappa, Cymbopogon citratus, Bacharis trimera, Equisetum sp., Melia azedarach, Mentha sp., Ricinus communis, Ocimum basilicum, Momordica charantia, Ruta graveolens, Coleus barbatus, Symphitum officinalis, Polygonum acre, Canavalia ensiformis, Foeniculum vulgare, Petiveria alliacea, Ageratum conyzoides, Mucuna pruriens and Azadirachta indica). Distilled water was used as control. Sixty days later, were evaluated for plant height, the fresh weight of shoot and root and the numbers of galls and eggs per root system. The extracts of Mentha sp., Arctium lappa and Ricinus communis reduced the number of galls of M. javanica in 75.6%; 65.7% and 54.4%; and the number of eggs in 81.7%, 75.9% and 56.6%, respectively.     

O uso de extratos vegetais com propriedades nematicidas no controle de fitonematóides representa mais uma alternativa para os pequenos produtores, com valor prático e econômico, e sem riscos de contaminação do ambiente. A adição ao solo dos extratos aquosos de 20 espécies de plantas foi avaliada sobre a população de Meloidogyne javanica em plantas de tomateiro, em casa de vegetação. Estas foram divididas em dois grupos e avaliadas em dois experimentos separados. No mesmo dia em que se infestou o solo com 5.000 ovos do nematóide, adicionou-se 20 mL dos extratos aquosos obtidos de folhas de artemísia (Chrysanthemum parthenium), bardana (Arctium lappa), capim cidreira (Cymbopogon citratus), carqueja (Bacharis trimera), cavalinha (Equisetum sp.), cinamomo (Melia azedarach), hortelã (Mentha sp.), mamona (Ricinus communis), manjericão (Ocimum basilicum), melão-de-São-Caetano (Momordica charantia), arruda (Ruta graveolens), falso-boldo (Coleus barbatus), confrei (Symphitum officinalis), erva-de-bicho (Polygonum acre), feijão-de-porco (Canavalia ensiformis), funcho (Foeniculum vulgare), guiné (Petiveria alliacea), mentrasto (Ageratum conyzoides), mucuna-cinza (Mucuna pruriens) e nim (Azadirachta indica). Água destilada foi adicionada ao solo como tratamento testemunha. Após 60 dias, avaliou-se a altura das plantas, o peso fresco da parte aérea e da raiz e os números de galhas e de ovos