Avaliação dos efeitos da congelação do sêmen suíno em diferentes concentrações na palheta de 0,5 ml em relação às características de motilidade, integridade das membranas espermáticas e peroxidação lipídica

A ausência de trabalhos verificando a melhor concentração de espermatozoides para se congelar o sêmen de cachaços em palhetas de 0,5mL, gerou necessidade deste estudo. O experimento propôs encontrar uma quantidade ideal, ou seja, uma concentração em que se consiga congelar o maior número de espermatozoides por palheta, sem aumentar os danos já causados pelo processo de criopreservação dos espermatozoides de cachaços. Diante disso, foram realizadas 5 coletas de 5 cachaços (n=25), utilizando apenas a fração rica do ejaculado. Estes foram divididos em cinco concentrações espermáticas diferentes, a saber: 100, 200, 300, 600 e 800x106 espermatozoides/mL e congelados em palhetas de 0,5mL. Após o processo de criopreservação, realizado por um sistema automatizado, as plalhetas foram acondicionadas em botijão criogênico. Para as análises, 2 palhetas de cada concentração foram descongeladas em banho maria (37ºC por 30 segundos) e submetido às avaliações das características de motilidade através do CASA, citometria de fluxo para a análise da integridade das membranas acrossomal e plasmática, potencial mitocondrial, peroxidação lipídica e fluidez da membrana espermática (capacitação), além da morfologia espermática por microscopia de contraste de interferência diferencial de fase. As variáveis avaliadas foram submetidas à análise de variância e ao teste de média PDDIF, ao nível de 5%. O aumento da concentração espermática, na palheta de 0,5mL, afetou significativamente (p<0,05) a motilidade total e progressiva, velocidade progressiva, velocidade de trajeto, linearidade, retilinearidade, frequência de batimento flagelar e hiperativação. O aumento do número de espermartozoides na palheta não alterou (p>0,05) a porcentagem de células que apresentavam simultaneamente a integridade das membranas plasmática e acrossomal e com potencial mitocondrial (MIAIAP), o aumento não influenciou (p>0,05) as variáveis peroxidação lipídica, capacitação e morfologia espermática. Baseado nos resultados, pode-se sugerir a congelação de até 300x106 espermatozoides/mL, na palheta de 0,5 mL, sem maiores danos à motilidade e integridade das membranas espermáticas.

The lack of studies veryfing the best concentration of sperm to freeze the boar semen in 0.5 ml straws, bring forth necessity for this study. The experiment proposed to find an optimal amount, in other words a concentration that is possible to freeze the higher number of spermatozoa per straw without increasing the damage already caused by the process of cryopreservation of boar spermatozoa. Therefore, there were 5 semen collections of 5 boars (n = 25) using only the rich fraction of the ejaculate. They were divided into five different sperm concentrations, namely 100, 200, 300, 600 and 800x106 sperm / mL and frozen in 0.5 ml straw. After the cryopreservation process, carried out by an automated system, straws were placed in cryogenic cylinders. For the analysis, two straws of each concentration were thawed in water bath (37°C for 30 seconds) and subjected to evaluations of motility characteristics through CASA, flow cytometry to analyze the integrity of the acrosome and plasma membrane, mitochondrial potential, peroxidation and lipid fluidity of sperm membrane (capacitation), and the sperm morphology by phase differential interference contrast microscopy. The variables were subjected to analysis of variance and the average test PDDIF, at 5%. The increased sperm concentration, in the 0.5mL straw, affected significantly (p <0.05) total and progressive motility, progressive velocity, path velocity, linearity, straightness, flagellar beat frequency and hyperactivation. The increase in the spermatozoa number, in 0,05 mL straw, did not change (p> 0.05) the percentage of cells that simultaneously showed the integrity of plasma and acrosomal membranes and with high mitochondrial potential (MIAIHM), the increase did not affect (p> 0.05) the lipid peroxidation variables, training and sperm morphology. Based on the results, it can be suggested to freeze with 300x106 spermatozoa / ml, in 0.5 mL straw, without major damage to the integrity and motility of the sperm membrane.

Taxa de gestação de vacas nelore inseminadas artificialmente em tempo fixo com diferente concentração espermática e momento de inseminação / Tasa de preñez de vacas nelores inseminadas artificialmente en tiempo fijo con diferente concentración espermática y momento de inseminación / The rate gestation of nellore cows submitted fixed time artificial insemination under different sperm concentration and insemination moment

Neste estudo objetivou-se avaliar a taxa de gestação, 86 vacas foram submetidas à inseminação artificial em tempo fixo (IATF), sob o protocolo: D0 (dia zero) inserção do implante intravaginal de progesterona (CIDR®) e aplicação intramuscular (IM) de benzoato de estradiol (2mg - Estrogin®); D7 retirada do implante e aplicação IM de prostaglandina (Veteglan®), D8 administração IM de Gonadotrofina Coriônica Humana (hCG - Vetecor®) e D9 IATF. Na IATF utilizou-se sêmen comercial de qualidade e eficiência comprovada. As vacas foram divididas em: Grupo 1 (35), Grupo 2 (26) e Grupo 3 (25), e inseminadas utilizando-se uma única dose de sêmen, duas doses juntas e duas doses com intervalo de 12 horas, respectivamente. Após 60 dias realizou-se o diagnóstico de gestação pela palpação transretal, que foi comparado pelo teste do Qui-quadrado. Observou-se que a taxa de gestação foi semelhante entre os grupos [31,43% (11/35), 34,62% (09/26) e 20,00% (05/25) para os grupos 1, 2 e 3, respectivamente), bem como, a sincronia entre a chegada dos espermatozóides ao local da fertilização, indicando que a concentração de espermatozóides e o intervalo de 12 horas entre as IATF não influenciaram a fertilidade de vacas Nelore, quando submetidas às condições desse estudo.(AU)

The purpose of this study is to evaluate gestation rate of Nellore cows artificially inseminated in fixed time under different methodologies. Eighty-six Nellore cows, kept grazing, supplemented with protein salt and water ad libitum, were submitted to Fixed Time Artificial Insemination (FTAI) on the following protocol: animals received an intravaginal progesterone device (CIDR®) on day zero (D0) and injection IM intramuscular of estradiol (2mg - Estrogin®). After 7 days (D7), the device was removed and prostaglandin (Veteglan®) IM administered. On the eighth day (D8), 1000UI of human chorionic gonadotrofina (Vetecor®) were IM administered, and, on the ninth Day (D9), the FTAI ? when the animals were randomly assigned into three experimental groups: Group 1 (n=35) were inseminated approximately 48h after the removal of the device with a single dose of commercial semen from a tested and quality-attested bull. The animals from Group 2 (n=26) were inseminated at the same time and conditions of the former group; however, two doses of semen were inserted together, whereas the animals from Group 3 (n=25) were inseminated twice, with an interval of approximately 12h between the insertions. The diagnosis of gestation through transrectal palpation was carried out 60 days later and was compared among the groups by the Qui-squared test. Gestation rate was similar for the animals from the different experimental groups (p<0.05): 31.43% (11/35), 34.62% (09/26) and 20% (05/25) for the animals from Groups 1, 2 and 3, respectively. Thus, it is concluded that under the conditions of this study, the conventional dose of semen traditionally used in AI programs does not interfere with the fertility and sync between the arrival of sperm to fertilize location of cows submitted to FTAI.(AU)

En este estudio se buscó evaluar la tasa de preñez, 86 vacas sometidas a la inseminación artificial en tiempo fijo (IATF), bajo el protocolo: D0 (día cero) inserción del implante intravaginal de progesterona (CIDR®) y aplicación intramuscular (IM) de benzoato de estradiol (2mg - Estrogin®); D7 retirada del implante y aplicación IM de prostaglandina (Veteglan®), D8 administración IM de Gonadotrofina Coriónica Humana (hCG - Vetecor®) y D9 IATF. En la IATF se utilizó semen comercial de calidad y eficiencia comprobada. Las vacas fueron divididas en: Grupo 1 (35), Grupo 2 (26) y Grupo 3 (25), e inseminadas utilizándose una única dosis de semen, dos dosis juntas y dos dosis con intervalo de 12 horas, respectivamente. Después de 60 días se realizó el diagnóstico de preñez por palpación transrectal, que fue comparado por el test Qui-cuadrado. Se observó que la tasa de preñez fue semejante entre los grupos 31,43% (11/35), 34,62% (09/26) y 20,00% (05/25) para los grupos 1, 2 y 3 respectivamente, así como, la sincronía entre la llegada de los espermatozoides al local de fertilización, indicando que la concentración de espermatozoides y el intervalo de 12 horas entre las IATF no influenciaron la fertilidad de vacas Nelore, cuando sometidas a las condiciones de ese estudio.(AU)

Dinâmica ovariana, concentração de progesterona e taxa de gestação em vacas Nelore inseminadas artificialmente em tempo fixo sob diferentes metodologias / The follicular dynamics, progesterone concentration and gestation rate of Nellore cows / artificially inseminated in fixed time under different methodologies / Dinámica ovárica, concentración de progesterona e índice de preñez en vacas de la raza Nelore inseminadas artificialmente en tiempo fijo bajo diferentes metodologías

Con la intención de maximizar la eficiencia de rebaños bovinos, la utilización de sincronización de estros y ovulación, asociados a la IATF, ha sido divulgada y estudiada por las ventajas que ofrece. Estudios involucrando IATF son muchos, con protocolos y resultados variables. Sin embargo, se busca la precisión del momento de la ovulación, la concentración ideal de espermatozoides en dosis de semen y la reducción en preparaciones hormonales y costos, viabilizando la utilización rutinera con mejores resultados y accesibilidad económica. Este estudio pretende evaluar la dinámica folicular, la concentración de progesterona e índice de preñez en ganado lechero de la raza Nelore inseminadas artificialmente, en tiempo fijo, bajo diferentes metodologías. Para tanto, 86 vacas de la raza Nelore, de diferentes categorías, mantenidas bajo pastaje, suplementadas con sal, proteínas y agua ad limitum, fueron sometidas a la IATF, siguiendo el protocolo: implante intravaginal de progesterona (CIDR®) en el día cero (DO) y aplicación de estradiol. Tras siete días (D7) el implante fue retirado y se aplicó PGF2alfa (Veteglan®). En el octavo día (D8) se inyectó 1000UI de hCG (Vetecor®) y, en el noveno día (D9) la IATF, cuando las hembras fueron divididas al alzar, en tres grupos experimentales. De los animales sometidos al experimento, al alzar se eligió siete animales, para recolección de sangre para dosificar progesterona sérica, por la técnica de radioinmunoensayo de fase sólida, que fue realizada en los días del implante. Esos mismos animales fueron sometidos, dos veces al día (mañana y tarde), a la ultrasonografía transrectal, para evaluación del momento de la retirada del implante de progesterona hasta la IATF, del número de folículos en cada ovario (derecho e izquierdo) y del diámetro del mayor folículo presente en cada uno de ellos.(AU)

In an attempt to maximize the efficiency of cattle, the use of synchronization of estrus and ovulation associated to FTAI has been published and studied as a result of the advantages it provides. There are a number of current studies related to FTAI - with varied results and protocols. However, the accuracy of the moment of ovulation, the ideal concentration of spermatozoids within the dose of semen, the reduction of hormone preparations, and costs, thus making practical the routine use with better results and economical accessibility, have been researched. The purpose of this study is to evaluate the follicular dynamics, progesterone concentration and gestation rate of Nellore cows artificially inseminated in fixed time under different methodologies. Eight-six Nellore cows, from different categories, kept grazing, supplemented with protein salt and water ad libitum, were submitted to FTAI on the following protocol: animals received an intravaginal progesterone device (CIDR®) on day zero (D0) and injection of estradiol. After 7 days (D7), the device was removed and PGF2alpha (Veteglan®) administered. On the eighth day (D8), 1000UI of hCG (Vetecor®) were administered, and, on the ninth Day (D9), the IATF - when the animals were randomly assigned into three experimental groups. Seven animals were chosen from the experimental animals and had their blood collected for the dosage of serum progesterone by the solid-phase radioimmunoassay technique, which was conducted on the days of the insertion, on the removal, on days 2, 10, 15, 18, and 23 after the insertion removal. The same animals were submitted, twice a day (morning and afternoon), to transrectal ultrasonography for the assessment of the moment of the removal of the device until the FTAI, the amount of follicles in each ovarium (right and left) and the diameter of the longest follicle in each of them.(AU)

Na tentativa de maximizar a eficiência de rebanhos bovinos, a utilização da sincronização de estros e ovulação, associados à IATF, tem sido divulgada e estudada pelas vantagens que oferece. Estudos envolvendo IATF são muitos, atuais, com protocolos e resultados variáveis. No entanto, continua-se pesquisando a precisão do momento da ovulação, a concentração ideal de espermatozóides na dose de sêmen e a redução nas preparações hormonais e custos, viabilizando a utilização rotineira com melhores resultados, e acessibilidade econômica. Pretende-se, com este estudo, avaliar a dinâmica folicular, a concentração de progesterona e a taxa de gestação de vacas Nelore inseminadas artificialmente, em tempo fixo, sob diferentes metodologias. Para tanto, 86 vacas da raça Nelore, de diferentes categorias, mantidas sob pastejo, suplementadas com sal proteinado e água ad libitum, foram submetidas à IATF, seguindo o seguinte protocolo: implante intravaginal de progesterona (CIDR®) no dia zero (D0) e aplicação de estradiol. Após sete dias (D7) o implante foi retirado e aplicou-se PGF2alfa (Veteglan®). No oitavo dia (D8) administrou-se 1000UI de hCG (Vetecor®) e, no nono dia (D9), a IATF, quando as fêmeas foram divididas aleatoriamente, em três grupos experimentais. Dos animais experimentais, escolheram-se aleatoriamente sete animais, para coleta de sangue para dosagem de progesterona sérica, pela técnica de radioimunoensaio de fase sólida, que foi realizada nos dias do implante, na retirada, aos 2, 10, 15, 18 e 23 dias após a retirada do implante. Esses mesmos animais foram submetidos, duas vezes ao dia (manhã e tarde), à ultrassonografia transretal, para avaliação do momento da retirada do implante de progesterona até a IATF, do número de folículos em cada ovário (direito e esquerdo) e do diâmetro do maior folículo presente em cada um deles.(AU)

Relação entre perímetro escrotal e concentração espermática em cães, clinicamente normais, da raça Pastor Alemão

The aim of this study was to estimate the correlation between scrotal girth and spermatic concentration in German Sheepherd dogs. Thirteen German Sheepherd dogs were used and 44 semen samples were obtained by digital manipulation. The ejaculate was separated in its three fractions. The sperm rich fraction was kept for evaluation and determination of spermatic concentration by spectrofotometry. The parameters were expressed as mean and standard deviation. Spearman correlation test was used to estimate the correlation between spermatic concentration and scrotal girth. The mean spermatic concentration was 568.45±314.91x10(6) sptz/ml and the mean scrotal girth was17.6±1.6 cm and the correlation was r = 0.10. It can be conclude that scrotal girth can not be an appropriate measurement as indicative of spermatic concentration in German Sheepherd dogs.

Efeito da concentração espermática e do número de inseminações artificiais sobre a fertilidade de éguas inseminadas com sêmen fresco diluído / Effects of sperm concentration and number of artificial inseminations on fertility of inseminated mares with diluted fresh semen

Sessenta e duas fêmeas eqüinas (tipo militar) foram distribuídas, ao acaso, em dois grupos experimentais para estudar o efeito da concentração espermática (200I 10(6) e 400I 10(6) de espermatozóides progressivamente móveis/dose inseminante) e do número de inseminações/ciclo (duas, três e quatro ou mais inseminações) sobre a fertilidade. As éguas foram rufiadas e inseminadas às segundas, quartas e sextas-feiras, a partir de um folículo de 3,0 a 3,5cm de diâmetro, com sêmen de apenas um garanhão com fertilidade comprovada, diluído para um volume inseminante de 10ml com diluidor de mínima contaminação. As taxas de concepção ao primeiro ciclo para as concentrações de 200 e 400 milhões foram de 66,7 por cento (20/30) e 65,5 por cento (19/29), e as taxas de concepção/ciclo, após quatro ciclos, de 52,0 por cento (26/50) e 57,8 por cento (26/45), respectivamente (P>0,05). As taxas de concepção ao primeiro ciclo para os grupos com duas, três e quatro ou mais inseminações/ciclo foram, respectivamente, 72,0 por cento (18/25), 65,2 por cento (15/23) e 54,6 por cento (6/11), sem que se observassem diferenças entre elas (P>0,05). Após quatro ciclos, as taxas de concepção foram de 59,0 por cento (23/39), 52,5 por cento (21/40) e 50,0 por cento (8/16), respectivamente, na mesma ordem de citação (P>0,05). Com base nos resultados, recomendam-se inseminações às segundas, quartas e sextas-feiras, utilizando-se a concentração de 200I10(6) SPTZ/dose inseminante, sem que haja perda da fertilidade, independente do número de inseminações/ciclo.(AU)

This work aimed to study the effects of spermatic concentrations (200× 10(6) and 400×10(6) spermatozoa/inseminated dose) and number of inseminations (two, three and four or more) on the fertility of 62 mares (military type). Mares were teased and inseminated on Mondays, Wednesdays and Fridays with diluted semen from only one stallion of proven fertility. The conception rates during the first cycle for the two spermatic concentrations were, respectively, 66.7%(20/30) and 65.5%(19/29) and after four cycles they were, respectively, equals to 52.0%(26/50) and 57.8%(26/45) with no difference on conception rate according to the spermatic concentrations (P>0.05). The conception rates for the first cycle after two, three and four or more inseminations were, respectively, 72.0%(18/25), 65.2%(15/23) and 54.6%(6/11) and after four cycles they were, respectively, equals to 59.0%(23/39), 52.5%(21/40) and 50.0%(8/16) with no differences on conception rates according to the number of inseminations. The results suggested that mares could be inseminated using a spermatic concentration of 200×106/inseminated dose on Mondays, Wednesdays and Fridays without any loss of fertility independently of the number of inseminations/cycle.(AU)