Effect of the cryopreservation method used, the embryonic stage and the use of conjugated linoleic acid isomers on the cryotolerance of in vitro-produced bovine embryos / Efeito do método de criopreservação utilizado, estágio de desenvolvimento embrionário e uso de isômeros do ácido linoleico conjugado na criotolerância de embriões bovinos produzidos in vitro

Conjugated linoleic acid (CLA) might be able to improve the cryotolerance of in vitro-produced (IVP) embryos. The effect of two CLA isomers on the cryotolerance of bovine IVP embryos, as well as that of the stage of embryonic development and the method used for cryopreservation was evaluated by three experiments. In Experiment 1, oocytes (n = 3,917) were fertilized in vitro and cultured with 0, 50, 100, or 200 μM trans-10, cis-12 (t10, c12 CLA). In Experiment 2, fertilized oocytes (n = 2,131) were cultured with 100 μM t10, c12 or cis-9, trans-11 (c9, t11 CLA), or a combination of both isomers. The embryos were vitrified at the blastocyst (BL) or the expanded blastocyst (EB) stage. In Experiment 3, oocytes (n = 1,720) were fertilized and cultured with or without 100 μM t10, c12 CLA, and the blastocysts were vitrified or frozen. Blastocyst development rate as well as the rates of re-expansion and hatching after thawing was recorded. Moreover, the mean cell number and mRNA expression of acetyl-CoA carboxylase (ACC1) and stearoyl-CoA desaturase (SCD1) as well as fatty acid synthase (FASN) multienzyme complex were determined. In Experiment 1, the highest concentration of t10, c12 CLA that did not reduce blastocyst development rate was 100 μM. In Experiment 2, the rates of re-expansion and hatching among the EBs obtained through IVP after supplementation with t10, c12 CLA (73.1% and 57.7%), with c9, t11 CLA (80.0% and 68.6%), with the combination (78.3% and 52.2%), and with the control group (85.4% and 58.3%) were similar. At the BL stage, the rates of re-expansion and hatching were lower than those at the EB stage, and CLA combination allowed a hatching rate (8.0%) lower than that observed in the control group (40.0%). In Experiment 3, the hatching rates for vitrified EBs (vitrified control; 67.4%) and vitrified CLA EBs (65.8%) were higher than those obtained for frozen EBs, exposed (13.3%) or not exposed (28.6%) to CLA.(AU)

Existem evidências de que o ácido linoleico conjugado (CLA) pode aumentar a criotolerância de embriões produzidos in vitro (PIV). O efeito de dois isômeros do CLA na criotolerância de embriões bovinos PIV, assim como o estágio de desenvolvimento e o efeito do método de criopreservação, foi avaliado através de três experimentos. No Experimento 1, oócitos (n = 3.917) foram fecundados in vitro e embriões foram cultivados com 0, 50, 100 ou 200 μM de trans-10, cis-12 (t10, c12 CLA). No Experimento 2, oócitos fecundados (n = 2.131) foram cultivados com 100 μM de t10, c12 ou cis-9, trans-11 (c9, t11 CLA), ou ainda com uma associação de ambos. Os embriões foram vitrificados nos estágios de blastocisto (BL) ou blastocisto expandido (BE). No Experimento 3, oócitos (n = 1.720) foram fecundados e cultivados com ou sem 100 μM de t10, c12 CLA e os blastocistos foram vitrificados ou congelados. As taxas de desenvolvimento dos blastocistos, bem como de re-expansão e eclosão após o reaquecimento foram observadas. Adicionalmente, o número médio de células e a expressão de mRNA das enzimas acetil-CoA carboxilase (ACC1) e estearoil-CoA dessaturase (SCD1) e do complexo enzimático ácido graxo sintase (FASN) foram avaliados. No Experimento 1, a maior concentração de t10, c12 CLA que não reduziu a taxa de blastocisto foi 100 μM. No Experimento 2, as taxas de re-expansão e eclosão obtidas entre EB obtidos por PIV após suplementação com t10, c12 CLA (73,1 e 57,7%), com c9, t11 CLA (80,0 e 68,6%), com a associação de ambos (78,3 e 52,2%) e com o grupo Controle (85,4 e 58,3%) foram similares. As taxas de re-expansão e eclosão foram mais baixas no estágio de BL do que no estágio de BE, e a associação dos isômeros apresentou taxa de eclosão (8,0%) mais baixa do que a do grupo controle (40,0%).(AU)

Effect of the cryopreservation method used, the embryonic stage and the use of conjugated linoleic acid isomers on the cryotolerance of in vitro-produced bovine embryos / Efeito do método de criopreservação utilizado, estágio de desenvolvimento embrionário e uso de isômeros do ácido linoleico conjugado na criotolerância de embriões bovinos produzidos in vitro

Conjugated linoleic acid (CLA) might be able to improve the cryotolerance of in vitro-produced (IVP) embryos. The effect of two CLA isomers on the cryotolerance of bovine IVP embryos, as well as that of the stage of embryonic development and the method used for cryopreservation was evaluated by three experiments. In Experiment 1, oocytes (n = 3,917) were fertilized in vitro and cultured with 0, 50, 100, or 200 μM trans-10, cis-12 (t10, c12 CLA). In Experiment 2, fertilized oocytes (n = 2,131) were cultured with 100 μM t10, c12 or cis-9, trans-11 (c9, t11 CLA), or a combination of both isomers. The embryos were vitrified at the blastocyst (BL) or the expanded blastocyst (EB) stage. In Experiment 3, oocytes (n = 1,720) were fertilized and cultured with or without 100 μM t10, c12 CLA, and the blastocysts were vitrified or frozen. Blastocyst development rate as well as the rates of re-expansion and hatching after thawing was recorded. Moreover, the mean cell number and mRNA expression of acetyl-CoA carboxylase (ACC1) and stearoyl-CoA desaturase (SCD1) as well as fatty acid synthase (FASN) multienzyme complex were determined. In Experiment 1, the highest concentration of t10, c12 CLA that did not reduce blastocyst development rate was 100 μM. In Experiment 2, the rates of re-expansion and hatching among the EBs obtained through IVP after supplementation with t10, c12 CLA (73.1% and 57.7%), with c9, t11 CLA (80.0% and 68.6%), with the combination (78.3% and 52.2%), and with the control group (85.4% and 58.3%) were similar. At the BL stage, the rates of re-expansion and hatching were lower than those at the EB stage, and CLA combination allowed a hatching rate (8.0%) lower than that observed in the control group (40.0%). In Experiment 3, the hatching rates for vitrified EBs (vitrified control; 67.4%) and vitrified CLA EBs (65.8%) were higher than those obtained for frozen EBs, exposed (13.3%) or not exposed (28.6%) to CLA.

Existem evidências de que o ácido linoleico conjugado (CLA) pode aumentar a criotolerância de embriões produzidos in vitro (PIV). O efeito de dois isômeros do CLA na criotolerância de embriões bovinos PIV, assim como o estágio de desenvolvimento e o efeito do método de criopreservação, foi avaliado através de três experimentos. No Experimento 1, oócitos (n = 3.917) foram fecundados in vitro e embriões foram cultivados com 0, 50, 100 ou 200 μM de trans-10, cis-12 (t10, c12 CLA). No Experimento 2, oócitos fecundados (n = 2.131) foram cultivados com 100 μM de t10, c12 ou cis-9, trans-11 (c9, t11 CLA), ou ainda com uma associação de ambos. Os embriões foram vitrificados nos estágios de blastocisto (BL) ou blastocisto expandido (BE). No Experimento 3, oócitos (n = 1.720) foram fecundados e cultivados com ou sem 100 μM de t10, c12 CLA e os blastocistos foram vitrificados ou congelados. As taxas de desenvolvimento dos blastocistos, bem como de re-expansão e eclosão após o reaquecimento foram observadas. Adicionalmente, o número médio de células e a expressão de mRNA das enzimas acetil-CoA carboxilase (ACC1) e estearoil-CoA dessaturase (SCD1) e do complexo enzimático ácido graxo sintase (FASN) foram avaliados. No Experimento 1, a maior concentração de t10, c12 CLA que não reduziu a taxa de blastocisto foi 100 μM. No Experimento 2, as taxas de re-expansão e eclosão obtidas entre EB obtidos por PIV após suplementação com t10, c12 CLA (73,1 e 57,7%), com c9, t11 CLA (80,0 e 68,6%), com a associação de ambos (78,3 e 52,2%) e com o grupo Controle (85,4 e 58,3%) foram similares. As taxas de re-expansão e eclosão foram mais baixas no estágio de BL do que no estágio de BE, e a associação dos isômeros apresentou taxa de eclosão (8,0%) mais baixa do que a do grupo controle (40,0%).