Sheep polyclonal antibody to map Haemonchus contortus mimotopes using phage display library / Anticorpo policlonal de ovinos para mapear mimetopos de Haemonchus contortus usando a biblioteca de Phage display

The aim of this study was to evaluate phage display technology for mapping Haemonchus contortus mimotopes. We screened the PhD-7 Phage Display Peptide Library Kit with a sheep polyclonal antibody against H. contortus. After four rounds of selection, 50 phage peptide clones were selected by biopanning and sequenced. Two clones displaying peptide mimotopes of H. contortus proteins were chosen for sheep immunization: clone 6 - mimotope of glyceraldehyde-3-phosphate dehydrogenase (GAPDH) and clone 17 - mimotope of a disorganized muscle family member (Dim 1). Twelve sheep were allocated into 3 groups of 4 animals as follow: G1: control group; G2/GAPDH: immunized with clone 6; and G3/Dim1: immunized with clone 17. Four immunizations were performed at intervals of seven days (0, 7, 14, and 21 days). On day 28 post initial vaccination, all groups were orally challenged with 2500 H. contortus infective larvae. The mimotope peptides selected by phage display were recognized by IgG from sheep naturaly infected with H. contortus. The immunization protocol showed an increasein IgG anti-M13 phage titers, but no effect was observed in IgG-specific for the anti-mimotope peptides. This is the first report of successful use of a phage display library for the identification of mimotopes of H. contortus proteins.(AU)

O objetivo deste estudo foi avaliar a tecnologia de phage display no mapeamento de mimetopos de Haemonchus contortus. Anticorpo policlonal de ovinos anti-H. contortus foi usado para seleção a partir da biblioteca PhD-7 Phage Display Peptide Library Kit (New England BioLabs). Após quatro rodadas, 50 clones de fagos expressando peptídeos foram selecionados e sequenciados. Dois clones que exibiram mimetopos de H. contortus foram escolhidos para imunização de ovinos: clone 6 mimetopo de gliceraldeído-3-fosfato desidrogenase (GAPDH) e clone 17 - mimetopo da família do músculo desorganizado (Dim 1). Doze ovinos foram alocados em 3 grupos de 4 animais, da seguinte forma: G1: grupo controle, G2/GAPDH: imunizado com o clone 6 e G3/Dim1: imunizado com o clone 17. Quatro imunizações foram realizadas (0, 7, 14 e 21 dias). No dia 28 após a primeira imunização, todos os grupos foram desafiados oralmente com 2500 larvas infectantes de H. contortus . Os peptídeos mimetopos selecionados foram reconhecidos por IgG de ovinos naturalmente infectados por H. contortus. O ensaio de imunização revelou um aument dos títulos de IgG anti-fago M13, mas não ocorreu aumento de IgG anti-peptídeos mimetopos. Este é o primeiro relato de uso bem sucedido da biblioteca de Phage display para a identificação de mimetopos de H. contortus.(AU)

Agronomic characterization and responses to coffeeleaf rust in coffee progenies resistant to the gall nematode Meloidogyne exigua / Caracterização agronômica e reação à ferrugem de progênies de cafeeiro resistentes a Meloidogyne exigua

The aim of this study was to determine agronomic characteristics and responses to the coffee leaf rust fungus (Hemileia vastatrix Berk. et Br.) in coffee progenies resistant to the gall nematode Meloidogyne exigua. The experiment was conducted in December 2000 at Ouro Verde Farm (FazendaOuro Verde), located in the municipality of Campos Altos Minas Gerais (MG). Ten F3:4 progenies were evaluated. They were derived from crosses between CIFC 2570 Timor Hybrid selections and Catuaí cultivars known to be resistant to M. exigua. The Catuaí Vermelho IAC 99 cultivar served as a control. A randomized block design with three replicates was used. In total, there were thirty-three plots consisting of eight plants each. The following characteristics were assessed between the harvests of 2011/2012 and 2014/2015: (a) yield expressed as processed coffee bags ha-1; (b) rust incidence and severity; (c) vegetative vigor; (d) percentage of coffee fruits at the “cherry” stage; (e) percentage of floaters; (f) crown diameter; (g) percentage of coffee beans of size sieve 17 and higher; and (h) sensory analysis of the coffee beverage. The results indicated the following: (a) the H514-7-14-2, H514-7-4-5, H493- 1-2-2, H514-7-16-3, H514-7-8-11, H518-2-10-1, and H514-5-2-4 progenies were the most productive; (b) all progenies showed promising resistance to coffee leaf rust; (c) all genotypes had the potential for specialty coffee production; (d) the H493-1-2-2 progeny showed resistance both to rust and the nematode, and has good potential for specialty coffee production; and (e) the yields of the H514-7-8-11, H518-2-10-1, H514-5-2-4, H514-7-16-3, H514-7-14-2, H514-7-4-5, and H493-1-2-2 progenies were significantly higher than that of the Catuaí IAC 99 control.(AU)

O objetivo deste trabalho foi disponibilizar informações de características agronômicas e reação à ferrugem de progênies de cafeeiro resistentes a M. exigua. O experimento foi instalado em dezembro de 2000, na Fazenda Ouro Verde, situada no município de Campos Altos MG. Foram avaliadas 10 progênies F3:4 oriundas do cruzamento entre seleções de Híbrido de Timor provenientes do CIFC 2570 e cultivares do grupo Catuaí, previamente selecionadas como resistentes a M. exigua, e a cultivar Catuaí Vermelho IAC 99 como testemunha. Utilizou-se delineamento de blocos ao acaso, com três repetições, totalizando 33 parcelas constituídas de oito plantas cada. Entre as safras 2011/2012 a 2014/2015 foram avaliadas as seguintes características: produtividade em sacas de café beneficiado ha-1, incidência e severidade da ferrugem, vigor vegetativo, porcentagem de frutos no estádio “cereja”, porcentagem de frutos chochos, diâmetro de copa, porcentagem de grãos peneira 17 e acima e análise sensorial de bebida. Diante dos resultados pode-se concluir que: as progênies H514-7-14-2, H514-7-4-5, H493-1- 2-2, H514-7-16-3, H514-7-8-11, H518-2-10-1 e H514-5-2-4 são as mais produtivas; todas as progênies apresentam comportamento promissor para resistência à ferrugem do cafeeiro; todos os genótipos apresentam potencial para a produção de cafés especiais; a progênie H493-1-2-2 se mostra promissora apresentando resistência à ferrugem e ao nematóide além de apresentar bom potencial produtivo; e as progênies H514-7-8-11, H518-2-10-1, H514-5-2-4, H514-7-16-3, H514-7-14-2, H514-7-4-5 e H493-1- 2-2 tiveram produtividade estatisticamente superior à testemunha Catuaí IAC 99.(AU)

Resposta imunológica a antígenos de Hysterothylacium deardorffoverstreetorum de peixes teleósteos / Imunne response against Hysterothylacium deardorffoverestreetorum from teleost fish

Anisaquidose é uma doença provocada por parasitos da família Anisakidae e se caracteriza por manifestações gastrointestinais e alérgicas. O Anisakis simplex é o parasito mais patogênico ao homem e altamente alergênico. Porém, outros anisaquídeos também são danosos aos humanos, mas é desconhecida a imunogenicidade dessas larvas. O objetivo deste trabalho foi avaliar o potencial imunogênico do parasito Hysterothylacium deardorffoverestreetorum (HD) em modelo murino. Camundongos da linhagem BALB/c foram divididos em três grupos experimentais e receberam as preparações antigênicas obtidas de larvas de HD: extrato bruto de larvas (EBH), extrato secretado/ excretado de larvas (ESH) e extrato bruto de larvas após excreção/secreção (EEH). Amostras séricas foram obtidas em diferentes dias após imunização para determinação dos níveis de anticorpos específicos pelo ensaio imunoenzimático (ELISA). Os resultados demonstram aumento na produção de imunoglobulina (Ig) G após a segunda imunização, com aumento progressivo após a terceira imunização. Já em relação à IgE, a reatividade foi mais tardia, demonstrando aumento progressivo após a terceira imunização. Foi avaliada a imunidade celular por meio da intradermorreação, como resultado estatisticamente significativo em relação ao controle utilizado. Este experimento é a primeira descrição da potencialidade patogênica desse parasito em mamíferos e representa um avanço no diagnóstico da anisaquidose humana.(AU)

Anisaquidosis is a disease caused by parasites of Anisakidae family and is characterized by gastrointestinal and allergic reactions. The Anisakis simplex is a more pathogenic Anisakidae to humans and is highly allergenic. However, other species of this family also have characteristics that are harmful to humans, but little is known about the immunogenicity this parasites. The objective of this study was to experimentally assess the immunogenic potential of the parasite Hysterothylacium deardorffoverestreetorum (H.D) in mice. Mice of inbred BALB/c strain were divided into three groups and received three immunizations of the following antigenic preparations obtained from L3 larvae H.D: Crude larval extract of H.D (CEH) Extract secreted / excreted larvae H.D. (ESH) and crude extract of larvae after excretion / secretion (EEH). Serum samples were obtained on different days after immunization to determine the levels of circulating specific antibodies by enzyme-linked immunosorbent assay (ELISA). The results show increased production of immunoglobulin (Ig) G after the second immunization with a gradual increase after the third immunization. Regarding IgE reactivity, this occurred later, demonstrating a progressive increase only after the third immunization. Cellular immunity was evaluated by intradermal, and showed statistically significant result compared to the control used. This experiment is the first description of the pathogenic potential of this parasite in mammals and represents a breakthrough in the diagnosis of human Anisakidosis.(AU)

Resposta imunológica a antígenos de Hysterothylacium deardorffoverstreetorum de peixes teleósteos / Imunne response against Hysterothylacium deardorffoverestreetorum from teleost fish

Anisaquidose é uma doença provocada por parasitos da família Anisakidae e se caracteriza por manifestações gastrointestinais e alérgicas. O Anisakis simplex é o parasito mais patogênico ao homem e altamente alergênico. Porém, outros anisaquídeos também são danosos aos humanos, mas é desconhecida a imunogenicidade dessas larvas. O objetivo deste trabalho foi avaliar o potencial imunogênico do parasito Hysterothylacium deardorffoverestreetorum (HD) em modelo murino. Camundongos da linhagem BALB/c foram divididos em três grupos experimentais e receberam as preparações antigênicas obtidas de larvas de HD: extrato bruto de larvas (EBH), extrato secretado/ excretado de larvas (ESH) e extrato bruto de larvas após excreção/secreção (EEH). Amostras séricas foram obtidas em diferentes dias após imunização para determinação dos níveis de anticorpos específicos pelo ensaio imunoenzimático (ELISA). Os resultados demonstram aumento na produção de imunoglobulina (Ig) G após a segunda imunização, com aumento progressivo após a terceira imunização. Já em relação à IgE, a reatividade foi mais tardia, demonstrando aumento progressivo após a terceira imunização. Foi avaliada a imunidade celular por meio da intradermorreação, como resultado estatisticamente significativo em relação ao controle utilizado. Este experimento é a primeira descrição da potencialidade patogênica desse parasito em mamíferos e representa um avanço no diagnóstico da anisaquidose humana.(AU)

Anisaquidosis is a disease caused by parasites of Anisakidae family and is characterized by gastrointestinal and allergic reactions. The Anisakis simplex is a more pathogenic Anisakidae to humans and is highly allergenic. However, other species of this family also have characteristics that are harmful to humans, but little is known about the immunogenicity this parasites. The objective of this study was to experimentally assess the immunogenic potential of the parasite Hysterothylacium deardorffoverestreetorum (H.D) in mice. Mice of inbred BALB/c strain were divided into three groups and received three immunizations of the following antigenic preparations obtained from L3 larvae H.D: Crude larval extract of H.D (CEH) Extract secreted / excreted larvae H.D. (ESH) and crude extract of larvae after excretion / secretion (EEH). Serum samples were obtained on different days after immunization to determine the levels of circulating specific antibodies by enzyme-linked immunosorbent assay (ELISA). The results show increased production of immunoglobulin (Ig) G after the second immunization with a gradual increase after the third immunization. Regarding IgE reactivity, this occurred later, demonstrating a progressive increase only after the third immunization. Cellular immunity was evaluated by intradermal, and showed statistically significant result compared to the control used. This experiment is the first description of the pathogenic potential of this parasite in mammals and represents a breakthrough in the diagnosis of human Anisakidosis.(AU)

Detecção de proteínas imunorreativas de Rickettsia sp. cepa Mata Atlântica / Detection of immunoreactive proteins of Rickettsia sp. Atlantic Forest strain

A Febre Maculosa Brasileira (FMB) é uma doença infecciosa, transmitida por carrapatos ao homem. Uma nova riquetsiose humana foi descrita como causadora de Febre Maculosa no Estado de São Paulo, sendo denominada de Rickettsia sp. cepa Mata Atlântica. O presente trabalho teve como objetivo detectar e identificar proteínas com potencial de estimular o sistema imune de hospedeiro mamífero, desta nova cepa descrita. Para tanto, foi realizado a extração proteica total de Rickettsia sp. cepa Mata Atlântica. As proteínas extraídas foram fracionadas por eletroforese. As bandas proteicas foram transferidas para membranas de nitrocelulose por migração elétrica e submetidas à técnica de Western-blot, para detecção proteica. Ao todo sete proteínas imunorreativas foram detectadas. Duas proteínas apresentaram maior abundancia, com peso molecular, de 200 e 130 kDa respectivamente. Através da comparação de mapas proteômicos existentes e pelo peso molecular que estas proteínas apresentaram, sugere-se que as duas proteínas detectadas representem rOmpA (200 kDa) e rOmpB (130 kDa). As demais proteínas detectadas apresentaram menor ocorrência e peso molecular inferior a 78 kDa, podendo representar membros da família de antígenos de superfície celular (Sca - Surface cell antigen). As proteínas detectadas poderão servir como base de estudo na elaboração de métodos diagnósticos sensíveis e específicos, no desenvolvimento de vacinas, além de possibilitarem novos estudos para terapias mais eficazes.(AU)

Brazilian Spotted Fever (BSF) is an infectious disease transmitted by ticks to humans. A new human rickettsial infection was reported to cause spotted fever in the State of São Paulo and was named Rickettsia sp. Strain Atlantic Forest. This study aimed to detect and identify proteins with potential to stimulate the immune system of mammalian host of this new strain described. Therefore, we performed total protein extraction Rickettsia sp. Strain Atlantic Forest. The extracted proteins were fractionated by electrophoresis. The protein bands were transferred to nitrocellulose membrane by electrical migration and subjected to Western blot for protein detection. In all, seven immunoreactive proteins were detected. Two proteins showed higher abundance, with molecular weight of 200 and 130 kDa respectively. By comparing existing proteomic maps and the molecular weight of these proteins showed that, it is suggested that the two proteins detected representing rOmpA (200 kDa) and rOmpB (130 kDa). The other detected proteins had lower occurrence and molecular weight less than 78 kDa, which may represent members of the cell surface antigens Family (Sca - Surface cell antigen). The detected proteins may serve as a study based on the development of sensitive and specific diagnostic methods in the development of vaccines and they enable further studies to more effective therapies.(AU)

Detecção de proteínas imunorreativas de Rickettsia sp. cepa Mata Atlântica / Detection of immunoreactive proteins of Rickettsia sp. Atlantic Forest strain

Brazilian Spotted Fever (BSF) is an infectious disease transmitted by ticks to humans. A new human rickettsial infection was reported to cause spotted fever in the State of São Paulo and was named Rickettsia sp. Strain Atlantic Forest. This study aimed to detect and identify proteins with potential to stimulate the immune system of mammalian host of this new strain described. Therefore, we performed total protein extraction Rickettsia sp. Strain Atlantic Forest. The extracted proteins were fractionated by electrophoresis. The protein bands were transferred to nitrocellulose membrane by electrical migration and subjected to Western blot for protein detection. In all, seven immunoreactive proteins were detected. Two proteins showed higher abundance, with molecular weight of 200 and 130 kDa respectively. By comparing existing proteomic maps and the molecular weight of these proteins showed that, it is suggested that the two proteins detected representing rOmpA (200 kDa) and rOmpB (130 kDa). The other detected proteins had lower occurrence and molecular weight less than 78 kDa, which may represent members of the cell surface antigens Family (Sca - Surface cell antigen). The detected proteins may serve as a study based on the development of sensitive and specific diagnostic methods in the development of vaccines and they enable further studies to more effective therapies.(AU)

A Febre Maculosa Brasileira (FMB) é uma doença infecciosa, transmitida por carrapatos ao homem. Uma nova riquetsiose humana foi descrita como causadora de Febre Maculosa no Estado de São Paulo, sendo denominada de Rickettsia sp. cepa Mata Atlântica. O presente trabalho teve como objetivo detectar e identificar proteínas com potencial de estimular o sistema imune de hospedeiro mamífero, desta nova cepa descrita. Para tanto, foi realizado a extração proteica total de Rickettsia sp. cepa Mata Atlântica. As proteínas extraídas foram fracionadas por eletroforese. As bandas proteicas foram transferidas para membranas de nitrocelulose por migração elétrica e submetidas à técnica de Western-blot, para detecção proteica. Ao todo sete proteínas imunorreativas foram detectadas. Duas proteínas apresentaram maior abundancia, com peso molecular, de 200 e 130 kDa respectivamente. Através da comparação de mapas proteômicos existentes e pelo peso molecular que estas proteínas apresentaram, sugere-se que as duas proteínas detectadas representem rOmpA (200 kDa) e rOmpB (130 kDa). As demais proteínas detectadas apresentaram menor ocorrência e peso molecular inferior a 78 kDa, podendo representar membros da família de antígenos de superfície celular (Sca - Surface cell antigen). As proteínas detectadas poderão servir como base de estudo na elaboração de métodos diagnósticos sensíveis e específicos, no desenvolvimento de vacinas, além de possibilitarem novos estudos para terapias mais eficazes.(AU)

Agronomic characterization and responses to coffeeleaf rust in coffee progenies resistant to the gall nematode Meloidogyne exigua / Caracterização agronômica e reação à ferrugem de progênies de cafeeiro resistentes a Meloidogyne exigua

The aim of this study was to determine agronomic characteristics and responses to the coffee leaf rust fungus (Hemileia vastatrix Berk. et Br.) in coffee progenies resistant to the gall nematode Meloidogyne exigua. The experiment was conducted in December 2000 at Ouro Verde Farm (FazendaOuro Verde), located in the municipality of Campos Altos – Minas Gerais (MG). Ten F3:4 progenies were evaluated. They were derived from crosses between CIFC 2570 Timor Hybrid selections and Catuaí cultivars known to be resistant to M. exigua. The Catuaí Vermelho IAC 99 cultivar served as a control. A randomized block design with three replicates was used. In total, there were thirty-three plots consisting of eight plants each. The following characteristics were assessed between the harvests of 2011/2012 and 2014/2015: (a) yield expressed as processed coffee bags ha-1; (b) rust incidence and severity; (c) vegetative vigor; (d) percentage of coffee fruits at the “cherry” stage; (e) percentage of floaters; (f) crown diameter; (g) percentage of coffee beans of size sieve 17 and higher; and (h) sensory analysis of the coffee beverage. The results indicated the following: (a) the H514-7-14-2, H514-7-4-5, H493- 1-2-2, H514-7-16-3, H514-7-8-11, H518-2-10-1, and H514-5-2-4 progenies were the most productive; (b) all progenies showed promising resistance to coffee leaf rust; (c) all genotypes had the potential for specialty coffee production; (d) the H493-1-2-2 progeny showed resistance both to rust and the nematode, and has good potential for specialty coffee production; and (e) the yields of the H514-7-8-11, H518-2-10-1, H514-5-2-4, H514-7-16-3, H514-7-14-2, H514-7-4-5, and H493-1-2-2 progenies were significantly higher than that of the Catuaí IAC 99 control.

O objetivo deste trabalho foi disponibilizar informações de características agronômicas e reação à ferrugem de progênies de cafeeiro resistentes a M. exigua. O experimento foi instalado em dezembro de 2000, na Fazenda Ouro Verde, situada no município de Campos Altos – MG. Foram avaliadas 10 progênies F3:4 oriundas do cruzamento entre seleções de Híbrido de Timor provenientes do CIFC 2570 e cultivares do grupo Catuaí, previamente selecionadas como resistentes a M. exigua, e a cultivar Catuaí Vermelho IAC 99 como testemunha. Utilizou-se delineamento de blocos ao acaso, com três repetições, totalizando 33 parcelas constituídas de oito plantas cada. Entre as safras 2011/2012 a 2014/2015 foram avaliadas as seguintes características: produtividade em sacas de café beneficiado ha-1, incidência e severidade da ferrugem, vigor vegetativo, porcentagem de frutos no estádio “cereja”, porcentagem de frutos chochos, diâmetro de copa, porcentagem de grãos peneira 17 e acima e análise sensorial de bebida. Diante dos resultados pode-se concluir que: as progênies H514-7-14-2, H514-7-4-5, H493-1- 2-2, H514-7-16-3, H514-7-8-11, H518-2-10-1 e H514-5-2-4 são as mais produtivas; todas as progênies apresentam comportamento promissor para resistência à ferrugem do cafeeiro; todos os genótipos apresentam potencial para a produção de cafés especiais; a progênie H493-1-2-2 se mostra promissora apresentando resistência à ferrugem e ao nematóide além de apresentar bom potencial produtivo; e as progênies H514-7-8-11, H518-2-10-1, H514-5-2-4, H514-7-16-3, H514-7-14-2, H514-7-4-5 e H493-1- 2-2 tiveram produtividade estatisticamente superior à testemunha Catuaí IAC 99.