Identification of locally isolated entomopathogenic Fusarium species from the soil of Changa Manga Forest, Pakistan and evaluation of their larvicidal efficacy against Aedes aegypti / Identificação de espécies de Fusarium entomopatogênicas localmente isoladas do solo da Floresta de Changa Manga, Paquistão e avaliação de sua eficácia larvicida contra Aedes aegypti

Abstract Dengue fever vectored by the mosquito Aedes aegypti is one of the most rapidly spreading insect-borne diseases. Current reliance of dengue vector control is mostly on chemical insecticides. Growing insecticide resistance in the primary mosquito vector, Aedes aegypti, limits the effectiveness of vector control through chemical insecticides. These chemical insecticides also have negative environmental impacts on animals, plants and human health. Myco-biocontrol agents are naturally occurring organisms and are found to be less damaging to the environment as compared to chemical insecticides. In the present study, entomopathogenic potential of local strains of fungi isolated from soil was assessed for the control of dengue vector. Local fungal isolates presents better alternative to introducing a foreign biocontrol strain, as they may be better adapted to environmental conditions of the area to survive and may have more entomopathogenic efficacy against target organism. Larvicidal efficacy of Fusarium equiseti and Fusarium proliferatum was evaluated against Aedes aegypti. Local strains of F. equiseti (MK371718) and F. proliferatum (MK371715) were isolated from the soil of Changa Manga Forest, Pakistan by using insect bait method. Larvicidal activity of two Fusarium spp. was tested against forth instar larvae of A. aegypti in the laboratory, using concentrations 105, 106, 107 and 108 conidia /ml. LC50 values for F. equiseti after 24h, 48h, 72h and 96h of exposure were recorded as 3.8x 108, 2.9x107, 2.0x107, and 7.1x106 conidia /ml respectively while LC50 values for F. proliferatum were recorded as 1.21x108, 9.6x107, 4.2x107, 2.6x107 conidia /ml respectively after 24h, 48h, 72h and 96h of exposure. The results indicate that among two fungal strains F. equiseti was found to be more effective in terms of its larvicidal activity than F. proliferatum against larvae of A. aegypti.

Resumo A dengue transmitida pelo mosquito Aedes aegypti é uma das doenças transmitidas por insetos de propagação mais rápida. A dependência atual do controle do vetor da dengue é principalmente de inseticidas químicos. O aumento da resistência a inseticidas no principal vetor do mosquito, Aedes aegypti, limita a eficácia do controle do vetor por meio de inseticidas químicos. Esses inseticidas químicos também têm impactos ambientais negativos sobre os animais, plantas e saúde humana. Os agentes de micobiocontrole são organismos que ocorrem naturalmente e são menos prejudiciais ao meio ambiente em comparação com os inseticidas químicos. No presente estudo, avaliou-se o potencial entomopatogênico de cepas locais de fungos isolados do solo para o controle do vetor da dengue. Isolados de fungos locais apresentam melhor alternativa para a introdução de uma cepa de biocontrole estrangeira, pois podem ser mais bem adaptados às condições ambientais da área para sobreviver e podem ter maior eficácia entomopatogênica contra o organismo-alvo. A eficácia larvicida de Fusarium equiseti e Fusarium proliferatum foi avaliada contra Aedes aegypti. Cepas locais de F. equiseti (MK371718) e F. proliferatum (MK371715) foram isoladas do solo de Changa Manga Forest, Paquistão, usando o método de isca para insetos. Atividade larvicida de dois Fusarium spp. foi testado contra larvas de quarto ínstar de A. aegypti em laboratório, nas concentrações 105, 106, 107 e 108 conídios / ml. Os valores de LC50 para F. equiseti após 24 h, 48 h, 72 h e 96 h de exposição foram registrados como 3,8x 108, 2,9x107, 2,0x107 e 7,1x106 conídios / ml, respectivamente, enquanto os valores de LC50 para F. proliferatum foram registrados como 1,21x108, 9,6 x107, 4,2x107, 2,6x107 conídios / ml, respectivamente, após 24 h, 48 h, 72 h e 96 h de exposição. Os resultados indicam que entre duas cepas de fungos F. equiseti se mostrou mais eficaz em termos de atividade larvicida do que F. proliferatum contra larvas de A. aegypti.

Mosquitocidal activities of Chenopodium botrys whole plant n-hexane extract against Culex quinquefasciatus / Atividades mosquitocidas do extrato de n-hexano de planta inteira de Chenopodium botrys contra Culex quinquefasciatus

Abstract This research aimed to investigate various mosquitocidal activities of Chenopodium botrys whole- plant n-hexane extract against Culex quinquefasciatus. The extract showed remarkable larvicidal, pupicidal, adulticidal, oviposition deterrent and adult emergence inhibitory activities against Cx. quinquefasciatus. During the larvicidal and pupicidal activities, the 24-hour lethal concentration (LC50) of extract against 2nd instar larvae, 4th instar larvae and pupae were 324.6, 495.6 and 950.8 ppm, respectively. During the CDC (Centers for Disease Control and Prevention) bottle bioassay for adulticidal activity, the median knockdown times (KDT50) at 1.25% concentration was 123.4 minutes. During the filter paper impregnation bioassay for adulticidal activity, the KDT50 value at 0.138 mg/cm2 concentration was 48.6 minutes. The extract was fractionated into 14 fractions through silica gel column chromatography which were then combined into six fractions on the basis of similar retention factor (Rf) value. These fractions were screened for adulticidal activity by applying CDC bottle bioassay. The fraction obtained through 60:40 to 50:50% n-hexanes-chloroform mobile phase with 0.5 Rf value showed 100% adulticidal activity at 0.2% concentration. During oviposition deterrent activity, the highest concentration (1000 ppm) showed 71.3 ± 4.4% effective repellence and 0.6 ± 0.1 oviposition activity index. During adult emergence inhibition activity, the median emergence inhibition (EI50) value was 312.3 ppm. From the outcome of the present investigation, it is concluded that the n-hexane extract of C. botrys whole- plant possesses strong larvicidal, pupicidal, adulticidal, oviposition deterrent and adult emergence inhibitory activities against Cx. quinquefasciatus.

Resumo Esta pesquisa teve como objetivo investigar várias atividades mosquitocidas do extrato n-hexano de planta inteira de Chenopodium botrys contra Culex quinquefasciatus. O extrato mostrou atividades larvicida, pupicida, adulticida, dissuasora de oviposição e inibidora da emergência de adultos contra a Cx. quinquefasciatus. Durante as atividades larvicida e pupicida, a concentração letal de 24 horas (CL50) do extrato contra larvas de 2º estádio, larvas de 4º estádio e pupa foi de 324,6, 495,6 e 950,8 ppm, respectivamente. Durante o bioensaio com frasco do CDC (Centros para Controle e Prevenção de Doenças) para adulticida, o tempo médio de desativação (KDT50) na concentração de 1,25% foi de 123,4 minutos. Durante o bioensaio de impregnação com papel de filtro para a atividade adulticida do extrato, o valor KDT50 na concentração de 0,138 mg / cm2 foi de 48,6 minutos. O extrato foi fracionado em 14 frações através de cromatografia em coluna de gel de sílica que foram então combinadas em seis frações com base em um valor de fator de retenção (Rf) semelhante. Essas frações foram selecionadas quanto à atividade adulticida por meio da aplicação do bioensaio com garrafa do CDC. A fração obtida através da fase móvel de n-hexanos-clorofórmio 60:40% a 50:50% com valor de 0,5 Rf apresentou atividade adulticida de 100% na concentração de 0,2%. Durante a atividade de dissuasão da oviposição, a maior concentração de extrato (1000 ppm) apresentou repelência efetiva de 71,3 ± 4,4% e índice de atividade de oviposição de 0,6 ± 0,1. Durante a atividade de inibição da emergência de adultos, o valor médio de inibição da emergência (EI50) foi de 312,3 ppm. A partir do resultado da presente investigação, conclui-se que o extrato de n-hexano da planta inteira de C. botrys possui fortes atividades larvicida, pupicida, adulticida, dissuasora da oviposição e inibidora da emergência de adultos contra a Cx. quinquefasciatus.

Monitoring of Insecticides resistance against cotton Jassid (Amrasca biguttutla biguttutla) under laboratory conditions / Monitoramento da resistência de inseticidas contra o algodão Jassid (Amrasca biguttutla biguttutla) em condições laboratoriais

Abstract Development of insecticides resistance mainly hinge with managements techniques for the control of Jassid, Amrasca biguttutla biguttutla. Five insecticides were applied against field collected and laboratory rared jassid populations during the years of 2017 to 2019 to profile their resistance level against field population of jassid through leaf dip method. Very low resistance level was found in jassid against confidor whereas high level of resistance was observed by pyriproxyfen against other test insecticides. Gradual resistance was observed against diafenthiuron. It is concluded that for the management of Jassid repetition of same insecticide should be avoided. The use of confidor may be reduced to overcome resistance against Jassid.

Resumo Desenvolvimento da resistência a inseticidas principalmente em dobradiça com técnicas de manejo para o controle de jassid, Amrasca biguttutla biguttutla. Cinco inseticidas foram aplicados contra populações de jassídeos coletados em campo e em laboratório durante os anos de 2017 a 2019 para traçar o perfil de seu nível de resistência contra populações de jassídeos em campo através do método de imersão nas folhas. Nível de resistência muito baixo foi encontrado em jassid contra confidor, enquanto alto nível de resistência foi observado por piriproxifeno contra outros inseticidas de teste. Resistência gradual foi observada contra o diafenthiuron. Conclui-se que, para o manejo do jassid, a repetição do mesmo inseticida deve ser evitada. O uso de confidor pode ser reduzido para superar a resistência contra jassid.

Evaluation of indigenous plants' extracts for mosquitocidal activity against different stages of Culex quinquefasciatus say (Diptera: Culicidae) / Avaliação de extratos de plantas indígenas quanto à atividade mosquitocida contra diferentes estágios de culex quinquefasciatus say (Diptera: Culicidae)

Abstract Being vector of West Nile Virus and falariasis the control of Culex quinquefasciatus is likely to be essential. Synthetic insecticide treatment is looking most effective for vectors mosquito control. However, these products are toxic to the environment and non-target organisms. Consequently, ecofriendly control of vectors mosquito is needed. In this regard botanical insecticide is looking more fruitful. Therefore, the present research aimed to investigate the effectiveness of methanolic extract and various fractions, including, n-hexane, ethyl-acetate, chloroform, and aqueous fraction, obtained from methanolic extract of Ailanthus altissima, Artemisia scoparia, and Justicia adhatoda using separating funnel against larval, pupal, and adult stages of Culex quinquefasciatus. The larvae and pupae of Culex quinquefasciatus were exposed to various concentrations (31.25-1000 ppm) of methanolic extract and its fractions for 24 hours of exposure period. For knock-down bioassay (filter paper impregnation bioassay) different concentration of the methanolic extract and its various fractions (i.e. 0.0625, 0.125, 0.25, 0.5 and 1mg/mL) were applied for 1 hour exposure period. The results were statistically analysed using standard deviation, probit analysis, and linear regression. The R2 values of larvae, pupae, and adult range from 0.4 to 0.99. The values of LC50 (concentration causing 50% mortality) for late 3rd instar larvae after 24 hours exposure period range from 93-1856.7 ppm, while LC90 values range from 424 -7635.5ppm. The values of LC50for pupae range form 1326.7-6818.4ppm and and values of LC90 range from 3667.3-17427.9ppm, respectively. The KDT50 range from 0.30 to 2.8% and KDT90 values range from1.2 to 110.8%, respectively. In conclusion, Justicia adhatoda may be effective for controlling populations of vector mosquito.

Resumo Por ser o vetor do vírus do Nilo Ocidental e da falaríase, o controle de Culex quinquefasciatus Say é provavelmente essencial. O tratamento com inseticida sintético parece ser mais eficaz para o controle dos mosquitos vetores. No entanto, esses produtos são tóxicos para o meio ambiente e organismos não visados. Consequentemente, o controle ecológico dos mosquitos vetores é necessário. Nesse sentido, o inseticida botânico parece mais produtivo. Portanto, a presente pesquisa teve como objetivo investigar a eficácia do extrato metanólico e de várias frações, incluindo n-hexano, acetato de etila, clorofórmio e fração aquosa, obtidos do extrato metanólico de Ailanthus altissima (Mill.) Swingle, Artemisia scoparia Waldst. & Kit. e Justicia adhatoda L. usando funil de separação contra os estágios larval, pupal e adulto de C. quinquefasciatus. As larvas e pupas de C. quinquefasciatus foram expostas a várias concentrações (31,25-1000 ppm) de extrato metanólico, e suas frações por 24 horas de período de exposição. Para o bioensaio knock-down (bioensaio de impregnação de papel de filtro), diferentes concentrações do extrato metanólico e suas várias frações (ou seja, 0,0625, 0,125, 0,25, 0,5 e 1 mg / mL) foram aplicadas por um período de exposição de 1 hora. Os resultados foram analisados ​​estatisticamente usando desvio padrão, análise Probit e regressão linear. Os valores de R2 de larvas, pupas e adultos variaram de 0,4 a 0,99. Os valores de LC50 (concentração que causa 50% de mortalidade) para larvas de terceiro estádio tardio após 24 horas de período de exposição variaram de 93-1856,7 ppm, enquanto os valores de LC90 variaram de 424-7635,5ppm. Os valores de LC50 para pupas variaram de 1326,7-6818,4 ppm e os valores de LC90 variaram de 3667,3-17427,9 ppm, respectivamente. O KDT50 variou de 0,30 a 2,8% e os valores de KDT90 variaram de 1,2 a 110,8%, respectivamente. Por fim, a espécie J. adhatoda pôde ser eficaz para controlar populações de mosquitos vetores.

Chemical composition, in vitro larvicidal and antileishmanial activities of the essential oil from Citrus reticulata Blanco fruit peel / Composição química, atividades larvicida e leishmanicida in vitro do óleo essencial da casca do fruto de Citrus reticulata Blanco

Abstract Numerous studies have investigated the chemical composition and biological activities of essential oils from different Citrus species fruit peel, leaves and flowers. This paper aims to investigate the chemical composition, larvicidal and antileishmanial activities of essential oil from Citrus reticulata fruit peel (CR-EO). CR-EO was obtained by hydrodistillation in a Clevenger-type apparatus and its chemical composition was analyzed by GC-MS and GC-FID. Limonene (85.7%), ɣ-terpinene (6.7%) and myrcene (2.1%) were identified as its major components. CR-EO showed high activity against promastigote forms of Leishmania amazonensis (IC50 = 8.23 µg/mL). CR-EO also exhibited high larvicidal activity against third instar Aedes aegypti larvae at a lethal concentration (LC50 = 58.35 µg/mL) and 100% mortality at 150 µg/mL. This study suggests, for the first time, the potential use of CR-EO against this important mosquito-borne viral disease caused by the genus Aedes.

Resumo Numerosos estudos têm investigado a composição química e as atividades biológicas de óleos essenciais extraídos de cascas dos frutos, folhas e flores de diferentes espécies de Citrus. Este trabalho tem como objetivo investigar a composição química e as atividades larvicida e leishmanicida in vitro do óleo essencial das cascas dos frutos de Citrus reticulata (CR-EO). CR-EO foi obtido pela técnica de extração em aparelho Clevenger e sua composição química foi determinada por CG-EM e CG-DIC. Limoneno (85,7%), ɣ-terpineno (6,7%) and mirceno (2,1%) foram identificados como os constituintes majoritários. CR-EO mostrou alta atividade contra as formas promastigota de Leishmania amazonensis (CI50 = 8,23 µg/mL). CR-EO também exibiu alta atividade larvicida contra as larvas do terceiro estágio do Aedes aegypti com concentração letal (CL50 = 58,35 µg/mL) e mortalidade de 100% em 150 µg/mL. Este estudo sugere, pela primeira vez, o uso potencial de CR-EO contra esta importante doença viral transmitida por mosquitos do gênero Aedes.

Momordica charantia L. extracts against Aedes aegypti larvae / Extratos de Momordica charantia L. sobre larvas de Aedes aegypti

Mormodica charantia (Curcubitaceae) is a plant with great medicinal potential, also used as an alternative of mosquitoes control as demonstrated by previous studies. We evaluated the larvicidal activity of crude extracts of ethyl acetate, methanol and hexane from flowers and fruits of M. charantia against Aedes aegypti (Culicidae). Flowers and fruits were macerated in methanol, ethyl acetate and hexane. Bioassays were performed with application of the extracts at final concentrations of 1 - 200 µg/mL in the middle of the third instar larvae of A. aegypti (L3). The results showed high toxicity to ethyl acetate extracts from flowers and fruits at concentrations of 200 µg/mL and 100 µg/mL, with 97% and 87% of larvae mortality (L3), respectively. Hexane extract demonstrated low toxicity, while methanol extract exhibited 78% larval mortality. The data suggested that the ethyl acetate extracts of flowers and fruits of M. charantia can effectively contribute to larvicidal activity. In addition, purification of M. charantia extracts may lead to a promising larvicidal activity to control the A. aegypti population.

Mormodica charantia (Curcubitaceae) é uma planta com grande potencial medicinal, sendo também uma alternativa no controle de mosquitos conforme demonstrado por estudos prévios. Avaliou-se a atividade larvicida dos extratos brutos de acetato de etila, metanólico e hexânico das folhas, flores e frutos de M. charantia no Aedes aegypti (Culicidae). Folhas, flores e frutos foram macerados em metanol, acetato de etila e hexano. Os bioensaios foram realizados com aplicação dos extratos nas concentrações finais de 1-200 µg/mL no meio de criação das larvas de terceiro estádio de A. aegypti (L3). Os resultados obtidos apontaram alta toxicidade para os extratos de acetato de etila das flores e frutos nas concentrações de 200 µg/mL e 100 µg/mL com mortalidade em L3 de 96,7% e 87%, respectivamente. Baixa toxicidade para o extrato hexânico e o extrato metanólico apresentou mortalidade de 78% larval. Os dados sugerem que os extratos de acetato de etila das flores e frutos de M. charantia podem contribuir efetivamente para atividade larvicida no controle da população de A. aegypti.

Reduced expression of exocytotic proteins caused by anti-cholinesterase pesticides in Brachionus calyciflorus (Rotifera: Monogononta) / Redução da expressão de proteínas de exocitose causados por pesticidas anti-colinesterase em Brachionus calyciflorus (Rotifera: Monogononta)

The organophosphate and carbamate pesticides methyl-parathion and carbaryl have a common action mechanism: they inhibit acetylcholinesterase enzyme by blocking the transmission of nerve impulses. However, they can alter the expression of exocytotic membrane proteins (SNARE), by modifying release of neurotransmitters and other substances. This study evaluated the adverse effects of the pesticides methyl-parathion and carbaryl on expression of SNARE proteins: Syntaxin-1, Syntaxin-4 and SNAP-23 in freshwater rotifer Brachionus calyciflorus. Protein expression of these three proteins was analyzed before and after exposure to these two pesticides by Western Blot. The expression of Syntaxin-1, Syntaxin-4 and SNAP-23 proteins in B. calyciflorussignificantly decreases with increasing concentration of either pesticides. This suggests that organophosphates and carbamates have adverse effects on expression of membrane proteins of exocytosis by altering the recognition, docking and fusion of presynaptic and vesicular membranes involved in exocytosis of neurotransmitters. Our results demonstrate that the neurotoxic effect of anticholinesterase pesticides influences the interaction of syntaxins and SNAP-25 and the proper assembly of the SNARE complex.(AU)

Os pesticidas organofosforados e carbamatos metil- paration e carbaril tem um mecanismo de ação comum: eles inibem a enzima acetilcolinesterase, bloqueando a transmissão dos impulsos nervosos. No entanto, eles podem alterar a expressão de proteínas de membrana de exocitose (SNARE), através da modificação da libertação de neurotransmissores e outras substâncias. Este estudo avaliou os efeitos adversos dos pesticidas metil- paration e carbaril sobre a expressão de proteínas SNARE: Sintaxina -1, Sintaxina-4 e SNAP-23 em rotíferos de água doce Brachionus calyciflorus. A expressão destas três proteínas foi analisada antes e depois da exposição a estes dois pesticidas por Western Blot. A expressão das proteínas Sintaxina-1, Sintaxina-4 e SNAP-23 em B. calyciflorus diminui significativamente com o aumento da concentração de ambos os pesticidas. Isto sugere que os organofosfatos e carbamatos têm efeitos adversos sobre a expressão de proteínas de membrana de exocitose, alterando o reconhecimento, de encaixe e fusão de membranas pré-sinápticas e vesiculares envolvidas na exocitose de neurotransmissores. Nossos resultados demonstram que o efeito neurotóxico de pesticidas anticolinesterásicos influencia a interação de sintaxinas e SNAP-25 e a montagem correta do complexo SNARE.(AU)

Mechanisms of pyrethroid resistance in Haematobia irritans (Muscidae) from Mato Grosso do Sul state, Brazil / Mecanismos de resistência da Haematobia irritans (Muscidae) a piretróides em Mato Grosso do Sul, Brasil

Horn fly resistance to pyrethroid insecticides occurs throughout Brazil, but knowledge about the involved mechanisms is still in an incipient stage. This survey was aimed to identify the mechanisms of horn fly resistance to cypermethrin in Mato Grosso do Sul state, Brazil. Impregnated filter paper bioassays using cypermethrin, synergized or not with piperonyl butoxide (PBO) and triphenyl phosphate (TPP), were conducted from March 2004 to June 2005 in horn fly populations (n = 33) from all over the state. All populations were highly resistant to cypermethrin, with resistance factors (RF) ranging from 89.4 to 1,020.6. Polymerase chain reaction (PCR) assays to detect the knockdown resistance (kdr) mutation also were performed in 16 samples. The kdr mutation was found in 75% of the tested populations, mostly with relatively low frequencies (<20%), and was absent in some highly resistant populations. Addition of TPP did not significantly reduce the LC50 in any population. However, PBO reduced LC50s above 40-fold in all tested populations, resulting in RFs ≤ 10 in most cases. Horn fly resistance to cypermethrin is widespread in the state, being primarily caused by an enhanced activity of P450 mono-oxygenases and secondarily by reduced target site sensitivity.

Resistência da mosca-dos-chifres a inseticidas piretróides ocorre em todo o país, entretanto, o conhecimento sobre os mecanismos envolvidos é ainda incipiente. Este estudo objetivou identificar os mecanismos de resistência desta mosca à cipermetrina em Mato Grosso do Sul. Bioensaios utilizando papéis impregnados com cipermetrina, isoladamente ou sinergizada por butóxido de piperonila (PBO) ou trifenil fosfato (TPP), foram realizados de março∕2004 a junho∕2005 em 33 populações. Todas as populações apresentaram elevada resistência à cipermetrina, com fatores de resistência (FR) variando de 89,4 a 1.020,6. Ensaios de reação em cadeia da polimerase (PCR) visando a detecção de kdr ("knockdown resistance") foram realizados em 16 amostras. A mutação kdr foi detectada em 75% das populações, geralmente em baixas frequências (<20%) e ausente em algumas populações resistentes. A adição de TPP não reduziu significativamente a CL50 em nenhuma população. Entretanto, o PBO reduziu em mais de 40 vezes a CL50 de todas as populações testadas, resultando em FR ≤ 10 na maioria dos casos. Resistência da mosca-dos-chifres à cipermetrina encontra-se disseminada no estado, sendo causada primariamente por um aumento da atividade de P450 mono-oxigenases e secundariamente pela redução da sensibilidade do sítio de ação do inseticida.

Characterization of the pyrethroid resistance profile of Rhipicephalus (Boophilus) microplus populations from the states of Rio Grande do Sul and Mato Grosso do Sul, Brazil / Caracterização do perfil de resistência do Rhipicephalus (Boophilus) microplus a piretróides em populações dos estados do Rio Grande do Sul e Mato Grosso do Sul, Brasil

Cattle ticks Rhipicephalus (Boophilus) microplus are mainly controlled in Brazil by means of acaricide products, without any official policies in this regard. Acaricides continue to be sold indiscriminately, and this has contributed towards making the problem of resistance widespread, thus making diagnosis and monitoring of tick resistance essential. Here, bioassays (larval packet test) were performed on tick populations from the states of Rio Grande do Sul and Mato Grosso do Sul regarding their susceptibility to cypermethrin, deltamethrin and flumethrin. All the tick samples tested showed resistance to cypermethrin (10) (resistance factor (RF) ranging from 5.6 to 80.3) and deltamethrin (10) (RF ranging from 2.4 to 83.1). Six out of eight populations were resistant to flumethrin (RF ranging from 3.8 to 8.2). PCR molecular analyses did not show any T2134A mutations in the voltage-gated sodium channel gene, in any of the sampled populations. The results from this study highlight the critical status of resistance of the cattle tick to synthetic pyrethroids in the regions studied. Further studies are needed to identify the mechanisms responsible for the resistant phenotypes observed in the bioassays. This was the first detection of flumethrin resistance in Brazil.

O controle do carrapato Rhipicephalus (Boophilus) microplus no Brasil é feito principalmente com produtos acaricidas, sem uma política de controle oficial. A venda destes produtos continua ocorrendo de maneira indiscriminada, o que tem contribuído para generalizar o problema da resistência em todo o país, tornando essencial seu diagnóstico e monitoramento. Bioensaios (teste do pacote de larvas) foram conduzidos com populações de carrapatos do Rio Grande do Sul e Mato Grosso do Sul, com relação à sua suscetibilidade a três princípios ativos piretróides. Todas as amostras analisadas mostraram resistência à cipermetrina (10), com fatores de resistência (FR) de 5,6 a 80,3, e à deltametrina, com FR variando de 2,4 a 83,1. Seis das oito amostras foram resistentes à flumetrina (FR de 3,8 a 8,2). Análises moleculares utilizando PCR demonstraram que em todas as populações amostradas não foram encontrados alelos com a mutação T2134A no gene do canal de sódio controlado por voltagem. Os resultados deste estudo evidenciam a situação crítica da resistência do carrapato bovino ao grupo dos piretróides sintéticos nas regiões estudadas. Novos estudos são necessários para identificar os mecanismos responsáveis pelos fenótipos resistentes observados nos bioensaios. Este é o primeiro relato da resistência a flumetrina no Brasil.

Susceptibility of Rhipicephalus (Boophilus) microplus (Acari: Ixodidae) to pyrethroids and their associations in Pernambuco, Brazil / Susceptibilidade de Rhipicephalus (Boophilus) microplus (Acari: Ixodidae) a piretróides e suas associações em Pernambuco, Brasil

The synthetic pyrethroids and their associations have been widely used for controlling Rhipicephalus (Boophilus) microplus. The frequent use of acaricides has been inducing the development of resistance in the tick populations. The aim of this study was to assess the susceptibility of R. (B.) microplus populations to pyrethroids and their associations in the region of Garanhuns, Pernambuco, Brazil. In addition, the level of information among farm owners regarding tick control measures was investigated. Ticks were collected directly from naturally infested dairy cattle in the region and were exposed to pyrethroids and their associations. At the same time, an epidemiological questionnaire was applied with the aim of investigating the level of information among the farmers. The results reported here indicate that R. (B.) microplus populations in the dairy region of Garanhuns show resistance to pyrethroids and their associations, except when the product is associated with piperonyl butoxide. Regarding the results from the epidemiological survey, it was seen that there is a considerable lack of information among the farmers in relation to ixodid control measures. The level of ticks resistance to acaricides varied widely across the region studied. No alternative control programs have been implemented among these farms, thus demonstrating that there is a need for more information relating to the biology and control of R. (B.) microplus.

Os piretróides sintéticos e associações são acaricidas amplamente utilizados para o controle do Rhipicephalus (Boophilus) microplus. O uso frequente destes fármacos tem induzido o surgimento de populações de carrapatos resistentes. Objetivou-se neste estudo avaliar a susceptibilidade de populações de R. (B.) microplus aos piretróides e associações. Além disso, investigou-se o nível de informações dos proprietários com relação ás medidas de controle utilizadas. Os carrapatos foram coletados diretamente de bovinos naturalmente infestados na região leiteira de Garanhuns, Pernambuco e expostos a piretróides e suas associações. Contemporaneamente, foi aplicado um questionário epidemiológico com o objetivo de avaliar o nível de informação dos produtores. Os resultados aqui obtidos demonstram que populações de R. (B.) microplus provenientes da região leiteira de Garanhuns apresentam resistência aos piretróides, exceto quando o produto está associado com butóxido de piperonila. Em se tratando dos resultados referentes ao inquérito epidemiológico, verificou-se considerável falta de informação por parte dos produtores com relação ás medidas de controle de ixodídeos. Assim, verifica-se que o nível de resistência aos acaricidas é muito variável na região estudada e que não há, nas propriedades, a adoção de programas alternativos de controle, demonstrando a necessidade de maiores informações relacionadas á biologia e ao controle do R. (B.) microplus.

Comparison of three larval bioassays to evaluate susceptibility of Rhipicephalus (Boophilus) microplus to amitraz / Comparação de três bioensaios larvais para avaliar a suscetibilidade de Rhipicephalus (Boophilus) microplus ao amitraz

Field samples of Rhipicephalus (Boophilus) microplus from the state of Rio Grande do Sul, Brazil, were assessed using the following methods: larval packet test (LPT), larval immersion test (LIT) and syringe immersion test (SIT). The following parameters were determined for each population and for the Mozo susceptible reference strain: lethal concentration for 50% (LC50) with its 95% confidence interval (95% CI), regression line slope and resistance ratio (RR). Using the LPT, only one population was susceptible to amitraz, presenting a RR of 1.9. Using the same technique, the other populations presented RRs of between 92.9 and 3445.8 and were considered resistant. The LC50 of the Mozo strain calculated using the LPT, LIT and SIT was 2.9, 27.3, and 52.7 µg/mL, respectively. In general, a good fit to the probit statistical model was only achieved using the LPT. The results obtained in this study impair recommendations for using the LIT and SIT to diagnose amitraz resistance in R. (B.) microplus populations. Additional studies are required to improve the sensitivity of these tests in relation to the LPT.

Amostras de Rhipicephalus (Boophilus) microplus coletadas à campo no Rio Grande do Sul, Brasil, foram analisadas pelos seguintes métodos: teste do pacote de larvas (TPL), teste de imersão de larvas (TIL) e teste de imersão em seringas (TIS). Os seguintes parâmetros foram determinados para cada população e para a amostra referência suscetível Mozo: concentração letal para 50% (CL50) e seu intervalo de confiança de 95% (IC95%), inclinação da reta de regressão e os fatores de resistência (FR). Pelo TPL, apenas uma população foi sensível ao amitraz, com FR de 1,9. Utilizando a mesma técnica, as outras amostras apresentaram FR entre 92,9 e 3445,8 sendo consideradas resistentes. As CL50 da cepa Mozo calculadas por meio do TPL, TIL e TIS foram 2,9, 27,3 e 52,7 µg/mL, respectivamente. De forma geral, a adequação ao modelo estatístico de probitos só foi alcançada com o uso do TPL. Os resultados obtidos no presente estudo limitam a recomendação de uso do TIL e TIS para diagnóstico de resistência ao amitraz em populações de R. (B.) microplus. Estudos adicionais são necessários para aprimorar a sensibilidade destes testes em relação ao LPT.

Susceptibility of the horn fly, Haematobia irritans irritans (Diptera: Muscidae), to insecticides in Brazil / Suscetibilidade da mosca-dos-chifres, Haematobia irritans irritans (Diptera: Muscidae), a inseticidas no Brasil

Since horn fly populations became established throughout Brazil, complaints regarding control failure have increased around the country. A broad survey to evaluate the susceptibility of horn flies to both organophosphate (OP) and pyrethroid insecticides was conducted from October 2000 to April 2003. Bioassays using filter papers impregnated with cypermethrin, permethrin or diazinon were conducted on 154 horn fly populations in 14 states and 78 municipalities. Resistance to cypermethrin, the active ingredient present in most insecticide products for horn fly control in Brazil, was detected in 98.46% of the populations, with resistance ratios (RR) ranging from 2.5 to 719.9. Resistance to permethrin (RRs < 6.3) was found in 96.67% of the populations, despite its lack of use. In general, pyrethroid resistance was detected in 97.18% of the horn fly populations, with frequencies greater than 87% in all regions of the country. The status of susceptibility of horn fly populations in Brazil to insecticides can be characterized by high susceptibility to OPs and widespread resistance to pyrethroids, potentially compromising the efficacy of pyrethroid products in most cases. Although some partial results have previously been presented, a general picture of horn fly susceptibility in Brazil is presented here for the first time.(AU)

Desde a dispersão da mosca-dos-chifres, no Brasil, queixas sobre seu controle aumentaram em todo o país. Um amplo levantamento objetivando avaliar a suscetibilidade da mosca a inseticidas organofosforados (OF) e piretróides foi realizado de outubro de 2000 a abril de 2003. Bioensaios com papéis de filtro impregnados com cipermetrina, permetrina ou diazinon foram conduzidos em 154 populações da mosca-dos-chifres de 14 Estados e 78 municípios. Resistência à cipermetrina, ingrediente ativo presente na maioria dos produtos para controle da mosca-dos-chifres no Brasil, foi detectada em 98,46% das populações, com fatores de resistência (FR) variando de 2,5 a 719,9. Resistência à permetrina (FR < 6,3) foi encontrada em 96,67% das populações testadas, apesar da falta de uso de produtos contendo este princípio ativo. Em geral, resistência a piretróides foi detectada em 97,18% das populações, com frequências acima de 87% em todas as regiões do país. A situação da suscetibilidade da mosca-dos-chifres a inseticidas, no Brasil, pode ser caracterizada por uma elevada suscetibilidade aos organofosforados e ocorrência generalizada de resistência aos piretróides, potencialmente comprometendo a eficácia desses produtos na maioria dos casos. Embora resultados parciais tenham sido apresentados anteriormente, um quadro geral da suscetibilidade da mosca-dos-chifres no Brasil é apresentado pela primeira vez.(AU)

Resistance to cypermethrin and amitraz in Rhipicephalus (Boophilus) microplus on the Santa Catarina Plateau, Brazil / Situação da resistência do Rhipicephalus (Boophilus) microplus à cipermetrina e amitraz no Planalto Catarinense, Brasil

With the objective of evaluating Rhipicephalus (Boophilus) microplus resistance to cipermetrina and amitraz, were collected engorged tick females from cattle on 20 farms on the Santa Catarina Plateau, in southern Brazil, between January of 2004 and May of 2006. Were also received 20 groups of engorged R. (B.) microplus females, collected by cattle farmers requesting acaricidal efficacy (AE) testing. Were performed in vitro tests, which consisted of immersing engorged females in cypermethrin (0.015%) and in amitraz (0.025%). An AE >95% was considered indicative of effectiveness. Of the 20 collected groups, 18 (90%) showed cypermethrin resistance and 1 (5%) showed amitraz resistance. Of the 20 received groups, 19 (95%) showed cypermethrin resistance and 2 (10%) showed amitraz resistance. The AE of cypermethrin was found to be >95%, 85-94%, and 55-64%, respectively, in 4 (57.1%), 2 (28.6%), and 1 (14.3%) of 7 reference groups, collected in the 1997-2001 period. The AE of amitraz was >95% in all of those groups. Among the groups of specimens received for analysis in that period, the AE of amitraz was >95% in 6 (85.71%) and 75-84% in 1 (14.28%). R. (B.) microplus resistance to acaricides is increasing on the Santa Catarina Plateau.(AU)

Com os objetivos de avaliar a resistência do Rhipicephalus (Boophilus) microplus à cipermetrina e ao amitraz no Planalto Catarinense, no período de janeiro de 2004 a maio de 2006, foram coletadas teleóginas em bovinos de 20 propriedades onde os produtores autorizaram a coleta (amostras por conveniência) e recebidas teleóginas de mais 20 propriedades com objetivo de diagnóstico de eficácia. Os testes in vitro foram realizados por imersão de teleóginas em cipermetrina (0,015%) e amitraz (0,025%). Considerando a eficácia igual ou superior a 95%, das 20 propriedades amostradas, 18 (90%) apresentaram resistência à cipermetrina e uma (5%) ao amitraz. Das 20 propriedades com teleóginas para diagnóstico, 19 (95%) apresentaram resistência à cipermetrina e duas (10%) ao amitraz. No período de agosto de 1997 a dezembro de 2001, das sete amostras coletadas, em quatro (57,1%) a eficácia da cipermetrina foi >95%, em duas (28,6%) entre 85% e 94% e em uma, (14,3%) entre 55% e 64%. A eficácia do amitraz foi >95%, em teleóginas de todas as propriedades. Nas amostras para diagnóstico, seis (85,71%) apresentaram eficácia para o amitraz >95% e uma (14,28%) entre 75% e 84%. A resistência desse ixodídeo aos carrapaticidas testados é crescente no Planalto Catarinense.(AU)

Avaliação da atividade repelente do timol, mentol, salicilato de metila e ácido salicilico sobre larvas de Boophilus microplus (Canestrini, 1887) (Acari: Ixodidae) / Evaluation of repellent activity of thymol, menthol, methyl salicylate and salicylic acid on Boophilus microplus larvae (Canestrini, 1887) (Acari: Ixodidae)

Verificou-se a atividade repelente do timol, mentol, ácido salicílico e salicilato de metila sobre larvas de Boophilus microplus. Essas substâncias foram usadas em emulsões em dimetilsulfuxido aquoso a 1 por cento ou solução aquosa. Para cada substância foram testadas três concentrações, 1,0 por cento; 0,5 por cento e 0,25 por cento, com cinco repetições cada. Cerca de 100 larvas, com 21 dias de idade, foram inseridas na base de hastes de madeira para avaliação da repelência, a cada duas horas, totalizando 12 horas. As concentrações mais elevadas apontaram que as quatro substâncias causaram alteração no comportamento das larvas. Timol, com mortalidade de 65 por cento e 35 por cento de repelência e mentol e salicilato de metila, ambos com 80 por cento de repelência foram os mais eficientes.(AU)

The repellent activity of thymol, menthol, salicylic acid and methyl salicylate on Boophilus microplus larvae was studied. These substances were tested according to their solubility: emulsions in 1 percent aqueous dimethylsulphoxide or in pure water. Three concentrations were tested for each substance, 1.0 percent, 0.5 percent and 0.25 percent, with five repetitions for each. Approximately 100 larvae at 21 days of age were placed on the base of wooden sticks and then observed for repellent action every two hours, during twelve hours. The results obtained from the higher concentrations showed that the four substances caused alterations on the larvae behavior. However, thymol (65 percent of mortality and 35 percent of repellency), menthol (80 percent of repellency) and methyl salicylate (80 percent of repellency) were the most efficient.(AU)