Yeast microbiota of free-ranging amphibians and reptiles from Caatinga biome in Ceará State, Northeast Brazil: High pathogenic potential of Candida famata / Leveduras da microbiota de anfíbios e répteis do bioma Caatinga no Ceará, Nordeste do Brasil: alto potencial patogênico de Candida famata

Studies on the fungal microbiota of reptiles and amphibians are necessary to better understand of host-microbe interactions and the establishment of fungal disease in these animals. However, these studies are limited. The present researchidentified yeasts from free-ranging reptiles and amphibians from the Caatinga biome andevaluated the virulence factors production, the antifungal susceptibility in planktonic and biofilm growth and the pathogenicity of Candida famata isolates. Twenty-nine isolates of the genera Candida, Cryptococcus and Rhodotorula were identified by phenotypic and/or molecular methods and production of hydrolytic enzymes in vitro by these genera of fungi was evaluated. In addition, susceptibility of planktonic cells and biofilms to azoles and amphotericin B was evaluated. The pathogenicity of C. famata, the most prevalent yeast species isolated, was evaluated using Caenorhabditis elegans model. C. famata was the most prevalent yeast in amphibian and reptilian microbiota. Phospholipase and protease production was observed in 18/29 and 11/29 of the yeast isolates, respectively, while 100% formed biofilms. Itraconazole presented high minimal inhibitory concentrations against C. famata and C. tropicalis. Amphotericin B reduced the biomass and metabolic activity of biofilms. C. famata induced the mortality of C. elegans. In conclusion, reptiles and amphibians are colonized by yeasts capable of producing important virulence factors, especially by Candida spp. that present low susceptibility to azoles which may result from imbalances in ecosystem. Finally, C. famata isolated from these animals presented high pathogenicity, showing the importance of the study of reptile and amphibians fungal microbiota.(AU)

Estudos sobre a microbiota fúngica de répteis e anfíbios são necessários para melhor compreender as interações hospedeiro-microrganismo e o estabelecimento de doenças fúngicas nesses animais. No entanto, esses estudos são limitados. O objetivo da presente pesquisa foi identificar leveduras isoladas de répteis e anfíbios do bioma Caatinga e avaliar a produção de fatores de virulência, a sensibilidade a antifúngicos no crescimento planctônico e de biofilme e a patogenicidade de Candida famata. Vinte e nove isolados dos gêneros Candida, Cryptococcus e Rhodotorula foram identificados por métodos fenotípicos e/ou moleculares e a produção de enzimas hidrolíticas in vitro por esses gêneros de fungos foi avaliada. Além disso, foi avaliada a suscetibilidade de células planctônicas e biofilmes a azólicos e anfotericina B. A patogenicidade de C. famata, a espécie de levedura isolada mais prevalente, foi avaliada usando Caenorhabditis elegans. C. famata foi a levedura mais prevalente na microbiota de anfíbios e répteis. A produção de fosfolipase e protease foi observada em 18/29 e 11/29 dos isolados de levedura, respectivamente, enquanto 100% formaram biofilmes. O itraconazol apresentou altas concentrações inibitórias mínimas contra C. famata e C. tropicalis. A anfotericina B reduziu a biomassa e atividade metabólica dos biofilmes. C. famata induziu a mortalidade de C. elegans. Em conclusão, répteis e anfíbios são colonizados por leveduras capazes de produzir importantes fatores de virulência, especialmente por cepas de Candida spp. que apresentam baixa suscetibilidade a azólicos que podem resultar de desequilíbrio no ecossistema. Por fim, C. famata isolados desses animais apresentaram alta patogenicidade, mostrando a importância do estudo da microbiota fúngica de répteis e anfíbios.(AU)

Antifungal susceptibility profile of diferent yeasts isolates from wild animals, cows milk with subclinical mastitis and hospital environment / Perfil de suscetibilidade antifúngica de diferentes leveduras isoladas damicrobiota de animais silvestres, leite com mastite subclínica eambiente hospitalar

Yeast infections have acquired great importance due to increasing frequency in immunocompromised patients or patients undergoing invasive diagnostic and therapeutic techniques, and also because of its high morbidity and mortality. At the same time, it has been seen an increase in the emergence of new pathogenic species difficult to diagnose and treat. The aim of this study was to determine the in vitro susceptibility of 89 yeasts from different sources against the antifungals amphotericin B, voriconazole, fluconazole and flucytosine, using the VITEK® 2 Compact system. The antifungal susceptibility was performed automatically by the Vitek® 2 Compact system. The origin of the yeasts was: Group 1 - microbiota of wild animals (W) (26/89), 2 - cows milk with subclinical mastitis (M) (27/89) and 3 - hospital enviorment (H) (36/89). Of the 89 yeasts submitted to the Vitek® 2 test, 25 (20.9%) were resistant to fluconazole, 11 (12.36%) to amphotericin B, 3 (3.37%) to voriconazole, and no sample was resistant to flucytosine. Regarding the minimum inhibitory concentration (MIC), fluconazole showed an MIC between 1 and 64 mg/mL for the three groups, voriconazole had an MIC between 0.12 and 8 mg/mL, amphotericin B had an MIC between 0.25 and 4 mg/mL for group H and group W respectively, between 0.25 and 16 mg/mL for group M and flucytosine had an MIC equal to 1g/mL for all groups. The yeasts isolated from the H group showed the highest resistance to fluconazole 12/89 (13.49%), followed by group W (7.87%) and group M (5.62%). The more resistant group to voriconazole was followed by the M and H groups, the W group showed no resistance to this antifungal. Group H was the least resistant (2.25%) to amphotericin.(AU)

As infecções por leveduras têm adquirido grande importância, devido ao aumento da sua frequência em pacientes imunocomprometidos ou pacientes submetidos a técnicas diagnosticas e terapêuticas agressivas, e devido sua alta morbidade e mortalidade. Paralelamente tem-se observado um incremento na aparição de novas espécies patógenas difíceis de diagnosticar e tratar. O objetivo desse estudo foi avaliar a suscetibilidade in vitro de 89 leveduras de diferentes origens frente aos antifúngicos Anfotericina B, Voriconazol, Fluconazol e Fluocitocina pelo Sistema Vitek 2.O antifungigrama foi realizado automaticamente pelo Vitek 2 Compact. A origem das leveduras foi: Grupo 1-Microbiota de Animais Silvestres (S) (26/89), 2- Leite com mastite bovina subclínica (L) (27/89) e 3- Ambiente Hospitalar (H)(36/89). Das 89 leveduras submetidas à carta Vitek, 25 (20.09%) foram resistentes ao fluconazol, oito (8.99%) à anfotericina B, três (3.37%) ao voriconazol, e nenhuma amostra mostrou-se resistente a fluocitosina. O grupo três (H)foi mais resistente ao fluconazol que os demais, já o dois (L) foi mais resistente ao voriconazol e a anfotericina B que os outros dois. O fluconazol pode ter apresentado maior número de resistências devido ser um fármaco comumente usado principalmente em humanos. As leveduras isoladas de humanos apresentaram maior número de resistências aos fármacos testados do que as leveduras isoladas de animais silvestres. O que pode ocorrer devido a uma maior exposição dos humanos aos fármacos em relação aos animais que vivem isolados em ambientes selvagens e na maioria dos casos nunca teve contato com fármacos de qualquer origem.(AU)

Adição da parede celular de levedura (Saccharomyces cerevisiae) na dieta para frangos de corte / Addition of the yeast cell wall (Saccharomyces cerevisiae) in the diet for broilers chickens

Os efeitos da parede celular de Saccharomyces cerevisiae (PCSc) na dieta para frangos foram avaliados com base nos tratamentos: dieta referência com avilamicina (AV); dieta referência (DR); DR com 0,1% de PCSc (PCSc0,1); DR com 0,2% de PCSc (PCSc0,2); DR com 0,3% de PCSc (PCSc0,3). O delineamento foi o de blocos ao acaso, com cinco tratamentos e seis repetições de 10 aves, totalizando 300 frangos, machos. No período de nove a 21 dias de idade, o tratamento PCSc0,3 influenciou negativamente no ganho de peso (631g), e no período de 34 a 39 dias, o tratamento PCSc0,1 proporcionou melhor ganho de peso (461g) em relação ao tratamento com o antimicrobiano. O maior peso vivo ao abate, 2571g, foi obtido no tratamento PCSc0,1. Os pesos absolutos de sobrecoxa e coxa+sobrecoxa foram maiores nos tratamentos PCSc0,1 (290g e 560g) e PCSc0,2 (292g e 561g) e menores no tratamento PCSc0,3 (263g e 515g). Não houve influência na metabolizabilidade da ração e na contagem total de coliformes totais no íleo. Dietas com inclusão de até 0,2% de PCSc resultaram em índices produtivos adequados, podendo ser utilizadas como aditivo em dietas livres de antimicrobiano melhorador de desempenho sem o comprometimento do desempenho, características de carcaça, metabolizabilidade da ração e da contagem total de coliformes totais do íleo.(AU)

The effects of the yeast cell wall (Saccharomyces cerevisiae) (CWSc) in the diet of broiler chickens were evaluated through the following treatments: reference diet with avilamicin (AV); reference diet (RD); RD with 0.1% CWSc (CWSc0,1); RD with 0.2% CWSc (CWSc0,2); RD with 0.3% CWSc (CWSc0,3). The study design was randomized blocks, with five treatments and six replicates of 10 birds, totaling 300 male broilers. In the period from 9 to 21 days treatment CWSc0.3 had a negative influence on weight gain (631g) and from 34 to 39 days CWSc0.1 provided better weight gain (461g) compared to the treatment with the antimicrobial. The highest live weight value at slaughter, 2,571 grams, was obtained in treatment CWSc0.1. The absolute weights of drumstick and thigh+drumstick were higher in treatments CWSc0.1 (290g and 560g) and CWSc0.2 (292g and 561g) and were lower for CWSc0.3 (263g and 515g). There was no influence of the treatments on both the metabolizability and the total count of coliforms in the ileum. Diets until 0.2% of PCSc inclusion resulted in correct productive rates and they can be used as a ration growth promoter additive in antimicrobial free diets without damage on performance, carcass characteristics, organ weight, metabolizability of the diets and total coliform count in the ileum.(AU)

Estudo dos nichos ecológicos de leveduras patogênicas das espécies Cryptococcus neoformans e Cryptococcus gattii na cidade de Londrina, PR / Study of ecological niches from pathogenic yeasts of the species Cryptococcus neoformans and Cryptococcus gattii in Londrina City, PR

fungos patogênicos das espécies Cryptococcus neoformans e Cryptococcus gattii podem ser encontrados no meio ambiente em guano de pombos, solo com excrementos de pombos e pássaros, além de matéria vegetal de árvores. O objetivo deste estudo foi investigar a presença das espécies patogênicas de Cryptococcus em solo com excrementos de pombos, solo com matéria vegetal e em madeira em decomposição de partes ocas de árvores existentes em lugares públicos da cidade de Londrina, PR. Trinta locais foram selecionados dentre praças, parques e ruas da região central da cidade onde amostras foram coletadas de: solo com excretas de pombos (n=120), solo com matéria vegetal da base das árvores (n=120) e swab de matéria vegetal em decomposição de partes ocas de árvores, no período de junho de 2009 a março de 2010. As coletas abrangeram três estações do ano: inverno, primavera e verão, nesse período 360 amostras foram obtidas e analisadas em quatro diferentes etapas. As espécies foram identificadas por meio de análise microscópica da cultura e crescimento em meios seletivos. Um total de cinco amostras foi positivo para Cryptococcus spp. (1,38%), três amostras foram identificadas como C. neoformans (0,84%), duas amostras de solo com excrementos de pombos e uma amostra vegetal do solo. As amostras eram provenientes de um parque, uma rua e uma praça localizados na área central de Londrina. C. gattii foi isolado das outras duas amostras (0,54%), uma em solo com excrementos de pombos e outra em amostra de matéria vegetal do solo obtida de dois parques da cidade localizados em área desprotegida contra insolação e chuvas. Não foi obtido isolamento de Cryptococcus spp. das 120 amostras de swab de madeira em decomposição de partes ocas das 12 espécies de árvores amostradas. Os resultados das análises do meio ambiente confirmaram a ocorrência das espécies patogênicas Cryptococcus neoformans e Cryptococcus gattii em locais onde a população suscetível de humanos e animais podem ser expostos aos propágulos infecciosos dos fungos.(AU)

The pathogenic fungi of the species Cryptococcus neoformans and Cryptococcus gattii could be found in the environment on pigeon guano, soil with pigeon and bird excreta and vegetable material from trees. The aim of this study was analyze the presence of the Cryptococcus pathogenic species on soil with pigeon excreta, soil with vegetable material and decayed wood of trunk hollows of trees from public places in the city of Londrina, PR. Thirty public places were selected from squares, parks and streets in the city centre where samples were collected from: soil with pigeon excreta (n=120), soil with vegetable material (n=120) and decayed wood of trunk hollows of trees (n=120), during June 2009 until March 2010. These collect comprised the seasons: winter, spring and summer, during this period 360 samples were obtained and analyzed in four different times. The species were identified by means of microscopic analysis from culture and their rising on selective medium. A total of five samples were positive to Cryptococcus spp. (1,38%) three were positive to Cryptococcus neoformans (0,84%) in two samples of soil with pigeon excreta, the other one on soil with vegetable material. The samples were originated from a park, a street and a square, placed in the city centre area of Londrina. Cryptococcus gattii was isolated from two samples (0,54%), one in soil with pigeon excreta and another in vegetable material obtained from the soil of two parks that were not protected against sunshine and rain. Cryptococcus spp. was not isolated in none of the 120 swabs samples of decayed wood trunk hollows from the 12 species of trees sampled. The results of the analyses from the environment confirmed the occurrence of the pathogenic species Cryptococcus neoformans e Cryptococcus gattii in places were the human and animal susceptible populations could be exposure to infectious fungi propagators.(AU)

Yeast mastite outbreak in a Brazilian dairy herd / Surto de mastite causado por leveduras em um rebanho brasileiro

This study aimed to describe an outbreak of bovine mastitis caused by yeast in a dairy herd located in the state of Minas Gerais, Brazil. Microbiological analysis of milk samples (106) of the infected mammary quarters of lactating cows showed that Corynebacterium bovis (43.48%) and yeasts from the genus Candida (29.35%) were the main agents isolated in the herd. C. albicans(33.34%), C. catenulate (22.23%) and C. glabrata (18.52%) were the species most commonly isolated. The high prevalence of yeast mastitis was associated with lack of training formilkers, repetitive intramammary treatment and poor teat hygiene prior to the intramammary infusion. Appropriate management measures, specific treatment with antifungal drugs and removal of chronically infected animals were effective for the control of mastitis outbreak.(AU)

O objetivo deste estudo foi descrever um surto de mastite bovina causada por leveduras em um rebanho leiteiro localizado no Estado de Minas Gerais, Brasil. Análises microbiológicas de amostras de leite (106) dos quartos mamários infectados de vacas em lactação demonstraram que Corynebacterium bovis (43,48%) e leveduras do gênero Candida (29,35%) foram os principais agentes isolados no rebanho. C. albicans (33,34%), C. catenulata (22,23%) e C. glabrata (18,52%) foram as espécies mais comumente isoladas. A elevada prevalência da mastite por leveduras foi associada à falta de treinamento dos ordenhadores, ao tratamento intramamário repetitivo e a falhas na higienização de tetas antes da infusão intramamária. Medidas adequadas de manejo, tratamento específico com drogas antifúngicas e descarte de animais cronicamente infectados foram eficazes para o controle do surto.(AU)

Pathogenic characteristics of yeasts isolated from vaginal secretion preserved under mineral oil

In order to evaluate the pathogenicity of yeasts isolated from vaginal secretion of pregnant and non-pregnant women - stored in mineral oil at the URM Mycology Collection, Department of Mycology, Federal University of Pernambuco - 30 samples belonging to the genera Candida, Rhodotorula, Trichosporon, and Kloeckera, were studied regarding their pathogenic characteristics, ability to grow at room temperature (28°C ± 1°C), 37°C, and 42°C for 72 hours, and production of both phospholipase and proteinase. Results showed that all 30 isolates (100%) were able to grow at room temperature and 37°C, and that 17 samples (57%) were able to grow at 42°C. Evaluation of enzymatic activity showed protease activity in only two isolates (7%), namely C. maritima and C. obtusa. Phospholipase activity was detected in 20 isolates (67%) using soy lecithin as substrate at different temperatures. The characterization of yeasts isolated from vaginal secretion and determination of their enzymatic activity may contribute to understanding the epidemiology of vulvovaginitis and assist in the treatment of patients.(AU)

Estudo dos nichos ecológicos de leveduras patogênicas das espécies Cryptococcus neoformans e Cryptococcus gattii na cidade de Londrina, PR / Study of ecological niches from pathogenic yeasts of the species Cryptococcus neoformans and Cryptococcus gattii in Londrina City, PR

fungos patogênicos das espécies Cryptococcus neoformans e Cryptococcus gattii podem ser encontrados no meio ambiente em guano de pombos, solo com excrementos de pombos e pássaros, além de matéria vegetal de árvores. O objetivo deste estudo foi investigar a presença das espécies patogênicas de Cryptococcus em solo com excrementos de pombos, solo com matéria vegetal e em madeira em decomposição de partes ocas de árvores existentes em lugares públicos da cidade de Londrina, PR. Trinta locais foram selecionados dentre praças, parques e ruas da região central da cidade onde amostras foram coletadas de: solo com excretas de pombos (n=120), solo com matéria vegetal da base das árvores (n=120) e swab de matéria vegetal em decomposição de partes ocas de árvores, no período de junho de 2009 a março de 2010. As coletas abrangeram três estações do ano: inverno, primavera e verão, nesse período 360 amostras foram obtidas e analisadas em quatro diferentes etapas. As espécies foram identificadas por meio de análise microscópica da cultura e crescimento em meios seletivos. Um total de cinco amostras foi positivo para Cryptococcus spp. (1,38%), três amostras foram identificadas como C. neoformans (0,84%), duas amostras de solo com excrementos de pombos e uma amostra vegetal do solo. As amostras eram provenientes de um parque, uma rua e uma praça localizados na área central de Londrina. C. gattii foi isolado das outras duas amostras (0,54%), uma em solo com excrementos de pombos e outra em amostra de matéria vegetal do solo obtida de dois parques da cidade localizados em área desprotegida contra insolação e chuvas. Não foi obtido isolamento de Cryptococcus spp. das 120 amostras de swab de madeira em decomposição de partes ocas das 12 espécies de árvores amostradas. Os resultados das análises do meio ambiente confirmaram a ocorrência das espécies patogênicas Cryptococcus neoformans e Cryptococcus gattii em locais onde a população suscetível de humanos e animais podem ser expostos aos propágulos infecciosos dos fungos.

The pathogenic fungi of the species Cryptococcus neoformans and Cryptococcus gattii could be found in the environment on pigeon guano, soil with pigeon and bird excreta and vegetable material from trees. The aim of this study was analyze the presence of the Cryptococcus pathogenic species on soil with pigeon excreta, soil with vegetable material and decayed wood of trunk hollows of trees from public places in the city of Londrina, PR. Thirty public places were selected from squares, parks and streets in the city centre where samples were collected from: soil with pigeon excreta (n=120), soil with vegetable material (n=120) and decayed wood of trunk hollows of trees (n=120), during June 2009 until March 2010. These collect comprised the seasons: winter, spring and summer, during this period 360 samples were obtained and analyzed in four different times. The species were identified by means of microscopic analysis from culture and their rising on selective medium. A total of five samples were positive to Cryptococcus spp. (1,38%) three were positive to Cryptococcus neoformans (0,84%) in two samples of soil with pigeon excreta, the other one on soil with vegetable material. The samples were originated from a park, a street and a square, placed in the city centre area of Londrina. Cryptococcus gattii was isolated from two samples (0,54%), one in soil with pigeon excreta and another in vegetable material obtained from the soil of two parks that were not protected against sunshine and rain. Cryptococcus spp. was not isolated in none of the 120 swabs samples of decayed wood trunk hollows from the 12 species of trees sampled. The results of the analyses from the environment confirmed the occurrence of the pathogenic species Cryptococcus neoformans e Cryptococcus gattii in places were the human and animal susceptible populations could be exposure to infectious fungi propagators.