Activity of rosemary (Rosmarinus officinalis - Family: Lamiaceae) essential oil compared to peracetic acid in Listeria monocytogenes biofilms

The objective of this study was to evaluate the activity of Rosmarinus officinalis essential oil (EO) compared to peracetic acid (PA) regarding formation and elimination of Listeria monocytogenes biofilms on polystyrene surface. The minimum inhibitory concentration (MIC) was determined according to standard protocol. Isolates were inoculated according to MIC standards polystyrene plate wells, which were then incubated at 37°C/96 hours for evaluation of biofilm formation. Regarding the evaluation of biofilm elimination, the biofilms were treated under MIC for 10 minutes. The MIC obtained were 2.0 and 3.0 mg mL-1 for EO and 0,015% for PA. Therefore, the results showed a reduction in the formation of biofilm with the presence of EO and PA, EO being more efficient (p < 0.05). Both compounds had a good capacity of eliminating biofilms, however the EO reduced the biofilm formation when compared to PA, highlighting its potential as an antibacterial agent and antibiofilm.(AU)

Listeria innocua and serotypes of Listeria monocytogenes isolated from clinical cases in small ruminants in the northwest of Uruguay / Listeria innocua e serotipos do Listeria monocytogenes isoladas dos casos clínicos em pequenos ruminantes no noroeste do Uruguai

Listeriosis is an infectious disease caused by bacteria of the genus Listeria, the neurological form being more common in ruminants. There are many reports of listeriosis in small ruminants in the region that includes Brazil, Argentina and Uruguay. However, these diagnoses were mainly based on histological lesions in the central nervous system (CNS) without the isolation and characterization of the involved Listeria strains. The aim of this study was to report sheep and goats listeriosis cases from 2016 to 2021 in northwestern Uruguay. The diagnosis was made according to lesions observed at histopathology, plus Listeria isolation in CNS, identifying it at specie and serotype level. Nine animals (n=9) of three outbreaks and five sporadic cases of listeriosis were studied. Sheep was the species with more cases in relation to goats, and adults were the category most affected. Cases occurred in spring and less frequently in winter. All presented neurological clinical signs and the lesions in the CNS were consistent with suppurative meningoencephalitis and micro-abscesses in the brainstem. In eight of nine CNS samples, Listeria strains were isolated (seven L. monocytogenes and one L. innocua). All the L. monocytogenes isolates carried the inlA gene; serotyping showed that four strains belonged to serotype 1/2b, two isolates belonged to serotype 4b, and one to serotype 1/2a. Considering that listeriosis is a common disease in this region and the fact that isolates are scarcely recovered from small ruminants, it would be important to emphasize the need for Listeria isolation to better characterize the strains that affect animals. Not only to improve knowledge about the epidemiology of disease but also with the objective of developing serotype specific vaccines for animal use.

Listeriose uma doença bacteriana causada pelo gênero Listeria, a forma nervosa é a mais comum em ruminantes. No Brasil, Argentina e Uruguai há vários relatos de listeriose em pequenos ruminantes com diagnóstico baseado na histopatologia do sistema nervoso central (SNC), sem o isolamento e a caracterização do agente. O objetivo deste trabalho foi relatar uma série de casos diagnosticados em ovinos e caprinos no período 2016-2021 no noroeste do Uruguai. O diagnóstico foi feito basado nas lesões observadas na histopatologia, e caracterização das cepas de Listeria recuperadas do SNC quanto à espécie e sorotipo. Nove animais (n=9) do três surtos e cinco casos isolados de listeriose foram estudados. Os ovinos foram a espécie com o maior número de casos em relação aos caprinos, sendo os animais adultos a categoria mais afetada em ambas espécies. A doença ocorreu principalmente na primavera com alguns casos observados no inverno. Todos os casos apresentavam sinais clínicos nervosos e as lesões no SNC caracterizavam-se por meningoencefalite supurativa com presença de microabscessos no tronco encefálico. Em oito de nove amostras do SNC foram isoladas cepas de Listeria (sete L. monocytogenes e uma L. innocua). Todos os isolados de L. monocytogenes continham o gene inlA; a sorotipagem apresentou quatro cepas do serotipo 1/2b, duas cepas serotipo 4b e uma cepa 1/2a. Levando em consideração que nesta região a listeriose é uma doença frequente e que existem poucos isolados recuperados de casos clínicos em pequeño ruminantes, torna-se relevante o isolamento deste agente para caracterização das cepas que afetam os animais. Não só para melhorar o conhecimento sobre a epidemiologia da doença, mas também com o objetivo de desenvolver vacinas sorotipo-especificas para uso animal.

Listeriosis outbreak in sheep raised in feedlots in the Southern Region of Rio Grande do Sul state, Brazil

Background: A listeriosis outbreak in a sheep fattening feedlot in the Southern Region of Rio Grande do Sul State, Brazilis described. This disease is caused by Listeria monocytogenes and represents a risk to public health since it affects notonly ruminants but also humans. This agent is widely spread in the environment, such as in the soil and water. It is alsofound in decaying vegetable matter and the feces and fluids of domestic animals. The aim of this study was to describe alisteriosis outbreak in sheep raised in feedlots, its epidemiology, and to establish the importance of this disease in this typeof sheep management system, evaluate the possible sources of infection, and suggest ways to control it.Cases: Sheep were kept in a 2-sector shed, one with east solar orientation and the other with west solar orientation, thelatter with free access to domestic birds. Sheep were fed silage and concentrate. Seven sheep were affected, 5 died and 2recovered. Clinically, the sheep displayed loss of balance, excessive drooling, and tremors; one exhibited circling, headdeviation, apathy, nystagmus, lateral recumbency, paddling, and labored breathing. At necropsy, macroscopic lesions werenot found, and histologically several micro-abscesses and perivascular cuffs with lymphocytes, macrophages, and neutrophils were present in the brain stem. Listeria monocytogenes suspected colonies were observed in the microbiologicalculture, and the bacteria was identified by biochemical analysis. The immunohistochemistry test in brain stem sectionswas positive for the antibody BD DifcoTM Listeria O Antiserum Poly Serotypes 1 and 4.Discussion: A listeriosis outbreak in a feedlot sheep was confirmed through epidemiological findings, histological lesions,bacterial culture, and immunohistochemistry analysis. This infection is frequent...(AU)

Listeriosis outbreak in sheep raised in feedlots in the Southern Region of Rio Grande do Sul state, Brazil

Background: A listeriosis outbreak in a sheep fattening feedlot in the Southern Region of Rio Grande do Sul State, Brazilis described. This disease is caused by Listeria monocytogenes and represents a risk to public health since it affects notonly ruminants but also humans. This agent is widely spread in the environment, such as in the soil and water. It is alsofound in decaying vegetable matter and the feces and fluids of domestic animals. The aim of this study was to describe alisteriosis outbreak in sheep raised in feedlots, its epidemiology, and to establish the importance of this disease in this typeof sheep management system, evaluate the possible sources of infection, and suggest ways to control it.Cases: Sheep were kept in a 2-sector shed, one with east solar orientation and the other with west solar orientation, thelatter with free access to domestic birds. Sheep were fed silage and concentrate. Seven sheep were affected, 5 died and 2recovered. Clinically, the sheep displayed loss of balance, excessive drooling, and tremors; one exhibited circling, headdeviation, apathy, nystagmus, lateral recumbency, paddling, and labored breathing. At necropsy, macroscopic lesions werenot found, and histologically several micro-abscesses and perivascular cuffs with lymphocytes, macrophages, and neutrophils were present in the brain stem. Listeria monocytogenes suspected colonies were observed in the microbiologicalculture, and the bacteria was identified by biochemical analysis. The immunohistochemistry test in brain stem sectionswas positive for the antibody BD DifcoTM Listeria O Antiserum Poly Serotypes 1 and 4.Discussion: A listeriosis outbreak in a feedlot sheep was confirmed through epidemiological findings, histological lesions,bacterial culture, and immunohistochemistry analysis. This infection is frequent...

Pathogenic bacteria load and safety of retail marine fish / Carga de bactérias patogênicas e segurança de peixes marinhos de varejo

This study was conducted to determine the pathogenic bacteria load of 14 species of marine fish obtained from two suppliers (in Bitlis city, Turkey), which provide fish for fish markets, and to reveal the safety of the marine fish in terms of microbiological quality. The counts of total mesophilic aerobic bacteria (TMAB), Staphylococcus aureus, and Escherichia coli, the presence of Salmonella spp. and Listeria monocytogenes were determined in anchovy, horse mackerel, salmon, red mullet, gilthead seabream, bonito, pilchard, common sole, sand smelt, axillary seabream, seabass, Mediterranean horse mackerel, bluefish, and garpike. It was determined that common sole, axillary seabream, seabass, bluefish and Mediterranean horse mackerel obtained from both suppliers were unacceptable in terms of the counts of TMAB. Twenty-four samples exceeded the critical limit of S. aureus and all the samples were unacceptable according to the critical limit of E. coli. While L. monocytogenes was isolated from 50.0% of the samples, Salmonella spp. was isolated from 39.3% of the samples. These results showed that the pathogenic bacteria load of the analyzed marine fish was quite high and they were unsafe in terms of microbiological quality.

Este estudo foi realizado para determinar a carga de bactérias patogênicas de 14 espécies de peixes marinhos obtidos de dois fornecedores (na cidade de Bitlis, Turquia), que fornecem peixes para mercados de peixes, e para revelar a segurança do peixe marinho em termos de qualidade microbiológica. As contagens de bactérias aeróbias mesófilas totais (TMAB), Staphylococcus aureus e Escherichia coli, a presença de Salmonella spp. e Listeria monocytogenes foram determinados em anchova, carapau, salmão, salmonete, dourada, bonito, sardinha, linguado, cheirado, dourada-axilar, robalo, carapau-do-mediterrâneo, anchova e garpike. Foi determinado que o linguado, o dourada-axilar, o robalo, a anchova e o carapau-do-mediterrâneo obtidos de ambos os fornecedores eram inaceitáveis nas contagens do TMAB. Vinte e quatro amostras excederam o limite crítico de S. aureus, e todas as amostras foram inaceitáveis de acordo com o limite crítico de E. coli. Enquanto L. monocytogenes foi isolada em 50.0% das amostras, Salmonella spp. foi isolado de 39.3% das amostras. Esses resultados mostraram que a carga de bactérias patogênicas dos peixes marinhos analisados era bastante alta e eles eram inseguros em termos de qualidade microbiológica.

Comparison between immunofluorescence and immunohistochemistry for Listeria monocytogenes detection in formalin-fixed paraffin-embedded tissues / Comparação entre imunofluorescência e imuno-histoquímica para detecção de Listeria monocytogenes em tecidos fixados e parafinizados

Listeria monocytogenes is a bacterium that infect humans and animals and causes a zoonotic disease characterized by encephalitis, septicemia or abortion. In addition, listeriosis leads to significant economic losses due to animal death and sacrifice. This research compared the technique of immunofluorescence (IF) and immunohistochemistry (IHC) for the diagnosis of L. monocytogenes in formalin-fixed and paraffin-embedded (FFPE) tissues. A total of 30 tissue blocks from 15 animals with history and/or lesions compatible with listeriosis were selected. For both IHC and IF, the same diluted (1:200) polyclonal primary antibody was used against L. monocytogenes serotypes 1 and 4. For IHC, a polymer secondary antibody conjugated to peroxidase (HRP) was used. For IF, samples were incubated with a fluorescein-labeled anti-rabbit IgG secondary antibody. Each sample was classified according to the presence and percentage of immunolabeling area. From 30 samples, 10 were positive at least for one technique, whereas eight samples were positive for both IHC and IF with similar score. There was strong immunolabeling in tissue samples from bovines experimentally infected with L. monocytogenes ATCC 7644, as well as in nervous tissues from naturally infected ruminants. Additionally, IF did not show any difference in sensitivity when compared to IHC. Using processed biological materials for IF, instead of fresh tissues, is a quite unique technique, since there are few protocols described. Therefore, this study demonstrated that both techniques are efficient to detect L. monocytogenes in FFPE tissues.

Listeria monocytogenes é uma bactéria que infecta humanos e animais, podendo causar uma doença zoonótica caracterizada por encefalite, septicemia e abortos. Além disso, a listeriose resulta em perdas econômicas significativas pela morte e sacrifício de animais. O objetivo deste trabalho foi comparar a técnica de imunofluorescência (IF) e imuno-histoquímica (IHQ) para detecção de L. monocytogenes em tecidos fixados e parafinizados. Foram selecionados 30 blocos de tecidos de 15 animais com histórico e/ou lesões compatíveis com listeriose. Para ambas as técnicas, foi utilizado o mesmo anticorpo primário policlonal diluído (1:200) para detecção de L. monocytogenes sorotipos 1 e 4. Para a IHQ foi utilizado anticorpo secundário em polímero acoplado a peroxidase (HRP). Para a IF, as amostras foram incubadas com anticorpo secundário anti-IgG de coelho marcado com fluoresceína. Cada amostra foi classificada quanto à presença de imunomarcação e porcentagem de área positiva. Das 30 amostras, 10 foram positivas em pelo menos uma das técnicas, sendo oito amostras positivas em ambas IHQ e IF com o mesmo escore. Houve forte imunomarcação tanto em amostras de bovino experimentalmente infectado com L. monocytogenes ATCC 7644, como em amostras de tecido nervoso de ruminantes naturalmente infectados. Além disso, a IF não apresentou diferença na sensibilidade quando comparada com a IHQ. O uso de materiais biológicos processados para IF, ao invés de tecidos frescos, é algo inovador, uma vez que existem poucos protocolos descritos. Portanto, este estudo demonstrou que as duas técnicas foram eficientes para detectar L. monocytogenes em tecidos fixados em formol e parafinizados.

Standardization of a rapid quadruplex PCR method for the simultaneous detection of bovine, buffalo, Salmonella spp, and Listeria monocytogenes DNA in milk / [Padronização de um método rápido de PCR quadriplex para a detecção simultânea de DNA de bovino, bubalino, Salmonella spp. e Listeria monocytogenes em leite]

The objective of the present study was to Standardize a Polymerase Chain Reaction (PCR) protocol for the authentication of bovine and buffalo milk, and to detect the presence of Salmonella spp. and Listeria monocytogenes. For this, the target DNA was extracted, mixed, and subjected to a PCR assay. Milk samples were defrauded and experimentally contaminated with microorganisms to assess the detection of target DNA at different times of cultivation, bacterial titers, and concentration of genetic material. In addition, the protocol was tested with DNA extracted directly from food, without a pre-enrichment step. The proposed quadruplex PCR showed good accuracy in identifying target DNA sequences. It was possible to simultaneously identify all DNA sequences at the time of inoculation (0h), when the samples were contaminated with 2 CFU/250mL and with 6h of culture when the initial inoculum was 1 CFU/250mL. It was also possible to directly detect DNA sequences from the food when it was inoculated with 3 CFU/mL bacteria. Thus, the proposed methodology showed satisfactory performance, optimization of the analysis time, and a potential for the detection of microorganisms at low titers, which can be used for the detection of fraud and contamination.

O objetivo do presente estudo foi padronizar um protocolo de reação em cadeia da polimerase (PCR) para a autenticação de leite bovino e bubalino e a detecção da presença de Salmonella spp. e Listeria monocytogenes. Para isso, o DNA-alvo foi extraído, misturado e submetido ao ensaio de PCR. Amostras de leite foram fraudadas e contaminadas experimentalmente com os micro-organismos, para se avaliar a detecção do DNA-alvo em diferentes tempos de cultivo, os títulos bacterianos e a concentração de material genético. Além disso, o protocolo foi testado com DNA extraído diretamente do alimento, sem a etapa de pré-enriquecimento. A PCR quadriplex proposta mostrou boa precisão na identificação de sequências de DNA-alvo. Foi possível identificar simultaneamente todas as sequências de DNA no momento da inoculação (0h), quando as amostras estavam contaminadas com 2 UFC/250mL, e com seis horas de cultura, quando o inóculo inicial foi de 1 UFC/250mL. Também foi possível detectar diretamente as sequências de DNA do alimento quando este foi inoculado com 3 UFC/mL de bactérias. Dessa forma, a metodologia proposta apresentou desempenho satisfatório, otimização do tempo de análise e potencial para detecção de micro-organismos em baixos títulos, podendo ser utilizada para detecção de fraude e contaminação.

Lactic acid bacteria against Listeria monocytogenes

Listeria monocytogenes is a pathogenic bacterium that can contaminate food and cause public health problems due its ability to form biofilms and resistance to sanitizers, it is responsible for sanitary and economic losses in food producing establishments. The difficulties in controlling biofilms and increasing resistance to traditional antibacterial agents is motivating studies of alternative potential biological agents for the control of pathogenic biofilms, among which lactic acid bacteria (LABs) are included. The objective of this work was to evaluate the activity of LABs against Listeria monocytogenes biofilm formation on polystyrene plates, a surface commonly used in the food industry. Lyophilized commercial strains of Bifidobacterium animalis, Lactobacillus fermentum, Lactobacillus plantarum, Lactobacillus salivaris and Lactobacillus acidophilus were used. The strain of Listeria monocytogenes (L4) was isolated from polystyrene mats from a poultry slaughterhouse cutting room and demonstrated the ability to attach to microplates and resistance to sanitizers (sodium hypochlorite and hydrogen peroxide) at all times, temperatures and tested surfaces. The antimicrobial activity of LABs was evaluated by the agar diffusion method. The LABs that presented action on Listeria monocytogenes were selected for the inhibition and/or removal of biofilms in microplates, and all experiments were carried out in triplicate. Only Bifidobacterium animalis and Lactobacillus plantarum demonstrated action against Listeria monocytogenes in the agar diffusion assays and were selected for inhibition and competition assays. Furthermore, competition of LABs against Listeria monocytogenes adhesion was evaluated. There was no significant difference between LABs and L. monocytogenes, alone or in combination, at temperatures of 30ºC and 37ºC in the Listeria monocytogenes inhibition assays on polystyrene surface. The lactic acid bacteria evaluated did not demonstrate inhibition of L. monocytogenes adhesin testes with optical density visualization, however, it was possible to identify a reduction in L. monocytogenes counts with the application of Bifidobacterium animals and Lactobacillus plantarum in the testes of competition against biofilm formation. In competition tests Bifidobacterium animalis and Lactobacillus plantarum have an injunction in Listeria monocytogenes, indicating that these lactic acid bacteria can retard Listeria biofilm formation on polystyrene surfaces and thus help control the pathogen in the food industry. A potential mechanism to control biofilm adhesion and formation of pathogens for nutrients and fixation on surfaces, multiplication factors and surfaces are a challenge in controlling biofilms of pathogenic microorganisms, alternative measures to traditional methods for inactivating pathogens and biofilm formers bacteria are necessary. In this sense, lactic acid bacteria generate high levels of bacteriocin and are effective in inhibiting the biofilm of pathogenic bacteria, however, our study did not reveal this. We verified that Bifidobacterium animalis and Lactobacillus plantarum have an inhibitory action on Listeria monocytogenes, indicating that these lactic acid bacteria can be used to delay the formation of biofilms by Listeria on polystyrene surfaces, helping to control this pathogen in food industry.(AU)

Chemical characterization and antimicrobial activity of Campomanesia aurea against three strains of Listeria monocytogenes / Caracterização química e atividade antimicrobiana de Campomanesia aurea contra três cepas de Listeria monocytogenes

The essential oil (EO) composition of leaves of Campomanesia aurea was analyzed by GC-MS. The plant was collected in April (EOA) and October (EOO) in São Francisco de Assis/RS. The essential oils were obtained by hydrodistillation in a modified Clevenger apparatus. The yields were 4.44% in April, and 6.15%, in October. Thirty-one compounds were identified in EOA, accounting for 96.87% of the total, and twenty-eight compounds were identified in EOO, accounting for 99.46% of the total. For EOA, the major identified monoterpene was p-cymene (8.33%) and the major identified sesquiterpene was alpha-cadinol (10.72%), while regarding EOO the major identified monoterpene was repeatedly Terpinolene (3.43%), whereas the major identified sesquiterpene was alpha-cadinol (12.79%). The antibacterial activity of the essential oil was evaluated against the three Listeria monocytogenes from the American Type Culture Collection (strains ATCC 7644, 19114 and 13932). The essential oil showed a MIC of 10 mg/mL against the strains ATCC 7644 and 19114, with bacteriostatic effect of 20 mg/mL and a MIC of 20 mg/mL for ATCC 13932. Regarding the antibiofilm activity, o EOO showed the best results with an inhibition of 90% in the sessile growth with an applied concentration of 4.0 mg/mL.(AU)

O óleo essencial (EO) das folhas de Campomanesia aurea foi analisado por CG-EM. O A planta foi coletada em abril (OEA) e outubro (OEO) em São Francisco de Assis/RS. Os óleos essenciais foram obtidos por hidrodestilação em aparelho Clevenger modificado. Os rendimentos foram de 4,44% em abril e 6,15% em outubro. Trinta e um compostos foram identificados no EOA, representando 96,87% do total, e vinte e oito compostos foram identificados no EOO, representando 99,46% do total. Para EOA, o principal monoterpeno identificado foi o p-cimeno (8,33%) e o principal sesquiterpeno identificado foi o alfa-candinol (10,72%), enquanto o EOO o maior monoterpeno identificado foi repetidamente Terpinolene (3,43%), enquanto o sesquiterpeno principal identificado foi alfa-cadinol (12,79%). A atividade antibacteriana do óleo essencial foi avaliada contra as três cepas de Listeria monocytogenes obtidas a partir da American Type Culture Collection (isolados ATCC 7644, 19114 and 13932). O óleo essencial apresentou uma CIM de 10 mg/mL contra as cepas ATCC 7644. e 19114, com efeito bacteriostático de 20 mg/mL e MIC de 20 mg/mL para ATCC 13932. Quanto à atividade antibiofilme, o EOO apresentou os melhores resultados com uma inibição de 90% no crescimento séssil com uma concentração aplicada de 4,0 mg/mL.(AU)

Principais aspectos de listeria monocytogenes e sua importância para a saúde pública / Main aspects of l. Monocytogenes and its importance to public health

Esta revisão tem como objetivo descrever os principais aspectos relacionados a Listeria monocytogenes e sua ocorrência nos alimentos. Alimentos contaminados com L. monocytogenes representam importante risco para o desenvolvimento das doenças veiculadas por alimentos (DVA). Listeriose é uma doença grave para grupos de risco, como idosos, mulheres grávidas, recém-nascidos e pacientes imunocomprometidos, com taxas de letalidade que podem ultrapassar 80%. É um patógeno amplamente distribuído na natureza, pode ser isolado de diversos produtos de origem animal e vegetal, como carnes de frango, bovinos, suínos, embutidos, leite e derivados e hortaliças. Além disso, possui inúmeros fatores de virulência, que permitem que escape do sistema imune e mantenha a infecção. É um microrganismo capaz de crescer em temperaturas de refrigeração e formar biofilme, sendo esses fatores de risco quando associados às más práticas de manejo e controle da cadeia produtiva dos alimentos, já que estas características propiciam a contaminação cruzada. Como medidas de controle, faz-se necessário implementar métodos que assegurem as boas condições de manipulação dos alimentos na indústria, no varejo e nas residências. Muitas práticas previstas na legislação podem ser empregadas para controlar contaminação nos alimentos, como as Boas Práticas de Fabricação (BPF), os Procedimentos Padrão de Higiene Operacional (PPHO) e o sistema de Análise de Perigos e Pontos Críticos de Controle (APPCC). Porém, a falta de fiscalização pelos órgãos competentes pode ser um fator de incentivo para a não implementação destas práticas, o que pode comprometer a qualidade microbiológica dos alimentos e gerar riscos à saúde pública.

This review aims to list the main aspects of Listeria monocytogenes and its occurrence in foods. Food contaminated with L. monocytogenes poses an important risk for the occurrence of foodborne illnesses. Listeriosis is a serious disease to risk groups, such as the elderly, pregnant women, newborns and immunocompromised patients, with mortality rates that can exceed 80%. It is a widely distributed pathogen in the environment and can be isolated from various animal and greens, such as chicken, beef, pork, sausages, dairy products and vegetables. In addition, the pathogen has numerous of virulence factors, that allows the microorganism to dodge the immune system and continue the infection. It is a microorganism capable of growing at refrigeration temperatures and forming biofilm, which is a risk factor when combined with poor management and control practices in the food production chain, as these features can lead to cross contamination. As control measures, it is necessary to implement methods that ensure good food handling conditions in industry, retail and households. Many practices provided in the legislation can be used to control food contamination, such as Good Manufacturing Practices (GMP), Standard Operating Hygiene Procedures (SOHP) and the Hazard Analysis and Critical Control Points (HACCP) system; however, the lack of inspection by competent bodies can be an encouragement factor for the non-implementation of these practices, which would be able to compromise the microbiological quality of the food and creates a threat to public health.

Principais aspectos de listeria monocytogenes e sua importância para a saúde pública / Main aspects of l. Monocytogenes and its importance to public health

Esta revisão tem como objetivo descrever os principais aspectos relacionados a Listeria monocytogenes e sua ocorrência nos alimentos. Alimentos contaminados com L. monocytogenes representam importante risco para o desenvolvimento das doenças veiculadas por alimentos (DVA). Listeriose é uma doença grave para grupos de risco, como idosos, mulheres grávidas, recém-nascidos e pacientes imunocomprometidos, com taxas de letalidade que podem ultrapassar 80%. É um patógeno amplamente distribuído na natureza, pode ser isolado de diversos produtos de origem animal e vegetal, como carnes de frango, bovinos, suínos, embutidos, leite e derivados e hortaliças. Além disso, possui inúmeros fatores de virulência, que permitem que escape do sistema imune e mantenha a infecção. É um microrganismo capaz de crescer em temperaturas de refrigeração e formar biofilme, sendo esses fatores de risco quando associados às más práticas de manejo e controle da cadeia produtiva dos alimentos, já que estas características propiciam a contaminação cruzada. Como medidas de controle, faz-se necessário implementar métodos que assegurem as boas condições de manipulação dos alimentos na indústria, no varejo e nas residências. Muitas práticas previstas na legislação podem ser empregadas para controlar contaminação nos alimentos, como as Boas Práticas de Fabricação (BPF), os Procedimentos Padrão de Higiene Operacional (PPHO) e o sistema de Análise de Perigos e Pontos Críticos de Controle (APPCC). Porém, a falta de fiscalização pelos órgãos competentes pode ser um fator de incentivo para a não implementação destas práticas, o que pode comprometer a qualidade microbiológica dos alimentos e gerar riscos à saúde pública.(AU)

This review aims to list the main aspects of Listeria monocytogenes and its occurrence in foods. Food contaminated with L. monocytogenes poses an important risk for the occurrence of foodborne illnesses. Listeriosis is a serious disease to risk groups, such as the elderly, pregnant women, newborns and immunocompromised patients, with mortality rates that can exceed 80%. It is a widely distributed pathogen in the environment and can be isolated from various animal and greens, such as chicken, beef, pork, sausages, dairy products and vegetables. In addition, the pathogen has numerous of virulence factors, that allows the microorganism to dodge the immune system and continue the infection. It is a microorganism capable of growing at refrigeration temperatures and forming biofilm, which is a risk factor when combined with poor management and control practices in the food production chain, as these features can lead to cross contamination. As control measures, it is necessary to implement methods that ensure good food handling conditions in industry, retail and households. Many practices provided in the legislation can be used to control food contamination, such as Good Manufacturing Practices (GMP), Standard Operating Hygiene Procedures (SOHP) and the Hazard Analysis and Critical Control Points (HACCP) system; however, the lack of inspection by competent bodies can be an encouragement factor for the non-implementation of these practices, which would be able to compromise the microbiological quality of the food and creates a threat to public health.(AU)

Growth kinetics of Salmonella Typhimurium and Listeria monocytogenes in buffalo milk under different processing and storage conditions / Cinética de crescimento de Salmonella Typhimurium e Listeria monocytogenes em leite bubalino sob diferentes condições de processamento e armazenamento

Buffalo milk is rich in nutrients and can serve as a substrate for the proliferation of microorganisms. Thus, the objective of the present study was to evaluate the growth kinetics of Salmonella Typhimurium and Listeria monocytogenes in buffalo milk under different processing and storage conditions. Samples of raw and pasteurized milk were inoculated with 1 CFU of each bacterium, separately and together, per 25 mL. After contamination, samples were stored at 8 °C or 37 °C, and bacterial counts were performed at 24, 48, and 168 h. In addition, the accompanying microbiota growth, pH, and the effect of these variables on the growth kinetics of microorganisms were monitored. The pathogens tested were able to proliferate under most conditions tested, reaching high titers throughout the experimental period. At 37 °C, there was a decrease in pH and an increase in the accompanying microbiota that interfered with the microbial growth curve. It was also observed that pasteurized milk subjected to 8 °C provided better conditions for the multiplication of bacteria. Therefore, it was concluded that care throughout the production chain, storage, and commercialization of milk must be adopted to guarantee the microbiological safety of this food.(AU)

O leite bubalino é rico em nutrientes e pode servir de substrato para a proliferação de micro-organismos. Assim, o objetivo do presente estudo foi avaliar a cinética de crescimento de Salmonella Typhimurium e Listeria monocytogenes em leite bubalino, em diferentes condições de processamento e armazenamento. Para isso, utilizaram-se amostras de leite cru e pasteurizado, que foram inoculadas com 1 UFC/25 mL de cada bactéria separadamente e em conjunto. Após a contaminação, as amostras foram armazenadas nas temperaturas de 8 ºC e 37 ºC e realizadas contagens bacterianas em 24, 48 e 168h. Além disso, foi acompanhado o crescimento da microbiota acompanhante, o pH e o efeito dessas variáveis sobre a cinética de crescimento dos micro-organismos. Os patógenos testados conseguiram se proliferar na maioria das condições testadas, atingindo altos títulos durante todo o período experimental. Na temperatura de 37 ºC, houve uma diminuição do pH e um aumento da microbiota acompanhante, o que interferiu na curva de crescimento microbiana. Observou-se também que o leite pasteurizado e submetido a 8 ºC possibilitou melhores condições para a multiplicação das bactérias. Sendo assim, concluiu-se que cuidados durante toda a cadeia de produção, armazenamento e comercialização do leite devem ser adotados para garantir a segurança microbiológica desse alimento.(AU)

Growth kinetics of Salmonella Typhimurium and Listeria monocytogenes in buffalo milk under different processing and storage conditions / Cinética de crescimento de Salmonella Typhimurium e Listeria monocytogenes em leite bubalino sob diferentes condições de processamento e armazenamento

Buffalo milk is rich in nutrients and can serve as a substrate for the proliferation of microorganisms. Thus, the objective of the present study was to evaluate the growth kinetics of Salmonella Typhimurium and Listeria monocytogenes in buffalo milk under different processing and storage conditions. Samples of raw and pasteurized milk were inoculated with 1 CFU of each bacterium, separately and together, per 25 mL. After contamination, samples were stored at 8 °C or 37 °C, and bacterial counts were performed at 24, 48, and 168 h. In addition, the accompanying microbiota growth, pH, and the effect of these variables on the growth kinetics of microorganisms were monitored. The pathogens tested were able to proliferate under most conditions tested, reaching high titers throughout the experimental period. At 37 °C, there was a decrease in pH and an increase in the accompanying microbiota that interfered with the microbial growth curve. It was also observed that pasteurized milk subjected to 8 °C provided better conditions for the multiplication of bacteria. Therefore, it was concluded that care throughout the production chain, storage, and commercialization of milk must be adopted to guarantee the microbiological safety of this food.

O leite bubalino é rico em nutrientes e pode servir de substrato para a proliferação de micro-organismos. Assim, o objetivo do presente estudo foi avaliar a cinética de crescimento de Salmonella Typhimurium e Listeria monocytogenes em leite bubalino, em diferentes condições de processamento e armazenamento. Para isso, utilizaram-se amostras de leite cru e pasteurizado, que foram inoculadas com 1 UFC/25 mL de cada bactéria separadamente e em conjunto. Após a contaminação, as amostras foram armazenadas nas temperaturas de 8 ºC e 37 ºC e realizadas contagens bacterianas em 24, 48 e 168h. Além disso, foi acompanhado o crescimento da microbiota acompanhante, o pH e o efeito dessas variáveis sobre a cinética de crescimento dos micro-organismos. Os patógenos testados conseguiram se proliferar na maioria das condições testadas, atingindo altos títulos durante todo o período experimental. Na temperatura de 37 ºC, houve uma diminuição do pH e um aumento da microbiota acompanhante, o que interferiu na curva de crescimento microbiana. Observou-se também que o leite pasteurizado e submetido a 8 ºC possibilitou melhores condições para a multiplicação das bactérias. Sendo assim, concluiu-se que cuidados durante toda a cadeia de produção, armazenamento e comercialização do leite devem ser adotados para garantir a segurança microbiológica desse alimento.

Influence of dry and wet beef maturation on the microbiological quality and safety / Influência da maturação a seco e a vácuo na qualidade e segurança microbiológica da carne

The most used methods for the maturation process are vacuum (wet-aged) and dry (dry-aged), which can influence the microbiological quality and safety of meat for consumption. In this study, we aimed to verify the differences in microbiological quality between beef (Longissimus dorsi) that was wet-aged and dry-aged for 30 days, by quantification of indicator microorganism groups and molecular identification of Salmonella, Listeria monocytogenes, and diarrheagenic Escherichia coli. This study verified that the meat matured by the dry-aged method showed significantly lower counts of total coliforms, aerobic mesophiles, psychrotrophs, and molds and yeasts as compared to wet-aged meat. While the Salmonella spp. was not isolated in any beef sample, L. monocytogenes and enteropathogenic E. coli (EPEC), and shiga toxin-producing E. coli (STEC) and enterohemorrhagic E. coli (EHEC) were isolated only from wet-aged beef. Thus, it was concluded that the superficial dehydration of the meat during dry-aged maturation, if carried out correctly and hygienically, confers higher microbiological quality and can reduce the occurrence of microbiological hazards.

A maturação da carne agrega características sensoriais desejáveis ao consumidor. Os métodos mais utilizados são a vácuo (wet-aged) e à seco (dry-aged), que podem influenciar na qualidade e segurança microbiológica da carne para o consumo. O objetivo desse estudo foi verificar as diferenças de qualidade microbiológica entre cortes de contra-filé (Longissimus dorsi) maturados a vácuo e a seco por 30 dias, através da quantificação de grupos de micro-organismos indicadores e identificação molecular de Samonella, Listeria monocytogenes e Escherichia coli diarreiogênica. A carne maturada a seco apresentou contagens significativamente menores de coliformes totais, aeróbios mesófilos, psicrotróficos e bolores e leveduras em relação à carne maturada a vácuo. Salmonella spp. não foi isolada de nenhuma das amostras de carne analisadas. L. monocytogenes e E. coli enteropatogênica (EPEC), E. coli produtora de toxina shiga (STEC) e E. coli enterohemorrágica (EHEC) foram identificadas somente das carnes maturadas a vácuo. A desidratação superficial das peças durante a maturação a seco, desde que realizada de forma correta e higiênica, pode conferir maior qualidade e menor risco microbiológico para o consumo.

Influence of dry and wet beef maturation on the microbiological quality and safety / Influência da maturação a seco e a vácuo na qualidade e segurança microbiológica da carne

The most used methods for the maturation process are vacuum (wet-aged) and dry (dry-aged), which can influence the microbiological quality and safety of meat for consumption. In this study, we aimed to verify the differences in microbiological quality between beef (Longissimus dorsi) that was wet-aged and dry-aged for 30 days, by quantification of indicator microorganism groups and molecular identification of Salmonella, Listeria monocytogenes, and diarrheagenic Escherichia coli. This study verified that the meat matured by the dry-aged method showed significantly lower counts of total coliforms, aerobic mesophiles, psychrotrophs, and molds and yeasts as compared to wet-aged meat. While the Salmonella spp. was not isolated in any beef sample, L. monocytogenes and enteropathogenic E. coli (EPEC), and shiga toxin-producing E. coli (STEC) and enterohemorrhagic E. coli (EHEC) were isolated only from wet-aged beef. Thus, it was concluded that the superficial dehydration of the meat during dry-aged maturation, if carried out correctly and hygienically, confers higher microbiological quality and can reduce the occurrence of microbiological hazards.

A maturação da carne agrega características sensoriais desejáveis ao consumidor. Os métodos mais utilizados são a vácuo (wet-aged) e à seco (dry-aged), que podem influenciar na qualidade e segurança microbiológica da carne para o consumo. O objetivo desse estudo foi verificar as diferenças de qualidade microbiológica entre cortes de contra-filé (Longissimus dorsi) maturados a vácuo e a seco por 30 dias, através da quantificação de grupos de micro-organismos indicadores e identificação molecular de Samonella, Listeria monocytogenes e Escherichia coli diarreiogênica. A carne maturada a seco apresentou contagens significativamente menores de coliformes totais, aeróbios mesófilos, psicrotróficos e bolores e leveduras em relação à carne maturada a vácuo. Salmonella spp. não foi isolada de nenhuma das amostras de carne analisadas. L. monocytogenes e E. coli enteropatogênica (EPEC), E. coli produtora de toxina shiga (STEC) e E. coli enterohemorrágica (EHEC) foram identificadas somente das carnes maturadas a vácuo. A desidratação superficial das peças durante a maturação a seco, desde que realizada de forma correta e higiênica, pode conferir maior qualidade e menor risco microbiológico para o consumo.(AU)

Identification of Salmonella spp., Listeria monocytogenes, and indicator microorganisms in commercialized raw meats and fresh sausages from Uruguaiana, Rio Grande do Sul, Brazil / Identificação de Salmonella spp., Listeria monocytogenes e micro-organismos indicadores em carnes cruas e embutidos frescais comercializados na cidade de Uruguaiana, Rio Grande do Sul, Brasil

This study evaluated the sanitary hygienic quality and the presence of pathogenic microorganisms in raw meats and fresh sausages marketed in the city of Uruguaiana, Rio Grande do Sul (RS), Brazil. We analyzed 238 samples of fresh sausages, beef, pork, and chicken from 18 commercial establishments (butchers, supermarkets, and groceries). Samples were subjected to enumerate hygiene indicator microorganisms (mesophilic aerobes and enterobacteria) and detection of Salmonella spp. and Listeria monocytogenes. The mean counts of mesophilic aerobes and enterobacteria were 5.09 and 3.54 log CFU/g, respectively. Beef samples presented the highest frequency of Salmonella spp. (7.93%) and fresh sausages present the highest frequency of L. monocytogenes (19.04%). Among the analyzed samples, 43.70% did not comply with the microbiological parameters established by the Brazilian Ministry of Health. The presence of Salmonella spp. and L. monocytogenes in different samples and commercial establishments demonstrate the failures of good manufacturing practices in industrial environmental and retails points and the need to train food handlers to reduce the exposure of consumers to potential risks.(AU)

Este estudo teve como objetivo avaliar a qualidade higiênica sanitária e a presença de microrganismos patogênicos em carnes in natura e linguiças frescais comercializadas na cidade de Uruguaiana, Rio Grande do Sul (RS), Brasil. Foram analisadas 238 amostras de linguiças, carne bovina, suína e de frango de 18 estabelecimentos comerciais (açougues, supermercados e mercearias). As amostras foram submetidas à enumeração de microrganismos indicadores de higiene (aeróbios mesófilos e enterobactérias) e detecção de Salmonella spp. e Listeria monocytogenes. As contagens médias de aeróbios mesófilos e enterobactérias foram 5,09 e 3,54 log UFC/g, respectivamente. Salmonella spp. esteve presente mais frequentemente em amostras de carne bovina (4,91 %), enquanto L. monocytogenes foi mais frequente em linguiças frescais (19,04 %). Das amostras analisadas, 43,70 % não atenderam aos parâmetros microbiológicos estabelecidos pelo Ministério da Saúde. A presença de Salmonella spp. e L. monocytogenes em diferentes amostras e estabelecimentos comerciais demonstra falhas de boas práticas de fabricação na indústria e pontos de venda, além da necessidade de treinar manipuladores de alimentos para reduzir a exposição dos consumidores à riscos.(AU)

Listeria monocytogenes en leche de vaca producida por granjas lecheras familiares / Listeria monocytogenes in cow's milk produced by family-owned dairy farms / Listeria monocytogenes em leite de vaca produzido por propriedades leiteiras familiares

Refrigeration is an important milk preservation method. However, milk quality may deteriorate if the product is refrigerated for long periods, mainly due to the growth of psychrotrophic bacteria. This group of microorganisms includes pathogenic genera, most notably Listeria monocytogenes. The detection of this bacterium in food is important, given its pathogenic effects on human and animal health and also its economic relevance. This study focused on detecting the presence of L. monocytogenes in milk samples collected at small family-owned dairy farms. Samples were cultivated on PALCAM and ALOA agars for microbiological analysis and a molecular analysis by polymerase chain reaction was performed for the detection of L. monocytogenes. Despite the negative results obtained in both these analyses, further studies are recommended to confirm or refute the negligible effect of L. monocytogenes on small dairy farms.

A refrigeração é um método importante de preservação do leite. No entanto, a qualidade do leite pode piorar se o produto for mantido sob refrigeração por longos períodos, principalmente devido ao crescimento de bactérias psicrotróficas. Este grupo de microorganismos inclui gêneros patogênicos, mais notavelmente Listeria monocytogenes. A detecção dessa bactéria em alimentos é importante, tendo em vista seus efeitos patogênicos na saúde humana e animal e também sua relevância econômica. Este estudo teve como objetivo detectar a presença de L. monocytogenes em amostras de leite coletadas em pequenas fazendas leiteiras de propriedade familiar. As amostras foram cultivadas em ágar PALCAM e ALOA para análise microbiológica e análise molecular por reação em cadeia da polimerase para detecção de L. monocytogenes. Apesar dos resultados negativos obtidos em ambas as análises, estudos adicionais são recomendados para confirmar ou refutar o efeito insignificante de L. monocytogenes em pequenas fazendas leiteiras.

La refrigeración es un método importante de conservación de la leche. Sin embargo, la calidad de la leche puede deteriorarse si el producto se refrigera durante períodos prolongados, principalmente debido al crecimiento de bacterias psicrotróficas. Este grupo de microorganismos incluye géneros patógenos, más notablemente Listeria monocytogenes. La detección de esta bacteria en los alimentos es importante, dados sus efectos patógenos sobre la salud humana y animal y también su relevancia económica. Este estudio se centró en detectar la presencia de L. monocytogenes en muestras de leche recolectadas en pequeñas granjas lecheras familiares. Las muestras se cultivaron en agares PALCAM y ALOA para análisis microbiológico y se realizó un análisis molecular por reacción en cadena de la polimerasa para la detección de L. monocytogenes. A pesar de los resultados negativos obtenidos en ambos análisis, se recomiendan más estudios para confirmar o refutar el efecto insignificante de L. monocytogenesen pequeñas granjas lecheras.

Listeria monocytogenes en leche de vaca producida por granjas lecheras familiares / Listeria monocytogenes in cow's milk produced by family-owned dairy farms / Listeria monocytogenes em leite de vaca produzido por propriedades leiteiras familiares

Refrigeration is an important milk preservation method. However, milk quality may deteriorate if the product is refrigerated for long periods, mainly due to the growth of psychrotrophic bacteria. This group of microorganisms includes pathogenic genera, most notably Listeria monocytogenes. The detection of this bacterium in food is important, given its pathogenic effects on human and animal health and also its economic relevance. This study focused on detecting the presence of L. monocytogenes in milk samples collected at small family-owned dairy farms. Samples were cultivated on PALCAM and ALOA agars for microbiological analysis and a molecular analysis by polymerase chain reaction was performed for the detection of L. monocytogenes. Despite the negative results obtained in both these analyses, further studies are recommended to confirm or refute the negligible effect of L. monocytogenes on small dairy farms.(AU)

A refrigeração é um método importante de preservação do leite. No entanto, a qualidade do leite pode piorar se o produto for mantido sob refrigeração por longos períodos, principalmente devido ao crescimento de bactérias psicrotróficas. Este grupo de microorganismos inclui gêneros patogênicos, mais notavelmente Listeria monocytogenes. A detecção dessa bactéria em alimentos é importante, tendo em vista seus efeitos patogênicos na saúde humana e animal e também sua relevância econômica. Este estudo teve como objetivo detectar a presença de L. monocytogenes em amostras de leite coletadas em pequenas fazendas leiteiras de propriedade familiar. As amostras foram cultivadas em ágar PALCAM e ALOA para análise microbiológica e análise molecular por reação em cadeia da polimerase para detecção de L. monocytogenes. Apesar dos resultados negativos obtidos em ambas as análises, estudos adicionais são recomendados para confirmar ou refutar o efeito insignificante de L. monocytogenes em pequenas fazendas leiteiras.(AU)

La refrigeración es un método importante de conservación de la leche. Sin embargo, la calidad de la leche puede deteriorarse si el producto se refrigera durante períodos prolongados, principalmente debido al crecimiento de bacterias psicrotróficas. Este grupo de microorganismos incluye géneros patógenos, más notablemente Listeria monocytogenes. La detección de esta bacteria en los alimentos es importante, dados sus efectos patógenos sobre la salud humana y animal y también su relevancia económica. Este estudio se centró en detectar la presencia de L. monocytogenes en muestras de leche recolectadas en pequeñas granjas lecheras familiares. Las muestras se cultivaron en agares PALCAM y ALOA para análisis microbiológico y se realizó un análisis molecular por reacción en cadena de la polimerasa para la detección de L. monocytogenes. A pesar de los resultados negativos obtenidos en ambos análisis, se recomiendan más estudios para confirmar o refutar el efecto insignificante de L. monocytogenesen pequeñas granjas lecheras.(AU)

Investigation of Listeria monocytogenes, Salmonella enterica and Yersinia enterocolitica in pig carcasses in Southern Brazil / Pesquisa de Listeria monocytogenes, Salmonella enterica and Yersinia enterocolitica em carcaças de suínos no sul do Brasil

The intensification of pig production and advances in the sanitary control of herds profoundly changed the profile of risk attributed to pork consumption. In the actual scenario, most microorganisms related to macroscopic lesions observed in the post mortem inspection are not transmitted by food, while foodborne bacteria of importance to consumer health do not cause macroscopic lesions. In Brazil, the "Ministério da Agricultura, Pecuária e Abastecimento" requested a scientific opinion on the prioritizing of pathogens potentially transmitted by unprocessed pork. After conducting a qualitative risk assessment, only Salmonella enterica was classified as of high risk to consumers. The present study was part of the validation step of the risk assessment and aimed to investigate the frequency of S. enterica, Yersinia enterocolitica and Listeria monocytogenes and hygienic-sanitary indicators in pig carcasses of pigs rose under intensive production and slaughtered under the Federal Inspection System in three slaughterhouses located in Southern Brazil. Additionally, the antimicrobial resistance profile of the isolated pathogens was also investigated. A total of 378 carcasses were sampled by superficial sponges before the chilling step in three slaughterhouses. Samples were investigated for the presence of the three aforementioned pathogens and subjected to enumeration of Colony Formation Units (log CFU.cm-1) of total aerobic mesophiles (TAM) and Enterobacteriaceae. Salmonella strains were tested by disc diffusion test for resistance to eleven antimicrobials. There were significantly statistical differences (p<0.0001) on the median counts of both indicators between the slaughterhouses. The median of TAM was very close for Slaughterhouses A and B: 1.573 log CFU.cm-1 and 1.6014 log CFU.cm-1, respectively. While in Slaughterhouse C, a higher TAM median was detected (2.216 log CFU.cm-1)...(AU)

A intensificação da produção de suínos e os avanços no controle sanitário dos rebanhos alterou de forma importante o perfil de risco do consumo de carne suína. No cenário atual, a maioria dos microrganismos causadores de lesões macroscópicas detectáveis na inspeção post mortem não são transmissíveis por alimentos, enquanto bactérias de importância como causadoras de doenças transmitidas por alimentos não causam lesões macroscópicas. No Brasil, o Ministério da Agricultura, Pecuária e Abastecimento solicitou uma opinião científica sobre a priorização de patógenos potencialmente transmitidos pela carne suína in natura. Após conduzir uma avaliação de risco qualitativa, apenas Salmonella enterica foi classificada como de alto risco para o consumidor. O presente estudo foi parte da etapa de validação da avaliação de risco e objetivou: investigar a frequência de S. enterica, Yersinia enterocolitica e Listeria. monocytogenes; e enumerar indicadores higiênico-sanitários em carcaças de suínos abatidos sob inspeção federal em frigoríficos dedicados ao abate de suínos sob sistema intensivo de criação no sul do Brasil. Além disso, o perfil de resistência a antimicrobianos dos patógenos isolados foi investigado. A superfície de um total de 378 carcaças foi amostrada por esponjas, na etapa de pré-resfriamento em três matadouros frigoríficos (A, B, C). As amostras foram investigadas quanto à presença dos três patógenos acima mencionados e quanto à enumeração de Unidades Formadoras de Colônia (log UFC.cm-1) de mesófilos aeróbios totais (MAT) e Enterobacteriaceae. As cepas isoladas de Salmonella foram testadas quanto à resistência a onze antimicrobianos pela técnica de disco difusão. As medianas de contagem de ambos os indicadores apresentaram diferença significativa (p<0,0001) entre matadouros-frigoríficos. A mediana de MAT foi bastante próxima para A e B (1,573 log UFC.cm-1 e 1,6014 log UFC.cm-1, respectivamente),...(AU)

Investigation of Listeria monocytogenes, Salmonella enterica and Yersinia enterocolitica in pig carcasses in Southern Brazil / Pesquisa de Listeria monocytogenes, Salmonella enterica and Yersinia enterocolitica em carcaças de suínos no sul do Brasil

The intensification of pig production and advances in the sanitary control of herds profoundly changed the profile of risk attributed to pork consumption. In the actual scenario, most microorganisms related to macroscopic lesions observed in the post mortem inspection are not transmitted by food, while foodborne bacteria of importance to consumer health do not cause macroscopic lesions. In Brazil, the "Ministério da Agricultura, Pecuária e Abastecimento" requested a scientific opinion on the prioritizing of pathogens potentially transmitted by unprocessed pork. After conducting a qualitative risk assessment, only Salmonella enterica was classified as of high risk to consumers. The present study was part of the validation step of the risk assessment and aimed to investigate the frequency of S. enterica, Yersinia enterocolitica and Listeria monocytogenes and hygienic-sanitary indicators in pig carcasses of pigs rose under intensive production and slaughtered under the Federal Inspection System in three slaughterhouses located in Southern Brazil. Additionally, the antimicrobial resistance profile of the isolated pathogens was also investigated. A total of 378 carcasses were sampled by superficial sponges before the chilling step in three slaughterhouses. Samples were investigated for the presence of the three aforementioned pathogens and subjected to enumeration of Colony Formation Units (log CFU.cm-1) of total aerobic mesophiles (TAM) and Enterobacteriaceae. Salmonella strains were tested by disc diffusion test for resistance to eleven antimicrobials. There were significantly statistical differences (p<0.0001) on the median counts of both indicators between the slaughterhouses. The median of TAM was very close for Slaughterhouses A and B: 1.573 log CFU.cm-1 and 1.6014 log CFU.cm-1, respectively. While in Slaughterhouse C, a higher TAM median was detected (2.216 log CFU.cm-1). A similar profile was observed regarding to Enterobacteriaceae, and medians were calculated as follow: -0.426 log CFU.cm-1 in Slaughterhouse A; 0.2163 log CFU.cm-1 in B; and 0.633 log CFU.cm-1 in C. Regarding the pathogens investigated, L. monocytogenes was not detected and only one carcass from Slaughterhouse C was positive for Y. enterocolitica. Thus, the results suggest a very low prevalence of L. monocytogenes and Y. enterocolitica in the sampled population. A total of 65 (17.2%) carcasses were positive for S. enterica, with a difference in frequencies between slaughterhouses and slaughter days. The prevalence of Salmonella positive carcasses was higher in the Slaughterhouse C (25.4%; CI 95% 19-32%) in comparison with A (9.5%; CI 95% 9-14%) and B (18.3%; CI 95% 12-24%). There was no significantly statistical association between Enterobacteriaceae counts and Salmonella isolation on carcass surface (p=0.69). The slaughtering day, nested within the slaughterhouse, explains 31.3% of Salmonella prevalence variability. S. Typhimurium (38.1%) was the most prevalent, followed by S. Infantis (30.1%). Among the 61 Salmonella strains tested for resistance to antimicrobials, 18 (31.6%) were full-susceptible. No strain displayed resistance to azithromycin, ceftazidime, cefotaxime and meropenem. The highest resistance frequency was displayed to tetracycline (54.1%), followed by ampicillin (50.82%), nalidixic acid (42.62%) and chloramphenicol (42.62). Multi-resistance was detected in 52.54% of the, strains. In conclusion, S. enterica is more prevalent in pre-chill pig carcasses than Y. enterocolitica and L. monocytogenes and thus should be prioritized in monitoring and control programs at slaughter. Salmonella serovars varied among slaughterhouses and present significant differences in their resistance to antimicrobials. Slaughterhouses that present higher medians of TAM or Enterobacteriaceae in a monitoring period may have higher S. enterica prevalences as well. However, there is a high variation of S. enterica prevalence among slaughter days, which cannot be always related to the hygienic indicators counts observed on a given day.(AU)

A intensificação da produção de suínos e os avanços no controle sanitário dos rebanhos alterou de forma importante o perfil de risco do consumo de carne suína. No cenário atual, a maioria dos microrganismos causadores de lesões macroscópicas detectáveis na inspeção post mortem não são transmissíveis por alimentos, enquanto bactérias de importância como causadoras de doenças transmitidas por alimentos não causam lesões macroscópicas. No Brasil, o Ministério da Agricultura, Pecuária e Abastecimento solicitou uma opinião científica sobre a priorização de patógenos potencialmente transmitidos pela carne suína in natura. Após conduzir uma avaliação de risco qualitativa, apenas Salmonella enterica foi classificada como de alto risco para o consumidor. O presente estudo foi parte da etapa de validação da avaliação de risco e objetivou: investigar a frequência de S. enterica, Yersinia enterocolitica e Listeria. monocytogenes; e enumerar indicadores higiênico-sanitários em carcaças de suínos abatidos sob inspeção federal em frigoríficos dedicados ao abate de suínos sob sistema intensivo de criação no sul do Brasil. Além disso, o perfil de resistência a antimicrobianos dos patógenos isolados foi investigado. A superfície de um total de 378 carcaças foi amostrada por esponjas, na etapa de pré-resfriamento em três matadouros frigoríficos (A, B, C). As amostras foram investigadas quanto à presença dos três patógenos acima mencionados e quanto à enumeração de Unidades Formadoras de Colônia (log UFC.cm-1) de mesófilos aeróbios totais (MAT) e Enterobacteriaceae. As cepas isoladas de Salmonella foram testadas quanto à resistência a onze antimicrobianos pela técnica de disco difusão. As medianas de contagem de ambos os indicadores apresentaram diferença significativa (p<0,0001) entre matadouros-frigoríficos. A mediana de MAT foi bastante próxima para A e B (1,573 log UFC.cm-1 e 1,6014 log UFC.cm-1, respectivamente), enquanto em C uma mediana de MAT mais elevada foi determinada (2,216 log CFU.cm-1). Um perfil semelhante foi observado em relação a Enterobacteriaceae, sendo as medianas calculadas para A, B e C, respectivamente: -0,426 log CFU.cm-1; 0,2163 log UFC.cm-1; e 0,633 log UFC.cm-1. Em relação aos patógenos investigados, L. monocytogenes não foi detectada e apenas uma carcaça, do Matadouro C, foi positiva para Y. enterocolitica. Portanto, os resultados sugerem uma prevalência muito baixa desses patógenos na população amostrada. Em um total de 65 (17,2%) carcaças houve isolamento de S. enterica, com diferença nas frequências observadas entre matadouros e dias de abate. A prevalência de carcaças positivas para S. enterica foi maior no Matadouro C (25,4%; IC95% 19-32%) em comparação com A (9,5%; IC95% 9-14%) e B (18,3%; IC95% 12-24%). Não houve associação estatística entre o número de Enterobacteriaceae e o isolamento de S. enterica na superfície das carcaças (p=0,69). O dia de abate agrupado por frigorífico explica 31,3% da variação na prevalência de Salmonella. O sorovar mais frequente de S. enterica foi Typhimurium (38,1%) seguido de S. Infantis (30,1%). Entre as 61 cepas de S. enterica testadas quanto à resistência a antimicrobianos, 18 (31,6%) foram totalmente suscetíveis aos antimicrobianos testados. Nenhuma cepa apresentou resistência a azitromicina, ceftazidima, cefotaxima e meropenem. As maiores frequências de resistência foram demonstradas contra tetraciclina (54,1%), ampicilina (50,8%), ácido nalidíxico (42,62%) e cloranfenicol (42,62%). Em 52,54% das cepas foi detectada multi-resistência. Em conclusão, S. enterica é mais prevalente em carcaças suínas no pré-resfriamento do que Y. enterocolitica e L. monocytogenes. Portanto, S. enterica deve ser priorizada em programas de monitoramento e controle ao abate. Os sorovares de Salmonella variam entre matadouros e apresentam diferenças significativas na resistência a antimicrobianos. Matadouros de suínos que apresentam medianas de MAT e Enterobacteriaceae num período de monitoramento podem apresentar também prevalências mais de altas de presença de S. enterica. Entretanto, há uma alta variabilidade na frequência de S. enterica entre dias de abate, e nem sempre há relação entre essa frequência e a contagem de indicadores higiênico-sanitários determinados num determinado dia.(AU)