Mycoplasma agalactiae and the Mycoplasma mycoides cluster in goat herds in the states of Pernambuco and Paraíba, Brazil / Mycoplasma agalactiae e Mycoplasma mycoides cluster em rebanhos caprinos nos estados de Pernambuco e Paraíba, Brasil

The objective of this study was to detect Mycoplasma agalactiae (Ma) and the Mycoplasma mycoides cluster (Mmcluster) in 373 goat milk samples of different breeds from herds located in Pernambuco and Paraíba states, as well as to evaluate somatic cell count (SCC) and milk composition from positive animals. For this, DNA extraction from milk samples was carried out, followed by generic and species-specific amplification by Polymerase Chain Reaction (PCR). Milk constituents were determined by medium infrared spectrometry and SCC by flow cytometry. Analyses of variance and tests of comparison of means verified the effects of positivity on the evaluated characteristics. The frequencies for Ma and Mmcluster were 43.21 and 5.70%, respectively. In all genetic groups, Ma was detected in all positive samples, whereas Mmcluster was only observed in samples from Moxotó, Parda Sertaneja, and that without a defined racial pattern. Statistical difference was observed (p < 0.05) between mean values of protein, casein and SCC in positive and negative Ma samples. In terms of Mmcluster there was only a statistically significant difference in the SCC parameter. The detection of Mycoplasma in samples of goat milk suggests an introduction of infected animals into the evaluated herds, as well as possible contact with the etiological agents at fairs and exhibitions.

O presente trabalho teve como objetivo detectar Mycoplasma agalactiae (Ma) e Mycoplasma mycoides cluster (Mmcluster) em 373 amostras de leite caprino de diferentes raças, pertencentes a rebanhos localizados nos estados de Pernambuco e Paraíba, bem como avaliar a composição e a contagem de células somáticas (CCS) de leite de animais positivos para aqueles agentes. Para isso realizou-se a extração de DNA de amostras de leite, seguida de amplificação genérica e espécie-específica por Reação em Cadeia da Polimerase (PCR). Os constituintes do leite foram determinados por espectrômetro de infravermelho médio e a CCS, por citometria de fluxo. As análises de variância e testes de comparação de médias verificaram os efeitos da positividade sobre as características avaliadas. As frequências para Ma e Mmcluster foram de 43,21 e 5,70%, respectivamente. Em todos os grupos genéticos foram detectadas amostras positivas para Ma, enquanto que para Mmcluster só foram observadas em animais das raças Moxotó, Parda Sertaneja e sem padrão racial definido. Observou-se diferença estatística (p < 0,05) entre as médias de proteína, caseína e CCS de amostras positivas e negativas para Ma. Para Mmcluster, verificou-se diferença estatística significativa apenas para o parâmetro CCS. A detecção de Mycoplasma em amostras de leite caprino sugere a introdução de animais infectados nos rebanhos avaliados, como também o possível contato com os agentes etiológicos em feiras e exposições.

Mycoplasma agalactiae and the Mycoplasma mycoides cluster in goat herds in the states of Pernambuco and Paraíba, Brazil / Mycoplasma agalactiae e Mycoplasma mycoides cluster em rebanhos caprinos nos estados de Pernambuco e Paraíba, Brasil

The objective of this study was to detect Mycoplasma agalactiae (Ma) and the Mycoplasma mycoides cluster (Mmcluster) in 373 goat milk samples of different breeds from herds located in Pernambuco and Paraíba states, as well as to evaluate somatic cell count (SCC) and milk composition from positive animals. For this, DNA extraction from milk samples was carried out, followed by generic and species-specific amplification by Polymerase Chain Reaction (PCR). Milk constituents were determined by medium infrared spectrometry and SCC by flow cytometry. Analyses of variance and tests of comparison of means verified the effects of positivity on the evaluated characteristics. The frequencies for Ma and Mmcluster were 43.21 and 5.70%, respectively. In all genetic groups, Ma was detected in all positive samples, whereas Mmcluster was only observed in samples from Moxotó, Parda Sertaneja, and that without a defined racial pattern. Statistical difference was observed (p < 0.05) between mean values of protein, casein and SCC in positive and negative Ma samples. In terms of Mmcluster there was only a statistically significant difference in the SCC parameter. The detection of Mycoplasma in samples of goat milk suggests an introduction of infected animals into the evaluated herds, as well as possible contact with the etiological agents at fairs and exhibitions.(AU)

O presente trabalho teve como objetivo detectar Mycoplasma agalactiae (Ma) e Mycoplasma mycoides cluster (Mmcluster) em 373 amostras de leite caprino de diferentes raças, pertencentes a rebanhos localizados nos estados de Pernambuco e Paraíba, bem como avaliar a composição e a contagem de células somáticas (CCS) de leite de animais positivos para aqueles agentes. Para isso realizou-se a extração de DNA de amostras de leite, seguida de amplificação genérica e espécie-específica por Reação em Cadeia da Polimerase (PCR). Os constituintes do leite foram determinados por espectrômetro de infravermelho médio e a CCS, por citometria de fluxo. As análises de variância e testes de comparação de médias verificaram os efeitos da positividade sobre as características avaliadas. As frequências para Ma e Mmcluster foram de 43,21 e 5,70%, respectivamente. Em todos os grupos genéticos foram detectadas amostras positivas para Ma, enquanto que para Mmcluster só foram observadas em animais das raças Moxotó, Parda Sertaneja e sem padrão racial definido. Observou-se diferença estatística (p < 0,05) entre as médias de proteína, caseína e CCS de amostras positivas e negativas para Ma. Para Mmcluster, verificou-se diferença estatística significativa apenas para o parâmetro CCS. A detecção de Mycoplasma em amostras de leite caprino sugere a introdução de animais infectados nos rebanhos avaliados, como também o possível contato com os agentes etiológicos em feiras e exposições.(AU)

Epidemiology of Mycoplasma agalactiae and Mycoplasma mycoides cluster in flocks of northeastern Brazil / Epidemiologia de Mycoplasma agalactiae e Mycoplasma mycoides cluster em rebanhos do nordeste do Brasil

The present study aimed to investigate contagious agalactia (CA) in flocks from Pernambuco State. The study involved 225 goats and 63 ewes; 288 milk samples and 100 vaginal swabs were collected in total. The PCR assays were carried out using specific primers to Mycoplasma agalactiae and the Mycoplasma mycoides cluster. Among the goat’s milk samples,12.0% (27/225) were positive for Mycoplasma agalactiae DNA, while 5.3% (12/225) contained the Mycoplasma mycoides cluster. Of the vaginal swabs taken from goats, 15.4% (12/78) were positive for Mycoplasma agalactiae DNA and 3.8% (3/78) contained the Mycoplasma mycoides cluster. In the case of ewes, 4.3% (1/23) of the milk samples contained Mycoplasma agalactiae DNA, and 7.5% (3/40) were positive for the Mycoplasma mycoides cluster. Vaginal swabs taken from sheep´s were negative. Analysis of risk factors for mycoplasmosis, showed that goats and sheep flocks on the extensive breeding system are more likely to have mycoplasmosis than those on the intensive breeding system (odds ratio (OR) 6.2; p=0.004); meat goat and sheep flocks are more likely to have infection compared to dairy flocks (OR 4.8; p=0.011); unclean animal housing increases the chances of infection (OR 5.0; p=0.031) and not performing quarantine increases the chances of mycoplasmosis (OR 4.6; p=0.042). Based on these findings we conclude that CA syndrome in the semiarid region of Pernambuco state can be associated with Mycoplasma agalactiae and Mycoplasma mycoides cluster.

O objetivo deste estudo foi investigar a Agalaxia contagiosa em rebanhos do estado de Pernambuco. Foram examinadas 225 cabras e 63 ovelhas, das quais foram colhidas 288 amostras de leite e 100 suabes vaginais. Foram realizadas reações da PCR com iniciadores específicos para Mycoplasma agalactiae e Mycoplasma mycoides cluster. A frequência total de Mycoplasma agalactiae em amostras de leite caprino foi de 12,0% (27/225) e de 5,3% (12/225) para Mycoplasma mycoides cluster. Dos suabes vaginais de cabras as frequências detectadas na PCR foram de 15,4% (12/78) para Mycoplasma agalactiaee 3,8% (3/78) para Mycoplasma mycoides cluster. Em leite de ovelhas a frequência de Ma foi de 4.3% (1/23) e de 7,5% (3/40) para Mycoplasma mycoides cluster. Na análise dos fatores de risco para micoplasmoses verificou-se que rebanhos de caprinos e ovinos mantidos no sistema extensivo são mais prováveis de adquirir micoplasmose quando comparados com o sistema intensivo (odds ratio (OR) 6,2; p=0,004); rebanhos de caprinos e ovinos de corte são mais prováveis de adquirir micoplamsose do que rebanhos de leite (OR 4,8; p=0,011); não realizar limpeza das instalações aumenta as chances de infecção (OR 5,0; p=0,031); não realizar quarentena aumenta as chances das micoplasmoses estudadas (OR 4,6; p=0,042). Conclui-se que M. agalactiae e Mycoplasma mycoides cluster estão envolvidos na síndrome de CA em rebanhos de caprinos e ovinos do semiárido pernambucano.

Epidemiology of Mycoplasma agalactiae and Mycoplasma mycoides cluster in flocks of northeastern Brazil / Epidemiologia de Mycoplasma agalactiae e Mycoplasma mycoides cluster em rebanhos do nordeste do Brasil

The present study aimed to investigate contagious agalactia (CA) in flocks from Pernambuco State. The study involved 225 goats and 63 ewes; 288 milk samples and 100 vaginal swabs were collected in total. The PCR assays were carried out using specific primers to Mycoplasma agalactiae and the Mycoplasma mycoides cluster. Among the goats milk samples,12.0% (27/225) were positive for Mycoplasma agalactiae DNA, while 5.3% (12/225) contained the Mycoplasma mycoides cluster. Of the vaginal swabs taken from goats, 15.4% (12/78) were positive for Mycoplasma agalactiae DNA and 3.8% (3/78) contained the Mycoplasma mycoides cluster. In the case of ewes, 4.3% (1/23) of the milk samples contained Mycoplasma agalactiae DNA, and 7.5% (3/40) were positive for the Mycoplasma mycoides cluster. Vaginal swabs taken from sheep´s were negative. Analysis of risk factors for mycoplasmosis, showed that goats and sheep flocks on the extensive breeding system are more likely to have mycoplasmosis than those on the intensive breeding system (odds ratio (OR) 6.2; p=0.004); meat goat and sheep flocks are more likely to have infection compared to dairy flocks (OR 4.8; p=0.011); unclean animal housing increases the chances of infection (OR 5.0; p=0.031) and not performing quarantine increases the chances of mycoplasmosis (OR 4.6; p=0.042). Based on these findings we conclude that CA syndrome in the semiarid region of Pernambuco state can be associated with Mycoplasma agalactiae and Mycoplasma mycoides cluster.(AU)

O objetivo deste estudo foi investigar a Agalaxia contagiosa em rebanhos do estado de Pernambuco. Foram examinadas 225 cabras e 63 ovelhas, das quais foram colhidas 288 amostras de leite e 100 suabes vaginais. Foram realizadas reações da PCR com iniciadores específicos para Mycoplasma agalactiae e Mycoplasma mycoides cluster. A frequência total de Mycoplasma agalactiae em amostras de leite caprino foi de 12,0% (27/225) e de 5,3% (12/225) para Mycoplasma mycoides cluster. Dos suabes vaginais de cabras as frequências detectadas na PCR foram de 15,4% (12/78) para Mycoplasma agalactiaee 3,8% (3/78) para Mycoplasma mycoides cluster. Em leite de ovelhas a frequência de Ma foi de 4.3% (1/23) e de 7,5% (3/40) para Mycoplasma mycoides cluster. Na análise dos fatores de risco para micoplasmoses verificou-se que rebanhos de caprinos e ovinos mantidos no sistema extensivo são mais prováveis de adquirir micoplasmose quando comparados com o sistema intensivo (odds ratio (OR) 6,2; p=0,004); rebanhos de caprinos e ovinos de corte são mais prováveis de adquirir micoplamsose do que rebanhos de leite (OR 4,8; p=0,011); não realizar limpeza das instalações aumenta as chances de infecção (OR 5,0; p=0,031); não realizar quarentena aumenta as chances das micoplasmoses estudadas (OR 4,6; p=0,042). Conclui-se que M. agalactiae e Mycoplasma mycoides cluster estão envolvidos na síndrome de CA em rebanhos de caprinos e ovinos do semiárido pernambucano.(AU)

Detecção do Grupo Mycoplasma mycoides por imunoperoxidase indireta (IPI) e PCR-REA em conduto auditivo de bovinos / Detection of Mycoplasma mycoides cluster by indirect immunoperoxidase (IPI) and PCR-REA in the ear canal of bovines

O Grupo Mycoplasma mycoides (GMM) foi diagnosticado por PCR-REA e imunoperoxidase indireta (IPI) em amostras de lavados de conduto auditivo de bovinos no Estado do Rio de Janeiro, Brasil. 60 bovinos foram selecionados aleatoriamente. As lavagens foram feitas com uso de seringas estéreis contendo um volume de 60 mL de solução salina tamponada (PBS pH 7.2). As amostras obtidas foram estocadas em glicerol (1:2) e congeladas a 20ºC até uso. Estas amostras foram diluídas até 10-5 e repicadas em meio Hayflick modificado, sólido e líquido, sendo incubados a 37ºC por 48-72 horas. As placas foram mantidas em microaerofilia e observadas diariamente, para visualização das colônias típicas em ôovo-fritoõ. Das 60 amostras cultivadas, 48 (80,00 por cento) foram positivas para Mycoplasma spp. A prevalência obtida para o GMM na IPI foi de 20,0 por cento (12/60) enquanto na PCR-REA foi de 41,7 por cento (25/60). Das cepas tipificadas pela IPI 58,3 por cento (7/12) foram M. mycoides subsp. mycoides LC e 41,7 por cento (5/12) foram M. capricolum. Na PCR-REA o grupo M. mycoides foi confirmado pela visualização de um amplicon de 785bp, compatível com este grupo. O valor encontrado no teste Kappa para associação entre estes testes foi de 0,14 (P>0,05. Na clivagem do produto da PCR com a enzima de restrição AluI, de cepas de referências e dos isolados de ouvido os fragmentos obtidos foram de 81, 98, 186 e 236pb, mas não de 370pb, que é específica para o agente da Pleuropneumonia Contagiosa Bovina. A presença de espécies de micoplasmas no conduto auditivo de bovinos assintomáticos representa um risco para propagação de Mycoplasma spp. entre rebanhos bovinos no Brasil.(AU)

Mycoplasma mycoides cluster (MMC) was diagnosed by polimerase chain reaction-restriction endonuclease analysis (PCR-REA) and indirect immunoperoxidase (IPI), both, carried out in flushing from external ear canal, collected from bovine at slaughter time in the State of Rio de Janeiro, southeastern, Brazil. A total of 60 bovines were randomly selected. Sterile syringes (60mL) loaded with buffer solution (PBS, pH 7.2) were used for the ear canal flushing. The obtained samples were stored in glycerol (1:2) and frozen at -20ºC until use. These specimens were diluted up to 10-5, inoculated in liquid and solid modified Hayflickïs media and incubated at 37ºC for 2-3 days. The plates were kept in a microaerophilia condition and examined every two days under a stereomicroscope for the presence of typical colonies ôfried-eggõ. In this study, 35 strains selected in agreement with their biochemistry and physiologic proprieties, were used. From the 60 cultivated samples, 48 (80.00 percent) were positive for Mycoplasma spp. Under IPI the prevalence obtained for MMC was 20.0 percent (12/60) while by PCR-REA it was 41.7 percent (25/60). The IPI typing of these isolates resulted in 58.3 percent (7/12) for M.mycoides mycoides LC and 41.7 percent (5/12) for M. capricolum. PCR-REA for MMC was confirmed by the amplicon size of 785bp, compatible with this group. The Kappa value for the association between these two tests was 0.14 (p>0.05). After restriction analysis with AluI in all MMC strains the fragments size obtained were of 81, 98, 186 and 236bp, but not of 370bp that is compatible with Mycoides mycoides mycoides SC of bovine type. The presence of mycoplasmas species in the ear canal of asymptomatic bovines represent a risk of subsequent propagation of Mycoplasma spp. among bovine herds in Brazil.(AU)