In vitro development and acclimatization of Cyrtopodium aliciae L. Linden & Rolfe, an endemic species of the Chapada Diamantina / Desenvolvimento in vitro e aclimatização de Cyrtopodium aliciae L. Linden & Rolfe: uma bela e endêmica espécie da Chapada Diamantina

Orchids are valued as ornamental plants, bioindicators, and medicinal plants, which implies that some species may be over-collected. Some inhabit very fragile environments and are under threat by the misuse of habitats and anthropogenic impacts. The search for beautiful plants and flowers has increased the number of facilities for micropropagation either by seeding or by cloning plants using in vitro techniques. However, not all species have appropriate media for growth and development that would help in conservation efforts. Cyrtopodium aliciae is an endemic species of rupestrian grassland in Brazil t. It has appeal as an ornamental plant or for use in hybridisation programs dueo its small size and white brownish-purple dotted flowers. This study compared three different media, namely ½ concentration Murashige and Skoog (MS), Vacin and Wendt, and Knudson C, during plant growth and their effect on the acclimatization of Cyrtopodium aliciae. The number and length of shoots and roots, increase in mass, and survival in vitro and ex vitro were analyzed. The experiment was conducted as completely random with a factorial arrangement of treatments (3 × 3) with 10 repetitions per treatment containing 10 plants for the in vitro experiment and 3 repetitions of 10 plants for the ex vitro experiment. Cyrtopodium aliciae performed better in the ½ concentration MS medium with a higher increase in mass, plant development, and survival under both in vitro and ex vitro conditions.

As orquídeas são valiosas como plantas ornamentais, bioindicadores ou medicinais, o que implica que algumas espécies podem ser coletadas em demasia. Algumas habitam ambientes muito frágeis e devido ao impacto antrópico, estão sob ameaça devido ao mau uso destes habitats. A busca por belas plantas e flores aumentou as facilidades para micropropagação, seja por semeadura ou por clonagem de plantas com técnicas in vitro. No entanto, nem todas as espécies possuem meios apropriados para crescimento e desenvolvimento que ajudem nos esforços de conservação. Cyrtopodium aliciae é uma bela espécie endêmica de campos rupestres do Brasil, apresenta bom apelo tanto como planta ornamental quanto como potencial para ser usada em programas de hibridização, devido ao seu pequeno tamanho de planta e belas flores brancas pontilhadas com marrom-púrpura. Este trabalho teve como objetivo comparar três meios diferentes, Murashige e Skoog à ½ concentração (MS); Vacin e Wendt (VW) e Knudson C (KC), durante o crescimento e na aclimatização. Foram analisadas as seguintes variáveis: número e comprimento de brotos e raízes, aumento de massa, sobrevivência in vitro e ex vitro. O experimento foi conduzido em delineamento inteiramente casualizado, com os tratamentos em um arranjo fatorial 3x3 (meios x tempo) com 10 repetições por tratamento contendo 10 plantas cada para a fase in vitro e três repetições com 10 plantas para a fase ex vitro. Cyrtopodium aliciae teve melhor desempenho na concentração de ½ MS com o maior aumento de massa, desenvolvimento da planta e sobrevivência tanto em condições in vitro quanto em condições ex vitro.

Brassavola tuberculata Hook: in vitro growth and ex vitro establishment as a function of the micropropagation system and sucrose / Brassavola tuberculata Hook: crescimento in vitro e estabelecimento ex vitro em função do sistema de micropropagação e da sacarose

This study examines the in vitro growth and ex vitro establishment of Brassavola tuberculata in relation to the micropropagation system and sucrose concentration employed in the in vitro culture. A completely randomized experimental design was utilized, employing a 2 x 5 factorial arrangement. The experimental period began with seedlings cultivated in vitro for 180 days, which were subsequently transferred to Murashige and Skoog culture media containing sucrose concentrations of 0, 15, 30, 45, or 60 g L-1. The cultures were subjected to two micropropagation systems: conventional and gas exchange. After 90 days of in vitro cultivation, the plants were evaluated, transplanted into a substrate, and placed in a screened nursery for ex vitro cultivation. After 300 days of ex vitro cultivation, the survival and initial characteristics of the plants were assessed. The micropropagation system allowing gas exchange and sucrose concentrations up to 30 g L-1 enhanced the shoot and root growth of in vitro propagated plants. No noticeable anatomical differences were observed after 90 days of in vitro culture among the different sucrose concentrations and micropropagation systems used. In the ex vitro establishment, irrespective of sucrose concentration, the micropropagation system facilitating gas exchange positively influenced all evaluated characteristics.

Objetivou-se com este trabalho avaliar o crescimento in vitro e estabelecimento ex vitro de Brassavola tuberculata em função do sistema de micropropagação e da concentração de sacarose utilizados no cultivo in vitro. Foi utilizado o delineamento inteiramente casualizado e os tratamentos arranjados em esquema fatorial 2 x 5. Para o início do período experimental, foram utilizadas plântulas cultivadas in vitro por 180 dias, sendo transferidas para meios de cultivo Murashige e Skoog contendo 0, 15, 30, 45 ou 60 g L-1 de sacarose, e as culturas submetidas a dois sistemas de micropropagação: convencional ou com troca gasosa. Após 90 dias de cultivo in vitro, as plantas foram avaliadas e na sequência plantadas em substrato e acondicionadas em viveiro telado para o cultivo ex vitro. Após 300 dias de cultivo ex vitro, as plantas foram avaliadas quanto à sobrevivência e às mesmas características iniciais. A utilização do sistema de micropropagação que permite trocas gasosas, em conjunto com concentrações de sacarose de até 30 g L-1, proporcionou aumento no crescimento de parte aérea e do sistema radicular das plantas propagadas in vitro. As diferentes concentrações de sacarose e os sistemas de micropropagação utilizados não apresentaram diferenças anatômicas perceptíveis aos 90 dias de cultivo in vitro. Já no estabelecimento ex vitro, independente da utilização de sacarose, o sistema de micropropagação que permite trocas gasosas influenciou positivamente todas as características avaliadas.

In vitro propagation and conservation of Cattleya tigrina A Rich / Propagação e conservação in vitro de Cattleya tigrina A Rich

Cattleya tigrina A. Rich has been suffering heavy losses in its natural habitat and it is now included in the list of plants that are vulnerable to extinction. The development of in vitro propagation and conservation methodologies, as well as acclimatization, are considered important for species at the risk of extinction, as they promote the multiplication and conservation of the species, hence avoiding the loss of their genetic variability. The present study established the protocol of micropropagation and the in vitro conservation of C. tigrina. For the in vitro propagation, the study tested two volumes of the MS medium and two medium consistencies (stationary liquid and semi-solid). For acclimatization, the substrate mixtures containing pine bark, charcoal, vermiculite, and coconut coir were analyzed. For the in vitro conservation, different concentrations of the salts were tested in the MS medium, together with the osmotic regulators (sucrose, mannitol, and sorbitol), and at two temperatures (18 and 25 °C). The results obtained inferred that the semi-solid medium was superior to the stationary liquid medium in the variables of survival and the presence of roots, while the liquid medium was superior to the semi-solid medium in the number of shoots. For acclimatization, pine bark was the substrate where the plants developed an improved height, with sprouting, and rooting. The conservation was satisfactory and the plants remained viable for a period of 730 days, with the MS medium with 25% of the salts, and at temperatures of 18 ºC or 25 ºC. The plants were propagated in the stationary liquid MS medium (10 mL) and the semi-solid medium (25 mL), while they were acclimatized in pine bark and preserved in the MS medium with 25% of the salts (18 ºC or 25 ºC).

A Cattleya tigrina A. Rich vem sofrendo grandes perdas no seu habitat natural, sendo assim foi inclusa na lista de vulneráveis a extinção. O desenvolvimento de metodologias de propagação e conservação in vitro, bem como de aclimatização, são consideradas importantes para espécies em risco de extinção, por promover a multiplicação e conservação da espécie, evitando a perda do seu material genético. Desta forma, o presente trabalho visou estabelecer protocolo de micropropagação e conservação in vitro de C. tigrina. Para propagação in vitro testou volumes de meio de cultura e duas consistências do meio MS (líquido estacionário e semissólido). Para aclimatização, analisou misturas de substratos contendo casca de pinus, carvão vegetal, vermiculita e pó de coco. Para conservação in vitro, foram testados diferentes concentrações de sais no meio MS, reguladores osmóticos (sacarose, manitol e sorbitol), e duas temperaturas (18 e 25 °C). Os resultados obtidos inferem que, o meio de cultura semissólido foi superior ao líquido nas variáveis sobrevivência e presença de raízes, enquanto que o meio líquido foi superior ao meio semissólido em números de brotos. Na aclimatização a casca de pinus foi o substrato em que as plantas se desenvolveram melhor em altura, brotação e enraizamento. A conservação foi satisfatória e as plantas permaneceram viáveis por um período de 730 dias, usando 25% dos sais MS e temperatura de 18 ºC ou 25 ºC. As plantas podem ser propagadas em meio MS líquido estacionário (10 mL) ou semissólido (25 mL), aclimatizadas em casca de pinus e conservadas em 25% dos sais MS (18 ºC ou 25 ºC).

Methodology of the tetrazolium test for identifying viable seeds of orchids of the genus Cattleya native to the Brazilian Cerrado / Metodologia do teste de tetrazólio para identificação de sementes viáveis de orquídeas do gênero Cattleya nativas do Cerrado brasileiro

Orchids need measures for conservation of their species, among them the creation of seed banks. This study analyzes suitable methodologies to identify the viability of Cattleya seeds through the tetrazolium test. Seeds of Cattleya nobilior Rchb. and Cattleya walkeriana Gardn. were submitted to three preconditioning: no soaking (control); sucrose (10%); or distilled water. After 24 hours, they were submitted to tetrazolium solution with three types of conditioning: oven (40 °C); water bath (40 °C); or room temperature. Subsequently, the percentage of viable seeds (VS) was calculated and in vitro sowing was carried out. Germination percentage (G) was determined after 45 days. A completely randomized design was used for each species studied, with treatments arranged in a 3x3 factorial scheme (three preconditioning and three conditioning), with eight replicates of one tube each. The experiment was performed in duplicate. The highest viability values found in the tetrazolium test were close to those of germination (C. nobilior: VS = 88% e G = 97%; C. walkeriana: VS = 88% e G = 95%) for Cattleya species native to the Cerrado. The conditioning at ambient temperature had a greater effect on seed visualization for both species studied, suggesting that the tetrazolium test should be performed at this conditioning temperature.(AU)

As orquídeas necessitam de medidas para a conservação de suas espécies, entre essas a criação de bancos de sementes. Objetivou-se identificar metodologia adequada para a identificação da viabilidade de sementes de Cattleya por meio do teste de tetrazólio. Sementes de Cattleya nobilior Rchb. e Cattleya walkeriana Gardn. foram submetidas a três pré-condicionamentos: sem embebição (controle); sacarose (10%) ou água destilada. Decorridas 24 horas, foram submetidas à solução de tetrazólio, com três tipos de condicionamento: estufa (40 °C), banho maria (40 °C) ou temperatura ambiente. Após esse período foi calculada a porcentagem de sementes viáveis (SV). Foi realizada a semeadura in vitro e, após 45 dias, determinada a porcentagem de germinação (G). Para cada espécie estudada, foi utilizado o delineamento inteiramente casualizado e os tratamentos foram arranjados em esquema fatorial 3x3 (três précondicionamentos e três condicionamentos) com oito repetições de um tubo de ensaio cada, sendo o experimento realizado em duplicata. Os maiores valores de viabilidade encontrados no teste de tetrazólio foram próximos aos de germinação (C. nobilior: SV = 88% e G = 97%; C. walkeriana: SV = 88% e G = 95%) para essas espécies de Cattleya nativas do Cerrado. Para as duas espécies estudadas, o condicionamento em temperatura ambiente apresentou melhor visualização das sementes, sugerindo que o teste de tetrazólio deve ser realizado nesta temperatura de condicionamento.(AU)

Light sources on the germination and initial in vitro establishment of Schomburgkia crispa Lindl., a species of the Brazilian Cerrado / Fontes de luz na germinação e estabelecimento inicial in vitro de Schomburgkia crispa Lindl. uma espécie do Cerrado brasileiro

Light is one of the factors that influence the germination and initial establishment of orchids under in vitro cultivation. This study evaluated the effect of different light sources on these stages in in vitro cultivation of Schomburgkia crispa Lindl. After sowing in an aseptic environment, we stored the cultures in a screened greenhouse (natural light) or in a growth room with the following light sources: 3,000 K yellow LED; 6,500 K white LED [1]; 6,500 K white LED [2]; or 6,500 K white fluorescent lamp (control). We assessed germination percentage and initial seedling establishment at 45 and 90 days after sowing. Light did not influence the germination of S. crispa. However, the use of 3,000 K LED provided a faster initial establishment of S. crispa when compared to the other light sources, also presenting lower seedling mortality. Thus, the light source 3,000 K LED is a potential substitute for the 6,500 K fluorescent lamps and LEDs used in growth rooms in in vitro culture laboratories.(AU)

A luz é um dos fatores que influenciam a germinação e o estabelecimento inicial no cultivo in vitro de orquídeas. Assim, objetivou-se avaliar o efeito de diferentes fontes de luz na germinação e no estabelecimento inicial in vitro de Schomburgkia crispa Lindl. Após semeadura em ambiente asséptico, as culturas foram acondicionadas em viveiro telado (luz natural) ou em sala de crescimento nas seguintes fontes luminosas: LEDs amarelo 3.000 K, branco 6.500 K [1], branco 6.500 K [2] ou lâmpada fluorescente branca 6.500 K (controle). Aos 45 e 90 dias após a semeadura foi avaliada a porcentagem de germinação e o estabelecimento inicial dos propágulos. A luz não influenciou a germinação das sementes de S. crispa, mas a utilização do LED 3.000 K proporcionou estabelecimento inicial de S. crispa em menor período e com menor mortalidade das plântulas, quando comparado com as demais fontes de luz utilizadas. A fonte de luz LED 3.000 K pode ser indicada como um substituto potencial para as lâmpadas fluorescentes e LEDs 6.500 K, utilizadas em salas de crescimento em laboratórios de cultivo in vitro.(AU)

First record of Vanilla labellopapillata (Orchidaceae: Vanilloideae) in the state of Amazonas, Brazil / Primero registro de Vanilla labellopapillata (Orchidaceae: Vanilloideae) no Estado do Amazonas, Brasil

The first record of Vanilla labellopapillata is presented for the state of Amazonas, Brazil, in the region of Manaus, now the western limit of the species, which was previously known only from the type locality in the state of Pará. A brief description is provided and taxonomic and ecological aspects of the species are discussed in the light of this new finding.(AU)

É apresentado o primeiro registro de Vanilla labellopapillata para o Estado do Amazonas, Brasil, na região de Manaus, sendo este o limite oeste da espécie, anteriormente só conhecida da localidade tipo no estado do Pará. É apresentada uma breve descrição da espécie e comentários taxonômicos e ecológicos da espécie no contexto da nova localidade.(AU)

Somatic embryos from Phalaenopsis classic Spotted Pink (Orchidaceae) protocorms / Embriões somáticos provenientes de protocormos de Phalaenopsis classic Spotted Pink (Orquidaceae)

The aim of the present study was to induce the formation of somatic embryos in protocorms from Phalaenopsis Classic Spotted Pink hybrids at two physiological maturation stages, namely: 80 and 120 days after seed inoculation (DASI). Protocorms were inoculated in ½ MS medium supplemented with 0.1 mg L-¹ ANA and 3 mg L-¹ TDZ. Protocorms were inoculated 120 days after sowing were more developed at the 15th cultivation day due to the formation of pro-embryogenic structures. It was possible seeing the formation of globular- and torpedo-stage somatic embryos at the 30th day of cultivation in somatic embryogenesis (SE) induction medium. The protocorms inoculated at the 80th DASI did not formed somatic embryos; they oxidized 20 days after cultivation in SE-induction medium. The formation of somatic embryos happened directly on the explant, thus characterizing a direct somatic embryogenesis. The embryos converted into plants when the somatic embryos were transferred to the nutrient medium containing no growth regulator. Therefore, it was concluded that the somatic embryos induction from protocorms 120 days after sowing was positive, since the embryos were able to become plants and presented vegetative organs with morphological traits similar to those of the matrix plant.(AU)

O presente estudo buscou induzir a formação de embriões somáticos em protocormos do híbrido Phalaenopsis Classic Spotted Pink em dois estádios de maturação fisiológica aos 80 e 120 dias após a inoculação das sementes (DAIS). Os protocormos foram inoculados em meio ½ MS suplementado com 0,1 mg L-¹ de ANA e 3 mg L-¹ de TDZ. Aos 15 dias de cultivo os protocormos, inoculados aos 120 dias após a semeadura, apresentavam estádio mais desenvolvido, apresentando formação de estruturas pró-embriogênicas. Aos 30 dias de cultivo em meio de indução de ES observou-se a formação de embriões somáticos na fase globular e torpedo. Os protocormos inoculados com 80 DAIS não evoluíram para a formação de embriões somáticos, ocorrendo a oxidação destes aos 20 dias após o cultivo em meio de indução de ES. A formação dos embriões somáticos ocorreu diretamente no explante, caracterizando uma embriogênese somática direta. Quando os embriões somáticos foram transferidos para o meio nutritivo sem regulador de crescimento, houve a conversão em plantas. Diante disso, conclui-se que a indução de embriões somáticos a partir de protocormos com 120 dias após a semeadura, foi positiva, em que os embriões obtidos apresentaram competência em converter-se em plantas, apresentando os órgãos vegetativos com características morfológicas satisfatórias.(AU)

Novas opções de substratos para o cultivo de Cyrtopodium cardiochilum (Orchidaceae) / Effect of substrates in the cultivation of Cyrtopodium cardiochilum (Orchidaceae)

O presente trabalho teve como objetivo avaliar diferentes substratos no cultivo da espécie Cyrtopodium cardiochilum (Orchidaceae). As plantas foram cultivadas em vasos de polietileno, em casa de vegetação com tela de sombreamento de polipropileno de 60% de retenção de luminosidade. Os tratamentos constituíram-se de brita de gnaisse (granulometria variando de 8-15 mm), argila expandida (15-22 mm de diâmetro), seixo rolado (8-15 mm), casca de coco em cubos (coxim) e vermiculita. Foram analisadas também as combinações de brita e argila expandida, brita e seixo, argila expandida e seixo, na proporção 1:1 (v/v); brita, argila expandida e seixo na proporção 1:1:1 (v/v/v); e brita, argila expandida, seixo e vermiculita na proporção 1:1:1:1 (v/v/v/v). Após seis meses de instalação do experimento foram avaliadas as seguintes variáveis: altura das plantas, diâmetro dos pseudobulbos, número de folhas, produção de massa de matéria seca total (MST), da parte aérea (MSPA) e do sistema radicular (MSR). Utilizou-se o delineamento experimental em blocos casualizados, composto por nove tratamentos e oito repetições. Não houve diferença entre os tratamentos para: altura de planta, número de folhas, diâmetro dos pseudobulbos e MSR. Para a MSPA e MST observou-se diferença entre os substratos, com destaque para o tratamento argila expandida + brita de gnaisse. Conclui-se que todos os substratos utilizados podem ser utilizados no cultivo de C. cardiochilum, destacando-se o substrato argila expandida + brita de gnaisse na proporção de 1:1 (v/v).

This study aimed to evaluate the effect of different substrates in the cultivation of the species Cyrtopodium cardiochilum (Orchidaceae). Plants were grown in plastic pots in a greenhouse with 60% shading, obtained through a polypropylene mesh black type "shading". The treatments consisted of gneiss gravel (grain size ranging from 8-15 mm), expanded clay (15-22 mm diameter), pebbles (8-15 mm), coconut cubes (cushion) and vermiculite. The combinations of gravel and expanded clay, gravel and pebble, expanded clay and pebble, in a 1:1 (v/v); gravel, expanded clay and pebble in the proportion 1:1:1 (v/ v/v); and gravel, expanded clay, vermiculite and pebble in the proportion 1:1:1:1 (v/v/v/v) were also tested. After six months of trial installation the variables were evaluated: plant height, diameter of the pseudobulbs, number of leaves, mass production of total dry matter (TDM) and shoot (DMS) and root system (DMRS) dry matter. It was used the experimental randomized block design, consisting of nine treatments and eight repetitions. There was no difference between treatments for: plant height, leaf number, diameter of the pseudobulbs and DMRS. For the DMS and TDM was observed difference between the substrates, especially for the treatment expanded clay + gravel gneiss. It concluded that all tested substrates may be used in cultivation of C. cardiochilum, high lighting the substrate expanded clay + gneiss gravel in the ratio 1:1 (v/v).

Novas opções de substratos para o cultivo de Cyrtopodium cardiochilum (Orchidaceae) / Effect of substrates in the cultivation of Cyrtopodium cardiochilum (Orchidaceae)

O presente trabalho teve como objetivo avaliar diferentes substratos no cultivo da espécie Cyrtopodium cardiochilum (Orchidaceae). As plantas foram cultivadas em vasos de polietileno, em casa de vegetação com tela de sombreamento de polipropileno de 60% de retenção de luminosidade. Os tratamentos constituíram-se de brita de gnaisse (granulometria variando de 8-15 mm), argila expandida (15-22 mm de diâmetro), seixo rolado (8-15 mm), casca de coco em cubos (coxim) e vermiculita. Foram analisadas também as combinações de brita e argila expandida, brita e seixo, argila expandida e seixo, na proporção 1:1 (v/v); brita, argila expandida e seixo na proporção 1:1:1 (v/v/v); e brita, argila expandida, seixo e vermiculita na proporção 1:1:1:1 (v/v/v/v). Após seis meses de instalação do experimento foram avaliadas as seguintes variáveis: altura das plantas, diâmetro dos pseudobulbos, número de folhas, produção de massa de matéria seca total (MST), da parte aérea (MSPA) e do sistema radicular (MSR). Utilizou-se o delineamento experimental em blocos casualizados, composto por nove tratamentos e oito repetições. Não houve diferença entre os tratamentos para: altura de planta, número de folhas, diâmetro dos pseudobulbos e MSR. Para a MSPA e MST observou-se diferença entre os substratos, com destaque para o tratamento argila expandida + brita de gnaisse. Conclui-se que todos os substratos utilizados podem ser utilizados no cultivo de C. cardiochilum, destacando-se o substrato argila expandida + brita de gnaisse na proporção de 1:1 (v/v).(AU)

This study aimed to evaluate the effect of different substrates in the cultivation of the species Cyrtopodium cardiochilum (Orchidaceae). Plants were grown in plastic pots in a greenhouse with 60% shading, obtained through a polypropylene mesh black type "shading". The treatments consisted of gneiss gravel (grain size ranging from 8-15 mm), expanded clay (15-22 mm diameter), pebbles (8-15 mm), coconut cubes (cushion) and vermiculite. The combinations of gravel and expanded clay, gravel and pebble, expanded clay and pebble, in a 1:1 (v/v); gravel, expanded clay and pebble in the proportion 1:1:1 (v/ v/v); and gravel, expanded clay, vermiculite and pebble in the proportion 1:1:1:1 (v/v/v/v) were also tested. After six months of trial installation the variables were evaluated: plant height, diameter of the pseudobulbs, number of leaves, mass production of total dry matter (TDM) and shoot (DMS) and root system (DMRS) dry matter. It was used the experimental randomized block design, consisting of nine treatments and eight repetitions. There was no difference between treatments for: plant height, leaf number, diameter of the pseudobulbs and DMRS. For the DMS and TDM was observed difference between the substrates, especially for the treatment expanded clay + gravel gneiss. It concluded that all tested substrates may be used in cultivation of C. cardiochilum, high lighting the substrate expanded clay + gneiss gravel in the ratio 1:1 (v/v).(AU)

Bioprospecting and selection of growth-promoting bacteria for Cymbidium sp. orchids

Inoculants containing bacteria which promote growth in plants can increase productivity and both the economic and the environmental cost in plant crop systems. Similarly, in the flower and ornamental plant sector, the use of diazotrophic bacteria is a promising approach for improving orchid propagation from tissue culture to the ex vitro environment. We isolated diazotrophic bacteria from the roots and leaves of Cymbidium sp. The isolates were used to inoculate Cymbidium sp. plantlets during acclimatization in the nursery. After 150 days, plants were collected and their morphological and nutritional characteristics assessed. Eight bacterial strains were isolated containing traits that promote plant growth: Bacillus thuringiensis, Burkholderia cepacia, Burkholderia gladioli, Herbaspirillum frisingense, Pseudomonas stutzeri, Rhizobium cellulosilyticum, Rhizobium radiobacter, and Stenotrophomonas maltophilia. The isolated Herbaspirillum frisingense and Stenotrophomonas maltophilia increased 26 % and 29 % in dry matter in Cymbidium sp. plants, respectively, compared to the control. In addition, H. frisingense led to higher contents of N and P, by 68 % and 28 %, respectively, than those found in the control plants. These isolates, therefore, have potential for application as biostimulants and biofertilizers to promote growth and development of Cymbidium sp. during acclimatization.

Bioprospecting and selection of growth-promoting bacteria for Cymbidium sp. orchids

Inoculants containing bacteria which promote growth in plants can increase productivity and both the economic and the environmental cost in plant crop systems. Similarly, in the flower and ornamental plant sector, the use of diazotrophic bacteria is a promising approach for improving orchid propagation from tissue culture to the ex vitro environment. We isolated diazotrophic bacteria from the roots and leaves of Cymbidium sp. The isolates were used to inoculate Cymbidium sp. plantlets during acclimatization in the nursery. After 150 days, plants were collected and their morphological and nutritional characteristics assessed. Eight bacterial strains were isolated containing traits that promote plant growth: Bacillus thuringiensis, Burkholderia cepacia, Burkholderia gladioli, Herbaspirillum frisingense, Pseudomonas stutzeri, Rhizobium cellulosilyticum, Rhizobium radiobacter, and Stenotrophomonas maltophilia. The isolated Herbaspirillum frisingense and Stenotrophomonas maltophilia increased 26 % and 29 % in dry matter in Cymbidium sp. plants, respectively, compared to the control. In addition, H. frisingense led to higher contents of N and P, by 68 % and 28 %, respectively, than those found in the control plants. These isolates, therefore, have potential for application as biostimulants and biofertilizers to promote growth and development of Cymbidium sp. during acclimatization.(AU)

Carbohydrates on the growth of Cattleya schilleriana Reichb.f. seedlings (Orchidaceae) / Carboidratos no crescimento de plântulas de Cattleya schilleriana Reichb.f. (Orchidaceae)

The aim of the present study was to evaluate the effects of carbohydrate supplementation on the propagation of the orchid Cattleya schilleriana. The 120-d-old seedlings were subcultured in fructose-, glucose-, or sucrose-supplemented (0, 15, 30, and 45g L-1) ½ MS culture medium (half-strength macronutrient concentrations), using a completely random design with four repetitions per treatment. After 120d of treatment, root number and length, leaf number and length, and fresh weight were evaluated, and seedling survival was evaluated after 75d of acclimatization in a greenhouse. The in vitro growth data were submitted to regression analysis, whereas the percentage survival data were analyzed using ANOVA and Tukeys test. Both in vitro growth and ex vitro survival were lowest when the plantlets were grown in the absence of a carbohydrate source and highest (>90% survival) when supplemented with glucose. According to our findings, the addition of either glucose (30g L-1) or sucrose (30g L-1) is recommended for mass propagation of C. schilleriana.(AU)

O objetivo deste estudo foi avaliar a adição de doses de carboidratos em meio de cultura ½ MS para a propagação da orquídea Cattleya schilleriana. Plântulas com 120 dias após semeadura foram recultivadas em 12 tratamentos, onde foram investigadas a adição de diferentes doses de frutose, glicose e sacarose (0, 15, 30 e 45g L-1). O delineamento utilizado foi inteiramente casualizado com quatro repetições por tratamento. Após 120 dias nos tratamentos, foram mensurados o número de raízes, comprimento da maior raiz, número de folhas, comprimento da maior folha e massa fresca total. Depois as plântulas foram aclimatizadas em casa de vegetação e avaliada a taxa de sobrevivência após 75 dias. Os dados obtidos foram submetidos ao teste de Tukey a 5% de probabilidade e ajustadas curvas de regressão. A ausência de carboidrato reduziu o crescimento das plântulas entre todas as características avaliadas in vitro e ex vitro. As doses de glicose promoveram maior eficiência para o crescimento in vitro e sobrevivência acima de 90% após a aclimatização. Assim, a adição de glicose (30g L-1) ou sacarose (30g L-1) são recomendadas para a propagação massal de C. schilleriana.(AU)

Anatomy and micromorphometric analysis of leaf Catasetum x apolloi Benelli & Grade with addition of potassium silicate under different light sources / Anatomia e análise micromorfométrica foliar de Catasetum x apolloi Benelli & Grade com adição de silicato de potássio em diferentes fontes de luz

The aim of this study was to compare vitroplants Catasetum x apolloi grown under natural light and artificial light and different concentrations of potassium silicate, providing data on the anatomical differentiation that aids the acclimatization process of this species. Plants from in vitro seeding were used; 5 protocorms of approximately 0.5 cm were inoculated into vials with a capacity of 500 mL containing 100 mL of alternative culture medium plus potassium silicate (0.0, 0.5; 1.0 mL L–1), pH adjusted to 5.5 ± 0.5 and gelated with 4GL–1 agar before the autoclaving process. Cultures were maintained under natural light (TNE) and artificial light (TAE) for 90 days, and micromorphometric analysis was performed for polar and equatorial diameter, density and stomatal index, blade thickness in the central rib, and secondary veins. Applications in K2SiO4 alternative medium provided the following: elongation of the hypodermis, thicker mesophyll, and more prominent midrib; elipptical guard cells; formation of epistomatal chamber; and lower stomatal density and stomatal with lower equatorial and polar diameters. The conditions that favored the acclimatization were lower light intensities and lower potassium silicate doses.(AU)

O objetivo desse trabalho foi comparar vitroplantas de Catasetum x apolloi cultivadas sob luz natural e luz artificial e diferentes concentrações de silicato de potássio, fornecendo dados sobre diferenciação anatômica que auxiliem no processo de aclimatação dessa espécie. Utilizou-se plantas provenientes da semeadura in vitro, 5 protocormos de aproximadamente 0,5 cm foram inoculados em frascos com capacidade para 500 mL contendo 100 mL de meio de cultura alternativo, acrescido de silicato de potássio (0,0; 0,5; 1,0 mL L–1), pH ajustado para 5,5 ±0,5 e gelificado com 4gL–1 de ágar antes do processo de autoclavagem. As culturas foram mantidas sob luz natural (TAA) e luz artificial (TAN) por 90 dias, e feitas análises micromorfométricas (diâmetro polar e equatorial, densidade e índice estomático, espessura do limbo na nervura central e nervuras secundárias). As aplicações de K2SiO4 em meio alternativo, propiciaram: alongamento da hipoderme; mesofilo mais espesso e nervura central mais proeminente; células guardas elípticas; formação de câmaras supraestomáticas; menor densidade estomática e estômatos com menores diâmetros equatorial e polar. As condições que podem favorecer a aclimatação são menores intensidades de luz e menores doses de silicato de potássio.(AU)

Hydroponic cultivation of Oncidium baueri / Cultivo hidropônico de Oncidium baueri

In Brazil, orchid cultivation has been increasing steadily over the last few years and contributing significantly to the economy. It has been reported that several vegetable crops and ornamentals have been successfully grown by soilless cultivation. The orchid Oncidium baueri Lindl. is grown on pot substrates. Nevertheless, hydroponics is an excellent alternative, especially for the production of cut flowers and bare root plants. The objective of this study was to evaluate the development of Oncidium baueri on two soilless systems: (a) pots containing Amafibra® coconut fiber, carbonized rice husk, and pine bark (1:1:1) irrigated with nutrient solution every 15 d; and (b) a nutrient film technique (NFT) hydroponic system irrigated with nutrient solution daily. Shoot height, pseudobulb diameter, and number of sprouts were evaluated monthly. The number of flowering plants, number of flowers, dry mass of shoots, and dry mass of roots were evaluated 11 months after onset of experiment. The pot cultivation system yielded more flowers and higher values for all vegetative parameters than the NFT hydroponic system.

No Brasil, o cultivo de orquídeas vem crescendo continuamente ao longo dos últimos anos, contribuindo de forma significativa na economia do país. O cultivo sem solo tem sido relatado com sucesso para diversas espécies hortícolas. Para a orquídea Oncidium baueri Lindl., além do uso de substratos em vaso, a hidroponia pode representar uma alternativa interessante. Assim, o objetivo deste trabalho foi avaliar o desenvolvimento de Oncidium baueri em dois sistemas de cultivo sem solo: em vasos contendo fibra de coco Amafibra®+casca de arroz carbonizada+casca de pinus (1:1:1) e irrigadas com solução nutritiva a cada quinze dias e irrigadas diariamente com solução nutritiva em sistema hidropônico do tipo NFT. O delineamento experimental foi em blocos completos casualizados, com seis repetições, sendo cada parcela composta por seis plantas. Foram avaliados mensalmente a altura de parte aérea, o diâmetro do pseudobulbo, o número de brotações e, após 11 meses, o número de plantas florescidas e de flores emitidas por planta, a massa seca da parte aérea e das raízes. O sistema de cultivo em vaso contendo substrato propiciou o florescimento das plantas ao final do experimento e os melhores resultados para todas as variáveis vegetativas avaliadas, propiciando maior crescimento e desenvolvimento de Oncidium baueri do que o cultivo hidropônico do tipo NFT.

Light sources and culture media in the in vitro growth of the Brazilian orchid Microlaelia lundii / Fontes de luz e meios de cultura no crescimento in vitro da orquidea brasileira Microlaelia lundii

The Brazilian micro-orchid Microlaelia lundii enchants by its beautiful blooms in winter, but its cultivation is still a challenge, requiring specific care. The objectiv of this work was to evaluate the influence of light sources and culture media on in vitro growth and ex vitro survival of this micro-orchid. M. lundii seedlings were transferred to flasks containing the culture medium ½ MS and Simplified Medium, consisting of 5 mL L-1 of Biofert Plus® NPK fertilizer (09-08-09) and 60 g L-1 of Nanica banana pulp. These flasks were placed in a growth chamber composed of seven environments, characterized by types of lighting: L1) LEDtube 4000K; L2) LEDtube 6500K; L3) L1 + L2; L4) L1 + L1; L5) red LED; L6) blue LED; L7) fluorescent lamp (control). After 200 days of cultivation, biometric growth parameters and leaves chlorophyll content were evaluated together with the percentage of seedling survival when acclimatized. At the end of the experiment, an analysis of individual variances and a combined analysis of the environments were carried out. The simplified medium led to higher seedlings, especially for light source L6. Light sources L1, L2, L3 and L4 promoted an increase in the seedlings root system in the simplified medium. As for the chlorophyll content, L4 and L7 showed higher contents of chlorophyll a and b. The simplified medium led practically to 100% of seedling survival, regardless of the light source used. Results shown that the simplified medium under light sources L1, L2, L3 and L4 is recommendedfor the in vitro propagation of M. lundii.(AU)

A micro-orquídea brasileira Microlaelia lundii encanta pelas belas floradas no inverno, no entanto o seu cultivo ainda é um desafio, requerendo cuidados específicos. Assim, objetivou-se avaliar a influência de fontes de luz e meios de cultura no crescimento in vitro e na sobrevivência ex vitro dessa micro-orquídea. Plântulas de M. lundii foram transferidas para frascos contendo os meios de cultura: ½ MS e Meio Simplificado, composto por 5 mL L-1 do fertilizante Biofert Plus® NPK (08-09-09) e 60 g L-1 de polpa de banana Nanica. Estes frascos foram acondicionados em câmara de cultivo composta por sete ambientes, caracterizados pelo tipo de iluminação: L1) LEDtube 4000K; L2) LEDtube 6500K; L3) L1 + L2; L4) L1 + L1; L5) LED vermelho; L6) LED azul; L7) Lâmpada fluorescente (controle). Após 200 dias de cultivo, avaliou-se o crescimento da parte aérea e do sistema radicular das plantas e o teor de clorofila nas folhas. Também, avaliou-se a porcentagem de sobrevivência das plantas, quando aclimatizadas. O meio simplificado propiciou plântulas mais altas, com destaque para a fonte de luz L6. As fontes de luz L1, L2, L3 e L4 no meio simplificado proporcionaram aumento do sistema radicular das plantas. Quanto ao teor de clorofila, L4 e L7 apresentaram maiores teores de clorofila a e b. O meio simplificado propiciou, praticamente, 100% de sobrevivência das plantas, independente da fonte de luz utilizada. Conclui-se que o meio simplificado nas fontes de luz L1, L2, L3 e L4 é recomendado para a propagação in vitro de M. lundii.(AU)

Hydroponic cultivation of Oncidium baueri / Cultivo hidropônico de Oncidium baueri

In Brazil, orchid cultivation has been increasing steadily over the last few years and contributing significantly to the economy. It has been reported that several vegetable crops and ornamentals have been successfully grown by soilless cultivation. The orchid Oncidium baueri Lindl. is grown on pot substrates. Nevertheless, hydroponics is an excellent alternative, especially for the production of cut flowers and bare root plants. The objective of this study was to evaluate the development of Oncidium baueri on two soilless systems: (a) pots containing Amafibra® coconut fiber, carbonized rice husk, and pine bark (1:1:1) irrigated with nutrient solution every 15 d; and (b) a nutrient film technique (NFT) hydroponic system irrigated with nutrient solution daily. Shoot height, pseudobulb diameter, and number of sprouts were evaluated monthly. The number of flowering plants, number of flowers, dry mass of shoots, and dry mass of roots were evaluated 11 months after onset of experiment. The pot cultivation system yielded more flowers and higher values for all vegetative parameters than the NFT hydroponic system.(AU)

No Brasil, o cultivo de orquídeas vem crescendo continuamente ao longo dos últimos anos, contribuindo de forma significativa na economia do país. O cultivo sem solo tem sido relatado com sucesso para diversas espécies hortícolas. Para a orquídea Oncidium baueri Lindl., além do uso de substratos em vaso, a hidroponia pode representar uma alternativa interessante. Assim, o objetivo deste trabalho foi avaliar o desenvolvimento de Oncidium baueri em dois sistemas de cultivo sem solo: em vasos contendo fibra de coco Amafibra®+casca de arroz carbonizada+casca de pinus (1:1:1) e irrigadas com solução nutritiva a cada quinze dias e irrigadas diariamente com solução nutritiva em sistema hidropônico do tipo NFT. O delineamento experimental foi em blocos completos casualizados, com seis repetições, sendo cada parcela composta por seis plantas. Foram avaliados mensalmente a altura de parte aérea, o diâmetro do pseudobulbo, o número de brotações e, após 11 meses, o número de plantas florescidas e de flores emitidas por planta, a massa seca da parte aérea e das raízes. O sistema de cultivo em vaso contendo substrato propiciou o florescimento das plantas ao final do experimento e os melhores resultados para todas as variáveis vegetativas avaliadas, propiciando maior crescimento e desenvolvimento de Oncidium baueri do que o cultivo hidropônico do tipo NFT.(AU)

DNA barcode regions for differentiating Cattleya walkeriana and C. loddigesii / Regiões de DNA barcode para diferenciar Cattleya walkeriana e C. loddigesii

Growers appreciate Cattleya walkeriana and C. loddigesii due to striking shape and rarity. Thus, this study aimed to evaluate the feasibility of DNA barcode regions, namely ITS1, ITS2 and rpoC1, to discriminate between C. walkeriana and C. loddigesii species. DNA barcode regions were successfully amplified using primers designed to amplify plants. We also included sequences from public databases in order to test if these regions were able to discriminate C. walkeriana and C. loddigesii from other Cattleya species. These regions, and their combinations, demonstrated that the ITS1+ITS2 had the highest average interspecific distance (11.1%), followed by rpoC1 (1.06%). For species discrimination, ITS1+ITS2 provided the best results. The combined data set of ITS1+ITS2+rpoC1 also discriminated both species, but did not result in higher rates of discrimination. These results indicate that ITS region is the best option for molecular identification of these two species and from some other species of this genus.(AU) 

As espécies Cattleya walkeriana e C. loddigesii são apreciadas pelos colecionadores devido às suas impressionantes forma e raridade. Este estudo teve como objetivo avaliar a viabilidade das regiões DNA barcode, ou seja, ITS1, ITS2 e rpoC1, para discriminar as espécies C. walkeriana e C. loddigesii. Regiões DNA barcode foram amplificadas com êxito utilizando os iniciadores desenhados para plantas. Nós também incluímos sequências de bases públicas de dados, a fim de testar se estas regiões foram capazes de discriminar C. walkeriana e C. loddigesii de outras espécies de Cattleya. Estas regiões e suas combinações demonstraram que o ITS1 + ITS2 teve a maior distância média interespecífica (11,1%), seguido por rpoC1 (1,06%). Para a discriminação das espécies, ITS1 + ITS2 proporcionaram os melhores resultados. Os dados combinados dos ITS1 + ITS2 + rpoC1 também discriminaram ambas as espécies, mas não resultaram em maiores taxas de discriminação. Estes resultados indicam que a região ITS é a melhor opção para a identificação molecular destas duas espécies e a partir de algumas outras espécies deste gênero.(AU)

Vascular epiphytes in seasonal semideciduous forest in the State of Espírito Santo and the similarity with other seasonal forests in Eastern Brazil / Epífitas vasculares em floresta estacional semidecidual no estado do Espírito Santo e similaridade com outras florestas estacionais no Leste do Brasil

In this study, we evaluated the floristic composition of vascular epiphytes in seasonal semideciduous forest fragments of the Itapemirim River basin, Southern State of Espírito Santo, in order to verify its similarity to other semideciduous forests studied in Brazil. Excursions were conducted every fortnight between June 2008 and May 2009, and epiphytes were collected and recorded (55 species, 34 genera and six families). Orchidaceae (21 species) was the richest family, whereas the genera presenting the greatest richness were Tillandsia (seven), Rhipsalis (four), Aechmea, Epidendrum and Peperomia (three species each). The category the most representative was characteristics holoepiphytes (84%). The riparian forests were the most important environments for the epiphytic flora. Similarity analysis and PCA supported four groups, where the study area appears disjointed from the others, supporting the hypothesis that geographical proximity, elevation and climate have a strong effect on the floristic composition, conditioning the formation of distinct floras. Detailed surveys on the floristic composition and structure of this community are important for the elaboration of studies on coherent environmental impacts, since epiphytes are typical in tropical rainforests, and they are an important floristic, structural and functional component of these ecosystems.(AU)

Neste estudo, avaliamos a composição florística de epífitos vasculares em remanescentes de Floresta Estacional Semidecidual na bacia hidrográfica do rio Itapemirim, sul do estado do Espírito Santo, com o intuito de analisar sua similaridade com outras florestas semideciduais estudadas no Brasil. Excursões quinzenais foram realizadas entre junho de 2008 e maio de 2009, e os epífitos foram coletados e registrados (55 espécies, 34 gêneros e seis famílias). Orchidaceae, com 21 espécies, foi a mais rica, enquanto os gêneros com a maior riqueza foram Tillandsia (7 spp.), Rhipsalis (4), Aechmea, Epidendrum e Peperomia, com três espécies cada. A categoria ecológica mais representativa foi holoepífita característica com 84% das espécies. O ambiente mais importante para a flora epifítica foram as matas ciliares. Análise de similaridade e PCA sustentaram quatro grupos, em que a área estudada aparece disjunta das demais, corroborando a hipótese de que a proximidade geográfica, a altitude e o clima têm forte efeito sobre a composição florística, condicionando a formação de floras distintas. Estudos detalhados sobre a composição florística e a estrutura dessa comunidade são importantes para a elaboração de estudos de impactos ambientais coerentes, porque epífitas são típicas de florestas tropicais, constituindo importante componente florístico, estrutural e funcional desses ecossistemas.(AU)

In vitro development of Encyclea cordigera in different concentrations of honey / Desenvolvimento in vitro de Encyclea cordigera em diferentes concentrações de mel

The objective of this paper was to evaluate the effects of different honey concentrations in culture media, in comparison to sucrose medium, for the in vitro development of the epiphytic Encyclea cordigera orchid, in order to improve the process of propagation of the species. The in vitro germination was prepared on a reduced Murashige & Skoog (MS) medium. After 90 days, the seedlings were divided into different treatments, where they remained for another 90 days. Six treatments were set up (30g L-1 of sucrose; 15, 30, 45, and 60g L-1 of honey; and absence of any carbohydrates) in a completely randomized design. Plants were removed from the vials 270 days after the start of the experiment, and the number of roots, length of the largest leaf, length of the longest root, number of leaves, and fresh and dry masses were evaluated. Data concerning the number of leaves and roots were (x+1)1/2 transformed and subjected to an analysis of variance (ANOVA); the means were compared by a Tukey's test set at 5% probability. Medium containing 60g L-1 of honey proved to be superior to the sucrose medium traditionally used, favoring the in vitro growth and development of Encyclea cordigera. This medium can therefore be recommended for the propagation of this species, which is usually cultivated as an ornamental plant.(AU)

Este trabalho foi realizado com objetivo de avaliar a influência da concentração de mel no meio de cultura, comparando-o com a sacarose, para o desenvolvimento in vitro da orquídea epífita Encyclea cordigera, a fim de aperfeiçoar o processo de propagação dessa espécie. A semeadura in vitro procedeu-se em meio de cultura Murashige & Skoog (MS) reduzido e, após 90 dias, as plântulas foram distribuídas entre os tratamentos, em que permaneceram por mais 90 dias. Seis tratamentos (30g L-1 de sacarose, 15, 30, 45 e 60g L-1 de mel e ausência de carboidrato) foram utilizados, em delineamento inteiramente casualizado. Após 270 dias do início do experimento, as plantas foram retiradas dos frascos, sendo avaliado o número de raízes, comprimento da maior folha, comprimento da maior raiz, número de folhas, massa fresca e massa seca. Os dados de número de folhas e de raízes foram transformados (x+1)1/2 e submetidos à análise de variância (ANAVA); as médias foram comparadas pelo teste de Tukey a 5% de probabilidade. O meio de cultura suplementado com 60g L-1 de mel favoreceu o crescimento e desenvolvimento in vitro de Encyclea cordigera, sendo superior ao uso de sacarose, que é tradicionalmente usado, podendo ser recomendado para propagação dessa orquídea, que apresenta potencial ornamental.(AU)

Growth regulators and substrates for Oncidium baueri Lindl. micropropagation / Reguladores de crescimento e substratos para a micropropagação de Oncidium baueri Lindl

An adequate concentration of growth regulators as well as the replacement of agar by an alternative medium may be promising from practical and financial points of view to produce orchid plants by micropropagation. The objective of this work was to evaluate different concentrations of growth regulator and alternative substrates for agar replacement in culture medium for in vitro multiplication and rooting of Oncidium baueri. In the explant multiplication phase, two experimental factors were evaluated- various concentrations of 6-benzylaminopurine (BAP) (0.0, 1.0, 2.0, and 3.0 mg L-1) and substrates (agar, vermiculite, and coconut fiber) added to MS medium. In the rooting phase, different concentrations of indole butyric acid (IBA) (0.0, 0.5, 1.0, and 1.5 mg L-1) were added to culture medium containing the same substrate. Six months after the experiments were initiated, the survival percentage, number of leaves, shoots, and roots and length of the aerial part and the major root were evaluated. The results suggested that addition of 1.0 mg L-1 BAP is necessary for the O. baueri in vitro multiplication phase, but IBA is not necessary in the rooting phase. For the substrate, vermiculite is not indicated as an agar replacement. In contrast, coconut fiber can be used in both multiplication and rooting phases of Oncidium baueri in vitro culture.

Na micropropagação de orquídeas, a concentração adequada de reguladores de crescimento, bem como a substituição do ágar por substratos alternativos no meio de cultura podem ser promissoras do ponto de vista da praticidade e da economia financeira para a obtenção de mudas. Assim, o objetivo do trabalho foi avaliar diferentes concentrações de reguladores de crescimento e substratos alternativos em substituição ao ágar no meio de cultura para a multiplicação e o enraizamento in vitro de Oncidium baueri. Na fase de multiplicação dos explantes, foram avaliados dois fatores: concentração de benzilaminopurina (BAP) (0,0; 1,0; 2,0 e 3,0 mg L-1) e substrato (ágar, vermiculita e fibra de coco) no meio de cultura MS e, no período de enraizamento, foram testadas concentrações de ácido indolbutírico (AIB) (0,0; 0,5; 1,0 e 1,5 mg L-1) nos mesmos substratos e meio de cultura. Após seis meses da instalação dos experimentos, foram avaliadas as variáveis: porcentagem de sobrevivência; número médio de folhas, brotações e raízes; comprimento da parte aérea e da maior raiz. Para a fase de multiplicação in vitro é necessário a utilização de BAP na concentração de 1,0 mg L-1; porém, para a fase de enraizamento a utilização do regulador de crescimento AIB é dispensável. Quanto aos substratos, a vermiculita não é indicada para substituir o ágar; entretanto, a fibra de coco pode ser usada, tanto na fase de multiplicação, quanto no enraizamento in vitro de Oncidium baueri.