Outbreak of toxoplasmosis associated with muscular lesions in finishing pigs caused by an atypical Toxoplasma gondii genotype / Surto de toxoplasmose associado a lesões musculares em suínos de terminação causado por um genótipo atípico de T. gondii

Toxoplasma gondii infections are usually asymptomatic in pigs, and an acute clinical disease is rare in this host. This study aimed to determine the pathological and molecular aspects of an outbreak of fatal systemic toxoplasmosis in finishing pigs in Brazil. The outbreak occurred on a commercial finishing pig farm in the state of Santa Catarina in southern Brazil. The farm had 1500 pigs and 3.8% of mortality rate during the outbreak. The pigs had fever, anorexia, apathy, and locomotor deficits. Seven pigs were necropsied. Gross findings included multifocal to coalescent pale areas in skeletal muscles, lymphadenomegaly, hepatosplenomegaly, and non-colapsed lungs. The histological findings included granulomatous lymphadenitis, hepatitis and splenitis, necrotizing myositis, and lymphoplasmacytic interstitial pneumonia. Lung and liver lesions were occasionally accompanied by T. gondii parasitic structures. Positive immunolabeling for T. gondii tachyzoites and encysted bradyzoites was detected in all examined pigs. PCR-RFLP (11 markers) and microsatellite analysis (15 markers) identified the non-archetypal genotype #278 in pigs. This is the first report of systemic toxoplasmosis in pigs with muscle lesions and additionally shows the diversity of disease-causing T. gondii genotypes circulating in animals in Brazil.(AU)

As infecções por Toxoplasma gondii são geralmente assintomáticas em suínos, e uma doença clínica aguda é rara nessa espécie. Este estudo teve como objetivo determinar os aspectos patológicos e moleculares de um surto de toxoplasmose sistêmica fatal em suínos em terminação no Brasil. O surto ocorreu em uma granja comercial de suínos em terminação no estado de Santa Catarina, no sul do Brasil. A granja tinha 1500 suínos e a taxa de mortalidade durante o surto foi de 3,8%. Os suínos apresentaram febre, anorexia, apatia e déficits locomotores. Sete suínos foram necropsiados. Os achados macroscópicos incluíram áreas pálidas multifocais a coalescentes nos músculos esqueléticos, linfadenomegalia, hepatoesplenomegalia e pulmões não colapsados. Os achados histológicos incluíram linfadenite, hepatite, esplenite granulomatosa e miosite necrosante, assim como pneumonia intersticial linfoplasmocítica. Lesões pulmonares e hepáticas foram ocasionalmente acompanhadas por estruturas parasitárias de T. gondii. A imunomarcação positiva para taquizoítos e bradizoítos encistados de T. gondii foi observada em todos os suínos examinados. PCR-RFLP (11 marcadores) e análise de microssatélites (15 marcadores) identificaram o genótipo não arquetípico #278 em suínos. Este é o primeiro relato de toxoplasmose sistêmica em suínos com lesões musculares e, adicionalmente, demonstra a diversidade de genótipos de T. gondii causadores de doenças circulantes em animais no Brasil.(AU)

Detection of Sarcocystis spp. and Toxoplasma gondii in swine and detection of DNA of these protozoa in tissues and sausages / Soroprevalência de Sarcocystis spp. e Toxoplasma gondii em suínos e detecção do DNA desses protozoários em tecidos e embutidos

Abstract The seroprevalence of Sarcocystis spp. and Toxoplasma gondii was researched in swine raised in Santa Maria, RS, Brazil. Serum samples from 84 pigs from 31 farms were tested using indirect immunofluorescence assay (IFA) for both agents. Additionally, 53 samples of pork sausages and tissues destined for human consumption, including: salami, sausage, black pudding, heart, tongue, brain, and rib muscle, were submitted to PCR to detect DNA for each agent. The frequency of anti-Sarcocystis spp. antibodies was 36.9% (31/84), with titers ranging from 32 to 1024, and 25% (21/84) for anti-T. gondii antibodies, with titers ranging from 64 to 2048. Sarcocystis spp. and T. gondii DNA were detected in 67.9% (36/53) and 13.2% (7/53) of samples, respectively. The presence of antibodies and the detection of DNA from Sarcocystis spp., and T. gondii suggests that the pigs were infected and may serve as an important reservoir for both parasites. The infection by these protozoa in the swine population is relevant to public health due to their zoonotic potential.

Resumo A soroprevalência de Sarcocystis spp. e Toxoplasma gondii foi pesquisada em suínos criados em Santa Maria, RS, Brasil. Amostras de soro de 84 suínos de 31 fazendas foram testadas pela reação deimunofluorescência indireta (IFA) para ambos os agentes. Adicionalmente, 53 amostras de embutidos suínos e tecidos cárneos destinados ao consumo humano, incluindo: salame, linguiça, morcela, coração, língua, cérebro e músculo da costela foram submetidas à PCR para detecção de DNA para cada agente. A frequência de anticorpos anti-Sarcocystis spp. foi de 36,9% (31/84), com títulos variando de 32 a 1.024; e 25% (21/84) para anticorpos anti-T. gondii, com títulos variando de 64 a 2048. A presença de DNA de Sarcocystis spp. e T. gondii foi detectada em 67,9% (36/53) e 13,2% (7/53) das amostras avaliadas, respectivamente. A detecção de anticorpos e DNA de Sarcocystis spp. e T. gondii sugere que os suínos foram infectados e podem servir como um importante reservatório de ambos os parasitas. A circulação desses agentes na população suína é relevante para a saúde pública devido ao seu potencial zoonótico.

Molecular characterization of Toxoplasma gondii and Sarcocystis spp. in raw kibbeh and other meat samples commercialized in Botucatu, Southeastern Brazil / Caracterização molecular de Toxoplasma gondii e Sarcocystis spp. em amostras de quibe cru e de outras carnes comercializadas em Botucatu, Região Sudeste do Brasil

Abstract Toxoplasmosis occurs worldwide causing economic losses to the animal production and problems to the public health. The study aimed to detect Toxoplasma gondii and Sarcocystis spp.in 141 meat products from commercial meat cuts of pork, beef, and kibbeh sold in commercial markets from Botucatu, SP, Brazil. Samples were bioassayed in mice to isolate the parasite, and the parasite DNA detected by PCR targeting the 529 base pairs repeat element region (PCR-529-bp). All samples resulted negative on bioassay, whereas PCR positive for 9 (6,38%), distributed as 5/48 beef, 3/49 pork, and 1/44 kibbeh. PCR-positive were investigated for the the parasite genotype using multiplex-, nested-, and RFLP-PCR for 11 markers (SAG1, 5'-3'SAG2, alt.SAG2, SAG3, B-TUB, GRA6, L358, c22-8, c29-6, PK1, Apico). Complete genotype was determined on just one PCR-positive sample that matched MAS, TgCkBr89 and TgCkBr147 isolates already identified. In addition, nested- and RFLP-PCR targeting 18S rRNA was run for all PCR-positive samples and, the products, sequenced and aligned to the GenBank at NCBI website. Four samples showed 100% homology with T. gondii (GenBank #L37415.1), three with Sarcocystis hominis (GenBank #AF006471.1), two Sarcocystis cruzi (GenBank #AF176934.1), and one Sarcocystis hirsuta (GenBank #AF006469.1), indicating the circulation of T. gondii and Sarcocystis spp.

Resumo A toxoplasmose está mundialmente distribuída e causa perdas na produção animal e problemas de saúde pública. Objetivou-se detectar Toxoplasma gondii e Sarcocystis spp. em 141 produtos cárneos de origem suína (49), bovina (48) e de quibe cru (44), comercializados em mercados de Botucatu, SP, Brazil. Realizou-se bioensaio das amostras em camundongos para isolamento do parasita, e detecção do DNA pela reação em cadeia pela polimerase, tendo como alvo a região do elemento repetitivo de 529 pares de bases (PCR-529-bp). Todas as amostras foram negativas ao bioensaio e 9 (6,38%) positivas à PCR, sendo 5/48 bovinas, 3/49 suínas e 1/44 quibe. Determinou-se a genotipagem das amostras positivas pela multiplex-, nested- e RFLP-PCR com 11 marcadores (SAG1, 5'-3'SAG2, alt.SAG2, SAG3, B-TUB, GRA6, L358, c22-8, c29-6, PK1, Apico). Obteve-se genótipo completo em uma amostra, semelhante a outros já identificados (MAS, TgCkBr89 e TgCkBr147). Nested- e RFLP-PCR do gene 18S rRNA das amostras positivas à PCR foram realizadas, e os produtos da nested-PCR, sequenciados e alinhados com dados do GenBank no NCBI. Quatro apresentaram 100% de homologia com T. gondii (L37415.1), duas Sarcocystis hominis (AF006471.1), duas Sarcocystis cruzi (AF176934.1), uma Sarcocystis hirsuta (AF006469.1), indicando a circulação de T. gondii e Sarcocystis spp.

Evaluation of quantitative polymerase chain reaction for the detection of Toxoplasma gondii oocysts shed by cats / Avaliação da reação em cadeia da polimerase quantitativa para a detecção de oocistos de Toxoplasma gondii eliminados por gatos

Abstract Felines are definitive hosts of Toxoplasma gondii and can shed oocysts in their feces, contaminating the environment. Sporulated oocysts are highly resistant to the environment and have higher infectivity, which are attributed to many toxoplasmosis outbreaks. The aim of the present study was to evaluate a quantitative polymerase chain reaction (qPCR) technique for the detection of T. gondii oocysts shed by cats. Twelve cats from a previous vaccine experiment were challenged orally with 600 cysts of the TgDoveBr8 strain on day 72. Fecal samples were collected daily using the centrifugal flotation technique, with microscopic examination (Sheather technique) and qPCR for 20 days after the challenge. Cats from all groups shed oocysts in their feces. Five negative cats in the Sheather were positive according to qPCR on the 3rd day post-inoculation (dpi). Oocysts were detected on the 4th dpi using the Sheather; however, there was no statistical difference between the two methods (p=0.1116). In addition, there was no statistically significant difference in oocyst shedding between the groups according to the Sheather technique (p=0.6534) and qPCR (p=0.9670). In conclusion, these results demonstrate that qPCR can be used as an alternative to the Sheather to detect and quantify T. gondii oocysts.

Resumo Felinos são hospedeiros definitivos do Toxoplasma gondii e podem eliminar oocistos nas fezes, contaminando o meio ambiente. Oocistos esporulados são altamente resistentes ao meio ambiente com elevada infectividade, sendo atribuído a muitos surtos de toxoplasmose. O objetivo do estudo foi avaliar a reação em cadeia da polimerase quantitativa (qPCR) para a detecção de oocistos de T. gondii eliminados por gatos. Doze gatos de um experimento prévio de vacina foram desafiados por via oral com 600 cistos da cepa TgDoveBr8 no dia 72. Amostras fecais foram coletadas diariamente pela técnica de centrifugo-flutuação seguida de exame microscópico (técnica de Sheather) e qPCR por 20 dias após desafio. Gatos de todos os grupos eliminam oocistos nas fezes. Cinco gatos negativos na técnica Sheather foram positivos de acordo com a qPCR no 3º dia pós-inoculação (dpi). Oocistos foram detectados no 4º dpi no Sheather; entretanto, não houve diferença estatística entre os dois métodos (p=0,1116). Não houve diferença estatisticamente significativa na eliminação de oocistos entre os grupos de acordo com a técnica de Sheather (p = 0,6534) e qPCR (p = 0,9670). Em conclusão, esses resultados demonstram que qPCR pode ser usada como uma alternativa ao Sheather para detectar e quantificar oocistos de T. gondii.

Molecular investigation of Toxoplasma gondii in oysters (Crassostrea spp. ) sold on beaches in the State of Pará, Brazil / Investigação molecular de Toxoplasma gondii em ostras (Crassostrea spp. ) comercializadas em praias do estado do Pará, Brasil

The aim of this study was to detect Toxoplasma gondii DNA in oysters (Crassostrea spp.) sold on seven beaches in the State of Pará, Brazil. According to the National Program for Hygiene and Sanitary Control of Bivalve Mollusks, 100 g of the edible part of mollusks is required to analyze contaminating microorganisms. In this study, 12 oysters were assumed to be equivalent to 100 g of edible parts when preparing each pooled sample. In total, 360 oysters were purchased from 30 vendors. From groups of 12 oysters purchased per vendor, 60 pooled samples were obtained, comprising 30 gill tissues and 30 gastrointestinal tracts. For molecular analysis, nested-PCR was conducted to amplify a 155-base-pair product of the B1 gene from T. gondii. All analyzed samples were negative for T. gondii. Our findings indicate that the oyster samples sold on the beaches in the State of Pará were not contaminated by T. gondii.(AU)

O objetivo deste estudo foi detectar DNA de Toxoplasma gondii em ostras (Crassostrea spp.) comercializadas em sete praias do Estado do Pará, Brasil. De acordo com o Programa Nacional de Controle Higiênico Sanitário de Moluscos Bivalves, 100 g da parte comestível dos moluscos são necessários para a análise de microrganismos contaminantes. Neste estudo, 12 ostras foram consideradas equivalentes a 100 g de partes comestíveis na preparação de cada amostra agrupada. No total, 360 ostras foram compradas de 30 vendedores. De grupos de 12 ostras adquiridas por vendedor, foram obtidas 60 amostras agrupadas, compreendendo 30 tecidos branquiais e 30 tratos gastrointestinais. Para a análise molecular, a nested PCR foi realizada para amplificar um produto de 155 pares de bases do gene B1 de T. gondii. Todas as amostras analisadas foram negativas para T. gondii. Os resultados indicam que as amostras de ostras comercializadas em praias do Estado do Pará não foram contaminadas por T. gondii.(AU)

First report of detection of Toxoplasma gondii DNA in oysters (Crassostrea sp) in the state of Maranhão / Primeiro relato da detecção de DNA de Toxoplasma gondii em ostras (Crassostrea sp) no Estado do Maranhão

The aim of this study was to report on detection of Toxoplasma gondii DNA in oysters (Crassostrea sp.) in the state of Maranhão. To conduct this study, 200 farmed oysters were acquired in the municipality of Raposa and 100 in Paço do Lumiar; and a further 100 oysters were taken from the natural stock in the municipality of Primeira Cruz. This total of 400 specimens sampled was divided into 80 pools composed of five animals each. The gills and visceral mass of each oyster were removed for DNA extraction (per pool of oysters), using a commercial kit. The nested PCR technique (with the primer SAG-1) was then used to investigate any presence of protozoa. This molecular technique demonstrated the presence of DNA of T. gondii in 2.5% of the pools of oysters (n = 2/80): these oysters were exclusively from farms. The results from this study allow the conclusion that oysters of the genus Crassostrea that are farmed in the state of Maranhão are capable of filtering oocysts of T. gondii and maintaining them in their tissues. They are therefore potential sources of contamination for humans and other animals.(AU)

Objetivou-se com este estudo relatar a detecção do DNA de Toxoplasma gondii em ostras (Crassostrea sp.) no estado do Maranhão. Para a realização do estudo foram adquiridas 200 ostras de cultivo do município de Raposa, e 100 de Paço do Lumiar, além de 100 ostras extraídas de estoque natural do município de Primeira Cruz. Do total de 400 exemplares amostrados, formaram-se 80 pools em que cada pool foi constituído por cinco animais. De cada ostra foi procedida à retirada das brânquias e massa visceral, seguido da extração de DNA de cada pool de ostras, com a utilização de kit comercial. Posteriormente, realizou-se a pesquisa do protozoário por meio da técnica de nested PCR (primer SAG-1). Com a técnica molecular utilizada, foi diagnosticado o DNA do protozoário pesquisado em 2,5% (n=2/80) pools de ostras oriundas exclusivamente de cultivo. Com os resultados obtidos neste estudo, conclui-se que ostras do gênero Crassostrea sp., cultivadas no estado do Maranhão, são capazes de filtrar e manter nos seus tecidos oocistos de T. gondii, sendo, portanto, fontes potenciais de contaminação para seres humanos e outros animais.(AU)

Toxoplasma gondii molecular and immunological identification and risk factors associated with infection in chicken slaughtered at Triângulo Mineiro region, Minas Gerais, Brazil / Identificação molecular e imunológica de Toxoplasma gondii e fatores de risco associados com infecção em galinhas abatidas na região do Triângulo Mineiro, Minas Gerais, Brasil

This study aimed to determine the occurrence of anti-Toxoplasma gondii antibodies in the serum of slaughtered chickens in the region of Triângulo Mineiro, Minas Gerais, Brazil, to detect the parasite in tissues (heart and brain) of serologically positive chickens, based on molecular analysis, and to investigate risk variables associated with the infection. Sera from 417 chickens raised in extensive, semi-intensive, and intensive production systems were tested by an indirect immunofluorescent antibody test (IFAT) and indirect hemagglutination antibody test (IHA). Polymerase chain reaction (PCR) was performed to detect T. gondii DNA in brain and heart tissues. Antibody anti-T. gondii were found in 37.65% (157/417) of chickens by IFAT, and in 75.06% (313/417) by IHA. The Kappa index showed a weak concordance between the techniques (0.087). Association was observed between seropositivity and the variables, age (p 0.0001), type of feeding (p 0.0001) and collective raising with other animals species (p 0.0001). Association, based on IFAT, was not observed between seropositivity and the variables, sex (p = 0.0526), presence of cats (p > 0.9999), and presence of rats (p > 0.9999). Presence of parasite DNA was detected in brain samples from two chickens, which were raised in intensive and semi-intensive production systems. The results suggest(AU)

O objetivo do presente estudo foi determinar a frequência de anticorpos anti-Toxoplasma gondii em soro de galinhas abatidas na região do Triângulo Mineiro, Minas Gerais, detectar molecularmente o parasito em tecidos (coração e cérebro) de algumas das aves sorologicamente positivas e averiguar variáveis de risco associadas à infecção. Foram testados soros de 417 galinhas, criadas nos sistemas extensivo, semi-intensivo e intensivo. Para a pesquisa de anticorpos anti-T. gondii foi utilizada a Reação de Imunofluorescência Indireta (RIFI) e Hemaglutinação Indireta (HAI). A Reação em Cadeia da Polimerase (PCR) foi utilizada para detectar o DNA de T. gondii em fragmentos de cérebro e coração. Anticorpos foram detectados no soro de 37,65% (157/417) das aves pela RIFI e em 75,06% (313/417) pela HAI. O índice Kappa mostrou uma fraca concordância entre as técnicas (0,087). Baseado na RIFI, foi verificada associação estatisticamente significativa (p 0,0001) entre a soropositividade e as variáveis: idade, tipo de alimentação e criação em conjunto com outras espécies animais. Não foi observada associação estatística (p > 0,01) entre as variáveis: sexo, presença de gatos e presença de ratos. Pelo diagnóstico molecular DNA do parasito foi detectado em duas amostras de cérebro, de indivíduos diferentes criados em sistema intensivo e semi-intensivo.(AU)

Toxoplasma gondii: isolation, biological and molecular characterisation of samples from free-range Gallus gallus domesticus from countryside Southeast Brazil / Toxoplasma gondii: isolamento, caracterização biológica e molecular de amostras de Gallus gallus domesticus no interior do Sudeste brasileiro

Toxoplasma gondii presents a high prevalence worldwide, infecting several animals. Felines are considered the definitive hosts and among the intermediate hosts we highlight mammals and birds. The man can become infected by ingesting tissue cysts present in birds and mammals. Biological and molecular aspects of T. gondii allows a better understanding of the epidemiology of toxoplasmosis. This work is a serologic screening of 58 chickens grown (Gallus gallus domesticus) for human consumption in Espírito Santo State, by means of indirect haemagglutination assay (IHA). Thirteen chickens tested positive for anti-T. gondii antibodies. The heart and brain of five positive chickens were harvested, treated with pepsin and inoculated separately, in two Swiss mice, intraperitoneally. Tachyzoites were observed in the peritoneum of all the animals, between seven and 10 days after the inoculum. Ten isolates were obtained and biologically characterised in BALB/c mice inoculated with 101 to 104 tachyzoites. All isolates were classified as virulent or intermediately virulent. Isolates were genotyped by means of polymerase chain reaction-restriction fragment length polymorphism (PCR-RFLP) analysis, revealing three different genotypes. None of the isolates exhibited the clonal type I, II or III genotype. No genotypic differences were observed between the isolates from the brain or heart from the same bird.(AU)

Toxoplasma gondii apresenta alta prevalência mundial, capaz de infectar diversos animais. Felinos são considerados os hospedeiros definitivos e entre os hospedeiros intermediários destacamos os mamíferos e as aves. O homem pode se infectar ingerindo cistos teciduais presentes na carne das aves e mamíferos. O conhecimento dos aspectos biológicos e moleculares do parasito possibilitam melhor entendimento da epidemiologia da toxoplasmose. Neste trabalho foi realizada triagem sorológica por hemaglutinação indireta (HI) em 58 galinhas caipiras (Gallus gallus domesticus) utilizadas para consumo humano, provenientes do estado do Espírito Santo, Brasil. Treze galinhas apresentaram sorologia positiva para T. gondii. O coração e o cérebro de cinco galinhas positivas foram colhidos, tratados com pepsina e inoculados separadamente, em dois camundongos Swiss, por via intraperitoneal. Observou-se taquizoítos no peritônio de todos os camundongos, entre sete e 10 dias após o inóculo. Foram obtidos 10 novos isolados de T. gondii os quais foram estudados em camundongos BALB/C inoculados com 101 a 104 taquizoítos por animal. Todos os isolados foram considerados virulentos ou de virulência intermediária. A caracterização molecular dos isolados, realizada por PCR-RFLP, demonstrou a ocorrência de três genótipos distintos. Nenhum isolado apresentou genótipo clonal ou linhagem clonal do Brasil. Não foi observada diferença molecular (PCR-RFLP) entre os isolados obtidos a partir do cérebro ou do coração da mesma ave. Dois isolados já haviam sido relatados na literatura como causadores de doenças em humanos.(AU)

Isolation and genetic characterization of Toxoplasma gondii from free-ranging and captive birds and mammals in Pernambuco state, Brazil / Isolamento e caracterização genética de Toxoplasma gondii de aves e mamíferos de vida livre e cativeiro em Pernambuco

Recent genetic population studies on Toxoplasma gondii in Brazil have shown large genetic variability. The objective of the present study was to isolate and genotypically characterize T. gondii from free-ranging and captive wild mammals and birds in Pernambuco state, Brazil. Fragments of heart, brain, skeletal muscle and diaphragm tissue from 71 birds and 34 mammals, which were either free-ranging or captive, were collected. Samples from 32 of these animals were subjected to bioassays in mice. Samples from the remaining 73 animals underwent biomolecular diagnosis, using PCR technique, targeting a repetitive DNA fragment of 529 bp in T. gondii. A non-virulent isolate (TgButstBrPE1) was obtained from a free-ranging striated heron (Butorides striata) and, based on primary samples, seven animals were found to be positive. The primary samples and the isolate obtained were subjected to PCR-RFLP using the markers SAG1, 53SAG2, alt.SAG2, SAG3, BTUB, GRA6, c22-8, c29-2, L358, PK1, Apico and CS3. ToxoDB-RFLP genotype/13 from the striated heron isolate and Type BrIII genotype from a captive otter (Lontra longicaudis) (PS-TgLonloBrPE1) were obtained. The present study describes the first isolation and genotypic characterization of T. gondii in free-ranging striated heron, and the first genotypic characterization of T. gondii in a captive otter.(AU)

Recentes estudos genéticos nas populações deste parasita no Brasil têm mostrado grande variabilidade genética. O objetivo do presente estudo foi isolar e caracterizar genotipicamente T. gondii de aves e mamíferos de vida livre e de cativeiro no estado de Pernambuco, Brazil. Fragmentos de tecido do coração, cérebro, músculo esquelético e diafragma de 71 aves e 34 mamíferos de vida livre ou cativeiro foram colhidos. Amostras de 32 destes animais foram submetidas a bioensaios em camundongos. As amostras dos 73 animais restantes foram submetidas a diagnóstico biomolecular usando a técnica de PCR, tendo como alvo o fragmento repetitivo de 529 pb do DNA de T. gondii. Dentre os 32 bioensaios conduzidos, obteve-se um isolado não-virulento (TgButstBrPE1) de um socozinho (Butorides striata) de vida livre, e dentre as amostras primárias, sete animais foram positivos. As amostras primárias e o isolado foram submetidos a PCR-RFLP usando os marcadores SAG1, 53SAG2, alt.SAG2, SAG3, BTUB, GRA6, c22-8, c29-2, L358, PK1, Apico e CS3. Foram obtidos o genótipo ToxoDB-RFLP/13 do isolado do socozinho e o genótipo Type BrIII de uma lontra (Lontra longicaudis) de cativeiro (PS-TgLonloBrPE1). O presente estudo descreve o primeiro isolamento e caracterização genotípica de T. gondii em socozinho de vida livre, e a primeira caracterização genotípica de T. gondii em lontra em cativeiro.(AU)

Genotyping of Toxoplasma gondii isolates from naturally infected Gallus domesticus in Santa Catarina state, Brazil / Genotipagem de Toxoplasma gondii isolados de Gallus domesticus naturalmente infectados no estado de Santa Catarina, Brasil

Toxoplasmosis is a widespread zoonosis that can infect warm-blooded animals including birds and humans, and chickens are considered to be indicators of environmental contamination. In Brazil, Toxoplasma gondii has a non-clonal population structure composed of three lineages (I, II, and III), presenting high recombination, and resulting in wide genetic diversity. This study aimed to genetically characterize T. gondii isolates from naturally infected chickens (Gallus domesticus) in Santa Catarina state, southern Brazil region. Sera from 133 free-range chickens were analyzed by an immunofluorescence assay (IFA) to detect IgG antibodies against T. gondii. Brain and heart from 30 positive animals, based on IFA (≥ 1:64), were used to isolate the parasite using a mouse bioassay. Strain genotyping was performed by PCR-RFLP using 12 genetic markers (SAG1, 5´-3´SAG2, alt. SAG2, SAG3, BTUB, GRA6, c22-8, c29-2, L358, PK1, Apico, and CS3). The results were classified according to the genotypes based on the ToxoDB (http://toxodb.org/toxo/). Of 133 chicken sera analyzed, 84 (63.16%) were positive, with antibody titers ranging from 16 to 1024. Eleven isolates were obtained from mouse bioassay (Ck3, Ck32, Ck35, Ck56, Ck63, Ck89, Ck102, Ck103, Ck125, Ck127, and Ck128). Genotyping revealed six genotypes; three were classified as #26, #53, and #120, and three (NEO1, NEO2, and NEO3) were had not been previously described. No clonal lineages of type I, II, or III were identified. The present study confirms the high genetic diversity of T. gondii in Brazil.(AU)

A toxoplasmose é uma zoonose de ampla distribuição, que acomete animais homeotérmicos, incluindo as aves e o ser humano. Galinhas podem ser consideradas indicadoras de contaminação ambiental. No Brasil, Toxoplasma gondii não apresenta estrutura populacional clonal (I, II e III), ocorrendo alta frequência de recombinação, o que resulta na grande diversidade genética observada. O presente trabalho teve como objetivo caracterizar geneticamente T. gondii de galinhas (Gallus domesticus) naturalmente infectadas do estado de Santa Catarina. Soros de 133 aves criadas extensivamente foram analisados pela reação de imunofluorescência indireta (RIFI) para detecção de anticorpos IgG contra T. gondii. Para o isolamento do parasito (bioensaio em camundongos), foram utilizados coração e cérebro de 30 aves que apresentaram títulos maiores que 64 na RIFI. Os isolados obtidos foram submetidos à caracterização genotípica por meio da RFLP-PCR utilizando 12 marcadores genéticos (SAG1, 5'-3'SAG2, alt.SAG2, SAG3, BTUB, GRA6, c22-8, c29-2, L358, PK1, Apico e CS3). Os resultados obtidos foram classificados de acordo com os genótipos presentes no ToxoDB (http://toxodb.org/toxo/). Das 133 amostras de soros de galinha analisadas, 84 (63,16%) foram positivas, com títulos de anticorpos variando de 16 a 1024. No bioensaio, foram obtidos 11 isolados (Ck 3, Ck 32, Ck 35, Ck 56, Ck 63, Ck 89, Ck 102, Ck 103, Ck 125, Ck127 e Ck 128). A análise genotípica revelou a presença de seis genótipos, três dos quais classificados como #26, #53 e #120, e três, NEO1, NEO2 e NEO3, não descritos anteriormente. Nenhuma linhagem clonal I, II ou III foi encontrada. O presente trabalho confirma a ampla diversidade genética do parasito observada no Brasil.(AU)

Genotyping of Toxoplasma gondii isolates from naturally infected Gallus domesticus in Santa Catarina state, Brazil / Genotipagem de Toxoplasma gondii isolados de Gallus domesticus naturalmente infectados no estado de Santa Catarina, Brasil

Toxoplasmosis is a widespread zoonosis that can infect warm-blooded animals including birds and humans, and chickens are considered to be indicators of environmental contamination. In Brazil, Toxoplasma gondii has a non-clonal population structure composed of three lineages (I, II, and III), presenting high recombination, and resulting in wide genetic diversity. This study aimed to genetically characterize T. gondii isolates from naturally infected chickens (Gallus domesticus) in Santa Catarina state, southern Brazil region. Sera from 133 free-range chickens were analyzed by an immunofluorescence assay (IFA) to detect IgG antibodies against T. gondii. Brain and heart from 30 positive animals, based on IFA (≥ 1:64), were used to isolate the parasite using a mouse bioassay. Strain genotyping was performed by PCR-RFLP using 12 genetic markers (SAG1, 5´-3´SAG2, alt. SAG2, SAG3, BTUB, GRA6, c22-8, c29-2, L358, PK1, Apico, and CS3). The results were classified according to the genotypes based on the ToxoDB (http://toxodb.org/toxo/). Of 133 chicken sera analyzed, 84 (63.16%) were positive, with antibody titers ranging from 16 to 1024. Eleven isolates were obtained from mouse bioassay (Ck3, Ck32, Ck35, Ck56, Ck63, Ck89, Ck102, Ck103, Ck125, Ck127, and Ck128). Genotyping revealed six genotypes; three were classified as #26, #53, and #120, and three (NEO1, NEO2, and NEO3) were had not been previously described. No clonal lineages of type I, II, or III were identified. The present study confirms the high genetic diversity of T. gondii in Brazil.(AU)

A toxoplasmose é uma zoonose de ampla distribuição, que acomete animais homeotérmicos, incluindo as aves e o ser humano. Galinhas podem ser consideradas indicadoras de contaminação ambiental. No Brasil, Toxoplasma gondii não apresenta estrutura populacional clonal (I, II e III), ocorrendo alta frequência de recombinação, o que resulta na grande diversidade genética observada. O presente trabalho teve como objetivo caracterizar geneticamente T. gondii de galinhas (Gallus domesticus) naturalmente infectadas do estado de Santa Catarina. Soros de 133 aves criadas extensivamente foram analisados pela reação de imunofluorescência indireta (RIFI) para detecção de anticorpos IgG contra T. gondii. Para o isolamento do parasito (bioensaio em camundongos), foram utilizados coração e cérebro de 30 aves que apresentaram títulos maiores que 64 na RIFI. Os isolados obtidos foram submetidos à caracterização genotípica por meio da RFLP-PCR utilizando 12 marcadores genéticos (SAG1, 5'-3'SAG2, alt.SAG2, SAG3, BTUB, GRA6, c22-8, c29-2, L358, PK1, Apico e CS3). Os resultados obtidos foram classificados de acordo com os genótipos presentes no ToxoDB (http://toxodb.org/toxo/). Das 133 amostras de soros de galinha analisadas, 84 (63,16%) foram positivas, com títulos de anticorpos variando de 16 a 1024. No bioensaio, foram obtidos 11 isolados (Ck 3, Ck 32, Ck 35, Ck 56, Ck 63, Ck 89, Ck 102, Ck 103, Ck 125, Ck127 e Ck 128). A análise genotípica revelou a presença de seis genótipos, três dos quais classificados como #26, #53 e #120, e três, NEO1, NEO2 e NEO3, não descritos anteriormente. Nenhuma linhagem clonal I, II ou III foi encontrada. O presente trabalho confirma a ampla diversidade genética do parasito observada no Brasil.(AU)

Occurrence of Toxoplasma gondii DNA in sheep naturally infected and slaughtered in abattoirs in Pernambuco, Brazil / Ocorrência de DNA de Toxoplasma gondii em ovelhas naturalmente infectadas e abatidas em matadouros de Pernambuco

The aim of the present study was to assess the occurrence of antibodies to Toxoplasma gondii and to detect genomic DNA of the parasite in the reproductive organs, fetuses and fetal membranes of sheep in slaughterhouses in the state of Pernambuco, Brazil. The Indirect Immunofluorescence technique (IFA) was used for screening. The Polymerase Chain Reaction (PCR) was used to detect DNA of T. gondii in the animals that were positive in the serology. In the serology, 13/50 samples were positive and genomic DNA of T. gondii was detected in one uterus, tube, ovary, placenta and fetus (heart, brain and umbilical cord) sample from a sheep that was positive in the serology. The present study provides evidence of the occurrence of T. gondii DNA in the organs of the reproductive system, placenta and fetus of a naturally infected sheep.(AU)

Objetivou-se estudar a ocorrência de anticorpos contra Toxoplasma gondii e detectar o DNA genômico do parasito em órgãos reprodutivos, fetos e anexos fetais de ovelhas em matadouros no estado de Pernambuco, Brasil. Foram coletadas amostras de soro sanguíneo, útero, trompas e ovários, além de fetos e placentas. Para a triagem utilizou-se a técnica de Imunofluorescência Indireta (RIFI) e para a detecção do DNA de T. gondii empregou-se a Reação em Cadeia da Polimerase (PCR) nos animais positivos na sorologia e em todos os fetos e anexos fetais. Na sorologia, 13/50 amostras foram positivas e o DNA genômico de T. gondii foi detectado em uma amostra de útero, trompa, ovário, placenta e feto (coração, cérebro e cordão umbilical) de uma ovelha positiva na sorologia. A identidade molecular dos produtos amplificados foi confirmada por sequenciamento. Neste estudo comprova-se a ocorrência do DNA de T. gondii em órgãos do sistema reprodutivo, placenta e feto de ovelha naturalmente infectada.(AU)

Mamíferos de produção e seu papel na cadeia epidemiológica do Toxoplasma gondii- Revisão / Producting mammals and their role in the epidemiological chain of Toxoplasma gondii - Review

A toxoplasmose é uma zoonose de ampla distribuição mundial, causada pelo Toxoplasma gondii, um protozoário coccídio intracelular obrigatório, que pode infectar o homem e outros animais de sangue quente, sendo os felídeos os hospedeiros definitivos do parasito. A ingestão de produtos de origem animal crus e/ou mal cozidos contendo cistos de bradizoítaso interior de cistos ou taquizoítas vêm sendo apontada como uma das principais fontes de infecção deste protozoário para o homem. Sendo assim, o estudo da prevalência de T. gondii em animais de produção é de grande importância para saúde pública, mas também se destaca no âmbito econômico, uma vez que pode causar aborto, retardo no crescimento e animais debilitados, levando prejuízo ao pecuarista. Normalmente, o consumo de carne suína, caprina e ovina, bem como a ingestão do leite de cabra crus ou mal cozido pode ser considerado como um fator importante na transmissão do T. gondii por alimentos para os seres humanos, ficando a ingestão da carne, produtos cárneos e do leite de outros mamíferos com um papel epidemiológico secundário nesta cadeia de transmissão. No entanto, é possível reduzir significativamente o risco de infecção toxoplásmica nessas espécies se for usada gestão da exploração intensiva, com medidas adequadas de higiene, o confinamento e prevenção. Pensando já no produto final, a aplicação correta dos métodos utilizados atualmente para a destruição dos cistos do T.gondii como congelamento, defumação e salga podem também minimizar o risco de exposição ao protozoário pelo consumidor.(AU)

Toxoplasmosis is a zoonosis of worldwide distribution, caused by Toxoplasma gondii, an obligate intracellular coccidian that can infect humans and other warm-blooded animals, being felines the definitive host of the parasite. The consumption of raw and/or undercooked animal products containing bradyzoites cysts or tachyzoites is regarded as a major source of infection to humans. Thus, studying the prevalence of T. gondii in livestock animals is of great importance to public health, but also in economics, since it may cause miscarriage, growth retardation and debilitated animals, which harms farmers. Usually, the consumption of undercooked or raw pork, goat or sheep as well as raw goat milk ingestion is regarded as an important factor in the transmition of T. gondii to humans by food products. The intake of meat, meat products and milk of other mammals has a minor importance in the transmission chain. However, it is possible to greatly reduce the risk of T. gondii infection in livestock using intensive farm management with adequate measures of hygiene, confinement and prevention. Considering the final product, the correct application of the procedures currently used for cysts of T. gondii destruction, such as freezing, salting and smoking may also reduce the risk of exposure to the parasite by the consumer.(AU)

Isolation and genotyping of Toxoplasma gondii from pregnant dairy cows (Bos taurus) slaughtered / Isolamento e genotipagem de Toxoplasma gondii em vacas de leite (Bos taurus) prenhas abatidas

The current study aimed to evaluate serology, and isolate and genotype Toxoplasma gondii strains from pregnant dairy cows, slaughtered in an abattoir for human consumption, and their fetuses. Blood from 60 pregnant dairy cows and blood and tissue samples (brain, lung, heart, and liver) from their fetuses were collected and analyzed in a mouse bioassay. Antibodies against T. gondii were observed in 48.3% of cows and 3.7% of fetuses (IFAT, titers ≥ 50 for cows and 25 for fetuses were considered positive). Fourteen fetuses (23.3%) and six cows (10.0%) were identified as positive in the bioassay. T. gondii was isolated from a blood sample of a cow older than 4 years old in the 6th month of pregnancy, and from a blood sample of a fetus in the 6th month of gestation. These isolates were identified by polymerase chain reaction (PCR) as being of T. gondii and both strains showed type II alleles for all PCR-restriction fragment length polymorphism (PCR-RFLP) markers tested. T. gondii type II strain from cattle was isolated for the first time in Brazil. The current study also showed that transplacental transmission of T. gondii naturally occurs in dairy cows (23.3%) from Southern Brazil.(AU)

O presente estudo teve como objetivo avaliar a ocorrência de anticorpos, isolar e genotipar Toxoplasma gondii de vacas prenhas abatidas em um matadouro para consumo humano e de seus respectivos fetos. Sangue de 60 vacas gestantes e amostras de sangue e tecidos (cérebro, pulmão, coração e fígado) de seus fetos foram coletados e utilizados para bioensaio em camundongos. Anticorpos contra T. gondii foram observados em 48,3% das vacas e em 3,7% dos fetos (foram considerados positivos títulos ≥50 para as vacas e ≥25 para os fetos). Quatorze fetos (23,3%) e seis vacas (10,0%) apresentaram-se positivas para T. gondii ao bioensaio. T. gondii foi isolado de amostra de sangue de uma vaca com mais de quatro anos no 6º mês de gestação e de amostra de sangue de um feto no 6º mês de gestação. Por PCR esses isolados foram identificados como sendo de T. gondii e ambas as cepas apresentaram o alelo tipo II em todos os marcadores de PCR-RFLP testados. Esta é a primeira identificação de genótipo tipo II de T. gondii em bovinos do Brasil. Além disso, este estudo mostrou que a transmissão transplacentária de T. gondii ocorre naturalmente em bovinos de leite (23,3%).(AU)

Detection of Toxoplasma gondii in the reproductive system of male goats / Detecção de Toxoplasma gondii no sistema reprodutor de caprinos machos

Male goats of mating age serologically negative for Toxoplasma gondii were divided into three groups: GI controls(placebo) (n = 2); GII infected with 1 × 10 potention 6 tachyzoites (RH strains) (n = 2); and GIII infected with 2 × 10 potention 5 oocysts(P strains) (n = 2). Clinical, hematology, parasite and serology tests and studies of parasites in the semen through bioassayand polymerase chain reaction (PCR), and in reproductive organs (bioassay) were performed to assess toxoplasmainfection. Serological titers peaked at 4096 in two animal groups infected with the protozoan. The bioassays allowed anearly detection of protozoa in semen samples of tachyzoite-inoculated animals. T. gondii DNA was identified throughPCR in the semen in five (Days 5, 7, 28, 49, and 70) and two (both at day 56) different days post-inoculation in GIIand GIII animals, respectively. It was also possible to detect T. gondii DNA in reproductive organs (prostate pool,testicles, seminal vesicle and epididymis) of goats inoculated with either tachyzoites or oocysts. The present studysuggests the possibility of venereal transmission of T. gondii among goats and it should be further assessed.(AU)

Caprinos machos, em idade reprodutiva, sorologicamente negativos para Toxoplasma gondii foram distribuídos emtrês grupos de animais: GI (n = 2) controle (placebo), GII (n = 2) - infectado com 1 × 10 elevado a 6 taquizoítos (cepa RH) e GIII(n = 2) infectado com 2 × 10 elevado a 5 oocistos (cepa P). Exames clínicos, hematológicos, parasitêmicos, sorológicos, pesquisano sêmen e em tecidos do sistema reprodutor, por meio da bioprova, e da Reação em Cadeia pela Polimerase (PCR),foram conduzidas para avaliar a infecção toxoplásmica. Os títulos sorológicos alcançaram valores máximos de 4096 nosdois grupos de animais infectados. Pela técnica da bioprova, foi possível revelar precocemente a presença do coccídionas amostras seminais dos animais inoculados com taquizoítos. Pela PCR, foi possível identificar, no sêmen, materialgenético de T. gondii, em cinco (5º, 7º, 28º, 49º e 70º) e em duas (ambos ao 56º) datas experimentais pós‑inoculaçãodos animais pertencentes aos grupos GII e GIII, respectivamente.Por esta mesma técnica, foi possível ainda isolarmaterial genético deste protozoário, também em amostras teciduais (pool de próstata, testículo, vesícula seminal eepidídimo) dos caprinos inoculados com taquizoítos e oocistos. A presente pesquisa sugere a possibilidade da ocorrência da transmissão sexual do T. gondii na espécie caprina.(AU)

Sorodiagnóstico, isolamento e genotipagem de Toxoplasma gondii e investigação molecular de outros protozoários pertencentes à família Sarcocystidae em morcegos do estado de São Paulo / Serodiagnosis, isolation and genotyping of Toxoplasma gondii and molecular investigation of other protozoa belonging to the Sarcocystidae family in bats from São Paulo state

Os trabalhos existentes sobre protozoários pertencentes à família Sarcocystidae em morcegos são escassos e desatualizados. No Brasil, a ocorrência de Toxoplasma gondii é bem documentada nas espécies domésticas e no Homem, existindo relatos em diversos hospedeiros selvagens. Mundialmente, existe um grande interesse no conhecimento da variedade genética de T. gondii realizada por meio da Reação em Cadeia pela Polimerase Polimorfismo de Comprimento de Fragmentos de DNA gerados por Enzimas de Restrição (PCR-RFLP). No presente trabalho, objetivou-se pesquisar a frequência de ocorrência de anticorpos anti-T. gondii, isolar e caracterizar molecularmente T. gondii e investigar a presença de coccídios da família Sarcocystidae em morcegos de vida livre no estado de São Paulo. Um total de 1921 morcegos, provenientes de 15 municípios do estado de São Paulo, foi examinado durante o período de março de 2010 a março de 2011. Obteve-se 14,89% (28/188) de positividade para T. gondii na Reação de Imunofluorescência Indireta (RIFI ≥ 16) e 18,61% (35/188) no Teste de Aglutinação Modificado (MAT ≥ 25), com baixa concordância entre as técnicas utilizando o índice Kappa (K=0,046). De um total de 282 bioensaios em camundongos, foram obtidos dois isolados, sendo TgBatBr1 proveniente de Molossus molossus, insetívoro, macho e adulto, e TgBatBr2 proveniente de Desmodus rotundus, hematófago, macho e adulto, ambos causando 100% de mortalidade em camundongos. A genotipagem dos isolados e das amostras primárias de morcegos positivas para T. gondii foi feita por meio da PCR-RFLP com os marcadores SAG1, 5/'3/'SAG2, SAG3, BTUB, GRA6, alt. SAG2, c22-8, c29-2, PK1, Apico, L358 e CS3, revelando os genótipos ToxoDB-RFLP #162 e #19, respectivamente, para os isolados TgBatBr1 e TgBatBr2. Para a investigação molecular dos sarcocistídeos foram utilizados primers que amplificam a região 18S do DNA ribossomal e as amostras positivas foram sequenciadas. A análise de sequências pôde ser realizada em 48 das amostras positivas para Sarcocystidae, encontrando-se 100% de identidade com T. gondii em quatro morcegos e também 100% de identidade com Neospora caninum, Hammondia hammondi, Cystoisospora ohioensis e Frenkelia glareoli em um morcego, respectivamente. Outras 39 amostras apresentaram identidade de 94-98% com outros sarcocistídeos e, provavelmente, devem ser novas espécies. Foi possível a genotipagem de amostras primárias positivas para T. gondii de um morcego insetívoro (Eumops glaucinus), correspondendo ao genótipo #69 e de outro morcego insetívoro (E. glaucinus), apresentando o genótipo #6, que corresponde ao Tipo BrI. Há uma necessidade de se investigar a importância dos morcegos como reservatórios de doenças infecciosas, podendo-se sugerir a inclusão do diagnóstico de T. gondii como diferencial para raiva. Ressalta-se também a importância do compartilhamento dos genótipos de T. gondii dos morcegos com hospedeiros terrestres e dos estudos sobre sarcocistídeos em morcegos, a fim de compreender melhor as relações parasita-hospedeiro.

The existing studies on protozoa belonging to the Sarcocystidae family are scarce and outdated in free-living bats. In Brazil, the occurrence of Toxoplasma gondii is well documented in domestic animals and humans, with reports in several wild hosts. Worldwide, there is a great interest in understanding the genetic variation of T. gondii using differen molecular tools as the Polymerase Chain Reaction Restriction Fragment Length Polymorphism (PCR-RFLP). The present study aimed to research the frequency of occurrence of anti-T. gondii antibodies, to isolate and molecularly characterize T. gondii and to investigate the presence of coccidia from Sarcocystidae family in free-living bats from São Paulo state. A total of 1921 bats from 15 municipalities in São Paulo state were examined from March 2010 to March 2011. It was obtained 14.89% (28/188) of positivity for T. gondii by Indirect Immunofluorescence Assay (IFA ≥ 16) and 18.61% (35/188) by Modified Agglutination Test (MAT ≥ 25) with low agreement between techniques when using Kappa (K = 0.046). From a total of 282 bioassays in mice, two bat isolates were obtained, TgBatBr1 from Molossus molossus, an insectivorous, male, adult bat, and TgBatBr2 from Desmodus rotundus, a vampire, male, adult bat, both causing 100% of mouse mortality. Genotyping of isolates and T. gondii positive primary samples from bats were performed by PCR-RFLP using markers SAG1, 5/'3/'SAG2, SAG3, BTUB, GRA6, alt. SAG2, c22-8, c29-2, PK1, Apico, L358 and CS3, revealing ToxoDB-RFLP genotypes #162 and #19, respectively, for isolates TgBatBr1 and TgBatBr2. Primers that amplify the 18S ribosomal DNA region were employed for molecular investigation of Sarcocystidae in primary samples and the positive samples were sequenced. Analysis of sequence could be accomplished for 48 Sarcocystidae positive samples. A 100% identity with T. gondii was found in four bats, and with Neospora caninum, Hammondia hammondi, Cystoisospora ohioensis and Frenkelia glareoli in a bat, respectively. Thirty-nine samples showed 94-98% identity with other Sarcocystidae and, probably, these are new species. Genotyping of positive primary samples for T. gondii was complete from one insectivorous bat (Eumops glaucinus), corresponding to genotype # 69 and from other insectivorous bat (E. glaucinus), showing genotype # 6, which corresponds to the Type BrI. It is necessary to investigate the importance of bats as reservoirs of infectious diseases, and it could be suggested the inclusion of the diagnosis of T. gondii as a differential to rabies. We also emphasize the importance of T. gondii genotypes from bats being shared with terrestrial hosts and of studies on Sarcocystidae in bats in order to better understand the host-parasite relationship.

Sorodiagnóstico, isolamento e genotipagem de Toxoplasma gondii e investigação molecular de outros protozoários pertencentes à família Sarcocystidae em morcegos do estado de São Paulo / Serodiagnosis, isolation and genotyping of Toxoplasma gondii and molecular investigation of other protozoa belonging to the Sarcocystidae family in bats from São Paulo state

Os trabalhos existentes sobre protozoários pertencentes à família Sarcocystidae em morcegos são escassos e desatualizados. No Brasil, a ocorrência de Toxoplasma gondii é bem documentada nas espécies domésticas e no Homem, existindo relatos em diversos hospedeiros selvagens. Mundialmente, existe um grande interesse no conhecimento da variedade genética de T. gondii realizada por meio da Reação em Cadeia pela Polimerase Polimorfismo de Comprimento de Fragmentos de DNA gerados por Enzimas de Restrição (PCR-RFLP). No presente trabalho, objetivou-se pesquisar a frequência de ocorrência de anticorpos anti-T. gondii, isolar e caracterizar molecularmente T. gondii e investigar a presença de coccídios da família Sarcocystidae em morcegos de vida livre no estado de São Paulo. Um total de 1921 morcegos, provenientes de 15 municípios do estado de São Paulo, foi examinado durante o período de março de 2010 a março de 2011. Obteve-se 14,89% (28/188) de positividade para T. gondii na Reação de Imunofluorescência Indireta (RIFI ≥ 16) e 18,61% (35/188) no Teste de Aglutinação Modificado (MAT ≥ 25), com baixa concordância entre as técnicas utilizando o índice Kappa (K=0,046). De um total de 282 bioensaios em camundongos, foram obtidos dois isolados, sendo TgBatBr1 proveniente de Molossus molossus, insetívoro, macho e adulto, e TgBatBr2 proveniente de Desmodus rotundus, hematófago, macho e adulto, ambos causando 100% de mortalidade em camundongos. A genotipagem dos isolados e das amostras primárias de morcegos positivas para T. gondii foi feita por meio da PCR-RFLP com os marcadores SAG1, 5\'3\'SAG2, SAG3, BTUB, GRA6, alt. SAG2, c22-8, c29-2, PK1, Apico, L358 e CS3, revelando os genótipos ToxoDB-RFLP #162 e #19, respectivamente, para os isolados TgBatBr1 e TgBatBr2. Para a investigação molecular dos sarcocistídeos foram utilizados primers que amplificam a região 18S do DNA ribossomal e as amostras positivas foram sequenciadas. A análise de sequências pôde ser realizada em 48 das amostras positivas para Sarcocystidae, encontrando-se 100% de identidade com T. gondii em quatro morcegos e também 100% de identidade com Neospora caninum, Hammondia hammondi, Cystoisospora ohioensis e Frenkelia glareoli em um morcego, respectivamente. Outras 39 amostras apresentaram identidade de 94-98% com outros sarcocistídeos e, provavelmente, devem ser novas espécies. Foi possível a genotipagem de amostras primárias positivas para T. gondii de um morcego insetívoro (Eumops glaucinus), correspondendo ao genótipo #69 e de outro morcego insetívoro (E. glaucinus), apresentando o genótipo #6, que corresponde ao Tipo BrI. Há uma necessidade de se investigar a importância dos morcegos como reservatórios de doenças infecciosas, podendo-se sugerir a inclusão do diagnóstico de T. gondii como diferencial para raiva. Ressalta-se também a importância do compartilhamento dos genótipos de T. gondii dos morcegos com hospedeiros terrestres e dos estudos sobre sarcocistídeos em morcegos, a fim de compreender melhor as relações parasita-hospedeiro. (AU)

The existing studies on protozoa belonging to the Sarcocystidae family are scarce and outdated in free-living bats. In Brazil, the occurrence of Toxoplasma gondii is well documented in domestic animals and humans, with reports in several wild hosts. Worldwide, there is a great interest in understanding the genetic variation of T. gondii using differen molecular tools as the Polymerase Chain Reaction Restriction Fragment Length Polymorphism (PCR-RFLP). The present study aimed to research the frequency of occurrence of anti-T. gondii antibodies, to isolate and molecularly characterize T. gondii and to investigate the presence of coccidia from Sarcocystidae family in free-living bats from São Paulo state. A total of 1921 bats from 15 municipalities in São Paulo state were examined from March 2010 to March 2011. It was obtained 14.89% (28/188) of positivity for T. gondii by Indirect Immunofluorescence Assay (IFA ≥ 16) and 18.61% (35/188) by Modified Agglutination Test (MAT ≥ 25) with low agreement between techniques when using Kappa (K = 0.046). From a total of 282 bioassays in mice, two bat isolates were obtained, TgBatBr1 from Molossus molossus, an insectivorous, male, adult bat, and TgBatBr2 from Desmodus rotundus, a vampire, male, adult bat, both causing 100% of mouse mortality. Genotyping of isolates and T. gondii positive primary samples from bats were performed by PCR-RFLP using markers SAG1, 5\'3\'SAG2, SAG3, BTUB, GRA6, alt. SAG2, c22-8, c29-2, PK1, Apico, L358 and CS3, revealing ToxoDB-RFLP genotypes #162 and #19, respectively, for isolates TgBatBr1 and TgBatBr2. Primers that amplify the 18S ribosomal DNA region were employed for molecular investigation of Sarcocystidae in primary samples and the positive samples were sequenced. Analysis of sequence could be accomplished for 48 Sarcocystidae positive samples. A 100% identity with T. gondii was found in four bats, and with Neospora caninum, Hammondia hammondi, Cystoisospora ohioensis and Frenkelia glareoli in a bat, respectively. Thirty-nine samples showed 94-98% identity with other Sarcocystidae and, probably, these are new species. Genotyping of positive primary samples for T. gondii was complete from one insectivorous bat (Eumops glaucinus), corresponding to genotype # 69 and from other insectivorous bat (E. glaucinus), showing genotype # 6, which corresponds to the Type BrI. It is necessary to investigate the importance of bats as reservoirs of infectious diseases, and it could be suggested the inclusion of the diagnosis of T. gondii as a differential to rabies. We also emphasize the importance of T. gondii genotypes from bats being shared with terrestrial hosts and of studies on Sarcocystidae in bats in order to better understand the host-parasite relationship. (AU)