Resumo

Abstract Pakistan is an agricultural country and fisheries play a very important role in the economic development of the country. Different diseases are prevalent in Pakistani fish but information related to the causative agents is not well-known. Keeping in view the significance of bacterial pathogens as the causative agents of multiple fish diseases, the present study was conducted for identification, characterization and analysis of virulence genes of Aeromonas spp. isolated from diseased fishes. A total of fifty fish samples having multiple clinical indications were collected from different fish farms of district Kasur, Punjab Pakistan. For isolation of Aeromonas spp. samples were enriched and inoculated on Aeromonas isolation medium. Isolates were identified and characterized by different biochemical tests, Analytical Profile Index (API) 20E kit and Polymerase Chain Reaction (PCR) assays. All isolates were screened for three putative virulence genes including aerolysin (aer), haemolysin (hyl) and heat labile cytotonic enterotoxin (alt). Seven isolates of Aeromonas (A.) hydrophila were retrieved and identified based on API 20E. These isolates were further confirmed as A. hydrophila on the basis of PCR assays. Three isolates were detected positive for the presence of virulence genes (alt and hyl). Whereas aerolysin (aer) gene was not present in any of A. hydrophila isolates. The present study confirmed A. hydrophila as the causative agent of epizootic ulcerative syndrome and motile Aeromonas septicemia in fish farms of district Kasur, Punjab Pakistan. Moreover, detection of two virulence genes (alt and hyl) in A. hydrophila isolates is a threat for fish consumers of study area.

Resumo O Paquistão é um país agrícola, onde a pesca desempenha um papel muito importante para o desenvolvimento econômico. Diferentes doenças são prevalentes em peixes do Paquistão, mas as informações relacionadas aos agentes causadores não são bem conhecidas. Tendo em vista a importância dos patógenos bacterianos como agentes causadores de múltiplas doenças em peixes, o presente estudo foi conduzido para identificação, caracterização e análise de genes de virulência de isolados de Aeromonas spp. de peixes doentes. Foram coletadas 50 amostras de peixes com múltiplas indicações clínicas em diferentes fazendas do distrito de Kasur, Punjab, Paquistão. Para isolar Aeromonas spp., as amostras foram enriquecidas e inoculadas em meio de isolamento. Os isolados foram identificados e caracterizados por diferentes testes bioquímicos, kit Analytical Profile Index (API) 20E, e ensaios de reação em cadeia da polimerase (PCR). Todos os isolados foram selecionados para três genes de virulência putativos, incluindo aerolisina (aer), hemolisina (hyl) e enterotoxina citotônica termolábil (alt). Sete isolados de Aeromonas hydrophila foram recuperados e identificados com base no API 20E. Esses isolados foram posteriormente confirmados como A. hydrophila de acordo com ensaios de PCR. Três isolados indicaram a presença de genes de virulência (alt e hyl), enquanto o gene aerolisina (aer) não esteve presente em nenhum dos isolados de A. hydrophila. O presente estudo confirmou A. hydrophila como o agente causador da síndrome ulcerativa epizoótica e septicemia móvel por Aeromonas em fazendas de peixes, no distrito de Kasur, Punjab, Paquistão. Além disso, a detecção de dois genes de virulência (alt e hyl) em isolados de A. hydrophila é uma ameaça para os consumidores de peixes da área de estudo.

Resumo

This study investigated the effects of dietary supplementation with Mansoa alliacea hydroalcoholic extracts on growth, blood and immune parameters of Arapaima gigas. Fish were fed for 30 days with diets enriched with 0, 4, 8, and 12 g kg-1 of M. alliacea hydroalcoholic extract and subjected to infection with Aeromonas hydrophila and handling stress. Fish fed with 8 g kg-1 of extract showed significant increase in final weight, specific growth rate and feed efficiency when compared to the other groups. Glucose, triglycerides, total proteins, and globulins increased significantly in fish fed with 8 g kg-1 of extract, whereas albumin decreased. The number of thrombocytes increased significantly with the dietary supplementation of 8 and 12 g kg-1 of extract. After the challenge with A. hydrophila and handling stress, fish fed with 8 g kg-1 of extract had significantly higher levels of glucose, globulins, and albumins, and fish fed with 8 and 12 g kg-1 of extract showed an increment of respiratory burst. Triglyceride levels dropped significantly in fish fed with 4, 8, and 12 g kg-1 of extract, whereas the number of neutrophils increased, and total thrombocytes, leukocytes and lymphocytes were higher in fish fed with 12 g kg-1 of extract. Dietary supplementation with M. alliacea extract at 8 g kg-1 was efficient in improving the growth and innate immunity of A. gigas, being potentially useful in fish farming to control the development of A. hydrophila infections.(AU)

Investigou-se os efeitos da suplementação com extrato hidroalcólico de Mansoa alliacea sobre o crescimento e parâmetros sanguíneos e imunológicos de Arapaima gigas. Os peixes foram alimentados por 30 dias com dietas enriquecidas com 0, 4, 8 e 12 g kg-1 de extrato hidroalcoólico de M. alliacea e submetidos à infecção por Aeromonas hydrophila e estresse de manejo. Os peixes alimentados com 8 g kg-1 de extrato apresentaram aumento significativo no peso final, taxa de crescimento específico e eficiência alimentar quando comparados aos demais grupos. Glicose, triglicerídeos, proteínas totais e globulinas aumentaram significativamente nos peixes alimentados com 8 g kg-1 de extrato, enquanto a albumina diminuiu. O número de trombócitos aumentou significativamente com a suplementação dietética de 8 e 12 g kg-1 de extrato. Após infecção com A. hydrophila e estresse de manejo, os peixes alimentados com 8 g kg-1 de extrato apresentaram níveis significativamente mais altos de glicose, globulinas e albuminas, e os peixes alimentados com 8 e 12 g kg-1 de extrato apresentaram incremento de explosão respiratória. Os níveis de triglicerídeos decresceram nos peixes alimentados com 4, 8 e 12 g kg-1 de extrato, enquanto o número de neutrófilos aumentou, e o número total de trombócitos, leucócitos e linfócitos foi maior nos peixes alimentados com 12 g kg-1 de extrato. A suplementação com a 8 g kg-1 de extrato de M. alliacea foi eficiente em melhorar o crescimento e a imunidade inata de A. gigas, sendo potencialmente útil na piscicultura para controlar o desenvolvimento de infecções por A. hydrophila.(AU)

Resumo

Vitamins C and E are potent antioxidants that reduces the harmful effects of stress in several species including fish. In this study, it was evaluated the effect of vitamins C, E and their combination in the acute aerocystitis induced by inactivated Aeromonas hydrophila in pacu. 288 fish were distributed into 4 groups supplemented for 90 days: G1-control; G2- supplemented with 500 mg of Vitamin C; G3-supplemented with 500 mg of Vitamin E; G4-supplemented with 500 mg of Vitamin C + 500 mg of Vitamin E. The fish were divided in three groups, the first was not inoculated; second were inoculated in the swim bladder with 3 x 109 CFU of inactivated A. hydrophila and the last one with saline. The inflammatory exudate was collected from the swim bladder for assessment of cellular component and cytochemistry. The results showed higher accumulation of leukocytes in fish inoculated with bacteria. Cytochemistry was effective identifying thrombocytes, lymphocytes, macrophages and, granulocytes present in the exudate. It was also observed fish that received supplementation with vitamins presented higher accumulation of total cells in the exudate with a predominance of lymphocytes and thrombocytes. These results suggested that supplementation with vitamins improved the immunological responses.

As vitaminas C e E são potentes antioxidantes que reduzem os efeitos nocivos do estresse em várias espécies, incluindo peixes. Neste estudo, avaliou-se o efeito das vitaminas C, E e sua combinação na aerocistite aguda induzida por Aeromonas hydrophila inativada em pacu. 288 peixes foram distribuídos em 4 grupos suplementados por 90 dias: G1-controle; G2- suplementado com 500 mg de Vitamina C; G3-suplementado com 500 mg de Vitamina E; G4-suplementado com 500 mg de Vitamina C + 500 mg de Vitamina E. Os peixes foram divididos em três grupos, o primeiro não foi inoculado; o segundo foi inoculado na bexiga natatória com 3 x 109 UFC de A. hydrophila inativada e a última com soro fisiológico. O exsudato inflamatório foi coletado da bexiga natatória para avaliação do componente celular e citoquímica. Os resultados mostraram maior acúmulo de leucócitos nos peixes inoculados com a bactéria. A citoquímica foi eficaz na identificação de trombócitos, linfócitos, macrófagos e granulócitos presentes no exsudato. Também foi observado que os peixes que receberam suplementação com vitaminas apresentaram maior acúmulo de células totais no exsudato com predominância de linfócitos e trombócitos. Esses resultados sugeriram que a suplementação com vitaminas melhorou as respostas imunológicas.

Resumo

Abstract Aeromonas hydrophila is a cause of infectious disease outbreaks in carp species cultured in South Asian countries including Pakistan. This bacterium has gained resistance to a wide range of antibiotics and robust preventive measures are necessary to control its spread. No prior use of fish vaccines has been reported in Pakistan. The present study aims to develop and evaluate inactivated vaccines against local strain of A. hydrophila in Pakistan with alum-precipitate as adjuvant. The immunogenic potential of vaccine was evaluated in two Indian major carps (Rohu: Labeo rohita, Mori: Cirrhinus mrigala) and a Chinese carp (Grass carp: Ctenopharyngodon idella). Fish were vaccinated intraperitoneally followed by a challenge through immersion. Fish with an average age of 4-5 months were randomly distributed in three vaccinated groups with three vaccine concentrations of 108, 109 and 1010 colony forming unit (CFU)/ml and a control group. Fixed dose of 0.1ml was applied to each fish on 1st day and a booster dose at 15 days post-vaccination (DPV). Blood samples were collected on 14, 28, 35, 48 and 60 DPV to determine antibody titers in blood serum using compliment fixation test (CFT). Fish were challenged at 60 DPV with infectious A. hydrophila with 108 CFU/ml through immersion. Significantly higher levels of antibody titers were observed from 28 DPV in all vaccinated groups as compared to those in the control group. In challenge experiment the average RPS (relative percent survivability) was 71% for groups vaccinated with 109 and 1010 CFU/ml and 86% for 108 CFU/ml. Vaccine with 108 CFU/ml induced highest immune response followed by 109 and 1010 CFU/ml. The immune response of L. rohita and C. idella was better than that of C. mrigala. In general, normal histopathology was observed in different organs of vaccinated fish whereas minor deteriorative changes were found in fish vaccinated with higher concentrations of the vaccine.

Resumo Aeromonas hydrophila é uma causa de surtos de doenças infecciosas em espécies de carpas cultivadas em países do sul da Ásia, incluindo o Paquistão. Essa bactéria ganhou resistência a uma ampla gama de antibióticos, e medidas preventivas robustas são necessárias para controlar sua disseminação. Nenhum uso anterior de vacinas para peixes foi relatado no Paquistão. O presente estudo tem como objetivo desenvolver e avaliar vacinas inativadas contra cepa local de A. hydrophila no Paquistão com precipitado de alúmen como adjuvante. O potencial imunogênico da vacina foi avaliado em duas carpas principais indianas (Rohu: Labeo rohita, Mori: Cirrhinus mrigala) e uma carpa chinesa (Grass Carp: Ctenopharyngodon idella). Os peixes foram vacinados por via intraperitoneal, seguido de um desafio por imersão. Peixes com idade média de 4-5 meses foram distribuídos aleatoriamente em três grupos vacinados com três concentrações de vacina de 108, 109 e 1010 unidades formadoras de colônias (UFC) / ml e um grupo de controle. Foi aplicada dose fixa de 0,1ml em cada peixe no 1º dia e dose de reforço 15 dias pós-vacinação (DPV). Amostras de sangue foram coletadas em 14, 28, 35, 48 e 60 DPV para determinar os títulos de anticorpos no soro sanguíneo usando o teste de fixação de elogio (CFT). Os peixes foram desafiados a 60 DPV com infecciosa A. hydrophila com 108 CFU / ml por imersão. Níveis significativamente mais elevados de títulos de anticorpos foram observados em 28 DPV em todos os grupos vacinados, em comparação com aqueles no grupo de controle. Na experiência de desafio, o RPS médio (sobrevivência percentual relativa) foi de 71% para os grupos vacinados com 109 e 1010 CFU / ml e 86% para 108 CFU / ml. A vacina com 108 UFC / ml induziu a maior resposta imune seguida por 109 e 1010 UFC / ml. A resposta imune de L. rohita e C. idella foi melhor do que a de C. mrigala. Em geral, histopatologia normal foi observada em diferentes órgãos de peixes vacinados, enquanto pequenas alterações deteriorantes foram encontradas no grupo de controle e nos peixes vacinados com concentrações mais altas da vacina.

Resumo

In recent decades, Aeromonas hydrophila has emerged as a foodborne bacterial pathogen of public health concern, especially as it exhibits resistance to the major chemical sanitizers commonly used in the food industry. Meanwhile, this pathogen may be spread from diseased fish flesh through the contamination of equipment contact surfaces during food processing, thus posing a food safety risk. Thise determined the susceptibility profiles of retail fish-borne A. hydrophila isolates to 24 common antibiotics and five major sanitizers used in the food industry. The polymerase chain reaction technique was used to confirm all A. hydrophila isolates to the species level, and the agar diffusion method was applied to determine the antimicrobial susceptibility profiles. All isolates were confirmed to be A. hydrophila species. This bacterium was observed to have resistance to multiple antibiotics, with the highest resistance index being for those of the beta-lactam class. Additionally, the isolates showed high resistance to four of the five chemical sanitizers tested, with the highest resistance rate being toward sodium hypochlorite. The results suggested that A. hydrophila isolates with multiple resistance to the antimicrobials and main sanitizers used in the food industry can be found in retail fish sold in the Cuiabá region of Mato Grosso, Brazil.

Aeromonas hydrophila emergiu nas últimas décadas como um patógeno humano relevante. O fato desse patógeno alimentar emergente apresentar resistência antimicrobiana é um desafio considerável para as Agências de Saúde devido à resistência desta espécie aos principais sanitizantes químicos comumente utilizados na indústria alimentícia em que representa um risco à segurança dos alimentos, uma vez que pode contribuir para a disseminação desta bactéria na carne de peixes e levar à contaminação da superfície de contato dos equipamentos durante o processamento dos alimentos. Este estudo teve como objetivo determinar os padrões de suscetibilidade de isolados de A. hydrophila de peixes comercializados no varejo a 24 antibióticos comuns e cinco principais sanitizantes utilizados nas indústrias alimentícias. Neste estudo, todos os isolados de A. hydrophila foram confirmados em nível de espécie pela técnica de Reação em Cadeia da Polimerase (PCR). A técnica de difusão em ágar foi utilizada para determinar o perfil de suscetibilidade antimicrobiana frente aos 24 antibióticos testados e para avaliar a suscetibilidade aos principais sanitizantes utilizados na indústria alimentícia. A partir dos resultados, todos os isolados foram confirmados como sendo da espécie A. hydrophila pela técnica de PCR molecular. Observou-se A. hydrophila com perfil de resistência a múltiplos antibióticos, em que os da classe dos Beta-Lactâmicos foram os antimicrobianos com maior índice de resistência. Além disso, a suscetibilidade aos sanitizantes apresentou alta resistência em quatro dos cinco sanitizantes testados, sendo o hipoclorito de sódio foi o sanitizante químico com maior índice de resistência entre os isolados deste estudo. Os resultados sugerem que isolados de A. hydrophila com perfil de resistência a antimicrobianos e aos principais sanitizantes utilizados na indústria alimentícia podem ser encontrados em peixes comercializados no varejo da região de Cuiabá/Mato Grosso.

Resumo

Infection caused by Aeromonas brings great harm to fish farming. Among the factors associated with bacterial pathogenesis, iron uptake can contribute to the survival and virulence of bacteria within hosts. The aim of this study was to check the presence of genes related to iron uptake in Aeromonas hydrophila deriving from aquatic organisms in the São Francisco Valley and associate the presence of these genes with the ability to grow in media containing different concentrations of iron. The DNAs of 41 isolates were extracted and used in PCRs to verify the presence of the Fur, AmoA and pvcAB genes related to iron uptake. The growth of the isolates belonging to different genetic profiles was verified in culture media containing different iron concentrations. Two isolates were positive for the presence of the Fur gene, seven for the AmoA gene and two for the pvcAB gene. The growth test showed that the low availability of iron did not interfere in the growth of the isolates, nor in the isolate that did not contain any of the genes evaluated in this study, suggesting that the iron uptake's mechanisms of the tested isolates may be related to other genes and proteins.

Infecções causadas por Aeromonas trazem grandes prejuízos à piscicultura. Entre os fatores associados à patogênese bacteriana, a captação de ferro pode contribuir para a sobrevivência e a virulência das bactérias dentro dos hospedeiros. O objetivo deste estudo foi verificar a presença de genes relacionados à captação de ferro em Aeromonas hydrophila provenientes de organismos aquáticos do Vale do São Francisco e associar a presença desses genes com a capacidade de as bactérias crescerem em meios contendo diferentes concentrações de ferro. Os DNAs de 41 isolados foram extraídos e utilizados em PCRs para verificar a presença dos genes Fur, AmoA e pvcAB relacionados à captação de ferro. O crescimento dos isolados pertencentes a diferentes perfis genéticos foi verificado em meios de cultura contendo diferentes concentrações de ferro. Dois isolados foram positivos para a presença do gene Fur, sete para a do gene AmoA e dois para a do gene pvcAB. O teste de crescimento mostrou que a baixa disponibilidade de ferro não interferiu no crescimento dos isolados nem no isolado que não continha nenhum dos genes avaliados neste estudo, sugerindo que os mecanismos de captação de ferro dos isolados testados podem estar relacionados a outros genes e proteínas.

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Zileuton is an inhibitor of the 5-lipoxygenase enzyme that transforms essential fatty acid (EFA) substrates into leukotrienes (LTB4, LTC4, LTD4 and LTE4), but little is known about the use of this drug in teleost fish. Therefore, the objective of this study was to evaluate the clinical safety of treatments with 2,25 mg and 4,50 mg of zileuton/Kg-1 (bodyweight), administered orally in the diet, through biochemical and hematological analysis during the acute inflammatory reaction in Nile tilapia (Oreochromis niloticus), induced by Aeromonas hydrophila bacterins. The study used eighty tilapias, conditioned in 20 tanks (n=4), constituting the following treatments: T0 (control), T1 (2,25 mg zileuton) and T2 (4,50 mg zileuton), being sampled eight animals per treatment in three periods: 6, 24 and 48 hours post-inoculation, and a 10th group consisting of fish without any type of stimulus to obtain the reference values. In order to evaluate and determine the blood count and serum biochemical, it was necessary to collect blood samples. The hematology results of the tilapia treated with zileuton did not reveal alterations between tilapia subjected to different treatments and control fish (T0). The liver cytotoxicity analysis of tilapias treated with zileuton did not reveal significant (p≥0,05) alterations in AST and ALT serum enzymatic activity. The study of tilapia blood total protein showed decrease in the T1 group at 48 HPI. As the treatment time progressed, the results indicated decrease in the serum albumin levels for T2 group at 24 HPI. The determination of serum biochemichal of creatinine, cholesterol, triglycerides, and glucose did not differ statistically between treatments. The results observed in the hematological and biochemical analyzes allows to conclude that zileuton administered orally, at doses of 2,25 and 4,50 mg/Kg-1 (body weight) demonstrated to be clinically safe.(AU)

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This study aimed to evaluate the growth performance and animal health in juveniles of Nile tilapia (Oreochromis niloticus) fed a practical diet with total replacement of fishmeal (FM) by soybean meal, as well the effect on survival, following pathogenic challenge with Aeromonas hydrophila. Two hundred juveniles of Nile tilapia were stored in 8 tanks (800 L). The experiment consisted of two treatments: a commercial diet formulated with FM (control) and a practical diet with total replacement of FM by soybean meal (SM). The variables of water quality, zootechnical and hematological parameters were measured. In addition, at the end of the experiment, the fish were submitted to a challenge with A. hydrophila. Higher cost per kg of fish was obtained in the control treatment (with FM). N retention was higher in fish fed a diet without FM, while hematological, immunological parameters and survival after the experimental challenge did not differ between treatments. It is possible to reduce dietary costs by replacing FM with SM without affecting growth performance or animal health, in addition to benefiting the environment by reducing the excretion of N in water.

O objetivo deste estudo foi avaliar o desempenho de crescimento e saúde em juvenis de tilápia-do-nilo (Oreochromis niloticus) alimentados com dieta prática com substituição total da farinha de peixe (FP) por farelo de soja (FS), bem como o efeito na sobrevivência, após desafio patogênico com Aeromonas hydrophila. Duzentos juvenis de tilápia-do-nilo foram alojados em 8 tanques (800 L). O experimento consistiu de dois tratamentos: dieta comercial formulada com FP (controle) e dieta prática com substituição total do FP pelo FS. Foram mensuradas as variáveis de qualidade da água, parâmetros zootécnicos e hematológicos. Além disso, ao final do experimento, os peixes foram submetidos a um desafio com A. hydrophila. Maior custo por kg de peixe foi obtido no tratamento controle (com FP). A retenção de N foi maior nos peixes alimentados com dieta sem FP, enquanto os parâmetros hematológicos, imunológicos e a sobrevivência após o desafio experimental não diferiram entre os tratamentos. É possível reduzir os custos dietéticos substituindo a FP pelo FS sem afetar o desempenho do crescimento e a saúde do animal, além de beneficiar o meio ambiente ao reduzir a excreção de N na água.

Resumo

The essential oil of alfavaca (Ocimum gratissimum) contains important compounds, such as 1.8-cineol and eugenol. This study evaluated the effects of diets containing alfavaca essential oil on the zootechnical performance, plasma glucose, leukocyte respiratory activity, haematology, and intestinal histomorphometry in "cachara" (Pseudoplatystoma reticulatum) challenged with Aeromonas hydrophila. A total of 300 juvenile fish, with an average total length of 14.98 ± 0.28 cm and average weight of 18.84 ± 1.22 g, distributed in 20 tanks of 80 L, were fed twice a day with a diet containing essential oil at 0.5, 1.0, or 1.5% or without its inclusion in five replicates. After 45 days, blood collection and mid-intestinal bowel were sampled, before a challenge with Aeromonas hydrophila was performed. The fish supplemented with 1.0% of essential oil presented better weight gain, mean corpuscular volume, concentration of thrombotic and neutrophils, respiratory activity of leukocytes, and height of villi (p < 0.05) when compared to other groups. The cumulative mortality response was lower for fish fed 1.5% essential oil of alfavaca diets. Thus, the use of alfavaca essential oil is recommended in the diet of cachara catfish (P. reticulatum) at the level of up to 1.0% for 45 days for improvements in the zootechnical, haematological, and intestinal histomorphometric parameters.(AU)

O óleo essencial de alfavaca (Ocimum gratissimum) contém componentes importantes, como por exemplo o 1.8-cineol e o eugenol. Este estudo avaliou os efeitos de dietas contendo óleo essencial de alfavaca sobre o desempenho zootécnico, glicose plasmática, atividade respiratória leucocitária, hematologia e histomorfometria intestinal em cachara (Pseudoplatystoma reticulatum) desafiado com Aeromonas hydrophila. Um total de 300 peixes juvenis, com comprimento total médio de 14,98 ± 0,28 cm e peso médio de 18,84 ± 1,22 g, distribuídos em 20 tanques de 80 L, alimentados duas vezes ao dia com dieta contendo o óleo essencial a 0,5, 1,0 ou 1,5 % ou sem inclusão de óleo em cinco repetições. Após 45 dias, foi realizada a biometria final, coleta de sangue, amostra do intestino médio e desafio com Aeromonas hydrophila. Após o período experimental, a dieta suplementada com 1,0% do óleo essencial apresentou melhor ganho de peso, volume corpuscular médio, concentração de trombóticos e neutrófilos, atividade respiratória de leucócitos e altura de vilosidades (p < 0,05) quando comparada aos demais grupos. A resposta de mortalidade cumulativa foi menor para peixes alimentados com dietas com o óleo essencial de alfavaca a 1,5%. Assim, o uso de óleo essencial de alfavaca é recomendado na dieta do bagre cachara (P. reticulatum) no nível de até 1,0% por 45 dias para melhorias nos parâmetros zootécnicos, hematológicos e histomorfométricos intestinais.(AU)

Resumo

The study evaluated the toxicity of Lippia origanoides essential oil (EO) in tambaqui (Colossoma macropomum) and its in vivo activity against Aeromonas hydrophila. Toxicity was tested by tambaqui exposure to 0, 5, 10, 12.5, 15, 17.5 and 20 mg L-1 of L. origanoides EO for 96 h. The mean lethal concentration (LC50) was 15.2 mg L-1. After tambaqui exposure to sublethal concentrations of L. origanoides EO (7.6 and 11.4 mg L-1) for 96 h, only the 7.6 mg L-1 level caused minor hematologic and biochemical changes that include increase in mean corpuscular volume and decrease in total protein, which did not compromise fish homeostasis. Tambaqui experimentally infected with A. hydrophila had higher survival rate (79.2%) after therapeutic bath with 10 mg L-1 L. origanoides EO. Therefore, tambaqui exhibits moderate tolerance to L. origanoides EO, and this oil has potential for use in the treatment of tambaqui infected with A. hydrophila.

O presente estudo avaliou a toxicidade do óleo essencial de Lippia origanoides em tambaqui (Colossoma macropomum) e sua atividade in vivo frente à Aeromonas hydrophila. Para os testes de toxicidade, tambaquis foram expostos a 0, 5, 10, 12,5, 15, 17,5 e 20 mg L-1 do óleo essencial de L. origanoides por 96 horas. A concentração média letal (CL50) foi estimada em 15,2 mg L-1. Após exposição dos tambaquis às concentrações subletais de L. origanoides (7,6 e 11,4 mg L-1) por 96 horas, poucas alterações hematológicas e bioquímicas como aumento no volume corpuscular médio e decréscimo nos valores de proteínas totais foram observadas na concentração de 7,6 mg L-1, o que não compromete a homeostase orgânica dos peixes. Tambaquis experimentalmente infectados com A. hydrophila alcançaram maior taxa de sobrevivência (79,2%) após banho terapêutico com 10 mg L-1 do óleo essencial de L. origanoides. Portanto, o tambaqui exibe moderada tolerância ao óleo essencial de L. origanoides e este óleo tem potencial para uso no tratamento de tambaqui (C. macropomum) infectado com A. hydrophila.

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In vertebrates, the inflammatory reaction is responsible for modulating the initial nonspecific defense until specific immunity is acquired. In this context, numerous studies in mammals have demonstrated the participation of insulin in the inflammatory response, favoring cell proliferation and the migratory capacity of endothelial cells, vascular smooth muscle cells and monocytes, as well as mediating the expression of pro-thrombotic and pro-fibrotic factors. However, little is known about the effect of this peptidic hormone on the inflammatory reaction in teleostean fish. In order to evaluate the participation of insulin in the acute inflammatory response of Nile tilapia, Oreochromis niloticus, during aerocystitis induced by Aeromonas hydrophila, and 48 aloxane-diabetic tilapia were used, constituting two groups: diabetics treated with insulin and diabetics without treatment. After six, 24, and 48 hours of inflammatory stimulation, tilapia were submitted to deep anesthesia for euthanasia and necropsy, and thus, obtaining exudate and harvesting of the swim bladder for analysis of the inflammatory reaction. Based on this premise, the present study demonstrated the participation of insulin in the acute inflammatory reaction of alloxan-diabetic tilapia by favors the cellular accumulation in the exudate, the proliferative effect of fibrous tissue and neovascularization in the inflamed site. Such findings reinforce the old hypothesis that insulin plays an important role in the innate immune response during acute inflammatory reaction, being an important pro-inflammatory hormone. However, Nile tilapia proved to be a promising experimental model for studies and advances in research involving diabetes mellitus.(AU)

Em vertebrados, a reação inflamatória é responsável por modular a defesa inicial não-específica, até que imunidade específica seja adquirida. Neste contexto, inúmeros estudos em mamíferos têm demonstrado a participação da insulina sobre a resposta inflamatória, favorecendo a proliferação celular e a capacidade migratória das células endoteliais, células do músculo liso vascular e dos monócitos, além de mediar a expressão de fatores pró-trombótico e pró-fibrótico. Porém, pouco se conhece o efeito deste hormônio peptídico sobre a reação inflamatória em peixes teleósteos. Para avaliar a participação da insulina sobre a resposta inflamatória aguda em tilápias do Nilo, Oreochromis niloticus, na aerocistite induzida por Aeromonas hydrophila, foram utilizadas 48 tilápias aloxano-diabéticas, constituindo dois grupos: dos diabéticos tratados com insulina e diabéticos sem tratamento. Após, seis, 24 e 48 horas do estimulo inflamatório, as tilápias foram submetidas à anestesia profunda para eutanásia e necropsia, e assim, obtenção de exsudato e colheita da bexiga natatória para analise da reação inflamatória. Partindo-se desta premissa, o presente estudo demonstrou a participação da insulina na reação inflamatória aguda infecciosa de tilápias do Nilo aloxano-diabéticas por favorecer o acúmulo positivo celular no exsudato, assim como o efeito proliferativo de tecido fibroso e a neovascularização no local inflamado. Tais achados reforçam a hipótese de que a insulina desempenha importante papel na resposta imune inata na reação inflamatória aguda, sendo um importante hormônio pró-inflamatório. Contudo, a tilápia do Nilo demonstrou ser um modelo experimental promissor para estudos e avanços em pesquisas envolvendo o diabetes mellitus.(AU)

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The immunomodulatory effects of dietary ß-glucan were evaluated in silver catfish. ß-glucan was added to the diet (0.01%, and 0.1%) and fed to the fish for 21 days, to evaluate effects on blood and some innate immune parameter, or fed for 42 days, to evaluate growth rate and resistance to challenge with pathogenic Aeromonas hydrophila. We found that adding ß-glucan to the diet had no effect on fish growth and no effect on blood cells, or serum bacterial agglutination and serum myeloperoxidase activity. However, fish that received ß-glucan in the diet had the natural hemolytic activity of complement significantly higher compared to control fish. Furthermore, fish fed with ß-glucan and challenged with A. hydrophila had fewer bacteria in blood and presented a significantly higher survival rate compared to control fish. Thus, we concluded that ß-glucan might be explored as feed additive aiming to improve silver catfish innate immunity and resistance to specific pathogen.(AU)

O uso da ß-glucana como suplemento alimentar foi avaliado em jundiás. A ß-glucana foi adicionada à ração na proporção de 0.01%, e 0.1% e fornecida aos peixes por 21, para avaliar dados hematológicos e parâmetros do sistema imune natural, ou 42 dias, para avaliar ganho de peso e resistência ao desafio com Aeromonas hydrophila. A adição da ß-glucana na dieta não afetou o ganho de peso e não induziu alterações hematológicas nem alterações nos níveis de aglutininas e mieloperoxidase sanguínea. No entanto, a atividade hemolítica natural do sistema do complemento foi significativamente maior nos peixes alimentados com ß-glucana. Além disso, nos peixes alimentados com ß-glucana e desafiados com A. hydrophila, o número de bactérias isoladas do sangue foi significativamente menor, e a sobrevivência ao desafio foi significativamente maior do que nos peixes que não receberam ß-glucana. Consequentemente, concluímos que a ß-glucana tem potencial imunomodulador quando adicionada à dieta, nas condições experimentais aqui indicadas, e contribui para aumentar imunidade natural e a resistência dos jundiás ao desafio com patógenos específicos.(AU)

Resumo

Aeromonas hydrophila and Campylobacter jejuni are bacteria of emerging importance in public health. However, little has been published about fish contaminated by these pathogens. The present study aimed to verify the presence of Aeromonas hydrophila and Campylobacter jejuni in fresh tuna samples (Thunnus spp.) caught off the coast of Santa Catarina State and distributed in the wholesale market of São Paulo/SP. A total of 85 tuna fillet samples were collected and examined by PCR and bacteriological analyses. Aeromonas spp. was detected in 11/85 (13%) samples, with 10/11 (90.9 %) being confirmed as Aeromonas hydrophila by PCR. Campylobacter spp. was found in 10/85 (11.7%) samples, 10/10 (100%) identified as Campylobacter jejuni by PCR and conventional biochemical analyses. Both pathogens were found in 2/85 (2.3%) samples. This is the first report on the contamination of fresh tuna by Campylobacter jejuni and Aeromonas hydrophila in Brazil. In addition to show that tuna can be a vehicle for transmission of pathogens when consumed raw, it emphasizes the importance of further studies to support the control these pathogens in fish...

Aeromonas hydrophila e Campylobacter jejuni são bactérias de importância emergente em saúde pública, porém com escassos trabalhos publicados na área de pescado. O presente estudo investigou a presença de Aeromonas hydrophila e Campylobacter jejuni em amostras de atum (Thunnus spp.) fresco, capturados no litoral de Santa Catarina e distribuídos no comércio atacadista de São Paulo, SP. Foram colhidas 85 amostras de filé de atum e processadas por análises bacteriológicas e PCR. Do total, 11/85 (13%) amostras foram positivas para Aeromonas spp., sendo 10/11 (90,9%) confirmadas como Aeromonas hydrophila pela PCR. Para Campylobacter spp., 10/85 (11,7%) foram positivas, sendo 10/10 (100%) identificadas como Campylobacter jejuni pelas provas bioquímicas tradicionais e PCR ressaltando-se que duas (2/85 - 2,3%) amostras de atum albergavam ambos os patógenos. Trata-se do primeiro relato no Brasil de contaminação de atum fresco por Campylobacter jejuni e Aeromonas hydrophila, indicando que este alimento ingerido in natura pode ser um veículo de transmissão de agentes patogênicos, ressaltando-se a importância de estudos adicionais que deem suporte ao controle desses microrganismos em pescado consumido cru...

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In fish farmings, diseases can be reduced by using immunostimulants. The aim of this study was to evaluate the immunostimulant potential of Mentha piperita in tambaqui fed with 0, 0.5, 1.0 and 1.5% of oil per kg of commercial fish feed. The fish were inoculated with Aeromonas hydrophila to challenge them. Hematological and biochemical parameters were determined after 30 days of feeding and seven days after the challenge. There was no mortality and M. piperita oil did not influence fish production parameters. However, blood hemoglobin concentration (Hb) increased in the fish fed with 0.5 and 1.5% of oil per kg of diet; albumin increased in those fed with 1.0%; cholesterol increased in all groups with oil; and triglycerides increased in those fed with 0.5%. After the bacterial challenge, the fish showed decreases in Hb when fed with diet enriched with 1.5% oil per kg of diet, in mean corpuscular volume with 1.0% and in mean corpuscular hemoglobin concentration with 0 and 1.5%. Protein levels increased in groups with 0 and 1.5% of oil and albumin when fed with 0 and 1.0%; cholesterol levels increased in the control group; and high levels of triglycerides were observed in the groups with 0, 0.5 and 1.5%. Thus, M. piperita essential oil promoted hematological alterations in tambaqui and can be recommended in diets containing up to 1.0% per kg, because of the minimal physiological modifications caused. However, additional studies are necessary to obtain more information regarding to the physiological effects of this immunostimulant.

Em pisciculturas, doenças podem ser minimizadas com o uso de imunoestimulantes. O objetivo deste estudo foi avaliar o potencial imunoestimulante do óleo essencial de Mentha piperita na dieta de tambaqui com dietas contendo 0; 0,5; 1,0; 1,5% de inclusão do óleo por kg de ração comercial para peixes. Os tambaquis foram desafiados com a bactéria Aeromonas hydrophila. Hematologia e bioquímica dos tambaquis foram determinados após 30 dias de alimentação e sete dias do desafio. Não houve mortalidade dos peixes durante o experimento, sendo que o óleo não influenciou os parâmetros produtivos dos peixes. Entretanto, a concentração de hemoglobina (Hb) aumentou em peixes alimentados com 0,5 e 1,5% de óleo por kg de dieta; a albumina aumentou em 1,0%; o colesterol aumentou em todos os grupos com óleo; e triglicérides em 0,5% por kg de dieta. Após desafio bacteriano ocorreram diminuições da Hb nos peixes alimentados com 1,5% de óleo; do volume corpuscular médio com 1,0%; e da concentração de hemoglobina corpuscular média com 0 e 1,5%. Níveis aumentados de proteína nos grupos 0 e 1,5%; da albumina em 0 e 1,0%; do colesterol no controle; e dos triglicérides em 0, 0,5 e 1,5% de óleo na dieta. Assim o óleo essencial de M. piperita na dieta promoveu alterações hematológicas e pode ser recomendado seu uso em inclusões de até 1,0% por kg da dieta de tambaqui, devido às mínimas alterações fisiológicas causadas. Entretanto, estudos adicionais são necessários, de modo a obter informações sobre os efeitos fisiológicos deste imunoestimulante.

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O objetivo deste estudo foi isolar e caracterizar Aeromonas hydrophila, causadora de mortalidade em peixes descrever as alterações histopatológicas provocadas nas brânquias de machos de beta Bettas plendens. Foram utilizados dez peixes que apresentavam característica de alteração de comportamento como anorexia, letalidade e apatia. Amostras de água, muco e brânquias foram inoculadas em meio de cultura Agar sangue a 25ºC por 48 horas. Foi caracterizado A. hidrófila como principal causa do surto de mortalidade. Foram observadas alterações histopatológicas nas brânquias desde fusão lamelar secundária e necrose do tecido. A. hidrophila prejudica o órgão respiratório de forma irreversível, comprometendo as trocas gasosas levando o peixe ao óbito.

The objective of this study was to isolate and characterize Aeromonas hydrophila, a cause of mortality, and to describe the histopathological changes caused in the gills of Bettas plendens. Ten fish presenting change behavior such as anorexia, lethality and apathy were used in this study. Water, mucus and gill samples were inoculated in blood agar culture medium at 25°C for 48 hours. Aeromonas hidrophila was characterized as the main cause of mortality outbreak. Histopathological changes were observed in the gills, from secondary lamellar fusion to tissue necrosis. A. hidrophila irreversibly harms the respiratory organ, compromising the gaseous exchanges, which leads to the death of the fish.

El objetivo de este estudio fue aislar y caracterizar Aeromonas hydrophila, causante de mortalidad en peces, y describir las alteraciones histopatológicas causadas en las branquias de machos de beta Bettas plendens. Se utilizó 10 peces que presentaban características de cambio de comportamiento como anorexia, mortalidad y apatía. Las muestras de agua, moco y branquias fueron inoculadas en medio de cultivo Agar sangre a 25° C durante 48 horas. Fue caracterizado A. hidrófila como principal causa del surto de mortalidad. Se ha observado cambios histopatológicos en las branquias, desde fusión lamelar secundaria y necrosis de los tejidos. A. hidrophila compromete el órgano respiratorio de forma irreversible, comprometiendo los cambios gaseosos y llevando los peces a la muerte.

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Background: Motile aeromonads are considered to be one of the most important food-borne pathogens because of potential human health significance. Aerolysin and hemolysin are virulence factors playing a significant role in the pathogenesis of infections. Antimicrobial resistance is an important problem limiting therapeutic options. The main objective of the present study was to isolate motile Aeromonas species from cow and Anatolian buffalo quarter milk samples and determine the antimicrobial resistance and hemolysin (hlyA) and aerolysin (aerA) virulence genes of isolated species by PCR.Material, Methods & Results: The present study was carried out on apparently healthy 200 dairy cows and 103 Anatolian water buffaloes in different stages of lactation, hand-milked twice a day, held in private farms located in Afyonkarahisar province of Western Turkey. Before milking, 771 and 399 quarter milk samples were collected from cows and Anatolian buffaloes, respectively. For the isolation, APW, SAA and blood agar were used. The certain identification of isolates was made using API 20NE system. The strains were tested for susceptibility to 21 different antibiotics by disc diffusion test. Bacterial DNAs were extracted from all strains using a genomic DNA extraction kit and strains were screened for the presence of hlyA and aerA genes by PCR. While A. hydrophila was isolated from 22 (1.9%) of 1170 quarter milk samples, A. caviae and A. sobria were not detected in the examined milk samples. The isolation rate of A. hydrophila from cow and buffalo milk samples was 2.1% (n = 16) and 1.5% (n = 6), respectively. The highest resistance rate in strains was against ampicillin (100%), followed by ampicillin-sulbactam (95.5%), methicillin (95.5%) and cephazoline (81.8%). The most of strains were also resistant at least to one of the antibiotics.[...]

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Background: Modified embryo in vitro culture (IVC) systems have been devised for the culture of individual embryos, suchas in microdroplets, capillary tubes, or co-cultures systems. However, the development of the Well-of-the-Well (WOW)system takes advantage of both the individual and the grouped culture systems, as embryos are cultured into microwellsdisposed into a larger well. The aim of this study was to evaluate the in vitro and in vivo developmental potential of handmade cloning (HMC)-derived cloned bovine embryos after the IVC in three microwell (WOW) systems.Material, Methods & Results: Adipose tissue-derived mesenchymal stem cells (MSCs) isolated after subcutaneous biopsy from a Nellore adult female were used as nucleus donor cells for cloning. Collected adipose tissue was incubated in0.075% collagenase for 60 min at 39oC. After digestion, cell suspension was centrifuged at 80 g for 10 min, supernatantwas discarded, and 2 mL of Red Blood Cells Lysis Buffer (RBC) was added to the pellet, remaining for 2 min. The RBCbuffer was diluted with 20 mL PBS, with cell suspension spun at 80 g for 5 min. Supernatant was discarded and the pelletre-suspended in DMEM culture medium + 10% fetal calf serum (FCS). Following cell counting, 5 x 105 cells were seededin 25-cm² bottles containing 6 mL DMEM + 10% FCS, and cultured at 38.3°C, 5% CO2 in air and saturated humidity.After IVM, oocytes were denuded and incubated in demecolcine, followed by zona pellucida removal, oocyte bisection,embryo reconstruction, electrofusion and chemical activation. Cloned embryos were allocated to one of three IVC groups:cWOW: conventional microwells (250 µm, round); mWOW: modified microwells (130 µm, conical); and WOW-PDMS:microwells in polydimethylsiloxane chips (170 µm, cylindrical, with interconnecting microchannels); IVF embryos wereused as controls. Cleavage (D2), blastocyst (D7) and pregnancy (D30) rates were analyzed by the χ2 test, for P < 0.05...

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O objetivo deste estudo foi isolar e caracterizar Aeromonas hydrophila, causadora de mortalidade em peixes descrever as alterações histopatológicas provocadas nas brânquias de machos de beta Bettas plendens. Foram utilizados dez peixes que apresentavam característica de alteração de comportamento como anorexia, letalidade e apatia. Amostras de água, muco e brânquias foram inoculadas em meio de cultura Agar sangue a 25ºC por 48 horas. Foi caracterizado A. hidrófila como principal causa do surto de mortalidade. Foram observadas alterações histopatológicas nas brânquias desde fusão lamelar secundária e necrose do tecido. A. hidrophila prejudica o órgão respiratório de forma irreversível, comprometendo as trocas gasosas levando o peixe ao óbito...

The objective of this study was to isolate and characterize Aeromonas hydrophila, a cause of mortality, and to describe the histopathological changes caused in the gills of Bettas plendens. Ten fish presenting change behavior such as anorexia, lethality and apathy were used in this study. Water, mucus and gill samples were inoculated in blood agar culture medium at 25°C for 48 hours. Aeromonas hidrophila was characterized as the main cause of mortality outbreak. Histopathological changes were observed in the gills, from secondary lamellar fusion to tissue necrosis. A. hidrophila irreversibly harms the respiratory organ, compromising the gaseous exchanges, which leads to the death of the fish...

El objetivo de este estudio fue aislar y caracterizar Aeromonas hydrophila, causante de mortalidad en peces, y describir las alteraciones histopatológicas causadas en las branquias de machos de beta Bettas plendens. Se utilizó 10 peces que presentaban características de cambio de comportamiento como anorexia, mortalidad y apatía. Las muestras de agua, moco y branquias fueron inoculadas en medio de cultivo Agar sangre a 25° C durante 48 horas. Fue caracterizado A. hidró- fila como principal causa del surto de mortalidad. Se ha observado cambios histopatológicos en las branquias, desde fusión lamelar secundaria y necrosis de los tejidos. A. hidrophila compromete el órgano respiratorio de forma irreversible, comprometiendo los cambios gaseosos y llevando los peces a la muerte...

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The objective of this study was to evaluate the effect of Ascophyllum nodosum brown seaweed meal (FAM) on the health of Nile tilapia submitted to inoculation with Aeromonas hydrophila. The experiment was conducted for a period of 40 days using 120 Nile tilapia fingerlings, with age of 40 days, distributed in 20 tanks. A diet including Ascophyllum nodosum seaweed meal at 20g.kg-1 and a control diet (without FAM) were provided which constituted the treatments. Thirty days after beginning the experiment, A. hydrophila was inoculated by bacterial inoculum diluted in sterile saline solution at a concentration of 10(6) CFU ml-1. Except for the width, which was greater for the treatment with the provision of FAM (P<0.05), there was no influence on the performance parameters of the fingerlings, but the occurrence of lesions in animals inoculated with A. hydrophila and fed with FAM was lower and they also exhibited a decline in the lesions in a shorter period of time than the control group. FAM prevents hepatopancreatic congestion in infected animals. Ascophyllum nodosum brown seaweed meal reduced the number of lesions in fish in a shorter time when compared to the control group.

O objetivo desse estudo foi avaliar o efeito da farinha de alga marinha marrom Ascophyllum nodosum (FAM) em alevinois de tilápias do Nilo sob desafio sanitário com inoculação de Aeromonas hydrophila. O experimento foi realizado durante um período de 40 dias com a utilização de 120 alevinos de tilápia do Nilo, distribuídos em 20 aquários. Foi fornecida uma ração com inclusão da farinha da alga marinha Ascophyllum nodosum a 20g.kg ração-1 e uma ração testemunha (sem FAM), que constituiram os tratamentos. Após 30 dias experimentais foi realizada a inoculação de Aeromonas hydrophila por meio de um preparado de inóculo bacteriano com diluição em solução salina estéril a concentração de 106 UFC/ml. Exceto para a largura, que foi maior para o tratamento com o fornecimento da FAM (P<0,05), não houve influência sobre parâmetros de desempenho dos alevinos, mas a ocorrência de lesões nos animais inoculados com A. hydrophila e alimentados com FAM foi menor e, eles também exibiram um declínio das lesões em um menor período de tempo em relação ao grupo controle. FAM impediu a congestão hepatopancreática em animais infectados. A farinha de alga marinha marrom Ascophyllum nodosum reduziu o número de lesões nos peixes em menor tempo quando comparado ao controle.

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Antibody can be assessed by agglutinating antibody titer which is a quantitative measure of circulating antibodies in serum from fish previously immunized. The antibody evaluation has been performed with different fish species, and is considered a reliable method that can be applied to confirm several hypothesis regarding acquired immunity, even in conjunction with precise methods to describe immune mechanisms. In order to provide appropriate analytical methods for future studies on the specific immune system of native fish, the present study standardized on assay to measure the serum agglutinating antibody titer produced after immunization with inactivated A. hydrophila and levamisole administration in pacu. It was possible to determine the agglutinating antibodies titer in a satisfactorily way in pacu immunized with inactive A. hydrophila, and the highest titers were observed on fish fed with levamisole.

Os anticorpos podem ser avaliados pelo título aglutinante de anticorpos, que é uma medida quantitativa de anticorpos no soro de peixe previamente imunizados. A determinação do título de anticorpos foi realizada com diversas espécies de peixes e é considerado um método confiável que pode ser aplicado para confirmar diversas hipóteses que envolvam o sistema adquirido de defesa, mesmo em conjunto com métodos precisos, para descrever mecanismos imunes. A fim de prover métodos analíticos adequados para futuros estudos sobre o sistema imune específico de peixes nativos, o presente estudo aperfeiçoou o ensaio para avaliar o título aglutinante de anticorpos em soro de pacu imunizados com A. hydrophila e alimentados com levamisol. Foi possível determinar o título aglutinante de anticorpos de forma satisfatória, em pacus imunizados com A. hydrophila inativa, e os maiores títulos foram observados em peixes alimentados com levamisol.