Anaplasma phagocytophilum in horses - evaluation of proinflammatory biomarkers

Background: Anaplasma phagocytophilum is an obligate intracellular pathogen transmitted by the ticks that cause equinegranulocytic anaplasmosis (EGA). This pathogen is infects predominantly blood cells, principally granulocytes and especially neutrophils. A. phagocytophilum causes an acute febrile disease in horses accompanying with lethargy, loss ofappetite, lameness and hemorrhages. In horses, this disease should be considered in all acute symptoms accompaniedby thrombocytopenia and leukopenia identified by hematological test performed. Tick-borne pathogens have becomeincreasingly threatening for both animals and also public health since ticks mostly carry numerous well-documented andundocumented pathogens, and the geographical range of ticks has expanded in the recent years. This research has aimed toevaluate the impact of A. phagocytophilum infection on some oxidative/nitrosative stress parameters, antioxidant enzymeactivities, proinflammatory biomarkers and trace element levels in horses.Materials, Methods & Results: The present study has been carried out using blood samples collected from 93 horses aged1-year and older. The blood samples were centrifuged and sera were separated. Serum samples stored in the freezer (-20°C)until the day of analysis. The DNA was extracted from blood and analysed by nested-PCR technique targeting 16S rRNAgene of A. phagocytophilum and then positive PCR products were sequenced. A. phagocytophilum was 6 horses (6.4%)showed positive nested-PCR results. An infected group comprised of 6 positive horses according to PCR analysis results also6 healthy horses as control were selected. Serum SOD (Horse Superoxide Dismutase(Cu-Zn)) ELISA Kit, MPO (ELISAAssay Kit Horse Myeloperoxidase) and GPx (Horse glutathione peroxidase 1 ELISA Kit Assay), IL1 (Horse Interleukin 1Beta ELISA Kit), IL6 (Horse Interleukin 6 ELISA Kit), TNF α (Horse Tumor Necrosis...

Important frequency of Anaplasma phagocytophilum infection in a population of domiciled dogs in an urbanized area in south-eastern Brazil / Importante frequência da infecção por Anaplasma phagocytophilum em uma população de cães domiciliados em área urbanizada no sudeste do Brasil

Anaplasma phagocytophilum is responsible for granulocytic anaplasmosis in humans and various animal species. The aim of the present study was to determine the prevalence of A. phagocytophilum-infected dogs in a residential area of Belo Horizonte, Minas Gerais state, Brazil. A total of 62 dogs were submitted to serological (indirect fluorescent-antibody -IFI) and molecular (PCR) tests. Anti-A. phagocytophilum antibodies were detected in 43.8% of the dogs. Seven dogs (10.9%) were PCR-positive for the msp4 gene, six and four of these were positive for the for the msp2/p44 gene of A. phagocytophilum and 16S rRNA region of granulocytic Anaplasmataceae respectively. This study confirms a relatively high frequency of A. phagocytophilum infection in a population of domiciled dogs in an urbanized area in south-eastern Brazil and highlights the need for further studies on the role of Rhipicephalus sanguineus sensu lato ticks in the transmission of this bacterium to dogs in urban Brazilian areas.(AU)

Anaplasma phagocytophilum é responsável pela anaplasmose granulocítica, doença que acomete seres-humanos e várias espécies de animais. O objetivo do presente estudo foi determinar a prevalência de cães acometidos por A. phagocytophlium em uma área residencial de Belo Horizonte, MG, Brasil. Sessenta e dois cães foram submetidos a testes sorológicos (reação de imunofluorescência indireta - IFAT) e moleculares (PCR). Anticorpos anti-A. phagocytophilum foram detectados em 43,8% dos cães. Sete cães (10,9%) foram positivos no PCR para o gene msp4 de A. phagocytophilum, seis para o gene msp2/p44 A. phagocytophilum e quatro para a região 16S rRNA de Anaplasmataceae granulocíticas. Esse estudo confirma a frequência relativamente alta da infecção por A. phagocytophilum em uma população de cães domiciliados em área urbanizada no sudeste do Brasil e destaca a necessidade de pesquisas para determinar o papel do carrapato Rhipicephalus sanguineus sensu lato na transmissão desse microrganismo para cães de áreas urbanas brasileiras.(AU)

Molecular and serological detection of Theileria equi, Babesia caballi and Anaplasma phagocytophilum in horses and ticks in Maranhão, Brazil / Detecção molecular e serológica de Theileria equi, Babesia caballi e Anaplasma phagocytophilum em equinos e carrapatos no Maranhão

Equine piroplasmosis is a tick-borne disease caused by the intraeytrhocytic protozoans Babesia caballi and Theileria equi. It has been reported as a main equine parasitic disease. In addition, Anaplasma phagocytophilum, the causative agent of granulocytic ehrlichiosis, causes a seasonal disease in horses. Both diseases, can be detrimental to animal health. In this sense, blood samples and ticks were collected from 97 horses raised in the microregion of Baixada Maranhense, Maranhão State, Brazil. Serum samples were subjected to Indirect Fluorescence Antibody Test (IFAT) and blood samples and ticks to Polymerase Chain Reaction (PCR) to evaluate the infection by Theileria equi, Babesia caballi and Anaplasma phagocytophilum. The overall seroprevalence was 38.14%, 18.55% and 11.34% for T. equi, B. caballi and A. phagocytophilum, respectively. The results of PCR from blood samples showed 13.40% and 3.09% positive samples to T. equi and B. caballi, respectively. A total of 170 tick specimens were collected and identified as Dermacentor nitens, Amblyomma cajennense sensu lato and Rhipicephalus (Boophilus) microplus. It was detected 2.35% (4/170) and 0.59% (1/170) positive tick samples by PCR for T. equi and B. caballi, respectively. All samples were negative to A. phagocytophilum. No statically difference (p>0.05) was observed when gender, age, use of ectoparasiticide and tick presence were analyzed. A BLASTn analysis of the sequenced samples indicated 97 to 100% similarity with T. equi 18S rRNA gene sequences in GenBank and 98 to 100% with B. caballi. Genetic analysis classified the obtained sequences as T. equi and B. caballi cluster, respectively. It can be concluded that these pathogens occur and are circulating in the studied area.(AU)

A piroplasmose equina é uma doença transmitida por carrapatos causada pelos protozoários intraeritrocitários Babesia caballi e Theileria equi. É relatada como uma doença parasitária comum em equinos. Além disso, Anaplasma phagocytophilum, o agente causal da ehrlichiose granulocítica, causa uma doença sazonal em equinos. Ambas as doenças, podem ser prejudiciais para a saúde animal. Nesse sentido, amostras de sangue e carrapatos foram coletadas de 97 cavalos criados na microrregião da Baixada Maranhense, estado do Maranhão, Brasil. As amostras de soro foram submetidas ao Teste de Imunofluorescência Indireta (RIFI) e amostras de sangue e os carrapatos a Reação da Polimerase em Cadeia (PCR) para avaliar a infecção por Theileria equi, Babesia caballi e Anaplasma phagocytophilum. A prevalência foi de 38,14%, 18,55% e 11,34% para T. equi, B. caballi e A. phagocytophilum, respectivamente. Os resultados da PCR para as amostras de sangue demonstraram 13,40% e 3,09% de positividade para T. equi e B. caballi, respectivamente. Um total de 170 specimens de carrapatos foi coletado e foram identificados Dermacentor nitens, Amblyomma cajennense sensu lato and Rhipicephalus (Boophilus) microplus. Obteve-se 2,35% (4/170) e 0,59% (1/170) positivos por PCR para T. equi e B. caballi, respectivamente. Todas as amostras foram negativas para A. phagocytophilum. Não houve diferença estatística significativa (p>0.05) em relação ao sexo, idade, uso de ectoparasiticida e presença de carrapatos. A análise BLASTn das amostras sequenciadas para gene 18S rRNA indicaram 97 a 100% de similaridade com T. equi e 98-100% com B. caballi no GenBank. Análises genéticas classificaram as sequencias obtidas no mesmo clado que T. equi e B. caballi, respectivamente. Podemos concluir que estes patógenos estão circulando na área de estudo.(AU)

Important frequency of Anaplasma phagocytophilum infection in a population of domiciled dogs in an urbanized area in south-eastern Brazil / Importante frequência da infecção por Anaplasma phagocytophilum em uma população de cães domiciliados em área urbanizada no sudeste do Brasil

Anaplasma phagocytophilum is responsible for granulocytic anaplasmosis in humans and various animal species. The aim of the present study was to determine the prevalence of A. phagocytophilum-infected dogs in a residential area of Belo Horizonte, Minas Gerais state, Brazil. A total of 62 dogs were submitted to serological (indirect fluorescent-antibody -IFI) and molecular (PCR) tests. Anti-A. phagocytophilum antibodies were detected in 43.8% of the dogs. Seven dogs (10.9%) were PCR-positive for the msp4 gene, six and four of these were positive for the for the msp2/p44 gene of A. phagocytophilum and 16S rRNA region of granulocytic Anaplasmataceae respectively. This study confirms a relatively high frequency of A. phagocytophilum infection in a population of domiciled dogs in an urbanized area in south-eastern Brazil and highlights the need for further studies on the role of Rhipicephalus sanguineus sensu lato ticks in the transmission of this bacterium to dogs in urban Brazilian areas.(AU)

Anaplasma phagocytophilum é responsável pela anaplasmose granulocítica, doença que acomete seres-humanos e várias espécies de animais. O objetivo do presente estudo foi determinar a prevalência de cães acometidos por A. phagocytophlium em uma área residencial de Belo Horizonte, MG, Brasil. Sessenta e dois cães foram submetidos a testes sorológicos (reação de imunofluorescência indireta - IFAT) e moleculares (PCR). Anticorpos anti-A. phagocytophilum foram detectados em 43,8% dos cães. Sete cães (10,9%) foram positivos no PCR para o gene msp4 de A. phagocytophilum, seis para o gene msp2/p44 A. phagocytophilum e quatro para a região 16S rRNA de Anaplasmataceae granulocíticas. Esse estudo confirma a frequência relativamente alta da infecção por A. phagocytophilum em uma população de cães domiciliados em área urbanizada no sudeste do Brasil e destaca a necessidade de pesquisas para determinar o papel do carrapato Rhipicephalus sanguineus sensu lato na transmissão desse microrganismo para cães de áreas urbanas brasileiras.(AU)

Molecular and serological detection of Theileria equi, Babesia caballi and Anaplasma phagocytophilum in horses and ticks in Maranhão, Brazil / Detecção molecular e serológica de Theileria equi, Babesia caballi e Anaplasma phagocytophilum em equinos e carrapatos no Maranhão

Equine piroplasmosis is a tick-borne disease caused by the intraeytrhocytic protozoans Babesia caballi and Theileria equi. It has been reported as a main equine parasitic disease. In addition, Anaplasma phagocytophilum, the causative agent of granulocytic ehrlichiosis, causes a seasonal disease in horses. Both diseases, can be detrimental to animal health. In this sense, blood samples and ticks were collected from 97 horses raised in the microregion of Baixada Maranhense, Maranhão State, Brazil. Serum samples were subjected to Indirect Fluorescence Antibody Test (IFAT) and blood samples and ticks to Polymerase Chain Reaction (PCR) to evaluate the infection by Theileria equi, Babesia caballi and Anaplasma phagocytophilum. The overall seroprevalence was 38.14%, 18.55% and 11.34% for T. equi, B. caballi and A. phagocytophilum, respectively. The results of PCR from blood samples showed 13.40% and 3.09% positive samples to T. equi and B. caballi, respectively. A total of 170 tick specimens were collected and identified as Dermacentor nitens, Amblyomma cajennense sensu lato and Rhipicephalus (Boophilus) microplus. It was detected 2.35% (4/170) and 0.59% (1/170) positive tick samples by PCR for T. equi and B. caballi, respectively. All samples were negative to A. phagocytophilum. No statically difference (p>0.05) was observed when gender, age, use of ectoparasiticide and tick presence were analyzed. A BLASTn analysis of the sequenced samples indicated 97 to 100% similarity with T. equi 18S rRNA gene sequences in GenBank and 98 to 100% with B. caballi. Genetic analysis classified the obtained sequences as T. equi and B. caballi cluster, respectively. It can be concluded that these pathogens occur and are circulating in the studied area.(AU)

A piroplasmose equina é uma doença transmitida por carrapatos causada pelos protozoários intraeritrocitários Babesia caballi e Theileria equi. É relatada como uma doença parasitária comum em equinos. Além disso, Anaplasma phagocytophilum, o agente causal da ehrlichiose granulocítica, causa uma doença sazonal em equinos. Ambas as doenças, podem ser prejudiciais para a saúde animal. Nesse sentido, amostras de sangue e carrapatos foram coletadas de 97 cavalos criados na microrregião da Baixada Maranhense, estado do Maranhão, Brasil. As amostras de soro foram submetidas ao Teste de Imunofluorescência Indireta (RIFI) e amostras de sangue e os carrapatos a Reação da Polimerase em Cadeia (PCR) para avaliar a infecção por Theileria equi, Babesia caballi e Anaplasma phagocytophilum. A prevalência foi de 38,14%, 18,55% e 11,34% para T. equi, B. caballi e A. phagocytophilum, respectivamente. Os resultados da PCR para as amostras de sangue demonstraram 13,40% e 3,09% de positividade para T. equi e B. caballi, respectivamente. Um total de 170 specimens de carrapatos foi coletado e foram identificados Dermacentor nitens, Amblyomma cajennense sensu lato and Rhipicephalus (Boophilus) microplus. Obteve-se 2,35% (4/170) e 0,59% (1/170) positivos por PCR para T. equi e B. caballi, respectivamente. Todas as amostras foram negativas para A. phagocytophilum. Não houve diferença estatística significativa (p>0.05) em relação ao sexo, idade, uso de ectoparasiticida e presença de carrapatos. A análise BLASTn das amostras sequenciadas para gene 18S rRNA indicaram 97 a 100% de similaridade com T. equi e 98-100% com B. caballi no GenBank. Análises genéticas classificaram as sequencias obtidas no mesmo clado que T. equi e B. caballi, respectivamente. Podemos concluir que estes patógenos estão circulando na área de estudo.(AU)

Detecção direta e evidência de exposição à Anaplasma Phagocytophilum em equinos de Minas Gerais, Brasil / Anaplasma Phagocytophilum direct detection and exposure evidence in equines from Minas Gerais, Brazil

A Anaplasmose Granulocítica Equina (AGE) é causada pelo Anaplasma phagocytophilum, bactéria intracelular obrigatória, Gram-negativa, membro da família Anaplasmataceae incluída na ordem das Rickettsiales. Pouco se sabe sobre a doença, dinâmica de transmissão, cepa e prevalência da doença no território brasileiro. O presente trabalho teve por objetivo verificar, por métodos diretos e sorológicos, a ocorrência de A. phagocytophilum em equinos no municípios de Belo Horizonte, Minas Gerais. Encontrou-se uma ocorrência ao exame da reação de imunofluorescência indireta (RIFI) de 53,57% (120/224). Ao exame de capa leucocitária foi encontrado um percentual de 3,14% (7/223) de animais positivos. A maioria das amostras (41,47%) apresentou uma diluição de 1:160, tais amostras foram então submetidas à titulação nas diluições de 1:320, 1:640 e 1:1280. Pode-se concluir que a infecção por A. phagocytophilum está presente em cavalos pertencentes ao Projeto Carroceiros no município de Belo Horizonte. Para que se entenda melhor qual a importância epidemiológica desta infecção para o município mais levantamentos sorológicos e moleculares, em equinos, devem ser realizados a fim de se entender melhor a dinâmica do agente na população equina.

Equine granulocytic anaplasmosis is caused by Anaplasma phagocytophilum, a gram negative, obligatory intracellular bacteria, member of Anaplasmataceae family, included in the Rickettsiales order. Little is known about the disease, transmission dynamics, strain and prevalence in Minas Gerais State. This work aimed to verify, using direct and serologic methods, the occurrence of A. phagocytophilum in equines of the municipality of Belo Horizonte, Minas Gerais. It was found a positive reaction in the IFA in a frequency of 53.57% (120/124). In the buffy coat evaluation, it was found a percentage of 3.14% (7/223) of positive animals. Most of the samples reacted at a 1:160 dilution and were submitted to titration in the dilutions of 1:320, 1:640 and 1:1280. It is possible to conclude that A. phagocytophilum infection is present in horses of “Projeto Carroceiros” of the municipality of Belo Horizonte. In order to better understand the epidemiological importance of this infection more studies are needed to comprehend the dynamic of the agent in the equine population.

Detecção direta e evidência de exposição à Anaplasma Phagocytophilum em equinos de Minas Gerais, Brasil / Anaplasma Phagocytophilum direct detection and exposure evidence in equines from Minas Gerais, Brazil

A Anaplasmose Granulocítica Equina (AGE) é causada pelo Anaplasma phagocytophilum, bactéria intracelular obrigatória, Gram-negativa, membro da família Anaplasmataceae incluída na ordem das Rickettsiales. Pouco se sabe sobre a doença, dinâmica de transmissão, cepa e prevalência da doença no território brasileiro. O presente trabalho teve por objetivo verificar, por métodos diretos e sorológicos, a ocorrência de A. phagocytophilum em equinos no municípios de Belo Horizonte, Minas Gerais. Encontrou-se uma ocorrência ao exame da reação de imunofluorescência indireta (RIFI) de 53,57% (120/224). Ao exame de capa leucocitária foi encontrado um percentual de 3,14% (7/223) de animais positivos. A maioria das amostras (41,47%) apresentou uma diluição de 1:160, tais amostras foram então submetidas à titulação nas diluições de 1:320, 1:640 e 1:1280. Pode-se concluir que a infecção por A. phagocytophilum está presente em cavalos pertencentes ao Projeto Carroceiros no município de Belo Horizonte. Para que se entenda melhor qual a importância epidemiológica desta infecção para o município mais levantamentos sorológicos e moleculares, em equinos, devem ser realizados a fim de se entender melhor a dinâmica do agente na população equina.(AU)

Equine granulocytic anaplasmosis is caused by Anaplasma phagocytophilum, a gram negative, obligatory intracellular bacteria, member of Anaplasmataceae family, included in the Rickettsiales order. Little is known about the disease, transmission dynamics, strain and prevalence in Minas Gerais State. This work aimed to verify, using direct and serologic methods, the occurrence of A. phagocytophilum in equines of the municipality of Belo Horizonte, Minas Gerais. It was found a positive reaction in the IFA in a frequency of 53.57% (120/124). In the buffy coat evaluation, it was found a percentage of 3.14% (7/223) of positive animals. Most of the samples reacted at a 1:160 dilution and were submitted to titration in the dilutions of 1:320, 1:640 and 1:1280. It is possible to conclude that A. phagocytophilum infection is present in horses of “Projeto Carroceiros” of the municipality of Belo Horizonte. In order to better understand the epidemiological importance of this infection more studies are needed to comprehend the dynamic of the agent in the equine population.(AU)

Serological evidence of exposure to Anaplasma phagocytophilum in horses from the Rio de Janeiro state mounted police bred in the urban zone / Evidências sorológicas da exposição à Anaplasma phagocytophilum em cavalos da polícia montada do estado do Rio de Janeiro - Brasil criados em áreas urbanas

Anaplasma phagocytophilum is an emergent hemoparasite in regions where ticks are regularly found. In order to investigate the rate of anti-A. phagocytophilum antibody in horses of the Mounted Police of Rio de Janeiro state and therefore the presence of this agent,  41 horses from the Cavalry Squadron (CS) and 50 from the Regiment of Mounted Police (RMP) were selected. For the serologic diagnosis the Indirect Fluorescent Antibody test was performed. In the present work, among 91 equine sera samples anti-A. phagocytophilum antibodies, with titer ? 1:80, were detected in 11 animals (12%), being five (5%) from males and six (7%) females, with no statistical difference. The adult animals with ages varying between five and 14 years presented the highest rate of positive reaction, although antibodies were detected in animals of all ages. We did not observe statistic differences in relation to the presence of anti-A. phagocytophilum antibodies among the animals bred in the CS and RMP. The presence of anti-A.phagocytophilim antibodies in horses of the Mounted Police with no clinical signs is indicative that the parasite is present in the enzootic form among the horses of the urban area. The circulation of the parasite among the animals is not dependent of the presence of tick infestations.

Anaplasma phagocytophilum é uma hemoparasitose emergente em regiões onde existem carrapatos. Com o objetivo de investigar a frequência de anticorpos anti-A. phagocytophilum em cavalos da Policia Montada do Estado do Rio de Janeiro e, consequentemente, os indícios da presença desse agente em áreas urbanas, foram selecionados 41 cavalos do Esquadrão de Cavalaria (EC) e 50 do Regimento de Polícia Montada (RPM). Para o diagnóstico sorológico, foi utilizado o método de Imunofluorescência Indireta. No presente trabalho, dentre 91 amostras de soro de equinos, foram detectados anticorpos anti-A. phagocytophilum com título ? 1:80 em 11 animais (12%), sendo que cinco (5%) eram machos e seis (7%) fêmeas, sem diferenças estatísticas. Os animais adultos com faixa etária entre cinco e 14 anos foram os que apresentaram maior frequência de reação positiva; no entanto, foram detectados anticorpos em animais de todas as faixas etárias. Não foram observadas diferenças estatísticas quanto à presença de anticorpos anti-A. phagocytophilum nos animais criados no EC e no RPM. A presença de anticorpos anti-A. phagocytophilum em cavalos da Policia Montada sem sinais clínicos aparentes é indicativo que A. phagocytophilum está presente de forma enzóotica na região urbana e a circulação do parasita entres os animais independe da presença de infestações aparentes de carrapatos nos animais.

Serological evidence of exposure to Anaplasma phagocytophilum in horses from the Rio de Janeiro state mounted police bred in the urban zone / Evidências sorológicas da exposição à Anaplasma phagocytophilum em cavalos da polícia montada do estado do Rio de Janeiro - Brasil criados em áreas urbanas

Anaplasma phagocytophilum is an emergent hemoparasite in regions where ticks are regularly found. In order to investigate the rate of anti-A. phagocytophilum antibody in horses of the Mounted Police of Rio de Janeiro state and therefore the presence of this agent,  41 horses from the Cavalry Squadron (CS) and 50 from the Regiment of Mounted Police (RMP) were selected. For the serologic diagnosis the Indirect Fluorescent Antibody test was performed. In the present work, among 91 equine sera samples anti-A. phagocytophilum antibodies, with titer ? 1:80, were detected in 11 animals (12%), being five (5%) from males and six (7%) females, with no statistical difference. The adult animals with ages varying between five and 14 years presented the highest rate of positive reaction, although antibodies were detected in animals of all ages. We did not observe statistic differences in relation to the presence of anti-A. phagocytophilum antibodies among the animals bred in the CS and RMP. The presence of anti-A.phagocytophilim antibodies in horses of the Mounted Police with no clinical signs is indicative that the parasite is present in the enzootic form among the horses of the urban area. The circulation of the parasite among the animals is not dependent of the presence of tick infestations.(AU)

Anaplasma phagocytophilum é uma hemoparasitose emergente em regiões onde existem carrapatos. Com o objetivo de investigar a frequência de anticorpos anti-A. phagocytophilum em cavalos da Policia Montada do Estado do Rio de Janeiro e, consequentemente, os indícios da presença desse agente em áreas urbanas, foram selecionados 41 cavalos do Esquadrão de Cavalaria (EC) e 50 do Regimento de Polícia Montada (RPM). Para o diagnóstico sorológico, foi utilizado o método de Imunofluorescência Indireta. No presente trabalho, dentre 91 amostras de soro de equinos, foram detectados anticorpos anti-A. phagocytophilum com título ? 1:80 em 11 animais (12%), sendo que cinco (5%) eram machos e seis (7%) fêmeas, sem diferenças estatísticas. Os animais adultos com faixa etária entre cinco e 14 anos foram os que apresentaram maior frequência de reação positiva; no entanto, foram detectados anticorpos em animais de todas as faixas etárias. Não foram observadas diferenças estatísticas quanto à presença de anticorpos anti-A. phagocytophilum nos animais criados no EC e no RPM. A presença de anticorpos anti-A. phagocytophilum em cavalos da Policia Montada sem sinais clínicos aparentes é indicativo que A. phagocytophilum está presente de forma enzóotica na região urbana e a circulação do parasita entres os animais independe da presença de infestações aparentes de carrapatos nos animais.(AU)

In vitro cultivation of Anaplasma marginale and A. phagocytophilum in tick cell lines: a review / Cultivo in vitro de Anaplasma marginale e A. phagocytophilum em células de carrapatos: uma revisão

Continuous cell lines have been established from several ixodid and argasid tick species, representing an excellent tool suitable for the isolation of pathogens and their subsequent propagation, which in turn allows the production of antigenic material for diagnostic tests, antibody and vaccine production, and also for studies on host-vector-pathogen relationships. This paper reviews the use of tick cells for culture initiation and maintenance of two obligate intracellular bacterial pathogens, Anaplasma marginale and Anaplasma phagocytophilum. These in vitro cultivation systems have been used in a wide range of studies, covering morphological ultrastructural analysis, genetics, proteomics and biological differences between strains, including genome transcriptional and protein expression approaches, enabling comparisons between host and vector cells. Thus, such systems open a new window for a better understanding of interactions between pathogens and tick cells. Last but not least, such systems contribute to the reduction in usage of animals for experimental research, as antigenic material can be produced in reasonably large quantities without the use of in vivo species-specific systems.(AU)

Linhagens contínuas de células já foram estabelecidas a partir de várias espécies de carrapatos ixodídeos e argasídeos e representam uma ferramenta excelente para o isolamento e propagação de patógenos, permitindo a produção de material antigênico para testes diagnósticos, produção de anticorpos e vacinas, e também para estudos das relações entre hospedeiro-vetor-patógenos. Este artigo revisa o uso de células de carrapatos para estabelecimento e manutenção in vitro de dois patógenos intracelulares, Anaplasma marginale e Anaplasma phagocytophilum. Estes sistemas de cultivo in vitro, têm sido utilizados em vários estudos, tais como análises morfológicas, genéticas, proteômicas e estudos diferenciais entre isolados, incluindo genômica transcricional e expressões proteicas, permitindo comparações entre células dos hospedeiros e dos vetores. Tais sistemas constituem, portanto, uma nova abordagem para melhor entendimento das relações entre patógenos e células de carrapatos. Além disso, tais sistemas contribuem para a redução do uso de animais de experimentação, uma vez que permitem a produção de grandes quantidades de material antigênico sem o uso de sistemas espécie-específicos in vivo.(AU)

Serologic evidence of equine granulocytic anaplasmosis in horses from central West Brazil / Evidência sorológica de anaplasmose granulocítica equina em equinos do Centro-oeste Brasil

Ehrlichiosis is a zoonotic disease caused by gram-negative and intracellular obligatory bacterial organisms. Equine Granulocytic Anaplasmosis EGA (formerly Equine Granulocytic Ehrlichiosis, EGE) is a seasonal disease, normally self-limited in horses. There are few reports in Brazil about this ehrlichial agent, as well as its natural vectors. Nowadays, veterinarians are considering the suspicion of EGA in horses with suggestive symptoms of ehrlichiosis and which do not respond to piroplasmosis treatment. The aim of the present study was to identify horses exposed to the agent A. phagocytophilum by serological and molecular techniques. Twenty equine blood and serum samples from the central West region of Brazil were evaluated by microscopic examination of buffy coat smear, enzyme-linked immunosorbent assay (ELISA), indirect fluorescent antibody test (IFAT) and nested polymerase chain reaction (nPCR). Additionally, the serodiagnosis of Theileria equi by IFA and ELISA were carried out, as well as molecular diagnosis by nPCR. Thirteen (65%) serum samples were positive for A. phagocytophilum by ELISA, but none of them were positive by buffy-coat smear examination or nPCR. Antibodies IgG anti-T. equi were detected in 18 (90%) and 17 (85%) horses by IFA and ELISA, respectively and the agent was detected in 9 (45%) animals by nPCR. Our data may be considered as important information to understanding the occurrence of EGA and equine piroplasmosis in central West Brazil.(AU)

A Erliquiose é uma doença zoonótica causada por bactérias gram-negativas e intracelulares obrigatórias. A Anaplasmose Granulocítica Equina AGE (anteriormente denominada Erliquiose Granulocítica Equina, EGE) é uma enfermidade sazonal, normalmente auto-limitante em equinos. No Brasil, existem poucos relatos deste agente erliquial, bem como de seus vetores naturais. Atualmente, veterinários têm levantado a suspeita de casos de AGE em eqüinos com sinais clínicos sugestivos de erliquiose e não responsivos ao tratamento para a piroplasmose equina. O objetivo do presente estudo foi identificar equinos expostos a A. phagocytophilum por meio de técnicas sorológicas e moleculares. Vinte amostras de sangue e soro de equinos da região Centro-oeste do Brasil foram avaliados por meio do exame microscópico de capa leucocitária, ensaio imunoenzimático indireto (ELISA), reação de imunofluorescência indireta (RIFI) e reação em cadeia da polimerase (nested PCR). Adicionalmente, o diagnóstico sorológico de Theileria equi pela RIFI e ELISA foram realizados, assim como o diagnóstico molecular pelo nPCR. Treze (65%) amostras de soro foram positivas para A. phagocytophilum pelo teste de ELISA, entretanto nenhum equino foi positivo pelo exame microscópico da capa leucocitária ou nPCR. Anticorpos IgG anti-T. equi foram detectados em 18 (90%) e 17 (85%) equinos pela RIFI e ELISA, respectivamente e o agente foi detectado em 9 (45%) animais pelo nPCR. Estes dados sugerem importante informação para o entendimento da ocorrência da AGE e piroplasmose equina no Centro-oeste do Brasil.(AU)

Frequência de anticorpos anti-Anaplasma phagocytophilum em equídeos no Estado do Rio de Janeiro e seus fatores de risco

Anaplasma phagocytophilum é um hemoparasita, transmitido por carrapatos, causador da anaplasmose granulocítica, patógeno emergente no Brasil e diagnosticado em diversas espécies de animais domésticos, silvestres e humanos. Com o objetivo de investigar a frequência de anticorpos anti- Anaplasma phagocytophilum em equídeos do estado do Rio de Janeiro e associar aos possíveis fatores de risco para a infecção foram coletadas 612 amostras de sangue provenientes de equídeos de 15 municípios do estado e aplicado um questionário epidemiológico no qual foram avaliados aspectos ligados a propriedade, manejo sanitário, a enfermidade e ao estado individual do animal avaliado. Para o diagnóstico realizou-se a Imunofluorescência Indireta. No presente trabalho foram detectados 124 animais (20,26%) com anticorpos IgG anti- A.phagocytophilum com títulos de 1:80. Pela análise de regressão logística multivariável observou-se que a propriedade (P<0,0001), procedência (P=0,0095) e a idade (P=0,0236) dos animais são os reais fatores de risco para a infecção do estado do Rio de Janeiro. O que permitiu inferir que o parasita está distribuído em todas as mesorregiões do estado do Rio de Janeiro e que os focos em propriedades são importantes na permanência do parasita nos equídeos. Foi observado também que animais oriundos de outros estados podem introduzir a infecção e tornar as propriedades foco de doença. Os muares, pela primeira vez, foram identificados também como importantes hospedeiros da infecção. Animais jovens e adultos devem ser o foco da investigação quando se pretende monitorar a doença nos plantéis de equídeos com atenção as doenças de caráter sistêmico para o diagnóstico diferencial.

Determinação molecular de Anaplasma phagocytophilum e Neorickettsia risticii e alterações hematológicas e bioquímicas em equinos de áreas rurais e urbanas no Município de Angra dos Reis, Rio de Janeiro

Anaplasma phagocytophilum e Neorickettsia risticii são bactérias intracelulares obrigatórias, agentes da Ehrlichiose Granulocítica Equina (EGE) e Ehrlichiose Monocítica Equina (EME), respectivamente. Os objetivos deste trabalho foram detectar a presença de A. phagocytophilum e N. risticii em equinos do Município de Angra dos Reis, Rio de Janeiro e avaliar a presença de alterações laboratoriais nos animais positivos para a infecção. Para tal fim, coletou-se 187 amostras de sangue total de equinos de diferentes bairros de Angra dos Reis no período entre Julho de 2010 e Agosto de 2010. A detecção dos dois agentes foi realizada através Reação em Cadeia Polimerase (REAL-TIME PCR), além da realização de hemogramas e dosagens bioquímicas. Observou-se que cinco animais eram positivos para N. risticii e um para A. phagocytophilum. Concluiu-se que estas Rickettsioses estão presentes na região de Angra dos Reis.

Determinação molecular de Anaplasma phagocytophilum e Neorickettsia risticii e alterações hematológicas e bioquímicas em equinos de áreas rurais e urbanas no Município de Angra dos Reis, Rio de Janeiro

Anaplasma phagocytophilum e Neorickettsia risticii são bactérias intracelulares obrigatórias, agentes da Ehrlichiose Granulocítica Equina (EGE) e Ehrlichiose Monocítica Equina (EME), respectivamente. Os objetivos deste trabalho foram detectar a presença de A. phagocytophilum e N. risticii em equinos do Município de Angra dos Reis, Rio de Janeiro e avaliar a presença de alterações laboratoriais nos animais positivos para a infecção. Para tal fim, coletou-se 187 amostras de sangue total de equinos de diferentes bairros de Angra dos Reis no período entre Julho de 2010 e Agosto de 2010. A detecção dos dois agentes foi realizada através Reação em Cadeia Polimerase (REAL-TIME PCR), além da realização de hemogramas e dosagens bioquímicas. Observou-se que cinco animais eram positivos para N. risticii e um para A. phagocytophilum. Concluiu-se que estas Rickettsioses estão presentes na região de Angra dos Reis.(AU)