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1.
Rev. bras. reprod. anim ; 45(4): 608-619, out.-dez. 2021. ilus, tab
Artigo em Inglês | VETINDEX | ID: biblio-1492715

Resumo

Human plasma for obtaining biotherapeutics has shown considerable limitation in terms of biosafety and scalability. Engineered animal cells in bioreactors provide an alternative source of these complex proteins. However, manufacturing animal cell bioreactor technology can just produce about grams recombinant protein per liter. Besides, animal cell bioreactor has shown a rate limitation of biosynthesis of the post translational modifications (PTMs) in human proteins necessary for physiologic function. PTMs can be provided in nature by the capacity of mammary epithelia of livestock. Transgenic livestock offer a continuous productivity of grams recombinant protein per liter in the milk. Here, we discuss how recombinant proteins made in the milk of transgenic livestock represent a prodigious, selfreplicating bioreactor technology which can bring promising new biotherapeutic treatment paradigms world-wide.


O plasma humano para a obtenção de bioterapêuticos tem mostrado limitaçoes consideráveis em termos de biossegurança e escalabilidade. Células animais cultivadas em biorreatores fornecem uma fonte alternativa para essas proteínas complexas. No entanto, a tecnologia de biorreator de célula animal pode produzir apenas cerca de gramas de proteína recombinante por litro. Além disso, o biorreator de células animais tem mostrado limitacoes na escalabilidade de biossíntese das modificações pós-translacionais (PTMs) nas proteínas humanas necessárias para a função fisiológica. As PTMs podem acontecer naturalmente no epitélio mamário do gado. O gado transgênico oferece uma produtividade contínua de gramas de proteína recombinante por litro no leite. Aqui, discutimos como as proteínas recombinantes feitas no leite de gado transgênico representam uma tecnologia de biorreator auto-replicante prodigiosa que pode trazer novos paradigmas de tratamento bioterapêutico promissores em todo o mundo.


Assuntos
Feminino , Animais , Animais Geneticamente Modificados , Produtos Biológicos , Proteínas Recombinantes/análise , Proteínas Recombinantes/biossíntese , Leite
2.
Arq. bras. med. vet. zootec. (Online) ; 73(1): 256-260, Jan.-Feb. 2021. tab, ilus
Artigo em Inglês | LILACS, VETINDEX | ID: biblio-1153048

Resumo

As vantagens dos animais transgênicos têm sido demonstradas em diferentes aplicações, entretanto muitas metodologias usadas para gerar animais geneticamente modificados (GM) apresentam baixas taxas de eficiência. O objetivo deste estudo foi avaliar a entrega dos vetores lentivirais (VLs) em zigotos durante a fertilização in vitro (FIV), para gerar embriões GM, com o gene da proteína verde fluorescente (GFP) ou do fator IX de coagulação humana (FIX). Vetores lentivirais com os genes GFP (pLGW-GFP-LV) ou FIX (pLWE2-FIX-LV) foram utilizados na FIV ou na cultura de embriões in vitro (CIV). A coincubação de pLWE2-FIX-LV com espermatozoides e complexos oócitos-células do cumulus (COCs) durante a FIV diminuiu (P<0,05) as taxas de clivagem e de blastocistos, enquanto com pLGW-GFP-LV diminuiu (P<0,05) a taxa de blastocisto quando se comparou ao controle sem VL. A coincubação de pLWE2-FIX-LV e pLGW-GFP-LV com presumíveis zigotos durante a CIV não afetou (P>0,05) o desenvolvimento embrionário. A expressão da proteína GFP não foi detectada em embriões após a coincubação de FIV ou CIV, embora as células do cumulus expressassem a proteína até o dia oito de cultivo in vitro. Reações em cadeia da polimerase (PCR) não detectaram os genes GFP ou FIX em embriões, mas ambos foram detectados em células do cumulus. Assim, a coincubação de VL com espermatozoide bovino e COCs não é eficaz para produzir embriões geneticamente modificados por meio de FIV.(AU)


Assuntos
Animais , Bovinos , Zigoto , Animais Geneticamente Modificados/genética , Transgenes , Embrião de Mamíferos , Vetores Genéticos/análise , Fertilização in vitro/veterinária , Técnicas de Transferência de Genes/veterinária
3.
Ciênc. Anim. (Impr.) ; 30(04, Supl. 2): 200-203, 2020.
Artigo em Português | VETINDEX | ID: biblio-1472561

Resumo

With a focus on productivity, Brazil has advanced research and application of reproductive biotechnologies. However, much remains to be explored, such as in vitro embryo production and transfer in miniature breeds. Thus, the objective of the present work is to report the in vitro production of miniature bovine embryos and transfer to conventional sized cows located in Palmas/To. Nine miniature Jersey-Holstein cross breed donors were aspirated to obtain approximately 13 viable oocytes per female. The oocytes were matured, fertilized and cultured the in vitro, where the production of viable embryos was 23.2%. On day 7 of development (D7) the embryos were transferred to 17 crossbred dairy recipients and after 30 days of innovulation by ultrasound examination a conception rate of 76.4% was found. Thus, the technique of in vitro production and embryo transfer is viable for the reproduction of mini dairy cows, despite the lack of data regarding the work performed on small animals that serve as comparative parameters for the results achieved in the study.


Assuntos
Feminino , Animais , Bovinos , Animais Geneticamente Modificados/embriologia , Engenharia Genética/veterinária , Fertilização in vitro , Transferência Embrionária/veterinária
4.
Ci. Anim. ; 30(04, Supl. 2): 200-203, 2020.
Artigo em Português | VETINDEX | ID: vti-32342

Resumo

With a focus on productivity, Brazil has advanced research and application of reproductive biotechnologies. However, much remains to be explored, such as in vitro embryo production and transfer in miniature breeds. Thus, the objective of the present work is to report the in vitro production of miniature bovine embryos and transfer to conventional sized cows located in Palmas/To. Nine miniature Jersey-Holstein cross breed donors were aspirated to obtain approximately 13 viable oocytes per female. The oocytes were matured, fertilized and cultured the in vitro, where the production of viable embryos was 23.2%. On day 7 of development (D7) the embryos were transferred to 17 crossbred dairy recipients and after 30 days of innovulation by ultrasound examination a conception rate of 76.4% was found. Thus, the technique of in vitro production and embryo transfer is viable for the reproduction of mini dairy cows, despite the lack of data regarding the work performed on small animals that serve as comparative parameters for the results achieved in the study.(AU)


Assuntos
Animais , Feminino , Bovinos , Engenharia Genética/veterinária , Animais Geneticamente Modificados/embriologia , Fertilização in vitro , Transferência Embrionária/veterinária
5.
Ciênc. Anim. (Impr.) ; 29(1): 30-36, 2019. tab, ilus
Artigo em Português | VETINDEX | ID: biblio-1472457

Resumo

A espécie caprina tornou-se um excelente modelo animal objetivando a produção de proteínas recombinantes no leite. A obtenção de machos fundadores transgênicos é importante, pois os mesmos permitem aumentar o número de crias transgênicas pelo simples uso da inseminação artificial. Este trabalho teve por objetivo, comparar parâmetros seminais de machos caprinos transgênicos (TG) e não transgênicos (NTG) para o Fator Estimulante de Colônia de Granulócitos humano (hG-CSF). Para tanto, semanalmente,foram colhidas amostras de sêmen de todos os animais através de vagina artificial. Foram avaliados os seguintes parâmetros: volume, motilidade massal, concentração espermática, motilidade individual progressiva (MIP), vigor e patologias espermáticas. Foram observadas diferenças estatísticas somente para volume e MIP, os quais tiveram valores superiores (p0,05). Em conclusão, a presença do transgene não afetou a qualidade do sêmen favorecendo e contribuindo para a formação de um rebanho transgênico.


Goats became an excellent animal model aiming the production of recombinant proteins in the milk. Transgenic founder males are important to increase the number of transgenic kids by artificial insemination. This work aimed to compare seminal parameters of transgenic (TG) and non-transgenic goats (NTG) for the human Granulocyte Colony Stimulating Factor (hG-CSF). Thus, weekly, semen samples were collected from all transgenic males by artificial vagina and evaluated: volume, mass motility, sperm concentration, individual progressive motility (IPM), vigor and sperm pathologies. Statistical differences were observed only for volume and IPM, which had higher values (p0.05). In conclusion, the presence of the transgene did not affect the semen quality and these animals can be used to obtain kids and enable to create of a transgenic herd.


Assuntos
Masculino , Animais , Animais Geneticamente Modificados , Análise do Sêmen/veterinária , Cabras/genética , Fator Estimulador de Colônias de Granulócitos , Proteínas Recombinantes
6.
Ciênc. Anim. (Impr.) ; 29(1): 30-36, 2019. tab, ilus
Artigo em Português | VETINDEX | ID: vti-21588

Resumo

A espécie caprina tornou-se um excelente modelo animal objetivando a produção de proteínas recombinantes no leite. A obtenção de machos fundadores transgênicos é importante, pois os mesmos permitem aumentar o número de crias transgênicas pelo simples uso da inseminação artificial. Este trabalho teve por objetivo, comparar parâmetros seminais de machos caprinos transgênicos (TG) e não transgênicos (NTG) para o Fator Estimulante de Colônia de Granulócitos humano (hG-CSF). Para tanto, semanalmente,foram colhidas amostras de sêmen de todos os animais através de vagina artificial. Foram avaliados os seguintes parâmetros: volume, motilidade massal, concentração espermática, motilidade individual progressiva (MIP), vigor e patologias espermáticas. Foram observadas diferenças estatísticas somente para volume e MIP, os quais tiveram valores superiores (p<0,05) nos animais TG. Observou-se também, em ambos os grupos, um pequeno percentual de patologias espermáticas (<2%), sem diferença estatística (p>0,05). Em conclusão, a presença do transgene não afetou a qualidade do sêmen favorecendo e contribuindo para a formação de um rebanho transgênico.(AU)


Goats became an excellent animal model aiming the production of recombinant proteins in the milk. Transgenic founder males are important to increase the number of transgenic kids by artificial insemination. This work aimed to compare seminal parameters of transgenic (TG) and non-transgenic goats (NTG) for the human Granulocyte Colony Stimulating Factor (hG-CSF). Thus, weekly, semen samples were collected from all transgenic males by artificial vagina and evaluated: volume, mass motility, sperm concentration, individual progressive motility (IPM), vigor and sperm pathologies. Statistical differences were observed only for volume and IPM, which had higher values (p<0.05) in TG animals. There were also a small percentage of sperm pathologies (<2%) in both groups, with no statistical difference (p>0.05). In conclusion, the presence of the transgene did not affect the semen quality and these animals can be used to obtain kids and enable to create of a transgenic herd.(AU)


Assuntos
Animais , Masculino , Animais Geneticamente Modificados , Fator Estimulador de Colônias de Granulócitos , Cabras/genética , Análise do Sêmen/veterinária , Proteínas Recombinantes
7.
Ciênc. Anim. (Impr.) ; 29(1,supl.1): 01-04, 2019. tab
Artigo em Português | VETINDEX | ID: biblio-1472468

Resumo

Neste estudo, a avaliação do sêmen foi utilizada para investigar prováveis efeitos da presença do transgene sobre os parâmetros seminais de caprinos. Para tanto, amostras de sêmen foram colhidas semanalmente de três caprinos, sendo um não transgênico (NTG) e dois transgênicos (TG) para o Fator Estimulante de Colônia de Granulócitos humano (hG-CSF). Observou-se que, com exceção do volume ejaculado, não foram verificadas diferenças estatísticas para os dados relativos aos demais parâmetros: motilidade massal, concentração espermática, motilidade individual progressiva e patologias espermáticas. Concluiu-se que a presença do transgene hG-CSF não teve influência sobre os principais parâmetros seminais dos animais avaliados.


In this study, semen evaluation was used to investigate likely effects of transgene presence on seminal parameters of goats. For this purpose, semen samples were collected weekly from three goats, one non-transgenic (NTG) and two transgenic (TG) for the Human Granulocyte Colony Stimulating Factor (hG-CSF). It was observed that, with the exception of the ejaculated volume, no statistical differences were verified for the data related to the other parameters: mass motility, sperm concentration, individual progressive motility and spermatic pathologies. It was concluded that the presence of the hG-CSF transgene had no influence on the main seminal parameters of the animals evaluated.


Assuntos
Masculino , Animais , Animais Geneticamente Modificados , Fator Estimulador de Colônias de Granulócitos , Ruminantes/genética , Sêmen/fisiologia
8.
Ciênc. Anim. (Impr.) ; 29(1,supl.1): 01-04, 2019. tab
Artigo em Português | VETINDEX | ID: vti-21612

Resumo

Neste estudo, a avaliação do sêmen foi utilizada para investigar prováveis efeitos da presença do transgene sobre os parâmetros seminais de caprinos. Para tanto, amostras de sêmen foram colhidas semanalmente de três caprinos, sendo um não transgênico (NTG) e dois transgênicos (TG) para o Fator Estimulante de Colônia de Granulócitos humano (hG-CSF). Observou-se que, com exceção do volume ejaculado, não foram verificadas diferenças estatísticas para os dados relativos aos demais parâmetros: motilidade massal, concentração espermática, motilidade individual progressiva e patologias espermáticas. Concluiu-se que a presença do transgene hG-CSF não teve influência sobre os principais parâmetros seminais dos animais avaliados.(AU)


In this study, semen evaluation was used to investigate likely effects of transgene presence on seminal parameters of goats. For this purpose, semen samples were collected weekly from three goats, one non-transgenic (NTG) and two transgenic (TG) for the Human Granulocyte Colony Stimulating Factor (hG-CSF). It was observed that, with the exception of the ejaculated volume, no statistical differences were verified for the data related to the other parameters: mass motility, sperm concentration, individual progressive motility and spermatic pathologies. It was concluded that the presence of the hG-CSF transgene had no influence on the main seminal parameters of the animals evaluated.(AU)


Assuntos
Animais , Masculino , Ruminantes/genética , Animais Geneticamente Modificados , Fator Estimulador de Colônias de Granulócitos , Sêmen/fisiologia
9.
R. bras. Reprod. Anim. ; 41(1): 103-104, Jan-Mar. 2017.
Artigo em Português | VETINDEX | ID: vti-17188

Resumo

Tecnologias reprodutivas têm uma participação fundamental na pesquisa biomédica. Por meio delas,novos modelos animais são produzidos e preservados de forma segura. A produção de animais geneticamentemodificados envolve diretamente o uso de embriões, sua manipulação e transferência para fêmeas receptoras.Uma vez produzida uma nova linhagem geneticamente modificada, a melhor forma de preservá-la é por meio dacriopreservação de espermatozoides ou embriões. Uma nova tecnologia para manipulação e modificação dogenoma do camundongo foi desenvolvida nos últimos anos. O sistema CRISPR/Cas9 tornou a produção destesanimais mais rápida, efetiva e com um custo mais baixo que as técnicas tradicionais. Esta tecnologiaimpulsionará o projeto mundial de produção de animais mutantes para cada um dos cerca de 25 mil genespresentes no camundongo. Ainda permitirá a produção de modelos com mutação dupla ou tripla e em animaiscom fundo genético distintos. Esta apresentação abordará a importância das técnicas reprodutivas neste processofundamental da pesquisa biomédica.(AU)


Reproductive technologies have a fundamental role in biomedical research. Through them, new animal modelsare produced and preserved safely. The production of genetically modified animals directly involves the use ofembryos, their manipulation and transference to recipient females. Once a new genetically modified lineage hasbeen produced, the best way to preserve it is by cryopreservation of sperm or embryos. A new technology formanipulating and modifying the mouse genome has been developed in recent years. The CRISPR / Cas9 systemmade the production of these animals faster, more effective and at a lower cost than traditional techniques. Thistechnology will boost the worldwide mutant animal production project for each of the approximately 25,000genes present in the mouse. It will also allow the production of models with double or triple mutation and inanimals with different genetic backgrounds. This presentation will address the importance of reproductivetechniques in this fundamental process of biomedical research.(AU)


Assuntos
Animais , Animais Geneticamente Modificados/embriologia , Biotecnologia/tendências , Pesquisa Biomédica , Camundongos
10.
Rev. bras. reprod. anim ; 41(1): 103-104, Jan-Mar. 2017.
Artigo em Português | VETINDEX | ID: biblio-1492446

Resumo

Tecnologias reprodutivas têm uma participação fundamental na pesquisa biomédica. Por meio delas,novos modelos animais são produzidos e preservados de forma segura. A produção de animais geneticamentemodificados envolve diretamente o uso de embriões, sua manipulação e transferência para fêmeas receptoras.Uma vez produzida uma nova linhagem geneticamente modificada, a melhor forma de preservá-la é por meio dacriopreservação de espermatozoides ou embriões. Uma nova tecnologia para manipulação e modificação dogenoma do camundongo foi desenvolvida nos últimos anos. O sistema CRISPR/Cas9 tornou a produção destesanimais mais rápida, efetiva e com um custo mais baixo que as técnicas tradicionais. Esta tecnologiaimpulsionará o projeto mundial de produção de animais mutantes para cada um dos cerca de 25 mil genespresentes no camundongo. Ainda permitirá a produção de modelos com mutação dupla ou tripla e em animaiscom fundo genético distintos. Esta apresentação abordará a importância das técnicas reprodutivas neste processofundamental da pesquisa biomédica.


Reproductive technologies have a fundamental role in biomedical research. Through them, new animal modelsare produced and preserved safely. The production of genetically modified animals directly involves the use ofembryos, their manipulation and transference to recipient females. Once a new genetically modified lineage hasbeen produced, the best way to preserve it is by cryopreservation of sperm or embryos. A new technology formanipulating and modifying the mouse genome has been developed in recent years. The CRISPR / Cas9 systemmade the production of these animals faster, more effective and at a lower cost than traditional techniques. Thistechnology will boost the worldwide mutant animal production project for each of the approximately 25,000genes present in the mouse. It will also allow the production of models with double or triple mutation and inanimals with different genetic backgrounds. This presentation will address the importance of reproductivetechniques in this fundamental process of biomedical research.


Assuntos
Animais , Animais Geneticamente Modificados/embriologia , Biotecnologia/tendências , Camundongos , Pesquisa Biomédica
11.
R. bras. Reprod. Anim. ; 41(1): 217-221, 7. 2017. 2017.
Artigo em Português | VETINDEX | ID: vti-17302

Resumo

This review summarizes the main achievements with the use of transgenesis and genome editingtechnologies in sheep and goats. Transgenesis, also referred to as recombinant DNA (rDNA) technology, madepossible by the first time 30 years ago the addition of novel traits from a given species into a different one. Onthe other hand, more recently genome editing appears a much more precise method of making changes to thegenome of a plant, animal, or other living organism, allowing for the addition, substitution, or deletion ofspecific nucleotides in an organisms genome. With transgenesis, the introduction of new DNA into anorganisms genome was generally without control of the site of the genome in which the insertion of that rDNAconstruct would occur. With genome editing in contrast, researchers and developers of products can makespecific changes in precise locations of the genome. This concept was absolutely improved with the novelCRISPR/Cas system, making genome edition cheaper, more efficient, easier and affordable for every Laboratoryaround the world. This revolution that originally emerged from molecular biology and passed to biomedicine,has recently been applied to livestock and agriculture. In addition, the application of this technology in sheep,goats, pigs and cattle, also has been possible by the advance of assisted reproductive technologies for embryoproduction, micromanipulation, cryopreservation and transfer. In general, multidisciplinary approaches includingbasic research and technical improvements, participation of private actors and adequate regulation should bemerged to take advantage of this potent biotechnology in different countries.(AU)


Assuntos
Animais , Ruminantes/genética , Animais Geneticamente Modificados/genética , Biotecnologia , Micromanipulação/veterinária
12.
Rev. bras. reprod. anim ; 41(1): 217-221, Jan-Mar. 2017.
Artigo em Português | VETINDEX | ID: biblio-1492463

Resumo

This review summarizes the main achievements with the use of transgenesis and genome editingtechnologies in sheep and goats. Transgenesis, also referred to as recombinant DNA (rDNA) technology, madepossible by the first time 30 years ago the addition of novel traits from a given species into a different one. Onthe other hand, more recently genome editing appears a much more precise method of making changes to thegenome of a plant, animal, or other living organism, allowing for the addition, substitution, or deletion ofspecific nucleotides in an organism’s genome. With transgenesis, the introduction of new DNA into anorganism’s genome was generally without control of the site of the genome in which the insertion of that rDNAconstruct would occur. With genome editing in contrast, researchers and developers of products can makespecific changes in precise locations of the genome. This concept was absolutely improved with the novelCRISPR/Cas system, making genome edition cheaper, more efficient, easier and affordable for every Laboratoryaround the world. This revolution that originally emerged from molecular biology and passed to biomedicine,has recently been applied to livestock and agriculture. In addition, the application of this technology in sheep,goats, pigs and cattle, also has been possible by the advance of assisted reproductive technologies for embryoproduction, micromanipulation, cryopreservation and transfer. In general, multidisciplinary approaches includingbasic research and technical improvements, participation of private actors and adequate regulation should bemerged to take advantage of this potent biotechnology in different countries.


Assuntos
Animais , Animais Geneticamente Modificados/genética , Biotecnologia , Micromanipulação/veterinária , Ruminantes/genética
13.
Acta sci. vet. (Online) ; 43: 1-27, 2015. tab, graf
Artigo em Português | VETINDEX | ID: vti-23702

Resumo

Background: The production of transgenic animals has been envisioned as a viable strategy to improve food quality, animal yield, and for the production of bioproducts that can be used for the benefit of the human and animal population. Transgenic animals have been used to improve production traits, to add value to animal products, to minimize the impact on the environment, to promote disease resistance, and most notably, to produce recombinant proteins in natural fluids, such as milk, that can be collected, purified and used as biomedical products (biopharming). This review aims to discuss past and recent technological advances in animal transgenesis, and the perspective for biopharming in Brazil.Review: Since the production of recombinant human insulin from Escherichia coli in the 1970s, continuous development of new platforms has allowed a significant expansion in the biopharmaceutical market. The animal platform has been shown to be highly competitive by adding value as low cost implementation, production and scale up, as well as high productivity of synthesized proteins. The expression of recombinant proteins in milk represents the most developed system for production of biopharmaceutical drugs in animals, with two approved biopharmaceuticals for human use: Atryn®, a recombinant antithrombin produced in the milk of goats, approved in 2006 by European Medicines Agency (EMA) and in 2009 by US Food and Drug Administration (FDA), and more recently, Ruconest®, a recombinant human C1 esterase inhibitor protein (C1INH) produced in the milk of rabbits, first approved by EMA in 2012, followed by the FDA approval in 2014. Transgenic animals have been produced by many strategies that have gradually evolved over the decades, including the use of embryo microinjection, viral vectors and transposable elements, sperm-mediated gene transfer, and cloning by somatic cell nuclear transfer (SCNT).[...](AU)


Assuntos
Animais , Animais Geneticamente Modificados , Proteínas Recombinantes/uso terapêutico , Produtos Biológicos , Brasil , Microinjeções/veterinária , Clonagem de Organismos , Glândulas Mamárias Animais
14.
Acta sci. vet. (Impr.) ; 43: 1-27, 2015. tab, graf
Artigo em Português | VETINDEX | ID: biblio-1457298

Resumo

Background: The production of transgenic animals has been envisioned as a viable strategy to improve food quality, animal yield, and for the production of bioproducts that can be used for the benefit of the human and animal population. Transgenic animals have been used to improve production traits, to add value to animal products, to minimize the impact on the environment, to promote disease resistance, and most notably, to produce recombinant proteins in natural fluids, such as milk, that can be collected, purified and used as biomedical products (biopharming). This review aims to discuss past and recent technological advances in animal transgenesis, and the perspective for biopharming in Brazil.Review: Since the production of recombinant human insulin from Escherichia coli in the 1970s, continuous development of new platforms has allowed a significant expansion in the biopharmaceutical market. The animal platform has been shown to be highly competitive by adding value as low cost implementation, production and scale up, as well as high productivity of synthesized proteins. The expression of recombinant proteins in milk represents the most developed system for production of biopharmaceutical drugs in animals, with two approved biopharmaceuticals for human use: Atryn®, a recombinant antithrombin produced in the milk of goats, approved in 2006 by European Medicines Agency (EMA) and in 2009 by US Food and Drug Administration (FDA), and more recently, Ruconest®, a recombinant human C1 esterase inhibitor protein (C1INH) produced in the milk of rabbits, first approved by EMA in 2012, followed by the FDA approval in 2014. Transgenic animals have been produced by many strategies that have gradually evolved over the decades, including the use of embryo microinjection, viral vectors and transposable elements, sperm-mediated gene transfer, and cloning by somatic cell nuclear transfer (SCNT).[...]


Assuntos
Animais , Animais Geneticamente Modificados , Produtos Biológicos , Proteínas Recombinantes/uso terapêutico , Brasil , Clonagem de Organismos , Glândulas Mamárias Animais , Microinjeções/veterinária
15.
Pesqui. vet. bras ; 35(5): 477-485, maio 2015. tab, ilus
Artigo em Português | VETINDEX | ID: vti-906

Resumo

A utilização da transgenia com a proteína fluorescente verde (GFP) como marcador de células de origem fetal nas placentas de clones bovinos servirá de modelo inédito para estudo morfofisiológico e imunológico da interação materno-fetal, visto que possibilitará o seu mapeamento, diferenciando as células fetais das maternas. Tal modelo terá aplicação direta, principalmente porque estes são animais que apresentam problemas em relação ao seu desenvolvimento. Com o auxílio deste modelo, pretende-se verificar o transporte de substâncias entre a mãe e o feto via endocitose, pela imunolocalização das proteínas chamadas de caveolinas. Para tanto foram utilizados 06 bovinos clonados e 30 bovinos de inseminação artificial (IA) com idade até 90 dias de gestação, os quais tiveram seu desenvolvimento interrompido mediante abate humanitário das receptoras e ovariosalpingohisterectomia, com posterior recuperação do útero gestante. Foram coletados os placentônios e o cório. Uma parte das amostras foi recortada e fixada, por imersão, em solução de parafolmaldeído a 4% ou formoldeído a 10% em tampão fosfato de sódio (PBS) a 0,1M pH 7.4, solução de Zamboni (4% de paraformoldeído, 15% de ácido pícrico, em tampão fosfato de sódio a 0,1M pH 7.4), metacarn (60% de metanol, 30% de clorofórmio, e 10% de ácido acético glacial), para verificação da morfologia e realização de imuno-histoquímica para as proteínas caveolinas -1 e -2 (CAV -1 e CAV-2). As caveolinas -1 foram localizadas nos vilos fetais e maternos, mas sua marcação mais forte foi observada no estroma endometrial. As caveolinas -2 tiveram marcação positiva no trofoblasto e membrana córioalantoide, e, especificamente em célula trofoblástica gigante binucleada. Sendo assim, os resultados mostram que a proteína CAV-1 teve uma maior expressão em relação ...(AU)


The transgenic application of green fluorescent protein (GFP) as fetal cell marker on cattle cloned placenta could provide an exclusive model for studying the morphologic and immunologic maternal-fetal interactions, providing information about its mapping, distinguishing the fetal from maternal cells. This model will have direct application, mainly because these animals present problems during its development. With this model's support, we intend to verify the substances transport between mother and fetus during endocytosis, through the immunolocalization of protein named caveolae. For these, we used 06 cloned bovine and 30 cattle samples of artificial insemination (AI) with 90 days of pregnancy, which had been their development interrupted by humanitarian slaughter of the recipient and recovery of the pregnant uterus. We collected the placentome and the chorion. A part of the samples was cut and fixed, by immersion, on a solution containing 4% of parafomaldehyde or 10% of formaldehyde on a sodium phosphate buffer (PBS), at 0,1M pH 7.4, Zamboni solution (4% of paraformaldehyde, 15% of picric acid, on sodium phosphate buffer 0,1M pH 7.4), metacarn (60% of metanol, 30% of chloroform, and 10% glacial acetic acid), for morphologic and immunohistochemistry verification for caveolinas proteins -1 and -2 (CAV -1 and CAV- 2). The caveolins -1 were found in fetal and maternal villi, but its strongest staining was observed in the endometrial stroma. The caveolins -2 had positive staining in trophoblast and chorioallantoic membrane, and specifically in giant trophoblastic binucleated cell. Therefore the results were compared between cloned cattle and from AI or natural mating, for assisting on detection of the reason of many placental alterations, embryonic losses, spontaneous abortion, post-natal mortality and large offspring syndrome on laboratory-manipulated animals. The result suggests that the proteins caveolins -1 and -2 (CAV-1 and CAV-2) are part of the caveolae...(AU)


Assuntos
Animais , Feminino , Gravidez , Lactente , Bovinos , Caveolinas/genética , Clonagem de Organismos/veterinária , Animais Geneticamente Modificados/embriologia , Cavéolas/ultraestrutura , Imunofluorescência/veterinária , Endocitose , Pinocitose , Vilosidades Coriônicas/fisiologia , Apoptose , Crescimento Celular , Metabolismo dos Lipídeos
16.
Neotrop. ichthyol ; 12(3): 635-641, Jul-Sep/2014. tab, graf
Artigo em Inglês | VETINDEX | ID: vti-11124

Resumo

Hybrids of the species Pseudoplatystoma corruscans vs. Pseudoplatystoma reticulatum are extensively traded because they are more docile and precocious compared to their parents. This study aimed to identify the occurrence of hybrid 'Surubim' in rivers of the State of Mato Grosso do Sul, applying molecular techniques. Pseudoplatystoma corruscans, Pseudoplatystoma reticulatum and hybrid 'Surubim' were detected using multiplex PCR and PCR-RFLP in RAG2, GLOBIN, EF1α, 18S rRNA nuclear genes, and mitochondrial 16S rRNA gene. The results revealed the presence of F1 hybrids in rivers and the occurrence of genetic introgression, evidenced by the Post-F1 hybrids. Furthermore, discrepancies between the morphological and genetic identification were observed, demonstrating the effectiveness of using different molecular markers for the correct identification of these hybrids. The necessity of implementation of management and conservation projects to maintain the genetic integrity of native species populations threatened by hybridization in the rivers of Mato Grosso do Sul State is evident.(AU)


Híbridos envolvendo as espécies Pseudoplatystoma corruscans vs. Pseudoplatystoma reticulatum são amplamente comercializados por apresentarem maior docilidade e precocidade quando comparados aos parentais. Neste trabalho objetivou-se identificar, por meio de técnicas moleculares, a existência de surubins híbridos em rios do estado do Mato Grosso do Sul. Pseudoplatystoma corruscans, Pseudoplatystoma reticulatum e 'Surubim' híbrido foram identificados utilizando as técnicas de PCR multiplex e PCR-RFLP dos genes nucleares RAG2, GLOBINA, EF1α, 18S rRNA e mitocondrial 16S rRNA. Os resultados demonstraram a presença de híbridos F1 em rios e a ocorrência da introgressão genética, evidenciada pelos híbridos Pós-F1. Além disso, foram observadas discrepâncias entre a identificação morfológica e genética, demonstrando a eficácia da utilização de diversos marcadores moleculares para identificação correta destes híbridos. Torna-se evidente a necessidade da implantação de projetos de manejo e conservação, a fim de manter a integridade genética de populações de espécies nativas em rios do estado do Mato Grosso do Sul, que encontram-se ameaçadas pela hibridação.(AU)


Assuntos
Animais , Especificidade da Espécie , Animais Geneticamente Modificados , Peixes
17.
Acta Vet. bras. ; 8(supl.2): 402-406, 2014. ilus, tab
Artigo em Português | VETINDEX | ID: vti-22619

Resumo

Entre todos os mamíferos transgênicos produzidos até hoje, a espécie caprina tem representado um excelente modelo em transgênese quando são considerados os fatores como a demanda do mercado para a proteína, o volume de leite produzido por lactação e as taxas reprodutivas. Várias proteínas recombinantes foram obtidas a partir de cabras transgênicas, e entre estas, a antitrombina humana, foi a primeira proteína recombinante de origem animal a ser aprovada como um medicamento para a utilização clínica em seres humanos. Esta revisão tem por objetivo apresentar o estado-da-arte em caprinos transgênicos dando especial ênfase aos resultados obtidos por nosso grupo.(AU)


Among all the transgenic mammalians produced so far, goats have represented an excellent model of transgenesis when considering the factors such as the market demand for protein, volume of milk produced per lactation and reproductive rate. Various recombinant proteins have been obtained from the transgenic goats, and among these, human antithrombin was the first recombinant protein of animal origin to be released as a drug for the clinical use in humans. This review aims to present the state-of-the-art in transgenic goats with special emphasis on results obtained by our group.(AU)


Assuntos
Animais , Feminino , Transgenes , Animais Geneticamente Modificados , Cabras/genética , Proteínas Recombinantes , Antitrombinas
18.
Acta Vet. Brasilica ; 8(supl.2): 402-406, 2 jun. 2014. ilus, tab
Artigo em Português | VETINDEX | ID: biblio-1426854

Resumo

Entre todos os mamíferos transgênicos produzidos até hoje, a espécie caprina tem representado um excelente modelo em transgênese quando são considerados os fatores como a demanda do mercado para a proteína, o volume de leite produzido por lactação e as taxas reprodutivas. Várias proteínas recombinantes foram obtidas a partir de cabras transgênicas, e entre estas, a antitrombina humana, foi a primeira proteína recombinante de origem animal a ser aprovada como um medicamento para a utilização clínica em seres humanos. Esta revisão tem por objetivo apresentar o estado-da-arte em caprinos transgênicos dando especial ênfase aos resultados obtidos por nosso grupo.


Among all the transgenic mammalians produced so far, goats have represented an excellent model of transgenesis when considering the factors such as the market demand for protein, volume of milk produced per lactation and reproductive rate. Various recombinant proteins have been obtained from the transgenic goats, and among these, human antithrombin was the first recombinant protein of animal origin to be released as a drug for the clinical use in humans. This review aims to present the state-of-the-art in transgenic goats with special emphasis on results obtained by our group.


Assuntos
Animais , Cabras/genética , Animais Geneticamente Modificados , Engenharia Genética/veterinária , Técnicas de Transferência de Genes/veterinária
19.
Pesqui. vet. bras ; 33(supl.1): 113-118, Dec. 2013. ilus
Artigo em Inglês | VETINDEX | ID: vti-9917

Resumo

Transgenic technology has become an essential tool for the development of animal biotechnologies, and animal cloning through somatic cell nuclear transfer (SCNT) enabled the generation of genetically modified animals utilizing previously modified and selected cell lineages as nuclei donors, assuring therefore the generation of homogeneous herds expressing the desired modification. The present study aimed to discuss the use of SCNT as an important methodology for the production of transgenic herds, and also some recent insights on genetic modification of nuclei donors and possible effects of gene induction of pluripotency on SCNT.(AU)


Tecnologias de modificação genética têm se tornado ferramentas essenciais para o desenvolvimento de biotecnologias animais. A clonagem animal mediante transferência nuclear de célula somática (TNCS) possibilitou a geração de animais geneticamente modificados através da utilização de linhagens celulares previamente modificadas e selecionadas como doadoras de núcleo, garantindo desta maneira a geração de rebanhos homogênoes expressando a modificação desejada. O presente estudo objetivou discutir o uso da TNCS como importante metodologia para a produção de rebanhos transgênicos, assim como experiências recentes na manipulação genética de células doadoras de núcleo e possíveis efeitos da indução gênica à pluripotência na TNCS.(AU)


Assuntos
Animais , Bovinos , Biotecnologia/métodos , Clonagem de Organismos/veterinária , Animais Geneticamente Modificados/genética , Células-Tronco Pluripotentes/transplante , Técnicas de Transferência Nuclear/veterinária
20.
Artigo em Espanhol | VETINDEX | ID: biblio-1489685

Resumo

Los animales transgénicos son empleados en investigación biomédica para estudiar la función y regulación de los genes, como modelos de enfermedades humanas y para ensayar estrategias terapéuticas. Asimismo, la transgénesis es aplicada en animales productivos para la generación de proteínas recombinantes y la mejora animal, y para la realización de xenotrasplantes. La Unidad de Animales Transgénicos y de Experimentación del Institut Pasteur de Montevideo produce ratones transgénicos a demanda para investigadores locales y de la región. El objetivo de este trabajo es mostrar la eficiencia durante la puesta a punto de alguna de las técnicas empleadas: (i) microinyección pronuclear de ADN (Tg clásica); (ii) transgénesis mediada por lentivirus (LV); y (iii) microinyección de células madre embrionarias (ESC) en blastocistos. Los parámetros evaluados fueron: sobrevida embrionaria 30 min post-inyección, tasa de preñez, de nacimiento, de transgénesis y tasa global de transgénesis. La sobrevida embrionaria resultó en 54,6%, 78,8% y 87,8% para Tg clásica, ESC y LV, respectivamente. El número de embriones GFP (proteína verde fluorescente) + inyectados con LV resultó 42,6%. La tasa de preñez fue 54,8% y 25,0%; la tasa de nacimiento fue 21,3% y 24,0%; la tasa de transgénesis fue 4,5% y 24,1%; y la tasa de transgénesis global fue 0,2% y 0,8%, para Tg clásica y ESC, respectivamente. En suma, se produjeron 21 animales fundadores por Tg clásica, 7 animales quiméricos por inyección de ESC, y más de un 50% de embriones resultaron GFP+ con la técnica de inyección de LV. Las técnicas empleadas resultaron efectivas para obtener los modelos transgénicos solicitados. CEUA Nº 01-012.


Transgenic animals are used in biomedical research to study gene function and regulation, as human disease models, and to test therapeutic strategies. Moreover, transgenic farm animals are used for recombinant protein production, sanitary improvement, and xenotransplantation. The Transgenic and Experimental Animal Unit of Institut Pasteur Montevideo produces transgenic mice for local and regional researchers. The objective of this work is to show the efficiency of transgenesis techniques during their set up at the unit: (i) DNA pronuclear microinjection (classical Tg); (ii) lentiviral-mediated transgenesis (LV); and (iii) embryonic stem cell (ESC) microinjection in blastocysts. The parameters evaluated were: embryo survival 30 min post-injection, pregnancy rate, birth rate, transgenesis rate, and global transgenesis rate. Embryo survival was 54.6%, 78.8% and 87.8% for classical Tg, ESC and LV, respectively. The number of GFP+ embryos injected with LV was 42.6%. Pregnancy rate was 54.8% and 25.0%; birth rate was 21.3% and 24.0%; transgenesis rate was 4.5% and 24.1%; and global transgenesis rate was 0.2% and 0.8%, for classical Tg and ESC, respectively. In total, 21 founder animals were produced by classical Tg, 7 chimeric animals by ESC injection, and more than 50% GFP+ embryos were obtained using LV injection. The techniques used at the unit were effective to obtain the required transgenic models.


Assuntos
Animais , Animais Geneticamente Modificados/genética , Terapias Complementares/tendências , Genes , Lentivirus/genética
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