Effect of surfactants and temperature on germination and vegetative growth of Beauveria bassiana

Three non-ionic surfactants: Tween20, Tween80 and Breakthru® were screened for their effects on spore germination and mycelial growth rates and for their influence on three isolates of Beauveria bassiana spore germination at various temperatures. Tween20 and Tween80 were compatible with all the B. bassiana isolates in the germination studies, but inhibited germination at higher surfactant concentrations, irrespective of the conidial concentrations. Breakthru® had an inhibitory effect on germination even at the lowest concentration of 0.1% on all the B. bassiana isolates. The effects of the surfactants on spore germination did not correspond with their effects on colony growth. Conidial viability within the same formulation declined significantly with increases in temperature, irrespective of the surfactant. The optimal temperature for conidial germination of B. bassiana isolates was approximately 25 °C with an upper limit at 30 °C. Isolate 7320 was identified as the least affected by the different surfactants. This isolate was able to germinate rapidly in a broad temperature range of 25–30 °C after 24 h, this characteristic being an essential factor in controlling house fly populations in poultry houses.(AU)

Sensitivity of Beauveria bassiana conidia to abiotic factors after successive in vitro subcultures / Sensibilidade de conídios de Beauveria bassiana a fatores abióticos após sucessivos cultivos in vitro

The aim of this study was to evaluate the effect of in vitro successive subcultures of Beauveria bassiana isolates in different nutritional conditions on conidia heat and UV radiation tolerance and on sensitivity to azoxystrobin fungicide. The fungus was initially inoculated in Alphitobius diaperinus (Coleoptera: Tenebrionidae) adults and after its development, the conidia were cultivated in PDA (potato dextrose agar) and MPE (medium to produce Beauveria spp. conidia) originating the first subculture 1st (A) conidia, which were successively multiplied in their media until the 20th cultivation. Conidia taken from the 20th subculture were again inoculated in the insect and after sporulation they were once more multiplied in the media, producing the 1st (B) conidia. For the tests, 1st (A), 10th, 20th and 1st (B) conidia from the CG 152 and Unioeste 40 isolates were used. Successive subcultures and the medium nutritional conditions interfered on the fungus physiology, and the isolates showed different behaviors. The subcultures on PDA showed higher thermotolerance to Unioeste 40 in all subcultures and to CG 152 just after inoculation in the host. B. bassiana was susceptible to UV radiation, and this characteristic was influenced by the subcultures in different media. Both isolates were more tolerant to UV radiation when subcultivated on MPE, while just for the 40 Unioeste this tolerance increased after host inoculation. The B. bassiana sensitivity to azoxystrobin fungicide was affected after successive subcultures in bothmedium. Conidia originated in MPE were more resistant to fungicide and the host inoculation increased this tolerance. These results show that it is possible to enhance the fungi efficiency to control pests, through the selection of a virulent isolate, and handling their nutritional conditions during cultivation and host inoculation.(AU)

O objetivo deste trabalho foi avaliar o efeito de sucessivos cultivos in vitro de isolados de Beauveria bassiana, em diferentes condições nutricionais, sobre a tolerância ao calor e à radiação UV e a sensibilidade ao fungicida azoxistrobina. O fungo foi inicialmente inoculado em adultos de Alphitobius diaperinus (Coleoptera: Tenebrionidae), e após o seu desenvolvimento, os conídios foram multiplicados nos meios BDA (batata, dextrose, ágar) e MPE (meio para a produção de esporos de Beauveria spp.), originando os conídios de primeiro cultivo 1(A), os quais foram sucessivamente multiplicados nos respectivos meios até o 20 cultivo. Os conídios retirados do 20º cultivo foram reinoculados no inseto, e após a esporulação, foram novamente multiplicados nos meios de origem, produzindo os conídios de 1(B). Foram selecionados para os ensaios, os conídios de 1º(A), 10º, 20º e 1º(B) cultivos dos isolados CG 152 e Unioeste 40. Os cultivos sucessivos e as condições nutricionais do meio interferiram na fisiologia do fungo, e os isolados mostraram comportamentos diferentes entre si. Os cultivos em meio BDA proporcionaram maior termotolerância ao Unioeste 40 em todos os cultivos, e ao CG 152 apenas após as inoculações no hospedeiro. B. bassiana foi suscetível à radiação UV, e essa característica foi influenciada pelos cultivos nos diferentes meios. Ambos isolados foram mais tolerantes aradiação UV quando cultivados em MPE, enquanto apenas para o Unioeste 40 essa tolerância aumentou após a inoculação no hospedeiro. A sensibilidade de B. bassiana ao fungicida azoxistrobina foi afetada após os sucessivos cultivos em ambos os meios. Os conídios originados em MPE foram mais resistentes ao fungicida, e a inoculação no hospedeiro também aumentou essa tolerância. (AU)

Lethal effects of a Mexican Beauveria bassiana (Balsamo) strain against Meccus pallidipennis (Stal)

The entomopathogenic fungus Beauveria bassiana (Balsamo 1835) Vuillemin is an effective alternative control agent against some agricultural pests and biological vectors of important diseases such as Chagas disease. In this work we studied an isolate of Beauveria bassiana from of the town of San Antonio Rayón, Puebla, Mexico and its entomopathogenic effects on Meccus pallidipennis (Stal 1872). Phylogenetic analysis using molecular comparison of the ITS and EF1α genes, showed that the resulting cladogram places the BUAP 04 strain with a relationship closer to the AFAO 9-6 strain, within the diversity of the B. bassiana sensu lato group. Although there was the possibility that BUAP 04 strain was a direct descendant of strains used in campaigns of biologic control, molecular study allowed us to recognize that it was a different fungus due to numerous inserts. A strain isolated from a T. dimiata was evaluated for pathogenicity against another triatoma (Meccus pallidipennis) species obtaining an LC50 of 4.16 x 10(6) spores/mL, confirming that the BUAP 04 strain is virulent for M. pallidipennis and could be a good prospect for formulations to control M. pallidipennis.

Produção semissólida de Metarhizium anisopliae e Beauveria bassiana em diferentes substratos e efeito da radiação ultravioleta e da temperatura sobre propágulos desses entomopatógenos / Semi-solid production of Metarhizium anisopliae (Metsch) Sorok and Beauveria bassiana (Bals) Vuill on different media and the effects of ultraviolet radiation and temperature on the infective propagules of these fungi

O trabalho teve os seguintes objetivos: 1) avaliar diferentes substratos para a produção semissólida dos fungos Metarhizium anisopliae e Beauveria bassiana; 2) verificar a tolerância dos conídios produzidos ao efeito da radiação ultravioleta e da temperatura; e 3) avaliar a patogenicidade dos conídios a Diatraea saccharalis. Para ambos os fungos, foram utilizadas 6 repetições para cada tratamento: amido de milho, arroz integral, arroz parboilizado tipo1, arroz tipo 1 e 2, aveia em flocos, canjiquinha, farelo de trigo, farinhas de mandioca crua, de milho amarela e de trigo especial, fubá, milho em grãos, polvilho azedo, soja em grãos, trigo moído e turfa. Os conídios foram quantificados em câmara de Neubauer e a determinação da viabilidade foi realizada através da observação em microscópio, dos conídios germinados e não germinados, após espalhamento da suspensão fúngica em placas de Petri contendo BDA. No ensaio com radiação os fungos foram expostos à radiação por 25 e 50 segundos e foi considerado um tratamento sem exposição; para temperatura os fungos foram expostos a 20, 25, 30 e 35o C. Utilizando a torre de Potter, 2 mL de cada suspensão fúngica dos tratamentos foram pulverizados em lagartas de D. saccharalis. As maiores concentrações de conídios de M. anisopliae e B. bassiana foram encontradas nos tratamentos com arroz parboilizado tipo 1, arroz tipo 1 e 2, farinha de milho amarela, fubá e trigo moído e a viabilidade dos conídios produzidos superou os 94%. Quanto maior o tempo de exposição à radiação menor foi o número de conídios viáveis; também ocorreu perda significativa da viabilidade dos conídios quando expostos à temperatura de 35o C. Os fungos foram patogênicos para D. saccharalis.

The present study was aimed to evaluate different (semi-solid) media for the production of Metarhizium anisopliae and Beauveria bassiana propagules, and to evaluate the tolerance of these propagules to ultraviolet radiation and temperature. The experiments were performed at the Biological Control Laboratory of the Instituto Biológico at Campinas, São Paulo, Brazil. For both fungi, 6 repetitions were performed for each of the 17 treatments: corn starch, full rice, parboiled rice, type-1 rice, type-2 rice, oat flakes, canjiquinha [grits], wheat flour, raw cassava flour, yellow corn flour, special wheat flour, corn flour, corn in grains, cassava starch, soy in grains, crushed wheat, and turf. The viability analysis was done in plastic plates containing BDA. For the bioassays involving exposure to ultraviolet light and temperature, BDA was also used for viability analysis, and each treatment was exposed to the UV radiation for 0, 25 and 50 seconds, the temperature exposure being at 20, 25, 30 and 35º C. Using a Potter tower, 2 mL of fungus suspension from each treatment was inoculated to the Diatraea saccharalis caterpillars. Regarding the sporulation, the largest concentrations of M. anisopliae and B. bassiana were found for the treatments with parboiled rice, type-1 rice, type-2 rice, yellow corn flour, corn flour and crushed wheat. The viability of all treatments was superior to 94.00%. Also, the longer the duration of the exposition to the UV, the 2Universidade Estadual Paulista, Faculdade de Ciências Agronômicas, Botucatu, SP, Brasil.

Sensitivity of Beauveria bassiana conidia to abiotic factors after successive in vitro subcultures / Sensibilidade de conídios de Beauveria bassiana a fatores abióticos após sucessivos cultivos in vitro

The aim of this study was to evaluate the effect of in vitro successive subcultures of Beauveria bassiana isolates in different nutritional conditions on conidia heat and UV radiation tolerance and on sensitivity to azoxystrobin fungicide. The fungus was initially inoculated in Alphitobius diaperinus (Coleoptera: Tenebrionidae) adults and after its development, the conidia were cultivated in PDA (potato dextrose agar) and MPE (medium to produce Beauveria spp. conidia) originating the first subculture 1st (A) conidia, which were successively multiplied in their media until the 20th cultivation. Conidia taken from the 20th subculture were again inoculated in the insect and after sporulation they were once more multiplied in the media, producing the 1st (B) conidia. For the tests, 1st (A), 10th, 20th and 1st (B) conidia from the CG 152 and Unioeste 40 isolates were used. Successive subcultures and the medium nutritional conditions interfered on the fungus physiology, and the isolates showed different behaviors. The subcultures on PDA showed higher thermotolerance to Unioeste 40 in all subcultures and to CG 152 just after inoculation in the host. B. bassiana was susceptible to UV radiation, and this characteristic was influenced by the subcultures in different media. Both isolates were more tolerant to UV radiation when subcultivated on MPE, while just for the 40 Unioeste this tolerance increased after host inoculation. The B. bassiana sensitivity to azoxystrobin fungicide was affected after successive subcultures in bothmedium. Conidia originated in MPE were more resistant to fungicide and the host inoculation increased this tolerance. These results show that it is possible to enhance the fungi efficiency to control pests, through the selection of a virulent isolate, and handling their nutritional conditions during cultivation and host inoculation.

O objetivo deste trabalho foi avaliar o efeito de sucessivos cultivos in vitro de isolados de Beauveria bassiana, em diferentes condições nutricionais, sobre a tolerância ao calor e à radiação UV e a sensibilidade ao fungicida azoxistrobina. O fungo foi inicialmente inoculado em adultos de Alphitobius diaperinus (Coleoptera: Tenebrionidae), e após o seu desenvolvimento, os conídios foram multiplicados nos meios BDA (batata, dextrose, ágar) e MPE (meio para a produção de esporos de Beauveria spp.), originando os conídios de primeiro cultivo 1(A), os quais foram sucessivamente multiplicados nos respectivos meios até o 20 cultivo. Os conídios retirados do 20º cultivo foram reinoculados no inseto, e após a esporulação, foram novamente multiplicados nos meios de origem, produzindo os conídios de 1(B). Foram selecionados para os ensaios, os conídios de 1º(A), 10º, 20º e 1º(B) cultivos dos isolados CG 152 e Unioeste 40. Os cultivos sucessivos e as condições nutricionais do meio interferiram na fisiologia do fungo, e os isolados mostraram comportamentos diferentes entre si. Os cultivos em meio BDA proporcionaram maior termotolerância ao Unioeste 40 em todos os cultivos, e ao CG 152 apenas após as inoculações no hospedeiro. B. bassiana foi suscetível à radiação UV, e essa característica foi influenciada pelos cultivos nos diferentes meios. Ambos isolados foram mais tolerantes aradiação UV quando cultivados em MPE, enquanto apenas para o Unioeste 40 essa tolerância aumentou após a inoculação no hospedeiro. A sensibilidade de B. bassiana ao fungicida azoxistrobina foi afetada após os sucessivos cultivos em ambos os meios. Os conídios originados em MPE foram mais resistentes ao fungicida, e a inoculação no hospedeiro também aumentou essa tolerância.