Inhibitory effect of different probiotic formulations on Salmonella Heidelberg, avian pathogenic Escherichia coli and Campylobacter jejuni

A wide variety of microorganism species have been used as probiotics to improve the intestinal microbial balance, control and prevent the colonization of pathogenic bacteria and promote growth in animal production. Based on the various beneficial factors of probiotic agents, this study aimed to evaluate the effectiveness of three different formulations of probiotics strains through the analysis of antagonistic capacity against common pathogens from chickens gastrointestinal tract. Three formulations composed by Bacillus, Lactobacillus, Saccharomyces, Enterococcus, Bifidobacterium and Pediococcus were tested in vitro by the method of probiotic culture spot in plates seeded with inocula of Escherichia coli, Salmonella Heidelberg and Campylobacter jejuni. The inhibition halos were measured and classified according to the degree of pathogenic bacteria inhibition. The formulation containing an association among Bacillus, Lactobacillus and Saccharomyces presented better results when compared to the other formulations.

Phenotypic and molecular characterization of erythromycin resistance in Campylobacter jejuni and Campylobacter coli strains isolated from swine and broiler chickens / Caracterização fenotípica e molecular da resistência à eritromicina em cepas de Campylobacter jejuni e Campylobacter coli isoladas de suínos e frangos de corte

Campylobacter spp. is a bacterial agent that causes gastroenteritis in humans and may trigger Guillain-Barré Syndrome (GBS) and is also considered one of the main foodborne diseases in developed countries. Poultry and pigs are considered reservoirs of these microorganisms, as well as raw or undercooked by-products are often incriminated as a source of human infection. Treatment in human cases is with macrolide, such erythromycin, that inhibits the protein synthesis of the microorganism. This study aimed to isolate Campylobacter jejuni and Campylobacter coli from intestinal content samples of broiler chickens (n=20) and swine (n=30) to characterize the erythromycin resistance profile of the strains and to detect molecular mechanisms involved in this resistance. The minimum inhibitory concentration was determined by agar dilution. The Mismatch Amplification Mutation Assay-Polymerase Chain Reaction (MAMA-PCR) was performed to detect mutations at positions 2074 and 2075 of 23S rRNA region, in addition to PCR test to detect the erm(B) gene. From the intestinal content of broiler chickens, 18 strains of C. jejuni and two strains of C. coli were isolated, whereas, from swine samples, no C. jejuni strain and 14 strains of C. coli were isolated. All C. coli strains were resistant, and three C. jejuni strains from broilers chickens were characterized with intermediate resistance to erythromycin. The MIC of the strains ranged from ≤0.5mg/μL to ≥128mg/μL. All resistant strains had the A2075G mutation, and one strain with intermediate resistance had the A2075G mutation. However, the A2074C mutation and the erm(B) gene were not detected. High resistance levels were detected in C. coli strains isolated from swine. The MAMA-PCR is a practical tool for detecting the erythromycin resistance in Campylobacter strains.(AU)

Campylobacter spp. é um agente bacteriano causador de gastroenterite em humanos e associado à síndrome de Guillain-Barré, sendo a campilobacteriose considerada uma das principais enfermidades de origem alimentar. Aves e suínos são importantes reservatórios desses microrganismos e seus produtos derivados crus ou mal cozidos são muitas vezes incriminados como fonte de infecção humana. A primeira escolha para o tratamento em casos humanos são os antimicrobianos da classe dos macrolídeos como à eritromicina. Dentro desse contexto, o objetivo deste estudo foi isolar Campylobacter jejuni e C. coli a partir de 20 amostras de conteúdo intestinal de frangos de corte e de 30 de suínos ao abate e investigar a resistência à eritromicina das estirpes obtidas e os possíveis mecanismos moleculares envolvidos nesta resistência. A concentração inibitória mínima foi determinada pela diluição em ágar e a técnica MAMA-PCR foi utilizada para detecção de mutações nas posições 2074 e 2075 da região 23s rRNA, foi pesquisado também a presença do gene erm(B) pela PCR. A partir do conteúdo intestinal de frangos de corte foram isoladas 18 estirpes de C. jejuni e duas de C. coli, enquanto de suínos foram obtidas 14 estirpes de C. coli e nenhuma estirpe de C. jejuni. Todas as estirpes de C. coli de suínos foram identificadas como resistentes e três estirpes de C. jejuni de frangos foram caracterizadas com resistência intermediária. A CIM das estirpes variou de ≤0,5mg/μL a ≥128mg/μL. Todas as estirpes resistentes tinham a mutação A2075G e uma cepa com resistência intermediária também apresentou a mutação A2075G. Não foi detectada a mutação A2074C ou a presença do gene erm(B) em nenhuma das estirpes obtidas. Os resultados revelam um alto nível de resistência em estirpes de C. coli isoladas de suínos frente a eritromicina. A técnica MAMA PCR utilizada se constitui em uma ferramenta prática para detecção da resistência à eritromicina em estirpes de C. jejuni e C. coli.(AU)

Phenotypic and molecular characterization of erythromycin resistance in Campylobacter jejuni and Campylobacter coli strains isolated from swine and broiler chickens / Caracterização fenotípica e molecular da resistência à eritromicina em cepas de Campylobacter jejuni e Campylobacter coli isoladas de suínos e frangos de corte

Campylobacter spp. is a bacterial agent that causes gastroenteritis in humans and may trigger Guillain-Barré Syndrome (GBS) and is also considered one of the main foodborne diseases in developed countries. Poultry and pigs are considered reservoirs of these microorganisms, as well as raw or undercooked by-products are often incriminated as a source of human infection. Treatment in human cases is with macrolide, such erythromycin, that inhibits the protein synthesis of the microorganism. This study aimed to isolate Campylobacter jejuni and Campylobacter coli from intestinal content samples of broiler chickens (n=20) and swine (n=30) to characterize the erythromycin resistance profile of the strains and to detect molecular mechanisms involved in this resistance. The minimum inhibitory concentration was determined by agar dilution. The Mismatch Amplification Mutation Assay-Polymerase Chain Reaction (MAMA-PCR) was performed to detect mutations at positions 2074 and 2075 of 23S rRNA region, in addition to PCR test to detect the erm(B) gene. From the intestinal content of broiler chickens, 18 strains of C. jejuni and two strains of C. coli were isolated, whereas, from swine samples, no C. jejuni strain and 14 strains of C. coli were isolated. All C. coli strains were resistant, and three C. jejuni strains from broilers chickens were characterized with intermediate resistance to erythromycin. The MIC of the strains ranged from ≤0.5mg/μL to ≥128mg/μL. All resistant strains had the A2075G mutation, and one strain with intermediate resistance had the A2075G mutation. However, the A2074C mutation and the erm(B) gene were not detected. High resistance levels were detected in C. coli strains isolated from swine. The MAMA-PCR is a practical tool for detecting the erythromycin resistance in Campylobacter strains.(AU)

Campylobacter spp. é um agente bacteriano causador de gastroenterite em humanos e associado à síndrome de Guillain-Barré, sendo a campilobacteriose considerada uma das principais enfermidades de origem alimentar. Aves e suínos são importantes reservatórios desses microrganismos e seus produtos derivados crus ou mal cozidos são muitas vezes incriminados como fonte de infecção humana. A primeira escolha para o tratamento em casos humanos são os antimicrobianos da classe dos macrolídeos como à eritromicina. Dentro desse contexto, o objetivo deste estudo foi isolar Campylobacter jejuni e C. coli a partir de 20 amostras de conteúdo intestinal de frangos de corte e de 30 de suínos ao abate e investigar a resistência à eritromicina das estirpes obtidas e os possíveis mecanismos moleculares envolvidos nesta resistência. A concentração inibitória mínima foi determinada pela diluição em ágar e a técnica MAMA-PCR foi utilizada para detecção de mutações nas posições 2074 e 2075 da região 23s rRNA, foi pesquisado também a presença do gene erm(B) pela PCR. A partir do conteúdo intestinal de frangos de corte foram isoladas 18 estirpes de C. jejuni e duas de C. coli, enquanto de suínos foram obtidas 14 estirpes de C. coli e nenhuma estirpe de C. jejuni. Todas as estirpes de C. coli de suínos foram identificadas como resistentes e três estirpes de C. jejuni de frangos foram caracterizadas com resistência intermediária. A CIM das estirpes variou de ≤0,5mg/μL a ≥128mg/μL. Todas as estirpes resistentes tinham a mutação A2075G e uma cepa com resistência intermediária também apresentou a mutação A2075G. Não foi detectada a mutação A2074C ou a presença do gene erm(B) em nenhuma das estirpes obtidas. Os resultados revelam um alto nível de resistência em estirpes de C. coli isoladas de suínos frente a eritromicina. A técnica MAMA PCR utilizada se constitui em uma ferramenta prática para detecção da resistência à eritromicina em estirpes de C. jejuni e C. coli.(AU)

Antimicrobial Resistance in Campylobacter jejuni Isolated from Brazilian Poultry Slaughterhouses

Campylobacteriosis is one of the most common foodborne diseases in the world. It is considered the most frequently reported foodborne illness in the European Union (EU) and one of the most important in the United States (US) (EFSA & ECDC, 2018; CDC, 2019a; WHO, 2019). Poultry is known to be the major reservoir and an important source for pathogen transmission to humans (Kaakoush et al., 2015). Campylobacteriosis is most often associated with the consumption of raw and undercooked poultry or the cross-contamination of other foods by these items (CDC, 2019a). Although Brazil is a leading supplier of the worlds poultry meat (ABPA, 2018), Brazils official data does not report Campylobacter infections.(AU)

Antimicrobial Resistance in Campylobacter jejuni Isolated from Brazilian Poultry Slaughterhouses

Campylobacteriosis is one of the most common foodborne diseases in the world. It is considered the most frequently reported foodborne illness in the European Union (EU) and one of the most important in the United States (US) (EFSA & ECDC, 2018; CDC, 2019a; WHO, 2019). Poultry is known to be the major reservoir and an important source for pathogen transmission to humans (Kaakoush et al., 2015). Campylobacteriosis is most often associated with the consumption of raw and undercooked poultry or the cross-contamination of other foods by these items (CDC, 2019a). Although Brazil is a leading supplier of the world’s poultry meat (ABPA, 2018), Brazil’s official data does not report Campylobacter infections.

Maintenance of strains of Campylobacter jejuni in laboratories after use of cryoprotectors and pre-treatment of stress / Manutenção de cepas de Campylobacter jejuni em laboratório após uso de crioprotetores e pré-tratamento de estresse

This study evaluated the feasibility and the production of transcripts of sodB, p19, ciaB and dnaJ genes in strains of Campylobacter jejuni ATCC 33291, NCTC 11351, and 2383 IAL stored in whole UHT milk and or neopepton + 12% glycerol, submitted or not to pre-treatments at 4°C or 10°C for 30 minutes. The analyzes were performed immediately after freezing in liquid nitrogen (day 0) and after maintenance for 30, 60, and 90 days at -20ºC. The viability was evaluated by the traditional culture method and the production of transcripts by the RT-PCR technique. The quantification was only possible on the first day of analysis (day 0) and presented a mean of 3.0 x 107 CFU, and in the other periods of storage the strains presented confluent growth, not allowing their enumeration. The results indicated that whole UHT milk was more adequate for cryopreservation than the use of neopepton + 12% glycerol. The use of pre-treatments combined with the use of UHT milk as a cryoprotective medium stabilized the cells in order to transcribe the ciaB, dnaJ, sodBand p19 genes in the strains maintained under -20 ° for 30 to 60 days, indicating that they are more suitable methods for the maintenance of strains in the laboratory.

Este estudo avaliou a viabilidade e a produção de transcritos dos genes sodB, p19, ciaB e dnaJ em cepas de Campylobacter jejuni ATCC 33291, NCTC 11351 e 2383 IAL armazenadas em leite integral UHT e / ou neopeptona + 12% glicerol, submetidas ou não a pré-tratamentos a 4°C ou 10°C durante 30 minutos. As análises foram realizadas imediatamente após o congelamento em nitrogênio líquido (dia 0) e após a manutenção por 30, 60 e 90 dias à -20ºC. A viabilidade foi avaliada pelo método tradicional de cultura e a produção de transcritos, pela técnica de RT-PCR. A quantificação só foi possível no primeiro dia de análise (dia 0) e apresentou uma média de 3,0 x 107 UFC, e nos demais períodos de armazenamento as cepas apresentaram crescimento confluente, não permitindo sua enumeração. Os resultados indicaram que o leite integral UHT foi mais adequado para criopreservação em relação ao uso de neopeptona + 12% glicerol. A utilização de pré-tratamentos combinados com o uso de leite UHT como meio crioprotetor estabilizou as células para transcrever os genes ciaB, dnaJ, sodB e p19 nas cepas mantidas abaixo de -20° por 30 a 60 dias, indicando que são métodos mais adequados para a manutenção de cepas em laboratório.

Maintenance of strains of Campylobacter jejuni in laboratories after use of cryoprotectors and pre-treatment of stress / Manutenção de cepas de Campylobacter jejuni em laboratório após uso de crioprotetores e pré-tratamento de estresse

This study evaluated the feasibility and the production of transcripts of sodB, p19, ciaB and dnaJ genes in strains of Campylobacter jejuni ATCC 33291, NCTC 11351, and 2383 IAL stored in whole UHT milk and or neopepton + 12% glycerol, submitted or not to pre-treatments at 4°C or 10°C for 30 minutes. The analyzes were performed immediately after freezing in liquid nitrogen (day 0) and after maintenance for 30, 60, and 90 days at -20ºC. The viability was evaluated by the traditional culture method and the production of transcripts by the RT-PCR technique. The quantification was only possible on the first day of analysis (day 0) and presented a mean of 3.0 x 107 CFU, and in the other periods of storage the strains presented confluent growth, not allowing their enumeration. The results indicated that whole UHT milk was more adequate for cryopreservation than the use of neopepton + 12% glycerol. The use of pre-treatments combined with the use of UHT milk as a cryoprotective medium stabilized the cells in order to transcribe the ciaB, dnaJ, sodBand p19 genes in the strains maintained under -20 ° for 30 to 60 days, indicating that they are more suitable methods for the maintenance of strains in the laboratory.(AU)

Este estudo avaliou a viabilidade e a produção de transcritos dos genes sodB, p19, ciaB e dnaJ em cepas de Campylobacter jejuni ATCC 33291, NCTC 11351 e 2383 IAL armazenadas em leite integral UHT e / ou neopeptona + 12% glicerol, submetidas ou não a pré-tratamentos a 4°C ou 10°C durante 30 minutos. As análises foram realizadas imediatamente após o congelamento em nitrogênio líquido (dia 0) e após a manutenção por 30, 60 e 90 dias à -20ºC. A viabilidade foi avaliada pelo método tradicional de cultura e a produção de transcritos, pela técnica de RT-PCR. A quantificação só foi possível no primeiro dia de análise (dia 0) e apresentou uma média de 3,0 x 107 UFC, e nos demais períodos de armazenamento as cepas apresentaram crescimento confluente, não permitindo sua enumeração. Os resultados indicaram que o leite integral UHT foi mais adequado para criopreservação em relação ao uso de neopeptona + 12% glicerol. A utilização de pré-tratamentos combinados com o uso de leite UHT como meio crioprotetor estabilizou as células para transcrever os genes ciaB, dnaJ, sodB e p19 nas cepas mantidas abaixo de -20° por 30 a 60 dias, indicando que são métodos mais adequados para a manutenção de cepas em laboratório.(AU)

Detecção de Campylobacter jejuni em produtos de frango utilizando separação imunomagnética / Detection of Campylobacter jejuni in chicken products using immunomagnetic separation

Campylobacter jejuni é o principal causador de gastroenterite bacteriana aguda, e a carne de frango tem se mostrado uma importante fonte de transmissão. Este microrganismo é de difícil isolamento e os métodos convencionais muitas vezes não são eficientes, podendo levar a resultados errôneos. O objetivo deste trabalho foi desenvolver e testar a técnica de separação imunomagnética (IMS) na detecção de C. jejuni em produtos de frango. Micropartículas magnéticas ligadas a anticorpos policlonais anti-C. jejuni foram utilizadas para concentrar C. jejuni antes da semeadura em ágar. O protocolo foi comparado com o método convencional. C. jejuni foi recuperado do alimento experimentalmente contaminado por ambos os métodos, entretanto, quando foi usada a IMS, a presença de microrganismos contaminantes nos meios de cultura foi menor. C. jejuni foi isolado de 7% das amostras de alimento naturalmente contaminadas, usando IMS, e de 3% pelo método convencional. C. coli foi isolado de uma amostra pelo método convencional, mas não foi detectado pelo protocolo com IMS. A técnica de IMS pode ser usada para isolamento de C. jejuni de alimentos, oferecendo a vantagem de detectar em amostras o microrganismo cujo isolamento não é obtido por meio do método convencional.(AU)

Campylobacter jejuni is the main cause of acute bacterial gastroenteritis and chicken meat has shown to be an important source of infection. This microorganism is difficult to isolate and the conventional methods are often inefficient and may lead to erroneous results. This study aimed at developing and testing the technique of immunomagnetic separation (IMS) in the detection of C. jejuni in chicken products. Microparticles magnetically connected anti-C. jejuni polyclonal antibodies were used to concentrate C. jejuni before agar seeding. The protocol was compared with the conventional method. C. jejuni was recovered from experimentally contaminated food for both methods, however, when the IMS was used, the presence of contaminating microorganisms in the means of culture was smaller. C. jejuni was isolated from 7% of samples of food naturally contaminated, using IMS, and 3% by conventional method. C. coli was isolated from a sample by conventional method, but it was not detected by protocol with IMS. The IMS technique can be used for isolation of C. jejuni in food, offering the advantage of detecting the microorganism in samples from which the isolation is not obtained with the use of the conventional method.(AU)

Detecção de Campylobacter jejuni em produtos de frango utilizando separação imunomagnética / Detection of Campylobacter jejuni in chicken products using immunomagnetic separation

Campylobacter jejuni é o principal causador de gastroenterite bacteriana aguda, e a carne de frango tem se mostrado uma importante fonte de transmissão. Este microrganismo é de difícil isolamento e os métodos convencionais muitas vezes não são eficientes, podendo levar a resultados errôneos. O objetivo deste trabalho foi desenvolver e testar a técnica de separação imunomagnética (IMS) na detecção de C. jejuni em produtos de frango. Micropartículas magnéticas ligadas a anticorpos policlonais anti-C. jejuni foram utilizadas para concentrar C. jejuni antes da semeadura em ágar. O protocolo foi comparado com o método convencional. C. jejuni foi recuperado do alimento experimentalmente contaminado por ambos os métodos, entretanto, quando foi usada a IMS, a presença de microrganismos contaminantes nos meios de cultura foi menor. C. jejuni foi isolado de 7% das amostras de alimento naturalmente contaminadas, usando IMS, e de 3% pelo método convencional. C. coli foi isolado de uma amostra pelo método convencional, mas não foi detectado pelo protocolo com IMS. A técnica de IMS pode ser usada para isolamento de C. jejuni de alimentos, oferecendo a vantagem de detectar em amostras o microrganismo cujo isolamento não é obtido por meio do método convencional.(AU)

Campylobacter jejuni is the main cause of acute bacterial gastroenteritis and chicken meat has shown to be an important source of infection. This microorganism is difficult to isolate and the conventional methods are often inefficient and may lead to erroneous results. This study aimed at developing and testing the technique of immunomagnetic separation (IMS) in the detection of C. jejuni in chicken products. Microparticles magnetically connected anti-C. jejuni polyclonal antibodies were used to concentrate C. jejuni before agar seeding. The protocol was compared with the conventional method. C. jejuni was recovered from experimentally contaminated food for both methods, however, when the IMS was used, the presence of contaminating microorganisms in the means of culture was smaller. C. jejuni was isolated from 7% of samples of food naturally contaminated, using IMS, and 3% by conventional method. C. coli was isolated from a sample by conventional method, but it was not detected by protocol with IMS. The IMS technique can be used for isolation of C. jejuni in food, offering the advantage of detecting the microorganism in samples from which the isolation is not obtained with the use of the conventional method.(AU)

Eficiência de diferentes protocolos para isolamento de Campylobacter jejuni de carne de frango / Efficiency of different protocols for Campylobacter jejuni isolation from poultry meat

Campylobacter jejuni é o principal causador de gastroenterite bacteriana aguda e a carne de frango é um importante veículo do agente. Entretanto, as metodologias convencionais de isolamento de Campylobacter muitas vezes não são eficientes, podendo levar a resultados errôneos. Sendo assim, este trabalho teve como objetivo avaliar diferentes métodos utilizados na detecção de C. jejuni em produtos de frango. Carne moída experimentalmente contaminada com três diferentes diluições do microrganismo foi analisada com diferentes protocolos para isolamento de C. jejuni. Foram feitas semeaduras diretamente nos ágares mCCDA, Columbia e ágar sangue, e após pré-enriquecimento nos caldos Bolton ou Brucella. As colônias características de Campylobacter foram identificadas e os resultados comparados a fim de avaliar qual o método foi mais eficaz. Os únicos protocolos em que foi possível recuperar o microrganismo de todos os testes foram aqueles em que foi utilizado o ágar mCCDA associado com o Caldo Bolton ou com o Caldo Brucella. Estes foram também os únicos protocolos que permitiram a recuperação de C. jejuni 24 horas após a contaminação experimental com inóculo igual a 100 UFC/25 g. Entretanto, o ágar mCCDA sem o uso de pré-enriquecimento apresentou desempenho insatisfatório, inferior ao dos demais protocolos. Conclui-se que ágar mCCDA com pré-enriquecimento em caldo Brucella ou em caldo Bolton foram mais eficientes para o isolamento de C. jejuni que os demais protocolos.

Campylobacter jejuni is the main cause of acute bacterial gastroenteritis, and poultry meat is an important agent vehicle. However, the conventional methods for Campylobacter isolation are often not effective and may lead to erroneous results. Thus, this study aimed to evaluate different methods to C. jejuni detection in poultry products. Ground chicken experimentally contaminated with three different dilutions of the microorganism was analyzed with different protocols to C. jejuni isolation: Seeding directly in agars mCCDA, Columbia and blood agar, and after pre-enrichment in Bolton or Brucella broth. The Campylobacter characteristic colonies were identified and compared in order to assess which method was the most effective. The only protocols in which it was possible to recover the microorganism from all the tests were those using the mCCDA agar associated with the Bolton broth or the Brucella broth. These were also the only protocols that allowed the recovery of C. jejuni 24 hours after the experimental contamination with inoculum equal to 100 CFU/25 g. However, the mCCDA agar without the use of pre-enrichment presented an unsatisfactory performance, lower than the other protocols. It is concluded that mCCDA agar with Brucella broth or with Bolton broth pre-enrichment was more efficient for the C. jejuni isolation than the other protocols.

Eficiência de diferentes protocolos para isolamento de Campylobacter jejuni de carne de frango / Efficiency of different protocols for Campylobacter jejuni isolation from poultry meat

Campylobacter jejuni é o principal causador de gastroenterite bacteriana aguda e a carne de frango é um importante veículo do agente. Entretanto, as metodologias convencionais de isolamento de Campylobacter muitas vezes não são eficientes, podendo levar a resultados errôneos. Sendo assim, este trabalho teve como objetivo avaliar diferentes métodos utilizados na detecção de C. jejuni em produtos de frango. Carne moída experimentalmente contaminada com três diferentes diluições do microrganismo foi analisada com diferentes protocolos para isolamento de C. jejuni. Foram feitas semeaduras diretamente nos ágares mCCDA, Columbia e ágar sangue, e após pré-enriquecimento nos caldos Bolton ou Brucella. As colônias características de Campylobacter foram identificadas e os resultados comparados a fim de avaliar qual o método foi mais eficaz. Os únicos protocolos em que foi possível recuperar o microrganismo de todos os testes foram aqueles em que foi utilizado o ágar mCCDA associado com o Caldo Bolton ou com o Caldo Brucella. Estes foram também os únicos protocolos que permitiram a recuperação de C. jejuni 24 horas após a contaminação experimental com inóculo igual a 100 UFC/25 g. Entretanto, o ágar mCCDA sem o uso de pré-enriquecimento apresentou desempenho insatisfatório, inferior ao dos demais protocolos. Conclui-se que ágar mCCDA com pré-enriquecimento em caldo Brucella ou em caldo Bolton foram mais eficientes para o isolamento de C. jejuni que os demais protocolos.(AU)

Campylobacter jejuni is the main cause of acute bacterial gastroenteritis, and poultry meat is an important agent vehicle. However, the conventional methods for Campylobacter isolation are often not effective and may lead to erroneous results. Thus, this study aimed to evaluate different methods to C. jejuni detection in poultry products. Ground chicken experimentally contaminated with three different dilutions of the microorganism was analyzed with different protocols to C. jejuni isolation: Seeding directly in agars mCCDA, Columbia and blood agar, and after pre-enrichment in Bolton or Brucella broth. The Campylobacter characteristic colonies were identified and compared in order to assess which method was the most effective. The only protocols in which it was possible to recover the microorganism from all the tests were those using the mCCDA agar associated with the Bolton broth or the Brucella broth. These were also the only protocols that allowed the recovery of C. jejuni 24 hours after the experimental contamination with inoculum equal to 100 CFU/25 g. However, the mCCDA agar without the use of pre-enrichment presented an unsatisfactory performance, lower than the other protocols. It is concluded that mCCDA agar with Brucella broth or with Bolton broth pre-enrichment was more efficient for the C. jejuni isolation than the other protocols.(AU)

Campylobacter jejuni and Campylobacter coli originated from chicken carcasses modulate their transcriptome to translate virulence genes in human cells / Campylobacter jejuni e Campylobacter coli originadas de carcaças de frango modulam seu transcriptoma para traduzir genes de virulência em células humanas

The aim was to determine the spread of genetically similar profiles of Campylobacter in chicken carcasses and evaluate their ability to produce transcripts for ciaB, dnaJ, p19 and sodB genes, before and after cultivation in Caco-2 cells. The strains used were isolated from 420 samples of chicken carcasses chilled and frozen ready for marketing. The species were identified by PCR-multiplex, the phylogeny was determined by RAPD-PCR and the presence of transcripts was performed by RT-PCR. We identified 74 (17.6%) of Campylobacter strains, being 55 (74.3%) C. jejuni and 19 (25.7%) C. coli. The phylogenetic relationship demonstrated heterogeneity between isolates of the same species, with absence of clones, indicating the high level of diversity of circulating genotypes. The gene transcription showed conflicting results before and after the culture in Caco-2 cell, so that before cultivation isolates showed greater capacity to transcribe genes related to survival and after the interaction with human cells, the strains showed higher potential to transcribe genes associated with virulence. The result of this study contributes to the understanding of how these seemingly fragile microorganisms are the most prevalent bacterial agents in human gastroenteritis.(AU)

O objetivo foi determinar a disseminação de perfis geneticamente semelhantes de Campylobacter em carcaças de frango e avaliar sua capacidade de produzir transcritos para os genes ciaB, dnaJ, p19 e sodB, antes e após o cultivo em células Caco-2. As cepas utilizadas foram isoladas de 420 amostras de carcaças de frango resfriadas e congeladas prontas para comercialização. As espécies foram identificadas por PCR-multiplex, a filogenia foi determinada por RAPD-PCR e a presença de transcritos foi realizada por RT-PCR. Identificamos 74 (17,6%) das cepas de Campylobacter, sendo 55 (74,3%) C. jejuni e 19 (25,7%) C. coli. A relação filogenética demonstrou heterogeneidade entre isolados da mesma espécie, com ausência de clones, indicando o alto nível de diversidade dos genótipos circulantes. A transcrição gênica mostrou resultados conflitantes antes e após a cultura em células Caco-2, de modo que, antes do cultivo, os isolados apresentaram maior capacidade de transcrever genes relacionados à sobrevivência e após a interação com células humanas, as linhagens apresentaram maior potencial para transcrever genes associados à virulência. O resultado deste estudo contribui para a compreensão de como esses microrganismos aparentemente frágeis são os agentes bacterianos mais prevalentes na gastroenterite humana.(AU)

Campylobacter jejuni and Campylobacter coli originated from chicken carcasses modulate their transcriptome to translate virulence genes in human cells / Campylobacter jejuni e Campylobacter coli originadas de carcaças de frango modulam seu transcriptoma para traduzir genes de virulência em células humanas

The aim was to determine the spread of genetically similar profiles of Campylobacter in chicken carcasses and evaluate their ability to produce transcripts for ciaB, dnaJ, p19 and sodB genes, before and after cultivation in Caco-2 cells. The strains used were isolated from 420 samples of chicken carcasses chilled and frozen ready for marketing. The species were identified by PCR-multiplex, the phylogeny was determined by RAPD-PCR and the presence of transcripts was performed by RT-PCR. We identified 74 (17.6%) of Campylobacter strains, being 55 (74.3%) C. jejuni and 19 (25.7%) C. coli. The phylogenetic relationship demonstrated heterogeneity between isolates of the same species, with absence of clones, indicating the high level of diversity of circulating genotypes. The gene transcription showed conflicting results before and after the culture in Caco-2 cell, so that before cultivation isolates showed greater capacity to transcribe genes related to survival and after the interaction with human cells, the strains showed higher potential to transcribe genes associated with virulence. The result of this study contributes to the understanding of how these seemingly fragile microorganisms are the most prevalent bacterial agents in human gastroenteritis.(AU)

O objetivo foi determinar a disseminação de perfis geneticamente semelhantes de Campylobacter em carcaças de frango e avaliar sua capacidade de produzir transcritos para os genes ciaB, dnaJ, p19 e sodB, antes e após o cultivo em células Caco-2. As cepas utilizadas foram isoladas de 420 amostras de carcaças de frango resfriadas e congeladas prontas para comercialização. As espécies foram identificadas por PCR-multiplex, a filogenia foi determinada por RAPD-PCR e a presença de transcritos foi realizada por RT-PCR. Identificamos 74 (17,6%) das cepas de Campylobacter, sendo 55 (74,3%) C. jejuni e 19 (25,7%) C. coli. A relação filogenética demonstrou heterogeneidade entre isolados da mesma espécie, com ausência de clones, indicando o alto nível de diversidade dos genótipos circulantes. A transcrição gênica mostrou resultados conflitantes antes e após a cultura em células Caco-2, de modo que, antes do cultivo, os isolados apresentaram maior capacidade de transcrever genes relacionados à sobrevivência e após a interação com células humanas, as linhagens apresentaram maior potencial para transcrever genes associados à virulência. O resultado deste estudo contribui para a compreensão de como esses microrganismos aparentemente frágeis são os agentes bacterianos mais prevalentes na gastroenterite humana.(AU)

Isolation and antimicrobial resistance of Campylobacter jejuni and Campylobacter coli found in chilled chicken carcasses in the Federal District Region and surrounding areas / Isolamento e resistência antimicrobiana de Campylobacter jejuni e Campylobacter coli encontradas em carcaças de frango resfriadas na região do Distrito Federal e entorno

This study aimed to isolate Campylobacter jejuni and Campylobacter coli from chilled chicken carcasses marketed in the Federal District Region and surrounding areas, as well as to detect the occurrence of antimicrobial resistance and genes responsible for the same. A total of 105 chilled chicken carcasses were collected, of which 7 (6.67%) were positive for C. jejuni and 4 (3.81%) were positive for C. coli. These results were obtained using both the conventional microbiological isolation method and polymerase chain reaction assays. All of the positive strains were subjected to antimicrobial susceptibility testing for seven antimicrobials. The resistance incidences found in the C. jejuni strains were as follows: 71.43% for tetracycline and nalidixic acid, 42.86% for streptomycin and gentamicin, 57.14% for ciprofloxacin and erythromycin, and 28.57% for chloramphenicol. Among the C. coli strains, 100% were resistant to tetracycline and streptomycin, 75% were resistant to erythromycin, 50% were resistant to ciprofloxacin, gentamicin, and nalidixic acid, and no strains were resistant to chloramphenicol. While analyzing the presence of antimicrobial resistance genes in the isolated C. jejuni strains, the aph3-1 (resistance to aminoglycosides), aadE (resistance to streptomycin), and tet(O) (resistance to tetracycline) genes were identified, with occurrence rates of 57.14%, 28.57%, and 42.86%, respectively, whereas in the C. coli strains, there was a 25% occurrence rate for both the aph3-1 and tet(O) genes. The aadE gene was not found in the C. coli isolates. The results of this study demonstrated the presence of C. jejuni and C. coli in chilled chicken carcasses marketed in the Federal District Region and surrounding areas, as well as the antimicrobial resistance and the presence of resistance genes in these bacteria, which may pose threats to public health.

O objetivo deste trabalho foi isolar Campylobacter jejuni e Campylobacter coli de carcaças de frango resfriadas comercializadas no Distrito Federal e entorno, bem como detectar a ocorrência de resistência antimicrobiana e genes responsáveis pela resistência antimicrobiana. Foram coletadas um total de 105 carcaças de frango resfriadas, das quais 7 (6,67%) foram positivas para C. jejuni e 4 (3,81%) para C. coli. Estes resultados foram obtidos usando tanto o método convencional de isolamento microbiológico quanto os ensaios de reação em cadeia da polymerase (PCR). Todas as cepas positivas foram submetidas ao teste de susceptibilidade antimicrobiana para sete antimicrobianos. As incidências de resistência encontradas nas cepas de C. jejuni foram as seguintes: 71,43% para tetraciclina e ácido nalidíxico, 42,86% para estreptomicina e gentamicina, 57,14% para ciprofloxacina e eritromicina e 28,57% para cloranfenicol. Entre as cepas de C. coli, 100% foram resistentes à tetraciclina e à estreptomicina, 75% eram resistentes à eritromicina, 50% eram resistentes à ciprofloxacina, gentamicina e ácido nalidíxico, e nenhuma cepa eram resistentes ao cloranfenicol. Ao analisar a presença de genes de resistência antimicrobiana nas cepas isoladas de C. jejuni, foram identificados os genes aph3-1 (resistência a aminoglicosídeos), aadE (resistência à estreptomicina) e tet (O) (resistência à tetraciclina) genes foram identificados, com taxas de ocorrência de 57,14%, 28,57% e 42,86%, respectivamente, enquanto que nas cepas de C. coli, houve uma taxa de ocorrência de 25% para os genes aph3-1 e tet (O). O gene aadE não foi encontrado nos isolados de C. coli. Os resultados deste estudo demonstraram a presença de C. jejuni e C. coli em carcaças de frango resfriadas comercializadas na Região do Distrito Federal e entorno, além da resistência antimicrobiana e a presença de genes de resistência nestas cepas, que podem se tornar uma possível ameaça a saúde pública.

Isolation and antimicrobial resistance of Campylobacter jejuni and Campylobacter coli found in chilled chicken carcasses in the Federal District Region and surrounding areas / Isolamento e resistência antimicrobiana de Campylobacter jejuni e Campylobacter coli encontradas em carcaças de frango resfriadas na região do Distrito Federal e entorno

This study aimed to isolate Campylobacter jejuni and Campylobacter coli from chilled chicken carcasses marketed in the Federal District Region and surrounding areas, as well as to detect the occurrence of antimicrobial resistance and genes responsible for the same. A total of 105 chilled chicken carcasses were collected, of which 7 (6.67%) were positive for C. jejuni and 4 (3.81%) were positive for C. coli. These results were obtained using both the conventional microbiological isolation method and polymerase chain reaction assays. All of the positive strains were subjected to antimicrobial susceptibility testing for seven antimicrobials. The resistance incidences found in the C. jejuni strains were as follows: 71.43% for tetracycline and nalidixic acid, 42.86% for streptomycin and gentamicin, 57.14% for ciprofloxacin and erythromycin, and 28.57% for chloramphenicol. Among the C. coli strains, 100% were resistant to tetracycline and streptomycin, 75% were resistant to erythromycin, 50% were resistant to ciprofloxacin, gentamicin, and nalidixic acid, and no strains were resistant to chloramphenicol. While analyzing the presence of antimicrobial resistance genes in the isolated C. jejuni strains, the aph3-1 (resistance to aminoglycosides), aadE (resistance to streptomycin), and tet(O) (resistance to tetracycline) genes were identified, with occurrence rates of 57.14%, 28.57%, and 42.86%, respectively, whereas in the C. coli strains, there was a 25% occurrence rate for both the aph3-1 and tet(O) genes. The aadE gene was not found in the C. coli isolates. The results of this study demonstrated the presence of C. jejuni and C. coli in chilled chicken carcasses marketed in the Federal District Region and surrounding areas, as well as the antimicrobial resistance and the presence of resistance genes in these bacteria, which may pose threats to public health.(AU)

O objetivo deste trabalho foi isolar Campylobacter jejuni e Campylobacter coli de carcaças de frango resfriadas comercializadas no Distrito Federal e entorno, bem como detectar a ocorrência de resistência antimicrobiana e genes responsáveis pela resistência antimicrobiana. Foram coletadas um total de 105 carcaças de frango resfriadas, das quais 7 (6,67%) foram positivas para C. jejuni e 4 (3,81%) para C. coli. Estes resultados foram obtidos usando tanto o método convencional de isolamento microbiológico quanto os ensaios de reação em cadeia da polymerase (PCR). Todas as cepas positivas foram submetidas ao teste de susceptibilidade antimicrobiana para sete antimicrobianos. As incidências de resistência encontradas nas cepas de C. jejuni foram as seguintes: 71,43% para tetraciclina e ácido nalidíxico, 42,86% para estreptomicina e gentamicina, 57,14% para ciprofloxacina e eritromicina e 28,57% para cloranfenicol. Entre as cepas de C. coli, 100% foram resistentes à tetraciclina e à estreptomicina, 75% eram resistentes à eritromicina, 50% eram resistentes à ciprofloxacina, gentamicina e ácido nalidíxico, e nenhuma cepa eram resistentes ao cloranfenicol. Ao analisar a presença de genes de resistência antimicrobiana nas cepas isoladas de C. jejuni, foram identificados os genes aph3-1 (resistência a aminoglicosídeos), aadE (resistência à estreptomicina) e tet (O) (resistência à tetraciclina) genes foram identificados, com taxas de ocorrência de 57,14%, 28,57% e 42,86%, respectivamente, enquanto que nas cepas de C. coli, houve uma taxa de ocorrência de 25% para os genes aph3-1 e tet (O). O gene aadE não foi encontrado nos isolados de C. coli. Os resultados deste estudo demonstraram a presença de C. jejuni e C. coli em carcaças de frango resfriadas comercializadas na Região do Distrito Federal e entorno, além da resistência antimicrobiana e a presença de genes de resistência nestas cepas, que podem se tornar uma possível ameaça a saúde pública.(AU)

Campylobacter jejuni, Campylobacter coli, Salmonella spp. e Yersinia enterocolitica isoladas de animais silvestres em um centro de reabilitação / Campylobacter jejuni, Campylobacter coli, Salmonella spp. and Yersinia enterocolitica isolated from wildlife animals of a reabilitation center

Muitas espécies de animais silvestres de vida livre servem como reservatório de bactérias patogênicas que ameaçam a saúde humana e dos animais domésticos. Algumas bactérias, como Campylobacter jejuni, Campylobacter coli, Yersinia enterocolitica e Salmonella enterica, causam enfermidades em humanos e podem contaminar os animais domésticos e silvestres. O Núcleo de Reabilitação da Fauna Silvestre da Universidade Federal de Pelotas (NURFS-UFPel) soluciona uma demanda regional específica de atenção à fauna silvestre brasileira. O objetivo desse trabalho foi identificar a presença de Campylobacter jejuni, Campylobacter coli, Salmonella spp. e Yersinia enterocolitica em animais silvestres que se encontravam em processo de reabilitação. Foram coletadas amostras de fezes, com uso de zaragatoas estéreis, de 34 aves, 16 mamíferos e 23 répteis. Dos 73 animais amostrados, quatro (5,48%) albergavam Y. enterocolitica, sendo duas aves, um mamífero e um réptil. Salmonella e Campylobacter não foram isolados. Os perfis de bandas dos isolados de Y. enterocolitica analisados pela rep-PCR foram diferentes entre si. Esses resultados indicam que as cepas isoladas não estão relacionadas entre si, não possuindo uma origem comum recente. Vanellus chilensis, Turdus rufiventris, Didelphis albiventris e Pantherophis guttatus podem albergar Y. enterocolitica e eliminá-la nas fezes, oferecendo risco de disseminação desse micro-organismo no ambiente, além de constituírem possíveis fontes de contaminação para humanos e outros animais.(AU)

Wild animals can transmit pathogenic bacteria to human and domestic animal's health. Some bacteria, such as Campylobacter jejuni, Campylobacter coli, Yersinia enterocolitica and Salmonella enterica, cause diseases in humans and can contaminate domestic and wild animais. The Núcleo de Reabilitação da Fauna Silvestre of Universidade Federal de Pelotas (Nurfs-UFPel) attend a specific regional demand of wildlife in Brazil. The aim of this paper was to identify the presence of these pathogenic bacteria in wild animals in rehabilitation. Stool samples were collected using sterile swabs from 34 birds, 16 mammals and 23 reptilian that were housed at Nurfs. Of the 73 collections, Y. enterocolitica was isolated from four (5.48%) of two birds, one mammal and one reptile. Salmonella and Campylobacter were not isolated. The molecular profile of bands of Y. enterocolitica identified in rep-PCR had differences. These results indicated that the isolates did not have a recent common origin. Pantherophis guttatus, Didelphis albiventris, Turdus rufiventris and Vanellus chilensis could shelt Y. enterocolitica and eliminate the bacteria in stool, offering risk of dissemination of these microorganisms in the environment with possible contamination of humans and other animals.(AU)

Campylobacter jejuni, Campylobacter coli, Salmonella spp. e Yersinia enterocolitica isoladas de animais silvestres em um centro de reabilitação / Campylobacter jejuni, Campylobacter coli, Salmonella spp. and Yersinia enterocolitica isolated from wildlife animals of a reabilitation center

Muitas espécies de animais silvestres de vida livre servem como reservatório de bactérias patogênicas que ameaçam a saúde humana e dos animais domésticos. Algumas bactérias, como Campylobacter jejuni, Campylobacter coli, Yersinia enterocolitica e Salmonella enterica, causam enfermidades em humanos e podem contaminar os animais domésticos e silvestres. O Núcleo de Reabilitação da Fauna Silvestre da Universidade Federal de Pelotas (NURFS-UFPel) soluciona uma demanda regional específica de atenção à fauna silvestre brasileira. O objetivo desse trabalho foi identificar a presença de Campylobacter jejuni, Campylobacter coli, Salmonella spp. e Yersinia enterocolitica em animais silvestres que se encontravam em processo de reabilitação. Foram coletadas amostras de fezes, com uso de zaragatoas estéreis, de 34 aves, 16 mamíferos e 23 répteis. Dos 73 animais amostrados, quatro (5,48%) albergavam Y. enterocolitica, sendo duas aves, um mamífero e um réptil. Salmonella e Campylobacter não foram isolados. Os perfis de bandas dos isolados de Y. enterocolitica analisados pela rep-PCR foram diferentes entre si. Esses resultados indicam que as cepas isoladas não estão relacionadas entre si, não possuindo uma origem comum recente. Vanellus chilensis, Turdus rufiventris, Didelphis albiventris e Pantherophis guttatus podem albergar Y. enterocolitica e eliminá-la nas fezes, oferecendo risco de disseminação desse micro-organismo no ambiente, além de constituírem possíveis fontes de contaminação para humanos e outros animais.(AU)

Wild animals can transmit pathogenic bacteria to human and domestic animal's health. Some bacteria, such as Campylobacter jejuni, Campylobacter coli, Yersinia enterocolitica and Salmonella enterica, cause diseases in humans and can contaminate domestic and wild animais. The Núcleo de Reabilitação da Fauna Silvestre of Universidade Federal de Pelotas (Nurfs-UFPel) attend a specific regional demand of wildlife in Brazil. The aim of this paper was to identify the presence of these pathogenic bacteria in wild animals in rehabilitation. Stool samples were collected using sterile swabs from 34 birds, 16 mammals and 23 reptilian that were housed at Nurfs. Of the 73 collections, Y. enterocolitica was isolated from four (5.48%) of two birds, one mammal and one reptile. Salmonella and Campylobacter were not isolated. The molecular profile of bands of Y. enterocolitica identified in rep-PCR had differences. These results indicated that the isolates did not have a recent common origin. Pantherophis guttatus, Didelphis albiventris, Turdus rufiventris and Vanellus chilensis could shelt Y. enterocolitica and eliminate the bacteria in stool, offering risk of dissemination of these microorganisms in the environment with possible contamination of humans and other animals.(AU)

Aeromonas hydrophila and Campylobacter jejuni isolated in fresh tuna (Thunnus spp) sold in São Paulo, Brazil / Detecção de Aeromonas hydrophila e Campylobacter jejuni em atum (Thunnus spp) fresco comercializado em São Paulo, Brasil

Aeromonas hydrophila and Campylobacter jejuni are bacteria of emerging importance in public health. However, little has been published about fish contaminated by these pathogens. The present study aimed to verify the presence of Aeromonas hydrophila and Campylobacter jejuni in fresh tuna samples (Thunnus spp.) caught off the coast of Santa Catarina State and distributed in the wholesale market of São Paulo/SP. A total of 85 tuna fillet samples were collected and examined by PCR and bacteriological analyses. Aeromonas spp. was detected in 11/85 (13%) samples, with 10/11 (90.9 %) being confirmed as Aeromonas hydrophila by PCR. Campylobacter spp. was found in 10/85 (11.7%) samples, 10/10 (100%) identified as Campylobacter jejuni by PCR and conventional biochemical analyses. Both pathogens were found in 2/85 (2.3%) samples. This is the first report on the contamination of fresh tuna by Campylobacter jejuni and Aeromonas hydrophila in Brazil. In addition to show that tuna can be a vehicle for transmission of pathogens when consumed raw, it emphasizes the importance of further studies to support the control these pathogens in fish(AU)

Aeromonas hydrophila e Campylobacter jejuni são bactérias de importância emergente em saúde pública, porém com escassos trabalhos publicados na área de pescado. O presente estudo investigou a presença de Aeromonas hydrophila e Campylobacter jejuni em amostras de atum (Thunnus spp.) fresco, capturados no litoral de Santa Catarina e distribuídos no comércio atacadista de São Paulo, SP. Foram colhidas 85 amostras de filé de atum e processadas por análises bacteriológicas e PCR. Do total, 11/85 (13%) amostras foram positivas para Aeromonas spp., sendo 10/11 (90,9%) confirmadas como Aeromonas hydrophila pela PCR. Para Campylobacter spp., 10/85 (11,7%) foram positivas, sendo 10/10 (100%) identificadas como Campylobacter jejuni pelas provas bioquímicas tradicionais e PCR ressaltando-se que duas (2/85 - 2,3%) amostras de atum albergavam ambos os patógenos. Trata-se do primeiro relato no Brasil de contaminação de atum fresco por Campylobacter jejuni e Aeromonas hydrophila, indicando que este alimento ingerido in natura pode ser um veículo de transmissão de agentes patogênicos, ressaltando-se a importância de estudos adicionais que deem suporte ao controle desses microrganismos em pescado consumido cru(AU)

Campylobacter Jejuni Increases Transcribed Il-1 B and Causes Morphometric Changes in the Ileal Enterocytes of Chickens

Campylobacteriosis is a worldwide foodborne zoonosis disease caused by Campylobacter jejuni. This microorganism is considered a commensal bacterium in chicken hosts. C. jejuni produces epithelial cell modifications and induces a cytokine gene transcription innate immunity repertoire. In the present study, we describe the invasiveness, morphological cellular modifications, and transcript level expressions of innate immune cytokines from C. jejuni-inoculated chicken ileum explants. C. jejuni was internalized by epithelial ileum cells at 15 minutes postinoculation (p.i.) and was detected intracellularly for 4hs (p.i.). Inoculated explants displayed significant increases in cell height. C. jejuni induced a significant elevation of Transforming Growth Factor Beta 3 (TGF-b3) and Interleukin-1b (IL-1b) transcripts. In conclusion, C. jejuni is internalized in explanted epithelial ileum cells, produces morphological cell modifications, and induces gene transcription of both anti-inflammatory and pro-inflammatory cytokines.

Campylobacter Jejuni Increases Transcribed Il-1 B and Causes Morphometric Changes in the Ileal Enterocytes of Chickens

Campylobacteriosis is a worldwide foodborne zoonosis disease caused by Campylobacter jejuni. This microorganism is considered a commensal bacterium in chicken hosts. C. jejuni produces epithelial cell modifications and induces a cytokine gene transcription innate immunity repertoire. In the present study, we describe the invasiveness, morphological cellular modifications, and transcript level expressions of innate immune cytokines from C. jejuni-inoculated chicken ileum explants. C. jejuni was internalized by epithelial ileum cells at 15 minutes postinoculation (p.i.) and was detected intracellularly for 4hs (p.i.). Inoculated explants displayed significant increases in cell height. C. jejuni induced a significant elevation of Transforming Growth Factor Beta 3 (TGF-b3) and Interleukin-1b (IL-1b) transcripts. In conclusion, C. jejuni is internalized in explanted epithelial ileum cells, produces morphological cell modifications, and induces gene transcription of both anti-inflammatory and pro-inflammatory cytokines.(AU)