Técnicas biomoleculares aplicadas em hospedeiros intermediários da esquistossomose / Biomolecular techniques applied to intermediate hosts of Schistosomiasis

A esquistossomose é uma doença parasitária acometida por milhões de pessoas no mundo. Essa parasitose é transmitida por caramujos que servem de hospedeiros intermediários de helmintos digenéticos. A identificação correta das espécies transmissoras pode auxiliar no conhecimento epidemiológico da doença. Contudo, métodos convencionais de classificação podem ter resultado duvidoso, devido à variação intraespecífica entre os espécimes. Em virtude disso, esta revisão teve como objetivo descrever as principais técnicas moleculares que podem ser aplicadas, assim como o aprimoramento dos métodos ao longo do tempo. A PCR é uma técnica desenvolvida através da polimerização de DNA em cadeia realizada in vitro, onde se amplifica o DNA em múltiplas cópias, por replicação enzimática, sem necessidade de um organismo vivo. Na PCR, em tempo real, as fases de amplificação, detecção e quantificação são totalmente automatizadas, ocorrendo em simultâneo. Com a evolução da técnica convencional, foi surgindo a Proteína C Reativa ­ Polimorfismo de Comprimento de Fragmento de Restrição (PCR-RFLP), os microssatélites, e a PCR-RAPD. Através dessas variantes foi possível classificar, com precisão, as espécies transmissoras, fazer as análises da variabilidade genética intraespecífica e ampliar os estudos filogenéticos das populações. O conhecimento da aplicação de técnicas moleculares pode auxiliar em pesquisas relacionadas à epidemiologia e ao controle populacional dos vetores transmissores da esquistossomose mansônica.

Schistosomiasis is a parasitic disease that affects millions of people worldwide. This parasitosis is transmitted by snails that serve as intermediate hosts for digenetic helminths. The correct identification of the transmitting species can help in the epidemiological knowledge of the disease. However, conventional methods of classification may present questionable results due to intraspecific variation between specimens. As a result, this review aimed to describe the main molecular techniques that can be applied, as well as describe the improvement of the methods over time. PCR is a technique developed through the polymerization of DNA strands carried out in vitro, where it amplifies the DNA in multiple copies by enzymatic replication, without needing a living organism. In real-time PCR, amplification, detection and quantification phases are fully automated, occurring simultaneous. The evolution of the conventional technique resulted in the advent of Protein C Reactive - Restriction Fragment Length Polymorphism (PCR-RFLP), microsatellites, and Protein C Reactive ­ Random Amplification of Polymorphic DNA (PCR-RAPD). Through these variants it was possible to accurately classify the transmitting species, perform the analysis of intraspecific genetic variability and expand the phylogenetic studies of the populations. Knowledge of the application of molecular techniques can assist in research related to the epidemiology and population control of these vectors that transmit schistosomiasis mansoni.

Prevalence of Angiostrongylus cantonensis and Angiostrongylus costaricensis in Achatina fulica snails in the municipality of São Bernardo do Campo (SP, Brazil) / Prevalência de Angiostrongylus cantonensis e Angiostrongylus costaricensis em caramujos Achatina fulica na cidade de São Bernardo do Campo (SP, Brasil)

Angiostrongylus cantonensis e Angiostrongylus costaricensis são nematoides parasitas que residem em roedores e usam gastrópodes como hospedeiros intermediários. Achatina fulica, conhecida como caramujo-gigante-africano, é um hospedeiro intermediário que desempenha importante papel na dispersão de A. cantonensis e A. costaricensis, patógenos zoonóticos que causam, respectivamente, meningoencefalite eosinofílica e angiostrongilíase abdominal em humanos. O objetivo deste estudo foi o de coletar caramujos (A. fulica, n=90) de oito regiões diferentes (Rudge Ramos, Baeta Neves, Planalto, Demarchi, Dos Alvarengas, Batistini, Montanhão, Rio Grande) da cidade de São Bernardo do Campo (SP) para detecção molecular de A. cantonensis ou A. costaricensis pela técnica de reação em cadeia da polimerase (PCR). As amostras foram processadas em pools (n=25) segundo a região de coleta. Com exceção da região de Baeta Neves, as demais apresentaram caramujos infectados com larvas de nematoides. Seis regiões apresentaram amostras positivas para A. cantonensis. Quatorze (56%) das 25 amostras em pool apresentaram larvas de nematoides, e 52% delas (13/25) foram positivas para A. cantonensis. Nenhuma amostra positiva para A. costaricensis foi encontrada. A presença de A. fulica naturalmente infectada por A. cantonensis deve servir como um alerta para as autoridades de saúde pública sobre o risco potencial de infecção para humanos.(AU)

Prevalence of Angiostrongylus cantonensis and Angiostrongylus costaricensis in Achatina fulica snails in the municipality of São Bernardo do Campo (SP, Brazil) / Prevalência de Angiostrongylus cantonensis e Angiostrongylus costaricensis em caramujos Achatina fulica na cidade de São Bernardo do Campo (SP, Brasil)

Angiostrongylus cantonensis e Angiostrongylus costaricensis são nematoides parasitas que residem em roedores e usam gastrópodes como hospedeiros intermediários. Achatina fulica, conhecida como caramujo-gigante-africano, é um hospedeiro intermediário que desempenha importante papel na dispersão de A. cantonensis e A. costaricensis, patógenos zoonóticos que causam, respectivamente, meningoencefalite eosinofílica e angiostrongilíase abdominal em humanos. O objetivo deste estudo foi o de coletar caramujos (A. fulica, n=90) de oito regiões diferentes (Rudge Ramos, Baeta Neves, Planalto, Demarchi, Dos Alvarengas, Batistini, Montanhão, Rio Grande) da cidade de São Bernardo do Campo (SP) para detecção molecular de A. cantonensis ou A. costaricensis pela técnica de reação em cadeia da polimerase (PCR). As amostras foram processadas em pools (n=25) segundo a região de coleta. Com exceção da região de Baeta Neves, as demais apresentaram caramujos infectados com larvas de nematoides. Seis regiões apresentaram amostras positivas para A. cantonensis. Quatorze (56%) das 25 amostras em pool apresentaram larvas de nematoides, e 52% delas (13/25) foram positivas para A. cantonensis. Nenhuma amostra positiva para A. costaricensis foi encontrada. A presença de A. fulica naturalmente infectada por A. cantonensis deve servir como um alerta para as autoridades de saúde pública sobre o risco potencial de infecção para humanos.(AU)

Angistrongylus cantonensis and Ancylostoma caninum detection in snails of São Paulo city (2016-2017), Brazil / Detecção de Angistrongylus cantonensis and Ancylostoma caninum em caramujos da cidade de São Paulo (2016-2017), Brasil

Achatina fulica snails cause environmental problems and represent a public health hazard since it is a host in the life cycles of various parasites, among them, Angiostrongylus cantonensis and, less frequently, Ancylostoma caninum. We report the occurrence of Angistrongylus cantonensis, as well as the unexpected finding of Ancylostoma caninum, in a total of 936 specimens of Achatina fulica snails from different regions of São Paulo city, Brazil. Samples were divided into 492 pools which were screened for nematodes. If present, larvae were submitted to DNA extraction and PCR protocol targeting, the ITS-2 gene junction. From the 183 positive pools for larvae presence, 97 showed specific 650 bp band at electrophoresis and 21 presented bands nearly 300 bp. Two amplicons from each size were and sequenced. A BLAST/n of 650 bp sequences presented identity with Angistrongylus cantonensis, while the two of 300 bp, showed identity with Ancylostoma caninum, also supported by phylogenetic analysis. This is the second report of Ancylostoma caninum found in these snails in the world, therefore, this study allows a better understanding about these diseases and highlights the need of continue systematically mapping sites that can be infested with the mollusc.

Os caramujos Achatina fulica causam problemas ambientais e representam um perigo em Saúde Pública uma vez que são hospedeiros de vários parasitas, entre eles o Angiostrongylus cantonensis e menos frequentemente o Ancylostoma caninum. Nós relatamos a ocorrência de Angistrongylus cantonensis, bem como o achado de Ancylostoma caninum, a partir de 936 espécimens de caramujos Achatina fulica de diferentes regiões da cidade de São Paulo, Brasil. Amostras foram divididas em 492 pools os quais foram triados para nematóides. Se presentes, larvas foram submetidas a extração de DNA e um protocolo de PCR tendo como alvo a junção do gene ITS-2. De 183 pools contendo larvas, 97 apresentaram bandas específicas de 650 pb e na eletroforese 21 apresentaram bandas próximas aos 300 pb. Dois amplicons de cada tamanho foram sequenciados. A submissão ao BLAST/n das sequências de 650 pb apresentaram identidade das sequências com Angistrongylus cantonensis, enquanto que as duas de 300 pb apresentaram identidade com Ancylostoma caninum, também corroboradas por análises filogenéticas. Este é o segundo relato do encontro de Ancylostoma caninum nestes caramujos no mundo, sendo assim, este estudo permite um melhor entendimento destas doenças e denota a necessidade de contínuo monitoramento de regiões que estejam infestadas pelo molusco.

Angistrongylus cantonensis and Ancylostoma caninum detection in snails of São Paulo city (2016-2017), Brazil / Detecção de Angistrongylus cantonensis and Ancylostoma caninum em caramujos da cidade de São Paulo (2016-2017), Brasil

Achatina fulica snails cause environmental problems and represent a public health hazard since it is a host in the life cycles of various parasites, among them, Angiostrongylus cantonensis and, less frequently, Ancylostoma caninum. We report the occurrence of Angistrongylus cantonensis, as well as the unexpected finding of Ancylostoma caninum, in a total of 936 specimens of Achatina fulica snails from different regions of São Paulo city, Brazil. Samples were divided into 492 pools which were screened for nematodes. If present, larvae were submitted to DNA extraction and PCR protocol targeting, the ITS-2 gene junction. From the 183 positive pools for larvae presence, 97 showed specific 650 bp band at electrophoresis and 21 presented bands nearly 300 bp. Two amplicons from each size were and sequenced. A BLAST/n of 650 bp sequences presented identity with Angistrongylus cantonensis, while the two of 300 bp, showed identity with Ancylostoma caninum, also supported by phylogenetic analysis. This is the second report of Ancylostoma caninum found in these snails in the world, therefore, this study allows a better understanding about these diseases and highlights the need of continue systematically mapping sites that can be infested with the mollusc.(AU)

Os caramujos Achatina fulica causam problemas ambientais e representam um perigo em Saúde Pública uma vez que são hospedeiros de vários parasitas, entre eles o Angiostrongylus cantonensis e menos frequentemente o Ancylostoma caninum. Nós relatamos a ocorrência de Angistrongylus cantonensis, bem como o achado de Ancylostoma caninum, a partir de 936 espécimens de caramujos Achatina fulica de diferentes regiões da cidade de São Paulo, Brasil. Amostras foram divididas em 492 pools os quais foram triados para nematóides. Se presentes, larvas foram submetidas a extração de DNA e um protocolo de PCR tendo como alvo a junção do gene ITS-2. De 183 pools contendo larvas, 97 apresentaram bandas específicas de 650 pb e na eletroforese 21 apresentaram bandas próximas aos 300 pb. Dois amplicons de cada tamanho foram sequenciados. A submissão ao BLAST/n das sequências de 650 pb apresentaram identidade das sequências com Angistrongylus cantonensis, enquanto que as duas de 300 pb apresentaram identidade com Ancylostoma caninum, também corroboradas por análises filogenéticas. Este é o segundo relato do encontro de Ancylostoma caninum nestes caramujos no mundo, sendo assim, este estudo permite um melhor entendimento destas doenças e denota a necessidade de contínuo monitoramento de regiões que estejam infestadas pelo molusco.(AU)

Centrocestus formosanus (Trematoda: Heterophyidae) in Melanoides tuberculata (Gastropoda: Thiaridae) from Vila do Abraão, Ilha Grande, Rio de Janeiro, Brazil / Centrocestus formosanus (Trematoda: Heterophyidae) em Melanoides tuberculata (Gastropoda, Thiaridae) da Vila do Abraão, Ilha Grande, Rio de Janeiro, Brasil

Pleurolophocercous cercariae found in the invasive gastropod Melanoides tuberculata (Müller, 1774) collected in a stream of the Vila do Abraمo, Ilha Grande, Angra dos Reis, Rio de Janeiro, Brazil were used for experimental infection that enabled the identification of the heterophyid trematode Centrocestus formosanus (Nishigori, 1924). The parasite has been found in the locality since 2007, after two years of the introduction of M. tuberculata. Recently, from a sample of 483 specimens collected in June 2013, 101 (21%) were found infected with parasite. The potential environmental impacts caused by the parasite occurrence could be underestimated in the country, and actions to monitor and control both the parasite and the mollusk are necessary.(AU)

Cercárias do tipo pleurolofocerca encontradas no gastrópode invasor Melanoides tuberculata (Müller, 1774) coletados em um riacho da Vila do Abraão em Ilha Grande, Angra dos Reis, Rio de Janeiro, Brasil foram utilizadas em estudos de infecção experimental que possibilitaram a identificação do trematódeo heterofiídeo Centrocestus formosanus (Nishigori, 1924). O parasito vem sendo encontrado na localidade desde 2007, dois anos após a introdução do molusco. Recentemente, de uma amostra de 483 espécimes coletados em junho de 2013, 101 (21%) apresentavam-se infectados pelo parasito. Os potenciais impactos ambientais ocasionados pela ocorrência deste parasito podem estar sendo subestimados no país, sendo necessárias ações visando o monitoramento e controle tanto do parasito quanto do molusco.(AU)

Bioensaio de atividade moluscicida adaptado para a avaliação de extratos de plantas medicinais / Bioensayo de actividad moluscicida adaptado para evaluación de extractos de plantas medicinales / Bioassay of molluscicidal activity adapted for the evaluation of medicinal plant extracts

Nesta nota é apresentada detalhadamente a metodologia (preparação dos extratos, adaptação dos caramujos, ensaio de atividade, destino dos caramujos) usada para a avaliação da atividade moluscicida de extratos de plantas frente a caramujos da espécie Biomphalaria glabrata. A adaptação desta metodologia tem o propósito de avaliar extratos naturais para a busca de produtos alternativos mais baratos, biodegradáveis, seguros e disponíveis localmente, para o controle das populações de caramujos.(AU)

The methodology (extract preparation, adaptation of the snails, activity test, destiny of the snails) used for the evaluation of the molluscicidal activity of plant extracts in relation to snails from the Biomphalaria glabrata species appears in detail in this note. The adaptation of this methodology has the purpose of evaluating natural extracts in order to find cheaper, biodegradable, safe and easily available alternative products for the control of the populations of snails.(AU)

En este apunte se presenta detalladamente la metodología (preparación de los extractos, adaptación de los caracoles, ensayo de actividad, destino de los caracoles) utilizada para la evaluación de la actividad moluscicida de extractos de plantas frente a caracoles de la especie Biomphalaria glabrata. La adaptación de esta metodología tiene el propósito de evaluar extractos naturales para la búsqueda de productos alternativos más baratos, biodegradables, seguros y disponibles localmente, para el control de las poblaciones de caracoles.(AU)