Influence of euthanasia, the intensity of inflammatory lesion and viral load in the laboratory diagnosis of rabies in cattle / Influência da eutanásia, intensidade da lesão inflamatória e carga viral no diagnóstico laboratorial da raiva em bovinos

This research reports the use of different diagnostic tests in cattle, naturally infected by Rabies lyssavirus (RABV), and correlates the positivity of the tests with the clinical moment of euthanasia, the intensity of the inflammatory lesion and viral load. It also highlights the possibility of euthanasia in early stages of the disease as a way to improve animal welfare. For that, samples of 34 bovine brains were collected for analysis, preserved in 10% buffered formaline and refrigerated with subsequent freezing. The samples were subjected to direct immunofluorescence antibody technique (DFAT) tests, viral isolation in cell culture (VICC), histopathology with hematoxylin and eosin staining (HE), immunohistochemistry (IHC), Shorr stainied neural tissue smears (DSS), Reverse transcription polymerase chain reaction (RT-PCR) and polymerase chain reaction by quantitative reverse transcriptase (qRT-PCR). The areas used for analysis were the cerebellum, parietal telencephalon and thalamus. Samples with Negri bodies (NBs) or immunostaining in at least one of the analyzed areas were considered positive. For the study of the intensity of histological lesions, the lesions were classified into grades 0, 1, 2 and 3 and the positivity of the test in the presence or absence of NBs in one of the three areas analyzed. To verify the influence of the disease clinical evolution, 4-four groups of analysis were created according to the animal's clinical status at moment of the euthanasia, being: M1 = animal euthanized while standing, M2 = euthanized when in sternal recumbence, M3 = euthanized when in lateral recumbence, M4 = animal with natural death. Of the 34 brains evaluated, IHC was positive in 100% of cases, DFAT was positive in 97.05% of them, and in this negative sample the presence of RABV was confirmed by VICC. NBs ere seen in 88.23% of the cases, and the DSS test was positive in 82.35% of them. All diagnostic techniques showed positive cases in all groups analyzed. Each case was positive in at least two diagnostic methods. All cases that contained NBs were positive for rabies in the other tests. In this study, it was observed that the variables analyzed (intensity of injury and clinical evolution at the moment of euthanasia) had an influence only on HE and DSS techniques, which are based on NB research to form the diagnosis, but did not interfere with the effectiveness of the diagnosis performed by detecting the viral antigen performed by DFAT and IHC. All isolated RABV samples included in the present study have a genetic lineage characteristic of hematophagous bats Desmodus rotundus. The evaluation of qRT-PCR showed that the amount of virus did not interfere in the positivity of the tests. This work shows that IHC and DFAT are safe diagnostic techniques. They are capable of detecting RABV even in euthanized animals in the early stages of clinical evolution with mild intensities of histological lesions.(AU)

Esta pesquisa relata a utilização de diferentes testes de diagnóstico em bovinos, naturalmente infectados pelo Rabies lyssavirus (RABV), e correlaciona a positividade dos testes com o momento clínico da eutanásia, a intensidade da lesão inflamatória, e a carga viral. Salienta também a possibilidade da eutanásia em estágios precoces da doença como forma de melhorar o bem-estar animal. Para isso amostras de 34 encéfalos bovinos foram coletados para análise, conservadas em formol tamponado 10% e sob refrigeração com posterior congelamento. As amostras foram submetidas aos testes de imunofluorescência direta (IFD), isolamento viral em cultivo de células (IVCC), histopatologia com coloração de hematoxilina e eosina (HE), imuno-histoquímica (IHQ), esfregaço direto com coloração de Shorr (EDS), reação da polimerase em cadeia por transcriptase reversa (RT-PCR) e reação da polimerase em cadeia por transcriptase reversa quantitativo (qRT-PCR). As áreas utilizadas para análise foram o cerebelo, telencéfalo parietal e tálamo. Foram consideradas positivas as amostras que apresentaram Corpúsculo de Negri (CNs) ou imuno-marcação em ao menos uma das áreas analisadas. Para o estudo da intensidade das lesões histológicas, as lesões foram classificadas em graus 0, 1, 2 e 3 e a positividade do teste na presença ou ausência de CN em uma das três áreas analisadas. Para verificar a influência da evolução clínica da doença foram criados 4 grupos de análise conforme o estado clínico do animal no momento da eutanásia, sendo: M1 = animal eutanasiado em estação, M2 = eutanasiado em decúbito esternal, M3 = eutanasiado em decúbito lateral, M4 = animal com morte natural. Dos 34 encéfalos avaliados a IHQ foi positiva em 100% dos casos, a IFD foi positiva em 97,05%, sendo que na amostra negativa a presença de RABV foi confirmada por IVCC. A histologia com HE, através da visualização das CNs, foi positiva em 88,23 % dos casos, e o teste de EDS, foi positivo em 82,35%. Todas as técnicas de diagnóstico apresentaram casos positivos em todos os grupos analisados. Cada caso foi positivo em, pelo menos, dois métodos de diagnóstico. Todos os casos que continham CN foram positivos para raiva nos demais testes. Nesse estudo observou-se que as variáveis analisadas intensidade de lesão e evolução clínica no momento da eutanásia tiveram influência somente nas técnicas de HE e EDS, que se baseiam na pesquisa do CN para formação do diagnóstico, mas não interferiram na eficácia do diagnóstico realizado através da detecção do antígeno viral realizado por IFD e IHQ. Todas as amostras RABV isoladas incluídas no presente estudo apresentam linhagem genética característica de morcegos hematófagos Desmodus rotundus. A avaliação de qRT-PCR demostrou que a quantidade de vírus não interferiu na positividade dos testes. Esse trabalho mostra que a IHQ e a IFD são técnicas seguras de diagnóstico e que mesmo em animais eutanasiados em estágios iniciais de evolução clínica com intensidades leve de lesões histológicas, são capazes de detectar o RABV.(AU)

Influence of euthanasia, the intensity of inflammatory lesion and viral load in the laboratory diagnosis of rabies in cattle / Influência da eutanásia, intensidade da lesão inflamatória e carga viral no diagnóstico laboratorial da raiva em bovinos

This research reports the use of different diagnostic tests in cattle, naturally infected by Rabies lyssavirus (RABV), and correlates the positivity of the tests with the clinical moment of euthanasia, the intensity of the inflammatory lesion and viral load. It also highlights the possibility of euthanasia in early stages of the disease as a way to improve animal welfare. For that, samples of 34 bovine brains were collected for analysis, preserved in 10% buffered formaline and refrigerated with subsequent freezing. The samples were subjected to direct immunofluorescence antibody technique (DFAT) tests, viral isolation in cell culture (VICC), histopathology with hematoxylin and eosin staining (HE), immunohistochemistry (IHC), Shorr stainied neural tissue smears (DSS), Reverse transcription polymerase chain reaction (RT-PCR) and polymerase chain reaction by quantitative reverse transcriptase (qRT-PCR). The areas used for analysis were the cerebellum, parietal telencephalon and thalamus. Samples with Negri bodies (NBs) or immunostaining in at least one of the analyzed areas were considered positive. For the study of the intensity of histological lesions, the lesions were classified into grades 0, 1, 2 and 3 and the positivity of the test in the presence or absence of NBs in one of the three areas analyzed. To verify the influence of the disease clinical evolution, 4-four groups of analysis were created according to the animal's clinical status at moment of the euthanasia, being: M1 = animal euthanized while standing, M2 = euthanized when in sternal recumbence, M3 = euthanized when in lateral recumbence, M4 = animal with natural death. Of the 34 brains evaluated, IHC was positive in 100% of cases, DFAT was positive in 97.05% of them, and in this negative sample the presence of RABV was confirmed by VICC. NBs ere seen in 88.23% of the cases, and the DSS test was positive in 82.35% of them.(AU)

Esta pesquisa relata a utilização de diferentes testes de diagnóstico em bovinos, naturalmente infectados pelo Rabies lyssavirus (RABV), e correlaciona a positividade dos testes com o momento clínico da eutanásia, a intensidade da lesão inflamatória, e a carga viral. Salienta também a possibilidade da eutanásia em estágios precoces da doença como forma de melhorar o bem-estar animal. Para isso amostras de 34 encéfalos bovinos foram coletados para análise, conservadas em formol tamponado 10% e sob refrigeração com posterior congelamento. As amostras foram submetidas aos testes de imunofluorescência direta (IFD), isolamento viral em cultivo de células (IVCC), histopatologia com coloração de hematoxilina e eosina (HE), imuno-histoquímica (IHQ), esfregaço direto com coloração de Shorr (EDS), reação da polimerase em cadeia por transcriptase reversa (RT-PCR) e reação da polimerase em cadeia por transcriptase reversa quantitativo (qRT-PCR). As áreas utilizadas para análise foram o cerebelo, telencéfalo parietal e tálamo. Foram consideradas positivas as amostras que apresentaram Corpúsculo de Negri (CNs) ou imuno-marcação em ao menos uma das áreas analisadas. Para o estudo da intensidade das lesões histológicas, as lesões foram classificadas em graus 0, 1, 2 e 3 e a positividade do teste na presença ou ausência de CN em uma das três áreas analisadas.(AU)

Feline herpesvirus 1 viral load related to environmental factors in sheltered cats / Relação entre carga viral de herpesvirus felino 1 e fatores causadores de estresse em felinos de abrigo

Shelter environment stress factors are related to FHV-1 viral reactivation. However, comparisons between conjunctival viral load and environmental factors have not been commonly evaluated. The aim of this study was to correlate FHV-1 viral load in domestic cats with and without clinical signs of conjunctivitis to shelter design in order to use FHV-1 viral load as a parameter of “health management”. Cats from four different shelters underwent an ophthalmological examination. Samples were collected by rolling a DNA/RNAse-free cytobrush over the ventral conjunctival fornix and were stored in 1.5 mL sterile microtubes in 500 μL of Eagles minimum essential medium and kept at 4 ºC. Molecular procedures were performed up to 48 hours after collection. Different routines regarding new arrivals were directly related to FHV-1 viral load. Shelters where new arrivals occurred on daily basis had the highest viral load (2.69x108 copies/µL), while those shelters where new arrivals had not occurred in the few months prior to the beginning of the study had the lowest rate (1.63x103 copies/µL). Environmental factors directly influenced FHV-1 DNA viral load. This study highlighted the need to improve the management approach in the animal shelter environment to reduce stressful situations responsible for FHV-1 reactivation and higher viral load quantification.(AU)

No ambiente do abrigo encontram-se fatores que geram estresse nos animais que ali residem. Esses fatores acabam por provocar a reativação do FHV-1. No entanto, comparações entre carga viral conjuntival e fatores ambientais não foram ainda avaliadas. Objetivo deste estudo foi correlacionar a carga viral de FHV-1 em felinos domésticos com e sem sinais clínicos de conjuntivite com as características dos abrigos. Assim, pode-se usar carga viral de FHV-1 como parâmetro de sanidade. Todos os gatos foram submetidos a exame clínico oftalmológico. Amostras foram coletadas com uso de escova citológica, acondicionadas em microtubos estéreis de 1,5mL contendo 500 μL de meio Eagle essencial mínimo e mantidas em 4 ºC. Análises moleculares foram realizadas no prazo de 48 horas após coleta. A rotina de entrada de novos animais estava diretamente relacionada a carga viral de FHV-1. Abrigos com entrada diária apresentaram carga viral maior (2.69x108 cópias/µL), do que abrigo onde novos animais não chegaram nos meses que antecederam a coleta (1.63x103 cópias/µL). Fatores ambientais influenciam diretamente carga viral de FHV-1. Esse estudo evidencia a necessidade de aprimorar o sistema de manejo dos abrigos de forma a reduzir situações de estresse responsáveis pela reativação de FHV-1 e consequente aumento na carga viral.(AU)

Influence of the inclusion of spray-dried animal plasma in weanling pigs' diet on porcine circovirus type 2 (PCV2) loads / Influência da inclusão do plasma sanguíneo na dieta de leitões desmamados sobre a carga viral de circovírus suíno tipo 2 (PCV2)

Spray-dried animal plasma (SDAP), a natural byproduct of the meatpacking industry, has been shown to have beneficial effects on growth and performance of weaned pigs. Porcine circovirus 2 (PCV2) is an important virus that is disseminated in the pork industry. Regardless of the studies evaluating the possible transmission of PCV2 through SDAP, there is no information about the effects of its inclusion in the PCV2 loads in natural infections. The present investigation evaluated the influence of dietary inclusion levels of SDAP in weanling pigs on PCV2 viremia and humoral immune response. Fifty-six weaned piglets were fed in a 2-period feeding program. Dietary treatments included 0%, 2%, 4% or 6% and 0%, 1%, 2% or 3% of SDAP during period 1 (14 to 28 days old) and 2 (29 to 42-days old), respectively. In period 3 (42 to 56 days old), all piglets received a SDAP-free diet. Serum samples were collected weekly and tested for PCV2 antibodies and DNA load. The results show that the concentration of 6% and 3% of SDAP on feed offered for pigs during period 1 and 2, respectively, may have decreased the PCV2 loads.(AU)

O plasma sanguíneo em pó (PSP), produto natural de indústria frigorífica, tem mostrado efeitos benéficos sobre o crescimento e desempenho de leitões desmamados precocemente. Atualmente, embora o circovírus suíno 2 (PCV2) tenha grande importância para a suinocultura, não há informações sobre o impacto do uso de PSP e a resposta imune ao PCV2 em infecções naturais. Este trabalho avaliou diferentes níveis de inclusão de PSP em dietas de leitões e as cargas virais de PCV2 correspondentes. Quatro níveis de inclusão de PSP foram testados em dois períodos consecutivos: 0, 2, 4 ou 6% durante o período 1 (14 aos 28 dias de idade) e 1, 2 ou 3% de PSP durante o período 2 (29 a 42 dias de idade). No período 3 (42 aos 56 dias de idade), todos os leitões foram alimentados com dieta isenta de PSP. Amostras de soro foram coletadas semanalmente e testadas para anticorpos anti-PCV2 e carga de DNA de PCV2. As concentrações de 6% e 3% de PSP fornecidas nas rações durante o período 1 e 2, respectivamente, influenciaram na carga viral de PCV2 de suínos naturalmente infectados.(AU)

Influence of the inclusion of spray-dried animal plasma in weanling pigs' diet on porcine circovirus type 2 (PCV2) loads / Influência da inclusão do plasma sanguíneo na dieta de leitões desmamados sobre a carga viral de circovírus suíno tipo 2 (PCV2)

Spray-dried animal plasma (SDAP), a natural byproduct of the meatpacking industry, has been shown to have beneficial effects on growth and performance of weaned pigs. Porcine circovirus 2 (PCV2) is an important virus that is disseminated in the pork industry. Regardless of the studies evaluating the possible transmission of PCV2 through SDAP, there is no information about the effects of its inclusion in the PCV2 loads in natural infections. The present investigation evaluated the influence of dietary inclusion levels of SDAP in weanling pigs on PCV2 viremia and humoral immune response. Fifty-six weaned piglets were fed in a 2-period feeding program. Dietary treatments included 0%, 2%, 4% or 6% and 0%, 1%, 2% or 3% of SDAP during period 1 (14 to 28 days old) and 2 (29 to 42-days old), respectively. In period 3 (42 to 56 days old), all piglets received a SDAP-free diet. Serum samples were collected weekly and tested for PCV2 antibodies and DNA load. The results show that the concentration of 6% and 3% of SDAP on feed offered for pigs during period 1 and 2, respectively, may have decreased the PCV2 loads.(AU)

O plasma sanguíneo em pó (PSP), produto natural de indústria frigorífica, tem mostrado efeitos benéficos sobre o crescimento e desempenho de leitões desmamados precocemente. Atualmente, embora o circovírus suíno 2 (PCV2) tenha grande importância para a suinocultura, não há informações sobre o impacto do uso de PSP e a resposta imune ao PCV2 em infecções naturais. Este trabalho avaliou diferentes níveis de inclusão de PSP em dietas de leitões e as cargas virais de PCV2 correspondentes. Quatro níveis de inclusão de PSP foram testados em dois períodos consecutivos: 0, 2, 4 ou 6% durante o período 1 (14 aos 28 dias de idade) e 1, 2 ou 3% de PSP durante o período 2 (29 a 42 dias de idade). No período 3 (42 aos 56 dias de idade), todos os leitões foram alimentados com dieta isenta de PSP. Amostras de soro foram coletadas semanalmente e testadas para anticorpos anti-PCV2 e carga de DNA de PCV2. As concentrações de 6% e 3% de PSP fornecidas nas rações durante o período 1 e 2, respectivamente, influenciaram na carga viral de PCV2 de suínos naturalmente infectados.(AU)

A novel association of BoLA DRB3 alleles in BLV infected cattle with different proviral loads / Uma nova associação de alelos de BoLA DRB3 em bovinos infectados com BLV com diferentes cargas provirais

Bovine leukemia virus (BLV) is associated with the most common neoplastic disease of cattle. BLV has a silent dissemination in the herd due to infected cell exchange, thus the concentration of BLV-infected cells in blood should play a major role in the success of viral transmission. Genes from Bovine leukocyte antigen (BoLA), the MHC system of cattle, are associated with genetic resistance and susceptibility to a wide range of diseases, and also with production traits. Some BoLA DRB3.2 allele polymorphisms in Holstein cattle have been associated with resistance or susceptibility to BLV-disease development, or with proviral load (PVL). This investigation studied 107 BLV-infected Argentinean Holstein dairy cows, all of them belonging to one herd. PVL was analysed by qPCR and animals were classified as high proviral load (HPVL, N = 88) and low proviral load (LPVL, N = 19), and BoLA DRB3.2 alleles were genotyped. Alleles BoLA DRB3.2*1501 and *1201 were significantly associated with HPVL (p = 0.0230 and p = 0.0111 respectively), while allele BoLA DRB3.2*0201 was significantly associated with LPVL (p = 0.0030). The present study aims at contributing to the knowledge of the association between BoLA polymorphism and development of a BLV infection profile. Genes that best explain the PVL in this population resulted BoLA DRB3.2*0201 (as a protection factor) and *1501 (as a risk factor). Allelic differences may play an important role in the development of effective immune responses. A better understanding of how BoLA polymorphism contributes to these responses and the establishment of a BLV status is desirable to schedule and evaluate control measures.(AU)

O vírus da leucemia bovina (BLV) está associado à doença neoplásica mais comum do gado bovino. O BLV tem uma disseminação silenciosa no rebanho devido à troca de células infectadas, assim, a concentração de células BLV infectadas no sangue deve desempenhar um papel importante no sucesso da transmissão viral. Os genes do antígeno leucocitário bovino (BoLA), sistema MHC do gado bovino, estão associados à resistência genética e à susceptibilidade a uma ampla gama de doenças, bem como às características da produção. Alguns polimorfismos de alelos de BoLA DRB3.2 em bovinos Holstein têm sido associados à resistência ou susceptibilidade ao desenvolvimento da doença BLV, ou com carga proviral (PVL). Esta investigação avaliou 107 vacas leiteiras da raça Holstein argentina infectadas com BLV e pertencentes a um único rebanho. A PVL foi analisada por qPCR, os animais foram classificados em alta carga proviral (HPVL, N = 88) e baixa carga proviral (LPVL, N = 19), e os alelos BoLA DRB3.2 foram genotipados. Os alelos BoLA DRB3.2*1501 e *1201 estavam significativamente relacionados à HPVL (p = 0,0230 e p = 0,0111, respectivamente), enquanto o alelo BoLA DRB3.2*0201, à LPVL (p = 0,0030). O objetivo deste estudo é contribuir para o conhecimento da associação entre o polimorfismo de BoLA e o desenvolvimento de infecção por BLV. Os genes que melhor explicam a PVL na população analisada resultaram em BoLA DRB3.2*0201 (como fator de proteção) e *1501 (como fator de risco). As diferenças alélicas podem desempenhar um papel importante no desenvolvimento de respostas imunitárias eficazes. Uma melhor compreensão de como o polimorfismo BoLA contribui para estas respostas e o estabelecimento de um estado BLV é desejável para agendar e avaliar as medidas de controle.(AU)

A novel association of BoLA DRB3 alleles in BLV infected cattle with different proviral loads / Uma nova associação de alelos de BoLA DRB3 em bovinos infectados com BLV com diferentes cargas provirais

Bovine leukemia virus (BLV) is associated with the most common neoplastic disease of cattle. BLV has a silent dissemination in the herd due to infected cell exchange, thus the concentration of BLV-infected cells in blood should play a major role in the success of viral transmission. Genes from Bovine leukocyte antigen (BoLA), the MHC system of cattle, are associated with genetic resistance and susceptibility to a wide range of diseases, and also with production traits. Some BoLA DRB3.2 allele polymorphisms in Holstein cattle have been associated with resistance or susceptibility to BLV-disease development, or with proviral load (PVL). This investigation studied 107 BLV-infected Argentinean Holstein dairy cows, all of them belonging to one herd. PVL was analysed by qPCR and animals were classified as high proviral load (HPVL, N = 88) and low proviral load (LPVL, N = 19), and BoLA DRB3.2 alleles were genotyped. Alleles BoLA DRB3.2*1501 and *1201 were significantly associated with HPVL (p = 0.0230 and p = 0.0111 respectively), while allele BoLA DRB3.2*0201 was significantly associated with LPVL (p = 0.0030). The present study aims at contributing to the knowledge of the association between BoLA polymorphism and development of a BLV infection profile. Genes that best explain the PVL in this population resulted BoLA DRB3.2*0201 (as a protection factor) and *1501 (as a risk factor). Allelic differences may play an important role in the development of effective immune responses. A better understanding of how BoLA polymorphism contributes to these responses and the establishment of a BLV status is desirable to schedule and evaluate control measures.(AU)

O vírus da leucemia bovina (BLV) está associado à doença neoplásica mais comum do gado bovino. O BLV tem uma disseminação silenciosa no rebanho devido à troca de células infectadas, assim, a concentração de células BLV infectadas no sangue deve desempenhar um papel importante no sucesso da transmissão viral. Os genes do antígeno leucocitário bovino (BoLA), sistema MHC do gado bovino, estão associados à resistência genética e à susceptibilidade a uma ampla gama de doenças, bem como às características da produção. Alguns polimorfismos de alelos de BoLA DRB3.2 em bovinos Holstein têm sido associados à resistência ou susceptibilidade ao desenvolvimento da doença BLV, ou com carga proviral (PVL). Esta investigação avaliou 107 vacas leiteiras da raça Holstein argentina infectadas com BLV e pertencentes a um único rebanho. A PVL foi analisada por qPCR, os animais foram classificados em alta carga proviral (HPVL, N = 88) e baixa carga proviral (LPVL, N = 19), e os alelos BoLA DRB3.2 foram genotipados. Os alelos BoLA DRB3.2*1501 e *1201 estavam significativamente relacionados à HPVL (p = 0,0230 e p = 0,0111, respectivamente), enquanto o alelo BoLA DRB3.2*0201, à LPVL (p = 0,0030). O objetivo deste estudo é contribuir para o conhecimento da associação entre o polimorfismo de BoLA e o desenvolvimento de infecção por BLV. Os genes que melhor explicam a PVL na população analisada resultaram em BoLA DRB3.2*0201 (como fator de proteção) e *1501 (como fator de risco). As diferenças alélicas podem desempenhar um papel importante no desenvolvimento de respostas imunitárias eficazes. Uma melhor compreensão de como o polimorfismo BoLA contribui para estas respostas e o estabelecimento de um estado BLV é desejável para agendar e avaliar as medidas de controle.(AU)

Antibody response between pigs of Piau and a commercial breed naturally infected with Porcine circovirus 2 / Resposta sorológica entre suínos da raça Piau e linhagem comercial em rebanho naturalmente infectado pelo Porcine circovirus 2

Brazilian pig population is made up of several naturalized breeds; among them the Piau breed is known for its rusticity and large fat stores. The naturalized breeds, in comparison with commercial ones, may have an increased resistance to diseases circulating in their territory. Thus, this study aimed to verify if there are differences between the serologic profile against Porcine circovirus 2 (PCV2) of Piau pigs and that of a commercial breed from a farm naturally infected by PCV2. The serum viral load was measured by qPCR, and levels of anti-PCV2 antibodies were measured by ELISA. The results showed that the serum viral load was similar across all animals. However, Piau piglets showed higher levels of antibodies compared to commercial piglets (P= 0.05), while sows of the commercial breed showed higher levels than the Piau breed (P< 0.01). There was not a statistical difference between pigs of different production stages in the seroprevalence of PCV2 or the blood viral load. This work demonstrates that, with regard to a natural PCV2 infection, the Piau breed has a different humoral immune response compared to the response developed by the commercial pigs. The results support the importance of conservation of native breeds.(AU)

O rebanho de suínos brasileiro é constituído por diversas raças naturalizadas, entre elas a raça Piau, que é conhecida por sua rusticidade e pela grande deposição de toucinho. As raças naturalizadas, em comparação com as linhagens comerciais, podem ter uma maior resistência a doenças que circulam em seu território. Dessa forma, o presente estudo teve como objetivo verificar se existem diferenças no perfil sorológico contra o Porcine circovirus 2 (PVC2) entre suínos da raça Piau e de uma linhagem comercial de uma granja naturalmente infectada pelo PCV2. Foram realizadas mensurações da carga viral sérica por qPCR e dos níveis de anticorpos anti-PCV2 por meio da técnica de ELISA. Os resultados mostraram que a carga viral sérica se manteve homogênea em todos os animais e que os leitões da raça Piau apresentaram níveis de anticorpos superiores em comparação com os leitões da linhagem comercial (P=0,05), enquanto as porcas de linhagem comercial apresentaram níveis superiores aos da raça Piau (P<0,01). Este trabalho fornece indícios de que a raça Piau apresenta uma resposta imune humoral distinta diante de uma infecção natural pelo PCV2, quando comparada com a resposta desenvolvida pela linhagem comercial. Os resultados obtidos reforçam a importância da conservação das raças nativas.(AU)

Antibody response between pigs of Piau and a commercial breed naturally infected with Porcine circovirus 2 / Resposta sorológica entre suínos da raça Piau e linhagem comercial em rebanho naturalmente infectado pelo Porcine circovirus 2

Brazilian pig population is made up of several naturalized breeds; among them the Piau breed is known for its rusticity and large fat stores. The naturalized breeds, in comparison with commercial ones, may have an increased resistance to diseases circulating in their territory. Thus, this study aimed to verify if there are differences between the serologic profile against Porcine circovirus 2 (PCV2) of Piau pigs and that of a commercial breed from a farm naturally infected by PCV2. The serum viral load was measured by qPCR, and levels of anti-PCV2 antibodies were measured by ELISA. The results showed that the serum viral load was similar across all animals. However, Piau piglets showed higher levels of antibodies compared to commercial piglets (P= 0.05), while sows of the commercial breed showed higher levels than the Piau breed (P< 0.01). There was not a statistical difference between pigs of different production stages in the seroprevalence of PCV2 or the blood viral load. This work demonstrates that, with regard to a natural PCV2 infection, the Piau breed has a different humoral immune response compared to the response developed by the commercial pigs. The results support the importance of conservation of native breeds.(AU)

O rebanho de suínos brasileiro é constituído por diversas raças naturalizadas, entre elas a raça Piau, que é conhecida por sua rusticidade e pela grande deposição de toucinho. As raças naturalizadas, em comparação com as linhagens comerciais, podem ter uma maior resistência a doenças que circulam em seu território. Dessa forma, o presente estudo teve como objetivo verificar se existem diferenças no perfil sorológico contra o Porcine circovirus 2 (PVC2) entre suínos da raça Piau e de uma linhagem comercial de uma granja naturalmente infectada pelo PCV2. Foram realizadas mensurações da carga viral sérica por qPCR e dos níveis de anticorpos anti-PCV2 por meio da técnica de ELISA. Os resultados mostraram que a carga viral sérica se manteve homogênea em todos os animais e que os leitões da raça Piau apresentaram níveis de anticorpos superiores em comparação com os leitões da linhagem comercial (P=0,05), enquanto as porcas de linhagem comercial apresentaram níveis superiores aos da raça Piau (P<0,01). Este trabalho fornece indícios de que a raça Piau apresenta uma resposta imune humoral distinta diante de uma infecção natural pelo PCV2, quando comparada com a resposta desenvolvida pela linhagem comercial. Os resultados obtidos reforçam a importância da conservação das raças nativas.(AU)

Association of genotypes with viral load and biochemical markers in HCV-infected Sindhi patients

The presented study had two objectives. The first was to examine distributions of Hepatitis C Virus (HCV) genotypes in Sindh, Pakistan, where HCV is prevalent. The other was to explore clinically relevant relationships between the genotypes, viral load (measured by real-time polymerase chain reaction assays) and biochemical markers. For this, 1471 HCV-infected patients in six cities in Sindh were recruited and sampled. HCV genotype distributions varied among the cities, but genotype 3a was most prevalent, followed by 3b, 1a and 1b (detected in 51.5, 22.7. 9.25 and 3.2% of the cases, respectively). No type-specific sequences were detected in serum samples from 189 (12.8%) of the 1471 patients. Frequencies of low ( 200,000 IU/mL serum), intermediate (200,000-600,000 IU/mL serum) and high (>600,000 IU/mL serum) viral loads were respectively 45.4, 16.5 and 38.1% for patients infected with genotype 3, and 16.9, 36.9 and 46.2%, respectively, for patients with other genotypes. Infection with genotype 1a was associated with significantly higher (p 0.005) alanine aminotransferase, aspartate aminotransferase and alkaline phosphatase titers than infection with genotype 3a. The results will help in the formulation of treatment strategies.(AU)

The effects of sow viremia and maternal antibodies in porcine circovirus 2 on viral infection and weight of piglets / Efeito da viremia da porca e de anticorpos maternos para circovírus suíno 2 na infecção e no peso da leitegada

The aim of this study was to characterize the porcine circovirus 2 (PCV2) infections in farrowing sows and to evaluate an association with piglet viremia and weight. Twenty sows and 100 newborn piglets were studied. Colostrum and serum of the sows were obtained on the day of parturition. Milk samples were collected on day 20 postpartum. Blood samples were taken and the piglets were weighed on days 1, 20, 42, 63 and 84 postpartum. Colostrum, milk and serum were evaluated for PCV2 DNA load. Serum was evaluated for neutralizing antibodies. PCV2 DNA was found in 17/20 serum samples, 14/20 colostrum samples and 11/20 milk samples. On day 1 postpartum 29% of piglets were viremic. PCV2 viral load ranged from 3.02 to 6.75 log10 copies/mL considering all sampled days. There was no correlation between sow viremia, antibody levels or PCV2 load in colostrum and piglet viremia on day 1 postpartum. The PCV2 load in colostrum and milk was associated with viremia in piglets from weaning to 84 days postpartum. Piglets' PCV2 viremia and viral load could not be associated with weight throughout this study.(AU)

O objetivo deste estudo foi caracterizar o efeito do infecção pelo circovírus suíno 2 (PCV2) em porcas gestantes na viremia e no peso da leitegada. Vinte porcas e 100 leitões recém-nascidos foram acompanhados. Amostras de colostro e soro das porcas foram obtidas no dia do parto. Amostras de leite foram coletadas no dia pós-parto 20. Os leitões foram pesados e tiveram amostras de soro coletadas nos dias um, 20, 42, 63 e 84 pós-parto. Soro, colostro e leite foram testados para carga viral do PCV2. Soro foi avaliado para presença de anticorpos neutralizantes. O DNA do PCV2 foi encontrado em 14 de 20 amostras de colostro e em 11 de 20 amostras de leite. No dia pós-parto 1, 29% dos leitões foram virêmicos. A carga viral do PCV2 variou 3,02-6,75 log10 cópias / mL, considerando todos os dias amostrados. Não houve correlação entre viremia das porcas e os níveis de anticorpos no soro ou na carga de PCV2 no colostro e na viremia dos leitões com um dia de vida. A carga de PCV2 no colostro e no leite foi associada à viremia em leitões do desmame até 84 dias pós-parto. A carga viral do PCV2 em leitões não foi associada com o peso ao longo deste estudo.(AU)

Antiviral activity of a Bacillus sp: P34 peptide against pathogenic viruses of domestic animals

P34 is an antimicrobial peptide produced by a Bacillus sp. strain isolated from the intestinal contents of a fish in the Brazilian Amazon basin with reported antibacterial activity. The aim of this work was to evaluate the peptide P34 for its in vitro antiviral properties against canine adenovirus type 2 (CAV-2), canine coronavirus (CCoV), canine distemper virus (CDV), canine parvovirus type 2 (CPV-2), equine arteritis virus (EAV), equine influenza virus (EIV), feline calicivirus (FCV) and feline herpesvirus type 1 (FHV-1). The results showed that the peptide P34 exhibited antiviral activity against EAV and FHV-1. The peptide P34 inhibited the replication of EAV by 99.9% and FHV-1 by 94.4%. Virucidal activity was detected only against EAV. When P34 and EAV were incubated for 6 h at 37 °C the viral titer reduced from 10(4.5) TCID50 to 10(2.75) TCID50, showing a percent of inhibition of 98.6%. In conclusion, our results demonstrated that P34 inhibited EAV and FHV-1 replication in infected cell cultures and it showed virucidal activity against EAV. Since there is documented resistance to the current drugs used against herpesviruses and there is no treatment for equine viral arteritis, it is advisable to search for new antiviral compounds to overcome these infections.

Detection of enteric viruses in activated sludge by feasible concentration methods

Human enteric viruses are responsible to cause several diseases, including gastroenteritis and hepatitis, and can be present in high amounts in sewage sludge. This study compared virus recovery efficiency of two feasible concentration methods used for detecting human adenovirus (HAdV), rotavirus species A (RV-A), norovirus genogroup II (NoV GII) and hepatitis A virus (HAV) in sewage sludge from an activated sludge process. Twelve sewage sludge samples were collected bi-monthly from January to July, 2011. Ultracentrifugation was compared with a simplified protocol based on beef extract elution for recovering enteric viruses. Viruses were quantified by quantitative real-time PCR assays and virus recovery efficiency and limits of detection were determined. Methods showed mean recovery rates lower than 7.5%, presenting critical limits of detection (higher than 102 103 genome copies -GC L-1 for all viruses analyzed). Nevertheless, HAdV were detected in 90% of the analyzed sewage sludge samples (range: 1.8 x 104 to 1.1 x 105 GC L-1), followed by RV-A and NoV (both in 50%) and HAV (8%). Results suggesting that activated sludge is contaminated with high viral loads and HAdV are widely disseminated in these samples. The low virus recovery rates achieved, especially for HAV, indicate that other feasible concentration methods could be developed to improve virus recovery efficiency in these environmental matrices.

Detection of enteric viruses in activated sludge by feasible concentration methods

Human enteric viruses are responsible to cause several diseases, including gastroenteritis and hepatitis, and can be present in high amounts in sewage sludge. This study compared virus recovery efficiency of two feasible concentration methods used for detecting human adenovirus (HAdV), rotavirus species A (RV-A), norovirus genogroup II (NoV GII) and hepatitis A virus (HAV) in sewage sludge from an activated sludge process. Twelve sewage sludge samples were collected bi-monthly from January to July, 2011. Ultracentrifugation was compared with a simplified protocol based on beef extract elution for recovering enteric viruses. Viruses were quantified by quantitative real-time PCR assays and virus recovery efficiency and limits of detection were determined. Methods showed mean recovery rates lower than 7.5%, presenting critical limits of detection (higher than 102 103 genome copies -GC L-1 for all viruses analyzed). Nevertheless, HAdV were detected in 90% of the analyzed sewage sludge samples (range: 1.8 x 104 to 1.1 x 105 GC L-1), followed by RV-A and NoV (both in 50%) and HAV (8%). Results suggesting that activated sludge is contaminated with high viral loads and HAdV are widely disseminated in these samples. The low virus recovery rates achieved, especially for HAV, indicate that other feasible concentration methods could be developed to improve virus recovery efficiency in these environmental matrices.(AU)

Porcine circovirus-2 load in the gastrointestinal tract, mesenteric lymph node, tonsil, and feces of wasted pigs with and without diarrhea / Carga viral de circovírus suíno-2 no trato gastrintestinal, linfonodo mesentérico, tonsila e fezes de animais refugo com e sem diarreia

Relata-se a quantificação de PCV-2, por meio de PCR em tempo real, no trato gastrintestinal, linfonodo mesentérico, tonsilas e fezes de nove suínos refugo da fase de crescimento, provenientes de rebanhos com histórico de diarreia não responsiva ao tratamento com antibioticoterapia. Com base nos resultados histopatológicos e imunoistoquímicos, os animais foram classificados como afetados por PCV-2 (n=5) e não afetados (n=4). Foi observada diarreia em todos os animais do grupo afetado por PCV-2. Em todas as amostras testadas foi detectado PCV-2, no entanto, a carga viral observada nos tecidos, bem como a excreção nas fezes foi significantemente maior (P<0.01) nos animais com diarreia. A maior concentração de PCV-2 foi observada nos linfonodos mesentéricos. A carga viral observada em tecido fresco e nas mesmas amostras emblocadas em parafina foi semelhante, sugerindo que o PCR em tempo real pode ser uma ferramenta útil em estudos retrospectivos da infecção por PCV-2.(AU)

Citocinas IL-1β, IL-6, TNF-α e IFN-γ no sangue e colostro de fêmeas bovinas da raça Holandesa. Importância na transferência de imunidade passiva / Cytokines IL-1β, IL-6, TNF-α and IFN-γ in blood and colostrum of Holstein cows. Importance in the immune passive transfer

O colostro bovino contém fatores imunológicos, como imunoglobulinas, leucócitos e citocinas, absorvidos pela mucosa intestinal do neonato até 48 horas de vida, no entanto, pouco se conhece sobre a função de alguns desses componentes, como as citocinas, participantes da resposta imune inata e adaptativa. Acredita-se que estas substâncias possuem papel importante na imunidade dos neonatos nos seus primeiros dias de vida. Assim, os objetivos específicos desta pesquisa foram: determinar as concentrações das citocinas IL-1β, IL-6, IFN-γ e TNF-α no soro sanguíneo e colostro de fêmeas bovinas da raça Holandesa; verificar a liberação de citocinas pelas células mononucleares do colostro e sangue bovino "in vitro" antes e após a estimulação com Escherichia coli enterotoxigênica (ECET); avaliar a transferência das citocinas IL-1β, IL-6 e TNF-α do colostro aos bezerros neonatos, por meio da determinação das concentrações destas citocinas no soro sanguíneo dos bezerros, durante os quinze primeiros dias de vida. O trabalho foi realizado em duas etapas, em duas propriedades distintas: (1) avaliação do soro sanguíneo e colostro de primeira ordenha proveniente de 22 fêmeas; (2) avaliação das citocinas sanguíneas de 11 bezerros, antes e após a mamada de colostro. Nesta pesquisa foi possível determinar as medianas da concentração de citocinas IL-1β, IL-6, IFN-γ e TNF-α no colostro bovino e soro sanguíneo, correspondente a 70,5 e 41,5; 86,1 e 13,5; 41 e 57,9; 139,9 e 20,8 pg/mL, respectivamente, verificando menores valores de IFN-γ no colostro e TNF-α e IL-6 no soro sanguíneo. Observou-se diferença entre as citocinas no colostro e ...

Bovine colostrum contains immunological factors, such as immunoglobulins, leukocytes and cytokines, which are absorbed by the intestinal mucous membrane of the neonate up to 48 hours of life. However, little is known about the function of some of these components, such as cytokines, which take part in innate and adaptive immune responses. It is believed that these substances have important roles in neonate immunity on their first days of life. Therefore, the specific objectives of this study were: to determine the concentration of cytokines IL-1β, IL-6, IFN-γ and TNF-α in serum and colostrum of Holstein cows; to assess the in vitro release of cytokines by mononuclear cells of colostrum and blood before and after stimulation with enterotoxigenic Escherichia coli (ECET); to evaluate IL-1β, IL-6 and TNF-α transfer from colostrum to neonate calves by determining cytokine concentrations in calf blood during the first 15 days of life. The study was carried out in two stages, in different farms: (1) evaluation of blood and first milking colostrum in 22 females; (2) evaluation of blood cytokines of 11 calves, before and after colostrum intake. In this study, it was possible to determine the medians of IL-1β, IL-6, IFN-γ and TNF-α concentration in blood and colostrum as equal to 70.5 and 41.5; 86.1 and 13.5; 41 and 57.9; 139.9 and 20.8 pg/mL, respectively. The lowest values of IFN-γ were observed in colostrum, and of TNF-α and IL-6, in serum. TNF-α concentration was different in serum and in blood. It was observed colostrum and blood cells of the cows produced cytokines spontaneously and by means of ECET, with a tendenc...

Citocinas IL-1β, IL-6, TNF-α e IFN-γ no sangue e colostro de fêmeas bovinas da raça Holandesa. Importância na transferência de imunidade passiva / Cytokines IL-1β, IL-6, TNF-α and IFN-γ in blood and colostrum of Holstein cows. Importance in the immune passive transfer

O colostro bovino contém fatores imunológicos, como imunoglobulinas, leucócitos e citocinas, absorvidos pela mucosa intestinal do neonato até 48 horas de vida, no entanto, pouco se conhece sobre a função de alguns desses componentes, como as citocinas, participantes da resposta imune inata e adaptativa. Acredita-se que estas substâncias possuem papel importante na imunidade dos neonatos nos seus primeiros dias de vida. Assim, os objetivos específicos desta pesquisa foram: determinar as concentrações das citocinas IL-1β, IL-6, IFN-γ e TNF-α no soro sanguíneo e colostro de fêmeas bovinas da raça Holandesa; verificar a liberação de citocinas pelas células mononucleares do colostro e sangue bovino "in vitro" antes e após a estimulação com Escherichia coli enterotoxigênica (ECET); avaliar a transferência das citocinas IL-1β, IL-6 e TNF-α do colostro aos bezerros neonatos, por meio da determinação das concentrações destas citocinas no soro sanguíneo dos bezerros, durante os quinze primeiros dias de vida. O trabalho foi realizado em duas etapas, em duas propriedades distintas: (1) avaliação do soro sanguíneo e colostro de primeira ordenha proveniente de 22 fêmeas; (2) avaliação das citocinas sanguíneas de 11 bezerros, antes e após a mamada de colostro. Nesta pesquisa foi possível determinar as medianas da concentração de citocinas IL-1β, IL-6, IFN-γ e TNF-α no colostro bovino e soro sanguíneo, correspondente a 70,5 e 41,5; 86,1 e 13,5; 41 e 57,9; 139,9 e 20,8 pg/mL, respectivamente, verificando menores valores de IFN-γ no colostro e TNF-α e IL-6 no soro sanguíneo. Observou-se diferença entre as citocinas no colostro e ...(AU)

Bovine colostrum contains immunological factors, such as immunoglobulins, leukocytes and cytokines, which are absorbed by the intestinal mucous membrane of the neonate up to 48 hours of life. However, little is known about the function of some of these components, such as cytokines, which take part in innate and adaptive immune responses. It is believed that these substances have important roles in neonate immunity on their first days of life. Therefore, the specific objectives of this study were: to determine the concentration of cytokines IL-1β, IL-6, IFN-γ and TNF-α in serum and colostrum of Holstein cows; to assess the in vitro release of cytokines by mononuclear cells of colostrum and blood before and after stimulation with enterotoxigenic Escherichia coli (ECET); to evaluate IL-1β, IL-6 and TNF-α transfer from colostrum to neonate calves by determining cytokine concentrations in calf blood during the first 15 days of life. The study was carried out in two stages, in different farms: (1) evaluation of blood and first milking colostrum in 22 females; (2) evaluation of blood cytokines of 11 calves, before and after colostrum intake. In this study, it was possible to determine the medians of IL-1β, IL-6, IFN-γ and TNF-α concentration in blood and colostrum as equal to 70.5 and 41.5; 86.1 and 13.5; 41 and 57.9; 139.9 and 20.8 pg/mL, respectively. The lowest values of IFN-γ were observed in colostrum, and of TNF-α and IL-6, in serum. TNF-α concentration was different in serum and in blood. It was observed colostrum and blood cells of the cows produced cytokines spontaneously and by means of ECET, with a tendenc... (AU)