Leporinus elongatus induced spawning using carp pituitary extract or mammalian GnRH analogue combined with dopamine receptor antagonists

Several studies have been developed to support the replacement of the crude carp pituitary extract (CPE) by synthetic products for induced reproduction of South American rheophilic species. However, results have been quite heterogeneous and there is no consensus or a routine use of synthetic products in these species. Thus, the aim of this study was to evaluate the ovulatory process in L. elongatus using different protocols of hormonal induction. Thus, fifteen wild mature females maintained at the Experimental Fish Station, Salto Grande, SP, Brazil were submitted to three different hormonal treatments: CPE (fractioned dose: 0.5 and 5.0 mg kg-1 ); mGnRHa (single dose: 3.5 µg kg-1 ) and mGnRHa (single dose: 5.0 µg kg-1 ). The spawning rate and absolute fecundity were similar among the treatments, but fertility rates were higher for CPE treatment (23.60 ± 9.40) then for mGnRHa treatments (close to or zero zero). Although females ovulated in all treatments, none of them provided viable embryos, showing hatching rates close to zero or zero. Both mGnRHa treatments were more potent for inducing the ovulatory process then CPE treatment, which was evidenced by the fact that the formers showed higher volume density of postovulatory follicles (POF). Accordingly, E2 and 17α-OHP plasma levels were higher for the mGnRHa treated females compared to the CPE one at the time of ovulation. In this study we confirmed previous scientific evidence that, regardless of whether promoting ovulation, the use of conventional CPE and GnRH doses are not appropriate for some South American migratory species, due to the nonattainment of viable embryos. Moreover, we have brought new information about the relationship between reproductive performance and gonadal steroids concentrations using different hormonal therapies, contributing to understand the reasons for Leporinus elongatus embryo loss in induced spawning.

Leporinus elongatus induced spawning using carp pituitary extract or mammalian GnRH analogue combined with dopamine receptor antagonists

Several studies have been developed to support the replacement of the crude carp pituitary extract (CPE) by synthetic products for induced reproduction of South American rheophilic species. However, results have been quite heterogeneous and there is no consensus or a routine use of synthetic products in these species. Thus, the aim of this study was to evaluate the ovulatory process in L. elongatus using different protocols of hormonal induction. Thus, fifteen wild mature females maintained at the Experimental Fish Station, Salto Grande, SP, Brazil were submitted to three different hormonal treatments: CPE (fractioned dose: 0.5 and 5.0 mg kg-1 ); mGnRHa (single dose: 3.5 µg kg-1 ) and mGnRHa (single dose: 5.0 µg kg-1 ). The spawning rate and absolute fecundity were similar among the treatments, but fertility rates were higher for CPE treatment (23.60 ± 9.40) then for mGnRHa treatments (close to or zero zero). Although females ovulated in all treatments, none of them provided viable embryos, showing hatching rates close to zero or zero. Both mGnRHa treatments were more potent for inducing the ovulatory process then CPE treatment, which was evidenced by the fact that the formers showed higher volume density of postovulatory follicles (POF). Accordingly, E2 and 17α-OHP plasma levels were higher for the mGnRHa treated females compared to the CPE one at the time of ovulation. In this study we confirmed previous scientific evidence that, regardless of whether promoting ovulation, the use of conventional CPE and GnRH doses are not appropriate for some South American migratory species, due to the nonattainment of viable embryos. Moreover, we have brought new information about the relationship between reproductive performance and gonadal steroids concentrations using different hormonal therapies, contributing to understand the reasons for Leporinus elongatus embryo loss in induced spawning.(AU)

Dose inseminante e embriogênese na fertilização assistida de carpa comum no nordeste brasileiro / Inseminating dose and embryogenesis in assisted fertilization of common carp in northeastern of Brazil

A presente pesquisa visou determinar a dose inseminante para a fertilização assistida da carpa comum, e o registro em imagens e o tempo de desenvolvimento de cada fase embrionária desta espécie em latitude equatorial. Verificou-se que a porcentagem de fertilização aumentou de forma linear, atingindo um platô em 45,5% na proporção de 208.295 espermatozoides/oócito. Assim, recomenda-se o uso da dose inseminante de aproximadamente 200.000 espermatozoides/oócito na rotina de fertilização assistida dessa espécie, no nordeste brasileiro. Além disso, o desenvolvimento embrionário da carpa em latitude equatorial segue a cronologia semelhante ao relatado para a espécie em clima temperado.(AU)

The present research aimed at determining insemination dose for artificial fertilization of common carp, and record images and time in the development of each embryonic stage of the species in equatorial latitude. The fertilization rate increased linearly up to the proportion of 208.295 spermatozoa/oocyte, and, from this point, the fertilization rate was maintained at 45.5%. Therefore, we recommend the use of the insemination dose of approximately 200.000 sperm/oocyte in the artificial fertilization routine of common carpin brazilian northeast. Moreover, embryonic development of carp in equatorial latitude follows the chronology similar to that reported for the species in temperate zones.(AU)

Dose inseminante e embriogênese na fertilização assistida de carpa comum no nordeste brasileiro / Inseminating dose and embryogenesis in assisted fertilization of common carp in northeastern of Brazil

A presente pesquisa visou determinar a dose inseminante para a fertilização assistida da carpa comum, e o registro em imagens e o tempo de desenvolvimento de cada fase embrionária desta espécie em latitude equatorial. Verificou-se que a porcentagem de fertilização aumentou de forma linear, atingindo um platô em 45,5% na proporção de 208.295 espermatozoides/oócito. Assim, recomenda-se o uso da dose inseminante de aproximadamente 200.000 espermatozoides/oócito na rotina de fertilização assistida dessa espécie, no nordeste brasileiro. Além disso, o desenvolvimento embrionário da carpa em latitude equatorial segue a cronologia semelhante ao relatado para a espécie em clima temperado.

The present research aimed at determining insemination dose for artificial fertilization of common carp, and record images and time in the development of each embryonic stage of the species in equatorial latitude. The fertilization rate increased linearly up to the proportion of 208.295 spermatozoa/oocyte, and, from this point, the fertilization rate was maintained at 45.5%. Therefore, we recommend the use of the insemination dose of approximately 200.000 sperm/oocyte in the artificial fertilization routine of common carpin brazilian northeast. Moreover, embryonic development of carp in equatorial latitude follows the chronology similar to that reported for the species in temperate zones.

Densidade de estocagem durante a larvicultura do kinguio / Stocking densities in the larviculture of goldfish

We evaluated the effect of stocking density on the performance of post-larvae goldfish. The experimental units were composed of plastic containers with a volume of one liter. Four hundred and fifteen post-larvae (average length of 4.11 ± 0.93 mm) were distributed in five different stocking densities: 5, 10, 15, 20 and 25 post-larvae L-1. The performance was evaluated after a 24 day period, by weight gain (GP), producing L-¹ (PA), specific growth rate (TCE), development rate specific (TDE) and flock uniformity (U). The survival and parameters of water quality were not affected by the densities studied (P 0.05). It was found a negative effect of increased stocking density in the development of post-larvae and uniformity, indicating that the density of 5 post-larvae L-1 is the most suitable for the larviculture of goldfish.(AU)

Avaliou-se o efeito da densidade de estocagem no desempenho produtivo de pós-larvas de kinguios alimentadas com náuplios de artêmia. As unidades experimentais foram compostas por recipientes plásticos com volume útil de um litro. Foram utilizadas 415 pós-larvas (comprimento médio de 4,11 ± 0,93 mm) distribuídas em cinco densidades de estocagem: 5, 10, 15, 20 e 25 pós-larvas L-1. O desempenho produtivo foi avaliado após 24 dias de cultivo, por meio dos parâmetros de ganho de peso (GP), produção L-1 (PA), taxa de crescimento específico (TCE), taxa de desenvolvimento específico (TDE) e uniformidade do lote (U). A sobrevivência e os parâmetros de qualidade da água não foram afetados pelas densidades estudadas (P 0,05). Verificou-se efeito negativo do aumento da densidade de estocagem no desenvolvimento das pós-larvas e na uniformidade do lote dos animais mantidos nas densidades superiores a 5 pós-larvas L-1, sendo essa indicada para a larvicultura do kinguio.(AU)

Densidade de estocagem durante a larvicultura do kinguio / Stocking densities in the larviculture of goldfish

We evaluated the effect of stocking density on the performance of post-larvae goldfish. The experimental units were composed of plastic containers with a volume of one liter. Four hundred and fifteen post-larvae (average length of 4.11 ± 0.93 mm) were distributed in five different stocking densities: 5, 10, 15, 20 and 25 post-larvae L-1. The performance was evaluated after a 24 day period, by weight gain (GP), producing L-¹ (PA), specific growth rate (TCE), development rate specific (TDE) and flock uniformity (U). The survival and parameters of water quality were not affected by the densities studied (P 0.05). It was found a negative effect of increased stocking density in the development of post-larvae and uniformity, indicating that the density of 5 post-larvae L-1 is the most suitable for the larviculture of goldfish.

Avaliou-se o efeito da densidade de estocagem no desempenho produtivo de pós-larvas de kinguios alimentadas com náuplios de artêmia. As unidades experimentais foram compostas por recipientes plásticos com volume útil de um litro. Foram utilizadas 415 pós-larvas (comprimento médio de 4,11 ± 0,93 mm) distribuídas em cinco densidades de estocagem: 5, 10, 15, 20 e 25 pós-larvas L-1. O desempenho produtivo foi avaliado após 24 dias de cultivo, por meio dos parâmetros de ganho de peso (GP), produção L-1 (PA), taxa de crescimento específico (TCE), taxa de desenvolvimento específico (TDE) e uniformidade do lote (U). A sobrevivência e os parâmetros de qualidade da água não foram afetados pelas densidades estudadas (P 0,05). Verificou-se efeito negativo do aumento da densidade de estocagem no desenvolvimento das pós-larvas e na uniformidade do lote dos animais mantidos nas densidades superiores a 5 pós-larvas L-1, sendo essa indicada para a larvicultura do kinguio.

Efeito de diferentes taxas de diluição e protocolos de congelação sobre a cinética e morfologia de espermatozoides de carpa comum (Cyprinus carpio) criopreservados em água de coco em pó (ACP 104) / Effect of different rates of dilution and freezing protocols on the kinetics and morphology of sperm of common carp (Cyprinus carpio) cryopreserved in powdered coconut water (ACP - 104)

A carpa comum, Cyprinus carpio, é considerada uma das espécies domesticadas com grande tolerância e resistência a uma ampla variedade de habitats aquáticos, tendo sida introduzida no nordeste do Brasil pelo Departamento Nacional de Obras Contras às Secas (DNOCS) no ano de 1977. A carpa comum é uma espécie de alto valor comercial, forte apelo culinário e esportivo, sendo uma das espécies mais cultivadas em todo o mundo. O objetivo desse trabalho foi avaliar um protocolo de criopreservação de sêmen de carpa comum em ACP-104 e CCSE2 (NaCl e sacarose) utilizando dois métodos de congelação. A partir do sêmen coletado de 30 machos maduros foram determinadas as características seminais. Para a avaliação da concentração espermática, o sêmen fresco foi diluído na proporção de 1:4000 em solução de citrato-formol 4%. Para verificar o efeito dos diluentes e métodos de congelação foram formados onze pools e diluídos em ACP-104 + DMSO 10% ou CCSE2 + DMSO 10%, na taxa de diluição de 1:3 e envasados em palhetas de 0,25 mL. Para cada tratamento resultante foram congeladas quatro palhetas em vapores de nitrogênio líquido em dry shipper ou caixa térmica de poliestireno, sendo depois transferidas e armazenadas em botijões criogênicos. Para verificar o efeito das taxas de diluição os pools também foram diluídos em ACP-104 + DMSO 10% e submetido às diluições de 1:1 e 1:3. As amostras foram envasadas em palhetas de mesmo volume e número de replicatas, sendo congeladas em vapores de nitrogênio líquido em caixa térmica de poliestireno e depois transferidas e armazenadas em botijões criogênicos. O sêmen foi descongelado em banho Maria a 25C por 30 segundos e os parâmetros de motilidade e velocidade seminal foram avaliados com uso do Sperm Class Analyser (SCA). A análise das patologias espermáticas do sêmen fresco, diluído em 1:500, e pós-descongelado, diluído em 1:250 em citrato- formol 4%, foram realizados utilizando o corante azul de bromofenol. Os dados foram agrupados como média desvio padrão e comparados utilizando ANOVA e teste de Games-Howell, adotando um nível de significância de 0,05. Não houve diferença significativa (p<0,05) entre os diluentes, os métodos de congelação e as taxas de diluição empregadas sobre os parâmetros espermáticos e morfológicos de sêmen pós-descongelação de carpa comum. Embora todos os parâmetros espermáticos e morfológicos analisados entre os tratamentos tenham apresentado diferença significativa (p<0,05) em relação ao sêmen fresco (controle), os resultados foram favoráveis para a criopreservação do sêmen de Cyprinus carpio.

The common carp, Cyprinus carpio, is considered one of domesticated species with high tolerance and resistance to a wide variety of aquatic habitats, being introduced in northeastern Brazil by the National Department of Works Cons Drought (DNOCS) in 1977. The common carp is a species of high commercial value, strong appeal culinary and sports, one of the most cultivated species in the world. The aim of this study was to evaluate a protocol for semen cryopreservation of common carp in ACP-104 and CCSE2 using two freezing methods. The semen collected from 30 sexually mature males were analysed seminal characteristics.The fresh semen was diluted 1:4000 in solution in the proportion of citrate-formaldehyde 4% for the evaluation of sperm concentration. Eleven pools were diluted in 10% DMSO combined with ACP-104 or CCSE2 the dilution rate of 1:3 using 0.25 ml straws to determine the effect of diluent and freezing methods. For each treatment resulting four straws were frozen in liquid nitrogen vapors in dry shipper or styrofoam cooler, and later transferred to cryogenic cylinders. The pools were also diluted in 10% DMSO and ACP-104 at dilutions of 1:1 and 1:3 to check the effect of dilution rates. These samples were packaged into straws same volume and number of replicates, and frozen in liquid nitrogen vapors in styrofoam cooler and then transferred to cryogenic cylinders. The semen was thawed in a water bath at 25 C for 30 seconds and evaluated parameters of motility and velocity through the seminal program computerized semen analysis (SCA). The analysis of sperm pathologies of fresh semen, diluted 1:500, and post-thawed, diluted 1:250 in citrate-formaldehyde 4%, were performed using the bromophenol blue dye. All data were expressed as mean standard deviation and compared using ANOVA and Games-Howell test, considered at 5% of significance level. No significant difference (p<0.05) between the two extenders, two freezing methods and the two dilution rates on sperm and morphological parameters post-thawed semen of common carp. Although all sperm and morphological parameters analyzed between treatments showed significant differences (p<0.05) compared to fresh semen (control), they were favorable results for the cryopreservation of semen of Cyprinus carpio.

Efeito de diferentes taxas de diluição e protocolos de congelação sobre a cinética e morfologia de espermatozoides de carpa comum (Cyprinus carpio) criopreservados em água de coco em pó (ACP 104) / Effect of different rates of dilution and freezing protocols on the kinetics and morphology of sperm of common carp (Cyprinus carpio) cryopreserved in powdered coconut water (ACP - 104)

A carpa comum, Cyprinus carpio, é considerada uma das espécies domesticadas com grande tolerância e resistência a uma ampla variedade de habitats aquáticos, tendo sida introduzida no nordeste do Brasil pelo Departamento Nacional de Obras Contras às Secas (DNOCS) no ano de 1977. A carpa comum é uma espécie de alto valor comercial, forte apelo culinário e esportivo, sendo uma das espécies mais cultivadas em todo o mundo. O objetivo desse trabalho foi avaliar um protocolo de criopreservação de sêmen de carpa comum em ACP-104 e CCSE2 (NaCl e sacarose) utilizando dois métodos de congelação. A partir do sêmen coletado de 30 machos maduros foram determinadas as características seminais. Para a avaliação da concentração espermática, o sêmen fresco foi diluído na proporção de 1:4000 em solução de citrato-formol 4%. Para verificar o efeito dos diluentes e métodos de congelação foram formados onze pools e diluídos em ACP-104 + DMSO 10% ou CCSE2 + DMSO 10%, na taxa de diluição de 1:3 e envasados em palhetas de 0,25 mL. Para cada tratamento resultante foram congeladas quatro palhetas em vapores de nitrogênio líquido em dry shipper ou caixa térmica de poliestireno, sendo depois transferidas e armazenadas em botijões criogênicos. Para verificar o efeito das taxas de diluição os pools também foram diluídos em ACP-104 + DMSO 10% e submetido às diluições de 1:1 e 1:3. As amostras foram envasadas em palhetas de mesmo volume e número de replicatas, sendo congeladas em vapores de nitrogênio líquido em caixa térmica de poliestireno e depois transferidas e armazenadas em botijões criogênicos. O sêmen foi descongelado em banho Maria a 25C por 30 segundos e os parâmetros de motilidade e velocidade seminal foram avaliados com uso do Sperm Class Analyser (SCA). A análise das patologias espermáticas do sêmen fresco, diluído em 1:500, e pós-descongelado, diluído em 1:250 em citrato- formol 4%, foram realizados utilizando o corante azul de bromofenol. Os dados foram agrupados como média desvio padrão e comparados utilizando ANOVA e teste de Games-Howell, adotando um nível de significância de 0,05. Não houve diferença significativa (p<0,05) entre os diluentes, os métodos de congelação e as taxas de diluição empregadas sobre os parâmetros espermáticos e morfológicos de sêmen pós-descongelação de carpa comum. Embora todos os parâmetros espermáticos e morfológicos analisados entre os tratamentos tenham apresentado diferença significativa (p<0,05) em relação ao sêmen fresco (controle), os resultados foram favoráveis para a criopreservação do sêmen de Cyprinus carpio.(AU)

The common carp, Cyprinus carpio, is considered one of domesticated species with high tolerance and resistance to a wide variety of aquatic habitats, being introduced in northeastern Brazil by the National Department of Works Cons Drought (DNOCS) in 1977. The common carp is a species of high commercial value, strong appeal culinary and sports, one of the most cultivated species in the world. The aim of this study was to evaluate a protocol for semen cryopreservation of common carp in ACP-104 and CCSE2 using two freezing methods. The semen collected from 30 sexually mature males were analysed seminal characteristics.The fresh semen was diluted 1:4000 in solution in the proportion of citrate-formaldehyde 4% for the evaluation of sperm concentration. Eleven pools were diluted in 10% DMSO combined with ACP-104 or CCSE2 the dilution rate of 1:3 using 0.25 ml straws to determine the effect of diluent and freezing methods. For each treatment resulting four straws were frozen in liquid nitrogen vapors in dry shipper or styrofoam cooler, and later transferred to cryogenic cylinders. The pools were also diluted in 10% DMSO and ACP-104 at dilutions of 1:1 and 1:3 to check the effect of dilution rates. These samples were packaged into straws same volume and number of replicates, and frozen in liquid nitrogen vapors in styrofoam cooler and then transferred to cryogenic cylinders. The semen was thawed in a water bath at 25 C for 30 seconds and evaluated parameters of motility and velocity through the seminal program computerized semen analysis (SCA). The analysis of sperm pathologies of fresh semen, diluted 1:500, and post-thawed, diluted 1:250 in citrate-formaldehyde 4%, were performed using the bromophenol blue dye. All data were expressed as mean standard deviation and compared using ANOVA and Games-Howell test, considered at 5% of significance level. No significant difference (p<0.05) between the two extenders, two freezing methods and the two dilution rates on sperm and morphological parameters post-thawed semen of common carp. Although all sperm and morphological parameters analyzed between treatments showed significant differences (p<0.05) compared to fresh semen (control), they were favorable results for the cryopreservation of semen of Cyprinus carpio.(AU)