Teste intradérmico com proteínas recombinantes de Mycobacterium bovis como antígenos em Cavia porcellus / Skin test with recombinant protein of Mycobacterium bovis as antigen in Cavia porcellus

O teste intradérmico para o diagnóstico da tuberculose bovina utiliza derivados proteicos purificados (PPD) de Mycobacterium bovis que são capazes de induzir reações de hipersensibilidade em animais infectados. No entanto, apresenta baixa especificidade devido à ocorrência de reações cruzadas com outras micobactérias. Neste sentido, o objetivo desse trabalho foi produzir proteínas recombinantes (ESAT-6, PE13, PE5 e ESX-1) de Mycobacterium bovis e avaliá-las como antígenos em teste intradérmico utilizando Cavia porcellus como modelo, e verificar se as condições empregadas na purificação (nativa ou desnaturante) interferem no desempenho antigênico dessas proteínas. As proteínas foram testadas em Cavia porcellus previamente sensibilizados com cepa M. bovis AN5 inativada, individualmente (160 µg) ou combinadas na forma de um coquetel (40 µg cada). O coquetel de proteínas induziu reações de hipersensibilidade nos animais sensibilizados significativamente superiores (p=0,002) as observadas nos animais não sensibilizados, possibilitando diferenciação. No entanto, as proteínas isoladamente não foram capazes de promover essa diferenciação. As condições de solubilização e purificação influenciaram o desempenho antigênico da proteína ESAT-6, pois, quando produzida em condição desnaturante desencadeou reações inespecíficas nos animais não sensibilizados, enquanto que aquela produzida em condições nativas e aplicada em concentrações de 6, 12, 24 e 48µg induziu reações significativas apenas nos animais sensibilizados, confirmando o seu potencial como antígeno.(AU)

The intradermal skin test for diagnosis of bovine tuberculosis has been used the purified protein derivative (PPD) of Mycobacterium bovis, that is able to induce a hypersensitivity reaction in infected animals. However, shows low specificity due to the occurrence of cross reactions with other mycobacteria. Thus, the aim of this study was to produce recombinant proteins (ESAT-6, PE13, PE5 and ESX-1) of Mycobacterium bovis and assess them as antigens in skin test using guinea pigs (Cavia porcellus) as a model, and check if the conditions employed in the purification (native or denaturing condition) interfere in the antigenic performance of these proteins. The proteins were tested in guinea pigs previously sensitized with inactivated M. bovis strain AN5, individually (160 µg/µl), or as a mixed cocktail (40 µg each). The cocktail of proteins induced hypersensitivity reactions in sensitized animals significantly (p=0.002) higher than those observed in non-sensitized animals, allowing differentiation. On the other hand, the proteins individually were not able to promote this differentiation. The conditions of solubilization and purification influenced the antigenic performance of the protein ESAT-6, since, when produced in denaturing condition triggered nonspecific reaction in non-sensitized animals. Whereas when produced under native conditions and used at concentrations (6, 12, 24 and 48µg/µl) induced a significant response only in sensitized animals, confirming its potential as antigen.(AU)

Medetomidine hydrochloride efficiency and safety in guinea pig (Cavia porcellus), IN doses estimated through allometric extrapolation / Eficiência e segurança do cloridrato de medetomidina no cobaio (Cavia porcellus), em doses calculadas por extrapolação alométrica / Eficiencia y seguridad del clorhidrato de medetomidina en cobayo (Cavia porcellus), en dosis calculadas por extrapolación alométrica

In this study, medetomidine hydrochloride, an alfa2 adrenergic receptor agonist, was administered to five adult guinea pigs (three males and two females) to verify the efficiency and safety of using doses calculated by using an allometric scale. A surgical procedure was performed to insert a polyethylene cannula that advanced 2.0 to 2.5 cm into the left carotid artery until the aorta. A minimum recovery period of two days was observed before any other manipulation or pharmacological test were performed. The cannulas were washed every two days with heparinized saline flow and remained patent for two to three weeks after insertion. After surgery, each animal was placed in an open box measuring 45x25x20cm, in a quiet room with soft lighting. The “MS” group received exactly the allometrically calculated dose, while the “2MS” group received twice the allometric dose and the “½ MS” group received half the allometric dose. Parameters were measured and analyzed at 0, 5, 10, 20, 40, 60, 90 and 120 minutes after injection. Body mass was 709.6±169g, 742±172.87g and 710±160.2g for groups 1, 2 and 3, respectively. Body temperature was 101.68±0.19ºF; respiratory rate was 85.2±4.54 strokes per minute; heart rate was 297.13±3.46 beats per minute; PaO2 at 81.7±9.43mmHg; PaCO2 at 34.49±1.59mmHg; pH was measured at 7.41±0.07; hematocrit at 38.4±1.31%; total protein was 4.33±0.29g/dL, glucose was measured at 97.13±3.75mg/dL; systolic blood pressure was 85.53±2.50mmHg; diastolic pressure at 7.,40±3.74mmHg; and mean blood pressure was 78.73±1.13mmHg. Straightening postural reaction was lost at 7.20±2.05, 12.80±3.56 and 8.67±3.06 minutes for groups “2MS, MS and ½ MS”, respectively.(AU)

Neste estudo administrou-se cloridrato de medetomidina, um agonista de receptores adrenérgicos alfa2 , a cinco cobaios adultos (três machos e duas fêmeas) para verificar a eficiência e segurança do uso de doses calculadas por meio de extrapolação alométrica. Um procedimento cirúrgico foi realizado para inserir uma cânula de polietileno que avançou 2,0 a 2,5 cm no interior da artéria carótida esquerda, até a aorta. Um período mínimo de recuperação de dois dias foi respeitado antes de qualquer outra manipulação ou teste farmacológico. As cânulas eram lavadas a cada dois dias com fluxo de solução salina heparinizada e permaneceram patentes por duas a três semanas após sua inserção. Após a cirurgia, cada animal foi colocado em uma caixa aberta medindo 45x25x20cm, em uma sala silenciosa com iluminação suave. O grupo “MS” recebeu exatamente a dose alometricamente calculada, enquanto o grupo “2MS” recebeu o dobro da dose alométrica, e o grupo “½ MS” recebeu a metade da dose alométrica. Parâmetros foram mensurados e avaliados aos 0, 5, 10, 20, 40, 60, 90 e 120 minutos após a injeção. A massa corporal foi 709,6±169g, 742±172,87g e 710±160,2g para os grupos 1, 2 e 3 respectivamente, a temperatura corporal foi 101,68±0,19ºF, a frequência respiratória foi 85,2±4,54 movimentos por minuto, a frequência cardía ca foi 297,13±3,46 batimentos per minute, a PaO2 foi 81,7±9,43mmHg, a PaCO2 foi 34,49±1,59mmHg, o pH foi 7,41±0,07, o hematócrito foi 38,4±1,31%, a proteína total foi 4,33±0,29g/dL, a glucose foi 97,13±3,75mg/dL, a pressão sistólica foi 85,53±2,50mmHg, a pressão diastólica foi 71,40±3,74mmHg, e a pressão sanguínea média foi 78,73±1,13mmHg. (AU)

En esta investigación se ha administrado clorhidrato de medetomidina, un agonista de receptores adrenérgicos alfa2 , a cinco cobayos adultos (tres machos y dos hembras) para verificar la eficacia y seguridad del uso de dosis calculadas por extrapolación alométrica. Se realizó un procedimiento quirúrgico para introducir una cánula de polietileno penetrando 2,0 a 2,5 cm en la arteria carótida izquierda, hasta la aorta. Se ha respetado un período mínimo de recuperación de dos días antes de cualquier otra manipulación o teste farmacológico. Las cánulas eran lavadas a cada dos días con flujo de solución salina heparinizada, y permanecieron patentes por dos a tres semanas después de la inserción. Después de la cirugía, cada animal fue acomodado en una caja abierta con medida de 45x25x20cm, en una sala silenciosa con iluminación suave. El grupo “MS” recibió exactamente la dosis alométricamente calculada, mientras el grupo “2MS” recibió el doble de la dosis alométrica, y el grupo “½ MS” recibió la mitad de la dosis alométrica. Parámetros fueron mensurados y evaluados a los 0, 5, 10, 20, 40, 60, 90 y 120 minutos después de la inyección. El peso corporal fue 709,6±169g, 742±172,87g y 710±160,2g para los grupos 1, 2 y 3 respectivamente, la temperatura corporal fue 101,68±0,19ºF, la frecuencia respiratoria fue 85,2±4,54 movimientos por minuto, la frecuencia cardíaca fue 297,13±3,46 batimientos por minuto, la PaO2 fue 81,7±9,43mmHg, la PaCO2 fue 34,49±1,59mmHg, el pH fue 7,41±0,07, el hematocrito fue 38,4±1,31%, la proteína total fue 4,33±0,29g/dL, la glucosa fue 97,13±3,75mg/dL, la presión sistólica fue 85,53±2,50mmHg, la presión diastólica fue 71,40±3,74mmHg, y la presión sanguínea promedia fue 78,73±1,13mmHg. La reacción postural de enderezamiento fue perdida en 7.20±2,05, 12,80±3,56 y 8,67±3,06 minutos, para los grupos “2MS, MS y ½ MS”, respectivamente.(AU)