Tracking the evolutionary pathways among Brazilian Lebiasina species (Teleostei: Lebiasinidae): a chromosomal and genomic comparative investigation

Despite several difficulties in chromosomal analyses of small-sized fishes, the cytogenetics of the Lebiasinidae was largely improved in the last years, showing differential patterns in the chromosomal evolution inside the family. In this context, it has been shown that genus Lebiasina preserves its karyotypic macrostructure, composed of 2n = 36 chromosomes, whereas the other genera generally present higher 2n. This study focused on the comparative cytogenetics of three Lebiasina species, one of them analyzed here for the first time, using conventional and molecular procedures. The results reinforced the differentiated evolutionary path of the genus Lebiasina while, at the same time, highlighted the genomic particularities that have accompanied the evolution of each species. In this sense, the repetitive components of the genome played a significant role in the differentiation of each species. It is also notable that L. minuta and L. melanoguttata, the two species that occur exclusively in the Brazilian territory, show greater chromosomal similarities to each other than to the trans-Andean sister species, L. bimaculata.(AU)

Apesar das dificuldades encontradas em se realizar análises cromossômicas em peixes de pequeno porte, os estudos citogenéticos em Lebiasinidae vêm crescendo nos últimos anos e demonstrando padrões diferenciados na evolução cromossômica entre os membros da família. Nesse contexto, o gênero Lebiasina tem mostrado preservar sua macroestrutura cariotípica, composta por 2n = 36 cromossomos, enquanto os demais gêneros geralmente apresentam 2n maiores. Este estudo tem como foco a citogenética comparativa de três espécies de Lebiasina, sendo uma delas analisada pela primeira vez aqui, através do emprego de técnicas convencionais e moleculares. Os resultados obtidos reforçam a trajetória evolutiva diferenciada do gênero Lebiasina, ao mesmo tempo em que evidenciam as particularidades genômicas que acompanham a evolução de cada uma das espécies. Neste contexto, os componentes repetitivos do genoma tiveram um papel importante na caracterização particular de cada uma das espécies. Também, é notável que L. minuta e L. melanoguttata, duas espécies que ocorrem exclusivamente no território brasileiro, apresentam maior proximidade citogenética entre elas do que com a espécie irmã transandina, L. bimaculata.(AU)

Occurrence of euchromatic B chromosomes in natural populations of Moenkhausia bonita and M. forestii (Pisces: Characidae)

Moenkhausia is a highly specious genus among the Characidae, composed of 96 valid species. Only twelve species have a known karyotype. Thus, here are presented the first cytogenetic data of two allopatric populations of Moenkhausia bonita and one of M. forestii, both belonging to the upper Paraná River basin (PR) with discussion on the evolutionary and cytotaxonomic aspects of the genus. The two species presented 2n = 50 chromosomes but different karyotype formulas and occurrence of 1-2 B chromosomes. These elements are small metacentrics in M. bonita and small acrocentrics in M. forestii. In both species, B chromosomes were euchromatic. Ag-NOR sites were found in pair 3 (metacentric), coinciding with fluorescent in situ hybridization (FISH) by the 18S rDNA probe in both species. However, the species differed in terms of the number and position of 5S rDNA sites. Heterochromatic blocks, mapped in M. bonita showed the least amount of heterochromatin in the terminal and pericentromeric regions, while the M. forestii karyotype revealed a greater amount of interstitial heterochromatic blocks. The karyotype distinctions between the two species, including the morphology of B chromosomes, may contribute as a reference in the taxonomic studies in this group.(AU)

Moenkhausia é um gênero altamente especioso dentre os Characidae, composto por 96 espécies válidas, mas apenas doze espécies têm seus cariótipos conhecidos. Portanto, são apresentados aqui os primeiros dados citogenéticos de duas populações alopátricas de Moenkhausia bonita e uma de M. forestii, ambas pertencentes à bacia do alto rio Paraná (PR), com uma ampla discussão sobre os aspectos evolutivos e citotaxonômicos do gênero. As duas espécies apresentaram 2n = 50 cromossomos, mas diferentes fórmulas cariotípicas e ocorrência de 1-2 cromossomos B. Esses elementos são pequenos metacêntricos em M. bonita e acrocêntricos pequenos em M. forestii. Em ambas as espécies, os cromossomos B apresentaram-se eucromáticos. Sítios Ag-NOR foram encontrados no par 3 (metacêntrico), coincidindo com a hibridização fluorescente in situ (FISH) pela sonda 18S rDNA em ambas as espécies. No entanto, as espécies diferiram em termos de número e posição dos sítios de 5S rDNA. Blocos heterocromáticos mapeados em M. bonita revelaram pequena quantidade de heterocromatina nas regiões terminal e pericentromérica, enquanto o cariótipo de M. forestii revelou uma maior quantidade de blocos heterocromáticos intersticiais. As distinções cariotípicas entre as duas espécies, incluindo a morfologia dos cromossomos B, podem contribuir como uma referência em estudos taxonômicos neste grupo.(AU)

Occurrence of euchromatic B chromosomes in natural populations of Moenkhausia bonita and M. forestii (Pisces: Characidae)

Moenkhausia is a highly specious genus among the Characidae, composed of 96 valid species. Only twelve species have a known karyotype. Thus, here are presented the first cytogenetic data of two allopatric populations of Moenkhausia bonita and one of M. forestii, both belonging to the upper Paraná River basin (PR) with discussion on the evolutionary and cytotaxonomic aspects of the genus. The two species presented 2n = 50 chromosomes but different karyotype formulas and occurrence of 1-2 B chromosomes. These elements are small metacentrics in M. bonita and small acrocentrics in M. forestii. In both species, B chromosomes were euchromatic. Ag-NOR sites were found in pair 3 (metacentric), coinciding with fluorescent in situ hybridization (FISH) by the 18S rDNA probe in both species. However, the species differed in terms of the number and position of 5S rDNA sites. Heterochromatic blocks, mapped in M. bonita showed the least amount of heterochromatin in the terminal and pericentromeric regions, while the M. forestii karyotype revealed a greater amount of interstitial heterochromatic blocks. The karyotype distinctions between the two species, including the morphology of B chromosomes, may contribute as a reference in the taxonomic studies in this group.(AU)

Moenkhausia é um gênero altamente especioso dentre os Characidae, composto por 96 espécies válidas, mas apenas doze espécies têm seus cariótipos conhecidos. Portanto, são apresentados aqui os primeiros dados citogenéticos de duas populações alopátricas de Moenkhausia bonita e uma de M. forestii, ambas pertencentes à bacia do alto rio Paraná (PR), com uma ampla discussão sobre os aspectos evolutivos e citotaxonômicos do gênero. As duas espécies apresentaram 2n = 50 cromossomos, mas diferentes fórmulas cariotípicas e ocorrência de 1-2 cromossomos B. Esses elementos são pequenos metacêntricos em M. bonita e acrocêntricos pequenos em M. forestii. Em ambas as espécies, os cromossomos B apresentaram-se eucromáticos. Sítios Ag-NOR foram encontrados no par 3 (metacêntrico), coincidindo com a hibridização fluorescente in situ (FISH) pela sonda 18S rDNA em ambas as espécies. No entanto, as espécies diferiram em termos de número e posição dos sítios de 5S rDNA. Blocos heterocromáticos mapeados em M. bonita revelaram pequena quantidade de heterocromatina nas regiões terminal e pericentromérica, enquanto o cariótipo de M. forestii revelou uma maior quantidade de blocos heterocromáticos intersticiais. As distinções cariotípicas entre as duas espécies, incluindo a morfologia dos cromossomos B, podem contribuir como uma referência em estudos taxonômicos neste grupo.(AU)

Nested-PCR multiplex test with increased sensitivity for detection of allogeneic cells transplanted from male to female mice / Nested-PCR multiplex com aumento da sensibilidade de detecção de células alogênicas transplantadas de camundongos machos para fêmeas

Cell therapy has shown encouraging perspectives for human and veterinary medicine. Experimentally, genetic manipulation allows to mark and locate allogeneic cells. However, this makes their genotype/phenotype different from non-marked cells used clinically. Alternatively, the presence of the Y-chromosome enables male donor cells detection in female organisms. However, the concentration of engrafted cells may be minimal in tissues, due to systemic distribution. In this study, a nested-PCR multiplex test was developed, aiming to increase the sensitivity of the presence/absence diagnosis of male mice adipose-derived (ADSC-Y) and bone marrow mononuclear (BMNC-Y) cells in samples of blood and lungs from females, after endovenous transplantation. Four females received placebos; four females received ADSC-Y from two males; and four females received BMNC-Y from two males. The PCR first-step included two primer sets (multiplex): one for amplification of a Y-chromosome fragment (SRYout; 300bp); the other for amplification of an X-chromosome (DXNds3 gene) fragment. In the PCR second-step, one primer set (SRYinn) was used for amplification of a 110bp fragment, restrained in the SRYout amplification product. The PCR internal control (DXNds3 gene) was detected in all DNA samples, whereas the SRY gene external fragment (300bp) was detected exclusively in ADSC-Y and BMNC-Y pure DNA samples. The SRY gene internal fragment (110bp) was detected in 100% of the blood and lung samples from the ADSC-Y and BMNC-Y female recipients. The nested-PCR technique increased sensitivity and reliability for molecular diagnostic of presence or absence of male mice cells in body fluids and tissues of female recipients after endovenous transplantation.(AU)

A terapia celular traz perspectivas encorajadoras à medicina humana e veterinária. Experimentalmente, a manipulação genética permite a marcação e a localização de células alogênicas. Porém, isso torna seu genótipo/fenótipo diferente daquelas usadas clinicamente, sem marcação. Alternativamente, a presença do cromossomo Y possibilita detectar células de doadores machos no organismo de fêmeas. Todavia, a concentração de células transplantadas pode ser mínima em certos tecidos, pela distribuição sistêmica. Neste estudo, foi desenvolvida uma nested-PCR multiplex, visando a aumentar a sensibilidade do diagnóstico de presença/ausência de células derivadas do tecido adiposo (CDTA-Y) e derivadas da fração mononuclear da medula óssea (CFMO-Y) de camundongos machos, em amostras de sangue e de pulmões de camundongos fêmeas, após transplante endovenoso. Quatro fêmeas receberam placebo; quatro fêmeas receberam CDTA-Y de dois machos; e quatro fêmeas receberam CFMO-Y de dois machos. A primeira fase da PCR teve dois pares de primers (multiplex): um para amplificação de fragmento do cromossomo Y (SRYout; 300pb); outro para amplificação de fragmento do cromossomo X (gene DXNds3). Na segunda fase da PCR, foi usado um par de primers para amplificação de fragmento de 110pb (SRYinn) interno ao produto amplificado pelo SRYout. O controle interno da reação (gene DXNds3) foi detectado em todas as amostras de DNA testadas, enquanto que o fragmento externo do gene SRY (300pb) foi detectado apenas nas amostras puras de DNA de CDTA-Y e CFMO-Y. O fragmento interno do gene SRY (110pb) foi detectado no sangue e nos pulmões de 100% das receptoras de CDTA-Y e CFMO-Y. A técnica de nested-PCR aumentou a sensibilidade e a segurança do diagnóstico molecular de presença ou ausência de células de camundongos machos em fluidos e tecidos de receptoras fêmeas após transplante endovenoso.(AU)

Caracterização citogenética das raças bovinas caracu, junqueira, pantaneira e patuá / Cytogenetical characterization of bovine breeds Caracu, Junqueira, Pantaneiro and Patua

Durante o processo adaptativo às condições locais as raças bovinas europeias introduzidas no Brasil na época da colonização, adquiriram características fisiológicas e fenotípicas que as diferenciaram das raças originais. O presente estudo teve como objetivo comparar a morfologia dos cromossomos sexuais de bovinos de quatro raças, naturalizadas brasileiras, bem como verificar a incidência de anomalias cromossômicas. Foi analisado o cariótipo de 332 animais de quatro raças: Caracu (115 fêmeas e 159 machos), Junqueira (13 fêmeas e 3 machos), Pantaneiro (8 machos) e Patuá (21 fêmeas e 13 machos), utilizando-se a coloração convencional de Giemsa. Os animais das raças estudadas apresentaram o complemento cromossômico normal da espécie (2n=60), constituído de 58 cromossomos autossomos de morfologia acrocêntrica e dois cromossomos sexuais X submetacêntricos nas fêmeas e um X e um Y nos machos. Na raça Caracu, as linhagens selecionadas para corte e para leite foram formadas por indivíduos portadores de cromossomo Y acrocêntrico e submetacêntrico, sendo que a linhagem de corte apresentou maior percentagem de cromossomo Y acrocêntrico (P<0,01). Em duas fêmeas e em dois machos nascidos de partos gemelares da raça Caracu, foi observado quimerismo 60,XX/60,XY. O cariótipo 60,XX/61,XXY foi observado em outra fêmea da mesma raça. Nas outras três raças, nenhuma anomalia cromossômica foi observada. A morfologia do cromossomo Y das raças Pantaneira e Patuá apresentou dimorfismo do cromossomo Y acrocêntrico e submetacêntrico. Na raça Junqueira, apenas a morfologia submetacêntrica foi observada.

During the adaptive process to Brazilian conditions, the native cattle breeds acquired physiological and phenotypic characteristics wich differs them from European breeds, from which they derive. The objectives of present study were to compare the sex chromosomes morphologies between four Brazilian native cattle breeds as well as the incidence of chromosomal abnormalities. The karyotype of 332 animals from four breeds were analyzed: Caracu (115 females and 159 males), Junqueira (13 females and 3 males), Pantaneiro (8 males) and Patua (21 females and 13 males). The Giemsa coloring were used to read the chromosome. All cattle breeds studied showed the normal chromosome (2n=60) consisting of 58 acrocentric autosomes and two submetacentric X chromosomes in females, and one X and one Y in males. In Caracu breed, selected for dairy or beef, it was developed by animals dimorphism carriers of Y chromosome (acrocentric and submetacentric), and the beef bloodlines showed higher percentage of acrocentric Y chromosome. There was 1% significant difference in Chi-Square test. In two females and two male born from twin birth of Caracu breed it was observed chemerism 60, XX/ 60, XY, and in other female from same breed it was observed 60, XX/ 61 XXY. For other three breeds, no chromosomal abnormality was observed. The Y chromosome morphology of the Pantaneiro and Patua breeds showed dimorphism of Y chromosome (submetacentric an acrocentric). In the Junqueira breed, only submetacentric morphology was observed.

Caracterização citogenética das raças bovinas caracu, junqueira, pantaneira e patuá / Cytogenetical characterization of bovine breeds Caracu, Junqueira, Pantaneiro and Patua.

Durante o processo adaptativo às condições locais as raças bovinas europeias introduzidas no Brasil na época da colonização, adquiriram características fisiológicas e fenotípicas que as diferenciaram das raças originais. O presente estudo teve como objetivo comparar a morfologia dos cromossomos sexuais de bovinos de quatro raças, naturalizadas brasileiras, bem como verificar a incidência de anomalias cromossômicas. Foi analisado o cariótipo de 332 animais de quatro raças: Caracu (115 fêmeas e 159 machos), Junqueira (13 fêmeas e 3 machos), Pantaneiro (8 machos) e Patuá (21 fêmeas e 13 machos), utilizando-se a coloração convencional de Giemsa. Os animais das raças estudadas apresentaram o complemento cromossômico normal da espécie (2n=60), constituído de 58 cromossomos autossomos de morfologia acrocêntrica e dois cromossomos sexuais X submetacêntricos nas fêmeas e um X e um Y nos machos. Na raça Caracu, as linhagens selecionadas para corte e para leite foram formadas por indivíduos portadores de cromossomo Y acrocêntrico e submetacêntrico, sendo que a linhagem de corte apresentou maior percentagem de cromossomo Y acrocêntrico (P<0,01). Em duas fêmeas e em dois machos nascidos de partos gemelares da raça Caracu, foi observado quimerismo 60,XX/60,XY. O cariótipo 60,XX/61,XXY foi observado em outra fêmea da mesma raça. Nas outras três raças, nenhuma anomalia cromossômica foi observada. A morfologia do cromossomo Y das raças Pantaneira e Patuá apresentou dimorfismo do cromossomo Y acrocêntrico e submetacêntrico. Na raça Junqueira, apenas a morfologia submetacêntrica foi observada.(AU)

During the adaptive process to Brazilian conditions, the native cattle breeds acquired physiological and phenotypic characteristics wich differs them from European breeds, from which they derive. The objectives of present study were to compare the sex chromosomes morphologies between four Brazilian native cattle breeds as well as the incidence of chromosomal abnormalities. The karyotype of 332 animals from four breeds were analyzed: Caracu (115 females and 159 males), Junqueira (13 females and 3 males), Pantaneiro (8 males) and Patua (21 females and 13 males). The Giemsa coloring were used to read the chromosome. All cattle breeds studied showed the normal chromosome (2n=60) consisting of 58 acrocentric autosomes and two submetacentric X chromosomes in females, and one X and one Y in males. In Caracu breed, selected for dairy or beef, it was developed by animals dimorphism carriers of Y chromosome (acrocentric and submetacentric), and the beef bloodlines showed higher percentage of acrocentric Y chromosome. There was 1% significant difference in Chi-Square test. In two females and two male born from twin birth of Caracu breed it was observed chemerism 60, XX/ 60, XY, and in other female from same breed it was observed 60, XX/ 61 XXY. For other three breeds, no chromosomal abnormality was observed. The Y chromosome morphology of the Pantaneiro and Patua breeds showed dimorphism of Y chromosome (submetacentric an acrocentric). In the Junqueira breed, only submetacentric morphology was observed.(AU)

Detecção de locos de características quantitativas nos cromossomos 1, 2, 3, 12, 14, 15 e X de suínos: características de desempenho / Detection of quantitative trait loci on chromosomes 1, 2, 3, 12, 14, 15, X in pigs: performance characteristics

Mapeou-se quantitative trait loci (QTL) associados a características de desempenho nos cromossomos 1, 2, 3, 12, 14, 15 e X de suínos pertencentes a uma população F2, formada a partir do cruzamento entre dois machos da raça naturalizada brasileira Piau e 18 fêmeas comerciais (Landrace x Large White x Pietrain). O mapa genético de ligação da população foi construído após a genotipagem dos animais para 35 marcadores microssatélites. As estimativas do conteúdo de informação polimórfica indicaram que os marcadores microssatélites foram adequados para as análises de QTL. Os dados foram analisados pelo mapeamento por intervalo usando-se o programa GridQTL. Encontraram-se seis QTL, sendo que o QTL genômico para idade ao abate atingiu a significância de 5% de probabilidade. As informações dos QTL detectados neste estudo são úteis para identificar genes que podem ser usados em conjunto com os métodos convencionais de seleção, aumentar a acurácia deles e prover uma compreensão dos fenótipos produtivos de suínos.(AU)

The accomplishment of the present study had the objective of mapping Quantitative Trait Loci (QTL) related to performance traits in a F2 pig population developed by mating two Brazilian Piau breed sires with 18 dams from a commercial line (Landrace × Large White × Pietrain). The linkage map for this population was constructed after genotyping the animals for 35 microsatellite markers. Estimates of polymorphic information content indicated that the microsatellite markers were appropriate for QTL analyses. The genotypes were analyzed by interval mapping using the GridQTL program. A total of six QTL were found, of which the QTL for slaughter age (days) was significant at the 5% genome-wise level. The information of the significant QTL detected in this study is useful for future fine-mapping studies for the identification of genes. Such information can be used together with traditional methods in breeding programs or even for a better understanding of the phenotypes of swine production.(AU)

Padrão de metilação dos genes xist e igf2 em ovocitos de folículos antrais de vacas nelore

Modificações epigenéticas são eventos que controlam a expressão diferencial de genes, sendo a metilação do DNA um dos mais conhecidos, importante para a reprogramação epigenética durante a gametogênese. Entender como isso ocorre na ovogênese é importante para criar parâmetros para a competência ovocitária com o intuito de melhorar a produção in vitro de embriões. Nesse trabalho objetivou-se avaliar o padrão de metilação em ovócitos de duas categorias de folículos antrais: entre 1 e 3 mm e maiores que 6 mm. Para isso foram escolhidas duas ilhas CpGs, uma no éxon 1 do gene XIST – que está relacionado com a inativação do cromossomo X em fêmeas, e outra no último éxon do gene IGF2 – envolvido no desenvolvimento embrionário e placentação. Os ovócitos foram obtidos a partir de ovários de vacas Nelore provenientes de abatedouros usando o tissue chopper e sucessivas pipetagens para o isolamento dos ovócitos. A classificação dos ovócitos foi realizada de acordo com o seu diâmetro. O DNA extraído dos ovócitos foi tratado com bissulfito de sódio e os genes de interesse foram amplificados através de PCR nested. Os produtos purificados de gel de agarose 2% foram utilizados clonagem em células DH5α. Os clones foram sequenciados usando a metodologia dideoxi e analisados no programa BiQ Analyzer utilizando sequências controle do “GenBank”. Apenas sequências com mais de 90% de identidade e de conversão pelo bissulfito de sódio foram consideradas para análises. Os resultados mostraram que os ovócitos de folículos entre 1 e 3 mm e maiores que 6 mm possuem padrão de metilação iguais, tanto para o gene XIST (89,5% e 92,7%, respectivamente) quanto para o gene IGF2 (73,4% e 61,5%, respectivamente). Esses dados sugerem que, pelo menos para as regiões estudadas, o padrão de metilação já está estabelecido a partir da fase antral do folículo ovariano em ovócitos imaturos.

Padrão de metilação dos genes xist e igf2 em ovocitos de folículos antrais de vacas nelore

Modificações epigenéticas são eventos que controlam a expressão diferencial de genes, sendo a metilação do DNA um dos mais conhecidos, importante para a reprogramação epigenética durante a gametogênese. Entender como isso ocorre na ovogênese é importante para criar parâmetros para a competência ovocitária com o intuito de melhorar a produção in vitro de embriões. Nesse trabalho objetivou-se avaliar o padrão de metilação em ovócitos de duas categorias de folículos antrais: entre 1 e 3 mm e maiores que 6 mm. Para isso foram escolhidas duas ilhas CpGs, uma no éxon 1 do gene XIST que está relacionado com a inativação do cromossomo X em fêmeas, e outra no último éxon do gene IGF2 envolvido no desenvolvimento embrionário e placentação. Os ovócitos foram obtidos a partir de ovários de vacas Nelore provenientes de abatedouros usando o tissue chopper e sucessivas pipetagens para o isolamento dos ovócitos. A classificação dos ovócitos foi realizada de acordo com o seu diâmetro. O DNA extraído dos ovócitos foi tratado com bissulfito de sódio e os genes de interesse foram amplificados através de PCR nested. Os produtos purificados de gel de agarose 2% foram utilizados clonagem em células DH5α. Os clones foram sequenciados usando a metodologia dideoxi e analisados no programa BiQ Analyzer utilizando sequências controle do “GenBank”. Apenas sequências com mais de 90% de identidade e de conversão pelo bissulfito de sódio foram consideradas para análises. Os resultados mostraram que os ovócitos de folículos entre 1 e 3 mm e maiores que 6 mm possuem padrão de metilação iguais, tanto para o gene XIST (89,5% e 92,7%, respectivamente) quanto para o gene IGF2 (73,4% e 61,5%, respectivamente). Esses dados sugerem que, pelo menos para as regiões estudadas, o padrão de metilação já está estabelecido a partir da fase antral do folículo ovariano em ovócitos imaturos.(AU)

Aspects related to the technique and the utilization of sexed semen in vivo and in vitro

The development of methods capable of selecting the sex of animals has always been a great challenge for humankind. Separating X chromosome- bearing and Y chromosome-bearing sperm based on DNA difference using flow cytometry is the only technique that has achieved a useful level of progress, especially in cattle. This allowed the technique to be commercially applicable in this species. Thorough this review, aspects related to the sexing technique (flow cytometry) and to the sperm will be discussed along with the in vitro use of sexed semen. Besides, number of sperm used and semen deposition location, the influence of reproductive status (heifers vs. cows), time of insemination and production of embryos in superovulated donors will be reviewed.

Aspects related to the technique and the utilization of sexed semen in vivo and in vitro

The development of methods capable of selecting the sex of animals has always been a great challenge for humankind. Separating X chromosome- bearing and Y chromosome-bearing sperm based on DNA difference using flow cytometry is the only technique that has achieved a useful level of progress, especially in cattle. This allowed the technique to be commercially applicable in this species. Thorough this review, aspects related to the sexing technique (flow cytometry) and to the sperm will be discussed along with the in vitro use of sexed semen. Besides, number of sperm used and semen deposition location, the influence of reproductive status (heifers vs. cows), time of insemination and production of embryos in superovulated donors will be reviewed.(AU)

Karyotype variability in neotropical catfishes of the family Pimelodidae (Teleostei: Siluriformes)

Dados cariotípicos são apresentados para quatro espécies da família Pimelodidae. Todas apresentaram o mesmo número diploide, 2n = 56 cromossomos, com diferenças nas fórmulas cariotípicas. As espécies aqui analisadas mostraram pouca quantidade de heterocromatina localizada preferencialmente na região centromérica e telomérica de alguns cromossosmos do complemento cariotípico. As regiões organizadoras de nucléolo (Ag-RONs) e a localização dos genes ribossomais pela hibridização in situ fluorescente (FISH), com sondas 18S e 5S, evidenciaram somente um par cromossômico marcado portador de genes ribossomais, à exceção de Pimelodus britskii que apresentou NORs múltiplas e localização sintênica das sondas 18S e 5S. Eventos não-Robertsonianos, como inversão pericêntrica e duplicação das NORs são requeridos para explicar a diversificação cariotípica em Pseudoplatystoma do rio Paraguai (MS), Pimelodus do rio Iguaçu (PR), Sorubim do rio Paraguai (MS) e Steindachneridion do rio Paraíba do Sul (SP). Os dados obtidos para a macroestrutura cariotípica destas espécies corrobora um padrão conservado observado na família Pimelodidae. Por outro lado, evidências de variações interespecíficas pelos marcadores de citogenética molecular empregados possibilitam inferências citotaxonômicas e diferenciação das espécies aqui analisadas.(AU)

Karyotypic data are presented for four species of fish belonging to the Pimelodidae family. These species show a conserved diploid number, 2n = 56 chromosomes, with different karyotypic formulae. The analyzed species showed little amount of heterochromatin located preferentially in the centromeric and telomeric regions of some chromosomes. The nucleolus organizer regions activity (Ag-NORs) and the chromosomal location of ribosomal genes by fluorescent in situ hybridization (FISH), with 18S and 5S probes, showing only one chromosome pair marked bearer of ribosomal genes, the only exception was Pimelodus britskii that presented multiple NORs and syntenic location of the 18S and 5S probes. Non-Robertsonian events, as pericentric inversion and NORs duplication are requested to explain the karyotype diversification in Pseudoplatystoma from the rio Paraguay (MS), Pimelodus from the rio Iguaçu (PR), Sorubim from the rio Paraguay (MS) and Steindachneridion from the rio Paraíba do Sul (SP). The obtained data for the karyotype macrostructure of these species corroborates a conserved pattern observed in Pimelodidae. On the other hand, interspecific variations detected by molecular cytogenetics markers made possible cytotaxonomic inferences and differentiation of the species here analyzed.(AU)

Chromosomal analyses in Megalonema platanum (Siluriformes: Pimelodidae), an endangered species from South American rivers

Este estudo apresenta dados cromossômicos de Megalonema platanum do rio Tibagi, Paraná, Brasil e do rio Paraná, Argentina. O número diploide foi igual 54 com composição cariotípica de 24m+16sm+2st+12a em ambas populações. Os sítios AgNORs foram detectados na posição terminal de um par submetacêntrico das duas populações analisadas, coincidindo com constrição secundária no braço curto do par 15. CMA3 e FISH com sonda de DNAr 18S exibiram sinais fluorescentes que correspondem aos sítios AgNORs e à constrição secundária. A presença de um pequeno cromossomo supranumerário acrocêntrico foi observado em M. platanum do rio Tibagi, com heterocromatina centromérica. Outros blocos heterocromáticos foram evidenciados na posição terminal de alguns cromossomos e um par cromossômico submetacêntrico grande, provavelmente o primeiro par, mostrou heterocromatina intersticial. Na população do rio Paraná foram observados ainda blocos heterocromáticos em ambas regiões terminais em alguns cromossomos. Este trabalho mostra pela primeira vez dados citogenéticos de M. platanum, que é uma espécie muito rara na bacia do rio Paraná e pode estar ameaçada de extinção.(AU)

This study presents chromosomal data of Megalonema platanum from rio Tibagi, Paraná, Brazil and from rio Paraná, Argentina. The diploid number was equal 54 with karyotype composition of 24m+16sm+2st+12a in both populations. The AgNOR siteswere detected in the terminal position of a submetacentric pair of the two analyzed populations, coinciding with secondary constrictions on the short arm of pair 15. CMA3 and FISH with 18S rDNA probe displayed fluorescent signals that correspond to the AgNOR sites and secondary constriction. The presence of a small acrocentric supernumerary chromosome can be observed in M. platanum from rio Tibagi, with centromeric heterochromatin. Others heterochromatic blocks were evidenced in the terminal position of some chromosome and one metacentric large chromosome pair, probably the first pair, showed an interstitial heterochromatin. In the population of the rio Paraná were still observed heterochromatic blocks in both ends in some chromosomes. This work brings for the first time cytogenetic date of M. platanum, which is a very rare species in the rio Paraná basin and may be endangered.(AU)

Chromosomal variability in the wild ornamental species of Symphysodon (Perciformes: Cichlidae) from Amazon

Cytogenetic studies were conducted on three discus species which inhabit the Amazon in Brazil: Symphysodon haraldi from Manacapuru, S. aequifasciatus from Tefé and S. discus from Barcelos. All individuals showed 2n=60 chromosomes, most of them biarmed. No sexual chromosomal heteromorphism was verified. However, different karyotypic formulae, owing to the presence of subtelocentric chromosomes, were verified for S. aequifasciatus and S. discus. One of the karyotypic formulae from S. aequifasciatus (cytotype 2) differs from the others, due to one of the homologues in the first chromosome pair being significantly larger than the other. A large variability was observed toward the nucleolar organizer regions (NOR) of S. haraldi and S. aequifasciatus. Although the number of silver-stained blocks varied from 2 to 5, confirming different NOR patterns, at least seven homologue pairs were involved with NORs. In S. discus only two marks were observed, however two chromosome pairs were involved, characterizing a multiple NOR system for the three species. The heterochromatic blocks were mainly located in the pericentromeric region of all chromosomes but, in some of them, they are also located in the proximal regions, both in the short and long arms. Moreover, in the cytotype 2 from S. aequifasciatus, an interstitial heterochromatic block was observed on the long arm of the largest homologue of the first pair. A direct comparison of karyotypes from more related genera (Heros, Uaru, Mesonauta and Pterophyllum), makes it clear that a succession of chromosomal rearrangements, mainly pericentric inversions, translocations and fissions/fusions occurred resulting in the present diploid number and intraspecific karyological variability found in Symphysodon.(AU)

Estudos citogenéticos foram conduzidos em três espécies de acará-disco que habitam a Amazônia no Brasil: Symphysodon haraldi coletada em Manacapuru, S. aequifasciatus coletada em Tefé e S. discus em Barcelos. Todos os indivíduos apresentaram 2n=60 cromossomos, a maioria deles com dois braços. Heteromorfismo de cromossomos sexuais não foi detectado. Porém, diferentes fórmulas cariotípicas, devido à presença de cromossomos subtelocêntricos, foram verificadas em S. aequifasciatus e em S. discus. Uma das fórmulas cariotípicas (citótipo 2) de S. aequifasciatus difere das outras, devido a um dos homólogos do primeiro par cromossômico ser significativamente maior que o outro. Uma grande variabilidade foi observada em relação à região organizadora do nucléolo (RON) de S. haraldi e de S. aequifasciatus. Embora, o número de marcações coradas por Nitrato de Prata variou de 2 a 5, confirmando diferentes padrões de RON, pelo menos sete pares de homólogos foram envolvidos com a RON. Em S. discus foram observadas apenas duas marcas, envolvendo, contudo, dois pares de cromossomos, caracterizando um sistema de RONs múltiplas, para as três espécies. Os blocos heterocromáticos estão localizados, principalmente, na região pericentromérica de todos os cromossomos, sendo que alguns deles também foram observados em regiões próximas aos centrômeros, tanto nos braços curtos quanto nos braços longos. Além disso, no citótipo 2 de S. aequifasciatus, um bloco heterocromático foi observado, intersticialmente no braço longo do maior homólogo do primeiro par. Uma comparação direta dos cariótipos dos gêneros mais relacionados (Heros, Uaru, Mesonauta e Pterophyllum), deixa claro que ocorreu uma sucessão de rearranjos cromossômicos, principalmente inversões pericêntricas, translocações e fissões/fusões, que resultou no presente número diplóide e na variabilidade cariotípica encontrada em Symphysodon.(AU)

Cytogenetic and comparative morphology of two allopatric populations of Astyanax altiparanae Garutti & Britski, 2000 (Teleostei: Characidae) from upper rio Paraná basin

The recently described fish species, Astyanax altiparanae (tetra) is common in the upper rio Paraná basin, and has been reported in the Iguaçu basin. However, its natural origin in the rio Iguaçu is questionable. In the present work, karyotypical and morphological features of two populations of Astyanax altiparanae from the upper rio Tibagi and upper rio Iguaçu were compared. Both populations showed 2n=50 chromosomes and differences in their karyotype formula, NOR-bearing chromosomes and location of heterochromatin. Morphometric data from both populations were analyzed through free-size canonical variables. Cytogenetic and morphological results were mostly coincident showing exclusive markers that reflect their degree of populational isolation. In addition to other geographic, morphological and molecular data for A. altiparanae populations from the lower rio Iguaçu and rio Paraná tributaries upstream from the Itaipu Dam (South Brazil), the present results indicate that the two populations analyzed in this study belong to different stocks. The presence of this species along the rio Iguaçu basin would be a consequence of a complex and poorly understood evolutionary history.(AU)

Astyanax altiparanae, recentemente descrita, é comum na bacia do alto rio Paraná, tendo sido registrada recentemente na bacia do rio Iguaçu. Entretanto, sua origem natural no rio Iguaçu é questionável. No presente trabalho algumas características cariotípicas e morfológicas de duas populações de Astyanax altiparanae do rio alto rio Tibagi e alto rio Iguaçu foram comparadas. Ambas as populações mostraram 2n=50 cromossomos e diferenças nas suas fórmulas de cariotípicas, cromossomos portadores das regiões organizadoras de nucléolos e localização da heterocromatina. Dados morfométricos das duas populações foram analisados para variáveis canônicas livres de tamanho. Os dados citogenéticos e morfológicos foram coincidentes e mostraram marcas exclusivas que refletem o grau de isolamento populacional. Em adição a outros dados geográficos, morfológicos e moleculares em populações de A. altiparanae do baixo rio Iguaçu e tributários do rio Paraná acima da represa de Itaipu (Sul do Brasil), os presentes resultados indicam que as duas populações analisadas neste estudo pertençam a diferentes estoques. A presença desta espécie ao longo da bacia do rio Iguaçu pode ser uma conseqüência de uma história evolutiva complexa e pouco conhecida.(AU)

The effect of sperm selection by Percoll or swim-up on the sex ratio of in vitro produced bovine embryos

The goal of this investigation was to determine the percentage of male and female bovine embryos produced after oocyte fertilization with Percoll density gradient centrifugation or with self-migration (swim-up) selected semen. In Experiment 1, sperm selection was performed by 90-45% discontinuous Percoll density gradient centrifugation (T1) and swim-up (T2). InExperiment 2, in addition to the discontinuous gradient, a 67.5% continuous gradient, and 5 or 10 min centrifugation were used. Four treatment groups were defined (TI = continuous, 5 min, TII = discontinuous, 5 min, TIII = continuous, 10 min and TIV = discontinuous,10 min). Embryos were sexed using PCR. In Experiment 1,Percoll density gradient centrifugation (n = 185) resulted in 48.6% (n = 90) male and 51.4% (n = 95) female embryos, and swim-up (n = 142) in 58.4% (n = 83) male and 41.6% (n = 59) female embryos. In Experiment 2, the percentages of male and female embryos obtained in TI (n = 93), TII (n = 70), TIII (n = 82) and TIV (n = 82) were 49.5% (n = 46) and 50.5% (n = 47), 57.1% (n = 40) and 42.9% (n = 30), 36.6% (n = 30) and 63.4% (n = 52) and 48.8% (n = 40) and 51.2% (n = 42), respectively. Swim-up (T2) and continuous Percoll gradient centrifugation for 10 min (TIII) showed a deviation toward males (P = 0.044) and females (P = 0.015), respectively, when compared to the 50% expected percentage of each gender. There was no difference in male and female percentages in the other treatment groups from Experiments 1 and 2, when compared to the 50% expected percentage of each gender neither between treatment.(AU)

The effect of sperm selection by Percoll or swim-up on the sex ratio of in vitro produced bovine embryos

The goal of this investigation was to determine the percentage of male and female bovine embryos produced after oocyte fertilization with Percoll density gradient centrifugation or with self-migration (swim-up) selected semen. In Experiment 1, sperm selection was performed by 90-45% discontinuous Percoll density gradient centrifugation (T1) and swim-up (T2). InExperiment 2, in addition to the discontinuous gradient, a 67.5% continuous gradient, and 5 or 10 min centrifugation were used. Four treatment groups were defined (TI = continuous, 5 min, TII = discontinuous, 5 min, TIII = continuous, 10 min and TIV = discontinuous,10 min). Embryos were sexed using PCR. In Experiment 1,Percoll density gradient centrifugation (n = 185) resulted in 48.6% (n = 90) male and 51.4% (n = 95) female embryos, and swim-up (n = 142) in 58.4% (n = 83) male and 41.6% (n = 59) female embryos. In Experiment 2, the percentages of male and female embryos obtained in TI (n = 93), TII (n = 70), TIII (n = 82) and TIV (n = 82) were 49.5% (n = 46) and 50.5% (n = 47), 57.1% (n = 40) and 42.9% (n = 30), 36.6% (n = 30) and 63.4% (n = 52) and 48.8% (n = 40) and 51.2% (n = 42), respectively. Swim-up (T2) and continuous Percoll gradient centrifugation for 10 min (TIII) showed a deviation toward males (P = 0.044) and females (P = 0.015), respectively, when compared to the 50% expected percentage of each gender. There was no difference in male and female percentages in the other treatment groups from Experiments 1 and 2, when compared to the 50% expected percentage of each gender neither between treatment.