Contribution of environmental factors in the formation of biofilms by Alicyclobacillus acidoterrestris on surfaces of the orange juice industry / Contribuição de fatores ambientais na formação de biofilmes por Alicyclobacillus acidoterrestris em superfícies da indústria de suco de laranja

The objective of this study was to evaluate the effect of the initial microbial load, temperature and contact time on the biofilm formation of Alicyclobacillus acidoterrestris on stainless steel and natural food-grade rubber using orange juice as culture medium. The low initial load of A. acidoterrestris (2 log CFU/mL) led to biofilm formation on the stainless steel surface after 48 h of contact at 28 ºC and after 24 h at 45 ºC, and on natural food-grade rubber surface after 48 h of contact at both temperatures. The high initial microbial load (5 log CFU/mL) led to biofilm formation on stainless steel after 4 h of contact at 28 °C and 45 °C, while biofilm was formed on natural food-grade rubber after 8 h of contact at 28 °C and 4 h at 45 °C. The microbial load also affected the presence of spores in biofilm, which was observed on both surfaces only at high initial loads of A. acidoterrestris.(AU)

O objetivo deste estudo foi avaliar o efeito da carga microbiana inicial, temperatura e tempo de contato na formação de biofilme de Alicyclobacillus acidoterrestris em aço inoxidável e borracha natural de qualidade alimentar utilizando suco de laranja como meio de cultura. A baixa carga inicial de A. acidoterrestris (2 log UFC/mL) levou à formação de biofilme na superfície do aço inoxidável após 48 h de contato a 28 ºC e após 24 h a 45 ºC, e na superfície natural de borracha de qualidade alimentar após 48 h de contato nas duas temperaturas. A alta carga microbiana inicial (5 log UFC/mL) levou à formação de biofilme em aço inoxidável após 4 h de contato a 28 °C e 45 °C, enquanto o biofilme foi formado em borracha natural de qualidade alimentar após 8 h de contato a 28 °C e 4 h a 45 °C. A carga microbiana também afetou a presença de esporos no biofilme, o que foi observado em ambas as superfícies apenas com altas cargas iniciais de A. acidoterrestris.(AU)

Spoilage potential of spore-forming bacteria from refrigerated raw milk / Potencial deteriorante de bactérias formadoras de esporos do leite cru refrigerado

Aerobic bacterial spores are an important group of microorganisms in raw milk. These microbes are thermoduric, whereas the vegetative forms are thermophilic, thermoduric and psychrotrophic and reduce the shelf life of pasteurized milk. In Brazil, there are a lack of studies on the load of aerobic spores in raw milk; thus, little is known about the spoilage activity of these organisms. The aim the present study was to quantify the aerobic spores in Brazilian refrigerated raw milk of dairy region of Castro, Paraná state, assess the potential proteolytic and/or lipolytic isolates and identify the microorganisms derived from the germination. Twenty milk samples were evaluated, and the aerobic spore count was performed after plating the samples following heat treatment at 80ºC for 12 min. The activity proteolytic and lipolytic isolates were evaluated through subculture on milk agar and tributyrin agar, respectively, and these microorganisms were identified using partial 16S rRNA gene sequences that were compared through GenBank. The aerobic spore counts ranged from 1 to 3.7 log CFU.mL-¹, with a mean of 1.75 (± 0.59) log CFU.mL-¹. After spore germination, 137 aerobic bacterial isolates were obtained, 40 of which (29.2%) showed milk spoilage activity. Among these, 31 isolates (77.5%) were proteolytic and lipolytic, seven isolates (17.5%) were exclusively lipolytic and two isolates (5%) were only proteolytic. Based on the 16S rRNA gene analysis, Bacillus licheniformis (55%), Bacillus spp. (27.5%), Paenibacillus spp. (7.5%), Bacillus pumilus (5%), Bacillus circulans (2.5%) and Brevibacillus spp. (2.5%) were identified. Studies of Brazilian raw milk microbiota have not yet described B. circulans which are frequently detected in milk from other countries. Among the 22 B. licheniformis isolates, 21 microbes (95.5%) showed proteolytic and lipolytic activity, and one isolate (4.5%) exhibited only proteolytic activity. The two B. pumilus isolates were proteolytic...(AU)

Esporos de bactérias aeróbias são um importante grupo de micro-organismos no leite cru. Esses micro-organismos são termodúricos, e suas formas vegetativas são termofílicas, termodúricas e psicrotróficas e reduzem a vida útil do leite pasteurizado. No Brasil, não há estudos sobre os esporos aeróbios no leite cru, assim, pouco se sabe sobre o potencial deteriorante dessa microbiota no leite cru brasileiro. O objetivo do presente trabalho foi quantificar esporos aeróbios no leite cru refrigerado brasileiro, avaliar o seu potencial proteolítico e/ou lipolítico e identificar esses micro-organismos originários da germinação dos esporos. Foram avaliadas 20 amostras de leite cru refrigerado, nas quais foi realizada a contagem de esporos aeróbios após o tratamento térmico de 80ºC por 12 min. A atividade proteolítica e/ou lipolítica dos isolados foi avaliada após o repique das colônias em ágar leite e tributirina, respectivamente, e a identificação desses micro-organismos deteriorantes foi realizada pelo sequenciamento parcial do gene 16S rRNA e comparação com as sequencias depositadas no GenBank. As contagens de esporos aeróbios variaram de 1 a 3.7 log CFU.mL-¹, com média de 1.75 (± 0.59) log UFC.mL-¹. Após a germinação dos esporos, foram obtidas 137 colônias, das quais 40 (29.2%) apresentaram algum tipo de atividade deteriorante: 31 (77.5%) isolados foram proteolíticos e lipolíticos, sete (17.5%) foram exclusivamente lipolíticos e dois (5%) foram apenas proteolíticos. Baseado nas sequencias do gene 16S rRNA, foram identificados Bacillus licheniformis (55%), Bacillus spp. (27.5%), Paenibacillus spp. (7.5%), Bacillus pumilus (5%), Bacillus circulans (2.5%) e Brevibacillus spp. (2.5%) entre os esporulados deteriorantes. Estudos preliminaries sobre a microbiota do leite brasileiro ainda não haviam descrito B. circulans e Paenibacillus, gêneros frequentemente descritos no leite de outros países. Entre os 22 B. licheniformis...(AU)

Thermophilic bacteria in Moroccan hot springs, salt marshes and desert soils

The diversity of thermophilic bacteria was investigated in four hot springs, three salt marshes and 12 desert sites in Morocco. Two hundred and forty (240) thermophilic bacteria were recovered, identified and characterized. All isolates were Gram positive, rod-shaped, spore forming and halotolerant. Based on BOXA1R-PCR and 16S rRNA gene sequencing, the recovered isolates were dominated by the genus Bacillus (97.5%) represented by B. licheniformis (119), B. aerius (44), B. sonorensis (33), B. subtilis (subsp. spizizenii (2) and subsp. inaquosurum (6)), B. amyloliquefaciens (subsp. amyloliquefaciens (4) and subsp. plantarum (4)), B. tequilensis (3), B. pumilus (3) and Bacillus sp. (19). Only six isolates (2.5%) belonged to the genus Aeribacillus represented by A. pallidus (4) and Aeribacillus sp. (2). In this study, B. aerius and B. tequilensis are described for the first time as thermophilic bacteria. Moreover, 71.25%, 50.41% and 5.41% of total strains exhibited high amylolytic, proteolytic or cellulolytic activity respectively.(AU)

Evaluation of different culture media and enrichment in orange juice upon the growth of Alicyclobacillus spp / Avaliação de diferentes meios de cultura e enriquecimento em suco de laranja sobre o crescimento de Alicyclobacillus spp

Bacteria of the genus Alicyiclobacillus spp. form spores and develop in acid media, leading to the spoilage of citrus juices. Brazil is the largest exporter of orange juice concentrate, and yet, it has been extensively studied due to changes in taste and smell. Several investigations have reported different culture media used to detect and enumerate Alicyiclobacillus spp. The objective of the present study was to evaluate the recovery of Alicyiclobacillus spp. spores grown in ALI, BAT, K agar and YSG media using the methodology suggested by ABECitrus. Five inocula were used, two from reference strains and three from pasteurized concentrated orange juice. Cell recovery after the enrichment in reconstituted orange juice was also analyzed. An initial population of 6 log CFU/mL was inoculated. ALI, BAT and YSG media were able to recover the initial population of all different inocula, with no significant differences between the results. When compared to BAT, however, the preparation of ALI and YSG media was simpler and had more advantages. The recovery with K agar medium was lower than the other media for all the tested inocula, with significant differences found for Alicyclobacillus acidocaldarius0298T (3.66 log CFU/mL) and Alicyclobacillus pomorum-like CBMAI 0278 (4.11 log CFU/mL).(AU)

As bactérias do gênero Alicyiclobacillus spp. formam esporos e se desenvolvem em meios ácidos, podendo causar deterioração em sucos cítricos. O Brasil é o maior exportador de suco de laranja concentrado do mundo e, assim, este gênero vem sendo estudado por causar alterações de odor e sabor. Vários estudos relatam diferentes meios de culturas empregados para a detecção e enumeração de Alicyclobacillus spp. Este estudo teve como objetivo avaliar a recuperação de esporos de Alicyclobacillus spp. nos meios ALI, BAT, K ágar e YSG, utilizando a metodologia indicada pela ABECitrus. Cinco inóculos diferentes foram utilizados, sendo dois de linhagens-referência e os outros três isolados de suco concentrado de laranja pasteurizado. Também foi verificada a recuperação das células após o enriquecimento em suco de laranja reconstituído. Foi inoculada uma população inicial de 6 log UFC/mL. Os meios ALI, BAT e YSG conseguiram recuperar esta população nos diferentes inóculos, não existindo diferenças significativas entre os resultados. Contudo, devido à facilidade do preparo, os meios ALI e YSG mostraram-se mais vantajosos quando comparados ao meio BAT. O meio K ágar apresentou recuperação inferior aos outros meios para todos os inóculos, porém, houve diferença significativa apenas para Alicyclobacillus acidocaldarius 0298 T (3,66 log UFC/mL) e Alicyclobacillus pomorum-like CBMAI 0278 (4,11 log UFC/mL).(AU)

Evaluation of different culture media and enrichment in orange juice upon the growth of Alicyclobacillus spp / Avaliação de diferentes meios de cultura e enriquecimento em suco de laranja sobre o crescimento de Alicyclobacillus spp

Bacteria of the genus Alicyiclobacillus spp. form spores and develop in acid media, leading to the spoilage of citrus juices. Brazil is the largest exporter of orange juice concentrate, and yet, it has been extensively studied due to changes in taste and smell. Several investigations have reported different culture media used to detect and enumerate Alicyiclobacillus spp. The objective of the present study was to evaluate the recovery of Alicyiclobacillus spp. spores grown in ALI, BAT, K agar and YSG media using the methodology suggested by ABECitrus. Five inocula were used, two from reference strains and three from pasteurized concentrated orange juice. Cell recovery after the enrichment in reconstituted orange juice was also analyzed. An initial population of 6 log CFU/mL was inoculated. ALI, BAT and YSG media were able to recover the initial population of all different inocula, with no significant differences between the results. When compared to BAT, however, the preparation of ALI and YSG media was simpler and had more advantages. The recovery with K agar medium was lower than the other media for all the tested inocula, with significant differences found for Alicyclobacillus acidocaldarius 0298T (3.66 log CFU/mL) and Alicyclobacillus pomorum-like CBMAI 0278 (4.11 log CFU/mL).(AU)

As bactérias do gênero Alicyiclobacillus spp. formam esporos e se desenvolvem em meios ácidos, podendo causar deterioração em sucos cítricos. O Brasil é o maior exportador de suco de laranja concentrado do mundo e, assim, este gênero vem sendo estudado por causar alterações de odor e sabor. Vários estudos relatam diferentes meios de culturas empregados para a detecção e enumeração de Alicyclobacillus spp. Este estudo teve como objetivo avaliar a recuperação de esporos de Alicyclobacillus spp. nos meios ALI, BAT, K ágar e YSG, utilizando a metodologia indicada pela ABECitrus. Cinco inóculos diferentes foram utilizados, sendo dois de linhagens-referência e os outros três isolados de suco concentrado de laranja pasteurizado. Também foi verificada a recuperação das células após o enriquecimento em suco de laranja reconstituído. Foi inoculada uma população inicial de 6 log UFC/mL. Os meios ALI, BAT e YSG conseguiram recuperar esta população nos diferentes inóculos, não existindo diferenças significativas entre os resultados. Contudo, devido à facilidade do preparo, os meios ALI e YSG mostraram-se mais vantajosos quando comparados ao meio BAT. O meio K ágar apresentou recuperação inferior aos outros meios para todos os inóculos, porém, houve diferença significativa apenas para Alicyclobacillus acidocaldarius 0298 T (3,66 log UFC/mL) e Alicyclobacillus pomorum-like CBMAI 0278 (4,11 log UFC/mL).(AU)

Viabilidade técnica do kit QuickStix™ na identificação de Phakopsora pachyrhizi capturados com coletor de esporos / Technical feasibility of the QuickStix kit™ in identifying Phakopsora pachyrhizi captured by the spores collector

O objetivo deste trabalho foi testar a eficiência do uso do kitQuickStix™ para a identificação de esporos de Phakopsora pachyrhizi, agente causal da ferrugem asiática da soja, coletados por meio de um coletor SIGA. O kit QuickStix é capaz de detectar a presença de Phakopsora pachyrhizi nos estágios iniciais da infecção foliar, determinando a presença ou ausência do patógeno na amostra. Ele captura propágulos de fungos presentes no ar, que são identificados ou quantificados por varredura de lâminas em microscópio óptico comum. Foram testados diferentes números de esporos com 4, 8 e 12 gotas da solução extratora. Para os resultados positivos, foram avaliados a intensidade da linha de teste e o tempo para sua ocorrência. O kit foi capaz de detectar pequenas quantidades de esporos, sendo que a proporção de resultados positivos foi diretamente proporcional ao número de esporos e inversamente proporcional ao total de gotas. A porção adequada de gotas da solução extratora foi de quatro, pois apresentou mais resultados positivos para todas as classes dos números de esporos. Não foi possível observar uma diferença entre o tempo para a ocorrência dos resultados positivos aos diferentes tratamentos. A intensidade da linha de teste foi superior para as classes com mais esporos.(AU)

The aim of this study was to test the efficiency of QuickStix™ kit use for identification of Phakopsora pachyrhizi spores, which are the causal agents of Asian soybean rust, collected by "SIGA" spores collector. This kit is capable of detecting the presence of Phakopsora pachyrhizi in the early stages of leaf infection by determining the presence or absence of pathogen in the sample. It captures propagules of fungi present in the air that are identified or quantified by scanning blades in ordinary optical microscope. Different numbers of spores were tested with 4, 8 and 12 drops of extraction solution. For positive results, intensity of the test line and time for its occurrence were evaluated. The kit was able to detect small amounts of spores and the proportion of positive results was directly proportional to the number of spores and inversely proportional to the amount of drops. The proper portion of drops of extraction solution was four, as it showed more positive results for all classes of numbers of spores. No difference was found between the time to occurrence of positive results for the different treatments. The intensity of the test line was higher for classes with larger numbers of spores.(AU)

Viabilidade técnica do kit QuickStix™ na identificação de Phakopsora pachyrhizi capturados com coletor de esporos / Technical feasibility of the QuickStix kit™ in identifying Phakopsora pachyrhizi captured by the spores collector

O objetivo deste trabalho foi testar a eficiência do uso do kitQuickStix™ para a identificação de esporos de Phakopsora pachyrhizi, agente causal da ferrugem asiática da soja, coletados por meio de um coletor SIGA. O kit QuickStix é capaz de detectar a presença de Phakopsora pachyrhizi nos estágios iniciais da infecção foliar, determinando a presença ou ausência do patógeno na amostra. Ele captura propágulos de fungos presentes no ar, que são identificados ou quantificados por varredura de lâminas em microscópio óptico comum. Foram testados diferentes números de esporos com 4, 8 e 12 gotas da solução extratora. Para os resultados positivos, foram avaliados a intensidade da linha de teste e o tempo para sua ocorrência. O kit foi capaz de detectar pequenas quantidades de esporos, sendo que a proporção de resultados positivos foi diretamente proporcional ao número de esporos e inversamente proporcional ao total de gotas. A porção adequada de gotas da solução extratora foi de quatro, pois apresentou mais resultados positivos para todas as classes dos números de esporos. Não foi possível observar uma diferença entre o tempo para a ocorrência dos resultados positivos aos diferentes tratamentos. A intensidade da linha de teste foi superior para as classes com mais esporos.(AU)

The aim of this study was to test the efficiency of QuickStix™ kit use for identification of Phakopsora pachyrhizi spores, which are the causal agents of Asian soybean rust, collected by "SIGA" spores collector. This kit is capable of detecting the presence of Phakopsora pachyrhizi in the early stages of leaf infection by determining the presence or absence of pathogen in the sample. It captures propagules of fungi present in the air that are identified or quantified by scanning blades in ordinary optical microscope. Different numbers of spores were tested with 4, 8 and 12 drops of extraction solution. For positive results, intensity of the test line and time for its occurrence were evaluated. The kit was able to detect small amounts of spores and the proportion of positive results was directly proportional to the number of spores and inversely proportional to the amount of drops. The proper portion of drops of extraction solution was four, as it showed more positive results for all classes of numbers of spores. No difference was found between the time to occurrence of positive results for the different treatments. The intensity of the test line was higher for classes with larger numbers of spores.(AU)

Spoilage potential of spore-forming bacteria from refrigerated raw milk / Potencial deteriorante de bactérias formadoras de esporos do leite cru refrigerado

Aerobic bacterial spores are an important group of microorganisms in raw milk. These microbes are thermoduric, whereas the vegetative forms are thermophilic, thermoduric and psychrotrophic and reduce the shelf life of pasteurized milk. In Brazil, there are a lack of studies on the load of aerobic spores in raw milk; thus, little is known about the spoilage activity of these organisms. The aim the present study was to quantify the aerobic spores in Brazilian refrigerated raw milk of dairy region of Castro, Paraná state, assess the potential proteolytic and/or lipolytic isolates and identify the microorganisms derived from the germination. Twenty milk samples were evaluated, and the aerobic spore count was performed after plating the samples following heat treatment at 80ºC for 12 min. The activity proteolytic and lipolytic isolates were evaluated through subculture on milk agar and tributyrin agar, respectively, and these microorganisms were identified using partial 16S rRNA gene sequences that were compared through GenBank. The aerobic spore counts ranged from 1 to 3.7 log CFU.mL-¹, with a mean of 1.75 (± 0.59) log CFU.mL-¹. After spore germination, 137 aerobic bacterial isolates were obtained, 40 of which (29.2%) showed milk spoilage activity. Among these, 31 isolates (77.5%) were proteolytic and lipolytic, seven isolates (17.5%) were exclusively lipolytic and two isolates (5%) were only proteolytic. Based on the 16S rRNA gene analysis, Bacillus licheniformis (55%), Bacillus spp. (27.5%), Paenibacillus spp. (7.5%), Bacillus pumilus (5%), Bacillus circulans (2.5%) and Brevibacillus spp. (2.5%) were identified. Studies of Brazilian raw milk microbiota have not yet described B. circulans which are frequently detected in milk from other countries. Among the 22 B. licheniformis isolates, 21 microbes (95.5%) showed proteolytic and lipolytic activity, and one isolate (4.5%) exhibited only proteolytic activity. The two B. pumilus isolates were proteolytic...

Esporos de bactérias aeróbias são um importante grupo de micro-organismos no leite cru. Esses micro-organismos são termodúricos, e suas formas vegetativas são termofílicas, termodúricas e psicrotróficas e reduzem a vida útil do leite pasteurizado. No Brasil, não há estudos sobre os esporos aeróbios no leite cru, assim, pouco se sabe sobre o potencial deteriorante dessa microbiota no leite cru brasileiro. O objetivo do presente trabalho foi quantificar esporos aeróbios no leite cru refrigerado brasileiro, avaliar o seu potencial proteolítico e/ou lipolítico e identificar esses micro-organismos originários da germinação dos esporos. Foram avaliadas 20 amostras de leite cru refrigerado, nas quais foi realizada a contagem de esporos aeróbios após o tratamento térmico de 80ºC por 12 min. A atividade proteolítica e/ou lipolítica dos isolados foi avaliada após o repique das colônias em ágar leite e tributirina, respectivamente, e a identificação desses micro-organismos deteriorantes foi realizada pelo sequenciamento parcial do gene 16S rRNA e comparação com as sequencias depositadas no GenBank. As contagens de esporos aeróbios variaram de 1 a 3.7 log CFU.mL-¹, com média de 1.75 (± 0.59) log UFC.mL-¹. Após a germinação dos esporos, foram obtidas 137 colônias, das quais 40 (29.2%) apresentaram algum tipo de atividade deteriorante: 31 (77.5%) isolados foram proteolíticos e lipolíticos, sete (17.5%) foram exclusivamente lipolíticos e dois (5%) foram apenas proteolíticos. Baseado nas sequencias do gene 16S rRNA, foram identificados Bacillus licheniformis (55%), Bacillus spp. (27.5%), Paenibacillus spp. (7.5%), Bacillus pumilus (5%), Bacillus circulans (2.5%) e Brevibacillus spp. (2.5%) entre os esporulados deteriorantes. Estudos preliminaries sobre a microbiota do leite brasileiro ainda não haviam descrito B. circulans e Paenibacillus, gêneros frequentemente descritos no leite de outros países. Entre os 22 B. licheniformis...