Transmission of caprine arthritis encephalitis virus between sheep / Transmissão do vírus da artrite encefalite caprina entre ovinos

This study was conducted to evaluate caprine arthritis encephalitis virus (CAEV) transmission among sheep using 15 lambs that were distributed in 2 experimental groups. The exposed group consisted of 10 lambs that remained with their mothers, who were experimentally infected with CAEV. The non-exposed group was characterized as the control group and was comprised of 5 lambs that remained with their CAEV-negative mothers. Blood samples were collected monthly from birth until 1 year of life. To evaluate the transmission, an agar gel immunodiffusion test (AGID), enzyme immunoassay (ELISA), immunoblotting (IB), and nested polymerase chain reaction (nPCR) techniques were used. The non-exposed group was negative in all of the tests throughout the whole experiment. In the exposed group, 2 individuals had positive nPCR results. Positive nPCR samples were sequenced for comparison with the original goat strains and were shown to be similar to the CAEV-Cork strain. Seroconversion was not detected, and clinical manifestations were not observed. Thus, after 1 year of observation, it was verified that CAEV transmission among sheep is possible; however, with discreet frequency. This was an initial study, and other experiments are needed to analyze the adaptive capacity of the CAEV to remain in an infected sheep flock and cause the disease.(AU)

O estudo foi conduzido para avaliar a transmissão do vírus da artrite encefalite caprina (CAEV) entre ovinos, utilizando 15 cordeiros, distribuídos em dois grupos experimentais. O grupo exposto foi constituído por 10 cordeiros, mantidos com suas mães, que foram infectadas, experimentalmente, com CAEV. O grupo não exposto caracterizou-se como grupo controle e foi formado por cinco cordeiros, mantidos com suas matrizes, negativas para CAEV. Foram colhidas amostras de sangue mensalmente, do periodo que compreende o nascimento até um ano de vida. Para avaliar a transmissão, foram utilizadas as técnicas de imunodifusão em gel de agarose (IDGA), ensaio imunoenzimático (ELISA), immunoblotting (IB) e reação em cadeia da polimerase do tipo nested (nPCR). O grupo não exposto se manteve negativo aos testes durante todo o experimento. Já no grupo exposto, dois indivíduos apresentaram resultados positivos na nPCR. As amostras positivas na nPCR foram sequenciadas para serem comparadas com as cepas originais de caprinos, comprovando se tratar de lentivírus semelhante à cepa CAEV-Cork. A soroconversão não foi detectada e a manifestação clínica não foi observada. Sendo assim, após um ano de observação, verificou-se que a transmissão do CAEV entre ovinos é possível, entretanto, com discreta frequência. Este foi um estudo inicial, e outros experimentos são necessários para analisar a capacidade adaptativa do CAEV de permanecer em rebanho ovino infectado e, com isso, causar doença.(AU)

Evaluation of the "shelf life" of nitrocellulose membranes immobilized with Paracoccidioides brasiliensis antigen for performing the immunodiagnosis of paracoccidioidomycosis / Avaliação do "tempo de prateleira" de membranas de nitrocelulose imobilizadas com antígeno de Paracoccidioides brasiliensis para o imunodiagnóstico da paracoccidioidomicose

The immunoblotting reaction for performing the paracoccidioidomycosis (PCM) immunodiagnosis is an in-house methodology; and being a laborious task involving two previous steps, SDS-PAGE and Western blot, we evaluated the shelf life of nitrocellulose membranes containing the immobilized P. brasiliensis antigens, stored at -20 o C for 7, 15, 30, 45, 60 and 90 days. Twenty-eight serum samples were analyzed on two nitrocellulose membranes groups: (a) membranes previously blocked with PBS-5 % non-fat dry milk and (b) the priory non-blocked membranes. No difference was detected in the reactivity pattern in serum samples evaluated in the both membrane groups, especially for those stored for 7, 15, 30, 45 and 60 days. It might be emphasized that a good stability of P. brasiliensis antigens, immobilized on the nitrocellulose membranes, enable them to be stored up to 60 days at -20 o C. This finding contributes to the rapid diagnosis of PCM, and for sending them to other laboratories without adequate infrastructure for carrying out the steps that precede the immunodetection as the antigen production, SDS-PAGE and Western blot techniques. This scheme contributes substantially to improve the quality of PCM serodiagnosis, as it provides reproducible results in the units of the Laboratory Network.(AU)

Considerando-se que o immunoblotting para o imunodiagnóstico da paracoccidioidomicose (PCM) é uma metodologia in house e laboriosa envolvendo duas etapas iniciais, SDS-PAGE e Western blot, neste estudo foi avaliado o tempo de prateleira das membranas de nitrocelulose sensibilizadas com antígeno de P. brasiliensis, armazenadas a -20 o C durante 7, 15, 30, 45, 60 e 90 dias. Vinte e oito amostras de soro foram analisadas em dois grupos de membranas de nitrocelulose (membranas previamente bloqueadas com PBS-leite 5 % e as não-bloqueadas). Não houve diferença no padrão de reatividade quando os soros foram avaliados frente a ambos os grupos, especialmente para membranas armazenadas por 7, 15, 30, 45 e 60 dias. A boa estabilidade do antígeno utilizado para sensibilizar as membranas fez com que estas pudessem ser armazenadas a -20 C até 60 dias. Estas características contribuem para efetuar o diagnóstico rápido da PCM, bem como as perspectivas dessas membranas sensibilizadas serem encaminhadas para os laboratórios, que não possuam infraestrutura necessária para executar as etapas que antecedem a realização de immunoblotting, como a produção de antígeno, as técnicas de SDS PAGE e Western blot. Este procedimento contribui substancialmente para melhorar o diagnóstico sorológico da PCM, pois poderá fornecer resultados reprodutíveis nas unidades componentes da Rede de Laboratórios.(AU)

Diagnóstico e fatores de risco do complexo teníase-cisticercose bovina no município de Salinas, Minas Gerais / Diagnosis and risk factors of bovine taeniasis-cysticercosis complex in Salinas, Minas Gerais, Brazil

Com o objetivo de diagnosticar a situação do complexo teníase-cisticercose bovina no município de Salinas, Minas Gerais, foram coletadas amostras de sangue de 355 bovinos distribuídos em 18 propriedades rurais, sorteadas aleatoriamente. Em cada propriedade, foi aplicado um questionário socioeconômico para a análise de fatores que favorecem a manutenção do complexo teníase-cisticercose bovina. Foi realizado também um levantamento epidemiológico dos casos de teníase diagnosticados nos laboratórios credenciados pela Secretaria Municipal de Saúde de Salinas, no período de 2007 a 2010. A prevalência de cisticercose bovina foi de 4,70% enquanto as prevalências de teníase, encontradas durante os quatro períodos avaliados, foram de 0,29%, 0,36%, 0,24% e 0,24%. Entre os fatores de risco para a manutenção do complexo teníase-cisticercose analisados, foi observada uma relação estatisticamente significativa entre a ocorrência de cisticercose bovina e a ingestão de carne malpassada pelos entrevistados. Foi concluído que a cisticercose bovina está presente no município de Salinas, Minas Gerais, sendo o tratamento térmico ineficiente da carne bovina o principal fator de risco para a manutenção do complexo teníase-cisticercose, o que reforça a necessidade da adoção de medidas de controle com contínua vigilância epidemiológica e sanitária.(AU)

In order to diagnose the situation of bovine taeniasis-cysticercosis complex in the municipality of Salinas, Minas Gerais, Brazil, blood samples were collected from 355 cattle in 18 randomly selected farms. A socioeconomic questionnaire was filled in each farm for the analysis of factors which favor the maintenance of the taeniasis-cysticercosis complex. An epidemiological survey of human taeniasis was performed through analyses of the Municipal Health Department in the 2007-2010 period. A prevalence of 4.7% for bovine cysticercosis and the frequency of 0.29, 0.36, 0.24 and 0.24% for human taeniasis, during the evaluated period, was found. Among the risk factors, a statistically significant correlation was found between the occurrence of bovine cysticercosis and the ingestion of undercooked meat. It was concluded that bovine cysticercosis is present in the municipality of Salinas, due to inefficient heat treatment of the meat as the main risk factor for maintenance of the taeniasis-cysticercosis complex, reinforcing the need to adopt control measures with continuous epidemiological and health surveillance.(AU)

Diagnóstico e fatores de risco do complexo teníase-cisticercose bovina no município de Salinas, Minas Gerais / Diagnosis and risk factors of bovine taeniasis-cysticercosis complex in Salinas, Minas Gerais, Brazil

Com o objetivo de diagnosticar a situação do complexo teníase-cisticercose bovina no município de Salinas, Minas Gerais, foram coletadas amostras de sangue de 355 bovinos distribuídos em 18 propriedades rurais, sorteadas aleatoriamente. Em cada propriedade, foi aplicado um questionário socioeconômico para a análise de fatores que favorecem a manutenção do complexo teníase-cisticercose bovina. Foi realizado também um levantamento epidemiológico dos casos de teníase diagnosticados nos laboratórios credenciados pela Secretaria Municipal de Saúde de Salinas, no período de 2007 a 2010. A prevalência de cisticercose bovina foi de 4,70% enquanto as prevalências de teníase, encontradas durante os quatro períodos avaliados, foram de 0,29%, 0,36%, 0,24% e 0,24%. Entre os fatores de risco para a manutenção do complexo teníase-cisticercose analisados, foi observada uma relação estatisticamente significativa entre a ocorrência de cisticercose bovina e a ingestão de carne malpassada pelos entrevistados. Foi concluído que a cisticercose bovina está presente no município de Salinas, Minas Gerais, sendo o tratamento térmico ineficiente da carne bovina o principal fator de risco para a manutenção do complexo teníase-cisticercose, o que reforça a necessidade da adoção de medidas de controle com contínua vigilância epidemiológica e sanitária.(AU)

In order to diagnose the situation of bovine taeniasis-cysticercosis complex in the municipality of Salinas, Minas Gerais, Brazil, blood samples were collected from 355 cattle in 18 randomly selected farms. A socioeconomic questionnaire was filled in each farm for the analysis of factors which favor the maintenance of the taeniasis-cysticercosis complex. An epidemiological survey of human taeniasis was performed through analyses of the Municipal Health Department in the 2007-2010 period. A prevalence of 4.7% for bovine cysticercosis and the frequency of 0.29, 0.36, 0.24 and 0.24% for human taeniasis, during the evaluated period, was found. Among the risk factors, a statistically significant correlation was found between the occurrence of bovine cysticercosis and the ingestion of undercooked meat. It was concluded that bovine cysticercosis is present in the municipality of Salinas, due to inefficient heat treatment of the meat as the main risk factor for maintenance of the taeniasis-cysticercosis complex, reinforcing the need to adopt control measures with continuous epidemiological and health surveillance.(AU)

Intra-uterine exposure of horses to Sarcocystis spp. antigens / Exposição intrauterina ao Sarcocystis spp. em equinos

The aim of this study was to examine the intra-uterine exposure to Sarcocystis spp. antigens, determining the number of foals with detectable concentrations of antibodies against these agents in the serum, before colostrum ingestion and collect data about exposure of horses to the parasite. Serum samples were collected from 195 thoroughbred mares and their newborns in two farms from southern Brazil. Parasite specific antibody responses to Sarcocystis antigens were detected using the indirect immunofluorescent antibody test (IFAT) and immunoblot analysis. In 84.1% (159/189) of the pregnant mares and in 7.4% (14/189) of foals we detected antibodies anti-Sarcocystis spp. by IFAT. All samples seropositive from foals were also positive in their respective mares. Serum samples of seropositive foals by IFAT, showed no reactivity on the immunoblot, having as antigens S. neurona merozoites. In conclusion, the intra-uterine exposure to Sarcocystis spp. antigens in horses was demonstrated, with occurrence not only in mares, but also in their foals, before colostrum ingestion these occurrences were reduced.(AU)

O objetivo deste estudo foi avaliar a exposição intrauterina ao Sarcocystis spp., para determinar o número de potros que possuem concentrações detectáveis de anticorpos contra esses agentes no soro, antes da ingestão do colostro, por meio da coleta de dados sobre a exposição a esses protozoários nos equinos. Amostras de soro foram coletadas de 195 éguas puro-sangue e seus respectivos potros recém-nascidos, em duas fazendas localizadas na região Sul do Brasil. Os testes utilizados na detecção de anticorpos específicos para o Sarcocystis foram a reação de imunofluorescência indireta (RIFI) e análise por meio de immunoblot. Pela RIFI, em 84,1% (159/189) das éguas e em 7,4% (14/189) dos potros foram detectados anticorpos anti-Sarcocystis spp. Todas as amostras soropositivas dos potros também foram positivas para suas respectivas mães. As amostras de soro dos potros soropositivos na RIFI, não apresentaram reatividade no immunoblot, tendo como antígenos merozoítos de S. neurona. Em conclusão, foi demonstrada a exposição intrauterina de Sarcocystis spp. em equinos, com ocorrência em éguas, porém, em seus respectivos potros, antes da ingestão de colostro a ocorrência foi reduzida.(AU)

Proteínas imunorreativas de Conidiobolus lamprauges isoladas de ovinos infectados naturalmente / Immunoreactive proteins of Conidiobolus lamprauges isolated from naturally infected sheep

O estudo de conidiobolomicose ovina tem sido realizado nos seus aspectos clínicos, epidemiológicos, patológicos e moleculares. Informações, entretanto, sobre a resposta imune do hospedeiro na infecção por Conidiobolus lamprauges são inexistentes. Este estudo teve por objetivo a identificação de proteínas imunorreativas que possam desempenhar papel importante na resposta imune de ovinos naturalmente infectados por C. lamprauges. Para a caracterização protéica e imunológica foi utilizada a cepa de C. lamprauges (FIOCRUZ-INCQS 40316) isolada de ovino com sinais clínicos de conidiobolomicose no Estado do MT e cinco amostras de soro de ovinos infectados naturalmente pelo fungo. A presença de anticorpos IgG foi observada em todos os animais doentes com títulos reagentes em diluições de até 1:1.600. Na técnica do immunoblot, o perfil antigênico frente aos soros ovinos com a doença apresentou doze bandas reativas, com massas moleculares variando de 35 a 198 kDa. Dentre estas, a proteína de 198 kDa foi reativa em 3 soros de ovinos e a de 53 kDa apresentou a maior intensidade comparativamente com outras bandas, sendo provavelmente imunodominante. Amostras de soro de animais sadios não apresentaram reatividade demostrando a especificidade da técnica. A presença de proteínas antigênicas de C. lamprauges e IgG específicos em soros de ovinos observados no presente trabalho poderá auxiliar no desenvolvimento de métodos de diagnóstico precoces e na utilização de proteínas candidatas a vacinas para o controle e prevenção da infecção em animais e humanos.(AU)

The study of sheep conidiobolomycosis has been carried out in its clinical, epidemiological, pathological and molecular aspects. Information, however, about the host immune response in infection Conidiobolus lamprauges is absent. This study aimed to identify immunoreactive proteins that may play an important role in the immune response of sheep naturally infected by C. lamprauges. For protein and immunological characterization, C. lamprauges (strain FIOCRUZ-INCQS 40316) isolated from a sheep with clinical signs of conidiobolomycosis in the MT state and five sera samples of naturally infected sheep were used. The presence of IgG antibody was observed in all patients with reagent titers in dilutions up to 1:1600. In immunoblot technique, the antigenic profile against infected sheep sera showed twelve reactive bands with molecular weights ranging from 35 to 198 kDa. Among them, the 198 kDa protein was reactive against sera from three sheep and the 53 kDa showed increased intensity compared to other bands probably being immunodominant. Healthy animal serum samples showed no reactivity demonstrating the specificity of the technique. The presence of antigenic proteins of C. lamprauges and specific IgG in sheep sera observed in this study may assist in the development of early diagnostic methods and the use of protein as candidate vaccines for the control and prevention of infection in animals and human.(AU)

Relevant peptides of Taenia crassiceps for the diagnosis of bovine cysticercosis by immunoblot / Peptídeos relevantes de Taenia crassiceps para o diagnóstico da cisticercose bovina pelo immunoblot

Given the limited knowledge about the diagnosis of bovine cysticercosis by immunoblot, the aim of this study was to assess the applicability of this test, identifying key peptides with diagnostic value. Immunoblot assays were performed using total larval antigen of Taenia crassiceps and 60 sera of positive bovines for cysticercosis (30 naturally and 30 experimentally infected with T. saginata eggs), 30 sera of negative bovines for cysticercosis and 30 sera of bovines with other diseases (fascioliasis, hydatidosis and tuberculosis). The peptides of greater diagnostic importance, in descending order of accuracy (%), were as follows: 6-8kDa (90.8%), 129-143kDa (74.2%), 99-105kDa (71.7%) and 14-19kDa (71.1%). Cross-reactions, due to fascioliasis and hydatidosis, were observed in the four intervals of peptides highlighted. The results demonstrate that the total antigen of T. crassiceps has peptides with a high diagnostic potential; therefore, the immunoblot is useful in the diagnosis of bovine cysticercosis(AU)

Tendo em vista o conhecimento limitado sobre o diagnóstico da cisticercose bovina pelo immunoblot, o objetivo deste trabalho foi avaliar a aplicabilidade desse teste, identificando os principais peptídeos com valor diagnóstico. Foram realizados ensaios de immunoblot, utilizando antígeno total de larva de Taenia crassiceps e 60 soros de bovinos positivos para a cisticercose (30 naturalmente e 30 experimentalmente infectados com ovos de T. saginata), 30 soros de bovinos negativos para a cisticercose e 30 soros de bovinos com outras patologias (fasciolose, hidatidose e tuberculose). Os peptídeos de maior importância diagnóstica, em ordem decrescente de acurácia (%), foram os seguintes: 6-8 kDa (90,8%), 129-143 kDa (74,2%), 99-105 kDa (71,7%) e 14-19 kDa (71,1%). Reações cruzadas, em decorrência da fasciolose e hidatidose, foram observadas nos quatro intervalos de peptídeos ressaltados. Os resultados demonstram que o antígeno total de T. crassiceps possui peptídeos com alto potencial diagnóstico, sendo, portanto, o immunoblot útil no diagnóstico da cisticercose bovina(AU)

Importance of the association of molecular and immunological diagnosis in immunocompetent patient with Histoplasma capsulatum and Cryptoccocus neoformans infection: a case report

This case reports an immunocompetent 29-year-old woman with suspected pneumonia, suggestive of fungal infection. Immunoblotting analysis reactivity againstHistoplasma capsulatum and Paracoccidioides brasiliensis were observed. Nested-PCR in blood employing species-specific primers was positive for H. capsulatum andCryptococcus neoformans. The evaluation of paucisymptomatic patients with positive results for H. capsulatum and C. neoformans could be relevant for the prevention as well as the possible evaluation of the reactivated quiescent foci. In conclusion, the associated methodology may have contributed to the monitoring endogenous reactivation of these diseases.(AU)

Caracterização de anticorpos monoclonais contra rotavírus bovino e suas aplicações como ferramenta de diagnóstico / Characterization of monoclonal antibodies against bovine rotavirus and their diagnostic applications

Anticorpos monoclonais (AcM) para rotavírus bovino foram caracterizados para sua aplicação como ferramenta de diagnóstico, utilizando-se as técnicas de isotipificação, dot-blot, western-blot, imunofluorescência indireta (IFI) e ELISA de captura. A caracterização imunoquímica demonstrou que os cinco AcM 1G5, 4F7, 1E12, 4F3 e 3C12 foram do isótipo IgG2a. Pela técnica de dot-blot, os AcM 1G5, 4F7, 1E12, 4F3 detectaram antígenos do rotavírus, em diferentes concentrações, e dois AcM (1E12 e 4F3) reconheceram proteínas virais pela técnica de western-blot. Todos os AcM reagiram positivamente na técnica de IFI em cultivo celular e foram capazes de detectar antígeno viral em amostras fecais bovinas e humanas, pela técnica de ELISA de captura. Identificaram-se dois grupos de AcM, um deles formado pelos AcM 4F7, 1E12 e 1G5, para seu possível uso na detecção de antígeno viral em fezes por meio do ELISA de captura ou dot-blot e outro pelos 4F3 e 3C12, que podem ser usados para detectar antígeno viral em culturas de células por meio de IFI.(AU)

This work was carried out to characterize and evaluate five bovine rotavirus, monoclonal antibodies (MAbs), as a diagnosis tool, by isotyping, dot-blot, western-blot, indirect immunofluorescence (IFI) and ELISA techniques. The immunochemistry characterization showed that all five MAbs (4F7, 4F3, 1G5, 1E12 and 3C12) were IgG2a isotype. The dot-blot immunoassay showed that 1G5, 4F7, 1E12 and 4F3 detected viral antigen in different concentrations and two MAbs (1E12 and 4F3) recognized viral proteins by western-blot. All MAbs detected viral antigen in bovine and human fecal samples by capture ELISA technique and viral antigen in infected MA-104 cell culture by IFI. In conclusion, two groups of Mabs were indetified: one with Mabs 4F7, 1E12 and 1G5 showed the best results to detect rotavirus antigen in fecal samples by capture ELISA or dot-blot techniques assay and other with 4F3 and 3C12 which may be used to detect rotavirus antigens in cell culture by IFI. The results showed the potential use of these MAbs as diagnosis tools in diarrheas by rotavirus in bovines.(AU)