Standardization of molecular techniques for the detection and characterization of intestinal protozoa and other pathogens in humans

Background: The intrinsic sensitivity limitations of basic parasitological methods, along with the particular biological characteristics of parasites, make these methods ineffective to differentiate morphologically indistinguishable species. Molecular detection and characterization techniques could be used to overcome these problems. The purpose of this work was to standardize molecular polymerase chain reaction (PCR) techniques, described in the literature, for the detection and molecular characterization of intestinal protozoa and other pathogens in humans. Methods: DNA was extracted from human or animal feces, previously washed or cultured in Boeck Drbohlav's Modified Medium. DNA extraction was performed with Machery-Nagel extraction kits. The standardization of the PCR, nested-PCR or RFLP techniques was carried out according to the literature. For each molecular technique performed, the sensitivity of the test was determined based on the minimun quantity required of DNA (sensitivity A) and the minimum quantity of life forms that the test detected (sensitivity B). Results: Sensitivity A was 10 fg for G. duodenalis, 12.5 pg for Entamoeba histolytica or Entamoeba dispar, 50 fg for Cryptosporidium spp., 225 pg for Cyclospora spp. and 800 fg or 8 fg for Blastocystis spp. after performing a 1780 bp PCR or 310 bp nested PCR, respectively. The sensitivity B was 100 cysts for G. duodenalis, 500 cysts for E. histolytica or E. dispar, 1000 oocysts for Cyclospora spp. and 3600 or four vegetatives forms for PCR or nested PCR of Blastocystis spp., respectively. Conclusions: The molecular detection of protozoa and chromist was achieved and the molecular characterization allowed the genotyping of some of the parasites such as Giardia duodenalis, Cryptosporidium spp., and Blastocystis spp. This study summarizes the molecular techniques for epidemiological studies in humans and animals, and helps in the investigation of their transmission sources in countries where intestinal parasites are a public health problem.(AU)

Avaliação das endoparasitoses intestinais que acometem cães e gatos mantidos em um abrigo / Evaluating of the intestinal endoparasitic infections in dogs and cats living in a shelter

As endoparasitoses são enfermidades comuns em cães e gatos, sendo que a disseminação dos parasitos ocorre facilmente entre eles, principalmente em ambientes de abrigos para animais, onde estes permanecem em estreito contato. Além disso, muitas destas parasitoses são consideradas zoonoses. Assim, este trabalho teve como objetivo estudar a frequência dos endoparasitos que acometem os cães e gatos abrigados em um canil municipal na região da Zona da Mata Mineira, utilizando o Método de Hoffman, Pons e Janer (HPJ) para realização da análise coproparasitológica. Para isso, foram avaliadas 91 amostras fecais, sendo 56 de cães adultos, 9 de cães filhotes, 16 de gatos adultos e 10 de gatos filhotes. As amostras foram processadas através do Método HPJ, que tem como princípio a sedimentação simples. Do total de 91 amostras fecais de cães e gatos estudadas, 69 (75,8%) foram positivas para um ou mais tipos de ovos ou cistos de endoparasitos. Verificou-se uma variável ocorrência de agentes parasitário entre as espécies e faixas etárias estudadas. Portanto, destaca-se a importância da realização de exames coproparasitológicos em animais de abrigos para identificação dos endoparasitos, na tentativa de direcionar o tratamento e evitar a transmissão dos agentes parasitários entre os animais. Além disso, constatou-se que a técnica utilizada na análise das amostras deste estudo é capaz de detectar os mais variados tipos de ovos e cistos de enteroparasitos.

Endoparasitic infections are often observed in dogs and cats, since parasites spread easily among them, mainly in animal shelter environments, where animals remain close to each other. In addition, several parasitic infections are classified as zoonoses. Thus, the aim of the current study is to investigate the frequency of endoparasites affecting dogs and cats sheltered in a municipal kennel in Zona da Mata (Forest Zone) region, Minas Gerais State, using the Hoffman, Pons and Janer (HPJ) method to perform the coproparasitological analysis. In total, 91 fecal samples were evaluated: 56 samples from adult dogs; 9, from puppies; 16, from adult cats; and 10, from kitties. Collected samples were processed based on the method by Hoffman, Pons and Janer (HPJ), whose principle lies on simple sedimentation. Sixty-nine (n=69; 75.8%) of the 91 fecal samples tested positive for one, or more, endoparasite egg or cyst type. There was a variable occurrence of parasitic agents among the species and age groups studied. Therefore, the importance of performing coproparasitological tests on animals from shelters to identify endoparasites is highlighted, in an attempt to direct the treatment and prevent the transmission of parasitic agents between animals. Furthermore, it was found that the technique used to analyze the samples in this study is capable of detecting the most varied types of intestinal parasite eggs and cysts.

Avaliação das endoparasitoses intestinais que acometem cães e gatos mantidos em um abrigo / Evaluating of the intestinal endoparasitic infections in dogs and cats living in a shelter

As endoparasitoses são enfermidades comuns em cães e gatos, sendo que a disseminação dos parasitos ocorre facilmente entre eles, principalmente em ambientes de abrigos para animais, onde estes permanecem em estreito contato. Além disso, muitas destas parasitoses são consideradas zoonoses. Assim, este trabalho teve como objetivo estudar a frequência dos endoparasitos que acometem os cães e gatos abrigados em um canil municipal na região da Zona da Mata Mineira, utilizando o Método de Hoffman, Pons e Janer (HPJ) para realização da análise coproparasitológica. Para isso, foram avaliadas 91 amostras fecais, sendo 56 de cães adultos, 9 de cães filhotes, 16 de gatos adultos e 10 de gatos filhotes. As amostras foram processadas através do Método HPJ, que tem como princípio a sedimentação simples. Do total de 91 amostras fecais de cães e gatos estudadas, 69 (75,8%) foram positivas para um ou mais tipos de ovos ou cistos de endoparasitos. Verificou-se uma variável ocorrência de agentes parasitário entre as espécies e faixas etárias estudadas. Portanto, destaca-se a importância da realização de exames coproparasitológicos em animais de abrigos para identificação dos endoparasitos, na tentativa de direcionar o tratamento e evitar a transmissão dos agentes parasitários entre os animais. Além disso, constatou-se que a técnica utilizada na análise das amostras deste estudo é capaz de detectar os mais variados tipos de ovos e cistos de enteroparasitos.9AU)

Endoparasitic infections are often observed in dogs and cats, since parasites spread easily among them, mainly in animal shelter environments, where animals remain close to each other. In addition, several parasitic infections are classified as zoonoses. Thus, the aim of the current study is to investigate the frequency of endoparasites affecting dogs and cats sheltered in a municipal kennel in Zona da Mata (Forest Zone) region, Minas Gerais State, using the Hoffman, Pons and Janer (HPJ) method to perform the coproparasitological analysis. In total, 91 fecal samples were evaluated: 56 samples from adult dogs; 9, from puppies; 16, from adult cats; and 10, from kitties. Collected samples were processed based on the method by Hoffman, Pons and Janer (HPJ), whose principle lies on simple sedimentation. Sixty-nine (n=69; 75.8%) of the 91 fecal samples tested positive for one, or more, endoparasite egg or cyst type. There was a variable occurrence of parasitic agents among the species and age groups studied. Therefore, the importance of performing coproparasitological tests on animals from shelters to identify endoparasites is highlighted, in an attempt to direct the treatment and prevent the transmission of parasitic agents between animals. Furthermore, it was found that the technique used to analyze the samples in this study is capable of detecting the most varied types of intestinal parasite eggs and cysts.(AU)

In vitro anthelmintic activity of Lippia gracilis Schauer essential oil against egg-hatching of goat gastrointestinal nematodes / Atividade anti-helmíntica in vitro do óleo essencial de Lippia gracilis Schauer contra a eclosão de nematódeos gastrintestinais de caprinos

Since drug-resistant nematodes became a common problem in sheep and goat industries, alternative methods using natural products have emerged as a viable and sustainable anthelmintic treatment option. Here, the in vitro effect of essential oil extracted from Lippia gracilis Schauer was assessed on the hatching process of nematodes recovered from naturally infected goats. Essential oil at concentrations of 0.08% (0.008 µL/mL), 0.12% (0.012 µL/mL), and 0.16% (0.016 µL/mL) was able to induce an average inhibition of 74.7, 84 and 93%, respectively. The effective concentration required to inhibit egg hatching in 50% of eggs (EC50) was 0.03452%. Therefore, essential oil of L. gracilis showed promisor in vitro anthelmintic results against egg-hatching of goat gastrointestinal nematodes.(AU)

Como os nematoides resistentes a drogas se tornaram um problema comum nas indústrias de ovinos e caprinos, métodos alternativos que utilizam produtos naturais surgiram como uma opção de tratamento anti-helmíntico viável e sustentável. Aqui, o efeito in vitro do óleo essencial extraído de Lippia gracilis Schauer foi avaliado no processo de eclosão de nematoides recuperados de caprinos naturalmente infectadas. O óleo essencial nas concentrações de 0,08% (0,008 µL/mL), 0,12% (0,012 µL/mL), e 0,16% (0,016 µL/mL)foi capaz de induzir uma inibição média de 74,7, 84 e 93%, respectivamente. A concentração efetiva necessária para inibir a eclosão de ovos em 50% dos ovos (CE50) foi de 0,03452%. Portanto, o óleo essencial de L. gracilis apresentou resultados anti-helmínticos in vitro promissores contra a eclosão de nematódeos gastrintestinais de caprinos.(AU)

In vitro anthelmintic activity of Lippia gracilis Schauer essential oil against egg-hatching of goat gastrointestinal nematodes / Atividade anti-helmíntica in vitro do óleo essencial de Lippia gracilis Schauer contra a eclosão de nematódeos gastrintestinais de caprinos

Since drug-resistant nematodes became a common problem in sheep and goat industries, alternative methods using natural products have emerged as a viable and sustainable anthelmintic treatment option. Here, the in vitro effect of essential oil extracted from Lippia gracilis Schauer was assessed on the hatching process of nematodes recovered from naturally infected goats. Essential oil at concentrations of 0.08% (0.008 µL/mL), 0.12% (0.012 µL/mL), and 0.16% (0.016 µL/mL) was able to induce an average inhibition of 74.7, 84 and 93%, respectively. The effective concentration required to inhibit egg hatching in 50% of eggs (EC50) was 0.03452%. Therefore, essential oil of L. gracilis showed promisor in vitro anthelmintic results against egg-hatching of goat gastrointestinal nematodes.(AU)

Como os nematoides resistentes a drogas se tornaram um problema comum nas indústrias de ovinos e caprinos, métodos alternativos que utilizam produtos naturais surgiram como uma opção de tratamento anti-helmíntico viável e sustentável. Aqui, o efeito in vitro do óleo essencial extraído de Lippia gracilis Schauer foi avaliado no processo de eclosão de nematoides recuperados de caprinos naturalmente infectadas. O óleo essencial nas concentrações de 0,08% (0,008 µL/mL), 0,12% (0,012 µL/mL), e 0,16% (0,016 µL/mL)foi capaz de induzir uma inibição média de 74,7, 84 e 93%, respectivamente. A concentração efetiva necessária para inibir a eclosão de ovos em 50% dos ovos (CE50) foi de 0,03452%. Portanto, o óleo essencial de L. gracilis apresentou resultados anti-helmínticos in vitro promissores contra a eclosão de nematódeos gastrintestinais de caprinos.(AU)

Prevalence of intestinal parasite infections in stray and farm dogs from Spain / Prevalência de infecções por parasitos intestinais em cães errantes e de fazenda na Espanha

Dogs play a potential role as reservoirs for zoonotic parasites, being especially problematic uncontrolled dog populations such as stray and farm dogs with access to populated areas. In order to investigate the prevalence of canine intestinal parasites in at-risk dog populations, we tested a total of 233 faecal samples shed by stray and dairy farm dogs from northern Spain. Telemann method was used to detect the presence of eggs and (oo)cysts of common dog intestinal parasites and Cryptosporidium was detected by PCR. One hundred and forty eight out of 233 samples (63.5%) were positive for at least one intestinal parasite, being Ancylostomidae (35.6%; 83/233) and Trichuris (35.2%; 82/233) the parasites most frequently identified. Cryptosporidium DNA was not detected in any of the faecal samples analysed. The overall prevalence was significantly higher in stray dogs than in farm dogs (72.5% vs 58.8%). Specifically, stray dogs had a significantly higher prevalence of Ancylostomatidae, Toxocara, Toxascaris and Taenidae. These dog populations are an important source of environmental contamination with intestinal parasite forms, which could be of significance to animal and human health.(AU)

Os cães desempenham um importante papel como reservatório de parasitos zoonóticos, sendo especialmente problemáticas as populações descontroladas, como a de cães errantes e de fazenda, com acesso às áreas povoadas. Para investigar a prevalência de parasitos intestinais em populações caninas de risco, foram analisadas 233 amostras fecais provenientes de cães de fazendas leiteiras e errantes do norte da Espanha. O método Telemann foi utilizado para detectar ovos, cistos e oocistos dos parasitos caninos mais comuns e para a detecção de Cryptosporidium foi utilizada a técnica da PCR. Cento e quarenta e oito de 233 amostras analisadas (63,5%) foram positivas para pelo menos um parasito intestinal, sendo Ancyostomatidae (35,6%; 83/233) e Trichuris sp. (35,2%; 82/233) os parasitos identificados com maior frequência. O DNA de Cryptosporidium sp. não foi detectado em nenhuma das amostras fecais analisadas. A prevalência geral foi significativamente maior em cães errantes do que em cães de fazenda (72,5% vs 58,8%). Especificamente, os cães errantes tiveram prevalência maior para Ancylostomatidae, Toxocara, Toxascaris e Taenidae. Essas populações de cães são importantes fontes de contaminação ambiental, pois eliminam formas de vida desses parasitos, que podem ter impacto na saúde animal e humana.(AU)

Frequência de enteroparasitos em mulheres não grávidas e seus filhos e grávidas atendidas em uma unidade de saúde / Frequency of enteroparasites in non-pregnant women and their children and pregnant women attended at a public health unit

As infecções parasitárias intestinais são amplamente distribuídas em todo o mundo e a população infantil é a mais afetada. A prevalência das infecções parasitárias intestinais materna e infantil de pacientes atendidos em uma unidade de saúde pública do município de Lagoa Santa, Minas Gerais foi avaliada pela técnica de centrífugo sedimentação em formol-éter. A positividade foi de 41,7% para gestantes, 37,3% para mães e 35,7% em crianças. Endolimax nana (17,1%) e Giardia intestinalis (17,1%) foram os parasitos mais frequentemente detectados em crianças com idade inferior a dois anos e em gestantes (33,3%). Para as mães, G. intestinalis (20,3%) foi o parasito mais prevalente seguido de Entamoeba coli (17%). A infecção simultânea de mãe e filho foi detectada em 7 das 25 crianças infectadas. Apesar das ações de educação em saúde, melhoria no nível educacional e acesso a serviços médicos, a frequência de infecções por endoparasitas permanece alta. A literatura é escassa em relação ao tema e acredita-se que a deficiência na aplicação de medidas de educação sanitária possa fazer com que mães infectadas possam contribuir para a infecção parasitária de seus filhos, assim como os filhos podem ser fonte de infecção para suas mães.

Intestinal parasitic infections are widely distributed throughout the world and children are the most affected population. The objective of the present study was to evaluate the prevalence of parasitic maternal and infant intestinal infection of patients attended at a public health unit in the municipality of Lagoa Santa, Minas Gerais. The centrifugal-sedimentation in formol-ether was the technica used for stool analysis. Positivity was observed in 41.7% for pregnant women, 37.3% for mothers and 35.7% for children. Endolimax nana (17.1%) and Giardia intestinalis (17.1%) were the most frequently detected parasites in children under two-years old and pregnant women (33.3%). For mothers, G. intestinalis (20.3%) was the most prevalent parasite followed by Entamoeba coli (17%). Simultaneous infection of mother and child was detected in 7 of 25 infected children. Despite health educations actions, improvement in educational level, and access to medical services, the frequency of endoparasite infections remains high. Literature is scarce in relation to the present theme and it is believed that infected mothers can contribute for parasitic infection of their kids, just as children can be a source of infection for their mothers.

Frequência de enteroparasitos em mulheres não grávidas e seus filhos e grávidas atendidas em uma unidade de saúde / Frequency of enteroparasites in non-pregnant women and their children and pregnant women attended at a public health unit

As infecções parasitárias intestinais são amplamente distribuídas em todo o mundo e a população infantil é a mais afetada. A prevalência das infecções parasitárias intestinais materna e infantil de pacientes atendidos em uma unidade de saúde pública do município de Lagoa Santa, Minas Gerais foi avaliada pela técnica de centrífugo sedimentação em formol-éter. A positividade foi de 41,7% para gestantes, 37,3% para mães e 35,7% em crianças. Endolimax nana (17,1%) e Giardia intestinalis (17,1%) foram os parasitos mais frequentemente detectados em crianças com idade inferior a dois anos e em gestantes (33,3%). Para as mães, G. intestinalis (20,3%) foi o parasito mais prevalente seguido de Entamoeba coli (17%). A infecção simultânea de mãe e filho foi detectada em 7 das 25 crianças infectadas. Apesar das ações de educação em saúde, melhoria no nível educacional e acesso a serviços médicos, a frequência de infecções por endoparasitas permanece alta. A literatura é escassa em relação ao tema e acredita-se que a deficiência na aplicação de medidas de educação sanitária possa fazer com que mães infectadas possam contribuir para a infecção parasitária de seus filhos, assim como os filhos podem ser fonte de infecção para suas mães.(AU)

Intestinal parasitic infections are widely distributed throughout the world and children are the most affected population. The objective of the present study was to evaluate the prevalence of parasitic maternal and infant intestinal infection of patients attended at a public health unit in the municipality of Lagoa Santa, Minas Gerais. The centrifugal-sedimentation in formol-ether was the technica used for stool analysis. Positivity was observed in 41.7% for pregnant women, 37.3% for mothers and 35.7% for children. Endolimax nana (17.1%) and Giardia intestinalis (17.1%) were the most frequently detected parasites in children under two-years old and pregnant women (33.3%). For mothers, G. intestinalis (20.3%) was the most prevalent parasite followed by Entamoeba coli (17%). Simultaneous infection of mother and child was detected in 7 of 25 infected children. Despite health educations actions, improvement in educational level, and access to medical services, the frequency of endoparasite infections remains high. Literature is scarce in relation to the present theme and it is believed that infected mothers can contribute for parasitic infection of their kids, just as children can be a source of infection for their mothers.(AU)

Ocorrência de parasitos intestinais em Bugio-preto (Alouatta caraya) do Parque Zoobotânico de Teresina, Piauí / Occurrence of intestinal parasites in Alouatta caraya of the Zoobotanical Park of Teresina, Piauí, Brazil

Background: The animals of the genus Alouatta are popularly known as Bugios, barbados, roncadores and guaribas, being the neotropical primates better studied in the world. They originate in South America, with records in Argentina, Bolivia, Paraguay and Uruguay. Because of their migrations, many are found debilitated and taken to captivity until their rehabilitation and most cannot be reinserted in nature. They tend to live in extensive areas, having a low resistance against parasitic infections because of low exposure and when kept in captivity, the risks of these infections increase. Some diagnostic techniques can aid in the detection of parasites of zoo animals and can identify the parasitic fauna of these animals. The objective of this work was to investigate and report the presence of intestinal parasites in a female Bugio-preta (Alouatta caraya) captive of the Zoobotanical Park of the municipality of Teresina, Piauí, Brazil.Case: The animal presented a constipation signs before clinical signs of apathy, anorexia, diarrhea and weight loss, suggestive signs of parasitosis, Sterile papers were placed on the floor of the animal enclosure and collected fresh stools shortly after defecation, the feces were removed using gloves, stored in a capped containers, identified and taken to the Laboratory of Parasitology of the Department of Parasitology and Microbiology of the Federal University of Piauí, for further evaluation. The fecal samples were submitted to the techniques of spontaneous sedimentation (HPJ), centrifugation-flotation (Faust) and flotation method in hyper saturated sucrose solution (Willis-Mollay), obtaining slides that were analyzed under an optical microscope in the 10x and 40x objective, confirming the presence of ascarids and hookworms.[...](AU)

Ocorrência de parasitos intestinais em Bugio-preto (Alouatta caraya) do Parque Zoobotânico de Teresina, Piauí / Occurrence of intestinal parasites in Alouatta caraya of the Zoobotanical Park of Teresina, Piauí, Brazil

Background: The animals of the genus Alouatta are popularly known as Bugios, barbados, roncadores and guaribas, being the neotropical primates better studied in the world. They originate in South America, with records in Argentina, Bolivia, Paraguay and Uruguay. Because of their migrations, many are found debilitated and taken to captivity until their rehabilitation and most cannot be reinserted in nature. They tend to live in extensive areas, having a low resistance against parasitic infections because of low exposure and when kept in captivity, the risks of these infections increase. Some diagnostic techniques can aid in the detection of parasites of zoo animals and can identify the parasitic fauna of these animals. The objective of this work was to investigate and report the presence of intestinal parasites in a female Bugio-preta (Alouatta caraya) captive of the Zoobotanical Park of the municipality of Teresina, Piauí, Brazil.Case: The animal presented a constipation signs before clinical signs of apathy, anorexia, diarrhea and weight loss, suggestive signs of parasitosis, Sterile papers were placed on the floor of the animal enclosure and collected fresh stools shortly after defecation, the feces were removed using gloves, stored in a capped containers, identified and taken to the Laboratory of Parasitology of the Department of Parasitology and Microbiology of the Federal University of Piauí, for further evaluation. The fecal samples were submitted to the techniques of spontaneous sedimentation (HPJ), centrifugation-flotation (Faust) and flotation method in hyper saturated sucrose solution (Willis-Mollay), obtaining slides that were analyzed under an optical microscope in the 10x and 40x objective, confirming the presence of ascarids and hookworms.[...]

Neutrophils, eosinophils, and mast cells in the intestinal wall of dogs naturally infected with Leishmania infantum / Neutrófilos, eosinófilos e mastócitos na parede intestinal de cães naturalmente infectados com Leishmania infantum

Visceral leishmaniasis (VL) is a disease caused by the protozoa Leishmania infantum and can cause an inflammatory reaction in the gastrointestinal tract, however the role of granulocytic cells (neutrophils, eosinophils, and mast cells) in the intestine of dogs infected is not fully understood. We performed a quantitative analysis these cells in the intestinal wall of dogs with canine visceral leishmaniasis (CVL). Twenty dogs were assigned to one of three groups: group 1 (G1, n=8), dogs with CVL and L. infantum amastigotes in the intestine; group 2 (G2, n=9), dogs with CVL but without intestinal amastigotes; and group 3 (G3, n=3), uninfected dogs (control group). Granulocytic cells were counted in the crypt-villus unit (mucosa), submucosa, and muscle layer of the intestinal mucosa. Cell counts were higher in the intestinal wall of dogs from G2 followed by G1 and G3 (p≤0.05). In G1, there was a low inverse correlation between parasite burden of the small intestine and granulocyte counts (r= -0.1, p≤0.01). However, in G2 dogs, mast cell and eosinophil numbers showed positive correlation (r=0.85, p0.01). The granulocytic cell hyperplasia observed in the intestine of L. infantum-infected dogs suggests that these cells may be involved in the cell-mediated immune response for parasite elimination.(AU)

A leishmaniose visceral (LV) é uma doença causada pelo protozoário Leishmania infantum e pode causar uma reação inflamatória no trato gastrointestinal, entretanto o papel das células granulocíticas (neutrófilos, eosinófilos e mastócitos) no intestino de cães infectados não é totalmente compreendido. Neste estudo realizamos uma análise quantitativa dessas células na parede intestinal de cães com LV. Vinte cães foram distribuídos em três grupos: grupo 1 (G1, n=8), cães com LV e amastigotas de L. infantum no intestino; grupo 2 (G2, n=9), cães com LV, mas sem amastigotas intestinais; e grupo 3 (G3, n=3), não infectados (grupo controle). Células granulocíticas foram contadas na unidade cripta-vilo (mucosa), submucosa e camada muscular da mucosa intestinal. Observamos hiperplasia dessas células na parede intestinal de cães do G2, seguidas das G1 em relação ao G3 (p0,05). No G1, houve uma correlação inversa baixa entre a carga parasitária do intestino delgado e a contagem de granulócitos (r= -0,1; p≤0,01). No entanto, nos cães do G2, os números de mastócitos e eosinófilos apresentaram correlação positiva (r=0,85; p≤0,01). A hiperplasia de células granulocíticas observada no intestino de cães infectados por L. infantum sugere que essas células podem estar envolvidas na resposta imune mediada por células para a eliminação do parasita.(AU)

Analysis of the accuracy of different laboratory methods for the diagnosis of intestinal parasites from stray and domiciled cats (Felis catus domesticus) in Goiânia, Goiás, Brazil

Cats are carriers of zoonotic agents to humans, including intestinal parasites. The purpose of this study was to analyze the accuracy of different laboratory methods for the diagnosis of intestinal parasites. Fecal samples were processed by the Willis, Sheather, Faust and Hoffman-Janer-Pons-Lutz (HJPL) methods. Accuracy analysis was performed determining the sensitivity, specificity, positive and negative predictive value and Kappa. A total of 149 fecal samples were collected, 65 from stray cats and 84 from domiciled cats. The prevalence of intestinal parasites in stray cats was 60% while in domiciled cats it was 17%. In the analysis of accuracy, the techniques that showed the greatest accuracy for Ancylostomids were Willis and Faust, for Cystoisospora spp. Sheather with Faust or HPJL, and Toxoplasma gondii/Hammondia hammondi the association between Willis and Faust. Therefore, for a reliable evaluation of the prevalence of intestinal parasites, at least two different techniques should be used in parasitological exams of feces.(AU)

Gatos são veiculadores de agentes zoonóticos para o homem, entre eles os parasitos intestinais. O objetivo foi analisar a acurácia de diferentes métodos laboratoriais para o diagnóstico de parasitos entéricos. As amostras de fezes foram processadas pelos métodos de Willis, Sheather, Faust e Hoffman-Janer-Pons-Lutz (HJPL). A análise de acurácia foi realizada determinando a sensibilidade, especificidade, valor preditivo positivo e negativo e índice Kappa. Foram coletadas 65 amostras de fezes de gatos errantes e 84 amostras de gatos domiciliados, total de 149 amostras. A prevalência de parasitos entéricos nos errantes foi 60% e nos domiciliados 17%. Na análise de acurácia as técnicas que associadas apresentaram maior acurácia para Ancilostomídeos foram Willis e Faust, para Cystoisospora spp. Sheather com Faust ou HPJL, e para Toxoplasma gondii/Hammondia hammondi a associaçمo entre Willis e Faust. Portanto, para uma avaliação fidedigna da prevalência de parasitos entéricos, deve-se usar no mínimo duas técnicas diferentes ao realizar os exames parasitológicos de fezes.(AU)

Occurrences of gastrointestinal parasites in fecal samples from domestic dogs in São Paulo, SP, Brazil / Ocorrência de parasitos gastrintestinais em amostras fecais de cães domiciliados em São Paulo, SP, Brasil

Abstract Occurrences of gastrointestinal parasites were assessed in fecal samples from 3,099 dogs in the metropolitan region of São Paulo, SP, that were treated at the Veterinary Hospital of the University of São Paulo Veterinary School. The samples were analyzed using the flotation and centrifugal sedimentation methods. The results were compared with those from previous studies (at different times). The frequency of each parasite was correlated with the dogs ages, breeds and gender, as well as the occurrences of diarrhea and the use of anthelmintics, by means of the chi-square or Fisher exact test. Partitioned chi-square tests were used to compare occurrences of each parasite and the times analyzed. Out of the total number of samples, 20.5% were positive and 16.1% (102/635) of these presented more than one genus of parasites. Ancylostoma spp. (7.1%) and Giardia spp. (5.5%) were the most frequent helminths and protozoa, respectively. Ancylostoma spp. was associated (p 0.05) with age (over one year), mixed breeds, sex (male) and no use of anthelmintics. Dogs under one year and mixed breeds were associated with occurrences of Toxocara canis; and younger dogs with Giardia spp., Cryptosporidium spp. and Cystoisospora spp. Giardia spp. were also associated with dogs with a defined breed (p 0.05). All the parasites analyzed presented lower incidence in the last period analyzed than in the previous periods.(AU)

Resumo A ocorrência de parasitos gastrintestinais foi estudada em amostras fecais de 3099 cães, da região metropolitana de São Paulo, SP, tratados no Hospital Veterinário da Faculdade de Medicina Veterinária da Universidade de São Paulo. As amostras foram analisadas por métodos de flutuação e centrífugo-sedimentação. Os resultados foram comparados com estudos prévios (diferentes períodos). Associação entre as frequências de cada parasito e idade, raça, sexo, ocorrência de diarreia e uso de anti-helmínticos foram analisadas pelo teste do qui-quadrado ou exato de Fisher. O qui-quadrado estratificado foi utilizado para comparar a ocorrência de cada parasito e os períodos analisados. Do total 20,5% das amostras eram positivas e 16,1% destas (102/635) apresentaram mais de um gênero de parasitos. Ancylostoma spp. (7,1%) e Giardia spp. (5,5%) foram os mais frequentes helminto e protozoário, respectivamente. Ancylostoma spp. foi associado (p 0,05) com idade (> 1 ano), animais sem raça definida, sexo (macho) e a não utilização de anti-helmínticos. Cães 1 ano e mestiços apresentaram associação com ocorrência de Toxocara canis e cães jovens com Giardia spp, Cryptosporidium spp. e Cystoisospora spp. Giardia spp. também apresentou associação com cães de raças definidas (p 0,05). Para todos os parasitas analisados a incidência diminuiu no último período analisado quando comparado aos anteriores.(AU)

Frequency of gastrointestinal parasites in cats seen at the University of São Paulo Veterinary Hospital, Brazil / Frequência de parasitos gastrintestinais em gatos atendidos no Hospital Veterinário da Universidade de São Paulo, Brasil

Abstract The frequency of gastrointestinal infections in 502 cats seen at the Veterinary Hospital of the University of São Paulo, SP, Brazil, between 2005 and 2014, was measured. The samples were analyzed using methods of flotation and sedimentation. The results were compared with those from studies published previously using fecal samples from the same hospital at different times. Associations between the frequency of positivity for each parasite and age, breed, sex, diarrhea and use of anthelmintic were investigated (chi-square or Fishers exact tests). A partitioned chi-square test was used to compare different periods. Cryptosporidium spp., Giardia spp., Cystoisospora spp. and Sarcocystis spp. were the most common parasites, followed by Toxocara cati and Ancylostoma spp. Cryptosporidium spp. presented higher frequency in young cats and Sarcocystis spp. with the presence of diarrhea (p 0.05). Results from this study with previous periods showed that the frequencies of Cryptosporidium spp., Cystoisospora spp. and T. cati were lower (p 0.05) than those observed in previous periods. The frequencies of Giardia spp. and Ancylostoma spp. were similar to the results found in the preceding period and lower than the values found for the other periods (p 0.05). The reasons for these changes should be investigated.(AU)

Resumo A frequência de infecções gastrintestinais foi avaliada em 502 gatos atendidos no Hospital Veterinário da Universidade de São Paulo, SP, Brasil, entre 2005 e 2014. As amostras foram analisadas utilizando-se os métodos de flutuação e sedimentação. Os resultados foram comparados com os de estudos previamente publicados com amostras de fezes oriundas do mesmo hospital, em momentos diferentes. As associações entre a frequência de positividade para cada parasito e idade, raça, sexo, ocorrência de diarreia e uso de anti-helmínticos foram investigadas (teste de qui-quadrado ou teste exato de Fisher). Um teste de qui-quadrado estratificado foi utilizado para comparar os diferentes períodos (1991-1995; 1996-1999; 2000-2004 e 2005-2014). Cryptosporidium spp., Giardia spp., Cystoisospora spp. e Sarcocystis spp. foram os parasitos mais comuns parasitos, seguidos por Toxocara cati e Ancylostoma spp. Cryptosporidium spp. apresentou maior frequência em gatos jovens e Sarcocystis spp. em animais com diarreia (p 0,05). Comparação das frequências obtidas neste estudo com os de períodos anteriores mostrou que as frequências de Cryptosporidium spp., Cystoisospora spp. e T. cati foram menores (p 0,05) que as observadas nos períodos anteriores. As frequências de Giardia spp. e Ancylostoma spp. foram semelhantes (p > 0,05) aos resultados encontrados no período de 2000 a 2004 e menores do que os valores encontrados para os outros períodos (p 0,05). Os motivos dessas alterações devem ser investigados.(AU)

Acompanhamento da carga parasitária intestinal e do manejo sanitário de um criatório de pacas / Monitoring of the intestinal tract parasite load and of the sanitary mangement at a paca breeding farm

Paca (Cuniculus paca Linnaeus, 1766) rearing has shown development in all Latin America countries.Fresh feces samples were collected from the soil and analyzed by Willis Mollay and Hoffmannstechniques, aiming at accompanying the sanitary management, determining the prevalence ofgastrointestinal parasites, and their respective load, of pacas raised in captivity, and evaluating parasitecontrol strategies, between the months of November/2012 and June/2013. A McMasters camerawas used for quantification. The reading was accomplished by optical microscopy with 25x and 40xlenses, which revealed 21,433 eggs per gram of feces (EPG), with an average of 2,679,12 (± 41.0)Strongyloides spp., and 3,325 EPG, with average of 415.6 (± 57.0) Trychuris spp. Besides, 482,101oocytes per gram of feces (OPG) were found, with an average of 60,263 (± 15.93) Eimeria spp., and51 larvae of Strongyloides spp., with an average of 6.3 (± 6.86) larvae. Two eggs of Hymenolepisdiminuta were identified in only one stall. An anthelminthic (albendazole 10%) and trimethopim associated with sulfadiazine were used to treat the disease. We concluded the great index of parasiticinfestation presented by the animals, in spite of the anthelminthic treatments, can be associated withthe rainfall rates observed, the physical conditions of the instalations, as well as the adequate cleaningand sanitization of the facilities.

A criação de pacas (Cuniculus paca Linnaeus, 1766) vem se desenvolvendo em toda AméricaLatina. Com o objetivo de acompanhar o manejo sanitário, determinar a prevalência de parasitasgastrointestinais de pacas criadas em cativeiro, sua carga parasitária e avaliar estratégias utilizadasem seus controles, entre os meses de novembro/2012 a junho/2013, amostras de fezes frescas nosolo foram coletadas e analisadas, utilizando-se as técnicas de Willis Mollay e Hoffmann. Paraquantificação, utilizou-se a câmera de McMaster. A leitura foi realizada em microscopia óptica, comobjetivas de 25x e 40x, as quais revelaram 21.433 ovos por grama de fezes (OPG), com média de2.679,12 (± 41,0) Strongyloides spp., e 3.325 OPG, com média de 415,6 (± 57,0) Trychuris spp.Também encontraram-se 482.101 oocistos por grama de fezes (OOPG), com média 60.263 (± 15,93)de Eimeria spp. e 51 larvas de Strongyloides spp., com média 6,3 (± 6,86) larvas. Em uma única baiaforam identificados dois ovos de Hymenolepis diminuta. Foi utilizado um anti-helmíntico (albendazol10%) e trimetropina associada à sulfadiazina, para combater a eimeriose. Conclui-se que o grandeíndice de infestação parasitária apresentado pelos animais, mesmo a despeito dos tratamentos antihelmínticosefetuados, pode estar associado com o índice pluviométrico apresentado, as condiçõesfísicas das instalações e a limpeza e higienização dos recintos de forma inadequada.

Evaluation of the accuracy of parasitological techniques for the diagnosis of intestinal parasites in cats / Avaliação da acurácia de técnicas parasitológicos para o diagnóstico de parasitos intestinais em gatos

The accuracy of the parasitological techniques of Willis, Hoffman-Pons-Janer or Lutz (HPLJ), Sheather and Faust was evaluated in fecal samples from stray cats caught by the Zoonosis Control Center in Goiânia, Goiás, Brazil. These four techniques were applied separately to analyze 154 fecal samples, and their accuracy was analyzed based on an evaluation of their sensitivity, specificity, positive and negative predictive values, and Kappa index, resulting in the selection of the Willis technique as the nominal gold standard. Of the 154 samples, 115 (74.68%) tested positive for intestinal parasites. The analysis of the frequency of positivity indicated that the HPLJ technique detected 86.1% of the positive samples and was the closest to the gold standard. The analysis of the accuracy of the techniques was evaluated using the most prevalent parasites. The Sheather technique showed the highest accuracy in the detection of Ancylostomatidae, while the Sheather and HPLJ techniques showed similar accuracies in the detection of Cystoisospora spp. when compared to the gold standard. Lastly, the Faust technique showed the highest accuracy in the detection of Toxoplasma gondii when compared to the gold standard. This study underscores the importance of combining parasitological techniques in the diagnosis of intestinal parasites in cats.(AU)

A avaliação da acurácia das técnicas parasitológicas de Willis, Hoffman-Pons-Janer ou Lutz (HPJL), Sheather e Faust foram realizadas em amostras fecais de gatos capturados pelo Centro de Controle de Zoonoses em Goiânia, Goiás. Essas quatro técnicas foram utilizadas separadamente para análise de 154 amostras fecais. A análise de acurácia foi empregada, avaliando-se a sensibilidade, especificidade, valor preditivo positivo, valor preditivo negativo e índice kappa, sendo a técnica de Willis eleita como padrão-ouro. Das amostras analisadas 74,68% (115/154) foram positivas para enteroparasitos. A análise de frequência de positividade demonstrou que a técnica HPJL detectou 86,1% dos positivos, aproximando-se do padrão-ouro. A avaliação da acurácia foi realizada pela análise dos parasitos mais prevalentes, sendo que, para Ancilostomídeos, a técnica de Sheather apresentou melhor acurácia; para Cystoisospora spp., as técnicas de Sheather e HPJL foram semelhantes e para Toxoplasma gondii, a técnica de Faust apresentou melhor acurácia comparada ao padrão ouro. Este estudo demonstra a importância da associação de técnicas parasitológicas para o diagnóstico de enteroparasitos em gatos.(AU)

Acompanhamento da carga parasitária intestinal e do manejo sanitário de um criatório de pacas / Monitoring of the intestinal tract parasite load and of the sanitary mangement at a paca breeding farm

Paca (Cuniculus paca Linnaeus, 1766) rearing has shown development in all Latin America countries.Fresh feces samples were collected from the soil and analyzed by Willis Mollay and Hoffmannstechniques, aiming at accompanying the sanitary management, determining the prevalence ofgastrointestinal parasites, and their respective load, of pacas raised in captivity, and evaluating parasitecontrol strategies, between the months of November/2012 and June/2013. A McMasters camerawas used for quantification. The reading was accomplished by optical microscopy with 25x and 40xlenses, which revealed 21,433 eggs per gram of feces (EPG), with an average of 2,679,12 (± 41.0)Strongyloides spp., and 3,325 EPG, with average of 415.6 (± 57.0) Trychuris spp. Besides, 482,101oocytes per gram of feces (OPG) were found, with an average of 60,263 (± 15.93) Eimeria spp., and51 larvae of Strongyloides spp., with an average of 6.3 (± 6.86) larvae. Two eggs of Hymenolepisdiminuta were identified in only one stall. An anthelminthic (albendazole 10%) and trimethopim associated with sulfadiazine were used to treat the disease. We concluded the great index of parasiticinfestation presented by the animals, in spite of the anthelminthic treatments, can be associated withthe rainfall rates observed, the physical conditions of the instalations, as well as the adequate cleaningand sanitization of the facilities.(AU)

A criação de pacas (Cuniculus paca Linnaeus, 1766) vem se desenvolvendo em toda AméricaLatina. Com o objetivo de acompanhar o manejo sanitário, determinar a prevalência de parasitasgastrointestinais de pacas criadas em cativeiro, sua carga parasitária e avaliar estratégias utilizadasem seus controles, entre os meses de novembro/2012 a junho/2013, amostras de fezes frescas nosolo foram coletadas e analisadas, utilizando-se as técnicas de Willis Mollay e Hoffmann. Paraquantificação, utilizou-se a câmera de McMaster. A leitura foi realizada em microscopia óptica, comobjetivas de 25x e 40x, as quais revelaram 21.433 ovos por grama de fezes (OPG), com média de2.679,12 (± 41,0) Strongyloides spp., e 3.325 OPG, com média de 415,6 (± 57,0) Trychuris spp.Também encontraram-se 482.101 oocistos por grama de fezes (OOPG), com média 60.263 (± 15,93)de Eimeria spp. e 51 larvas de Strongyloides spp., com média 6,3 (± 6,86) larvas. Em uma única baiaforam identificados dois ovos de Hymenolepis diminuta. Foi utilizado um anti-helmíntico (albendazol10%) e trimetropina associada à sulfadiazina, para combater a eimeriose. Conclui-se que o grandeíndice de infestação parasitária apresentado pelos animais, mesmo a despeito dos tratamentos antihelmínticosefetuados, pode estar associado com o índice pluviométrico apresentado, as condiçõesfísicas das instalações e a limpeza e higienização dos recintos de forma inadequada.(AU)

Pathological and parasitological characterization of infection by trematodes (Paramphistomatidae) in the large intestine of capybaras / Caracterização patológica e parasitológica da infecção por trematódeos (Paramphistomatidae) no intestino grosso de capivaras

Gross and histological lesions caused by an intestinal parasite were described in three capybaras. The parasites presented a mean length of 14 mm and width of 7 mm, were round to oval or piriform, reddish and pedunculated, and adhered strongly to the mucosa of the large intestine. The intestinal mucosa at the parasite attachment site presented loss of surface epithelium and most glands, with replacement by fibrovascular proliferation that protruded from the mucosa and was involuted by the ventral sucker of the parasite. The lamina propria presented cellular debris, eosinophils, macrophages and plasma cells. The morphological characteristics, observed using serial histological sections, made it possible to classify the parasite as a trematode (Paramphistomatidae), compatible with Taxorchis schistocotyle. One capybara also harbored many ciliated protozoa in the large intestine (at the site of attachment of the parasite) and inside the caeca of the trematodes. In conclusion, this study described a multifocal necrotizing colitis associated with T. schistocotyle parasitism in capybaras.(AU)

Lesões macroscópicas e histológicas causadas por um parasita intestinal foram descritas em três capivaras. Os parasitas apresentaram média de 14 mm de comprimento e 7 mm de largura, eram de circulares a ovais ou piriformes, avermelhados, pedunculados e estavam fortemente aderidos à mucosa do intestino grosso. A mucosa intestinal, em que os parasitas estavam aderidos, apresentou perda do epitélio e da maioria das glândulas, sendo substituídos por proliferação fibrovascular que se projetava a partir da mucosa e era envolvida pela ventosa ventral do parasita. A lâmina própria apresentou restos celulares, eosinófilos, macrófagos e plasmócitos. As características morfológicas, utilizando cortes histológicos seriados, proporcionaram a classificação do parasita como um trematoda Paramphistomatidae, compatível com Taxorchis schistocotyle. Uma capivara continha também numerosos protozoários ciliados no intestino grosso (no local de fixação do parasita) e no lúmen do ceco desses parasitos. Em síntese, este estudo demonstrou a ocorrência de colite necrótica associada ao parasitismo por T. schistocotyle em capivaras.(AU)

First record of intestinal parasites in a wild population of jaguar in the Brazilian Atlantic Forest / Primeiros registros de parasitos intestinais em uma população silvestre de onça-pintada na Mata Atlântica Brasileira

Small and isolated wildlife populations may be more susceptible to disease, which makes illness an important issue to investigate regarding the conservation of large carnivores. Here, we present the results of the first investigation of intestinal parasites in one of the last remaining populations of jaguars in the Brazilian Atlantic Forest. We studied parasites from fecal samples using three different techniques for parasitological examination: floatation in saturated sodium chloride solution, sedimentation and formalin-ether centrifugation. Intestinal parasites were detected in 70% of the analyzed samples, and seven taxa (mean = 3.7 taxa/sample) were identified. All the groups of parasites that were identified have been recorded in previous jaguar studies. However, the records of Class Trematoda and nematodes Trichuridae are the first evidence of these groups of worms in free-ranging jaguars in Brazil. Although our results do not provide conclusive evidence on the health of this jaguar population, given its very small size (approximately 20 animals) we stress the need to properly understand the dynamics of disease in this wild population and to evaluate the risk of contracting new diseases from domestic species inhabiting the neighboring areas. These represent imperative actions for the successful conservation of this threatened population of jaguar.

Populações pequenas e isoladas são mais suscetíveis a doenças, o que torna a investigação de enfermidades uma questão importante para a conservação de grandes carnívoros. O presente estudo apresenta os resultados da primeira investigação de parasitos intestinais em uma das últimas populações remanescentes de onça-pintada na Mata Atlântica brasileira. Os parasitos foram obtidos a partir de amostras fecais, sendo utilizadas três técnicas para exame parasitológico: flutuação em solução saturada de cloreto de sódio (Método de Willis), sedimentação (Método de HPJ) e centrifugação com formol-éter. Parasitos intestinais foram detectados em 70% das amostras analisadas, tendo sido identificados sete táxons (média = 3,7 taxa/amostra). Todos os grupos de parasitos identificados foram mencionados em estudos anteriores realizados com onças-pintadas. Entretanto, os registros de Trematoda e nematoides Trichuridae aqui obtidos representam a primeira evidência desses grupos de vermes em onças-pintadas de vida livre no Brasil. Embora os resultados obtidos não sejam conclusivos quanto à saúde da população estudada, em virtude do tamanho populacional reduzido (aproximadamente 20 indivíduos), recomenda-se a investigação da dinâmica de doenças, bem como a avaliação do risco de contração de novas doenças a partir do contato com animais domésticos provenientes do entorno da área estudada. Essas investigações são fundamentais para a conservação dessa população ameaçada de onças-pintadas.

Prevalência de enteroparasitas em crianças atendidas em unidades básicas de saúde em uma cidade do sul do Brasil / Prevalence of enteroparasites in children attended at basic health unities in a Brazilian southern city

As helmintoses e protozooses intestinais constituem sério problema de saúde pública nos países em desenvolvimento. Este estudo analisou a prevalência de parasitas intestinais em crianças pré-escolares atendidas em Unidades Básicas de Saúde (UBS) na cidade do Rio Grande, Rio Grande do Sul, Brasil.Foram examinadas amostras de fezes de 144 crianças, no período de outubro de 2009 a março de 2010.A prevalência de parasitas patogênicos foi de 17,4 %, em que foram detectados ovos dos nematoides Ascaris lumbricoides (11,1 %) e Trichuris trichiura (6,3 %), e cistos do protozoário Giardia lamblia (4,9 %).Foram também identificados cistos de protozoários considerados não patogênicos, como Entamoeba coli, Endolimax nana e Enteromonas hominis, em 28,5 % das crianças. Em relação às prevalências nas UBS, as positividades foram de 36,4 % na UBS-1, 11,1 % na UBS-3, 14,8 % na UBS-4, 8 % na UBS-5 e 19,2 % naUBS-6. Na UBS-2 não foi detectada positividade nas amostras de fezes analisadas. A prevalência de parasitas patogênicos registrada na população estudada sugere a ocorrência de prováveis condições de reinfecção e a necessidade de implementar medidas de saneamento básico e de programas que possibilitem a melhoria da condição de vida dessas crianças.(AU)

Helminthes and enteric protozoa are serious problem of public health in developing countries. This studyanalyzed the prevalence of intestinal parasites in preschool children attend at basic health unities (BHS) in the city of Rio Grande, Rio Grande do Sul, Brazil. Stool samples collected from 144 children were analyzed, from October 2009 to March 2010. The observed prevalence rate for enteroparasites was 17.4 %, including eggs of nematodes Ascaris lumbricoides (11.1 %) and Trichuris trichiura (6.3 %), and cysts of protozoan Giardia lamblia (4.9 %). Also, cysts of protozoa considered as non-pathogenic, such as Entamoeba coli,Endolimax nana and Enteromonas hominis were found in 28.5 % of children. Regarding to the BHSs prevalence, in BHS-1 was detected a positivity of 36.4 %, 11.1 % in BHS-3, 14.8 % in BHS-4, 8 % in BHS-5 and 19.2 % in BHS-6. No positivity was detected in the stool samples from BHS-2. The prevalence of intestinal parasites registered in the studied population suggests the occurrence of probable conditions for re-infection, and the need to implement the basic sanitation procedures and programs which will provide an improvement in the life quality of these children.(AU)