Resumo

Pure breeds are important due to the fact that they adapt well to poor husbandry conditions. However, gene expression of digestive enzymes and nutrient transporters of pure breeds and layer hybrids have not been studied yet. Therefore, this study was directed to detect the gene expression of digestive enzymes and nutrient transporters in the yolk sac membrane and small intestine of the embryos in layer hybrid and pure breeds. A total of 354 hatching eggs were collected from 29 wk old Denizli, Gerze and Lohman White (LW) breeder flocks. Twelve eggs from each genotype were selected at embryonic day 19 (E19) and day 21 (E21). APN, SI, PepT1, EAAT3, CAT1, B0AT, SGLT1 and GLUT5 mRNA expressions were evaluated in the yolk sac membrane (YSM) and small intestine of the embryos from different genotypes. Expressions of APN and EAAT3 in the small intestine of Denizli embryo were upregulated from E19 to E21. B0AT, PepT1 and SGLT1 expressions were upregulated in the small intestine of pure breed and layer hybrid embryos with increasing embryonic age. SI expression in the small intestine of the LW embryos was upregulated from E19 to E21. APN, B0AT and EAAT3 expressions in the YSM of Denizli embryos were dowregulated from E19 to E21. EAAT3 and SGLT1 expressions in the YSM of Gerze embryos were upregulated at E21 and compared to E19. Taken together, our results indicate that genotype and embryonic age influenced the expression of digestive enzymes and nutrient transporter genes in the small intestine and YSM of embryos.

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During fertilization, spermatozoa interact with the zona pellucida (ZP) through the binding between the acrosome and proteins 2 and 3 (ZP2 and ZP3). The perivitelline membrane of chicken egg yolk is homologous to the mammalian ZP3, which allows the binding of sperm of several species. The aim of this study was to standardize and evaluate the efficiency of sperm-binding to the perivitelline membrane of chicken eggs as a functional method for canine semen evaluation. For this purpose, nine post-thaw sperm samples were used, which were divided into two aliquots: the first was kept in water bath at 37ºC (live sample) and the second was submitted to cold shock to induce cellular damage (dead sample). The two aliquots were mixed on five proportions, corresponding to 0%, 25%, 50%, 75%, and 100% of viable cells, and the binding test was performed by analyzing the number of spermatozoa bonded to the perivitelline membrane by means of computerized assessment of sperm motility (CASA) or conventional microscopy. Additionally, samples were submitted to sperm motility analysis, evaluation of plasmatic and acrosomal membrane integrity, and sperm mitochondrial activity. The sperm-binding test to the perivitelline membrane of chicken egg yolk was considered a feasible sperm analysis test for both fertilizing capacity and overall sperm attributes evaluation, mainly when the analysis is performed by a conventional microscope, which expands its practicality to the majority of canine reproduction laboratories.(AU)

Durante a fecundação, os espermatozoides interagem com a zona pelúcida (ZP) por meio da ligação entre o acrossomo e as proteínas 2 e 3 (ZP2 e ZP3). A membrana perivitelínica da gema de ovo de galinhas é homóloga à ZP3 de mamíferos, possibilitando a ligação espermática de diversas espécies. Este trabalho padronizou e avaliou a eficiência do teste de ligação espermática à membrana perivitelínica da gema de ovo de galinhas como avaliação funcional do sêmen de cães. Para tal, foram utilizadas nove amostras seminais previamente criopreservadas. Cada amostra foi dividida em duas alíquotas: a primeira foi mantida em banho-maria à 37ºC (vivos) e a segunda submetida a choque térmico com o intuito de induzir dano celular (mortos). As duas alíquotas foram misturadas, correspondendo a 0, 25, 50, 75 e 100% de células viáveis. As amostras foram avaliadas quanto ao número de espermatozoides ligados à membrana perivitelínica por meio da análise computadorizada da motilidade (CASA) ou microscopia convencional. Ademais, as amostras foram avaliadas quanto à motilidade espermática, integridade das membranas acrossomal e plasmática e atividade mitocondrial espermática. O teste de ligação espermática à membrana perivitelínica de ovos de galinha foi considerado um teste de análise seminal exequível tanto para avaliar a capacidade fecundante dos espermatozoides como atributos seminais gerais, especialmente quando realizado em microscopia convencional, expandindo sua praticidade para a maioria dos laboratórios de análise de sêmen canino.(AU)

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O objetivo deste trabalho foi observar a influência do campo magnético (CM) de baixa frequência na membrana do saco vitelínico (MSV) e no desenvolvimento do embrião de codornas japonesas (Coturnix japonica) em 72 horas de incubação. Ovos fertilizados foram expostos a nove horas consecutivas de CM, sendo um grupo a partir das 48 horas e o outro a partir das 63 horas de incubação. A quantificação da vascularização da MSV foi determinada pela obtenção da dimensão fractal por meio dos métodos de box-counting e de dimensão de informação, enquanto o peso corporal e o percentual de comprimento cefálico dos embriões foram utilizados como parâmetros de desenvolvimento embrionário. O CM não causou diferenças significativas na densidade vascular da MSV nem no desenvolvimento embrionário, quando comparados ao grupo controle...

The aim of this study was to observe the influence of the low frequency magnetic field (MF) on the yolk sac membrane (YSM) and embryonic development of Japanese quail (Coturnix japonica) in 72 hours of incubation. Fertilized eggs were exposed to 9 consecutive hours of MF, with a group from 48 hours and the second group from 63 hours of incubation. The evaluation of YSM vascularization was determined by the fractal dimensions obtained through box-counting method and information dimension, while body weight of the embryo and percentage of cephalic length were used as parameters for embryo development. The MF caused no significant differences in vessel density in the YSM, nor in the embryonic development considering the body weight and percentage cephalic length, when were compared to the control group...

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Com o presente estudo se verificou através do Teste de Ligação dos Espermatozoides à Membrana Perivitelina da Gema de Ovo a capacidade fecundante dessas células após o descongelamento e adição das soluções Ringer com Lactato, Citrato de Sódio 2,92% e TRIS. O sêmen dos animais foi coletado e realizado os procedimentos padrões de análise e criopreservação seminal. Após o descongelamento foi adicionado os diluentes Ringer com Lactato, Citrato de Sódio 2,92 % e Solução TRIS, os quais continham substâncias protetoras aos espermatozoides. Logo após, foram realizados os Testes de Ligação do Espermatozoide à Membrana Perivitelina da Gema de Ovo e Morfológico. Os parâmetros seminais do sêmen fresco ficaram de acordo com preconizado pela legislação vigente (CBRA,1998). A capacidade de ligação dos espermatozoides à membrana perivitelina da gema do ovo foi semelhante entre os tratamentos (P>0,05), mas foi observada correlação positiva entre a motilidade espermática e a capacidade de ligação (P<0,05). A diluição do sêmen criopreservado com soluções isoosmóticas após o descongelamento pode ser útil na manutenção da qualidade espermática e no aumento do volume existente a fim de otimizar a realização de testes e biotecnologias reprodutivas in vitro.

The present study was verified by testing for binding of sperm to the perivitelline membrane of the egg yolk fertilizing capacity of these cells after thawing and addition of Ringer Lactate, Sodium Citrate 2.92% and TRIS Solution. The semen of animals was collected and performed the standard procedures of analysis and cryopreservation seminal. After thawing was added the solutions Ringer Lactate, Sodium Citrate 2.92% and TRIS, which contained protective substances to sperm and performed the tests in vitro Sperm-Perivitelline Membrane egg Binding and Morphology. The seminal parameters of fresh semen were recommended according to current legislation. The binding capacity of the sperm membrane perivitelline egg yolk was similar between treatments(P>0,05), but there was a positive correlation between sperm motility and binding capacity (P<0,05). Thus, the dilution of semen cryopreserved with solutions isoosmóticas after thawing can be useful in maintaining the quality of sperm and increase existing volume to optimize the testing and reproductive biotechnologies in vitro.

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Verificou-se o efeito de diferentes fontes de ácidos graxos essenciais ômega-3 e ômega-6 sobre o perfil lipídico de codornas japonesas e sobre o crescimento vascular na membrana vitelina dos embriões de aves suplementadas com óleo de peixe, 2% e 4%, e óleo de soja, 2% e 4%, em relação à dieta-controle, sem suplementação lipídica. Foi usado o método enzimático com reação colorimétrica para estimar o perfil lipídico sérico de colesterol total, triglicerídeos e HDL das aves. A vascularização na membrana vitelina foi quantificada por meio da dimensão fractal, utilizando-se o método de box-counting. A concentração de colesterol dos grupos controle e tratados não diferiu entre si. Para o HDL, o grupo que recebeu maior proporção de óleo de peixe, 4%, diferiu dos outros grupos. Os níveis de triglicerídeos das codornas suplementadas com óleo de peixe foram superiores aos dos demais grupos. A dimensão fractal da vascularização da membrana vitelina dos embriões de codornas dos grupos que receberam 4% de óleo de peixe e 4% de óleo de soja foi significativamente menor que a dos demais grupos, indicando efeitos antiangiogênicos no processo de formação vascular.

The effect of different sources of omega-3 and omega-6 essential fatty acids on serum lipid profile in Japanese quails and on vascular growth in the embryos vitelline membrane was verified. The birds were supplemented with fish oil, 2% and 4%, and soybean oil, 2% and 4%, and one control diet, without lipid supply. The enzymatic method with colorimetric reaction was used to estimate the profile of serum total cholesterol, triglycerides and HDL of the birds. Vitelline membrane vascularization was measured using the box-counting fractal dimension. The cholesterol concentration of the treated and control groups showed no difference. For HDL, the group treated with a higher proportion of fish oil, 4%, differed from other groups. The triglycerides levels of quails supplemented with fish oil were higher than the other groups. The fractal dimension of quail embryos vitelline membrane from the groups treated with 4% fish oil and 4% soybean oil was lower than the other groups, indicating antiangiogenic effects on the vascular formation process.

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This study describes the egg membrane structures of angelfish (Pterophyllum scalare), morpho-physiological changes during angelfish embryogenesis from activation to hatching under optimal conditions (28°C; pH 6.8), the developing larvae and fry, the effect of alkaline pH on the early developmental stages of the species, the relationship between food item size and fry survival. Egg membranes (thin, transparent, 1.67-2.18 µm thick) are covered by a sticky substance. The amber-coloured angelfish eggs were oval in shape, with average diameters of 1.436 and 1.171 mm, i.e., a mean volume of 1.033 ± 0.095 mm³. The survival rate of embryos and larvae kept in water with an elevated, slightly alkaline pH was very low: as few as 2% of the embryos survived, while in the batch kept in optimal water conditions very few eggs died. The first larvae hatched after 1288 h of embryonic development. The newly hatched larvae measured on average 2.60 ± 0.093 mm and had large (0.64 ± 0.077 mm³) yolk sacs. They attached themselves to the substrate with a secretion of thin, viscous threads, which was released from glands situated on the top of the head. The glands vanished on day 5. The 1-day-old larvae showed the first pigment cells on the body and the eyes of the 2-day-olds were already fully pigmented. Between day 4 and 5 of larval life, the larvae began feeding on live food. The 23-day-old fry looked like a miniature versions of the adults. Mortality of the angelfish larvae during their first days after hatching was higher in those fed brine shrimp (Artemia salina) nauplii than those fed protozoans and rotifers.

En este trabajo se ha descrito la estructura de las túnicas ovulares del escalar o pez ángel (Pterophyllum scalare), las modificaciones morfo-fisiológicas que transcurren durante la embriogénesis del escalar desde el momento de activización para el desove en condiciones ambientales óptimas (28ºC y pH 6,8) y, se han caracterizado las larvas y los alevines desarrollándose. Adicionalmente, se ha estudiado el efecto del pH básico del agua sobre los primeros estadios de desarrollo y la dependencia entre la cantidad de alimento y la supervivencia de los alevines. Las túnicas ovulares del escalar son finas (1,67-2,18 mm), transparentes, cubiertas de una sustancia viscosa. Los huevos de color ámbar tienen forma ovalada de diámetros medios 1,436 y 1,171 mm y de un volumen medio de 1,033 ± 0,095mm³. El porcentaje de supervivencia de embriones y de larvas en agua con pH aumentado, ligeramente básico, fue muy bajo, ya que sólo el 2% de los embriones sobrevivió, mientras que en agua de parámetros óptimos sólo algunos huevos palidecieron. Las larvas recién salidas del huevo medían 2,60 ± 0,093 mm por término medio y poseían grandes (0,64 ± 0,077 mm³) sacos vitelinos. Se han adherido al substrato mediante una secreción en forma de filamentos finos y viscosos. Esta secreción se ha desprendido de las glándulas ubicadas en la cumbre de la cabeza. Las glándulas desaparecieron al 5º día de vida de las larvas. Las larvas de un día poseían ya las primeras células pigmentarias en el cuerpo, los ojos de las larvas de dos días estaban pigmentadas plenamente. Entre el 4º y 5º día de vida las larvas empezaron a tomar alimento. Las larvas de 23 días se parecían a una versión miniaturizada de los adultos. La mortalidad de las larvas del escalar alimentadas durante los primeros días a partir del desove con larvas de artemia salina (Artemia salina) fue mayor que la de las alimentadas con protozoarios y rotíferos.

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Egg- and meat-type quails were reared in groups of different sizes with a fixed female-to-male ratio of 2 to 1 and an area of 158 cm2 per bird. The aim was to investigate the influence of group size on quail production and reproductive variables. To this end, 360 quails (180 meat and 180 egg-type quails) were assigned in a completely randomized experimental design to one of three treatments with ten replicates each. The treatments consisted of groups with nine, six, or three quails per cage. Birds were observed for three cycles of 14 days. Daily feed intake and feed conversion ratio were influenced (p < 0.05) by group size in both types of quails. Quail type influenced (p < 0.05) daily feed intake, feed conversion, and egg weight due to the typical differences between meat and egg-type birds. Despite the observed differences in production parameters, the mean values observed were typical of meat- and egg-type quails. The number of hydrolysis points (holes) per mm2 on the vitelline membrane on the germinal disc area was higher in meat quails (2.89 ± 0.21) than in egg quails (2.15 ± 0.13). This parameter was not influenced by the number of birds per cage, which suggests that the number of males inside the cage did not modify the spermatozoa pool inside the female oviduct. We concluded that a ratio of two females per male in cages with three, six, and nine birds/cage is recommended, as no deleterious effect on quail reproduction was observed.

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Diversos estudos indicam que touros europeus (Bos taurus) apresentam uma maior susceptibilidade ao estresse térmico com um consequentemente aumento do estresse oxidativo. Este, por sua vez, leva a uma diminuição na qualidade espermática. O espermatozoide possui, fisiologicamente, uma grande quantidade de ácidos graxos poli-insaturados (PUFAs) em sua membrana. As ligações duplas entre carbonos desses PUFAs confere a membrana plasmática uma maior fluidez, necessária aos processos fisiológicos do espermatozoide como motilidade e fertilização. No entanto essas ligações são mais facilmente oxidadas e, portanto, mais susceptíveis a peroxidação lipídica. Sendo assim, a suplementação com PUFAs promoveria uma melhoria na qualidade espermática, porém, tornaria o espermatozoide ainda mais susceptível à peroxidação lipídica. A vitamina E é um antioxidante chave na prevenção do estresse oxidativo através da interceptação do radical hidroxila, protegendo os PUFAs da membrana espermática contra a peroxidação lipídica. Portanto, uma alternativa para melhorar a qualidade espermática de touros europeus submetidos ao estresse térmico, seria a suplementação com PUFAs associada a um tratamento com vitamina E para prevenir um possível efeito deletério oxidativo desses ácidos graxos. Estudos sugerem uma importante relação entre os testes convencionais de avaliação de sêmen e fertilidade. No entanto, a limitação destes testes também tem sido reconhecida, principalmente em casos de infertilidade idiopática. Estudos demonstram que os testes funcionais de avaliação do sêmen, podem ser uma alternativa importante para a avaliação da capacidade fecundante de uma determinada amostra seminal. [...] No entanto, a associação entre estes tratamentos não foi eficiente para melhorar a qualidade espermática assim como a capacidade fecundante avaliada através do teste de ligação espermática em membrana perivitelínica de ovos de galinha. (AU)

Several studies suggest a high susceptibility of European bulls (Bos taurus) to the heat stress, which will lead to an increase on oxidative stress and consequent impairment on sperm viability. Sperm membranes are rich in poly-unsaturated fatty acids (PUFAs). The carbon-carbon double bounds (insaturations) that characterize these PUFAs confer the necessary fluidity to the sperm membrane, essential to motility and fecundation capacity. However, these insaturations are more unstable and, therefore, more susceptible to the lipid peroxidation (i.e., attack of reactive oxygen species to the lipids). Hence, PUFA supplementation would improve certain sperm characteristics but increase the already high susceptibility to the oxidative stress. Vitamin E is a key antioxidante on oxidative stress prevention by intercepting hydroxyl radical and protecting sperm membrane PUFAS against lipid peroxidation. Therefore, an alternative to improve sperm quality in heat stressed european bulls would be a PUFA supplementation associated to a Vitamin E therapy in order to avoid a possible deleterious oxidative effects of these fatty acids. Estudies suggest an important relationship between conventional tests for sperm evaluation and fertility. However, limitations have been also verified, especially in cases of idiopathic infertility. Thus, tests to evaluate sperm functionality may be an interesting alternative to assess fecundation capacity of semen samples. The binding of sperm to the zona pellucida occurs initially by the interaction between acrosomal receptors and oocyte proteins ZP3 and ZP2. The perivitelline membrane of chicken eggs present homologies to zona pellucida proteins, which allows sperm from several species to bind to this membrane. [...] However, the association between both treatments were not efficient to improve sperm quality as well as the fecundation capacity as evaluated by the sperm binding test to the chicken perivitelline membrane. (AU)

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Diversos estudos indicam que touros europeus (Bos taurus) apresentam uma maior susceptibilidade ao estresse térmico com um consequentemente aumento do estresse oxidativo. Este, por sua vez, leva a uma diminuição na qualidade espermática. O espermatozoide possui, fisiologicamente, uma grande quantidade de ácidos graxos poli-insaturados (PUFAs) em sua membrana. As ligações duplas entre carbonos desses PUFAs confere a membrana plasmática uma maior fluidez, necessária aos processos fisiológicos do espermatozoide como motilidade e fertilização. No entanto essas ligações são mais facilmente oxidadas e, portanto, mais susceptíveis a peroxidação lipídica. Sendo assim, a suplementação com PUFAs promoveria uma melhoria na qualidade espermática, porém, tornaria o espermatozoide ainda mais susceptível à peroxidação lipídica. A vitamina E é um antioxidante chave na prevenção do estresse oxidativo através da interceptação do radical hidroxila, protegendo os PUFAs da membrana espermática contra a peroxidação lipídica. Portanto, uma alternativa para melhorar a qualidade espermática de touros europeus submetidos ao estresse térmico, seria a suplementação com PUFAs associada a um tratamento com vitamina E para prevenir um possível efeito deletério oxidativo desses ácidos graxos. Estudos sugerem uma importante relação entre os testes convencionais de avaliação de sêmen e fertilidade. No entanto, a limitação destes testes também tem sido reconhecida, principalmente em casos de infertilidade idiopática. Estudos demonstram que os testes funcionais de avaliação do sêmen, podem ser uma alternativa importante para a avaliação da capacidade fecundante de uma determinada amostra seminal. [...] No entanto, a associação entre estes tratamentos não foi eficiente para melhorar a qualidade espermática assim como a capacidade fecundante avaliada através do teste de ligação espermática em membrana perivitelínica de ovos de galinha.

Several studies suggest a high susceptibility of European bulls (Bos taurus) to the heat stress, which will lead to an increase on oxidative stress and consequent impairment on sperm viability. Sperm membranes are rich in poly-unsaturated fatty acids (PUFAs). The carbon-carbon double bounds (insaturations) that characterize these PUFAs confer the necessary fluidity to the sperm membrane, essential to motility and fecundation capacity. However, these insaturations are more unstable and, therefore, more susceptible to the lipid peroxidation (i.e., attack of reactive oxygen species to the lipids). Hence, PUFA supplementation would improve certain sperm characteristics but increase the already high susceptibility to the oxidative stress. Vitamin E is a key antioxidante on oxidative stress prevention by intercepting hydroxyl radical and protecting sperm membrane PUFAS against lipid peroxidation. Therefore, an alternative to improve sperm quality in heat stressed european bulls would be a PUFA supplementation associated to a Vitamin E therapy in order to avoid a possible deleterious oxidative effects of these fatty acids. Estudies suggest an important relationship between conventional tests for sperm evaluation and fertility. However, limitations have been also verified, especially in cases of idiopathic infertility. Thus, tests to evaluate sperm functionality may be an interesting alternative to assess fecundation capacity of semen samples. The binding of sperm to the zona pellucida occurs initially by the interaction between acrosomal receptors and oocyte proteins ZP3 and ZP2. The perivitelline membrane of chicken eggs present homologies to zona pellucida proteins, which allows sperm from several species to bind to this membrane. [...] However, the association between both treatments were not efficient to improve sperm quality as well as the fecundation capacity as evaluated by the sperm binding test to the chicken perivitelline membrane.