Cellulolytic activity of anaerobic facultative fungi from the digestive tract of sheep fed with banana leaf hay / Atividade celulolítica de fungos aeróbios facultativos do trato digestório de ovinos alimentados com feno da folha de bananeira

The addition of cellulolytic fungi, or their enzymes, in diets containing high levels of fiber are promising strategy for improving the performance. In this study, the aims were to select cellulolytic fungi from the digestive tract of sheep fed different concentrations of banana leaf hay. Thirty lambs raised in a feedlot were evaluated, distributed in a completely randomized design, with diets containing 0, 125, 250, 375, or 500 g/Kg of dry matter and six replications. Approximately 15 mL of ruminal fluid and swabs from the rectal ampulla were collected. The cultures were carried out in a medium containing microcrystalline cellulose (C medium). The mycelial fungi isolates were identified through the microculture technique. Among the fungi from the ruminal fluid, 23 isolates corresponded to the genus Aspergillus and three to Paecilomyces spp. Among the isolates from the rectal ampulla, seven were A. spp., and three were P. spp. The A. genus predominated among the isolates from both evaluated sites (p <0.05). Fragments of these fungi were inoculated in triplicate in medium C at 37 °C and the cellulolytic activity index (CAI) was determined after 24, 48, and 72 hours of incubation. There was no difference in the CAI of Aspergillus spp. from animals fed different diets or of different evaluated sites (P > 0.05). However, 22 isolates of Aspergillus spp. and three of Paecilomyces spp. showed a CAI > 1, indicating biotechnological potential for cellulase production. These selected isolates could be selected for the elaboration of microbial additives in ruminant diets.(AU)

A adição de fungos celulolíticos, ou suas enzimas, em dietas contendo elevados teores de fibras são estratégias pro-missoras para melhorar o desempenho. Neste estudo os objetivos foram selecionar fungos celulolíticos do trato digestório de ovinos alimentados com diferentes concentrações do feno da folha da bananeira (FBH). Foram avaliados 30 borregos criados em sistema intensivo, distribuídos em delineamento inteiramente ao acaso, com cinco dietas contendo 0, 125, 250, 375 ou 500 g/KG de matéria seca em seis repetições. Foram coletados aproximadamente 15 mL de fluido ruminal e swabs da ampola retal. Os cultivos foram realizados em meio de cultura contendo celulose microcristalina (meio C). Os fungos micelianos foram identificados após a técnica de microcultivo. Entre os fungos provenientes do fluido ruminal, 23 isolados corresponderam ao gênero Aspergillus e três a Paecilomyces spp.. Foram identificados nas fezes dos animais sete Aspergillus spp. e três Paecilomyces spp.. O gênero Aspergillus predominou entre os isolados de ambos os sítios avaliados (p =0,013). Fragmentos desses fungos foram inoculados em triplicada em meio C a 37 °C e determinou-se o índice de atividade celulolítica(IAC) após 24, 48 e 72 horas de incubação. Não houve diferença entre CAI de isolados de Aspergillus spp. provenientes dos animais em diferentes dietas ou sítios avaliados (P > 0.05). Entretanto, 22 isolados de Aspergillus spp. e três de Paecilomyces spp. apresentaram IAC >1, indicando potencial biotecnológico para produção de celulases.(AU)

Bioassay on banana rhizome discs for selecting bacteria antagonistic to Fusarium oxysporum f. sp. cubense / Bioensaio em discos de rizomas de bananeiras para a seleção de bactérias antagonistas a Fusarium oxysporum f. sp. cubense

Detached plant organs are alternative materials to in vitro tests for selecting biocontrol agents. On the other hand, the use of scales to quantify injured areas can generate inconsistent results. Rhizospheric and endophytic bacteria were selected as growth inhibitors of Fusarium oxysporum f. sp. cubense (Foc), the causal agent of Panama disease of banana. For this, rhizome discs were treated with 200 µL of antagonist suspension (109 CFU mL−¹) and inoculated with the pathogen. The material was placed in plastic gerbox boxes and incubated in BOD at 25 °C for 12 days. Afterward, the area of rhizome discs (mm²) colonized by Foc was quantified by digital images. The assay was set up in a completely randomized design, with four replications and three discs per replication. The control consisted of untreated and inoculated discs. The results showed the efficiency of this method in selecting the biological control agent, as the 26 isolates were group into five different clusters, with isolates belonging to four of these groups (from '1' to '4') being able to reduce Foc colonization. Isolates 520EB, 993EB, and 531EB had the highest potential for inhibition, with areas of 343.3, 344.1, 364.8 mm², respectively, promoting inhibition ranging from 53 to 56 % of the colonized area compared to the control (782.6 mm²).

O emprego de órgãos vegetais destacados é uma alternativa aos testes in vitro para seleção de agentes de biocontrole. Por outro lado, o uso de escalas para quantificação de área lesionada pode gerar resultados inconsistentes. Bactérias rizosféricas e endofíticas foram selecionadas como inibidoras do crescimento de Fusarium oxysporum f. sp. cubense (Foc), agente causal do mal-do-Panamá da bananeira. Para tanto, discos de rizoma foram tratados com 200 µL de suspensão dos antagonistas (109 UFC mL-¹) e inoculados com patógeno. O material foi disposto em caixas plásticas tipo gerbox e incubado em BOD a 25 ºC, por doze dias. Após, a área dos discos de rizoma (mm²) colonizada por Foc dos discos foi quantificada por meio de imagens digitais. O ensaio foi montado em delineamento inteiramente casualizado, com quatro repetições e três discos por repetição. Discos não tratados e inoculados compuseram o controle. Com base nos resultados obtidos, foi possível verificar a eficiência do método na seleção de agente de controle biológico, uma vez que foi possível o agrupamento dos 26 isolados utilizados em cinco clústeres distintos, sendo que isolados pertencentes a quatro destes grupos (do '1' a '4') foram capazes de proporcionar a redução da colonização por Foc. Os isolados com maior potencial de inibição foram520EB, 993EB e 531EB com 343,3, 344,1, 364,8 mm2, respectivamente, promovendo inibição variando de 53 a 56 % da área colonizada quando comparados com ao controle (782,6 mm²).

Bioassay on banana rhizome discs for selecting bacteria antagonistic to Fusarium oxysporum f. sp. cubense / Bioensaio em discos de rizomas de bananeiras para a seleção de bactérias antagonistas a Fusarium oxysporum f. sp. cubense

Detached plant organs are alternative materials to in vitro tests for selecting biocontrol agents. On the other hand, the use of scales to quantify injured areas can generate inconsistent results. Rhizospheric and endophytic bacteria were selected as growth inhibitors of Fusarium oxysporum f. sp. cubense (Foc), the causal agent of Panama disease of banana. For this, rhizome discs were treated with 200 µL of antagonist suspension (109 CFU mL−¹) and inoculated with the pathogen. The material was placed in plastic gerbox boxes and incubated in BOD at 25 °C for 12 days. Afterward, the area of rhizome discs (mm²) colonized by Foc was quantified by digital images. The assay was set up in a completely randomized design, with four replications and three discs per replication. The control consisted of untreated and inoculated discs. The results showed the efficiency of this method in selecting the biological control agent, as the 26 isolates were group into five different clusters, with isolates belonging to four of these groups (from '1' to '4') being able to reduce Foc colonization. Isolates 520EB, 993EB, and 531EB had the highest potential for inhibition, with areas of 343.3, 344.1, 364.8 mm², respectively, promoting inhibition ranging from 53 to 56 % of the colonized area compared to the control (782.6 mm²).(AU)

O emprego de órgãos vegetais destacados é uma alternativa aos testes in vitro para seleção de agentes de biocontrole. Por outro lado, o uso de escalas para quantificação de área lesionada pode gerar resultados inconsistentes. Bactérias rizosféricas e endofíticas foram selecionadas como inibidoras do crescimento de Fusarium oxysporum f. sp. cubense (Foc), agente causal do mal-do-Panamá da bananeira. Para tanto, discos de rizoma foram tratados com 200 µL de suspensão dos antagonistas (109 UFC mL-¹) e inoculados com patógeno. O material foi disposto em caixas plásticas tipo gerbox e incubado em BOD a 25 ºC, por doze dias. Após, a área dos discos de rizoma (mm²) colonizada por Foc dos discos foi quantificada por meio de imagens digitais. O ensaio foi montado em delineamento inteiramente casualizado, com quatro repetições e três discos por repetição. Discos não tratados e inoculados compuseram o controle. Com base nos resultados obtidos, foi possível verificar a eficiência do método na seleção de agente de controle biológico, uma vez que foi possível o agrupamento dos 26 isolados utilizados em cinco clústeres distintos, sendo que isolados pertencentes a quatro destes grupos (do '1' a '4') foram capazes de proporcionar a redução da colonização por Foc. Os isolados com maior potencial de inibição foram520EB, 993EB e 531EB com 343,3, 344,1, 364,8 mm2, respectivamente, promovendo inibição variando de 53 a 56 % da área colonizada quando comparados com ao controle (782,6 mm²).(AU)

Banana fertigation with treated sanitary wastewater: postharvest and microbiological quality / Fertirrigação da bananeira com água residuária sanitária tratada: qualidade pós-colheita e microbiológica

Sewage may serve as a source of water and nutrients for plants. In this study, the effects of fertigation with treated sanitary wastewater from Janaúba Sewage Treatment Plant were evaluated on the postharvest and microbiological quality of ‘Prata-An㒠banana. A randomized block experimental design was used. Four concentrations of wastewater were tested (70, 130, 170, and 200% of 150 kg ha-1 sodium). A wastewater-free control treatment was used for comparison. Two crop cycles were assessed for postharvest and microbiological quality. The parameters measured included total soluble solids, titratable acidity, total soluble solids/titratable acidity ratio, pH, total coliforms, and fecal coliforms on both the peel and the pulp. In the first crop cycle, both soluble solids and fruit pulp pH decreased as wastewater level increased up to a maximum of 141.5%. These correlations were not observed in the second cycle. Wastewater management did not affect the titratable acidity of the soluble solids. The agricultural application of treated sanitary wastewater provided banana fruits with a microbiological profile similar to that obtained with the control (pure water) and with mineral fertilizers. A microbial balance is necessary to maintain the nutritional status of the banana crop.

A utilização de água residuária proveniente do tratamento de esgoto, como fonte hídrica e nutricional para as plantas, é uma alternativa para racionalizar o aproveitamento do recurso natural na agricultura. O objetivo desse trabalho foi avaliar os efeitos da aplicação da água residuária sanitária de tratamento secundário da Estação de Tratamento de Esgoto de Janaúba – MG sobre a qualidade pós-colheita e microbiológica da bananeira ‘Prata-Anã’. O experimento foi conduzido no delineamento de blocos casualizados. As doses de água residuária testadas foram equivalentes a 70, 130, 170 e 200% do limite máximo de 150 kg ha-1 sódio que pode ser aportado ao solo. Para efeito de comparação foi conduzido também um tratamento testemunha, irrigado com água limpa. Durante dois ciclos produtivos da cultura determinaram-se os seguintes atributos pós-colheita da banana: sólidos solúveis totais, acidez total titulável, relação sólidos solúveis totais/acidez titulável e o pH. Para a análise microbiológica foram coletados frutos em cada ciclo produtivo da cultura, quando se quantificou a presença de coliformes totais e coliformes termotolerantes na casca e na polpa das bananas. No primeiro ciclo de produção da bananeira, o teor de sólidos solúveis dos frutos decresce com o aumento no aporte de água residuária sanitária tratada até o limite de 141,5%, havendo também redução do pH dos frutos, porém, tal fenômeno não é verificado no segundo ciclo. A relação sólidos solúveis:acidez titulável e a acidez titulável não são influenciadas pelo manejo com água residuária sanitária tratada. Considerando o grupo de microrganismos avaliados e tendo em vista a manutenção do equilíbrio do estado nutricional da cultura, o reúso agrícola da água residuária sanitária tratada permite a obtenção de frutos de banana com qualidade microbiológica semelhante àqueles obtidos pelo manejo com água limpa e fertilizantes minerais.

Banana fertigation with treated sanitary wastewater: postharvest and microbiological quality / Fertirrigação da bananeira com água residuária sanitária tratada: qualidade pós-colheita e microbiológica

Sewage may serve as a source of water and nutrients for plants. In this study, the effects of fertigation with treated sanitary wastewater from Janaúba Sewage Treatment Plant were evaluated on the postharvest and microbiological quality of ‘Prata-Anã banana. A randomized block experimental design was used. Four concentrations of wastewater were tested (70, 130, 170, and 200% of 150 kg ha-1 sodium). A wastewater-free control treatment was used for comparison. Two crop cycles were assessed for postharvest and microbiological quality. The parameters measured included total soluble solids, titratable acidity, total soluble solids/titratable acidity ratio, pH, total coliforms, and fecal coliforms on both the peel and the pulp. In the first crop cycle, both soluble solids and fruit pulp pH decreased as wastewater level increased up to a maximum of 141.5%. These correlations were not observed in the second cycle. Wastewater management did not affect the titratable acidity of the soluble solids. The agricultural application of treated sanitary wastewater provided banana fruits with a microbiological profile similar to that obtained with the control (pure water) and with mineral fertilizers. A microbial balance is necessary to maintain the nutritional status of the banana crop.(AU)

A utilização de água residuária proveniente do tratamento de esgoto, como fonte hídrica e nutricional para as plantas, é uma alternativa para racionalizar o aproveitamento do recurso natural na agricultura. O objetivo desse trabalho foi avaliar os efeitos da aplicação da água residuária sanitária de tratamento secundário da Estação de Tratamento de Esgoto de Janaúba MG sobre a qualidade pós-colheita e microbiológica da bananeira ‘Prata-Anã. O experimento foi conduzido no delineamento de blocos casualizados. As doses de água residuária testadas foram equivalentes a 70, 130, 170 e 200% do limite máximo de 150 kg ha-1 sódio que pode ser aportado ao solo. Para efeito de comparação foi conduzido também um tratamento testemunha, irrigado com água limpa. Durante dois ciclos produtivos da cultura determinaram-se os seguintes atributos pós-colheita da banana: sólidos solúveis totais, acidez total titulável, relação sólidos solúveis totais/acidez titulável e o pH. Para a análise microbiológica foram coletados frutos em cada ciclo produtivo da cultura, quando se quantificou a presença de coliformes totais e coliformes termotolerantes na casca e na polpa das bananas. No primeiro ciclo de produção da bananeira, o teor de sólidos solúveis dos frutos decresce com o aumento no aporte de água residuária sanitária tratada até o limite de 141,5%, havendo também redução do pH dos frutos, porém, tal fenômeno não é verificado no segundo ciclo. A relação sólidos solúveis:acidez titulável e a acidez titulável não são influenciadas pelo manejo com água residuária sanitária tratada. Considerando o grupo de microrganismos avaliados e tendo em vista a manutenção do equilíbrio do estado nutricional da cultura, o reúso agrícola da água residuária sanitária tratada permite a obtenção de frutos de banana com qualidade microbiológica semelhante àqueles obtidos pelo manejo com água limpa e fertilizantes minerais.(AU)

Production of plant cell wall degrading enzymes by monoculture and co-culture of Aspergillus niger and Aspergillus terreus under SSF of banana peels

Filamentous fungi are considered to be the most important group of microorganisms for the production of plant cell wall degrading enzymes (CWDE), in solid state fermentations. In this study, two fungal strains Aspergillus niger MS23 and Aspergillus terreus MS105 were screened for plant CWDE such as amylase, pectinase, xylanase and cellulases (β-glucosidase, endoglucanase and filterpaperase) using a novel substrate, Banana Peels (BP) for SSF process. This is the first study, to the best of our knowledge, to use BP as SSF substrate for plant CWDE production by co-culture of fungal strains. The titers of pectinase were significantly improved in co-culture compared to mono-culture. Furthermore, the enzyme preparations obtained from monoculture and co-culture were used to study the hydrolysis of BP along with some crude and purified substrates. It was observed that the enzymatic hydrolysis of different crude and purified substrates accomplished after 26 h of incubation, where pectin was maximally hydrolyzed by the enzyme preparations of mono and co-culture. Along with purified substrates, crude materials were also proved to be efficiently degraded by the cocktail of the CWDE. These results demonstrated that banana peels may be a potential substrate in solid-state fermentation for the production of plant cell wall degrading enzymes to be used for improving various biotechnological and industrial processes.

Chemical management in fungicide sensivity of Mycosphaerella fijiensis collected from banana fields in México

The chemical management of the black leaf streak disease in banana caused by Mycosphaerella fijiensis (Morelet) requires numerous applications of fungicides per year. However this has led to fungicide resistance in the field. The present study evaluated the activities of six fungicides against the mycelial growth by determination of EC50 values of strains collected from fields with different fungicide management programs: Rustic management (RM) without applications and Intensive management (IM) more than 25 fungicide application/year. Results showed a decreased sensitivity to all fungicides in isolates collected from IM. Means of EC50 values in mg L-1 for RM and IM were: 13.25 ± 18.24 and 51.58 ± 46.14 for azoxystrobin, 81.40 ± 56.50 and 1.8575 ± 2.11 for carbendazim, 1.225 ± 0.945 and 10.01 ± 8.55 for propiconazole, 220 ± 67.66 vs. 368 ± 62.76 for vinclozolin, 9.862 ± 3.24 and 54.5 ± 21.08 for fludioxonil, 49.2125 ± 34.11 and 112.25 ± 51.20 for mancozeb. A molecular analysis for β-tubulin revealed a mutation at codon 198 in these strains having an EC50 greater than 10 mg L-1 for carbendazim. Our data indicate a consistency between fungicide resistance and intensive chemical management in banana fields, however indicative values for resistance were also found in strains collected from rustic fields, suggesting that proximity among fields may be causing a fungus interchange, where rustic fields are breeding grounds for development of resistant strains. Urgent actions are required in order to avoid fungicide resistance in Mexican populations of M. fijiensis due to fungicide management practices.(AU)

Estabilidade físico-química e microbiológica de banana passa orgânica / Stability physical-chemical and microbiological of organic dehydrated banana

O objetivo do trabalho foi avaliar a estabilidade física, físico-química e microbiológica da banana passa orgânica das variedades Caipira, Pacovan Ken e Prata Anã, durante 180 dias de armazenamento, bem como ajustar as curvas de secagem. As bananas foram desidratadas em estufa de circulação de ar forçada a 65°C, até umidade final entre 20-25% (b.u.). A variedade Pacovan Ken atingiu a umidade final após 37h de desidratação. O valor da atividade de água, para as três variedades, manteve-se estável aos 180 dias e caracteriza o produto como de umidade intermediária. Não se observou, em nenhum tratamento, variação significativa dos parâmetros físico-químicos pela análise de variância. Houve escurecimento do produto nas três variedades, com perda significativa do brilho (L*) e da intensidade da cor amarela (b*) e aumento da intensidade da cor vermelha (a*) durante o armazenamento. Houve estabilidade microbiológica do produto, com baixa contagem de bolores e leveduras e ausência de Salmonella e coliformes totais a 35°C em todas as variedades, conforme Legislação vigente. A banana passa orgânica apresentou estabilidade comercial nos meses de estudo.(AU)

The objective of this study was to evaluate the physical, physico-chemical and microbiological stability of dried organic banana varieties Caipira, Pacovan Ken and Prata Anã, 180 days of storage, as well as adjust the drying curves . The bananas were dried in an oven with forced air circulation at 65 ° C until final humidity of 20-25 % ( wb). The variety Pacovan Ken reached the final moisture after 37h of dehydration . The value of water activity for the three varieties, remained stable at 180 days and features the product as intermediate moisture. Not observed in any treatment, significant variation of physico-chemical analysis of variance parameters. There darkening of the product in all three varieties, with a significant loss of brightness (L*) and the intensity of the yellow color (b*) and increased intensity of red color (a*) during storage. There was microbiological stability of the product, with low count of yeasts and molds and Salmonella and coliforms at 35°C in all varieties, according to current legislation. The dried organic banana trade showed stability in the months of study.(AU)

Influência de diferentes pré-tratamentos sobre a qualidade de banana nanica desidratada / Influence of different pretreatments on quality of dried banana nanica

Bananas desidratadas têm ampla utilização alimentícia e caracterizam-se por intenso escurecimento. O objetivo deste trabalho foi verificar a influência de diferentes tratamentos (branqueamento e adição de ácido cítrico) sobre a composição química e propriedades físicas, assim como a aceitação dos produtos desidratados a 70ºC em secador de cabine. Os resultados mostraram que somente a acidez titulável e o parâmetro de intensidade do vermelho “a” aumentaram com elevação da concentração de ácido cítrico, sendo as demais propriedades inalteradas. As análises sensoriais mostraram que houve diferenças significativas quanto à cor, sendo o uso de branqueamento inadequado. Demais atributos não foram afetados indicando que as condições utilizadas não foram suficientes para causar alteração significativa nos mesmos, podendo a banana ser processada sem pré-tratamento.(AU)

Dehydrated bananas are widelyused in foods and are characterizedby intense browning. The objective atthis study was to verify the influenceof different treatments (blanchingand the addition of citric acid) anthe chemical composition, physicalproperties and acceptance of productsdehydrated at 700C in a dryingchamber. The results showed that onlythe titratable acidity and the intensityof red parameter "a" increased withincrease in the citric acid concentration, the other properties remainingunaltered. The sensory results showedsignificant differences with respectto the color, the use of blanching being inadequate.The other attributeswere not affected indicating that theconditions used were not sufficientto cause significant alterations in theproduct and therefore banana couldbeprocessed without pre-treatment. (AU)

Desenvolvimento e avaliação microbiológica do molho condimentado da biomassa de banana verde / Development and evaluation of microbial biomass spicy sauce of green bananas

O Brasil é o segundo maior produtor de banana (Musa spp.) do mundo, onde 60 por cento da sua produção é desperdiçada, desde o campo até a comercialização. Por isso, estudamos uma forma de aproveitar industrialmente a banana no estágio de maturação verde, desenvolvendo um molho condimentado pastoso e pronto para o consumo, a partir da biomassa desta fruta. As bananas, da variedade casca verde, foram adquiridas no mercado do Pirajá, localizado em Juazeiro do Norte CE e destinadas a processamento, no Laboratório de Frutos e Hortaliças da Faculdade de Tecnologia CENTEC Cariri, com apoio da Fundação Cearense de Apoio à Pesquisa FUNCAP. As frutas passaram pelas etapas de: seleção, removendo algum fruto que estivesse estragado; pesagem, obtendo o rendimento de polpa, biomassa e molho; lavagem; aquecimento, facilitando o descasque;branqueamento químico, evitando escurecimento enzimático; trituração e homogeneização, obtendo-se abiomassa. Esta matéria-prima básica foi adicionada de temperos desidratados e conservantes, resultando num molho que depois de ter sido embalado, foi submetido posteriormente a um tratamento térmico à temperatura de 100°C por 10 minutos (método Hot Pack), sendo por fim, resfriado e armazenado em prateleiras, à temperatura ambiente. Por seis meses o produto foi submetido a análises microbiológicas, com base na legislação vigente da Agência Nacional d Vigilância Sanitária ANVISA, na Resolução –m RDC n. 12 de 02 de janeiro de 2001. As análises serviram para avaliarmos as condições higiênico-sanitárias do processamento e armazenamento. Os resultados obtidos mostram que o produto está dentro dos padrões microbiológicos, indicando que as técnicas utilizadas foram eficientes, adequadas e seguiram as Boas Práticas de Fabricação BPF.(AU)

Brasil is the second biggest producer of banana (Musa spp.) in the world, which 60% of its production is wasterful, from the field to the commercialization. Therefore, we studied a form of taking advantage industrially of the banana in its green maturation stage, developing a seasoned pasty sauce andready for consumption, starting from the biomass of this fruit. The bananas of the "green pell" variety were acquired in the market Piraja, located in Juazeiro do Norte and destined to processing, in the Laboratory of Fruits and Vegetables of the Tecnoloogy College - CENTEC Cariri with support of theFUNCAP a Fundation of Research Support from Ceara. The fruits went by the stages of: selection, removing some fruits that was damaged; weighing, obtaining the revenue of the pulp, biomassand sauce; wash; heating, facilitating the peeling; chemical bleaching, avoiding enzymatic darkening; trituration and homogenization; being obtained the biomass. This basic raw material was added of dehydrated seasonines and consorvers, resulting in a sauce that after it being packed, it was submittedlater to a thermal treatment to the temperature of 1OO°Cforten minutes (Hot Pack method), being finallycooled and stored in shelves, to the ambient temperature. For six months the product was submitted to the microbiological analyses, whit base in the effective legislation of the National Agency of Sanity Vigilance (ANVISA), in the resolution - RDC # 12, of January 2, 2001. The analyses served for usto evaluate the hygienic-sanitary conditions of the processing and storage. The obtained results show that the product is within of the microbiological patterns. This indicates that the used techniques were efficient, adequated and they followed the Good Manufacture Practices - BPF. (AU)