Molecular detection of Toxoplasma gondii, Neospora caninum and Sarcocystis spp in tissues of Sus scrofa slaughtered in southern Brazil / Detecção molecular de Toxoplasma gondii, Neospora caninum e Sarcocystis spp. em tecidos de Sus scrofa abatidos no Sul do Brasil

The aim of this study was to determine the presence of deoxyribonucleic acid (DNA) from Toxoplasma gondii, Sarcocystis spp. and Neospora caninum, in tissues of wild boars slaughtered in southern Brazil. A total of 156 samples were collected from different organs of 25 wild boars, and DNA from at least one of the protozoa investigated was detected in 79 samples. To differentiate between infectious agents, restriction fragment length polymorphism was performed using the restriction enzymes DdeI and HpaII. For N. caninum, conventional PCR was performed with specific primers. The DNA of at least one of the studied pathogens was detected in each animal: 26.58% for T. gondii, 68.36% for Sarcocystis spp. and 5.06% for N. caninum. Coinfection between T. gondii and Sarcocystis spp. occurred in 14 animals, between T. gondii and N. caninum in only one male animal, between Sarcocystis spp. and N. caninum in a female, while co-infection with the three agents was equally observed in only one male animal. Considering the high frequency of detection and its zoonotic risk, especially T. gondii, it appears that wild boars can be potential sources of transmission of infectious agents and the adoption of monitoring measures in these populations should be prioritized.(AU)

O objetivo deste estudo foi determinar a presença de ácido desoxirribonucléico (DNA) de Toxoplasma gondii, Sarcocystis spp. e Neospora caninum, em tecidos de javalis abatidos no sul do Brasil. Foram coletadas 156 amostras de diferentes órgãos de 25 javalis, sendo detectado o DNA de pelo menos um dos protozoários pesquisados em 79 amostras. Para diferenciar entre os agentes infecciosos, o polimorfismo do comprimento do fragmento de restrição, foi realizado usando-se as enzimas de restrição DdeI e HpaII. Para N. caninum, a PCR convencional foi realizada com "primers" específicos. O DNA de pelo menos um dos patógenos estudados foi detectado em cada animal: 26,58% para T. gondii, 68,36% para Sarcocystis spp. e 5,06% para N. caninum. Coinfecção entre T. gondii e Sarcocystis spp. ocorreu em 14 animais; entre T. gondii e N. caninum em apenas um animal macho; entre Sarcocystis spp. e N. caninum em uma fêmea, enquanto a coinfecção com os três agentes foi observada igualmente em apenas um animal macho. Considerando-se a alta frequência de detecção e seu risco zoonótico, especialmente T. gondii, constata-se que os javalis podem ser potenciais fontes de transmissão de agentes infecciosos, e a adoção de medidas de monitoramento nessas populações devem ser priorizadas.(AU)

Prevalence of antibodies against Neospora spp. and Sarcocystis neurona in donkeys from northeastern Brazil / Prevalência de anticorpos contra Neospora spp e Sarcocystis neurona em jumentos do nordeste do Brazil

Sarcocystis neurona and Neospora hughesi are coccidian protozoa that can cause neurological illness in horses in America. In this study we report seroprevalence of Neospora spp. andS. neurona in sera of 333 donkeys from the northeastern region of Brazil. Antibodies to Neospora spp. were detected in 2% (7 donkeys) of 333 sera tested by the indirect fluorescent antibody test (IFAT) with a cut-off dilution of 1:40. Antibodies to S. neurona were found in 3% (10 donkeys) of the samples tested by IFAT (cut-off 50) and 21% (69 donkeys) by the direct agglutination test (SAT 50). The SAT and IFAT results for S. neurona showed a poor concordance (value of Kappa=0.051). This is the first report ofNeospora spp. antibodies in Brazilian donkeys and the first detection of antibodies against S. neurona in this animal species.(AU)

Sarcocystis neurona e Neospora hughesi são protozoários coccídios que infectam equídeos e são responsáveis por doenças neurológicas nessas espécies. Neste estudo, a soroprevalência de infecção porS. neurona e Neospora spp. foi determinada em amostras de 333 soros de jumentos da Região Nordeste do Brasil. Anticorpos contra Neospora spp. foram detectados em 2% (7 jumentos) dos 333 animais examinados pela reação de imunofluorescência indireta (RIFI), com ponto de corte de 40. Anticorpos contra S. neurona foram detectados em 3% (10 jumentos) das amostras pela RIFI (ponto de corte de 50) e em 21% (69 jumentos) pela técnica de aglutinação direta (SAT - ponto de corte de 50). SAT e RIFI, para diagnóstico de S. neurona, apresentaram uma baixa concordância (Kappa = 0,051). Essa é a primeira observação de anticorpos anti-N. caninum em jumentos brasileiros e a primeira detecção de anticorpos contra S. neurona nessa espécie.(AU)

Use of ELISA based on NcSRS2 of Neospora caninum expressed in Pichia pastoris for diagnosing neosporosis in sheep and dogs / Utilização de um ELISA baseado em NcSRS2 de Neospora caninum expressa em Pichia pastoris para diagnóstico de neosporose em ovinos e cães

Neosporosis is a disease caused by the protozoon Neospora caninum that leads to significant economic losses in many countries. In the present study, we report on use of the recombinant protein NcSRS2 of N. caninum expressed in Pichia pastoris in an indirect immunoenzymatic assay (ELISA) for diagnosing neosporosis infection in sheep and dogs. We observed that the ELISA test yielded specificity of 94.5% and sensitivity of 100% for sheep and specificity of 93.3% and sensitivity of 100% for dogs. We observed that the sensitivity was higher than shown by the indirect fluorescent antibody test, and this was confirmed by means of Western blot. The results from this study suggest that the recombinant protein expressed in P. pastoris is a suitable antigen for use in immunodiagnosis to detect N. caninum in two important species exposed to this parasitosis.(AU)

A neosporose é uma doença causada pelo protozoário Neospora caninum que leva a perdas econômicas importantes em muitos países. No presente estudo, é descrita a utilização da proteína recombinante NcSRS2 de N. caninum expressa em Pichia pastoris em um ensaio imunoenzimático indireto (ELISA) para o diagnóstico de infecção por Neospora em ovelhas e cães. Observou-se, que utilizando-se um ELISA, o teste produziu uma especificidade de 94,5% e uma sensibilidade de 100% para ovinos, e uma especificidade de 93,3% e sensibilidade de 100% para cães. Uma maior sensibilidade foi observada em relação à IFI que foi confirmada por Western blot. Os resultados deste estudo sugerem que a proteína recombinante expressa em P. pastoris é bom antígeno para ser utilizado no diagnóstico imunológico para detectar N. caninum em duas espécies importantes expostas a esta parasitose.(AU)