Brazilian donkeys (Equus asinus) have a low exposure to Neospora spp / Asininos (Equus asinus) brasileiros têm uma baixa exposição à Neospora spp

Donkeys (Equus asinus) are closely related to horses and are known to be infected by several equine pathogens. Neospora caninum and Neospora hughesi are protozoan parasites that infect horses, but they were not confirmed in donkeys up to this date. The aim of this study was to evaluate the exposure of donkeys (Equus asinus) to Neospora spp. using tachyzoites of N. caninum as antigen and employing two common serologic methods, IFAT and immunoblot. Sera from 500 donkeys were obtained from 30 municipalities in Bahia state and tested by IFAT. Two of 500 sera were positive for Neospora spp. by IFAT with antibody titers of 100, and recognized a 37kDa antigen in immunoblot. Approximately 22% of the samples showed strong apical reactions and/or incomplete fluorescence, what may cause confusion in the interpretation of IFAT. We concluded that Neospora spp. are possibly of minor importance for Brazilian donkeys. Future studies are necessary to prove that Neospora spp. can naturally infect donkeys.(AU)

Asininos (Equus asinus) são próximos filogeneticamente a equinos e podem ser infectados por vários patógenos de cavalos. Neospora caninum e Neospora hughesi são parasitos protozoários que infectam equinos, porém não foram confirmados em asininos até o momento. O objetivo deste estudo foi avaliar a exposição de asininos (Equus asinus) a Neospora spp., usando-se taquizoítos de N. caninum como antígeno e empregando-se duas técnicas sorológicas comuns para esta finalidade, reação de imunofluorescência indireta (RIFI) e immunoblot. Soros de 500 asininos, obtidos em 30 municípios no Estado da Bahia, foram testados por meio da RIFI. Dois dos 500 soros foram positivos para Neospora spp. pela RIFI com títulos de anticorpos de 100, e reconheceram um antígeno de 37kDa no immunoblot. Aproximadamente, 22% das amostras apresentaram fortes reações apicais e/ou fluorescência incompleta, o que pode causar confusão na interpretação da RIFI. Conclui-se que Neospora spp. são, possivelmente, de pouca importância para asininos brasileiros. Estudos posteriores são necessários para provar que Neospora spp. podem causar infecção natural em asininos.(AU)

Comparison of an ELISA assay for the detection of adhesive/invasive Neospora caninum tachyzoites / Comparação de um ensaio de ELISA para a detecção de taquizoítas adesivos/invasivos de Neospora caninum

Neospora caninum belongs to the phylum Apicomplexa, the causative agent of neosporosis, which leads to economic impacts on cattle production. A common feature among apicomplexan parasites is the invasive process driven mostly by the parasite. As a first evaluation of candidate molecules that play a possible role by interfering in this invasive process, the in vitro invasion assay is a fast and direct way to screen future agonists or antagonists. This work involved the development of a new cell culture ELISA and transient β-galactosidase activity applied to the semi-quantitative detection of N. caninum in Vero cell culture. Cell culture ELISA is based on histochemistry and immunology, resulting in a colorimetric reaction. The β-galactosidase activity was obtained by the transient transfection of the lacZ gene under control of RPS13 promoter of N. caninum. These methods were used to evaluate the effects of temperature (37°C and 85°C) on the invasion and adhesion of tachyzoites. The three tested methods (real time PCR, β-galactosidase activity and ELISA) showed a similar pattern, indicating that different methods may be complementary.

Neospora caninum, parasita do filo Apicomplexa, é causador da neosporose, doença responsável por perdas econômicas importantes na pecuária. Um fator comum entre os apicomplexas é o processo de invasão majoritariamente dirigido pelo parasita. Dentre as primeiras avaliações de moléculas candidatas, que possivelmente interferem no processo de invasão, o ensaio de invasão in vitro é um meio rápido e direto de selecionar futuros agonistas ou antagonistas. Este trabalho desenvolveu um novo ELISA baseado em cultura (Cell-culture ELISA) e um ensaio que mede a atividade transiente de β-galactosidase, aplicados para a detecção semiquantitativa de N. caninum em células Vero. Cell-culture ELISA é baseado em histoquímica e imunologia, resultando em uma reação colorimétrica. A atividade da β-galactosidase foi obtida pela transfecção transiente do gene LacZ sob controle do promotor RPS13 de N. caninum. Esses métodos avaliaram os efeitos da temperatura (37°C e 85°C) sobre a invasão e adesão. Os três métodos testados (real time PCR, atividade de β-galactosidase e ELISA) mostraram um padrão similar, indicando que diferentes métodos podem ser complementares. Adicionalmente, esse ELISA é adequado para aplicação em laboratórios carentes de uma complexa estrutura para métodos de detecção moleculares.

Estudo epidemiológico sobre as perdas reprodutivas em bovinos leiteiros: ocorrência de Neospora caninum, Brucella abortus, Herpesvírus bovino tipo-1 e Leptospira spp. Em uma propriedade do município de São Carlos-sp / Epidemiologic study on the reproductive losses in dairy cattle: occurrence of Neospora caninum, Brucella abortus, Bovine herpesvirus type-1 and Leptospira spp. In a propriety of São Carlos city

Este trabalho objetivou traçar o nível endêmico de perdas reprodutivas e determinar a positividade para quatro agentes infecciosos relacionados com problemas reprodutivos em um rebanho bovino leiteiro no município de São Carlos-SP. Foram coletadas amostras de soro sanguíneo de 142 animais em reprodução com idades acima de dois anos, dos quais 21,1% apresentaram casos de abortamentos ou natimortos em pelo menos uma gestação. Utilizaram-se os testes sorológicos de imunofluorescência indireta, teste do antígeno acidificado tamponado, virusneutralização e soroaglutinação microscópica, virusneutralizaçãopara detecção de anticorpos anti-Neospora caninum, anti-Brucella abortus, anti-Herpesvírus Bovino Tipo-1(BoHV-1) e anti-Leptospira spp, respectivamente. Os exames sorológicos realizados demonstraram que 28,9% dos animais apresentaram títulos superiores ou iguais a 100 de anticorpos anti-Neospora caninum. Os exames de virusneutralização demonstraram que 26,8% dos animais apresentaram títulos maiores ou iguais a 256 para anticorpos anti-BoHV-1. Apenas 7,7% dos animais estudados apresentaram títulos iguais ou superiores a 100 na soroaglutinação microscópica para diagnóstico de Leptospira spp. Não foram observadas reações positivas ao teste de antígeno acidificado tamponado para diagnóstico de brucelose bovina. O estudo realizado sugere a presença de BoHV-1, N. caninum e Leptospira spp em contato com os animais leiteiros da unidade experimental, podendo estar envolvidos na ocorrência de abortamentos e natimortos no rebanho. As perdas reprodutivas encontram-se de forma endêmica, implicando um possível comportamento crônico das infecções causadas por estes micro-organismos.

The aim of this work was draw an endemic level of reproductive losses and determine positivity for four infectious agents related to reproductive problems in dairy cattle on a property in São Carlos city. Blood serum samples were collected of 142 breeding animals more than two years old, from which 21.1% showed history of abortions or stillbirths in at least one pregnancy. Immunofluorescent antibody technique, tamponated acidified antigen test, serum neutralization technique and microscopic agglutination test, were used for detection of antibody anti-Neospora caninum, anti- Brucella abortus, anti-Bovine Herpesvirus Type-1 (BoHV-1) and anti-Leptospira spp , respectively. The serological tests carried out showed that 28.9% of the animals had titers greater than or equal to 100 of anti-Neospora caninum. Viral neutralization tests demonstrated that 26.8% of the animals had titers greater or equal to 256 for antibody anti-BoHV-1.Only 7.7% of the animals studied had titers equal to or greater than 100 in the microscopic agglutination test for Leptospira spp. There weren’t observed positive reactions to the tamponated acidified antigen test for diagnosis of bovine brucellosis. The study suggests the presence of BoHV-1, N. caninum and Leptospira spp in contact with dairy cattle property and could be involved in the occurrence of abortions and stillbirths in cattle. Reproductive losses are endemic and implies a possible behavior of chronic infections caused by these microorganisms.

Estudo epidemiológico sobre as perdas reprodutivas em bovinos leiteiros: ocorrência de Neospora caninum, Brucella abortus, Herpesvírus bovino tipo-1 e Leptospira spp. Em uma propriedade do município de São Carlos-sp / Epidemiologic study on the reproductive losses in dairy cattle: occurrence of Neospora caninum, Brucella abortus, Bovine herpesvirus type-1 and Leptospira spp. In a propriety of São Carlos city

Este trabalho objetivou traçar o nível endêmico de perdas reprodutivas e determinar a positividade para quatro agentes infecciosos relacionados com problemas reprodutivos em um rebanho bovino leiteiro no município de São Carlos-SP. Foram coletadas amostras de soro sanguíneo de 142 animais em reprodução com idades acima de dois anos, dos quais 21,1% apresentaram casos de abortamentos ou natimortos em pelo menos uma gestação. Utilizaram-se os testes sorológicos de imunofluorescência indireta, teste do antígeno acidificado tamponado, virusneutralização e soroaglutinação microscópica, virusneutralizaçãopara detecção de anticorpos anti-Neospora caninum, anti-Brucella abortus, anti-Herpesvírus Bovino Tipo-1(BoHV-1) e anti-Leptospira spp, respectivamente. Os exames sorológicos realizados demonstraram que 28,9% dos animais apresentaram títulos superiores ou iguais a 100 de anticorpos anti-Neospora caninum. Os exames de virusneutralização demonstraram que 26,8% dos animais apresentaram títulos maiores ou iguais a 256 para anticorpos anti-BoHV-1. Apenas 7,7% dos animais estudados apresentaram títulos iguais ou superiores a 100 na soroaglutinação microscópica para diagnóstico de Leptospira spp. Não foram observadas reações positivas ao teste de antígeno acidificado tamponado para diagnóstico de brucelose bovina. O estudo realizado sugere a presença de BoHV-1, N. caninum e Leptospira spp em contato com os animais leiteiros da unidade experimental, podendo estar envolvidos na ocorrência de abortamentos e natimortos no rebanho. As perdas reprodutivas encontram-se de forma endêmica, implicando um possível comportamento crônico das infecções causadas por estes micro-organismos.(AU)

The aim of this work was draw an endemic level of reproductive losses and determine positivity for four infectious agents related to reproductive problems in dairy cattle on a property in São Carlos city. Blood serum samples were collected of 142 breeding animals more than two years old, from which 21.1% showed history of abortions or stillbirths in at least one pregnancy. Immunofluorescent antibody technique, tamponated acidified antigen test, serum neutralization technique and microscopic agglutination test, were used for detection of antibody anti-Neospora caninum, anti- Brucella abortus, anti-Bovine Herpesvirus Type-1 (BoHV-1) and anti-Leptospira spp , respectively. The serological tests carried out showed that 28.9% of the animals had titers greater than or equal to 100 of anti-Neospora caninum. Viral neutralization tests demonstrated that 26.8% of the animals had titers greater or equal to 256 for antibody anti-BoHV-1.Only 7.7% of the animals studied had titers equal to or greater than 100 in the microscopic agglutination test for Leptospira spp. There werent observed positive reactions to the tamponated acidified antigen test for diagnosis of bovine brucellosis. The study suggests the presence of BoHV-1, N. caninum and Leptospira spp in contact with dairy cattle property and could be involved in the occurrence of abortions and stillbirths in cattle. Reproductive losses are endemic and implies a possible behavior of chronic infections caused by these microorganisms.(AU)