Distribution of 5-methylcytosine and 5-hydroxymethylcytosine in bovine fetal tissue of the placenta / Distribuição de 5-metilcitosina e 5-hidroximetilcitosina em placenta fetal bovina

5-methylcytosine (5-mC) and 5-hydroxymethylcytosine (5-hmC) are modified cytosines found in mammals that are involved in the regulation of gene expression. The aim of this study was to characterize the global patterns of 5-mC and 5-hmC of the fetal placenta of Nellore cattle as well as blood and sperm as controls. 5-mC and 5-hmC levels were determined using MethylFlash Methylated/Hydroxymethylated DNA Quantification Kit, respectively. Placenta tissues showed lower levels of 5-mC and 5-hmC compared to sperm. The male cotyledon showed higher levels of 5-hmC than the female. For the first time, the levels of 5-mC and 5-hmC in Bos taurus indicus were characterized, which may contribute to our understanding of the mechanisms of epigenetic regulation in the placenta. The presence of 5-hmC in somatic tissues suggest that 5-hmC has its own biological function and it is not only a byproduct from the oxidation of 5-mC. These results may be of interest in ARTs, especially in cloning in the diagnosis/prognosis of aberrant placentation and the viability of pregnancies.(AU)

5-metilcitosina (5-mC) e 5-hidroximetilcitosina (5-hmC) são citosinas modificadas encontradas nos mamíferos que estão envolvidas com a regulação da expressão gênica. O objetivo do presente estudo foi caracterizar os padrões globais de 5-mC e 5-hmC em placenta fetal de animais da raça Nelore, assim como em sangue e espermatozoides, usados como controles. Os níveis de 5-mC e 5-hmC foram determinados usando os kits MethylFlash Methylated/Hydroxymethylated DNA Quantification, respectivamente. Tecidos placentários apresentaram menores níveis de 5-mC e 5-hmC quando comparados com espermatozoides. Cotilédones de machos apresentaram maiores níveis de 5-hmC do que os de fêmeas. Os níveis de 5-mC e 5-hmC em animais Bos taurus indicus foram caracterizados pela primeira vez, o que pode contribuir para o nosso conhecimento sobre a regulação dos mecanimos epigenéticos na placenta. A presença de 5-hmC em tecidos somáticos sugerem que essa base pode ter sua própria função biológica, sendo não somente um sub-produto da oxidação da 5-mC. Esses resultados podem ser de interesse nas Tecnologias de Reprodução Assistida, especialmente na clonagem, no diagnóstico/prognóstico de placentação aberrante e viabilidade da progênie.(AU)

Distribution of 5-methylcytosine and 5-hydroxymethylcytosine in bovine fetal tissue of the placenta / Distribuição de 5-metilcitosina e 5-hidroximetilcitosina em placenta fetal bovina

5-methylcytosine (5-mC) and 5-hydroxymethylcytosine (5-hmC) are modified cytosines found in mammals that are involved in the regulation of gene expression. The aim of this study was to characterize the global patterns of 5-mC and 5-hmC of the fetal placenta of Nellore cattle as well as blood and sperm as controls. 5-mC and 5-hmC levels were determined using MethylFlash Methylated/Hydroxymethylated DNA Quantification Kit, respectively. Placenta tissues showed lower levels of 5-mC and 5-hmC compared to sperm. The male cotyledon showed higher levels of 5-hmC than the female. For the first time, the levels of 5-mC and 5-hmC in Bos taurus indicus were characterized, which may contribute to our understanding of the mechanisms of epigenetic regulation in the placenta. The presence of 5-hmC in somatic tissues suggest that 5-hmC has its own biological function and it is not only a byproduct from the oxidation of 5-mC. These results may be of interest in ARTs, especially in cloning in the diagnosis/prognosis of aberrant placentation and the viability of pregnancies.(AU)

5-metilcitosina (5-mC) e 5-hidroximetilcitosina (5-hmC) são citosinas modificadas encontradas nos mamíferos que estão envolvidas com a regulação da expressão gênica. O objetivo do presente estudo foi caracterizar os padrões globais de 5-mC e 5-hmC em placenta fetal de animais da raça Nelore, assim como em sangue e espermatozoides, usados como controles. Os níveis de 5-mC e 5-hmC foram determinados usando os kits MethylFlash Methylated/Hydroxymethylated DNA Quantification, respectivamente. Tecidos placentários apresentaram menores níveis de 5-mC e 5-hmC quando comparados com espermatozoides. Cotilédones de machos apresentaram maiores níveis de 5-hmC do que os de fêmeas. Os níveis de 5-mC e 5-hmC em animais Bos taurus indicus foram caracterizados pela primeira vez, o que pode contribuir para o nosso conhecimento sobre a regulação dos mecanimos epigenéticos na placenta. A presença de 5-hmC em tecidos somáticos sugerem que essa base pode ter sua própria função biológica, sendo não somente um sub-produto da oxidação da 5-mC. Esses resultados podem ser de interesse nas Tecnologias de Reprodução Assistida, especialmente na clonagem, no diagnóstico/prognóstico de placentação aberrante e viabilidade da progênie.(AU)

Immunophenotyping of leukocytes in bovine placenta / Imunofenotipagem de leucócitos na placenta bovina

Lymphocytes and macrophages are the main white cells involved in fetal-maternal tolerance. Little is known about these leukocytes in bovine placenta, such as the quantity and location of these cells. Thus, the objective of this study was to identify lymphocyte and macrophage populations in bovine placenta using specific markers and flow cytometry. This study analyzed samples of placentomes and intercaruncular regions of cows in the three quarters of pregnancy. In the placentomes, during the first quarter of pregnancy, mean percentage of labeled CD3+ cells was 2.34%; CD8+, 1.28%; CD14+, 1.66%; and CD335+, 0.96%. For the intercaruncular region, percentage of CD3+ cells was 0.71%; CD8+, 1.63%; CD14+, 2.81%; and CD335+, 2.81%. In the second quarter, placentomes showed 0.94% CD3+ cells; 0.77% CD8+; 0.72% CD14+; and 0.51% CD335+. In the intercaruncular region, percentage of labeled CD3+ cells was 0.50%; CD8+, 1.81%; CD14+, 2.64%; and CD335+, 0.51%. In the third quarter, placentomes showed labeling of 0.88% CD3+; 0.66% CD8+; 1.06% CD14+; and 0.74% CD335+ cells. In the intercaruncular region, percentage of labeled CD3+ cells was 0.19%; CD8+, 2.23%; CD14+, 2.43%; and CD335+, 0.16%. The results showed that there was a greater immunomarking of leukocytes CD3+ and CD335+ in the placentome when compared to the intercaruncular region during the third trimester. It can be concluded that leukocytes populations in bovine placenta is reduced, probably because of the syndesmochorial characteristic of bovine placenta. This represents a significant barrier for the immunological system of the mother, sharply decreasing the exposure of the conceptus to the mother's immune system.(AU)

Linfócitos e macrófagos são os principais leucócitos envolvidos na tolerância materno-fetal. Pouco se sabe sobre esses leucócitos na placenta bovina, como por exemplo, a quantidade e localização dessas células. Assim, o objetivo desse estudo foi identificar populações de linfócitos e macrófagos na placenta bovina utilizando marcadores específicos e citometria de fluxo. Este estudo analisou amostras de placentônios da região intercaruncular de bovinos nos três trimestres da gestação. No primeiro trimestre, nos placentônios, a porcentagem média de células CD3+ foi 2,34%; CD8+, 1,28%; CD14+, 1,66%; e CD335+, 0,96%. Na região intercaruncular, a porcentagem de células CD3+ foi 0,71%; CD8+, 1,63%; CD14+, 2,81%; e CD335+, 2,81%. No segundo trimestre, os placentônios apresentaram 0,94% de células CD3+; 0,77% de CD8+; 0,72% de CD14+e 0,51% de CD335+. Na região intercaruncular, a porcentagem de células CD3+ foi 0,50%; CD8+, 1,81%; CD14+, 2,64%; e CD335+, 0,51%. No terceiro trimestre, os placentônios apresentaram 0,88% de células marcadas CD3+; 0,66% de CD8+; 1,06% de CD14+ e 0,74% de CD335+. Na região intercaruncular, a porcentagem de células CD3+ foi 0,19%; CD8+, 2,23%; CD14+, 2,43% e CD335+, 0,16%. Os resultados mostraram que a imunomarcação de leucócitos na região do placentônio foi maior do que na região intercaruncular no terceiro trimestre. Concluiu-se que a população de leucócitos CD3+ e CD335+ na placenta bovina está reduzida, provavelmente devido à sua característica sindesmocorial. Essa característica representa uma barreira significante para o sistema imunológico da mãe, o que diminui drasticamente a exposição do concepto ao sistema de defesa da mãe.(AU)

Ultrastructure of bovine placenta during all gestational period / Ultraestrutura de placenta bovina durante todo o período gestacional

Placentas from pregnant cows with different gestation periods were used. Placental fragments of all groups were processed and evaluated by transmission electron microscopy. After fragment analysis, bovine placenta was observed to be epitheliochorial type in early pregnancy, becoming progressively sinepiteliocorial at the beginning of the second trimester. There are no ultrastructural evidences of inflammation in the region of caruncles throughout gestation, despite the invasion of caruncle proper lamina by trophoblast cells. However, throughout pregnancy and especially at the end, there were evident signs of cell degeneration in both trophoblast and the uterine epithelium. The active trophoblast cells intensely phagocytize cellular debris. There are complex interdigitations between the surface of the trophoblast and the uterine epithelium, which is related to the increase of the exchange surface between mother and fetus. At the end of pregnancy, interdigitations disappear, favoring the detachment and expulsion of the placenta after birth.(AU)

Foram utilizadas placentas de vacas abatidas em frigorífico com diversos tempos gestacionais. Fragmentos de placentomo de todos os grupos foram processados e avaliados em microscopia eletrônica de transmissão. Após análise dos fragmentos, observou-se que a placenta bovina é do tipo epiteliocorial no início da gestação, tornando-se sinepiteliocorial progressivamente a partir do início do segundo mês de gestação. Não existem evidências ultraestruturais de inflamação na região das carúnculas durante toda a gestação, apesar da invasão da lâmina própria caruncular por células trofoblásticas. No entanto, durante toda a gestação e em especial ao seu final, foram observados sinais evidentes de degeneração celular, tanto do trofoblasto como do epitélio uterino. As células trofoblásticas ativas fagocitam intensamente os debris celulares originados dessas degenerações. Existem complexas interdigitações entre a superfície do trofoblasto e do epitélio uterino, o que estaria relacionado com o aumento da superfície de troca entre mãe e feto. Ao final da gestação, praticamente desaparecem essas interdigitações, favorecendo o descolamento e a expulsão da placenta após o parto.(AU)

Immunophenotyping of leukocytes in bovine placenta / Imunofenotipagem de leucócitos na placenta bovina

Lymphocytes and macrophages are the main white cells involved in fetal-maternal tolerance. Little is known about these leukocytes in bovine placenta, such as the quantity and location of these cells. Thus, the objective of this study was to identify lymphocyte and macrophage populations in bovine placenta using specific markers and flow cytometry. This study analyzed samples of placentomes and intercaruncular regions of cows in the three quarters of pregnancy. In the placentomes, during the first quarter of pregnancy, mean percentage of labeled CD3+ cells was 2.34%; CD8+, 1.28%; CD14+, 1.66%; and CD335+, 0.96%. For the intercaruncular region, percentage of CD3+ cells was 0.71%; CD8+, 1.63%; CD14+, 2.81%; and CD335+, 2.81%. In the second quarter, placentomes showed 0.94% CD3+ cells; 0.77% CD8+; 0.72% CD14+; and 0.51% CD335+. In the intercaruncular region, percentage of labeled CD3+ cells was 0.50%; CD8+, 1.81%; CD14+, 2.64%; and CD335+, 0.51%. In the third quarter, placentomes showed labeling of 0.88% CD3+; 0.66% CD8+; 1.06% CD14+; and 0.74% CD335+ cells. In the intercaruncular region, percentage of labeled CD3+ cells was 0.19%; CD8+, 2.23%; CD14+, 2.43%; and CD335+, 0.16%. The results showed that there was a greater immunomarking of leukocytes CD3+ and CD335+ in the placentome when compared to the intercaruncular region during the third trimester. It can be concluded that leukocytes populations in bovine placenta is reduced, probably because of the syndesmochorial characteristic of bovine placenta. This represents a significant barrier for the immunological system of the mother, sharply decreasing the exposure of the conceptus to the mother's immune system.(AU)

Linfócitos e macrófagos são os principais leucócitos envolvidos na tolerância materno-fetal. Pouco se sabe sobre esses leucócitos na placenta bovina, como por exemplo, a quantidade e localização dessas células. Assim, o objetivo desse estudo foi identificar populações de linfócitos e macrófagos na placenta bovina utilizando marcadores específicos e citometria de fluxo. Este estudo analisou amostras de placentônios da região intercaruncular de bovinos nos três trimestres da gestação. No primeiro trimestre, nos placentônios, a porcentagem média de células CD3+ foi 2,34%; CD8+, 1,28%; CD14+, 1,66%; e CD335+, 0,96%. Na região intercaruncular, a porcentagem de células CD3+ foi 0,71%; CD8+, 1,63%; CD14+, 2,81%; e CD335+, 2,81%. No segundo trimestre, os placentônios apresentaram 0,94% de células CD3+; 0,77% de CD8+; 0,72% de CD14+e 0,51% de CD335+. Na região intercaruncular, a porcentagem de células CD3+ foi 0,50%; CD8+, 1,81%; CD14+, 2,64%; e CD335+, 0,51%. No terceiro trimestre, os placentônios apresentaram 0,88% de células marcadas CD3+; 0,66% de CD8+; 1,06% de CD14+ e 0,74% de CD335+. Na região intercaruncular, a porcentagem de células CD3+ foi 0,19%; CD8+, 2,23%; CD14+, 2,43% e CD335+, 0,16%. Os resultados mostraram que a imunomarcação de leucócitos na região do placentônio foi maior do que na região intercaruncular no terceiro trimestre. Concluiu-se que a população de leucócitos CD3+ e CD335+ na placenta bovina está reduzida, provavelmente devido à sua característica sindesmocorial. Essa característica representa uma barreira significante para o sistema imunológico da mãe, o que diminui drasticamente a exposição do concepto ao sistema de defesa da mãe.(AU)

Ultrastructure of bovine placenta during all gestational period / Ultraestrutura de placenta bovina durante todo o período gestacional

Placentas from pregnant cows with different gestation periods were used. Placental fragments of all groups were processed and evaluated by transmission electron microscopy. After fragment analysis, bovine placenta was observed to be epitheliochorial type in early pregnancy, becoming progressively sinepiteliocorial at the beginning of the second trimester. There are no ultrastructural evidences of inflammation in the region of caruncles throughout gestation, despite the invasion of caruncle proper lamina by trophoblast cells. However, throughout pregnancy and especially at the end, there were evident signs of cell degeneration in both trophoblast and the uterine epithelium. The active trophoblast cells intensely phagocytize cellular debris. There are complex interdigitations between the surface of the trophoblast and the uterine epithelium, which is related to the increase of the exchange surface between mother and fetus. At the end of pregnancy, interdigitations disappear, favoring the detachment and expulsion of the placenta after birth.(AU)

Foram utilizadas placentas de vacas abatidas em frigorífico com diversos tempos gestacionais. Fragmentos de placentomo de todos os grupos foram processados e avaliados em microscopia eletrônica de transmissão. Após análise dos fragmentos, observou-se que a placenta bovina é do tipo epiteliocorial no início da gestação, tornando-se sinepiteliocorial progressivamente a partir do início do segundo mês de gestação. Não existem evidências ultraestruturais de inflamação na região das carúnculas durante toda a gestação, apesar da invasão da lâmina própria caruncular por células trofoblásticas. No entanto, durante toda a gestação e em especial ao seu final, foram observados sinais evidentes de degeneração celular, tanto do trofoblasto como do epitélio uterino. As células trofoblásticas ativas fagocitam intensamente os debris celulares originados dessas degenerações. Existem complexas interdigitações entre a superfície do trofoblasto e do epitélio uterino, o que estaria relacionado com o aumento da superfície de troca entre mãe e feto. Ao final da gestação, praticamente desaparecem essas interdigitações, favorecendo o descolamento e a expulsão da placenta após o parto.(AU)