Galea spixii embryos have potential to produce steroid hormones

Estrogens and progestogens are hormones produced by maternal organs and it is required for recognition and maintenance of pregnancy. In addition, the embryo may also be a source. For this, the aim was to identify steroidogenic expression on Galea spixii embryos early in the embryonic period. Embryos were collected on Days 10 and 15 of gestation; some were fixed in 4% paraformaldehyde for morphological and immunohistochemical analysis (P450arom), whereas others had RNA extracted to determine presence of CYP19a1 gene. In addition, for immunochemistry, maternal ovaries were collected as positive control tissues. Maternal tissues had positive staining for aromatase, whereas none of the embryos stained for P450 aromatase. Based on qPCR reactions, CYP19a1 gene were expressed in all embryos. Galea spixii embryos expressed steroidogenic genes during the post-implantation period, indicating they have the potential to produce steroid hormones.(AU)

Produção de embriões partenogenéticos de cutias usando Cloreto de Estrôncio e Citocalasina B / Production of parthenogenetic embryos from agoutis using strontium chloride and cytochalasin B

The study aimed to evaluate the effect of strontium chloride (SrCl2) with cytochalasin B (CB) on the activation of agouti oocytes matured in vitro for embryo production. Thus, ovaries were used for oocyte recovery by slicing. Subsequently, viable oocytes were destined for in vitro maturation (IVM) and after 24 h evaluated for the expansion and viability of the cumulus cells and presence of the first polar body (1PB). After IVM, oocytes were activated with a combination of 10 mM SrCl2 and 5 μg/mL CB for 6 h and evaluated for embryo development kinetics. Hence, 93.3% of cumulus cell expansion was observed, with 91.2% viability and 37.3% of oocytes with the presence of 1PB. Regarding embryonic development, 43.2% (19/44) of cleaved structures and 6.8% (3/44) of morulae were observed in relation to the number of oocytes and 18.8% (3/16) morulae in relation to the number of cleaved structures. Thus, the combination of SrCl2 with CB promoted the activation of oocytes matured in vitro from agouti resulting in morulae. Finally, with this study, fundamental steps for in vitro conservation through reproductive biotechniques were developed in agoutis.

Produção de embriões partenogenéticos de cutias usando Cloreto de Estrôncio e Citocalasina B / Production of parthenogenetic embryos from agoutis using strontium chloride and cytochalasin B

The study aimed to evaluate the effect of strontium chloride (SrCl2) with cytochalasin B (CB) on the activation of agouti oocytes matured in vitro for embryo production. Thus, ovaries were used for oocyte recovery by slicing. Subsequently, viable oocytes were destined for in vitro maturation (IVM) and after 24 h evaluated for the expansion and viability of the cumulus cells and presence of the first polar body (1PB). After IVM, oocytes were activated with a combination of 10 mM SrCl2 and 5 μg/mL CB for 6 h and evaluated for embryo development kinetics. Hence, 93.3% of cumulus cell expansion was observed, with 91.2% viability and 37.3% of oocytes with the presence of 1PB. Regarding embryonic development, 43.2% (19/44) of cleaved structures and 6.8% (3/44) of morulae were observed in relation to the number of oocytes and 18.8% (3/16) morulae in relation to the number of cleaved structures. Thus, the combination of SrCl2 with CB promoted the activation of oocytes matured in vitro from agouti resulting in morulae. Finally, with this study, fundamental steps for in vitro conservation through reproductive biotechniques were developed in agoutis.(AU)

Imunolocalização de receptores de leptina no ovário de preás (Galea spixii Wagler, 1831) / Immunolocalization of leptin receptor of Spix's Yellow-toothed Cavy (Galea spixii Wagler, 1831) ovary

A leptina, uma citocina produzida pelas células adiposas, é alvo da comunidade científica por acreditarem que ela apresente impacto sobre a reprodução dos animais promovendo a puberdade, foliculogênese e oogênese, ciclo estral e auxiliando na fecundação. A compreensão dos mecanismos que controlam a atividade reprodutiva de preás (Galea spixii) possui papel relevante para a preservação da espécie. Desta forma, o presente trabalho propôs analisar a imunolocalização dos receptores de leptina (Ob-R) no ovário de preás. Coletaram-se os ovários de 20 fêmeas adultas, não prenhes e saudáveis. As amostras foram fixadas em paraformaldeído a 4% em tampão fosfato, incluídas em parafina e seccionadas para a realização de imunohistoquímica (IHC). As secções foram fotomicrografadas e avaliadas quanto à intensidade da reação. Observou-se forte imunorreação no oócito e nas células da teca, moderada nas células do estroma ovariano e nas células luteínicas grandes e fracamente coradas nas células da granulosa, endoteliais, perivasculares e células luteínicas pequenas. Quando comparado a expressão de receptores ao longo do desenvolvimento folicular foi observado que o oócito e as células da teca se mantiveram com expressão na mesma intensidade. Entretanto, as células da granulosa apresentaram forte marcação nos estádios pré-antrais enquanto que nos folículos antrais apresentou fraca intensidade. Concluímos que em ovários de Galea spixii existe a presença de Ob-R nas principais estruturas do ovário sugerindo que este hormônio desempenhe papel fundamental na reprodução desta espécie.(AU)

Leptin, a cytokine produced by adipose cells, is the target of the scientific community for believing that it has an impact on the reproduction of the animals promoting puberty, folliculogenesis and oogenesis, estrous cycle and aiding in fertilization. The understanding of the mechanisms controlling the reproductive activity of Spix's Yellow-toothed Cavy (Galea spixii) plays a relevant role in the preservation of the species. Thus, the present study proposed to analyze the immunolocalization of leptin receptors (Ob-R) in the ovary of cavies. Ovaries from 20 adult, non-pregnant, healthy females were collected. The samples were fixed in 4% phosphate buffered paraformaldehyde, embedded in paraffin and sectioned for immunohistochemistry. The sections were photomicrographs and intensity of the reaction was measured. Strong immunoreaction was observed in oocyte and theca cells, moderate in ovarian stromal cells and large luteal cells and weak stained in granulosa, endothelial, perivascular and small luteal cells. When compared to receptor expression along follicular development it was observed that the oocyte and the theca cells remained with expression at the same intensity. However, the granulosa cells presented strong stained in the preantral stages, whereas in the antral follicles it presented low intensity. We conclude that in the ovaries of Galea spixii there is the presence of Ob-R in the main structures of the ovary sugesting that this hormone plays a fundamental role in the reproduction of this species.(AU)

Imunolocalização de receptores de leptina no ovário de preás (Galea spixii Wagler, 1831) / Immunolocalization of leptin receptor of Spix's Yellow-toothed Cavy (Galea spixii Wagler, 1831) ovary

A leptina, uma citocina produzida pelas células adiposas, é alvo da comunidade científica por acreditarem que ela apresente impacto sobre a reprodução dos animais promovendo a puberdade, foliculogênese e oogênese, ciclo estral e auxiliando na fecundação. A compreensão dos mecanismos que controlam a atividade reprodutiva de preás (Galea spixii) possui papel relevante para a preservação da espécie. Desta forma, o presente trabalho propôs analisar a imunolocalização dos receptores de leptina (Ob-R) no ovário de preás. Coletaram-se os ovários de 20 fêmeas adultas, não prenhes e saudáveis. As amostras foram fixadas em paraformaldeído a 4% em tampão fosfato, incluídas em parafina e seccionadas para a realização de imunohistoquímica (IHC). As secções foram fotomicrografadas e avaliadas quanto à intensidade da reação. Observou-se forte imunorreação no oócito e nas células da teca, moderada nas células do estroma ovariano e nas células luteínicas grandes e fracamente coradas nas células da granulosa, endoteliais, perivasculares e células luteínicas pequenas. Quando comparado a expressão de receptores ao longo do desenvolvimento folicular foi observado que o oócito e as células da teca se mantiveram com expressão na mesma intensidade. Entretanto, as células da granulosa apresentaram forte marcação nos estádios pré-antrais enquanto que nos folículos antrais apresentou fraca intensidade. Concluímos que em ovários de Galea spixii existe a presença de Ob-R nas principais estruturas do ovário sugerindo que este hormônio desempenhe papel fundamental na reprodução desta espécie.

Leptin, a cytokine produced by adipose cells, is the target of the scientific community for believing that it has an impact on the reproduction of the animals promoting puberty, folliculogenesis and oogenesis, estrous cycle and aiding in fertilization. The understanding of the mechanisms controlling the reproductive activity of Spix's Yellow-toothed Cavy (Galea spixii) plays a relevant role in the preservation of the species. Thus, the present study proposed to analyze the immunolocalization of leptin receptors (Ob-R) in the ovary of cavies. Ovaries from 20 adult, non-pregnant, healthy females were collected. The samples were fixed in 4% phosphate buffered paraformaldehyde, embedded in paraffin and sectioned for immunohistochemistry. The sections were photomicrographs and intensity of the reaction was measured. Strong immunoreaction was observed in oocyte and theca cells, moderate in ovarian stromal cells and large luteal cells and weak stained in granulosa, endothelial, perivascular and small luteal cells. When compared to receptor expression along follicular development it was observed that the oocyte and the theca cells remained with expression at the same intensity. However, the granulosa cells presented strong stained in the preantral stages, whereas in the antral follicles it presented low intensity. We conclude that in the ovaries of Galea spixii there is the presence of Ob-R in the main structures of the ovary sugesting that this hormone plays a fundamental role in the reproduction of this species.

Controle reprodutivo em biotérios de criação de animais de laboratório com ênfase em roedores / Reproductive control in Rodents animals facilities

A pesquisa experimental utiliza em sua grande maioria ratos e camundongos. Os animais de laboratório sãocaracterizados pela sua genética (isogênicos ou heterogênicos) definida através de práticas reprodutivas sistemáticas(acasalamentos irmão x irmão ou randômicos). O conhecimento da biologia e genética destes é fundamental paraque se estabeleçam controles reprodutivos capazes de evitar desperdícios espaciais, financeiros e sobretudo odescarte excessivo de excedentes. O uso de animais isogênicos elimina a variabilidade genética em experimentos,uma vez que possuem ao menos 98,2% de homozigose em seus alelos e formam uma linhagem onde ascaracterísticas genéticas e fenotípicas são únicas e exclusivas. O uso de linhagens permite a reprodutibilidade deexperimentos ao longo do tempo e em diferentes laboratórios. Ao contrário, animais heterogênicos, chamados deestoque ou colônias que objetivam mimetizar a variabilidade genética de uma população, são mantidos emacasalamentos randômicos, não possuem uma genética definida e suas características fenotípicas podem variar entrelaboratórios. Tanto um quanto o outro exigem esquemas reprodutivos rígidos para garantir a qualidade efidedignidade dos experimentos.(AU)

The great majority of animals used in research are rats and mice. Laboratory animals are characterized by theirgenetic patterns (isogenic or heterogenic) defined through systematic breeding practices (brother vs. brother orrandom mating). It is fundamental to know their biology and genetics to establish reproductive controls in order toavoid spatial and financial waste and, more important, to avoid the excessive discarding of surpluses. The use ofisogenic animals eliminates genetic variability in experiments, since they have at least 98.2% homozygoze in theiralleles and form a lineage where the genetic and phenotypic characteristics are unique and exclusive. The use oflineages allows the reproducibility of experiments in different laboratories and along the time. On the other hand,heterogenic animals, called stock or colonies, that aim to mimic the genetic variability of a population, are kept inrandom mating, they do not have a defined genetic profile and their phenotypic characteristics can vary amonglaboratories. Both ways of breeding (isogenic or heterogenic) demand rigid reproductive schemes to ensure thequality and reliability of the experiments.(AU)

Controle reprodutivo em biotérios de criação de animais de laboratório com ênfase em roedores / Reproductive control in Rodents animals facilities

A pesquisa experimental utiliza em sua grande maioria ratos e camundongos. Os animais de laboratório sãocaracterizados pela sua genética (isogênicos ou heterogênicos) definida através de práticas reprodutivas sistemáticas(acasalamentos irmão x irmão ou randômicos). O conhecimento da biologia e genética destes é fundamental paraque se estabeleçam controles reprodutivos capazes de evitar desperdícios espaciais, financeiros e sobretudo odescarte excessivo de excedentes. O uso de animais isogênicos elimina a variabilidade genética em experimentos,uma vez que possuem ao menos 98,2% de homozigose em seus alelos e formam uma linhagem onde ascaracterísticas genéticas e fenotípicas são únicas e exclusivas. O uso de linhagens permite a reprodutibilidade deexperimentos ao longo do tempo e em diferentes laboratórios. Ao contrário, animais heterogênicos, chamados deestoque ou colônias que objetivam mimetizar a variabilidade genética de uma população, são mantidos emacasalamentos randômicos, não possuem uma genética definida e suas características fenotípicas podem variar entrelaboratórios. Tanto um quanto o outro exigem esquemas reprodutivos rígidos para garantir a qualidade efidedignidade dos experimentos.

The great majority of animals used in research are rats and mice. Laboratory animals are characterized by theirgenetic patterns (isogenic or heterogenic) defined through systematic breeding practices (brother vs. brother orrandom mating). It is fundamental to know their biology and genetics to establish reproductive controls in order toavoid spatial and financial waste and, more important, to avoid the excessive discarding of surpluses. The use ofisogenic animals eliminates genetic variability in experiments, since they have at least 98.2% homozygoze in theiralleles and form a lineage where the genetic and phenotypic characteristics are unique and exclusive. The use oflineages allows the reproducibility of experiments in different laboratories and along the time. On the other hand,heterogenic animals, called stock or colonies, that aim to mimic the genetic variability of a population, are kept inrandom mating, they do not have a defined genetic profile and their phenotypic characteristics can vary amonglaboratories. Both ways of breeding (isogenic or heterogenic) demand rigid reproductive schemes to ensure thequality and reliability of the experiments.

Aspectos reprodutivos de Dinomys branickii (pacarana) em cativeiro - Relato de caso / Reproductive aspects of Dinomys branickii (pacarana) in captivity - Case report

A pacarana (Dinomys branickii) é um roedor raro de hábito noturno, sendo a única representante dafamília Dinomyidae. A espécie é ameaçada de extinção em vida livre, e pouco se conhece sobre sua reprodução.Este trabalho teve por objetivo estudar as fases do ciclo estral por meio da citologia vaginal, associado aos sinaisclínicos da genitália externa e o estabelecimento da primeira prenhez de uma única fêmea de pacarana. O animalera mantido em cativeiro no Parque Ambiental Chico Mendes, localizado em Rio Branco, Acre, Brasil. Foramrealizados exames de citologia vaginal em uma fêmea pré-púbere (11 meses) cativa, durante sete meses. Osesfregaços foram corados pelo Método de Shorr, para a quantificação e observação de células do epitélio vaginalde acordo com a sua morfologia. Além disso, os sinais clínicos da genitália externa foram observados durante ociclo estral. A fêmea iniciou a puberdade aos 14 meses, período no qual foi evidenciada uma maior diferenciaçãocelular, sendo visualizadas células intermediárias, parabasais e superficiais anucleadas e nucleadas, além deleucócitos. Verificou-se que o período do ciclo estral para este espécime foi em média 30 dias. Aos 20 meses, afêmea demonstrou sinais de gestação, sendo confirmada posteriormente por exame ultrassonográfico.(AU)

The pacarana (Dinomys branickii) is a rare nocturnal rodent and the sole member of Dinomyidae family. Thespecies is threatened in its distribution range and little is known of its reproduction. This study aimed to reportthe phases of the estrous cycle through vaginal cytology, related to the clinical signs of external genitalia andthe establishment of the first pregnancy of a single female pacarana. The animal was kept in captivity at theAmbiental Chico Mendes Park, situated in the municipality of Rio Branco, Acre, Brazil. Vaginal smears wereperformed in a prepubescent female (aged 11 months). For vaginal epithelial cell morphology and quantificationwe used Shorrs staining. Besides, clinical signs of the external genitalia were observed during estrous cycle.The female turned into pubescent at 14 months, with significant cell type differentiation. We found intermediate,parabasal and superficial, nucleated and anucleated cells, besides leukocytes. Pacaranas estrous cycle lastedapproximately 30 days. When aged 20 months the female exhibited pregnancy signs, which was confirmedthrough ultrasonography exam.(AU)

Aspectos reprodutivos de Dinomys branickii (pacarana) em cativeiro - Relato de caso / Reproductive aspects of Dinomys branickii (pacarana) in captivity - Case report

A pacarana (Dinomys branickii) é um roedor raro de hábito noturno, sendo a única representante dafamília Dinomyidae. A espécie é ameaçada de extinção em vida livre, e pouco se conhece sobre sua reprodução.Este trabalho teve por objetivo estudar as fases do ciclo estral por meio da citologia vaginal, associado aos sinaisclínicos da genitália externa e o estabelecimento da primeira prenhez de uma única fêmea de pacarana. O animalera mantido em cativeiro no Parque Ambiental Chico Mendes, localizado em Rio Branco, Acre, Brasil. Foramrealizados exames de citologia vaginal em uma fêmea pré-púbere (11 meses) cativa, durante sete meses. Osesfregaços foram corados pelo Método de Shorr, para a quantificação e observação de células do epitélio vaginalde acordo com a sua morfologia. Além disso, os sinais clínicos da genitália externa foram observados durante ociclo estral. A fêmea iniciou a puberdade aos 14 meses, período no qual foi evidenciada uma maior diferenciaçãocelular, sendo visualizadas células intermediárias, parabasais e superficiais anucleadas e nucleadas, além deleucócitos. Verificou-se que o período do ciclo estral para este espécime foi em média 30 dias. Aos 20 meses, afêmea demonstrou sinais de gestação, sendo confirmada posteriormente por exame ultrassonográfico.

The pacarana (Dinomys branickii) is a rare nocturnal rodent and the sole member of Dinomyidae family. Thespecies is threatened in its distribution range and little is known of its reproduction. This study aimed to reportthe phases of the estrous cycle through vaginal cytology, related to the clinical signs of external genitalia andthe establishment of the first pregnancy of a single female pacarana. The animal was kept in captivity at theAmbiental Chico Mendes Park, situated in the municipality of Rio Branco, Acre, Brazil. Vaginal smears wereperformed in a prepubescent female (aged 11 months). For vaginal epithelial cell morphology and quantificationwe used Shorr’s staining. Besides, clinical signs of the external genitalia were observed during estrous cycle.The female turned into pubescent at 14 months, with significant cell type differentiation. We found intermediate,parabasal and superficial, nucleated and anucleated cells, besides leukocytes. Pacarana’s estrous cycle lastedapproximately 30 days. When aged 20 months the female exhibited pregnancy signs, which was confirmedthrough ultrasonography exam.

Os histricomorfos sul-americanos: uma análise comparativa do desenvolvimento embriológico / South-American hystricomorphs: a comparative analysis of embryological development

O objetivo do estudo foi realizar uma análise embriológica dos roedores histricomorfos (paca, cutia, preá e capivara), a fim de comparar com a de outros roedores e com a morfogênese humana um padrão embriológico. Utilizaram-se 8 espécimes de roedores sendo, 2 embriões para cada espécie coletada, ambas em inicio de gestação. Estes foram retirados dos úteros gestantes através de ovariosalpingohisterectomia parcial, seguido de fixação em solução de paraformaldeído 4 por cento. Para as mensurações de Crow-Rump, adotou-se como referência a crista nucal numa extremidade e da última vértebra sacral na extremidade oposta. De forma geral, os embriões analisados mostraram as seguintes características morfológicas: divisão dos arcos branquiais, o não fechamento do neuróporo cranial em alguns embriões estudados, a curvatura cranial acentuada e os somitos delimitados e individualizados. O broto dos membros apresentava-se em desenvolvimento em formato de remo, além da impressão cardíaca e fígado. Na região caudal, visualizou-se a curvatura crânio-caudal, a vesícula óptica com e sem pigmentação da retina, a abertura do tubo neural na região do quarto ventrículo encefálico, a fosseta nasal e a formação das vesículas encefálicas. Concluímos que desenvolvimento embriológico dos roedores histricomorfos pode ser comparado à morfogênese de ratos, cobaios, coelhos e humanos nos diferentes estágios de desenvolvimento, tomando apenas o cuidado com as particularidades de cada espécie, além da implementação de tecnologias reprodutivas, especialmente a de embriões, a qual requer o conhecimento do desenvolvimento pré-implantação referente às fases de desenvolvimento.(AU)

The aim of this study was to perform an embryology analysis of South-American hystricomorph rodents (paca, agouti, capybara, and rock cavy) to compare these data with the ones from other rodents and with the human embryologic morphogenesis. We used 8 samples of rodents, 2 embryos for each species, collected during early gestation. The embryos were removed from the pregnant uterus through partial ovarysalpingohysterectomy, followed by fixation in 4 percent paraformaldehyde solution. For crow-rump measurements, we had as reference the nuchal crest at one extremity and the last sacral vertebra on the opposite side. The embryos examined showed the following morphological characteristics: Division of the branchial arches, the cranial neuropore open in some embryos studied, the cranial curvature developed, and the somites delimited and distinct. The hindlimb and forelimb were in development, and showed "row" form; so we found the cardiac impression and the liver region. In the caudal region we observed the head-flow curve, the optic vesicle with and without pigmentation of the retina, the opening of neural tube in the fourth ventricle region of the brain, the nasal cavity, and the encephalic vesicles formation. We conclude that the embryo development of hystricomorph rodents can be compared with the morphogenesis in rats, guinea pigs, rabbits and humans in the early stages of development, being aware of the particularities for each species, in addition to the implementation of reproductive technology, especially of embryos, what requires knowledge of the pre-implantation stages for the different development phases.(AU)