Resumo

Porcine circovirus 2 (PCV2) has a considerable economic impact on the pork industry worldwide for more than two decades. In 2016, a new circovirus, porcine circovirus 3 (PCV3), was described; since then, it has been reported to be associated with diseased or even in clinically healthy swine in several countries. Considering the importance of wild boars as reservoirs of swine pathogens and the extensive distribution of these animals in Rio Grande do Sul and throughout the national territory, we searched for PCV2 and PCV3 in twenty-six wild boars coupled with necropsy and histologic examination of the sampled animals. Using PCR, 182 tissue samples were analyzed, including the heart, kidneys, liver, lung, lymph nodes, spleen, and tonsils. PCV2 and PCV3 were detected in 57.7% (15/26) and 15.4% (4/26) of wild boars, respectively. Furthermore, co-infection with PCV2 and PCV3 was detected in one of these animals, with PCV2 or PCV3 DNA detection in multiple organs. Histological examination showed mild to moderate and multifocal lymphoplasmacytic interstitial nephritis distributed randomly throughout the renal cortex, apparently unrelated to PCV2 or PCV3 detection. The wild boar population in Brazil is extensive, indicating the presence of a larger number of swine pathogen hosts. In the present study, more than half of the wild boars harbored PCV2; and although less frequently, PCV3 was also detected. Therefore, free-living wild boars can serve as reservoirs of swine circoviruses in southern Brazil.

O circovírus suíno 2 (PCV2) tem causado impacto econômico na indústria suína em todo o mundo por mais de duas décadas. Em 2016, um novo circovírus foi descrito - circovírus suíno 3 (PCV3) - e desde então tem sido relatado em vários países associado a doenças ou mesmo suínos saudáveis. Diante da importância dos javalis como reservatórios de patógenos suínos, e da ampla distribuição desses animais no Rio Grande do Sul e em todo o território nacional, foi realizada pesquisa de PCV2 e PCV3 em vinte e seis javalis (10 fêmeas e 16 machos). Necropsia e exame histológico foram realizados. Utilizando PCR, foram analisadas 182 amostras de tecidos incluindo: coração, rins, fígado, pulmão, linfonodos, baço e tonsila. PCV2 e PCV3 foram detectados por PCR em 57,7% (15/26) e 15,4% (4/26) dos javalis, respectivamente. Um destes animais estava co-infectado por PCV2 e PCV3. O DNA do PCV2 ou PCV3 foi detectado em multiplos órgãos. No exame histológico foi observada nefrite intersticial linfoplasmocitária multifocal leve a moderada, distribuída aleatoriamente pelo córtex renal, aparentemente sem relação com a detecção de DNA viral. A população de javalis no Brasil é extensa, resultando em maior número de hospedeiros para patógenos de suínos. No presente estudo, mais da metade dos javalis capturados abrigavam PCV2 e, embora menos frequente, PCV3 também foi detectado. Os javalis de vida livre podem servir como reservatórios de circovírus suínos no sul do Brasil.

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Hepatitis E is an emerging zoonotic disease caused by hepatitis E virus (HEV). Immunohistochemistry (IHC) can be used to verify viral presence in human and swine livers. The aim of this study was to comparatively analyze the immunolabeling of the ORF2 protein (pORF2) versus the ORF3 protein (pORF3) of HEV in swine livers from subsistence farms in the state of Mato Grosso, Brazil. This study included 25 liver samples formalin fixed paraffin embedded tissue block from a published molecular detection and immunohistochemistry (IHC) study, which used the HEV pORF3 protein, demonstrating 4% (1/25) of positive immunolabeling and 96% (24/25) negative, in contrast to the molecular exam that showed 24% (6/25) of liver samples positive and 76% (19/25) negative. In order to increase the sensitivity of the IHC technique, these samples were analyzed using the antibody for the detection of HEV pORF2, showing 24% (6/25) immunolabeling positive and 76% (19/25) negative, equivalent to the result of molecular analysis on corresponding samples. Thus, the use of antibody to pORF2 increased the number of HEV cases detectable in the IHC by 600%. The IHC added to molecular techniques can be used as a tool for monitoring viral presence in swine livers, constituting a sensitive diagnostic methodology when liver samples fixed in formalin and embedded in paraffin are available.

A hepatite E é uma enfermidade emergente de caráter zoonótico causada pelo Vírus da Hepatite E (HEV). A imuno-histoquímica (IHQ) pode ser utilizada para verificar a presença viral em fígados de humanos e suínos. O objetivo deste estudo foi analisar comparativamente a imunomarcação da proteína ORF2 (pORF2) versus proteína ORF3 (pORF3) de HEV em fígados de suínos de criatórios de subsistência no estado de Mato Grosso, Brasil. Este trabalho incluiu 25 amostras de fígados de suínos fixados em formol e embebidos em parafina provenientes de um estudo publicado de detecção molecular e imuno-histoquímica (IHQ), que utilizou pORF3 de HEV, demonstrando 4% (1/25) de imunomarcação positiva e 96% (24/25) negativa, em contraste com o exame molecular que apresentou 24% (6/25) das amostras de fígado positivas e 76% (19/25) negativas. Com o objetivo de aumentar a sensibilidade da técnica de IHQ, essas amostras foram analisadas utilizando o anticorpo para detecção da pORF2 de HEV, apresentando 24% (6/25) de imunomarcação positiva e 76% (19/25) negativa, equivalente ao resultado da análise molecular em amostras correspondentes. Desta forma, o uso do anticorpo para pORF2 ampliou o número de casos de HEV detectáveis na IHQ em 600%. A IHQ somada a técnica molecular pode ser utilizada como ferramenta de monitoramento da presença viral em fígados de suínos, constituindo uma metodologia diagnóstica sensível quando há disponibilidade de amostras de fígado fixadas em formol e embebidas em parafina.

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A hepatite E é uma zoonose emergente que afeta diversas espécies de mamíferos, inclusive o ser humano. É ocasionada por um vírus da espécie Orthohepevirus A que possui diversos genótipos e subgenótipos. No Brasil é descrito o genótipo HEV-3, cujo principal reservatório é o porco doméstico. Testes moleculares e sorológicos demonstram o HEV-3 em diferentes estados, tanto em animais quanto em humanos. No estado de São Paulo, existem diversos estudos sobre a epidemiologia da hepatite E em humanos, mas faltam informações sobre o HEV-3 em suínos. Assim, o objetivo deste trabalho foi verificar a ocorrência de HEV por meio da técnica de RT-PCR e posterior sequenciamento em um banco de amostras de fezes de suínos colhidas entre 2008 e 2009, na região metropolitana de Campinas. Das 89 amostras analisadas, foi possível detectar o HEV-3 em sete e, pela reconstrução filogenética, foram encontrados os subgenótipos HEV-3b, HEV-3h, e HEV-3j. Uma amostra disponível no GenBank, proveniente de São Paulo, que ainda não havia sido subgenotipada, foi agrupada ao HEV-3i. Os subgenótipos HEV-3j e HEV-3i ainda não tinham sido relatados no país. O estudo demonstra uma grande diversidade genética do HEV no estado de São Paulo e reforça o caráter zoonótico da HEV-3.(AU)

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Abstract Infectious viruses pose a threat to all living organisms, including humans, and can cause significant morbidity. Previous experience with pigs in medical education and research, rather than in domestic control settings, has led to a unique perspective on viral infections in swine. In this article, common porcine infectious diseases have been listed, based mainly on the authors' experience thus far. For example, young domestic pigs that were used in surgical training and infected with hepatitis E were subjected to quarantine and isolation treatment, and attempts were made to develop a DNA vaccine for swine influenza arising from swine-to-human transmission. More recent research has focused on preventing infection by the African swine virus, a current threat. We hope that this article of porcine infectious diseases identified at the School of Medicine will help develop a breakthrough with regard to coronavirus disease.

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Pestivirus infections are important in the livestock industries, with infection occurring in cattle, sheep and pigs. The Pestivirus genus of the family Flaviviridae, includes four recognized species: bovine viral diarrhea virus 1 (BVDV-1), bovine viral diarrhea virus 2 (BVDV-2), border disease virus (BDV), and classical swine fever virus (CSFV). All pestivirus species can infect pigs, therefore accurate and specific pestivirus detection and differentiation is of great importance to assure control measures in swine populations. The aim of the study was the molecular detection of different pestiviruses in domestic and feral pigs. A total of 527 samples (92 pigs and 435 wild boars) were tested for pestiviruses detection using molecular assays. Eleven positive samples (6 wild boars and 5 domestic pigs) were identified using panpestivirus primers targeting the 5'- UTR region of the pestivirus RNA genome. Further all the positive samples were sequentially tested for detection of CSFV, BVDV-1 and BVDV-2 using specific primers. All RNAs were identified as positives for BVDV-1 and no amplification signals were obtained from BVDV-2 and CSFV. The current detection of BVDV-1 in clinical swine specimens highlights the important risk factor of swine population as reservoir and consequently carrier for BVDV.(AU)

As infecções por pestivírus são importantes nas indústrias pecuárias, com infecções em bovinos, ovinos e suínos. O gênero Pestivirus da família Flaviviridae inclui quatro espécies reconhecidas: vírus da diarreia viral bovina 1 (BVDV-1), vírus da diarreia viral bovina 2 (BVDV-2), vírus da doença de fronteira (VDF) e vírus da peste suína clássica (VPSC). Todas as espécies de pestivírus podem infectar porcos, portanto a detecção e diferenciação precisas e específicas de pestivírus são de grande importância para garantir medidas de controle nas populações suínas. O objetivo do estudo foi a detecção molecular de diferentes pestivírus em suínos domésticos e javali. Um total de 527 amostras (92 porcos e 435 javalis) foram testados para detecção de pestivírus usando ensaios moleculares. Onze amostras positivas (6 javalis e 5 porcos domésticos) foram identificadas usando iniciadores de panpestivírus visando a região 5'-UTR do genoma do RNA do pestivírus. Além disso, todas as amostras positivas foram testadas sequencialmente para detecção de VPSC, BVDV-1 e BVDV-2 usando iniciadores específicos. Todos os RNAs foram identificados como positivos para BVDV-1 e nenhum sinal de amplificação foi obtido do BVDV-2 e CSFV. A detecção atual do BVDV-1 em amostras clínicas de suínos destaca o importante fator de risco da população suína como reservatório e consequentemente portador do BVDV.(AU)

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With the advancement of wild boar distribution in the rural environment, its impacts are not limited to health in the pig sector, but the requirements for monitoring and control of the species are requirements laid down by the OIE for the recognition of classical swine fever free zone status. The construction of ecological models of favorability or suitability for the occurrence of pest species are necessary tools for the decision making on priority areas of management aiming at risk management. This work aims to map the level of suitability for the occurrence of wild boar in the southern state of Mato Grosso do Sul, as well as to identify the main risk variables for contact with the wild boar and evaluate the biosecurity measures adopted by commercial farms integrated in the south of the State of Mato Grosso do Sul. To evaluate the risk potential of wild boar for commercial and subsistence swine farming in southern Mato Grosso do Sul, a model of environmental suitability was constructed for this species in the swine producing region. This model considered different environmental strata, being the selection of the layers considered the physiological and behavioral characteristics of the species. In parallel, interviews were carried out in a sample of commercial farms integrating the region to survey the perception of the presence of the invasive species and the biosafety measures adopted. The results of this work indicate that the risk of contact among wild boars and animals reared in closed production systems may be high in the study area and only establishment of appropriate biosecurity measures that consider the characteristics and habits of the boar may prevent the intrusion of this species and contact with domestic swine. The built model can be considered of high reliability and it is recommended to apply it to other areas of the state, being a useful tool for the productive sector, environmental agencies and decision makers.(AU)

Com o avanço da distribuição do javali no ambiente rural, seus impactos não se restringem somente a sanidade suidea, embora as exigências quanto ao monitoramento e controle da espécie sejam exigências previstas pela OIE, para o reconhecimento do status de zona livre de peste suína clássica. A construção de modelos ecológicos de favorabilidade ou adequabilidade para a ocorrência de espécies-praga são ferramentas necessárias para as tomadas de decisão sobre áreas prioritárias de manejo visando gestão de risco. Este trabalho objetiva mapear o nível de adequabilidade para a ocorrência de javalis no sul do Estado de Mato Grosso do Sul, bem como levantar as principais variáveis de risco para o contato com o javali asselvajado e avaliar as medidas de biosseguridade adotadas por granjas comerciais integradas no sul do Estado do Mato Grosso do Sul. Para avaliar o potencial de risco exercido pelos javalis para a suinocultura comercial e de subsistência nesta região foi construído um modelo de adequabilidade ambiental para essa espécie na região produtora de suínos. Esse modelo considerou diferentes estratos ambientais, sendo que para a seleção das camadas consideram-se características fisiológicas e comportamentais da espécie. Em paralelo, entrevistas foram realizadas em uma amostragem de granjas comerciais de integração da região para levantamento da percepção quanto a presença da espécie invasora e as medidas de biossegurança adotadas. Os resultados desse trabalho indicam que o risco de contato entre javalis de vida livre e os animais criados em sistemas de produção fechados pode ser alto na área de estudo e somente estabelecimento de medidas de biosseguridade apropriadas, que considerem as características e hábitos do javali poderá impedir a intrusão dessa espécie e o contato com os suínos domésticos. O modelo construído pode ser considerado de elevada confiabilidade e recomenda-se a sua aplicação para as outras áreas do estado, sendo uma ferramenta útil para o setor produtivo, os órgãos ambientais e os tomadores de decisão.(AU)

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Swine can be infected by bovine viral diarrhea virus (BVDV). However, transmission routes among pigs are still unknown. The objective of the present study was to induce experimental infection of BVDV-1 in weaned piglets and to assess the potential transmission through pen back pond water, used to facilitate heat exchange of the pigs housed in barns. Two repetitions (BP1 and BP 2) were performed using 12 piglets proven to be free BVDV (n=6 per repetition) allocated into three groups: control, sentinels and infected with two piglets each. The piglets were placed in stainless steel isolators. The infected group received an inoculum containing BVDV-1, Singer strain. The piglets remained in the cabinets for 25 days, during which samples of nasal swab were collected daily and blood sampled weekly. At the end, the piglets were euthanized, necropsied and organ fragments were collected for histopathology, immunohistochemistry and RT-PCR. In the first experiment (BP1) the infected animals shed the virus between days 6 and 21 post-infection. Regarding the sentinel group, shedding occurred in only one piglet, on the 20th day after infection, and seroconversion was observed on the 25th day post-infection. In BP2, infected piglets I3 and I4 shed the virus on days 4 and 21 post-infection, respectively. Only one sentinel piglet (S3) she the virus on day 13 post-infection. Therefore, it was concluded that pigs can become infected with BVDV-1 and shed potentially infectious viral particles consequently, being able to transmit the virus to other pigs through back pond water.(AU)

Os suínos podem ser infectados pelo vírus da diarreia viral bovina (BVDV). No entanto, as vias de transmissão entre os suínos são ainda desconhecidas. O objetivo do presente estudo foi induzir a infecção experimental de BVDV-1 em leitões desmamados e avaliar a potencial transmissão pela lâmina d'água, que ajuda na troca de calor dos suínos alojados em baias. Duas repetições do experimento (BP1 e BP2) foram realizadas com 12 animais comprovadamente livres de BVDV (n=6 por repetição) alocados em três grupos: controle, sentinelas e infectados, com dois animais cada. Os animais foram mantidos em isoladores de aço inoxidável. O grupo infectado recebeu um inóculo contendo BVDV-1, estirpe Singer. Os animais permaneceram nos isoladores durante 25 dias e, durante esse período, amostras de suabe nasal foram coletadas diariamente e sangue coletado semanalmente. No final, os animais foram eutanasiados, necropsiados e fragmentos de órgãos foram coletados para histopatologia, imuno-histoquímica e RT-PCR. No primeiro experimento (BP1), os animais infectados excretaram partículas virais entre os dias 6 e 21 pós-infecção. Quanto ao grupo sentinela, a excreção ocorreu apenas em um animal, no 20º dia pós-infecção, e a soroconversão foi observada no 25º dia pós-infecção. Na BP2, os animais infectados I3 e I4 excretaram partículas virais nos dias 4 e 21 pós-infecção, respectivamente. Apenas um animal sentinela (S3) apresentou excreção no dia 13 pós-infecção. Concluiu-se que os suínos podem se infectar com BVDV-1 e excretar partículas virais potencialmente infecciosas, sendo capazes de transmitir o vírus a outros suínos através da lâmina d'água.(AU)

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Background: The farming of wild boars has growing due to the interest of the human consumption of this exotic meat. Such a development may pose an increased risk of disease transmission between boars and domestic animals. The wild boar population has increased in South America in the last years due the absence of predator causing economic losses due to direct damage to crops and risk of disease transmission. The genus Pestivirus within the family Flaviviridae are composed by four recognized species by the International Committee on the Taxonomy of Viruses (ICTV): classical swine fever virus (CSFV), border disease virus (BDV), bovine viral diarrhea virus type 1 (BVDV-1) and 2 (BVDV-2). Other putative species denoted as atypical pesitiviruses have been reported as ‘HoBi’-like virus, giraffe pestivirus, Bungowannah pestivirus, Pronghorn antelope virus, atypical porcine pestivirus (APPV), Norwegian rat pestivirus (NrPV) and Rhinolophus affinis bat pestivirus (RaPestV-1). CSFV is commonly detected in wild boars, but despite positive serology, bovine viral diarrhea virus (BVDV) was never detected in this animal species. Thereby, the present communication describes the first detection of BVDV in the lungs of captive boars using RT-PCR and DNA sequencing.Materials, Methods & Results: Forty lung samples from farmed wild boars were collected after slaughter in a commercial abattoir. The organs were crushed separately, centrifuged, and the supernatant was stored for further analysis. The total RNA was isolated using a phenol-based protocol and RT-PCR protocol that amplified 118 bp of 5’ untranslated region (5’UTR) was carried out. One out 40 samples resulted positive. The positive sample had partial fragments of 5’UTR and N terminal autoprotease (Npro) sequenced and analyzed. The strain LV Java/2012 presented 99% of identity in 5’UTR and 98% in Npro region with a BVDV-2 previously reported in bovines in Southern Brazil.[...]

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Porcine teschovirus (PTV), porcine sapelovirus (PSV), and enterovirus G (EV-G) are infectious agents specific to pig host species that are endemically spread worldwide. This study aimed to investigate the natural infection by these porcine enteric picornaviruses in wild boars (Sus scrofa scrofa) of Paraná state, Brazil, and to evaluate peccaries (Pecari tajacu and Tayassu pecari) as alternative host species for these viruses. Fecal samples (n=36) from asymptomatic wild boars (n=22) with ages ranging from 2 to 7 months old (young, n=14) and 2 to 4 years old (adult, n=8) and from peccaries (6 to 8 months old, n=14) were collected from a farm and a zoo, respectively, both located in Paraná state. Reverse transcription-polymerase chain reaction (RT-PCR) and nested-PCR (n-PCR) assays targeting the 5'non-translated region of the virus genome were used for screening the viruses. Porcine enteric picornaviruses were detected in 12 out of the 22 wild boar fecal samples. According to each of the viruses, EV-G was most frequently (11/22, 50%) detected, followed by PTV (10/22, 45.5%) and PSV (4/22, 18.2%). Regarding the age groups, young wild boars were more frequently (9/14, 64.3%) infected with PTV, PSV, and EV-G than adult animals (3/8, 37.4%). One n-PCR amplified product for each of the viruses was submitted to sequencing analysis and the nucleotide sequences were compared with the related viruses, which showed similarities varying from 97.7% to 100% for PTV, 92.4% to 96.2% for PSV, and 87.1% to 100% for EV-G. Peccaries tested negative for the viruses and in this study they did not represent infection reservoirs. This study is the first to report the molecular detection of PTV, PSV, and EV-G from captive wild boars in a South American country and the first to screen peccaries as alternative host species for porcine enteric picornavirus.

Teschovírus suíno (PTV), sapelovírus suíno (PSV) e enterovírus G(EV-G) são agentes infecciosos específicos da espécie suína que estão endemicamente disseminados em todo o mundo. O objetivo deste estudo foi investigar a infecção natural por estes picornavírus entéricos suínos em javalis (Sus scrofa scrofa) do estado do Paraná, Brasil e avaliar pecaris (Pecari tajacu e Tayassu pecari) como hospedeiros alternativos para estes vírus. Amostras fecais (n=36) de javalis assintomáticos (n=22) com idades de 2 a 7 meses (jovens, n=14) e 2 a 4 anos (adultos, n=8) e de pecaris (6 a 8 meses de idade, n=14) foram coletadas em um cativeiro e zoológico, respectivamente, ambos localizados no estado do Paraná. A transcrição reversa seguida por reações da polimerase em cadeia (RT-PCR) e nested-PCR com alvo na região 5'-não traduzida do genoma viral foram utilizadas para a identificação dos vírus. Picornavírus entéricos suínos foram detectados em 12 das 22 amostras fecais de javalis. De acordo com cada um dos vírus, EV-G foi mais frequentemente (11/22, 50%) detectado, seguido pelo PTV (10/22; 45,5%) e PSV (4/22; 18,2%). Considerando os grupos de idade, javalis jovens foram mais frequentemente (9/14; 64,3%) infectados com PTV, PSV e EV-G do que os javalis adultos (3/8; 37,4%). Um produto amplificado na nested-PCR para cada um dos vírus foi submetido à análise de sequenciamento e as sequências de nucleotídeos foram comparadas com vírus relacionados, o que mostrou que as similaridades variaram entre 97,7% a 100% para o PTV, 92,4% a 96,2% para o PSV e 87,1% a 100% para o EV-G. Os pecaris foram negativos para as viroses investigadas e neste estudo não se apresentaram como hospedeiros alternativos para as infecções. Este estudo é o primeiro a relatar a detecção molecular de PTV, PSV e EV-G em javalis de cativeiro de um país da América Latina e o primeiro a avaliar pecaris como espécie hospedeira alternativa para picornavírus entéricos suínos.