Quantity - but not diversity - of secreted peptides and proteins increases with age in the tree frog Pithecopus nordestinus

Amphibians inhabit the terrestrial environment, a conquest achieved after several evolutionary steps, which were still insufficient to make them completely independent of the aquatic environment. These processes gave rise to many morphological and physiological changes, making their skin (and cutaneous secretion) rich in bioactive molecules. Among the tree frogs, the secretion is composed mainly of peptides; but alkaloids, proteins and steroids can also be found depending on the species. The most known class of biologically active molecules is the antimicrobial peptides (AMPs) that act against bacteria, fungi and protozoans. Although these molecules are well-studied among the hylids, AMPs ontogeny remains unknown. Therefore, we performed peptidomic and proteomic analyses of Pithecopus nordestinus (formerly Phyllomedusa nordestina) in order to evaluate the peptide content in post-metamorphosed juveniles and adult individuals. Methods: Cutaneous secretion of both life stages of individuals was obtained and analyzed by LC-MS/MS after reduction and alkylation of disulfide bonds or reduction, alkylation and hydrolysis by trypsin. Results: Differences in the TIC profile of juveniles and adults in both treatments were observed. Moreover, the proteomic data revealed known proteins and peptides, with slight differences in the composition, according to the life stage and the treatment. AMPs were identified, and bradykinin-potentiating peptides were observed in trypsin-treated samples, which suggests a protein source of such peptide (cryptide). Conclusion: In general, skin secretion contents were similar between juveniles and adults, varying in quantity, indicating that the different stages of life are reflected in the number of molecules and not on their diversity.(AU)

Quantity - but not diversity - of secreted peptides and proteins increases with age in the tree frog Pithecopus nordestinus

Amphibians inhabit the terrestrial environment, a conquest achieved after several evolutionary steps, which were still insufficient to make them completely independent of the aquatic environment. These processes gave rise to many morphological and physiological changes, making their skin (and cutaneous secretion) rich in bioactive molecules. Among the tree frogs, the secretion is composed mainly of peptides; but alkaloids, proteins and steroids can also be found depending on the species. The most known class of biologically active molecules is the antimicrobial peptides (AMPs) that act against bacteria, fungi and protozoans. Although these molecules are well-studied among the hylids, AMPs ontogeny remains unknown. Therefore, we performed peptidomic and proteomic analyses of Pithecopus nordestinus (formerly Phyllomedusa nordestina) in order to evaluate the peptide content in post-metamorphosed juveniles and adult individuals. Methods: Cutaneous secretion of both life stages of individuals was obtained and analyzed by LC-MS/MS after reduction and alkylation of disulfide bonds or reduction, alkylation and hydrolysis by trypsin. Results: Differences in the TIC profile of juveniles and adults in both treatments were observed. Moreover, the proteomic data revealed known proteins and peptides, with slight differences in the composition, according to the life stage and the treatment. AMPs were identified, and bradykinin-potentiating peptides were observed in trypsin-treated samples, which suggests a protein source of such peptide (cryptide). Conclusion: In general, skin secretion contents were similar between juveniles and adults, varying in quantity, indicating that the different stages of life are reflected in the number of molecules and not on their diversity.(AU)

Citral as food additive for common snook - zootechnical parameters and digestive enzymes / Citral como aditivo na ração para robalo flecha - parâmetros zootécnicos e enzimas digestivas

Essential oils of plants whose main compound is citral showed beneficial effects when added to fish feed. The objective of the present study was to evaluate the dietary effect of the addition of citral on zootechnical parameters and digestive enzyme activities of Centropomus undecimalis. Juveniles were fed for 45 days with diets containing different amounts of citral (0.0 - control, 0.5, 1.0, and 2.0 mL per kg of diet). The water quality parameters were kept stable during the experiment and no mortality was observed. At the end of the experimental period, the treatment 0.5 mL citral per kg of diet had the lowest weight gain and specific growth rate, and the highest feed conversion, while the same parameters did not differ between the other treatments. Pepsin activity was higher in the stomach of fish fed with 0.5 mL citral per kg of diet and amylase activity was higher in the intestine of fish fed with 0.5 and 2.0 mL citral per kg of diet compared to the control group. Intestinal lipase activity was higher in all groups that were fed with citral compared to the control group. Chymotrypsin and trypsin activities showed no difference between groups. Consequently, dietary addition of citral at any of the levels tested is not recommended for common snook.(AU)

Óleos essenciais de plantas, cujo composto majoritário é o citral, mostraram efeitos benéficos quando adicionados à ração para peixes. O objetivo do presente estudo foi avaliar o efeito da adição de citral sobre os parâmetros zootécnicos e atividades das enzimas digestivas de Centropomus undecimalis. Os juvenis foram alimentados por 45 dias com dietas contendo diferentes quantidades de citral (0,0 - controle, 0,5, 1,0 e 2,0 mL por kg de ração). Os parâmetros de qualidade da água foram mantidos estáveis ​​durante o experimento e nenhuma mortalidade foi observada. Ao final do período experimental, o tratamento 0,5 mL citral por kg de ração teve o menor ganho de peso e taxa de crescimento específico e a maior conversão alimentar, enquanto os mesmos parâmetros não diferiram entre os demais tratamentos. A atividade da pepsina foi maior no estômago de peixes alimentados com 0,5 mL de citral por kg de ração e a atividade de amilase foi maior no intestino de peixes alimentados com 0,5 e 2,0 mL citral por kg de ração comparado ao grupo controle. A atividade da lipase intestinal foi maior em todos os grupos que foram alimentados com citral, em comparação ao grupo controle. As atividades de quimotripsina e tripsina não mostraram diferença entre os grupos. Consequentemente, a adição de citral na ração em qualquer um dos níveis testados não é recomendada para robalo flecha.(AU)

Different feeding habits influence the activity of digestive enzymes in freshwater fish / Diferentes hábitos alimentares influenciam a atividade das enzimas digestivas em peixes de água doce

The aim of this study was to verify the activity of some digestive enzymes in four fish species with different feeding habits. Knowledge of these enzymatic activities can help us to understand the species" digestive processes. The species chosen for this study were Ctenopharyngodon idella (herbivore), Rhamdia quelen (omnivore), Leporinus obtusidens (omnivore) and Hoplias malabaricus (carnivore). The digestive tract of these species was divided into four portions to estimate enzymatic activity: stomach, anterior, mid and posterior intestine. Ctenopharyngodon idella had the highest amylase and maltase activities in all portions of the gut, followed by L. obtusidens . The highest trypsin activity was observed in all gut portions of H. malabaricus, followed by the mid intestine of L. obtusidens and the anterior intestine of C. idella . The highest chymotrypsin activity was found in all portions of C. idella followed by the anterior intestines of R. quelen, L. obtusidens and H. malabaricus . In the stomach, acid protease activity was significantly lower in R. quelen and L. obtusidens compared to H. malabaricus. Ctenopharyngodon idella showed high activity of enzymes that hydrolyze carbohydrates, represented in this study by amylase and maltase and H. malabaricus showed higher protease activity and low amylase activity.

O objetivo deste estudo foi verificar a atividade de algumas enzimas digestivas em quatro espécies de peixes com hábitos alimentares diferentes. O conhecimento das atividades dessas enzimas pode nos ajudar a compreender os processos digestivos das espécies. As espécies escolhidas para este estudo foram Ctenopharyngodon idella (herbívoro), Rhamdia quelen (onívoro), Leporinus obtusidens (onívoro) e Hoplias malabaricus (carnívoro). O trato digestivo dessas espécies foi dividido em quatro partes para estimar a atividade enzimática: estômago, intestino anterior, médio e posterior. Ctenopharyngodon idella teve a maior atividade da amilase e maltase em todas as porções do intestino, seguido por L. obtusidens . A maior atividade da tripsina foi observada em todas as porções do intestino de H. malabaricus , seguido pelo intestino médio de L. obtusidens e o intestino anterior de C. idella . A maior atividade de quimotripsina foi encontrada em todas as partes do intestino do C. idella , seguida pelo intestino anterior de R. quelen, L. obtusidens e H. malabaricus . No estômago, a atividade de protease ácida foi significativamente menor em R. quelen e L. obtusidens comparado com H. malabaricus. Ctenopharyngodon idella mostrou alta atividade de enzimas que hidrolisam carboidratos, representadas neste estudo por amilase e maltase e H. malabaricus mostrou maior atividade de proteases e baixa atividade de amilase.

Different feeding habits influence the activity of digestive enzymes in freshwater fish / Diferentes hábitos alimentares influenciam a atividade das enzimas digestivas em peixes de água doce

The aim of this study was to verify the activity of some digestive enzymes in four fish species with different feeding habits. Knowledge of these enzymatic activities can help us to understand the species" digestive processes. The species chosen for this study were Ctenopharyngodon idella (herbivore), Rhamdia quelen (omnivore), Leporinus obtusidens (omnivore) and Hoplias malabaricus (carnivore). The digestive tract of these species was divided into four portions to estimate enzymatic activity: stomach, anterior, mid and posterior intestine. Ctenopharyngodon idella had the highest amylase and maltase activities in all portions of the gut, followed by L. obtusidens . The highest trypsin activity was observed in all gut portions of H. malabaricus, followed by the mid intestine of L. obtusidens and the anterior intestine of C. idella . The highest chymotrypsin activity was found in all portions of C. idella followed by the anterior intestines of R. quelen, L. obtusidens and H. malabaricus . In the stomach, acid protease activity was significantly lower in R. quelen and L. obtusidens compared to H. malabaricus. Ctenopharyngodon idella showed high activity of enzymes that hydrolyze carbohydrates, represented in this study by amylase and maltase and H. malabaricus showed higher protease activity and low amylase activity. (AU)

O objetivo deste estudo foi verificar a atividade de algumas enzimas digestivas em quatro espécies de peixes com hábitos alimentares diferentes. O conhecimento das atividades dessas enzimas pode nos ajudar a compreender os processos digestivos das espécies. As espécies escolhidas para este estudo foram Ctenopharyngodon idella (herbívoro), Rhamdia quelen (onívoro), Leporinus obtusidens (onívoro) e Hoplias malabaricus (carnívoro). O trato digestivo dessas espécies foi dividido em quatro partes para estimar a atividade enzimática: estômago, intestino anterior, médio e posterior. Ctenopharyngodon idella teve a maior atividade da amilase e maltase em todas as porções do intestino, seguido por L. obtusidens . A maior atividade da tripsina foi observada em todas as porções do intestino de H. malabaricus , seguido pelo intestino médio de L. obtusidens e o intestino anterior de C. idella . A maior atividade de quimotripsina foi encontrada em todas as partes do intestino do C. idella , seguida pelo intestino anterior de R. quelen, L. obtusidens e H. malabaricus . No estômago, a atividade de protease ácida foi significativamente menor em R. quelen e L. obtusidens comparado com H. malabaricus. Ctenopharyngodon idella mostrou alta atividade de enzimas que hidrolisam carboidratos, representadas neste estudo por amilase e maltase e H. malabaricus mostrou maior atividade de proteases e baixa atividade de amilase. (AU)

Exocrine pancreatic insufficiency: a case report / Insuficiência pancreática exócrina: relato de caso

Exocrine pancreatic insufficiency (EPI), a common disease indogs, is mainly caused by pancreatic acinar atrophy, followedby chronic pancreatitis and pancreatic duct obstruction, withconsequent inadequate secretion of pancreatic enzymes.The present paper is a case report observed in a male eightyear-old dog that had the diagnosis of EPI suggested by thefecal proteolytic activity test (X-ray film proof). To date, thetreatment given with pancreatic enzyme supplementation andadequate diet has been able to promote the resolution of theclinical condition.

A insuficiência pancreática exócrina (IPE), doença comum principalmenteem cães, é causada, usualmente, pela atrofia acinar dopâncreas, seguida de pancreatite crônica e obstrução do ductopancreático, com consequente secreção inadequada de enzimaspancreáticas. O caso clínico descrito foi observado em um cão,macho, de oito anos de idade, em que o diagnóstico de IPE foilevantado pelo resultado do teste da atividade proteolítica fecal(prova do filme de raio-x). Até o presente momento, o tratamentoinstituído com suplementação de enzimas pancreáticas eadequação da dieta propiciou a resolução do quadro clínico.

Exocrine pancreatic insufficiency: a case report / Insuficiência pancreática exócrina: relato de caso

Exocrine pancreatic insufficiency (EPI), a common disease indogs, is mainly caused by pancreatic acinar atrophy, followedby chronic pancreatitis and pancreatic duct obstruction, withconsequent inadequate secretion of pancreatic enzymes.The present paper is a case report observed in a male eightyear-old dog that had the diagnosis of EPI suggested by thefecal proteolytic activity test (X-ray film proof). To date, thetreatment given with pancreatic enzyme supplementation andadequate diet has been able to promote the resolution of theclinical condition.(AU)

A insuficiência pancreática exócrina (IPE), doença comum principalmenteem cães, é causada, usualmente, pela atrofia acinar dopâncreas, seguida de pancreatite crônica e obstrução do ductopancreático, com consequente secreção inadequada de enzimaspancreáticas. O caso clínico descrito foi observado em um cão,macho, de oito anos de idade, em que o diagnóstico de IPE foilevantado pelo resultado do teste da atividade proteolítica fecal(prova do filme de raio-x). Até o presente momento, o tratamentoinstituído com suplementação de enzimas pancreáticas eadequação da dieta propiciou a resolução do quadro clínico.(AU)

In vitro interaction of bovine herpesvirus 1 with uterine tube epithelial cells and oocytes / Interação in vitro do herpesvírus bovino tipo 1 com células epiteliais da tuba uterina e oócitos

The aims of this study were to assess in vitro if bovine oocytes and oviductal epithelial cells from slaughterhouses for in vitro fertilization use may be infected with bovine herpesvirus 1; to analyze whether the treatment with trypsin according to the International Embryo Transfer Society guideline is efficient to inactivate the bovine herpesvirus 1; to morphologically study the virus-oocyte interaction through optical microscopy. In this study, Madin Darby Bovine Kidney (MDBK) cells that were co-cultured with oocytes matured in vitro and exposed to bovine herpesvirus 1 showed a cytopathic effect. The nested polymerase chain reaction for the supernatant was positive for the bovine herpesvirus 1, thus suggesting that the cytopathic effect observed in the MDBK monolayer was seen due to virus replication and not because of any culture toxicity. It was also observed cytopathic effect and positive nested polymerase chain reaction in MDBK cells co-cultured with in vitro maturated oocytes free of virus, but that were co-cultured in uterine epithelial cells pre-infected with bovine herpesvirus 1 and washed or not with trypsin, demonstrating an oocyte contamination by the virus. When trypsin-washing efficacy was evaluated, we could observe that the trypsin treatment was not able to eliminate the bovine herpesvirus 1 of the oocytes, and it was not observed any morphological difference in the infected oocytes.

Os objetivos do presente estudo foram avaliar in vitro se oócitos bovinos e células epiteliais de oviduto provenientes de abatedouros para uso em fertilização in vitro podem ser infectados com o herpesvírus bovino tipo 1; analisar se o tratamento com tripsina padronizado pelo International Embryo Transfer Society é eficiente para inativar o herpesvírus bovino tipo 1; estudar morfologicamente a interação vírus e oócito pela microscopia óptica. Neste estudo, as células Madin Darby Bovine Kidney (MDBK), que foram cocultivadas com oócitos maturados in vitro e expostos ao herpesvírus bovino tipo 1, apresentaram efeito citopático. A reação em cadeia da polimerase aninhada ao sobrenadante foi positiva para o herpesvírus bovino tipo 1, sugerindo que o efeito citopático observado na monocamada MDBK foi em função da replicação do vírus, mas não devido a qualquer toxicidade da cultura. Também foram mostrados efeito citopático e reação em cadeia da polimerase aninhada positivos em células MDBK cocultivadas com oócitos maturados in vitro isentos de vírus, porém que foram cocultivados em células epiteliais uterinas previamente infectadas com herpesvírus bovino tipo 1, que se lavou ou não com tripsina, demonstrando uma contaminação pelo vírus do oócito. Quando foi avaliada a eficácia de lavagem com a tripsina, foi possível notar que este tratamento não foi capaz de eliminar o herpesvírus bovino tipo 1 dos oócitos, e não foi observada qualquer diferença morfológica nos oócitos infectados.

In vitro interaction of bovine herpesvirus 1 with uterine tube epithelial cells and oocytes / Interação in vitro do herpesvírus bovino tipo 1 com células epiteliais da tuba uterina e oócitos

The aims of this study were to assess in vitro if bovine oocytes and oviductal epithelial cells from slaughterhouses for in vitro fertilization use may be infected with bovine herpesvirus 1; to analyze whether the treatment with trypsin according to the International Embryo Transfer Society guideline is efficient to inactivate the bovine herpesvirus 1; to morphologically study the virus-oocyte interaction through optical microscopy. In this study, Madin Darby Bovine Kidney (MDBK) cells that were co-cultured with oocytes matured in vitro and exposed to bovine herpesvirus 1 showed a cytopathic effect. The nested polymerase chain reaction for the supernatant was positive for the bovine herpesvirus 1, thus suggesting that the cytopathic effect observed in the MDBK monolayer was seen due to virus replication and not because of any culture toxicity. It was also observed cytopathic effect and positive nested polymerase chain reaction in MDBK cells co-cultured with in vitro maturated oocytes free of virus, but that were co-cultured in uterine epithelial cells pre-infected with bovine herpesvirus 1 and washed or not with trypsin, demonstrating an oocyte contamination by the virus. When trypsin-washing efficacy was evaluated, we could observe that the trypsin treatment was not able to eliminate the bovine herpesvirus 1 of the oocytes, and it was not observed any morphological difference in the infected oocytes.(AU)

Os objetivos do presente estudo foram avaliar in vitro se oócitos bovinos e células epiteliais de oviduto provenientes de abatedouros para uso em fertilização in vitro podem ser infectados com o herpesvírus bovino tipo 1; analisar se o tratamento com tripsina padronizado pelo International Embryo Transfer Society é eficiente para inativar o herpesvírus bovino tipo 1; estudar morfologicamente a interação vírus e oócito pela microscopia óptica. Neste estudo, as células Madin Darby Bovine Kidney (MDBK), que foram cocultivadas com oócitos maturados in vitro e expostos ao herpesvírus bovino tipo 1, apresentaram efeito citopático. A reação em cadeia da polimerase aninhada ao sobrenadante foi positiva para o herpesvírus bovino tipo 1, sugerindo que o efeito citopático observado na monocamada MDBK foi em função da replicação do vírus, mas não devido a qualquer toxicidade da cultura. Também foram mostrados efeito citopático e reação em cadeia da polimerase aninhada positivos em células MDBK cocultivadas com oócitos maturados in vitro isentos de vírus, porém que foram cocultivados em células epiteliais uterinas previamente infectadas com herpesvírus bovino tipo 1, que se lavou ou não com tripsina, demonstrando uma contaminação pelo vírus do oócito. Quando foi avaliada a eficácia de lavagem com a tripsina, foi possível notar que este tratamento não foi capaz de eliminar o herpesvírus bovino tipo 1 dos oócitos, e não foi observada qualquer diferença morfológica nos oócitos infectados.(AU)

In vitro interaction of bovine herpesvirus 1 with uterine tube epithelial cells and oocytes / Interação in vitro do herpesvírus bovino tipo 1 com células epiteliais da tuba uterina e oócitos

The aims of this study were to assess in vitro if bovine oocytes and oviductal epithelial cells from slaughterhouses for in vitro fertilization use may be infected with bovine herpesvirus 1; to analyze whether the treatment with trypsin according to the International Embryo Transfer Society guideline is efficient to inactivate the bovine herpesvirus 1; to morphologically study the virus-oocyte interaction through optical microscopy. In this study, Madin Darby Bovine Kidney (MDBK) cells that were co-cultured with oocytes matured in vitro and exposed to bovine herpesvirus 1 showed a cytopathic effect. The nested polymerase chain reaction for the supernatant was positive for the bovine herpesvirus 1, thus suggesting that the cytopathic effect observed in the MDBK monolayer was seen due to virus replication and not because of any culture toxicity. It was also observed cytopathic effect and positive nested polymerase chain reaction in MDBK cells co-cultured with in vitro maturated oocytes free of virus, but that were co-cultured in uterine epithelial cells pre-infected with bovine herpesvirus 1 and washed or not with trypsin, demonstrating an oocyte contamination by the virus. When trypsin-washing efficacy was evaluated, we could observe that the trypsin treatment was not able to eliminate the bovine herpesvirus 1 of the oocytes, and it was not observed any morphological difference in the infected oocytes.(AU)

Os objetivos do presente estudo foram avaliar in vitro se oócitos bovinos e células epiteliais de oviduto provenientes de abatedouros para uso em fertilização in vitro podem ser infectados com o herpesvírus bovino tipo 1; analisar se o tratamento com tripsina padronizado pelo International Embryo Transfer Society é eficiente para inativar o herpesvírus bovino tipo 1; estudar morfologicamente a interação vírus e oócito pela microscopia óptica. Neste estudo, as células Madin Darby Bovine Kidney (MDBK), que foram cocultivadas com oócitos maturados in vitro e expostos ao herpesvírus bovino tipo 1, apresentaram efeito citopático. A reação em cadeia da polimerase aninhada ao sobrenadante foi positiva para o herpesvírus bovino tipo 1, sugerindo que o efeito citopático observado na monocamada MDBK foi em função da replicação do vírus, mas não devido a qualquer toxicidade da cultura. Também foram mostrados efeito citopático e reação em cadeia da polimerase aninhada positivos em células MDBK cocultivadas com oócitos maturados in vitro isentos de vírus, porém que foram cocultivados em células epiteliais uterinas previamente infectadas com herpesvírus bovino tipo 1, que se lavou ou não com tripsina, demonstrando uma contaminação pelo vírus do oócito. Quando foi avaliada a eficácia de lavagem com a tripsina, foi possível notar que este tratamento não foi capaz de eliminar o herpesvírus bovino tipo 1 dos oócitos, e não foi observada qualquer diferença morfológica nos oócitos infectados.(AU)

Purification of a membrane-bound trypsin-like enzyme from the gut of the velvetbean caterpillar (Anticarsia gemmatalis Hübner) / Purificação de uma enzima "tipo tripsina" não-solúvel do intestino da lagarta da soja (Anticarsia gemmatalis Hübner)

Disruption of protein digestion in insects by specific endoprotease inhibitors is being regarded as an alternative to conventional insecticides for pest control. To optimize the effectiveness of this strategy, the understanding of the endoprotease diversity of the target insect is crucial. In this sense, a membrane-bound trypsin-like enzyme from the gut of Anticarsia gemmatalis fifth-instar larvae was purified. Non-soluble fraction of the gut extract was solubilized with 3-[(3-cholamidopropyl)dimethylammonio]-1-propanesulfonate (CHAPS) and subjected to a p-aminobenzamidine affinity chromatography followed by anion-exchange chromatography. The yield of the purified enzyme was 11% with a purification factor of 143 and a final specific activity of 18.6 µM min.-1 mg-1 protein using N-α-benzoyl-L- Arg-p-nitroanilide (L-BApNA) as substrate. The purified sample showed a single band with proteolytic activity active and apparent molecular mass of 25 kDa on SDS-PAGE. Molecular mass determined by MALDI-TOF mass spectrometry was 28,632 ± 26 Da. Although the low recovery and the difficulties in purifying large enzyme amounts limited its further characterization, the results contribute for the understanding of the proteases present on A. gemmatalis gut, which are potential targets for natural or specifically designed protease inhibitors.

Comprometer a digestão de proteínas dos insetos pelo uso de inibidores específicos de endoproteases tem sido amplamente estudado como um método de controle de pragas alternativo ao uso dos inseticidas convencionais. No processo de otimização desta estratégia, o conhecimento da diversidade das endoproteases do inseto alvo torna-se crucial. Neste sentido, uma enzima "tipo-tripsina" ligada à membrana obtida do intestino de larvas do 5° instar de A. gemmatalis foi purificada. A fração insolúvel do extrato do intestino foi solubilizada com 3-[(3-cholamidopropyl)dimethylammonio]-1-propanesulfonate (CHAPS) e submetida à uma cromatografia de afinidade em uma coluna de p-aminobenzamidina, seguida por uma cromatografia de troca-aniônica. O rendimento da enzima purificada foi de 11% com fator de purificação de 143 e uma atividade específica final de 18.6 µM min.-1 mg-1 de proteína usando N-α-benzoyl-L- Arg-p-nitroanilide (L-BApNA) como substrato. Após a separação da amostra purificada por SDS-PAGE e incubação subsequente com caseína, uma única banda ativa com massa molecular aparente de 25 kDa foi observada. A massa molecular determinada por espectrometria de massa (MALDI-TOF) foi de 28,632 ± 26 Da. O baixo rendimento e as dificuldades em purificar grandes quantidades da enzima limitaram caracterização complementar. A observação desta enzima, no entanto, é mais uma etapa no processo de conhecer as endoproteases presentes no intestino de A. gemmatalis, alvos potenciais de inibidores de proteases naturais ou especificamente projetados.

Prospeção de inibidores de serinoproteinases em folhas de leguminosas arbóreas da floresta Amazônica / Prospecting serine proteinase inhibitors in leaves from leguminous trees of the Amazon forest

Os inibidores de proteinases são proteínas extensivamente investigadas nos tecidos de estocagem, mas pouco prospectadas em outros tecidos vegetais. O objetivo deste estudo foi detectar a presença de inibidores de serinoproteinases em extratos foliares de quinze espécies de leguminosas arbóreas da Amazônia. As espécies estudadas foram: Caesalpinia echinata, C. ferrea, Cedrelinga cateniformis, Copaifera multijuga, Dinizia excelsa, Enterolobium contortisiliquum, E. maximum, E. schomburgkii, Leucaena leucocephala, Ormosia paraensis, Parkia multijuga, P. pendula, P. platycephala, Swartzia corrugata e S. polyphylla. Folhas foram coletadas, secas a 30ºC durante 48 h, trituradas e submetidas à extração com NaCl (0,15 M, 10 por cento p/v) resultando no extrato total. Ensaios foram executados para determinar a concentração de proteínas e detectar a atividade inibitória contra a tripsina e quimotripsina bovina. Os teores de proteínas bruta e solúvel nos extratos foliares variaram de 7,9 a 31,2 por cento e 1,3 a 14,8 por cento, respectivamente. A atividade inibitória sobre a tripsina e quimotripsina foi observada em todos os extratos foliares. Contudo, nos extratos de E. maximum, L. leucocephala, P. pendula, S. corrugata e S. polyphylla a inibição foi maior sobre a tripsina, enquanto o extrato de P. multijuga foi mais efetivo contra a quimotripsina. Nós concluímos que nos extratos foliares de leguminosas arbóreas têm inibidores de serinoproteinases e exibem potencial aplicações biotecnológicas.

The proteinase inhibitors are proteins extensively investigated in tissue storage, but few prospected in other plant tissues. The aim of this study was to detect the presence of serine proteinase inhibitors in leaf extracts from fifteen species of leguminous trees of the Amazon forest. The species studied were Caesalpinia echinata, C. ferrea, Cedrelinga cateniformis, Copaifera multijuga, Dinizia excelsa, Enterolobium contortisiliquum, E. maximum, E. schomburgkii, Leucaena leucocephala, Ormosia paraensis, Parkia multijuga, P. pendula, P. platycephala, Swartzia corrugata and S. polyphylla. Leaves were collected, dried at 30ºC for 48 h, crushed and subjected to extraction with NaCl (0.15 M, 10 percent w/v), resulting in the total extract. Tests were performed to determine the concentration of proteins and to detect of inhibitory activity against bovine trypsin and chymotrypsin. The content of crude and soluble protein in leaf extracts varied from 7.9 to 31.2 percent and 1.3 to 14.8 percent, respectively. The inhibitory activity on trypsin and chymotrypsin was observed in all leaf extracts. However, in extracts of E. maximum, L. leucocephala, P. pendula, S. corrugata and S. polyphylla, the inhibition was greater on trypsin, while extract of P. multijuga was more effective against chymotrypsin. We conclude that leaf extracts of leguminous trees have serine proteinase inhibitors and show potential biotecnological applications.

Fatores antinutricionais e coeficientes de digestibilidade aparente da proteína de produtos de soja para o pacu (Piaractus mesopotamicus) / Anti-nutritional factors and protein apparent digestibility coefficients of soybeans sources to pacu (Piaractus mesopotamicus)

Este estudo teve como objetivo determinar as atividades dos inibidores de tripsina, hemaglutinante e teores de taninos no farelo de soja e na soja crua e processada, e avaliar o coeficiente de digestibilidade aparente da fração proteica para juvenis de pacu. Oscoeficientes de digestibilidade aparente da proteína da soja crua, extrusada, tostada e macerada foram determinadas usando óxido de cromo (0,5%) como marcador. Foi elaborada dieta de referência com 26% de proteína bruta e 4.352 kcal kg-1, e a cada alimentoavaliado foram substituídas 30% da dieta-teste. As fezes foram coletadas por pressão abdominal. Todos os produtos analisados apresentaram fatores antinutricionais, mas foiobservada menor atividade de inibidor de tripsina no farelo de soja. Sojas que receberam tratamento térmico apresentaram os melhores coeficientes de digestibilidade e menoresvalores de atividade hemaglutinante do que a soja crua. Não foram observados efeitos dos inibidores de tripsina e taninos sobre o coeficiente de digestibilidade da proteína, mas foiobservada relação negativa entre os teores de hemaglutinina com a digestibilidade da proteína bruta. Para a alimentação do pacu recomenda-se a utilização do farelo de soja e dasoja processada por extrusão ou tostada.(AU)

This study aimed to determine theactivities of trypsin inhibitors, hemagglutinant and tannin levels in soybean meal and in raw andprocessed soy, as well evaluate the protein apparent digestibility coefficient for pacu juveniles. The apparent coefficients of raw, extruded, toasted and milled soy were determined usingchromium oxide (0.5%) as marker. A reference diet was created with 26% crude protein and 4,352 kcal kg-1, with each feed containing 30% of the test diet. Feces were collected by abdominalpressure. All analyzed products presented anti-nutritional factors, but the lowest trypsin inhibitoractivity was observed in soybean meal. Soy that received thermal treatment presented better digestibility coefficients and lower hemagglutinating activity values than raw soy. No effects of trypsin and tannin inhibitor were observed on the protein digestibility coefficient, but a negative relationship was observed between hemagglutinin levels and protein digestibility coefficient. The use of soybean meal and extruded or toasted soy is recommended for pacu feeding.(AU)

Fatores antinutricionais e coeficientes de digestibilidade aparente da proteína de produtos de soja para o pacu (Piaractus mesopotamicus) / Anti-nutritional factors and protein apparent digestibility coefficients of soybeans sources to pacu (Piaractus mesopotamicus)

Este estudo teve como objetivo determinar as atividades dos inibidores de tripsina, hemaglutinante e teores de taninos no farelo de soja e na soja crua e processada, e avaliar o coeficiente de digestibilidade aparente da fração proteica para juvenis de pacu. Oscoeficientes de digestibilidade aparente da proteína da soja crua, extrusada, tostada e macerada foram determinadas usando óxido de cromo (0,5%) como marcador. Foi elaborada dieta de referência com 26% de proteína bruta e 4.352 kcal kg-1, e a cada alimentoavaliado foram substituídas 30% da dieta-teste. As fezes foram coletadas por pressão abdominal. Todos os produtos analisados apresentaram fatores antinutricionais, mas foiobservada menor atividade de inibidor de tripsina no farelo de soja. Sojas que receberam tratamento térmico apresentaram os melhores coeficientes de digestibilidade e menoresvalores de atividade hemaglutinante do que a soja crua. Não foram observados efeitos dos inibidores de tripsina e taninos sobre o coeficiente de digestibilidade da proteína, mas foiobservada relação negativa entre os teores de hemaglutinina com a digestibilidade da proteína bruta. Para a alimentação do pacu recomenda-se a utilização do farelo de soja e dasoja processada por extrusão ou tostada.

This study aimed to determine theactivities of trypsin inhibitors, hemagglutinant and tannin levels in soybean meal and in raw andprocessed soy, as well evaluate the protein apparent digestibility coefficient for pacu juveniles. The apparent coefficients of raw, extruded, toasted and milled soy were determined usingchromium oxide (0.5%) as marker. A reference diet was created with 26% crude protein and 4,352 kcal kg-1, with each feed containing 30% of the test diet. Feces were collected by abdominalpressure. All analyzed products presented anti-nutritional factors, but the lowest trypsin inhibitoractivity was observed in soybean meal. Soy that received thermal treatment presented better digestibility coefficients and lower hemagglutinating activity values than raw soy. No effects of trypsin and tannin inhibitor were observed on the protein digestibility coefficient, but a negative relationship was observed between hemagglutinin levels and protein digestibility coefficient. The use of soybean meal and extruded or toasted soy is recommended for pacu feeding.

Diferentes fontes proteicas em rações de leitões sobre atividade da tripsina e parâmetros sangüíneos / Different protein sources in rations of piglets on activity of trypsin and blood parameters

Foram utilizados 64 leitões, submetidos a oito tratamentos: ração com leite em pó (LP), três rações com níveis crescentes de plasma suíno (PS), três rações com níveis crescentes de ovo inteiro (OI) eração com alto nível de farelo de soja (FS). Foi coletado sangue dos animais aos 27 e 34 dias de idade para avaliação dos parâmetros sangüíneos, e aos 28 e 35 dias de idade quatro animais por tratamento foram abatidos para coleta do pâncreas e posterior determinação do peso absoluto (PA) e peso relativo (PR) do pâncreas e da atividade datripsina (AT). Os tratamentos não influenciaram significativamente o PA e a AT. Verificou-se efeito significativo dos níveis crescentes de PS,com redução linear dos leucócitos e aumento do volume globular,aos 27 dias; enquanto aos 34 dias, observou-se aumento linear das hemácias. Aos 27 dias, os animais arraçoados com níveis de PS apresentaram menor percentagem de eosinófilos do que aqueles arraçoados com níveis de OI. A utilização de plasma suíno promoveu menor estímulo à resposta imune, enquanto que a utilização de ovo inteiro promoveu maior resposta humoral dos leitões.(AU)

Were used 64 piglets submitted eight treatments: ration with skim milk (SM), three rations with crescent levels of swine plasma (SP),three rations with whole egg (WE) and a ration with high inclusion of soybean meal (SB). Were monitored the blood parameters (BP) in pigs at 27 and at 34 days of age. The piglets were slaugther at 28 and at 35 days of age, for collections pancreas and posterior mensurements of absolut (AW) and relative weigth (RW) of pancreas and trypsinactivity (TA). Treatments not influencied AW and TA. Significant effect of the crescent levels was verified of SP, with lineal reduction ofthe leukocytes and increase of the globular volume, to the 27 days;while to the 34 days, lineal increase of the hematias was observed. At27 days, animals feds rations with crescent levels of SP have inferior percentage of e osinophils than others that consumed crescent levelsof WE. The utilization of SP promoted smaller stimulus to the immune reply, while the use of WE promoted larger humoral reply of the piglets.(AU)

O efeito das enzimas hialuronidase e tripsina na liquefação do sêmen de macacos pregos (Cebus apella) / The effect of hyaluronidase and trypsin ensymes on liquefaction of semen in capuchin monkey (Cebus apella)

Os efeitos das enzimas hialuronidase e tripsina foram avaliados quanto à liquefação, motilidade, vigor e integridade do acrossoma, no sêmen de seis macacos pregos (Cebus apeiia), mantidos na Fundação Parque Zoológico de São Paulo. O sêmen foi colhido por eletroejaculação, após anestesia geral, e a fração líquida foi imediatamente avaliada. A fração coagulada do sêmen foi tratada com as enzimas hialuronidase e tripsina, na dose de 1mg/ml, diluídas em meio 199 (Nutricel, Campinas/SP, Brasil), na proporção 1:4 e examinada após 5 e 15 minutos. Test t de Student foi utilizado para comparar os tratamentos. Não houve diferença significativa quanto a motilidade, vigor e integridade de acrossoma (p > 0.05), entre a fração de sêmen coagulado diluído em hialuronidase e tripsina, após cinco ou quinze minutos. No entanto, houve diferença significativa quanto a motilidade e vigor entre a fração líquida e a coagulada do sêmen (p < 0.05), após quinze minutos. Não houve diferença significativa com relação à integridade de acrossoma (p > 0.05) entre a fração líquida e coagulada do sêmen, após 15 minutos. De acordo com os resultados, podemos concluir que não houve efeito aparente na fração coagulada do sêmen tratado com as enzimas hialuronidase e tripsina com relação a motilidade, vigor e integridade do acrossoma. No entanto, houve diferença significativa entre a fração líquida e coagulada do sêmen com relação a motilidade e vigor, porém não quanto à integridade do acrossoma. De maneira geral, em ambos os tratamentos, não houve a completa dissolução do coágulo.(AU)

The effect of the enzymes hyaluronidase and trypsin were recorded on the motility, vigor and acrosome integrity in the semen of capuchin monkey (Cebus apella). The animals (n=6) were maintained at Fundação Parque Zoológico de São Paulo. Under anesthesia semen samples were collected by electroejaculation. Immediately after the ejaculation, the semen liquid fraction was analyzed for volume (ml), pH, motility (%), vigor (0-5), concentration (cells/ml), defects (%) and percentage of intact acrosome (%). The coagulated fraction was treated with a solution of hyaluronidase or trypsin, 1mg/ml in commercial medium (199-Nutricel, Campinas/SP, Brazil) in a proportion of 1:4 and the samples were examined after 5 and 15 minutes. The Student T Test (95%) was used to compare the treatments. There was no significant difference in the motility, vigor or acrossome integrity (p > 0.05) between coagulated fraction diluted either in trypsin or in hyaluronidase, after 5 or 15 minutes. However, there was significant difference in motility and vigor between liquid and coagulated fraction, after 15 minutes, for both treatments (p<0.05), but there were no difference in acrosome integrity (p > 0.05). In conclusion, there were no apparent effects in the coagulum for both treatments regarding motility, vigor and acrosome integrity. There were significant differences between liquid and coagulated fractions regarding motility and vigor, but not for acrosome integrity. In both enzyme treatments there were no complete dissolution of the coagulum.(AU)