Hydrogel composed of potassium acrylate, acrylamide, and mineral as soil conditioner under saline conditions

Hydrogels have potential as soil conditioners due to their high capacity to retain water and mitigate soil salinity. However, investigations under saline conditions are necessary because there are losses in both water absorption and salinity mitigation depending on the composition of hydrogel and ions involved in salinity. In this work, we studied a commercial hydrogel in two experiments. The first experiment was conducted in the laboratory to evaluate the absorption by the hydrogel of water with electrical conductivity (EC) of 0.5, 1.5, 3.0, and 4.5 dS m-1, promoted by NaCl. The second experiment was conducted in a greenhouse in a 2 × 4 factorial scheme (with and without hydrogel × EC of the first experiment). Although salinity reduced water absorption by hydrogel by 84 %, the polymer applied in a sandy soil under saline conditions reduced water losses by 58 %. However, hydrogel did not increase the final soil moisture (~ 0.10 g g-1). The polymer reduced Na+ concentration in leachate from 1,499 to 1,219 mg L-1 at the highest salinity level (4.5 dS m-1), but it increased Na+ soil availability by 0.1 mg kg-1 in comparison with polymer absence. Hydrogel application increased Na+ content in plants from 9 to 13 mg kg-1 at the highest salinity, while K+ content was 10 to 16 mg kg-1 lower than that observed without a polymer. Hydrogel 0.07 % (w/w) reduced maize biomass, indicating damage by monovalent ions, compromising the polymer potential under salinity.

Quality attributes for processing potato clones of purple-fleshed in Peru / Atributos de qualidade para o processamento industrial de clones de batata de polpa roxa no Peru

There is an increase in the demand and consumption of potato crisps and french chips in Peru. Therefore, the objective of the present work was to evaluate the industrial quality parameters of the physical and chemical characteristics of 17 advanced potato clones with purple pulp and select the clones with the best responses to the attributes of quality for industrial processing in Cajamarca, Peru. The results showed that the clones exhibited acceptable physical characteristics (tuber shape, depth of the eye, skin color, and color of the pulp) for processing, including the Amarilis variety. In addition, the clones reported tuber sizes within the recommended range for chips (40-60 mm) and french fries (≤ 45 mm). Clone CIP302306.19 produced the highest content of dry matter of the tuber (28.60%) and specific gravity (1,106 g cm-3 ), with low levels of reducing sugars (0.062%) and an acceptable range for the processing of the chips, while the lowest dry matter content (19.39%) and specific gravity (1.072 g cm-3 ), were reported by clone CIP302290.11. Most of the clones produced tubers with a dry matter content greater than 20% and a specific gravity greater than 0.080 g cm-3 , in addition to low levels of reducing sugars, and they are within the acceptable range for chip processing. The study indicated that the tested clones could potentially be used for chip production because of their significant effects on processing parameters.

Há um aumento na demanda de consumo de chips e batata frita no Perú. Portanto, o objetivo do presente trabalho foi avaliar os parâmetros de qualidade industrial das características físicas e químicas de 17 clones avançados de batata com polpa roxa e selecionar os clones com as melhores respostas aos atributos de qualidade para processamento industrial em Cajamarca, Perú. Os resultados mostraram que os clones exibiram características físicas aceitáveis (forma do tubérculo, profundidade do olho, cor da pele e cor da polpa) para processamento, incluindo a variedade Amarilis. Além disso, os clones mostraram tamanhos de tubérculos dentro do intervalo recomendado para batata chips (40-60 mm) e batata frita (≤ 45 mm). O clone CIP302306.19 produziu o maior teor de matéria seca de tubérculo (28,60%) e gravidade específica (1,106 g cm-3 ), com baixos níveis de açúcares redutores (0,062%) e uma faixa aceitável para o processamento dos chips, enquanto o menor teor de matéria seca (19,39%) e a gravidade específica (1,072 g cm-3 ) foram relatados pelo clone CIP302290.11. A maioria dos clones produziu tubérculos com um teor de matéria seca superior a 20% e uma gravidade específica maior que 0,080 g cm-3 , além de baixos níveis de açúcares redutores que estão dentro da faixa aceitável para processamento de chips. O estudo indicou que os clones testados podem potencialmente ser usados para a produção de chips devido aos seus efeitos significativos nos parâmetros de processamento.

Quality attributes for processing potato clones of purple-fleshed in Peru / Atributos de qualidade para o processamento industrial de clones de batata de polpa roxa no Peru

There is an increase in the demand and consumption of potato crisps and french chips in Peru. Therefore, the objective of the present work was to evaluate the industrial quality parameters of the physical and chemical characteristics of 17 advanced potato clones with purple pulp and select the clones with the best responses to the attributes of quality for industrial processing in Cajamarca, Peru. The results showed that the clones exhibited acceptable physical characteristics (tuber shape, depth of the eye, skin color, and color of the pulp) for processing, including the Amarilis variety. In addition, the clones reported tuber sizes within the recommended range for chips (40-60 mm) and french fries (≤ 45 mm). Clone CIP302306.19 produced the highest content of dry matter of the tuber (28.60%) and specific gravity (1,106 g cm-3 ), with low levels of reducing sugars (0.062%) and an acceptable range for the processing of the chips, while the lowest dry matter content (19.39%) and specific gravity (1.072 g cm-3 ), were reported by clone CIP302290.11. Most of the clones produced tubers with a dry matter content greater than 20% and a specific gravity greater than 0.080 g cm-3 , in addition to low levels of reducing sugars, and they are within the acceptable range for chip processing. The study indicated that the tested clones could potentially be used for chip production because of their significant effects on processing parameters.(AU)

Há um aumento na demanda de consumo de chips e batata frita no Perú. Portanto, o objetivo do presente trabalho foi avaliar os parâmetros de qualidade industrial das características físicas e químicas de 17 clones avançados de batata com polpa roxa e selecionar os clones com as melhores respostas aos atributos de qualidade para processamento industrial em Cajamarca, Perú. Os resultados mostraram que os clones exibiram características físicas aceitáveis (forma do tubérculo, profundidade do olho, cor da pele e cor da polpa) para processamento, incluindo a variedade Amarilis. Além disso, os clones mostraram tamanhos de tubérculos dentro do intervalo recomendado para batata chips (40-60 mm) e batata frita (≤ 45 mm). O clone CIP302306.19 produziu o maior teor de matéria seca de tubérculo (28,60%) e gravidade específica (1,106 g cm-3 ), com baixos níveis de açúcares redutores (0,062%) e uma faixa aceitável para o processamento dos chips, enquanto o menor teor de matéria seca (19,39%) e a gravidade específica (1,072 g cm-3 ) foram relatados pelo clone CIP302290.11. A maioria dos clones produziu tubérculos com um teor de matéria seca superior a 20% e uma gravidade específica maior que 0,080 g cm-3 , além de baixos níveis de açúcares redutores que estão dentro da faixa aceitável para processamento de chips. O estudo indicou que os clones testados podem potencialmente ser usados para a produção de chips devido aos seus efeitos significativos nos parâmetros de processamento.(AU)

Pregnancy modulates serum proteins, hematological and blood biochemical variables of the Pêga donkey / Prenhez modula as proteínas séricas, variáveis hematológicas e bioquímicas sanguíneas do jumento Pêga

Considering the scarcity of information regarding blood parameters of Pêga donkeys (Equus asinus), and the influence of factors such as breed and physiological status on these parameters, this study aimed to evaluate the influence of pregnancy on hematological, blood biochemical and serum protein profiles of the Pêga donkey, using samples from 59 female adult donkeys, 22 pregnant and 37 non-pregnant, kept under field conditions. The parameters measured were counts of red blood cells (RBC), white blood cells (WBC), basophils, eosinophils, bands, segmented neutrophils, lymphocytes, monocytes and platelets; and the levels of packed cell volume, hemoglobin concentration, alanine aminotransferase, aspartate aminotransferase, alkaline phosphatase, creatine kinase, gamma-glutamyl transferase, urea, glucose, cholesterol, triglycerides, total calcium, phosphorus, magnesium, chlorides, sodium, potassium, ionized calcium, creatinine, total protein, albumin, total, direct and indirect serum bilirubin. Serum protein fractionation was performed by sodium dodecyl sulphate-polyacrylamide gel electrophoresis (SDS-PAGE), which found 10 proteins: immunoglobulins A and G, ceruloplasmin, transferrin, albumin, haptoglobin, 1-acid glycoprotein, 138 kDa (MWP138), 33 kDa (MWP33) and 23 kDa (MWP23) molecular weight proteins. RBC and triglycerides were higher in pregnant females. Urea, Immunoglobulin A, MWP138 and MWP23 concentrations were higher in non-pregnant mares. This study presented differences from previous studies, and some differences in blood variables between pregnant and non-pregnant Pêga donkeys, confirming that pregnancy causes significant metabolic changes, which must be considered in the clinical evaluation of these animals.

Considerando a escassez de informações sobre as variáveis hematológicas dos jumentos Pêga e a influência de fatores como raça e estado fisiológico sobre estes parâmetros, este estudo teve como objetivo avaliar a influência da prenhez sobre os perfis hematológico, bioquímico sanguíneo e de proteínas séricas de jumentos Pêga, utilizando amostras de 59 jumentas adultas, 22 prenhes e 37 não prenhes, mantidas sob condições de campo. Foram mensuradas as contagens de hemácias, leucócitos, basófilos, eosinófilos, neutrófilos bastonetes, neutrófilos segmentados, linfócitos, monócitos e plaquetas; volume globular, concentração de hemoglobina e os níveis de alanina aminotransferase, aspartato aminotransferase, fosfatase alcalina, creatina quinase, gama glutamil transferase, ureia, glicose, colesterol, triglicérides, cálcio total, fósforo, magnésio, cloretos, sódio, potássio, cálcio ionizado, creatinina, proteína total, albumina, bilirrubina total, direta e indireta. O fracionamento de proteínas séricas foi realizado pela eletroforese em gel de acrilamida contendo dodecil sulfato de sódio (SDS-PAGE), o qual revelou 10 proteínas: imunoglobulinas A e G, ceruloplasmina, transferrina, albumina, haptoglobina, 1-glicoproteína ácida, proteína de peso molecular 138 kDa (PPM138), 33 kDa (PPM33) e 23 kDa (PPM23). A contagem de eritrócitos e os triglicérides séricos foram mais altos para as fêmeas prenhes. As concentrações de ureia, IgA, PPM138e PPM23 foram mais altas para jumentas não prenhes. Houve diferenças em relação a estudos anteriores, e diferenças entre as variáveis sanguíneas de jumentas Pêga prenhes e vazias confirmam que a prenhez causa mudanças metabólicas significantes, as quais devem ser consideradas na avaliação clínica destes animais.

Pregnancy modulates serum proteins, hematological and blood biochemical variables of the Pêga donkey / Prenhez modula as proteínas séricas, variáveis hematológicas e bioquímicas sanguíneas do jumento Pêga

Considering the scarcity of information regarding blood parameters of Pêga donkeys (Equus asinus), and the influence of factors such as breed and physiological status on these parameters, this study aimed to evaluate the influence of pregnancy on hematological, blood biochemical and serum protein profiles of the Pêga donkey, using samples from 59 female adult donkeys, 22 pregnant and 37 non-pregnant, kept under field conditions. The parameters measured were counts of red blood cells (RBC), white blood cells (WBC), basophils, eosinophils, bands, segmented neutrophils, lymphocytes, monocytes and platelets; and the levels of packed cell volume, hemoglobin concentration, alanine aminotransferase, aspartate aminotransferase, alkaline phosphatase, creatine kinase, gamma-glutamyl transferase, urea, glucose, cholesterol, triglycerides, total calcium, phosphorus, magnesium, chlorides, sodium, potassium, ionized calcium, creatinine, total protein, albumin, total, direct and indirect serum bilirubin. Serum protein fractionation was performed by sodium dodecyl sulphate-polyacrylamide gel electrophoresis (SDS-PAGE), which found 10 proteins: immunoglobulins A and G, ceruloplasmin, transferrin, albumin, haptoglobin, 1-acid glycoprotein, 138 kDa (MWP138), 33 kDa (MWP33) and 23 kDa (MWP23) molecular weight proteins. RBC and triglycerides were higher in pregnant females. Urea, Immunoglobulin A, MWP138 and MWP23 concentrations were higher in non-pregnant mares. This study presented differences from previous studies, and some differences in blood variables between pregnant and non-pregnant Pêga donkeys, confirming that pregnancy causes significant metabolic changes, which must be considered in the clinical evaluation of these animals.(AU)

Considerando a escassez de informações sobre as variáveis hematológicas dos jumentos Pêga e a influência de fatores como raça e estado fisiológico sobre estes parâmetros, este estudo teve como objetivo avaliar a influência da prenhez sobre os perfis hematológico, bioquímico sanguíneo e de proteínas séricas de jumentos Pêga, utilizando amostras de 59 jumentas adultas, 22 prenhes e 37 não prenhes, mantidas sob condições de campo. Foram mensuradas as contagens de hemácias, leucócitos, basófilos, eosinófilos, neutrófilos bastonetes, neutrófilos segmentados, linfócitos, monócitos e plaquetas; volume globular, concentração de hemoglobina e os níveis de alanina aminotransferase, aspartato aminotransferase, fosfatase alcalina, creatina quinase, gama glutamil transferase, ureia, glicose, colesterol, triglicérides, cálcio total, fósforo, magnésio, cloretos, sódio, potássio, cálcio ionizado, creatinina, proteína total, albumina, bilirrubina total, direta e indireta. O fracionamento de proteínas séricas foi realizado pela eletroforese em gel de acrilamida contendo dodecil sulfato de sódio (SDS-PAGE), o qual revelou 10 proteínas: imunoglobulinas A e G, ceruloplasmina, transferrina, albumina, haptoglobina, 1-glicoproteína ácida, proteína de peso molecular 138 kDa (PPM138), 33 kDa (PPM33) e 23 kDa (PPM23). A contagem de eritrócitos e os triglicérides séricos foram mais altos para as fêmeas prenhes. As concentrações de ureia, IgA, PPM138e PPM23 foram mais altas para jumentas não prenhes. Houve diferenças em relação a estudos anteriores, e diferenças entre as variáveis sanguíneas de jumentas Pêga prenhes e vazias confirmam que a prenhez causa mudanças metabólicas significantes, as quais devem ser consideradas na avaliação clínica destes animais.(AU)

Current applications and different approaches for microbial L-asparaginase production

L-asparaginase (EC 3.5.1.1) is an enzyme that catalysis mainly the asparagine hydrolysis in L-aspartic acid and ammonium. This enzyme is presented in different organisms, such as microorganisms, vegetal, and some animals, including certain rodent's serum, but not unveiled in humans. It can be used as important chemotherapeutic agent for the treatment of a variety of lymphoproliferative disorders and lymphomas (particularly acute lymphoblastic leukemia (ALL) and Hodgkin's lymphoma), and has been a pivotal agent in chemotherapy protocols from around 30 years. Also, other important application is in food industry, by using the properties of this enzyme to reduce acrylamide levels in commercial fried foods, maintaining their characteristics (color, flavor, texture, security, etc.) Actually, L-asparaginase catalyzes the hydrolysis of L-asparagine, not allowing the reaction of reducing sugars with this aminoacid for the generation of acrylamide. Currently, production of L-asparaginase is mainly based in biotechnological production by using some bacteria. However, industrial production also needs research work aiming to obtain better production yields, as well as novel process by applying different microorganisms to increase the range of applications of the produced enzyme. Within this context, this mini-review presents L-asparaginase applications, production by different microorganisms and some limitations, current investigations, as well as some challenges to be achieved for profitable industrial production.(AU)

Optimization of asparaginase production from Zymomonas mobilis by continuous fermentation / Otimização da produção de asparaginase de Zymomonas mobilis por fermentação contínua

Asparaginase is an enzyme used in clinical treatments as a chemotherapeutic agent and in food technology to prevent acrylamide formation in fried and baked foods. Asparaginase is industrially produced by microorganisms, mainly gram-negative bacteria. Zymomonas mobilis is a Gram-negative bacterium that utilizes glucose, fructose and sucrose as carbon source and has been known for its efficiency in producing ethanol, sorbitol, levan, gluconic acid and has recently aroused interest for asparaginase production. Current assay optimizes the production of Z. mobilis asparaginase by continuous fermentation using response surface experimental design and methodology. The studied variables comprised sucrose, yeast extract and asparagine. Optimized condition obtained 117.45 IU L-1 with dilution rate 0.20 h-1, yeast extract 0.5 g L-1, sucrose 20 g L-1 and asparagine 1.3 g L-1. Moreover, carbon:nitrogen ratio (1:0.025) strongly affected the response of asparaginase activity. The use of Z. mobilis by continuous fermentation has proved to be a promising alternative for the biotechnological production of asparaginase.(AU)

A asparaginase é uma enzima usada em tratamento clínico como agente quimioterapêutico e em tecnologia de alimentos na prevenção de formação de acrilamida em alimentos fritos e assados. Asparaginase é industrialmente produzida por micro-organismos, principalmente bactérias gram negativas. Zymomonas mobilis é uma bactéria gram negativa que utiliza glicose, frutose e sacarose como fonte de carbono e é conhecida por sua eficiência para produzir etanol, sorbitol, levana, ácido glicônico, e mais recentemente, tem despertado interesse no uso desse micro-organismo na produção de asparaginase. Este trabalho teve como objetivo otimizar a produção de asparaginase de Z. mobilis por fermentação contínua, pelo uso do delineamento experimental e da metodologia da superfície de resposta, testando as variáveis: sacarose, extrato de levedura e asparagina. A condição ótima alcançada, com produção de 117,45 UI L-1 foi na taxa de diluição 0,20 h-1, utilizando 0,5 g L-1 de extrato de levedura, 20 g L-1 de sacarose e 1,3 g L-1 de asparagina. Observou-se que a relação carbono:nitrogênio (1:0,025) exerceu forte influência na resposta da atividade de asparaginase. A utilização de Z. mobilis por fermentação contínua demonstrou ser uma alternativa promissora na produção biotecnológica da asparaginase.(AU)

PRODUÇÃO DE L-ASPARAGINASE E DIVERSIDADE DE FUNGOS ENDOFÍTICOS DE Mandevilla catimbauensis (APOCYNACEAE) DO PARQUE NACIONAL DO VALE DO CATIMBAU

A Caatinga, região exclusivamente brasileira, possui 47 unidades de conservação, entre estas, o Parque Nacional do Vale do Catimbau. O Parque é composto por inúmeras espécies endêmicas, entre elas, Mandevilla catimbauensis, uma espécie rara, pertencente à família Apocynaceae, e que está classificada como vulnerável à extinção. Os fungos endofíticos vivem no interior dos vegetais, sem lhes causar danos. Alguns endófitos possuem potencial para produzir substâncias bioativas como a enzima L-asparaginase. A L-asparaginase é utilizada no tratamento de diversos cânceres em humanos e outros animais. É também utilizada na indústria alimentícia para redução dos níveis de acrilamida dos alimentos. Pequisadores buscam fontes eucarióticas capazes de produzir L-asparaginase com menores efeitos colaterais. O objetivo desse estudo foi estimar a diversidade de fungos endofíticos presentes em M. catimbauensis e avaliar o potencial biotecnológico desses fungos na produção de L-asparaginase. Um total de 66 isolados foram obtidos e, a taxa de colonização dos fragmentos foi de 11,78%. As análises filogenéticas utilizando sequências de ITS e/ou LSU do DNAr revelaram a presença de sete ordens do filo Ascomycota. Um total de 18 táxons foi identificados. Os endófitos mais fequentemente isolados foram membros do gênero Phyllosticta (45,10%). A curva de acumulação de espécies não alcançou o ponto de estabilização. Uma nova espécie do gênero Phyllosticta foi descoberta, descrita e publicada como Phyllosticta catimbauensis. A produção de L-asparaginase foi estudada por 20 isolados. Um total de 14 fungos apresentou capacidade de produzir a enzima (0,48 U g-1 2,22 U g-1). A espécie P. catimbauensis exibiu capacidade significativa, e foi selecionada para realizar um planejamento fatorial 23. A melhor produção enzimática foi 2,25 U g-1, utilizando 1,5 g de L-asparagina, pH 5 e 1,5 g inóculo. Posteriormente, uma sequência experimental foi realizada e foi possível obter um aumento significativo na produção de L-asparaginase de 3,50 U g-1, utilizando 3,5 g de L-asparagina, pH 4,2 e 1 g de inóculo. Esse é o primeiro estudo sobre os fungos endofíticos de M. catimbauensis e também da produção de L-asparaginase por esses fungos. Essa pesquisa, poderá contribuir com o conhecimento da comunidade fúngica presente em M. catimbaunensis, além de auxiliar futuros estudos sobre a produção enzimática desses endófitos.

The Caatinga, an exclusively Brazilian region, has 47 conservation units, among them, the Catimbau Valley National Park. The park is compound of numerous endemic species, including Mandevilla catimbauensis, a rare species belonging to the family Apocynaceae, which is classified as vulnerable to extinction. Endophytic fungi live inside the plants without causing them harm. Some endophytes have the potential to produce bioactive substances like the enzyme L-asparaginase. L-asparaginase is used to treatment various cancers in humans and other animals. It is also used in the food industry to reduce the levels of acrylamide in food. Researchers pursue for eukaryotic sources capable of producing L-asparaginase with lower side effects. The aim of this study was to estimate the diversity of endophytic fungi present in M. catimbauensis and to evaluate the biotechnological potential of these fungi in the production of L-asparaginase. A total of 66 isolates were obtained and the rate of colonization of the fragments was 11.78%. Phylogenetic analyzes using ITS and / or LSU sequences of rDNA revealed the presence of seven orders of the Ascomycota phylum. A total of 18 taxa were identified. The most commonly isolated endophytes were members of the genus Phyllosticta (45.10%). The curve of species accumulation did not reach the point of stabilization. A new species of the genus Phyllosticta was discovered, described and published as Phyllosticta catimbauensis. The production of L-asparaginase was studied by 20 isolates. A total of 14 fungi were efficient to produce the enzyme (0,48 U g-1 2,22 U g-1). The species P. catimbauensis exhibited significant capacity and was selected to perform a factorial design 23. The best enzymatic production was 2,25 U g-1, using 1,5 g of L-asparagine, pH 5 and 1,5 g inoculum . Subsequently, an experimental sequence was performed and a significant increase in L-asparaginase production of 3,50 U g-1 was obtained using 3,5 g of L-asparagine, pH 4,2 and 1 g of inoculum. This is the first study on the endophytic fungi of M. catimbauensis and also on the production of L-asparaginase by these fungi. This research may contribute to the knowledge of the fungal community present in M. catimbaunensis, besides helping future studies on the enzymatic production of these endophytes.

PCR fluorescente associada à eletroforese capilar como ferramenta de diagnóstico de bactérias no sêmen / Fluorescent PCR associated with capillary electrophoresis as a diagnostic tool of bacteria in semen

Este estudo avaliou o limiar de detecção da técnica de PCR aliada à eletroforese capilar para diagnóstico da Brucella abortus em sêmen bovino. Doses inseminantes livres de patógenos foram contaminadas experimentalmente com B. abortus em escalas que variavam de 10(0) a 10(7) bactérias/mL e submetidas à extração de DNA pelo método de fenol/clorofórmio. A amplificação por PCR foi realizada utilizando-se oligonucleotídeos iniciadores, previamente descritos na literatura, BF-5'gcgctcaggctgccgacgcaa3' (cromóforo FAM) e BR-5'accagccattgcggtcggta3' para B. abortus.) Os pares de oligonucleotídeos geraram fragmentos de 193 pb. Após PCR, a visualização dos fragmentos foi realizada em gel de acrilamida 8% corada pela prata e por eletroforese capilar fluorescente em equipamento automático de análise de fragmentos de DNA. A detecção de DNA de B. abortus em sêmen bovino através de eletroforese capilar fluorescente foi possível a partir de concentração de 10(3) bactérias/mL, enquanto que em gel de poliacrilamida 8% o limite de detecção foi de 10(5) bactérias/mL. A eletroforese capilar demonstrou ser uma alternativa rápida, eficaz e de alta sensibilidade na detecção de DNA de Brucella em sêmen bovino, podendo ser uma valiosa ferramenta para a avaliação da sanidade do rebanho e para o controle de qualidade do sêmen produzido em centrais de inseminação artificial.

This study was performed in order to evaluate the detection limit of PCR with fluorescent capillary electrophoresis for Brucella abortus diagnosis in bovine semen. Negative bovine semen samples were artificially contaminated with B. abortus (10(0) to 10(7) bacteria/mL) and DNA was extracted by phenol/chloroform protocol. DNA was amplified by PCR with oligonucleotides previously described BF-5'gcgctcaggctgccgacgcaa3' (6-FAM labeled) and BR-5'accagccattgcggtcggta3' for B. abortus. Oligonucleotides generated DNA fragments of 193 bp. DNA fragments visualization was done under UV light at silver stained 8% poliacrylamide gel, and fluorescent capillary electrophoresis performed in an automatic DNA fragment analyzer. The detection limit of capillary electrophoresis for B. abortus was 10(3) bacteria/mL, while for silver stained 8% poliacrylamide gel it was 10(5) bacteria/mL. PCR with fluorescent capillary electrophoresis is fast, efficient and highly sensitive test for DNA detection of Brucella in bovine semen, and itcan be an important tool for health evaluation of the herd and semen sanitary control in artificial insemination centers.

PCR fluorescente associada à eletroforese capilar como ferramenta de diagnóstico de bactérias no sêmen / Fluorescent PCR associated with capillary electrophoresis as a diagnostic tool of bacteria in semen

Este estudo avaliou o limiar de detecção da técnica de PCR aliada à eletroforese capilar para diagnóstico da Brucella abortus em sêmen bovino. Doses inseminantes livres de patógenos foram contaminadas experimentalmente com B. abortus em escalas que variavam de 10(0) a 10(7) bactérias/mL e submetidas à extração de DNA pelo método de fenol/clorofórmio. A amplificação por PCR foi realizada utilizando-se oligonucleotídeos iniciadores, previamente descritos na literatura, BF-5'gcgctcaggctgccgacgcaa3' (cromóforo FAM) e BR-5'accagccattgcggtcggta3' para B. abortus.) Os pares de oligonucleotídeos geraram fragmentos de 193 pb. Após PCR, a visualização dos fragmentos foi realizada em gel de acrilamida 8% corada pela prata e por eletroforese capilar fluorescente em equipamento automático de análise de fragmentos de DNA. A detecção de DNA de B. abortus em sêmen bovino através de eletroforese capilar fluorescente foi possível a partir de concentração de 10(3) bactérias/mL, enquanto que em gel de poliacrilamida 8% o limite de detecção foi de 10(5) bactérias/mL. A eletroforese capilar demonstrou ser uma alternativa rápida, eficaz e de alta sensibilidade na detecção de DNA de Brucella em sêmen bovino, podendo ser uma valiosa ferramenta para a avaliação da sanidade do rebanho e para o controle de qualidade do sêmen produzido em centrais de inseminação artificial.(AU)

This study was performed in order to evaluate the detection limit of PCR with fluorescent capillary electrophoresis for Brucella abortus diagnosis in bovine semen. Negative bovine semen samples were artificially contaminated with B. abortus (10(0) to 10(7) bacteria/mL) and DNA was extracted by phenol/chloroform protocol. DNA was amplified by PCR with oligonucleotides previously described BF-5'gcgctcaggctgccgacgcaa3' (6-FAM labeled) and BR-5'accagccattgcggtcggta3' for B. abortus. Oligonucleotides generated DNA fragments of 193 bp. DNA fragments visualization was done under UV light at silver stained 8% poliacrylamide gel, and fluorescent capillary electrophoresis performed in an automatic DNA fragment analyzer. The detection limit of capillary electrophoresis for B. abortus was 10(3) bacteria/mL, while for silver stained 8% poliacrylamide gel it was 10(5) bacteria/mL. PCR with fluorescent capillary electrophoresis is fast, efficient and highly sensitive test for DNA detection of Brucella in bovine semen, and itcan be an important tool for health evaluation of the herd and semen sanitary control in artificial insemination centers.(AU)

Acute phase proteins: a potential approach for diagnosing chronic infection by Trypanosoma vivax / Proteínas de fase aguda: uma possível abordagem para diagnóstico de infecção crônica por Trypanosoma vivax

The present study aimed to assess potential changes in acute phase proteins in sheep experimentally infected with Trypanosoma vivax. There were studied eight male sheep, four used as controls and four infected with 10(5) T. vivax trypomastigotes. Blood samples were collected at two points times before infection and then at 5,7, 9, 11, 13, 15, 20, 30, 45, 60, 75, 90, 105 and 120 days post-infection (dpi). Blood samples were centrifuged and allotted, and acute phase proteins were then separated by electrophoresis on acrylamide gel containing sodium dodecyl sulfate. Protein concentrations were determined by computer-assisted densitometry. Total protein was determined by colorimetric biuret method. Trypanosomes were counted daily using a 5 mL aliquot of blood smear on a glass slide under a 22 × 22 mm coverslip. Parasites were counted in 100 microscopic fields (40× magnification), and then multiplied by a correction factor. The results were expressed as parasites per mL of blood. For statistical analyses, we used the Wilcoxon test at 5% significance level. There was found a reduction in several acute phase proteins and increase in antitrypsin and transferrin. This finding can be used for the diagnosis of T. vivax infection, especially in chronic infection.(AU)

O objetivo do presente estudo foi verificar possíveis alterações nas proteínas de fase aguda em ovinos infectados experimentalmente com Trypanosoma vivax. Para tanto, foram utilizados oito ovinos machos, sendo quatro usados como controle e quatro infectados com 10(5) tripomastigotas de T. vivax. Colheram-se amostras de sangue em dois tempos antes da infecção e, posteriormente, aos 5, 7, 9, 11, 13, 15, 20, 30, 45, 60, 75, 90, 105 e 120 dias após a infecção (dpi); após centrifugação e aliquotização das amostras. As proteínas de fase aguda foram separadas por eletroforese em gel de acrilamida, contendo dodecil sulfato de sódio, e suas concentrações foram determinadas através de densitometria computadorizada. A dosagem de proteína total foi realizada pelo método colorimétrico do biureto. A contagem dos tripanossomas foi realizada diariamente, utilizando-se uma alíquota de 5 µL de sangue disperso em lâmina de microscopia, sob lamínula de 22 × 22 mm, contando-se os parasitos em 100 campos microscópicos, com objetiva de 40×, multiplicados pelo fator de correção do microscópio, e o resultado expresso em parasitos por mL de sangue. Para a análise estatística, empregou-se o teste de Wilcoxon a 5% de probabilidade. Foi observada a diminuição de diversas proteínas de fase aguda e aumento de antitripsina e transferrina que podem ser utilizadas para auxiliar no diagnóstico da infecção por T. vivax, principalmente na fase crônica da infecção.(AU)

Proteínas séricas de potros da raça Puro Sangue Árabe recém-desmamados ou com mais de trinta dias de desmame / Serum protein profile in Arabian foals recently weaned or at more than thirty days after weaning

A fase perinatal do desenvolvimento constitui um dos períodos de vida mais desafiadores para o sistema imunológico dos potros. O objetivo do presente estudo foi verificar o perfil protéico sérico de parâmetros relacionados à imunidade de equinos jovens no período perinatal, verificando-se a transferência de imunidade passiva. Oito animais desmamados há um dia, formaram o Grupo 1 (G1), enquanto vinte animais desmamados há mais de trinta dias formaram o Grupo 2 (G2). A concentração sérica de proteína total foi determinada por refratometria. Para o fracionamento das proteínas, utilizou-se eletroforese em gel de acrilamida. Os resultados obtidos foram submetidos à análise de medidas repetidas e ao teste Tukey (p<0,05) para comparação das médias. As concentrações de IgA apresentaram diferença (p<0,05) entre os grupos, porém os valores observados encontravam-se dentro do considerado normal para equinos adultos. Não houve diferença (p>0,05) nas concentrações de IgG. O estabelecimento adequado da imunidade celular ocorre durante a fase neonatal, nos animais que ingerem adequadamente o colostro e o leite. O presente estudo determinou diferenças no perfil protéico sérico de parâmetros relacionados à imunidade de equinos jovens no período imediato ao desmame, comparados com animais desmamados há mais de 30 dias. De acordo com os valores observados, concluiu-se que os animais, mesmo desmamados precocemente, obtiveram transferência adequada de imunidade passiva.(AU)

The perinatal phase of foal development is one of the most challenger period for the immune system. The present study has analyzed serum protein profile, considering variables related to immunity in foals at the perinatal phase, verifying passive immunity transfer. The group 1 (G1) contained eight foals evaluated one day after weaning, and group 2 (G2) included twenty foals at more than thirty days after weaning. Total protein concentration was determined by means of refractometry. The concentration of serum proteins was determined through sodium dodecyl sulphatepolyacrylamide gel electrophoresis. Results were submitted to analysis of variance and Tukey test (P<0.05). IgA concentration showed difference (P<0.05) between the two studied groups, however data were within adult healthy horses normal values. IgG didn't show statistical difference (P>0.05). The cellular immunity establishment occurs in the neonatal phase, in foals that suckled colostrum and milk properly. The present study showed differences in serum protein profile, considering variables related to immunity, in foals immediately after weaning comparing to foals at more than 30 days after weaning. According to the observed values, we conclude that foals, even early weaned, showed proper passive immunity tranfer.(AU)

Proteinograma sérico de bovinos da raça Curraleir / Serum protein concentration in Curraleiro bovine breed

Estudou-se o perfil eletroforético das proteínas séricas de bovinos sadios da raça Curraleiro por meio da técnica de eletroforese em gel de acrilamida contendo dodecil sulfato de sódio. Utilizaram-se amostras de soro sanguíneo de 228 bovinos da raça Curraleiro, 51 machos e 177 fêmeas, com idades entre sete meses e 12 anos, pertencentes a dois rebanhos localizados nos Estados de Goiás e Tocantins. Foram quantificadas proteína total e concentração plasmática de fibrinogênio. Verificaram-se variações nas concentrações das diferentes frações proteicas. Foram detectadas 26 proteínas e identificadas 10 delas. A ceruloplasmina esteve ausente em 78,1 por cento dos indivíduos, e a α-antitripsina não foi detectada em nenhum animal. Proteína total, globulina, IgA, IgG e fibrinogênio aumentaram com a idade e houve correlação positiva entre os níveis séricos de haptoglobina e α1-glicoproteína ácida.(AU)

The eletrophoretic serum protein profile in healthy Curraleiro bovine breed was studied by dodecyl sulphate-polyacrylamide gel electrophoresis. A total of 228 serum samples from Curraleiro cattle, being 51 males and 177 females were analyzed. They were from seven month to 12-year-old and were raised in two farms of Goiás and Tocantins states. Total protein and plasma fibrinogen quantification were performed. It was possible to verify variation in proteins fractions concentration. Twenty-six proteins were detected and ten of them were identified. Ceruloplasmin was absente in 78,10 percent of animals and α-antitrypsin was not detected. The total protein, globulin, IgA, IgG, and fibrinogen increased with age and there was a positive correlaction between haptoglobin and α1-acid glycoprotein.(AU)

Resposta imune-humoral e proteinogramas séricos de bovinos naturalmente infectados pelo Trypanosoma vivax

Em bovinos o protozoário Trypanosoma vivax causa enfermidade que pode levar à redução dos índices produtivos ou a morte do animal. O diagnóstico deste protozoário pode ser realizado por testes parasitológicos, sorológicos e moleculares. Entretanto estes testes não são capazes de fornecer prognóstico, indicar a fase da infecção e a responsividade ao tratamento instituído. Por outro lado, o proteinograma sérico pode fornecer tais informações. O objetivo do estudo foi determinar o perfil eletroforético de proteínas de fase aguda de bovinos Girolando naturalmente infectados com T. vivax (NIF), utilizando-se como matriz gel de acrilamida contendo dodecil sulfato de sódio (SDS-PAGE). Foram estudados dois grupos de animais, NIF (n=507) e grupo de bovinos não infectados (NI; n=50). Amostras de soros de ambos os grupos foram submetidas à reação de imunofluorescência indireta (RIFI) e Ensaio de Imunoadsorção Enzimática (ELISA) para detecção de anticorpos anti-T. vivax e realização do fracionamento eletroforético. A porcentagem de soros positivos pela RIFI foi de 89,74% e pelo ELISA 93,09%, sendo que este método mostrou-se capaz de detectar mais amostras positivas do que a RIFI para detecção de anticorpos anti-T. vivax em fases iniciais da infecção. No fracionamento proteico foram consideradas 12 proteínas; sendo elas IgA, ceruloplasmina, proteínas de 95 KDa, 88 KDa, transferrina, albumina, antitripsina, IgG, haptoglobina, glicoproteína ácida e proteínas de 23 KDa e 20,5 KDa. No grupo NIF observou-se aumento de proteína total, IgA, proteína de 88 KDa, albumina, antitripsina, IgG, haptoglobina, 20,5 KDa e diminuição de ceruloplasmina, proteína de 95 KDa e 23 KDa e transferrina. Glicoproteina ácida não apresentou diferença significativa entre os grupos NIF e NI. A antitripsina pode ser utilizada como indicador da...

The protozoan T. vivax can cause an important disease in cattle, which is responsible for death or low index productive. The diagnosis is based on parasitologic, molecular and sorological tests. However, these tests are not able to provide prognostic, infection phase and response of treatment. On the other hand, serum proteinograms can accomplish these features. The present work aimed to assess the acute phase proteins eletrophoretic profile in Girolando cattle naturally infected by T. vivax (NIF) by SDS-Page. For this purpose, two groups of animals were utilized: one naturally infected by T. vivax (NIF; n=507) and another one by noninfected cattle (NI; n=50). Serum samples were submitted to IFA and ELISA for detecting IgG antibody to T. vivax. SDS-Page was only performed in samples which showed positive results in serological testes. The percentage of positive samples by IFA and ELISA were 89,74% and 93,09%, respectively. ELISA showed a higher number of seropositive samples when compared to IFA. In eletrophoretic fractioning 12 proteins were evaluated, including IgA, ceruloplasmin, 95 KDa and 88 KDa proteins, transferrin, albumin, antitrypsin, IgG, haptoglobin, acidic glycoprotein, and 23 KDa and 20,5 KDa proteins. NIF animals showed an increase of serum concentration of IgA, 88 KDa, albumin, antitrypsin, IgG, haptoglobin, 20,5 KDa when compared to NI animals; on the other hand, serum concentration of ceruloplasmin, 95 KDa and 23 KDa proteins, and transferrin were lower in NIF animals when compared to NI animals. Acidic glycoprotein serum concentration did not shown differences when both groups of sampled animais were compared. Since Antitrypsin was only detected in NIF animals, this protein may be used as a marker of T. vivaxinfection in cattle. More studies should be performed aiming to clarify the identity of 95, 88, 23, 20,5 KDa...

Parâmetros hematológicos e bioquímicos séricos de jumentos (Equus asinus) da raça Pêga

Sabendo-se que os valores laboratoriais de referência devem ser estabelecidos para cada espécie e em seus grupos, este estudo objetivou estabelecer valores hematológicos e bioquímicos séricos de referência para jumentos da raça Pêga; determinar diferenças entre as faixas etárias, sexos, fêmeas prenhes e não prenhes, além de acompanhar mudanças durante o primeiro ano de vida. Foram realizados hemogramas, análises bioquímicas séricas e fracionamento de proteínas por eletroforese em gel de acrilamida contendo dodecil sulfato de sódio (SDS-PAGE) de amostras de animais com zero a um, um a três e com mais de três anos de idade, machos e fêmeas. No primeiro ano de vida, apenas a porcentagem de monócitos (Mon), níveis de albumina (Alb), triglicérides (Trig), magnésio (Mg) e cloretos (Cl) não diferiram significativamente. Os animais até um ano tiveram as maiores médias para a contagem total de leucócitos (Leu), neutrófilos bastonetes (NB), fosfatase alcalina (FA), glicose (Glic), colesterol (Col), fósforo (P), imunoglobulina A (IgA) e ceruloplasmina (Cer) e as menores para a aspartato aminotransferase (AST), gama glutamiltransferase (GGT), creatinina (Crea), bilirrubina indireta (BI), cálcio (Ca), Cl, proteína de peso molecular (PPM) 138 kDa e albumina obtida por eletroforese (Albe). Além disso, possuem médias de volume globular (VG), concentração de hemoglobina (Hb) e 1-glicoproteína ácida (A1GA) superiores e porcentagem de eosinófilos (Eos), níveis de ureia (Ur) e Trig inferiores àquelas do grupo com mais de três anos. Os animais mais velhos tiveram a menor média para Mon e os maiores valores para bilirrubina total (BT) e transferrina (Trans). O grupo com um a três anos apresentou potássio (K) sérico mais elevado que os animais acima de três anos. O cálcio inorgânico (Cai) teve sua maior média nos animais...

The reference laboratory values must be determined for each specie and specific group. Therefore, the aim of this experiment were to determine the hematological and serum biochemical reference values for Pêga breed; to determine differences among age, sex, pregnant and non-pregnant females; and describe the changes during the first year of age. The complete blood count, serum biochemical analysis and the protein fractionation by means of sodium dodecyl sulphate - poliacrilamide gel electrophoresis (SDS-PAGE) of blood samples collected from animals until one year, from one to three years, and over three year of age, males and females, were analysed. During the first year, just monocytes percentage (Mon), levels of albumin (Alb), triglycerides (Trig), magnesium (Mg) and chloride (Cl) did not differ significantly. The animals until one year of age had the highest means for leukocytes (Leu), band cells (BC), alkaline phosphatase (AP), glucose (Gluc), cholesterol (Chol), phosphorus (P), IgA and ceruloplasmin (Cer) and the lowest for aspartate aminotransferase (AST), gamma glutamyl transferase (GGT), creatinine (Crea), unconjugated bilirubin (UB), calcium (Ca), Cl, 138 kDa molecular weight protein (MWP) and albumin of electrophoresis (Albe). Moreover, they had means of packed cell volume (PCV), hemoglobin concentration (Hb) and 1-acid glycoprotein (A1AG) higher and means of eosinophils percentage (Eos), levels of urea (Ur) and Trig lower than animals over three years old. The oldest animals had the smallest mean for Mon and the biggest values for total bilirubin (TB) and transferrin (Trans). The group between ages of one and three years old showed serum potassium (K) higher than animals over three years old. The inorganic calcium (Cai) was higher for animals until one year old, followed by the oldest animals...

Serum protein concentrations, including acute phase proteins, in calves with hepatogenous photosensitization / eores séricos de proteínas, inclusive proteínas de fase aguda, em bovinos com fotossensibilização hepatógena

One hundred 6- to 12-month-old Nelore calves were allotted into control group (G1; 50 healthy calves) and photosensitization group (G2; n= 50). Blood samples were collected 12 to 24 hours after the onset of dermatitis (M1), and 15 to 30 days after that (M2), at time of resolution of clinical signs. Serum protein electrophoresis was performed by means of sodium dodecyl sulphate-polyacrylamide gel electrophoresis. Eighteen serum proteins with molecular weights ranging from 16,000 to 189,000 daltons (Da) were identified in all calves. In M1 and M2 serum concentrations of proteins with molecular weights of 115,000Da (ceruloplasmin), 61,000Da (a1-antitrypsin), 45,000Da (haptoglobin), and 40,000Da (acid glycoprotein) were significantly increased in calves. In conclusion, measurement of serum acute phase protein concentrations may be useful in monitoring the progression of bovine hepatogenous photosensitization, including guide probable alteration on therapeutic procedures(AU)

Foram examinados 100 bezerros da raça Nelore com 6 a 12 meses de idade, distribuídos em: grupo controle (G1; 50 bezerros sadios) e grupo fotossensibilização (G2; n= 50). As amostras de sangue foram coletadas 12 a 24 horas após o início da dermatite (M1) e 15 a 30 dias após (M2), época da cura das lesões cutâneas. O proteinograma sérico foi obtido por eletroforese em gel de acrilamida. Em todos os bezerros foram identificadas 18 proteínas com pesos moleculares (PM) entre 16.000 a 189.000 dáltons (Da). Em M1 e M2, as concentrações séricas das proteínas de PM 115.000Da (ceruloplasmina), 61.000Da (1-antitripsina), 45.000Da (haptoglobina) e 40.000Da (glicoproteína ácida) foram significativamente maiores em bezerros com fotossensibilização hepatógena em comparação com aquelas dos animais do grupo-controle. A determinação dos teores séricos de proteínas de fase aguda pode ser útil no monitoramento da progressão da fotossensibilização hepatógena em bovinos, inclusive orientando possíveis alterações em procedimentos terapêuticos(AU)

Imunodetecção de antígenos de Escherichia coli em infecção experimental em aves / Imunodetection of Escherichia coli antigens in experimental infection in broiler flocks

A colibacilose é uma enfermidade importante na avicultura por causar prejuízos econômicos e danos à carcaça. Escherichia coli é um micro-organismo oportunista e a complexidade da infecção se deve a diversidade de sorotipos, variados fatores de virulência e baixa capacidade de estimular a imunidade cruzada. Assim, a compreensão dos mecanismos de virulência que ocorrem no hospedeiro, pode resultar no desenvolvimento de métodos diagnósticos e profiláticos. Neste estudo, 85 pintinhos foram divididos em quatro grupos, sendo três infectados com diferentes sorogrupos de Escherichia coli (O2, O78, O119) e um vacinado com Poulvac® E.coli (Pfizer®). As lesões sugestivas de colibacilose foram avaliadas e qualificadas aos 35 dias de idade, e em seguida realizada a colheita de sangue para a obtenção do soro. Foram obtidas proteínas in vitro dos sorogrupos de E. coli utilizados na infecção experimental e da vacina (mutante de Escherichia coli O78). Estas foram separadas por eletroforese unidimensional em gel de acrilamida utilizando dodecil sulfato de sódio (SDS) e foram submetidas a reação de western blot com a mistura de soros de cada grupo estudado e também com o pool de soros de aves livres de patógenos específicos (SPF), usadas como controle negativo. O perfil eletroforético revelou a presença de várias proteínas dos diferentes sorogrupos de E. coli quando cultivadas no meio casaminoácido e levedura. Houve diferenças entre os sorotipos, mas também proteínas comuns. Foi possível estabelecer uma relação entre virulência, quantidades de proteínas específicas e taxa de reisolamento

The colibacillosis is a serious disease in poultry industry to cause economic losses and damage to carcass. Escherichia coli is an opportunistic microorganism and the complexity of infection is due to the diversity of serotypes, several virulence factors and low ability to stimulate cross-immunity. Thus understanding of virulence mechanisms that occur in the host, may result in development of diagnostic and prophylactic methods. In this study, 85 chicks were divided into four groups being infected with three different serogroups of E. coli (O2, O78, O119) and vaccinated with Poulvac E. coli ® (Pfizer ®). The lesions suggestive of colibacillosis were evaluated at 35 days of age, and then the blood sample are collected to obtain the serum. Proteins were obtained in vitro from serogroups of E. coli used in experimental infection and vaccine (mutant of Escherichia coli O78). These were separated by one-dimensional electrophoresis on acrylamide gels using sodium dodecyl sulfate (SDS) and then reacted by western blot with the pool of sera from each group and also with the pool of sera from specific pathogen free poultry used as negative control. The electrophoretic pattern showed the presence of many proteins of different serogroups of E. coli when grown in the broth casaminoacid and yeast. There were differences among serotypes, but also common proteins. It was possible to establish a relationship between virulence and reisolation rate

Imunodetecção de antígenos de Escherichia coli em infecção experimental em aves / Imunodetection of Escherichia coli antigens in experimental infection in broiler flocks

A colibacilose é uma enfermidade importante na avicultura por causar prejuízos econômicos e danos à carcaça. Escherichia coli é um micro-organismo oportunista e a complexidade da infecção se deve a diversidade de sorotipos, variados fatores de virulência e baixa capacidade de estimular a imunidade cruzada. Assim, a compreensão dos mecanismos de virulência que ocorrem no hospedeiro, pode resultar no desenvolvimento de métodos diagnósticos e profiláticos. Neste estudo, 85 pintinhos foram divididos em quatro grupos, sendo três infectados com diferentes sorogrupos de Escherichia coli (O2, O78, O119) e um vacinado com Poulvac® E.coli (Pfizer®). As lesões sugestivas de colibacilose foram avaliadas e qualificadas aos 35 dias de idade, e em seguida realizada a colheita de sangue para a obtenção do soro. Foram obtidas proteínas in vitro dos sorogrupos de E. coli utilizados na infecção experimental e da vacina (mutante de Escherichia coli O78). Estas foram separadas por eletroforese unidimensional em gel de acrilamida utilizando dodecil sulfato de sódio (SDS) e foram submetidas a reação de western blot com a mistura de soros de cada grupo estudado e também com o pool de soros de aves livres de patógenos específicos (SPF), usadas como controle negativo. O perfil eletroforético revelou a presença de várias proteínas dos diferentes sorogrupos de E. coli quando cultivadas no meio casaminoácido e levedura. Houve diferenças entre os sorotipos, mas também proteínas comuns. Foi possível estabelecer uma relação entre virulência, quantidades de proteínas específicas e taxa de reisolamento (AU)

The colibacillosis is a serious disease in poultry industry to cause economic losses and damage to carcass. Escherichia coli is an opportunistic microorganism and the complexity of infection is due to the diversity of serotypes, several virulence factors and low ability to stimulate cross-immunity. Thus understanding of virulence mechanisms that occur in the host, may result in development of diagnostic and prophylactic methods. In this study, 85 chicks were divided into four groups being infected with three different serogroups of E. coli (O2, O78, O119) and vaccinated with Poulvac E. coli ® (Pfizer ®). The lesions suggestive of colibacillosis were evaluated at 35 days of age, and then the blood sample are collected to obtain the serum. Proteins were obtained in vitro from serogroups of E. coli used in experimental infection and vaccine (mutant of Escherichia coli O78). These were separated by one-dimensional electrophoresis on acrylamide gels using sodium dodecyl sulfate (SDS) and then reacted by western blot with the pool of sera from each group and also with the pool of sera from specific pathogen free poultry used as negative control. The electrophoretic pattern showed the presence of many proteins of different serogroups of E. coli when grown in the broth casaminoacid and yeast. There were differences among serotypes, but also common proteins. It was possible to establish a relationship between virulence and reisolation rate (AU)

Detecção de Leptospira pomona em sêmen bovino por eletroforese capilar fluorescente / Detection of Leptospira pomona in bovine semen by fluorescent capillary eletrophoresis

Este estudo pretendeu avaliar o limiar de detecção da técnica de PCR aliada à eletroforese capilar para diagnóstico da Leptospira pomona em sêmen bovino. Doses inseminantes livres de patógenos foram contaminadas experimentalmente com Leptospira pomona em escalas que variavam de 10(elevado a 0) a 10(elevado a 7) bactérias/ml e submetidas à extração de DNA pelo método de fenol/clorofórmio. Após a reação de PCR, a visualização dos fragmentos foi realizada em três tipos de eletroforese: agarose 2% sob luz UV, acrilamida 8% corado com prata e eletroforese capilar fluorescente. A detecção de DNA de Leptospira pomona em sêmen bovino através de eletroforese capilar fluorescente foi possível a partir de concentração de 10(elevado a 2 )bactérias/ml. Nos métodos de eletroforese em agarose 2%, observou-se limite de detecção de 10(elevado a 4 )bactérias/ml e em gel de poliacrilamida 8% o limite de detecção foi de 10(elevado a 2 )bactérias/ml. A eletroforese capilar demonstrou ser uma alternativa eficaz e rápida na detecção de DNA de Leptospira em sêmen bovino podendo ser uma valiosa ferramenta para controle de qualidade do sêmen produzido em centrais de inseminação artificial dada a facilidade de automação desse processo.(AU)

This study was performed in order to evaluate the detection limit of PCR with fluorescent capillary electrophoresis for Leptospira pomonadiagnosis in bovine semen. Negative bovine semen samples were artificially contaminated with Leptospira pomona 10(involution 0) to 10(involution 7 ) bacteria/ml) and DNA was extracted by phenol/chloroform protocol. DNA fragments visualization was done by three electrophoresis methods: under UV light in 2 % agarose gel, silver staining 8% polyacrylamide gel and fluorescent capillary electrophoresis. The detection limit of capillary electrophoresis for Leptospira pomona was 10(involution 2) bacteria/ml. Under UV light, in 2 % agarose gel, the detection limit was of 10(involution 4) bacteria/ml while for silver stained 8 % polyacrylamide gel it was 10(involution 2) bacteria/ml. PCR with fluorescent capillary electrophoresis is an efficient andrapid diagnostic test for DNA detection of Leptospira in bovine semen and this can be an important tool for herd and semen sanitary controlin artificial insemination centers.(AU)

VARIABILIDADE DE RpoS ENTRE GENÓTIPOS DE Escherichia coli PRODUTORA DE TOXINAS SHIGA (STEC)

Objetivos: RpoS contribui para a virulência através do esforço de sobrevivência contra os sistemas de defesa do hospedeiro, ou diretamente através da regulação de fatores de virulência em certos patógenos. A capacidade dos agentes patogênicos causadores de doenças alimentares sobreviver em certos alimentos depende, principalmente, de seus mecanismos de resposta ao estresse. Neste sentido foi objetivo deste estudo avaliar a variabilidade da produção de RpoS em isolados STEC de diferentes perfis stx+. Material e Métodos: Foi avaliada a produção de RpoS em 31 cepas, 8 cepas stx2, 16 cepas stx1+stx2 e 7 cepas stx1. O lisado de células foi resolvido em gel de acrilamida, e após a eletroforese, as proteínas foram transferidas a uma membrana de nitrocelulose submetida a ensaio de imuno-detecção com o soro anti-RpoS e soro anti-IgG conjugado. Para detecção do complexo, foi utilizado kit de detecção e a membrana exposta a filmes de raios-X. Resultados: Não observamos diferenças significativas no nível de produção de RpoS entre os perfis stx1 e stx2. O perfil stx1+ stx2 produziu, em geral, níveis menores de RpoS do que os dois perfis anteriores, mas nenhuma era rpoS-negativa. Avaliar o nível de produção de RpoS nos isolados STEC é fundamental pois já foi demonstrada sua importância para a E. coli O157:H7 sobreviver sob alta pressão hidrostática, em solo adubado com esterco, em á