Use of bone marrow for detection of toxic chemicals for the elucidation of poisoning in forensic veterinary medicine / Uso de medula óssea para detecção de produtos químicos tóxicos para a elucidação de intoxicação em patologia veterinária forense

In forensic toxicology, the detection of toxic chemicals from human bone marrow is often used in cases with an extended post mortem interval; however, in veterinary medicine, this practice is not used. Therefore, this study was performed to investigate the suitability of bone marrow for toxicological analysis in dogs and cats. Six animals with suspected poisoning were selected; the carcasses were sent for necropsy, and the organs were collected and preserved in buffered formalin and processed routinely for histological examination. In addition, bone marrow samples from the femur, humerus, and tibia were collected for toxicological analysis by liquid chromatography coupled to mass spectrometry detection (LC-MS). This analysis confirmed the presence of aldicarb, aldicarb sulfone, asulam, carbendazim, chlorpyrifos, dichlorvos, thifensulfuron methyl and trifloxysulfuron-sodium and associated with clinical symptoms and anatomo-histopathological alterations it was recognized the poisonings. It is expected that this study will promote the toxicological investigation of bone marrow and open avenues for the use of this tissue as an option for the detection of toxic chemicals in cases of forensic pathology.(AU)

Na toxicologia forense, a detecção de substâncias químicas tóxicas provenientes da medula óssea humana é frequentemente usada em casos com intervalo post mortem prolongado; no entanto, na medicina veterinária, essa prática não é utilizada. Portanto, este estudo foi realizado para investigar a utilização da medula óssea nas análises toxicológicas em cães e gatos. Seis animais com suspeita de intoxicação foram selecionados; as carcaças foram enviadas para necropsia e os órgãos foram coletados e preservados em formalina tamponada e processados rotineiramente para exame histológico. Amostras de medula óssea de fêmur, úmero e tíbia foram coletadas para análise toxicológica por cromatografia líquida acoplada à espectrometria de massa-massa (LC-MS). A análise por LC-MS confirmou a presença dos agrotóxicos aldicarbe, aldicarbe sulfona, asulam, carbendazim, clorpirifós, diclorvós, tifensulfuron metil e trifloxisulfuron-sódico, e em associação com sinais clínicos e achados anatomo-histopatológicos comprovou-se as intoxicações. Espera-se que este estudo promova a utilização da medula óssea como uma opção na investigação toxicológica para a detecção de produtos químicos tóxicos em casos de patologia forense.(AU)

Use of bone marrow for detection of toxic chemicals for the elucidation of poisoning in forensic veterinary medicine / Uso de medula óssea para detecção de produtos químicos tóxicos para a elucidação de intoxicação em patologia veterinária forense

In forensic toxicology, the detection of toxic chemicals from human bone marrow is often used in cases with an extended post mortem interval; however, in veterinary medicine, this practice is not used. Therefore, this study was performed to investigate the suitability of bone marrow for toxicological analysis in dogs and cats. Six animals with suspected poisoning were selected; the carcasses were sent for necropsy, and the organs were collected and preserved in buffered formalin and processed routinely for histological examination. In addition, bone marrow samples from the femur, humerus, and tibia were collected for toxicological analysis by liquid chromatography coupled to mass spectrometry detection (LC-MS). This analysis confirmed the presence of aldicarb, aldicarb sulfone, asulam, carbendazim, chlorpyrifos, dichlorvos, thifensulfuron methyl and trifloxysulfuron-sodium and associated with clinical symptoms and anatomo-histopathological alterations it was recognized the poisonings. It is expected that this study will promote the toxicological investigation of bone marrow and open avenues for the use of this tissue as an option for the detection of toxic chemicals in cases of forensic pathology.(AU)

Na toxicologia forense, a detecção de substâncias químicas tóxicas provenientes da medula óssea humana é frequentemente usada em casos com intervalo post mortem prolongado; no entanto, na medicina veterinária, essa prática não é utilizada. Portanto, este estudo foi realizado para investigar a utilização da medula óssea nas análises toxicológicas em cães e gatos. Seis animais com suspeita de intoxicação foram selecionados; as carcaças foram enviadas para necropsia e os órgãos foram coletados e preservados em formalina tamponada e processados rotineiramente para exame histológico. Amostras de medula óssea de fêmur, úmero e tíbia foram coletadas para análise toxicológica por cromatografia líquida acoplada à espectrometria de massa-massa (LC-MS). A análise por LC-MS confirmou a presença dos agrotóxicos aldicarbe, aldicarbe sulfona, asulam, carbendazim, clorpirifós, diclorvós, tifensulfuron metil e trifloxisulfuron-sódico, e em associação com sinais clínicos e achados anatomo-histopatológicos comprovou-se as intoxicações. Espera-se que este estudo promova a utilização da medula óssea como uma opção na investigação toxicológica para a detecção de produtos químicos tóxicos em casos de patologia forense.(AU)

Intoxicação por Aldicarb (chumbinho) em um felino – Relato de Caso / Aldicarb (chumbinho) poisoning in a feline - Case report

Aldicarb its a carbamate popularly known as “chumbinho” a pesticide very popular inBrazil, although his use is illegal because of your high toxicity. The poisoning by aldicarbin dogs and cats can be criminal or accidental, being an emergency in Veterinary Medicine.This study is a report of a clinic case of an accidental poisoning by aldicarb in a cat, thatdies two days after ingestion. The necropsy was made and the main finding was ahemorrhagic catarrhal gastroenteritis with tiny gray granules,compatibles with carbamate.The diagnosis was made based on the history and necropsy findings that suggests that thecause of death was a respiratory failure.

Intoxicação por Aldicarb (chumbinho) em um felino Relato de Caso / Aldicarb (chumbinho) poisoning in a feline - Case report

Aldicarb its a carbamate popularly known as “chumbinho” a pesticide very popular inBrazil, although his use is illegal because of your high toxicity. The poisoning by aldicarbin dogs and cats can be criminal or accidental, being an emergency in Veterinary Medicine.This study is a report of a clinic case of an accidental poisoning by aldicarb in a cat, thatdies two days after ingestion. The necropsy was made and the main finding was ahemorrhagic catarrhal gastroenteritis with tiny gray granules,compatibles with carbamate.The diagnosis was made based on the history and necropsy findings that suggests that thecause of death was a respiratory failure.(AU)

Detecção e análise da distribuição de carbamatos por espectrometria de massa DESI em órgãos de ratos experimentalmente intoxicados

Os carbamatos são praguicidas anticolinesterásicos com inúmeras formulações e usos distintos. O aldicarbe e o carbofurano, formulados para uso agrícola, têm frequentemente uso irregular como abortivos, tentativas de suicídio, homicídio e intoxicações de animais domésticos e silvestres. Eles são conhecidos como chumbinho devido à aparência enegrecida e granular, são fornecidos em uma única dose letal a animais junto a alimentos (iscas). Quando encontrados vivos, esses animais apresentam sinais relacionados à inibição da atividade da acetilcolinesterase, que causa estímulo a receptores muscarínicos e nicotínicos, resultando em sinais como diarreia, vômitos, depressão e convulsões. As alterações macroscópicas e histopatológicas são consideradas inespecíficas, sendo observadas congestões em múltiplos órgãos. O diagnóstico da intoxicação é feito a partir da análise de amostras colhidas durante a necropsia e os métodos mais utilizados são a cromatografia em camada delgada (CCD) e a cromatografia líquida de alta eficiência (CLAE), além da recém validada cromatografia líquida de alta pressão com detector de matriz de diodos (HPCL-DAD). O método de detecção por espectrometria de massa DESI (desorption electrospray ionization ou ionização por dessorção por eletrospray) pode ser utilizada para esse fim. Nele, um solvente é direcionado para a superfície da amostra para dessorver e ionizar o material. Esses íons são evaporados e, com a ajuda de um software, essa amostra é escaneada e a informação correlacionada com a distribuição espacial da espécie química.

Carbamates are acetylcholinesterase inhibitors with many different formulations and uses. Aldicarb and carbofuran, originally formulated for agricultural use, are frequently employed to cause abortions, homicides, suicides and intoxications of domestic and wild animals. They are known as small lead due to its dark granular presentation, are offered to animals with food (bait) in a single quickly lethal dosage. When found alive, these animals present clinical signs related to the inhibition of the acetylcholinestesase enzyme, which stimulates muscarinic and nicotinic receptors, such as diarrhea, vomits, depression and convulsions. The macroscopic and histopathological changes are considered unspecific; such are blood ingurgitation in many organs. The diagnosis is obtained after the analysis of samples taken during necropsy and the most used methods are the thin layer chromatography (TLC), high performance liquid chromatography (HPLC), and the recently validated High-performance liquid chromatography-diode array detection (HPLC-DAD). The method of desorption electrospray ionization mass spectrometry (DESI-MS) can also be used. In this technique, a solvent is directed towards a sample surface to desorb and ionize the material, which will be evaporated. Using a software, the sample is scanned and the information correlated with the spatial distribution of the chemical specimen.

COMPÓSITO CP50CA - UMA NOVA FERRAMENTA FARMACOLÓGICA E SEU PAPEL NA ADSORÇÃO DE ALDICARB (CHUMBINHO), EM ENSAIOS IN VITRO.

O presente trabalho teve como objetivo avaliar o nível de citotoxicidade em células de Saccharomyces cerevisiae e toxicidade aguda e subaguda do CP50CA, em embriões de Gallus gallus, até 13 dias de desenvolvimento além dos efeitos in vitro sobre os sistemas enzimáticos da catalase hemática e da acetilcolinesterase em amostras de sangue colhidas dos embriões, para tanto sintetizou-se um compósito formado pela combinação de uma MOF-Tb3 em associação com Carvão ativado e ácido succínico, processada por síntese hidrotermal, denominado de CP50CA. Ao final das preparações foi verificada a viabilidade celular pela técnica de exclusão do azul de Tripan a 0,25% em microscopia óptica. Em seguida, alíquotas de 1mL, contendo de 0,5 a 1,5.105 células/mL, foram adicionadas em de tubos de ensaio contendo 1mL de meio de cultivo mais 1mL de solução de cloreto de sódio a 0,9%, contendo Aldicarb, MOF, Carvão ativado e Compósito CP50CA, nas concentrações de 1 µg/mL, 0,1µg/mL, 0,01µg/mL, 0,001µg/mL e 0,0001µg/mL. O grupo controle continha meio de cultivo e solução de cloreto de sódio a 0,9%. Estas preparações foram incubadas por 18 horas, para ser avaliado o número de células de S. cerevisiae nos tempos de 0, 3, 6 e13 horas, em leitura espectrofotométrica em 620nm, para avaliar a destruição celular pelo agente tóxico, avaliamos o nível de toxicidade aguda em modelo de embriões de Gallus gallus e as alterações dos sistemas enzimáticos da acetilcolinesterase e catalase. Os ovos fertilizados prétratados, a partir do 6o dia de incubação, com 0,1mL do compósito na concentração de 0,1µg/mL até o 13o dias de incubação. Numa segunda preparação testou-se esta mesma concentração de compósito em diferentes concentrações de aldicarb, 1mg/0,1 mL; 0,5 mg/0,1mL; 0,1mg/0,1mL e 0,025mg/0,1mL. Numa terceira preparação aplicou-se o compósito a partir do 6o dia de incubação dos ovos e após 48 horas aplicou-se 0,1mL de aldicarb na concentração de 0,2µg/mL. As atividades da acetilcolinesterase e da catalase foram avaliadas através dos modelos Saccharomyces cerevisiae, embriões de galinha, acetilcolinesterase e catalase. Os resultados mostraram que o CP50CA na concentração de 1µg/mL não tem atividade citotóxica em cepas de Saccharomyces cerevisiae. O compósito potencializou o crescimento dos embriões até o 13º dia de incubação, apresentando a razão peso do embrião/peso do ovo aumentada em 30%. O compósito inibe os efeitos do aldicarb até a concentração de 0,5mg/mL, não afetando a forma como a enzima atua sobre o substrato acetilcolina. A atividade da catalase parece ser aumentada em presença do compósito, interagindo diretamente com os radicais do tipo peróxido de hidrogênio.

The present work had as objective to evaluate the level of cytotoxicity in an experimental model of Saccharomyces cerevisiae, we also evaluated the level of acute toxicity in embryo culture systems of Gallus gallus, at the 13th day of development, as well as the in vitro effects over the enzymatic systems of hematic catalase and the acetylcholinesterase in blood samples collected from the embryos therefore a composite was synthesized formed by a combination of MOF-Tb3 in association with activated charcoal and succinic acid, processed by hydrothermal synthesis, denominated CP50CA. At the end of the preparations, the cell viability was verified by means of a 0.25% Tripan blue exclusion technique under light microscopy. Then, 1mL aliquots containing 0.5 to 1,5.105 cells / mL were added in test tube sequences containing 1mL of culture medium plus 1mL of 0.9% of sodium chloride solution containing Aldicarb, MOF, Activated Charcoal and Composite CP50CA at concentrations of 1 g / mL, 0.1 g / mL, 0.01 g / mL, 0.001 g / mL and 0.0001 g / mL. The control group contained culture medium and sodium chloride solution at 0.9%. These preparations were incubated for 18 hours,to evaluate the number of S. cerevisiae cells at 0, 3, 6 and 13 hours by spectrophotometric reading at 620nm, in order to evaluate the capacity of Cell destruction by the toxic agent, we analyzed the acute toxicity in model of Gallus gallus embryos and the alterations of the enzymatic systems of the acetylcholinesterase and catalase. The pre-treated fertilized eggs, from the 6th day of culture, with 0.1mL of the composite in the concentration of 0.1g / mL until the 13th day. In a second preparation, this same composite concentration was tested against different concentrations of aldicarb, 1mg/0,1 mL; 0,5 mg/0,1mL; 0,1mg/0,1mL e 0,025mg/0,1mL. In a third preparation, the composite was applied from the 6th day of incubation of the eggs and 48 hours after 0.1mL of aldicarb was applied at the concentration of 0.2g / mL. The activities of acetylcholinesterase and catalase were evaluated under the Saccharomyces cerevisiae, chicken embryos, acetylcholinesterase and catalase models. The results, show that the CP50CA, in the concentration of 1g / mL, does not have cytotoxic activity in strains of Saccharomyces cerevisiae. The composite potentiated embryo growth up to the 13th day of incubacion, with the embryo weight / egg weight ratio increased by 30%. The composite inhibits the effects of aldicarb up to the concentration of 0.5 mg / mL, not affecting the way the enzyme acts on the substrate acetylcholine. The catalase activity appears to be increased in the presence of the composite, interacting directly with the hydrogen peroxide radicals.

Avaliação dos efeitos tóxicos dos carbamatos: I. Modelo experimental em ratos Wistar e comparação com a intoxicação exógena intencional em gatos e cães; II. Análise de estabilidade dos compostos e dos seus efeitos nos post mortem imediato e em animais exu

SIQUEIRA, A. de. Avaliação dos efeitos tóxicos dos carbamatos: I. Modelo experimental em ratos Wistar e comparação com a intoxicação exógena intencional em gatos e cães; II. Análise de estabilidade dos compostos e dos seus efeitos no post mortem imediato e em animais exumados. [Evaluation of the toxic effects of carbamates: I. Experimental model in Wistar rats and comparison with the intentional poisoning of cats and dogs; II. Analysis of the stability of the compounds and their effects in the immediate post mortem and in exhumed animals]. 2015. 101 f. Tese (Doutorado em Ciências) Faculdade de Medicina Veterinária e Zootecnia, Universidade de São Paulo, 2015. A intoxicação intencional de animais e de pessoas é uma ameaça à saúde e à segurança públicas em todo o mundo. No Brasil, os pesticidas da classe dos carbamatos aldicarbe e carbofurano são facilmente obtidos, e uma única dose letal daqueles é facilmente misturada a alimentos palatáveis e iscas. Foram analisadas as necropsias de 26 gatos e 10 cães, da rotina do Serviço de Patologia Animal da FMVZ-USP, com variados intervalos post mortem e tipos de conservação de carcaça, intoxicados pelos carbamatos aldicarbe e carbofurano, confirmados pela cromatografia de camada delgada (CCD) e cromatografia líquida de alta performance com detector de arranjo de diodos (CLAE-DAD). Foram colhidas as matrizes biológicas para histopatologia e análise toxicológica. CLAE-DAD foi utilizada para detectar o aldicarbe e seus metabólitos, aldicarbe sulfóxido e aldicarbe sulfona, e carbofurano e seu metabólito 3-hidroxicarbofurano. As análises macroscópica e histopatológica revelaram predominantemente achados congestivos e hemorrágicos, o que pode ser resultante dos efeitos tóxicos dos carbamatos e seus metabólitos. Foram feitos 2 experimentos envolvendo exposição a uma dose única de carbofurano e de aldicarbe via gavagem em ratos Wistar. No primeiro, no qual foram avaliados os efeitos no post mortem imediato, 30 animais forma separados nos seguintes grupos: aldicarbe (n=10), carbofurano (n=10) e grupo controle (n=10). Os animais foram filmados para avaliar as alterações clínicas na intoxicação aguda e, quando foram sedados, foi colhido sangue por punção cardíaca para fazer o hemograma, bioquímica sérica, colinesterase e exame toxicológico e, após a eutanásia, foi feita a necropsia e colhido material para o exame histopatológico. Em todos os animais experimentais foi possível ser feita a detecção e a quantificação do aldicarbe e do carbofurano, além das alterações microscópicas congestivas e hemorrágicas, com alterações em parâmetros hematológicos e bioquímicos. No segundo experimento, foram utilizados 30 animais, e o protocolo experimental foi idêntico ao experimento anterior, exceto que, após o óbito, os animais foram colocados em uma caixa com terra nos seguintes grupos: 1 dia, 3 dias, 5 dias, 7 dias e 10 dias, e em cada dia foram agrupados 2 animais intoxicados e 1 controle, sendo que as necropsias foram feitas nestes intervalos. Foram colhidos cérebro, pulmão, fígado e rim ao exame histopatológico e globo ocular, conteúdo gástrico, fígado e músculo esquelético ao exame toxicológico. Foram observadas as alterações tanatológicas e, em todas as matrizes analisadas, puderam ser quantificados o aldicarbe e/ou seus metabólitos aldicarbe sulfóxido e aldicarbe sulfona, bem como o carbofurano e seu metabólito 3-hidroxicarbofurano. Estes estudos mostram a importância da necropsia e da coleta de matrizes diversas ao exame toxicológico, que são complementares e cruciais na investigação de óbitos decorrentes de intoxicações por praguicidas, tanto no post mortem imediato quanto em exumações.

SIQUEIRA, A. de. Evaluation of the toxic effects of carbamates: I. Experimental model in Wistar rats and comparison with the intentional poisoning of cats and dogs; II. Analysis of the stability of the compounds and their effects in the immediate post mortem and in exhumed animals. [Avaliação dos efeitos tóxicos dos carbamatos: I. Modelo experimental em ratos Wistar e comparação com a intoxicação exógena intencional em gatos e cães; II. Análise de estabilidade dos compostos e dos seus efeitos no post mortem imediato e em animais exumados]. 2015. 101 f. Tese. (Doutorado em Ciências) Faculdade de Medicina Veterinária e Zootecnia, Universidade de São Paulo, 2015. The intentional poisoning of animals and people is a threat to public health and safety worldwide. In Brazil, the carbamate pesticides aldicarb and carbofuran are easily obtained. A single lethal dose of these carbamates is easily mixed with palatable food or baits. Necropsies and histopathological examinations of 26 cats and 10 dogs poisoned by the carbamates aldicarb and carbofuran were performed in the Service of Animal Pathology of FMVZ-USP, and the poisoning was confirmed by thin layer chromatography (TLC) and high performance liquid chromatography with diode-array detector (HPLC-DAD), with variable post mortem interval and conservation of the carcass. Biological matrices were collected for histopathological and toxicological analysis. HPLC-DAD was utilised to detect aldicarb and its metabolites, aldicarb sulphoxide and aldicarb sulphone, and carbofuran and its metabolite 3-hydroxycarbofuran. Gross and histopathological evaluations showed mainly congestive and haemorrhagic findings, which may result from the toxic effects of the carbamates and their metabolites. Two experimental protocols were performed in Wistar rats by exposing them to a single oral gavage dose to the carbamates aldicarb and carbofuran. The first experiment was performed to evaluate the immediate post mortem effects of carbamates, and 30 rats were divided into three groups: aldicarb (n-=10), carbofuran (n=10) and control (n=10). The animals were filmed to evaluate the clinical signs of poisoning, and they were sedated to collect blood by heart puncture, to perform CBC, serum biochemistry, and to measure serum cholinesterase. After euthanasia, tissues were collected for histopathological evaluation. Aldicarb and carbofuran were detected and quantified in the blood of all experimental groups, and the most common histological changes observed were congestion and haemorrhage. In the second experiment, the experimental protocol was identical to the first one, but the animals were buried in a plastic box with garden soil within 5 groups of 3 animals, two exposed to the same pesticide and 1 control, as follows: day 1, day 3, day 5, day 7 and day 10. The exhumations were performed within these days (1, 3, 5, 7 and 10). We collected brain, lung, liver and kidney to examine the thanatological changes, and the eyeballs, gastric content, liver and skeletal muscle to perform the toxicological screening. Thanatological changes could be observed within and between the groups, and, in all the matrices we could detect aldicarb and its metabolites aldicarb sulphoxide and aldicarb sulphone, and carbofuran and its metabolite 3-hydroxycarbofuran. The studies have shown the importance of the necropsy and the collection of diverse matrices to the toxicological screening, because both are complementary and crucial to the investigation of deaths by pesticides poisoning, even in exhumation, since we could evaluate the thanatological changes and correlate them to the action of the pesticides in the tissues.

Desenvolvimento de métodos analíticos com finalidade forense aplicados à medicina veterinária legal: ênfase na identificação de agentes anticolinesterásicos

As intoxicações letais, via de regra, estão comumente relacionadas com a área médico-legal; alguns agentes tóxicos ocupam lugar de destaque como os principais responsáveis pela ocorrência desses óbitos. Em medicina legal, tanto humana quanto animal, o grande desafio enfrentado é a elucidação da causa mortis e do tempo da ocorrência da morte quando os cadáveres são encontrados, indicando possível exposição aos agentes tóxicos, os quais são adicionados intencionalmente, na maior parte das vezes, com a finalidade de causar danos irreversíveis à vítima. No último relatório do Sistema Nacional de Informações Tóxico- Farmacológicas (SINITOX), no ano de 2012, foram relatadas no Brasil 102.854 intoxicações envolvendo seres humanos e animais, sendo que desse total 1.199 (1,17%) intoxicações foram relatadas em animais. Dentre os principais agentes responsáveis por intoxicação, tanto em seres humanos, como em animais, estão os praguicidas e, em particular, os anticolinesterásicos, sendo importante causa de óbitos intencionais e não intencionais em animais. Métodos de análises toxicológicas envolvendo intoxicações em seres humanos são amplamente estudados e divulgados, o que é menos usual na medicina veterinária legal. Portanto, a existência de laboratórios que atendam as legislações relacionadas as análises toxicológicas forenses, bem como a pesquisa das características da forma de apresentação e do potencial toxicológico dos anticolinesterásicos e o desenvolvimento e validação de técnicas analíticas mais sofisticadas se fazem necessária e contribuirão para os avanços nesse aspecto forense da toxicologia veterinária. Assim, o presente trabalho foi distribuído em quatro capítulos distintos. No primeiro capítulo discute-se o recebimento de amostras e um modelo de formulário de Requisição de Análise Toxicológica num laboratório veterinário de análises toxicológicas que recebe amostras biológicas de interesse forense. O segundo capítulo apresenta a possibilidade de utilização de uma técnica enzimática com a finalidade de avaliar o potencial de inibição dos praguicidas anticolinesterásicos; o método se mostrou eficiente para avaliar a inibição da atividade da acetilcolinesterase (AChE) causada pelo aldicarbe e pelo seu metabólito, o aldicarbe-sulfona. O terceiro capítulo trata-se do teste de dissolução in vitro da forma acabada do grânulo comercial do praguicida aldicarbe (Temik 150®), a fim de avaliar a cinética de liberação do princípio ativo tóxico, bem como a cinética de formação dos seus principais metabólitos ativos, considerando que cães e gatos encontrados mortos com suspeita de intoxicação exógena apresentam chumbinho no conteúdo estomacal. O perfil de dissolução dos grânulos do Temik 150® em meio ácido foi capaz mostrar a presença in vitro dos metabólitos aldicarbe-sulfóxido e o aldicarbe-sulfona, o que não ocorre quando apenas o princípio ativo passou pelo mesmo perfil de dissolução, mostrando que essa forma disponível no comércio contribui para a toxicidade deste praguicida. O quarto capítulo apresenta o desenvolvimento de um método para determinação de praguicidas anticolinesterásicos, bem como os seus produtos biotransformados em diversas matrizes biológicas, baseada em cromatografia líquida de alta eficiência (CLAE) com detecção por arranjo de diodos (DAD). Foi, então, desenvolvido e validado um método de extração e identificação de praguicidas anticolinesterásicos em matrizes biológicas, cujas figuras de mérito atendem a RDC 27 de 2012 da ANVISA (Brasil, 2012). O método permitiu a extração e identificação de aldicarbe e seus metabólitos (aldicarbe-sulfóxido e aldicarbe-sulfona), carbofurano e seu metabólito (3-OH carbofurano), forato e seu metabólito (forato-sulfóxido) e aldicarbe. Esse método foi aplicado em amostras reais encaminhadas ao Laboratório de Diagnóstico Toxicológico (LADTOX) e se mostrou eficiente para identificação de aldicarbe

Lethal poisonings, as a rule, are commonly related to the forensic area; some toxic agents are commonly found as the main agent responsible for these deaths. In forensic medicine, both human and animal, the major challenge faced is the elucidation of cause of death and the time elapsed when the bodies are found, indicating possible exposure to toxic agents, which are intentionally added, most of the times in order to cause irreversible damage to the victim. In the latest report of the Toxic-Pharmacologic National Information System (SINITOX) in the year 2012, 102 854 poisonings involving humans and animals were reported in Brazil, and of this total 1,199 (1.17%) poisonings have been reported in animals. Among the main agents responsible for toxicity, both in humans and in animals, pesticides are common and, in particular, cholinesterase inhibitors, which is important because of intentional and unintentional deaths in animals. Methods of toxicological analyzes involving poisoning in humans are widely studied and published, but less so in legal veterinary medicine. Therefore, the existence of laboratories that meet the legislation related to forensic toxicological analysis and research of the characteristics of the presentation and toxicological potential of cholinesterase inhibitors and the development and validation of more sophisticated analytical techniques are necessary and can contribute to advances in the forensic aspect of veterinary toxicology. Thus, this work was distributed into four distinct chapters. The first chapter discusses the receipt of samples and a Request Form template for Toxicological analysis in a Toxicological analysis veterinary laboratory that receives biological samples of forensic interest. The second section presents the possibility of using an enzymatic technique in order to assess the potential inhibition of cholinesterase inhibitors pesticides; the method was efficient to evaluate the inhibition of the activity of acetylcholinesterase (AChE) caused by aldicarb and its metabolite, aldicarb sulfone. The third chapter it is the in vitro dissolution test of the finished form of commercial bead pesticide aldicarb (Temik 150®) in order to assess the kinetics of release of toxic active ingredient, as well as the formation kinetics of its main metabolites assets, whereas dogs and cats found dead with suspected exogenous intoxication present "pellets" in the stomach contents. The dissolution profile of the Temik 150® beads in acid was able to show the presence of in vitro metabolites aldicarb sulfoxide and aldicarb sulfone, which does not occur when only the active ingredient went through the same dissolution profile, showing that this market-available form contributes to the toxicity of this pesticide. The fourth chapter presents the development of a method for determining cholinesterase inhibitors pesticides, as well as their biotransformation products in various biological matrices, based on high-performance liquid chromatography (HPLC) with diode array detection (DAD).Then, a method of extraction and identification of anticholinesterase pesticides in biological matrices was developed and validated, meeting current standards RDC 27, 2012 ANVISA (Brazil, 2012). The method allowed the extraction and identification of aldicarb and its metabolites (aldicarb sulfoxide and aldicarb sulfone), carbofuran and its metabolite (3-OH carbofuran), phorate and its metabolite (phorate sulfoxide) and aldicarb. This method was applied to real samples sent to the Toxicology Laboratory Diagnostics (LADTOX) and was efficient in aldicarb identification.

Intoxicação em cães e gatos: diagnóstico toxicológico empregando cromatografia em camada delgada e cromatografia líquida de alta pressão com detecção ultravioleta em amostras estomacais

The pesticides and rodenticides are responsible for several human and animal intoxications. Preliminary data suggest that the illegal use of these compounds to poison small animals is a common practice in the central region of the Rio Grande do Sul state. The Laboratory of Toxicology received samples, of cases in which the main suspected cause of death is poisoning by pesticides or exogenous rodenticides (licit and illicit). The aim of this study was show the survey of small animals poisoned and analyzed by LATOX during the period of 2004 to 2008 identifying the xenobiotics by optimized analytical methods, including screening by thin-layer chromatography (TLC) and a possible confirmation by high performance liquid chromatography - ultraviolet detection (HPLC-UV). In this period 68 samples were analyzed from small poisoned animals. The biological samples analyzed were stomach and stomach content and the TLC permitted carbamates, warfarin and stricnine identification. This proved to be an efficient and adequate technique for this purpose, relatively fast, inexpensive and with low matrix interference. The screening by HPLC for N-methyl carbamates was also realized: aldicarb, carbaryl, carbofuran and propoxur. The analysis showed that the main toxic agent found was aldicarb (chumbinho), responsible for 39.7% of poisoning (27 cases), followed by stricnine (6 cases), warfarin (3 cases) and sodium monofluoracetate (1 case). Thus, the 'chumbinho' was the main agent involved in dogs and cats poisoning in the central region of the state, during the analyzed period. The analytical methods TLC and HPLC can be used efficiently in laboratorial routine for identification and confirmation of xenobiotics involved in these poisonings.

Agrotóxicos e raticidas são responsáveis por inúmeras intoxicações humanas e animais. Dados preliminares sugerem que o uso ilegal desses compostos com a finalidade de intoxicação fatal em pequenos animais é uma prática comum na região central do Estado do Rio Grande do Sul. O Laboratório de Toxicologia (LATOX) recebe amostras de casos em que a principal suspeita é a intoxicação por agrotóxicos ou raticidas (lícitos e ilícitos). O presente estudo teve como objetivo apresentar um levantamento das intoxicações de pequenos animais, analisadas pelo LATOX no período de 2004 a 2008, sendo identificados os xenobióticos por meio de métodos analíticos otimizados pelo laboratório, incluindo screening por cromatografia em camada delgada (CCD) e possível confirmação por cromatografia líquida de alta eficiência (CLAE-UV). No período, foram analisadas 68 amostras oriundas de intoxicações em cães e gatos. As amostras biológicas analisadas foram o estômago e o conteúdo estomacal, das quais a CCD permitiu a identificação de carbamatos, warfarina e estricnina. Esta mostrou ser uma técnica qualitativa eficiente e adequada para esse propósito, além de ser relativamente rápida, de baixo custo e de sofrer pouca interferência de componentes da matriz. Também foi realizado um screening toxicológico por CLAE-UV para os carbamatos n-metilados: aldicarb, carbaril, carbofuran e propoxur. O resultado das análises indicou que o principal agente tóxico encontrado foi o aldicarb (chumbinho), responsável por 39,7% das intoxicações (27 casos), seguido por estricnina (seis casos), warfarina (três casos) e monofluoracetato de sódio (um caso). Sendo assim, o "chumbinho" foi o principal agente envolvido em intoxicações de cães e gatos na região central do Estado no período avaliado, e os métodos analíticos CCD e CLAE-UV podem ser utilizados de forma eficiente na rotina laboratorial para identificação e confirmação dos xenobióticos mais envolvidos nessas intoxicações.

Intoxicação em cães e gatos: diagnóstico toxicológico empregando cromatografia em camada delgada e cromatografia líquida de alta pressão com detecção ultravioleta em amostras estomacais

The pesticides and rodenticides are responsible for several human and animal intoxications. Preliminary data suggest that the illegal use of these compounds to poison small animals is a common practice in the central region of the Rio Grande do Sul state. The Laboratory of Toxicology received samples, of cases in which the main suspected cause of death is poisoning by pesticides or exogenous rodenticides (licit and illicit). The aim of this study was show the survey of small animals poisoned and analyzed by LATOX during the period of 2004 to 2008 identifying the xenobiotics by optimized analytical methods, including screening by thin-layer chromatography (TLC) and a possible confirmation by high performance liquid chromatography - ultraviolet detection (HPLC-UV). In this period 68 samples were analyzed from small poisoned animals. The biological samples analyzed were stomach and stomach content and the TLC permitted carbamates, warfarin and stricnine identification. This proved to be an efficient and adequate technique for this purpose, relatively fast, inexpensive and with low matrix interference. The screening by HPLC for N-methyl carbamates was also realized: aldicarb, carbaryl, carbofuran and propoxur. The analysis showed that the main toxic agent found was aldicarb (chumbinho), responsible for 39.7% of poisoning (27 cases), followed by stricnine (6 cases), warfarin (3 cases) and sodium monofluoracetate (1 case). Thus, the 'chumbinho' was the main agent involved in dogs and cats poisoning in the central region of the state, during the analyzed period. The analytical methods TLC and HPLC can be used efficiently in laboratorial routine for identification and confirmation of xenobiotics involved in these poisonings.

Agrotóxicos e raticidas são responsáveis por inúmeras intoxicações humanas e animais. Dados preliminares sugerem que o uso ilegal desses compostos com a finalidade de intoxicação fatal em pequenos animais é uma prática comum na região central do Estado do Rio Grande do Sul. O Laboratório de Toxicologia (LATOX) recebe amostras de casos em que a principal suspeita é a intoxicação por agrotóxicos ou raticidas (lícitos e ilícitos). O presente estudo teve como objetivo apresentar um levantamento das intoxicações de pequenos animais, analisadas pelo LATOX no período de 2004 a 2008, sendo identificados os xenobióticos por meio de métodos analíticos otimizados pelo laboratório, incluindo screening por cromatografia em camada delgada (CCD) e possível confirmação por cromatografia líquida de alta eficiência (CLAE-UV). No período, foram analisadas 68 amostras oriundas de intoxicações em cães e gatos. As amostras biológicas analisadas foram o estômago e o conteúdo estomacal, das quais a CCD permitiu a identificação de carbamatos, warfarina e estricnina. Esta mostrou ser uma técnica qualitativa eficiente e adequada para esse propósito, além de ser relativamente rápida, de baixo custo e de sofrer pouca interferência de componentes da matriz. Também foi realizado um screening toxicológico por CLAE-UV para os carbamatos n-metilados: aldicarb, carbaril, carbofuran e propoxur. O resultado das análises indicou que o principal agente tóxico encontrado foi o aldicarb (chumbinho), responsável por 39,7% das intoxicações (27 casos), seguido por estricnina (seis casos), warfarina (três casos) e monofluoracetato de sódio (um caso). Sendo assim, o "chumbinho" foi o principal agente envolvido em intoxicações de cães e gatos na região central do Estado no período avaliado, e os métodos analíticos CCD e CLAE-UV podem ser utilizados de forma eficiente na rotina laboratorial para identificação e confirmação dos xenobióticos mais envolvidos nessas intoxicações.

Análise retrospectiva de casos de maus tratos contra cães e gatos na cidade de São Paulo / Retrospective analyzes of cruelty toward dogs and cats in the city of São Paulo

A Medicina Veterinária Legal é uma área em crescimento devido à demanda da sociedade na coibição dos crimes contra a fauna. No Brasil, pouco se conhece acerca da magnitude deste problema. Assim, o presente estudo propôs-se a realizar um levantamento de casos em dois órgãos distintos que lidam com esta modalidade de crime em sua rotina de atendimento: o Serviço de Necropsia do Departamento de Patologia da FMVZ/USP e o Núcleo de Análise Instrumental do Instituto de Criminalística de São Paulo (NAI/IC). Este levantamento possibilitou a visualização do perfil quantitativo e qualitativo dos casos atendidos de maus tratos praticados contra cães e gatos, no período de 2003 a 2007. Constatou-se inicialmente que o número absoluto de casos de maus tratos em cães é maior que em gatos, porém, o confronto desses números absolutos com o tamanho da respectiva população atendida pelo Serviço de Necropsia da FMVZ/USP, revelou que os gatos são animais de eleição para as práticas de maus tratos. Constatou-se ainda que o sexo do animal não é fator relevante nessa eleição, mas a idade sim. Isso pode ser devido ao fato de animais de tenra idade serem mais indefesos que animais adultos. O tipo de maus tratos mais comumente praticado, tanto em cães como em gatos, é a intoxicação intencional e, os agentes tóxicos mais utilizados nestes casos são os carbamatos. Os resultados obtidos sugerem que a ampla utilização dos carbamatos decorre da facilidade com que podem ser adquiridos no comércio e fornecidos aos animais. (AU)

The area of Legal Veterinary Medicine is growing due to the demand of society in restraining crimes against wildlife. In Brazil, little is known about the magnitude of this problem. Thus, this study set out to do a survey of cases in two separate bodies dealing with this type of crime in their routine care: the Autopsy Service, Department of Pathology FMVZ / USP and the Instrumental Analysis Center of the Institute Forensic São Paulo (NAI / IC). This survey enabled the visualization of a qualitative and quantitative profile of the seen cases of abuse committed against dogs and cats in the period 2003 to 2007. The conclusions are: cats are more affected than dogs by the practice of maltreatment; there is no difference regarding sex, but age is a determinant factor, therefore young animals are predominantly maltreated; and the agents most commonly used to cause intentional poisoning are carbamates. (AU)

Cromatografia em camada delgada para o diagnóstico da intoxicação por aldicarb ("chumbinho") em cães e gatos

The present study concerns about the identification of aldicarb residues using thin-layer chromatography (TLC) in 50 samples of gastric content obtained from the necropsy of dogs and cats and 50 samples of foods suspected of being used as baits. All samples resulted positive for aldicarb showing that the TLC is an efficient, fast and not expensive qualitative method for the detection of aldicarb, being useful for this purpose in the forensic veterinary toxicology.

Avaliou-se a cromatografia em camada delgada (CCD) como método de diagnóstico toxicológico para os casos de intoxicação por aldicarb em cães e gatos, utilizando-se 50 amostras de conteúdo gástrico obtidas durante a necropsia e 50 amostras de alimentos utilizados como iscas para intoxicar criminalmente os animais. Todas as amostras resultaram positivas para o aldicarb, mostrando ser a CCD uma técnica qualitativa eficiente, rápida e de baixo custo, com uso potencial na toxicologia veterinária forense.

Toxicologia do praguicida aldicarb ("chumbinho"): aspectos gerais, clínicos e terapêuticos em cães e gatos

Aldicarb (Temik®), an anticholinesterase inhibitor of the carbamate group known as ‘chumbinho, is one of the most toxic of registered pesticides, and has its use restricted to agriculture in Brazil. In spite of it, aldicarb is being very often involved in severe intoxication in humans and animals. It is largely and illegally sold as rodenticide and often used in baits for intentional poisoning of companion animals. Because of this the aldicarb toxicology was reviewed empathizing its chemical properties, toxicokinetic, toxicodynamic, diagnostic and the clinical and therapeutics aspects in dogs and cats.

O aldicarb (Temik®), um agente anticolinesterásico carbamato vulgarmente conhecido como "chumbinho", é considerado um dos praguicidas mais tóxicos disponíveis comercialmente. No Brasil, embora seja registrado para uso agrícola exclusivo, tem sido freqüentemente apontado como o responsável por diversos casos de intoxicação em seres humanos e em animais. Desta forma, o presente estudo faz uma abordagem da toxicologia deste agente, enfocando as propriedades químicas, a toxicocinética, a toxicodinâmica, o diagnóstico e os aspectos clínicos e terapêuticos da intoxicação em cães e gatos.

Toxicologia do praguicida aldicarb ("chumbinho"): aspectos gerais, clínicos e terapêuticos em cães e gatos

Aldicarb (Temik®), an anticholinesterase inhibitor of the carbamate group known as ‘chumbinho’, is one of the most toxic of registered pesticides, and has its use restricted to agriculture in Brazil. In spite of it, aldicarb is being very often involved in severe intoxication in humans and animals. It is largely and illegally sold as rodenticide and often used in baits for intentional poisoning of companion animals. Because of this the aldicarb toxicology was reviewed empathizing its chemical properties, toxicokinetic, toxicodynamic, diagnostic and the clinical and therapeutics aspects in dogs and cats.

O aldicarb (Temik®), um agente anticolinesterásico carbamato vulgarmente conhecido como "chumbinho", é considerado um dos praguicidas mais tóxicos disponíveis comercialmente. No Brasil, embora seja registrado para uso agrícola exclusivo, tem sido freqüentemente apontado como o responsável por diversos casos de intoxicação em seres humanos e em animais. Desta forma, o presente estudo faz uma abordagem da toxicologia deste agente, enfocando as propriedades químicas, a toxicocinética, a toxicodinâmica, o diagnóstico e os aspectos clínicos e terapêuticos da intoxicação em cães e gatos.

Fatal poisoning in dogs and cats - A 6 - year report in a veterinary pathology service / Intoxicação fatal em cães e gatos - casuística de seis anos de um serviço de patologia veterinária

A retrospective evaluation (1999 to 2004) of all 1,875 necropsieswas performed at one Veterinary Pathology Service in Brazil withthe aim of characterizing the cases of fatal poisonings in dogs andcats. During this period, 261 (13.9%) cases of dog or cat poisoningwere identified. For all animals the exposures were of acute nature,caused by a single substance, occurred by ingestion and the mostthem were of intentional nature. The main agent was aldicarbresponsible for 88.6% of the intoxications in dogs and 95.0% incats. Other agents were anticoagulants (10.0% in dogs and 0.8% incats), sodium monofluoracetate (1.4% in dogs) and no specifiedorganic solvent (4.2% in cats).(AU)

Um levantamento retrospectivo (1999-2004) de 1.875 necropsias foi realizado em um Serviço de Patologia Veterinária brasileiro com o objetivo de caracterizar os casos de intoxicação fatal em cães e gatos. Durante este período, 261 (13,9%) cães e gatos tiveram como causa mortis a intoxicação exógena. Em todos os casos, a intoxicação foi de caráter agudo, causada por um único agente tóxico e, na maioria das vezes, de natureza intencional. O carbamato aldicarb foi o agente tóxico mais comum em ambas espécies, sendo responsável por 88,6% dos casos de intoxicação em cães e 95.0% dos casos em gatos. Outros agentes tóxicos encontrados foram o fluoroacetato de sódio (1,4% - em cães) e um solvente orgânico não especificado (4,7% - em gatos).(AU)

Cromatografia em camada delgada para o diagnóstico da intoxicação por aldicarb ("chumbinho") em cães e gatos / Thin-layer chromatography for aldicarb poisoning diagnosis in dogs and cats

Avaliou-se a cromatografia em camada delgada (CCD) como método de diagnóstico toxicológico para os casos de intoxicação por aldicarb em cães e gatos, utilizando-se 50 amostras de conteúdo gástrico obtidas durante a necropsia e 50 amostras de alimentos utilizados como iscas para intoxicar criminalmente os animais. Todas as amostras resultaram positivas para o aldicarb, mostrando ser a CCD uma técnica qualitativa eficiente, rápida e de baixo custo, com uso potencial na toxicologia veterinária forense(AU)

The present study concerns about the identification of aldicarb residues using thin-layer chromatography (TLC) in 50 samples of gastric content obtained from the necropsy of dogs and cats and 50 samples of foods suspected of being used as baits. All samples resulted positive for aldicarb showing that the TLC is an efficient, fast and not expensive qualitative method for the detection of aldicarb, being useful for this purpose in the forensic veterinary toxicology(AU)

Formulações de fungos nematófagos associadas ao controle químico e matéria orgânica no manejo dos nematoides dos citros (Tylenchulus semipenetrans e Pratylenchus jaehni)

Os nematoides dos citros causam perdas consideráveis à citricultura em todo o mundo. Em 1987, foram estimadas perdas de 14,2%. No Brasil, perdas associadas à Tylenchulus semipenetrans foram estimadas em R$ 319 milhões para a safra de 1999/2000 no Estado de São Paulo. Para Pratylenchus jaehni, observou-se perdas de 30% na produção, de pomares de laranja no município de Itápolis-SP. O manejo dessas espécies de nematoides, em pomares infestados é feito, exclusivamente, com uso de aldicarbe (Temik® 150G), contudo o controle biológico pode tornar-se uma alternativa viável de manejo desses nematoides. Os ensaios foram conduzidos nos Municípios de Taquaritinga, Itápolis e Fernandópolis-SP, no período de setembro de 2008 a fevereiro de 2011. Os objetivos desse trabalho foram: avaliar a sobrevivência dos fungos nematófagos nas parcelas que foram tratadas, a campo, com uma formulação de cinco espécies desses agentes de biocontrole; avaliar a influência da adição de matéria orgânica de diferentes fontes para promover o estabelecimento e potencializar a ação dos fungos; estudar o controle químico com doses reduzidas de aldicarbe, associado aos fungos nematófagos no manejo dos nematoides dos citros; avaliar a distribuição espacial nos sentidos norte, sul, leste e oeste de cinco fungos nematófagos aplicados em pomar comercial de citros. A sobrevivência dos fungos nematófagos concluiu-se que as espécies de Arthrobotrys e Monacrosporium já estavam presentes na área e foram recuperadas até a avaliação de 9 meses após a aplicação. No experimento de distribuição geográfica dos fungos nematófagos concluiu-se não existe um padrão de distribuição sob a copa das plantas. Nos experimentos de associação da formulação dos fungos nematófagos com aldicarbe pode-se indicar a aplicação...

The citrus nematodes cause considerable losses to the citrus industry worldwide. In 1987, estimated losses of 14.2%. In Brazil, losses associated with Tylenchulus semipenetrans were estimated at R$ 319 million for the harvest of 1999/2000 in São Paulo. To Pratylenchus jaehni, there was loss of 30% in the production of orange orchards in the county of Itápolis-SP. The management of these species of nematodes in infested orchards is made exclusively with the use of aldicarb (Temik ® 150G), but biological control is emerging as a viable alternative for management of these nematodes. The objectives of this study were to evaluate the survival of nematophagous fungi on plots that were treated, the field, with a formulation of five species of biocontrol agents, to evaluate the influence of the addition of organic matter from different sources to promote the establishment and enhance action of fungi, to study the chemical control with reduced doses of aldicarb associated with nematophagous fungi the management of the citrus nematode; evaluate the spatial distribution in the directions north, south, east and west with applied to five nematophagous fungi in commercial citrus orchards. The survival of nematophagous fungi concluded that the species of Arthrobotrys and Monacrosporium were already present in the area and were recovered up to the evaluation of 9 months after application. In the experiment of geographical distribution of nematophagous fungi concluded there is no standard distribution under the tree canopy. In association experiments the formulation of the nematophagous fungi with aldicarb may indicate the application concurrently with the nematicide aldicarb did not affect the survival of microorganisms in the soil and producing a positive interaction in the control of citrus nematode T. semipenetrans...

Comportamento clínico e perfil hematológico de cães intoxicados experimentalmente com carbamato (Aldicarb) e submetidos à hemodiálise e hemoperfusão

Técnicas dialíticas são estudadas a fim de se verificar suas reais contribuições no tratamento das mais diversas formas deintoxicações. Esta pesquisa foi realizada com o objetivo de avaliar o comportamento clínico e o perfil hematológico de cãesintoxicados com cabamato (Aldicarb) e submetidos a duas diferentes técnicas dialíticas: hemodiálise e hemoperfusão. Quinzecães adultos, sem raça definida foram intoxicados experimentalmente com 4,97mg/kg de peso vivo de Aldicarb, por via oral.Todos os animais, para controle dos efeitos clínicos provocados pela droga, foram medicados 30 minutos e uma hora após aingestão, com sulfato de atropina e benzodiazepínico (Diazepam), ambos na dose de 1mg/kg. Esses cães foram divididos emtrês grupos experimentais, compostos de cinco animais cada, denominados grupos I, II e III. Os animais do grupo II e do grupoIII, três horas após administração do Aldicarb foram submetidos a sessões de duas horas de hemodiálise e de hemoperfusão,respectivamente. Os animais do grupo I serviram de controle, não tendo sido submetidos a nenhum tratamento dialítico. Aintoxicação provocada pelo aldicarb foi capaz de causar alterações clínicas manifestadas por vômito, sialorréia, diarréia,incontinência urinária, fasciculações e alterações no perfil hematológico relacionadas principalmente a hemoconcentração.Houve leucocitose e aumento no número absoluto de neutrófilos em

Intoxicação por aldicarb (\"chumbinho\"): I. Estudo das alterações post mortem microscópicas em cães e gatos - II. Avaliação dos efeitos tóxicos agudos em camundongos / Aldicarb poisoning: I - Study of microscopic post mortem findings in dogs and cats. II - Acute toxicity evaluation in mice

O presente trabalho propôs estudar as alterações microscópicas observadas em 100 casos de intoxicação por aldicarb em cães e gatos e os efeitos agudos (14 dias) induzidos por esse praguicida em camundongos após a administração de dose única oral, avaliando-se as alterações clínicas, laboratoriais, microscópicas e ultraestruturais. As principais lesões microscópicas em cães e gatos foram observadas nos pulmões (congestão, edema, hemorragia, enfisema e atelectasia), fígado (congestão, degeneração vacuolar e hemorragia) e rins (congestão, hemorragia e nefrose). Nos demais órgãos, apenas alterações circulatórias (congestão e hemorragia) foram encontradas. Em ambas espécies, considerando as alterações significantes de acordo com a faixa etária, observou-se que os animais idosos apresentaram o maior grau de intensidade de degeneração vacuolar hepática e que a congestão renal foi mais intensa nos adultos. Em camundongos, observou-se que: 1) doses superiores a 0,08 mg/kg de aldicarb promoveram a morte de todos os animais em 2,6 - 4,7 minutos após a exposição, sendo o óbito precedido por convulsões; 2) a dose de 0,08 mg/kg promoveu o rápido aparecimento dos sinais clínicos clássicos da intoxicação por anticolinesterásicos, com duração de 45 - 120 minutos, sendo esta a dose escolhida para os demais experimentos in vivo; 3) os camundongos expostos mostraram consumo de água superior ao do grupo controle até o 5° dia após a exposição e inferior a partir do 10° dia até o término do experimento (14º dia); 4) quanto ao consumo de ração, de forma geral, camundongos expostos ao praguicida consumiram menos que os não expostos, sendo o ganho de peso inferior ao do grupo controle nas primeiras 48 horas após a intoxicação; 5) as alterações histopatológicas, como observado em cães e gatos, ocorreram principalmente nos pulmões (edema, congestão e hemorragia), fígado (congestão e degeneração vacuolar, principalmente em zona 3) e rins (congestão, hemorragia e nefrose), sendo que as alterações degenerativas em fígado e rins foram significantemente mais intensas até 48 horas após a exposição; 6) na avaliação ultraestrutural (microscopia eletrônica de transmissão) após 24 e 48 horas da exposição, foi observada a presença de tumefação celular e mitocondrial e, após 48 horas, a presença de vacúolos citoplasmáticos hepáticos, os quais continham gordura pela avaliação histoquímica; nos rins foram observadas também desorganização, tumefação e despregamento celulares, além da presença de conteúdo intratubular; 7) os principais achados do hemograma foram a diminuição no número de hemácias após 24 horas da exposição e leucopenia, que persistiu ate o 7° dia da intoxicação; 8) entre as alterações bioquímicas relevantes estão o aumento da glicemia e da amilase após 24 horas da exposição, bem como dos triglicerídeos e da creatinina até 48 horas após o quadro agudo; 9) os principais achados nos ensaios de imunotoxicidade foram o aumento do peso relativo do timo e da celularidade do baço, bem como a diminuição da celularidade da medula óssea nas primeiras 48 horas após a exposição; 10) avaliando-se a indução de morte celular por apoptose e/ou necrose pelo aldicarb em hepatócitos e leucócitos in vitro, constatou-se que o aldicarb promove tanto apoptose quanto necrose de leucócitos de camundongos e que é capaz de aumentar a porcentagem de hepatócitos com apoptose, tanto in vivo quanto in vitro. Tomando-se estes resultados em conjunto, foi possível constatar que a exposição oral aguda grave ao aldicarb produz efeitos nocivos graves, principalmente nos pulmões, fígado, rins, pâncreas e sistema imune, notadamente nas primeiras 48 horas após a exposição

The present study evaluated microscopic post mortem findings in 100 cases of aldicarb intoxication in dogs and cats and the acute toxicity in mice induced by a single dose of aldicarb, assessing the clinical, laboratorial, microscopic and ultrastructural alterations caused by aldicarb up to 14 days after exposition. The most commonly affected organs in dogs and cats were lung (congestion, edema, hemorrhage, emphysema and/or atelectasy), liver (congestion, vacuolar degeneration and/or hemorrhage) and kidney (congestion, hemorrhage and/or nephrosis); the other organs showed circulatory alterations, as congestion and hemorrhage. Considering both species and age we observed that old animals had the most intensity of hepatic vacuolar degeneration and the adult animals the most intensity of renal congestion. Experimental oral aldicarb poisoning resulted in death if mice were exposed to more than 0.08mg/kg, preceded by seizures. Rapid and classical symptoms of anticholinesterase poisoning occurred within 45 minutes to 2 hours after exposure to 0.08mg/kg of oral aldicarb. Animals exposed to 0.08mg/kg of aldicarb presented increased water intake until day 5, followed by decreased water intake from day 10 to day 14 after exposure to the drug in comparison to control animals. Food intake was also decreased in the experimental group. Blood analyses revealed decreased erythrocyte count and leukopenia started 24 hours after exposure and persistent for 7 days. Hyperglycemia, hypertriglyceremia, elevation of amylase and creatinine happened after 24 to 48 hours after exposure. Microscopic evaluation revealed: (i) lung edema, pulmonary congestion and/or pulmonary hemorrhage; (ii) liver congestion and zonal vacuolar degeneration of the liver; (iii) renal congestion, nephrosis and/or kidney hemorrhage. Those alterations were more prominent after 24 to 48 hours of exposure to aldicarb. Ultrastructural analysis (transmission electron microscopy) demonstrated: (i) cellular edema and mitochondrial swelling after 24 and 48 hours after exposure to aldicarb; (ii) lipid vacuoles in hepatocytes after 48 hours of exposure; (iii) renal tubular epithelium disorganization with swelling and intratubular cell exfoliation. Increased thymus/body weight ratio and spleen cellularity and decreased bone marrow cellularity were also found after 48 hours of aldicarb exposure. Aldicarb was able to induce leukocyte dead by necrosis and/or apoptosis in vitro and hepatocyte apoptosis in vivo and in vitro. Altogether, our findings demonstrated that acute oral exposure to aldicarb induces toxic effects mainly to the lungs, liver, kidneys, pancreas, and immune system. Those effects are more evident up to 48 hours after intoxication

Chemical control of the soybean cyst nematode Heterodera glycines in greenhouse conditions / Controle químico do nematoide de cisto da soja Heterodera Glycines em casa-de-vegetação

The soybean cyst nematode (SCN) Heterodera glycines Ichinohe, is the most important pest of soybean in the United States, eastern Asia and Brazil. The effects of abamectin (Vertimec 18 CE) on the NCS was evaluated under a greenhouse conditions. Three abamectin rates (lOO, 200 and 300 ml p.c/ha) were sprayed above ground of soybeans plants at 15, 21, 28 and 35 days after the transplant (d.a.t.). Aldicarb (Temik 10 G). 0,07g/ pot was incorporated to the soil short after the transplantation. Abamectin increased significantly plant height and the weight of fresh and dry root system and above ground part of soybean plants, and reduced significantly the number of females/g of roots when compared to the check and the aldicarb,

O nematóide de cisto da soja (NCS), Heterodera glycines Ichinohe, é uma das mais importantes pragas dessa cultura no Brasil, Estados Unidos e Ásia Oriental. O efeito do abamectin (Vertimec 18 CE) e do aldicarb (Temik 10 G) sobre o NCS foi avaliado em condições de casa-de-vegetação. Em plântulas de soja cv. "Cristalina" transplantadas em vasos de argila contendo solo naturalmente infestado, o abamectin foi aplicado via foliar nas doses 100, 200 e 300 ml p.c./ha, aos 15,21, 28 c 35 dias após o transplante (d.a.t.). O aldicarb {Temik 10 G) na dose de 0.07g/ vaso, foi incorporado ao solo, em três orifícios ao redor de cada plântufa. O abamectin aumentou significativamente a altura de plantas e pesos da maioria, fresca e seca de raízes e da parte aérea e reduziu significativamente o número de fêmeas/ g de raiz, quando comparado ao aldicarb e à testemunha.