Parâmetros espermáticos do sêmen suíno conservado a 10 e 17o C, em diluentes comerciais e alternativos / Spermatic parameters of swine semen conserved at 10 and 17o C, in commercial and alternative extenders

O uso de diluentes adequados é importante para o sucesso da inseminação artificial. O objetivo deste estudo foi avaliar a eficiência de diluentes em diferentes temperaturas. Foram utilizados os seguintes diluentes: Beltsville Thwaing Solution (BTS); TRIS (Tris-hidroximetil-aminometano - H2NC(CH2OH)3); TRIS + gema de ovo (TGO) e Leite em pó desnatado (LPD). Cinquenta ejaculados foram analisados quanto ao vigor, à motilidade, à funcionalidade de membrana e à atividade mitocondrial. Os diluentes TGO e LPD mantiveram os maiores valores para vigor e motilidade a 10 °C, em comparação aos demais tratamentos (p<0,05). A 17 °C, esses diluentes apresentaram resultados melhores de vigor e motilidade em relação aos demais, somente até D1 (p<0,05). A partir de D2, o BTS mostrou-se como o melhor diluente para a preservação dessas características. Maior percentual de espermatozoides com membrana funcional foi observado no TGO a 10 °C, seguido do LPD, BTS e TRIS (p<0,05). A 17 °C, o BTS manteve essa característica, exceto em D0, em que o TGO e o LPD apresentaram melhores resultados. Quanto a atividade mitocondrial, maiores valores foram observados a 10 °C no TGO em todos os dias de análise e em D0 à temperatura de 17 °C. O diluente TRIS + gema de ovo mostrou-se como uma alternativa para conservação do sêmen suíno a 10 °C, assim como o LPD. Além disso, esses mesmos diluentes constituem alternativas para conservação a curto prazo a 17 °C.

The use of suitable extenders is important to artificial insemination success. Therefore, the objective of this study was to evaluate the efficiency of extenders at different temperatures. The following extenders were used: Beltsville Thawing Solution (BTS); TRIS (Tris-hidroximetil-aminometano - H2NC(CH2OH)3); TRIS + egg yolk (TGO), and skim powdered milk (SPM). Fifty ejaculates were analyzed regarding sperm vigor, motility, membrane functionality, and mitochondrial activity. The TGO and SPM extenders maintained the highest values for vigor and motility at 10 °C, in comparison to the other treatments (p<0.05). At 17 °C, these extenders showed better results of vigor and motility compared to the others, only until D1 (p<0.05). From D2, BTS proved to be the best extender to preserve these characteristics. A higher percentage of sperm with a functional membrane was observed for TGO at 10 °C, followed by SPM, BTS, and TRIS (p<0.05). At 17 °C, BTS maintained this characteristic, except for DO, which showed better results for TGO and SPM. Regarding the mitochondrial activity, higher values were observed at 10 °C for TGO on all days of analysis and D0 at a temperature of 17 °C. The extender TRIS + egg yolk was shown as an alternative for the conservation of swine semen at 10 °C, as well as the SPM. In addition, these same extenders are alternatives for short-term conservation at 17 °C.

Sperm cell capacitation status of ram semen after cooling

Background: The use of conventional artificial insemination (AI) in sheep production is usually associated with lower fertility rates when frozen semen is used. Cooled ram semen has been an alternative over frozen semen due to the higher viability, seminal quality and fertility rates following AI. The semen preservation process promotes sperm cell modifications similar to capacitation (capacitation-like) that causes cell damage affecting viability and seminal quality, but such effects are unclear for cooled semen. The aim of this study was to determine the status of sperm cell capacitation (CA) and acrosome reaction (AR) during ram semen processing and cooling under different extenders, dilution factors, and aerobiosis conditions as a function of storage time at 5o C. Materials, Methods & Results: Two consecutive ejaculates per day per male were collected from 2 adult rams by artificial vagina at 48-72 h intervals, in three replications. After macro- and microscopic evaluations, semen was segregated into groups under 3 extenders (Tris-egg yolk or TY, citrate-egg yolk or CY, skimmed milk or SM), 2 dilution factors (1 x 109 or Bi, 100 x 106 or Mi cells/mL), and 2 aerobiosis conditions (aerobic or A, semi-anaerobic or SA). Diluted semen was cooled to 5ºC and stored for up to 72 h, with evaluations every 24 h. Aliquots of fresh ejaculates and of each cooled diluted subgroup, according to extender, dilution, and aerobiosis, were collected at times T0 and T72 for determination of acrosome status and membrane integrity by the chlortetracycline (CTC) and trypan blue-Giemsa stainings, respectively. No differences were detected in sperm cell motility (M) and motility vigor (V) between fresh and diluted semen. After cooling, a significant decrease in M was observed after 48 h in CY and SM compared with fresh semen and 0 h of cooling, while V started to decrease after 24 h in CY compared with TY. Likewise, M/V from different dilutions and aerobic conditions decreased more significantly after 48 and 24 h of cooling, respectively. The sperm capacitation status did not show differences in the proportion of non-capacitated (NCA), CA and AR sperm cells between TY, CY, and SM extenders (NCA: 75.0%, 71.3%, 74.0%; CA: 15.7%, 17.2%, 15.9%; AR: 9.3%, 11.5%, 10.2%) or between Bi and Mi dilutions (NCA: 74.0%, 72.9%; CA: 15.9%, 16.6%; AR: 10.1%, 10.5%), respectively. However, differences (P < 0.05) were observed between A and SA aerobic conditions, with CA (17.0% vs. 15.5%) and AR (11.9% vs. 8.7%) rates being higher in A than SA, respectively, with no differences in NCA (71.1% vs. 75.8%), irrespective of the storage time. Sperm cell viability decreased after 48 h, especially in CY (P < 0.05). Discussion: Ram sperm cells can suffer irreversible damage due to thermal shock during cooling. Egg yolk-based extenders provide phospholipids and cholesterol to protect the sperm cell membrane during the thermal shock caused by the change in temperature. In this study, sperm cells had irreversible decreases in M/V, with increase in acrosome and plasma membrane damage after cooling to 5ºC. The largest and smallest decreases in M and V over time were observed in the CY and TY extenders, respectively. In addition to the extender type, the semen preservation method and storage time promoted changes in the capacitation status, AR and in sperm cell viability, which per se were associated with a decrease in semen fertility. In fact, the proportions of CA and/or AR sperm cells gradually increased over time after dilution and storage at 5ºC, with a negative correlation between sperm cell viability and M/V over time. In summary, extender and cooling time affected mostly M/V, while aerobiosis condition and dilution factor were more associated with acrosome status and sperm survival, with the extender having less impact on the acrosome status as a function of time.

Uso de gema de ovo em diferentes concentrações na congelação espermática de Prochilodus brevis e sua influência em parâmetros cinéticos / Use of egg yolk on Prochilodus brevis sperm freezing and its influence on kinect parameters

Prochilodus brevis is a fish species with an important ecological and economic role. Therefore, its captive breeding, together with sperm cryopreservation, come as an alternative to improve its availability. To perform sperm cryopreservation with quality results, it is necessary to develop studies on cryomedia composition, such as non-permeable cryoprotectants. The aim of the study was to test the efficacy of two non-permeable cryoprotectants on post-thawed kinetic parameters of Prochilodus brevis sperm. Twenty reproductive mature P. brevis males were selected and induced to sperm with carp pituitary extract. The sperm was collected, and five pools were made. Pools were diluted in 5% glucose and 10% DMSO added or not with three different concentrations of egg yolk (5; 10 or 12%). The samples were placed on French straws, frozen in dry shipper and stored in liquid nitrogen. After thawing, the kinetic analyses of computer assisted sperm analysis (CASA) were performed. There were no significant differences between the total motility of the control (60.48%) and treatments (49.0; 47.8 and 51.68%, respectively). The other kinetic parameters also showed no statistical difference. Thus, there is no need to use egg yolk in the freezing of P. brevis sperm when using a glucose and DMSO extender.

Uso de gema de ovo em diferentes concentrações na congelação espermática de Prochilodus brevis e sua influência em parâmetros cinéticos / Use of egg yolk on Prochilodus brevis sperm freezing and its influence on kinect parameters

Prochilodus brevis is a fish species with an important ecological and economic role. Therefore, its captive breeding, together with sperm cryopreservation, come as an alternative to improve its availability. To perform sperm cryopreservation with quality results, it is necessary to develop studies on cryomedia composition, such as non-permeable cryoprotectants. The aim of the study was to test the efficacy of two non-permeable cryoprotectants on post-thawed kinetic parameters of Prochilodus brevis sperm. Twenty reproductive mature P. brevis males were selected and induced to sperm with carp pituitary extract. The sperm was collected, and five pools were made. Pools were diluted in 5% glucose and 10% DMSO added or not with three different concentrations of egg yolk (5; 10 or 12%). The samples were placed on French straws, frozen in dry shipper and stored in liquid nitrogen. After thawing, the kinetic analyses of computer assisted sperm analysis (CASA) were performed. There were no significant differences between the total motility of the control (60.48%) and treatments (49.0; 47.8 and 51.68%, respectively). The other kinetic parameters also showed no statistical difference. Thus, there is no need to use egg yolk in the freezing of P. brevis sperm when using a glucose and DMSO extender.(AU)

Effect of refrigeration at -1°C on spermatozoa quality of domestic cats / Efeito da refrigeração a -1°C na qualidade de espermatozoides de gatos domésticos

The objective of this study was to evaluate the sperm quality obtained of domestic cats by electroejaculation and recovery of the tail of the epididymis after cooling at -1°C and 4°C for 24 and 48 hours. Twenty-nine adult cats (2 to 6kg) were used. Sperm collection was performed by electroejaculation (EEJ), and after 48 hours, the cats were orchiectomized, and sperm sample was obtained from the vas deferens and epididymis tail (EPD). The samples were diluted in ACP-117® extender, and the sperm characteristics were evaluated at three different moments: when still fresh, 24 and 48 hours after cooling. The objective of this study was to evaluate the sperm quality obtained of domestic cats by electroejaculation and recovery of the tail of the epididymis after cooling at -1°C and 4°C for 24 and 48 hours. Twenty-nine adult cats (2 to 6kg) were used. Sperm collection was performed by electroejaculation (EEJ), and after 48 hours, the cats were orchiectomized, and sperm sample was obtained from the vas deferens and epididymis tail (EPD). The samples were diluted in ACP-117® extender, and the sperm characteristics were evaluated at three different moments: when still fresh, 24 and 48 hours after cooling. In order to compare the two refrigeration temperatures, the first stage was to analyze if there was a difference between the harvesting techniques. After this, two experiments were conducted: in the first, sperm sample from 14 cats were used and the cooling was performed at -1°C; and in the second, sample from 15 cats were used and the sperm were refrigerated at 4°C. Sperm kinetics were evaluated by computerized analysis (CASA) and concentration by Neubauer chamber, spermatic morphology was evaluated by modified Karras staining, and membrane integrity was evaluated by eosin nigrosine. The results obtained were analyzed in R software, version 3.2.5 using the Mann-Whitney test for variables with abnormal distributions, considering significance at the level of 5%. In ejaculate samples, higher values of total morphological defects were observed after 24 and 48 hours of refrigeration at 4°C (P<0.022) compared to refrigeration at -1°C, using Friedman test. To quantify the decrease in sperm quality, parameter reductions were calculated among time points (F-24h/F-48h/24h-48h). In EPD samples, a greater reduction in sperm quality was detected after 24 hours of refrigeration at 4°C, both in motility and sperm kinetics and in the movement and velocity indices, compared to refrigeration at -1°C. Based on the results, it can be concluded that cooling of feline spermatozoa at -1°C for up to 48 hours was efficient in maintaining spermatic quality collected by EEJ and EPD, and it could be an alternative to spermatozoa cryopreservation in domestic felines.(AU)

O objetivo deste trabalho foi avaliar a qualidade espermática de gatos domésticos obtidos por eletroejaculação e recuperação da cauda do epidídimo após a refrigeração a -1°C e a 4°C por 24 e 48 horas. Vinte e nove gatos adultos (2 a 6kg) foram utilizados. A colheita de espermatozoides foi realizada por eletroejaculação (EEJ) e, após 48 horas, os gatos foram orquiectomizados, e as amostras espermáticas foram obtidas a partir do ducto deferente e da cauda do epidídimo (EPD). As amostras foram diluídas em ACP-117® e as características espermáticas foram avaliadas em três momentos distintos: fresco, 24 e 48 horas após a refrigeração. Para ser possível comparar as duas temperaturas de refrigeração, a primeira etapa foi analisar se havia diferença entre as técnicas de colheita. Após isto, dois experimentos foram conduzidos: no primeiro, espermatozoides de 14 gatos foram utilizados e a refrigeração foi realizada a -1°C; e no segundo, amostras de 15 gatos foram utilizados e os espermatozoides foram refrigerados a 4°C. A cinética espermática foi avaliada por análise computadorizada (CASA), a concentração por câmara de Neubauer, a morfologia espermática foi avaliada pela coloração de Karras modificada, e a integridade da membrana foi avaliada por eosina nigrosina. Os resultados obtidos foram analisados no software R, versão 3.2.5, utilizando o teste de Mann-Whitney para variáveis com distribuições anormais, considerando significância ao nível de 5%. No ejaculado, maiores valores de defeitos morfológicos totais foram observados após 24 e 48 horas de refrigeração a 4°C (P<0,022) em comparação com refrigeração a -1°C, usando o teste de Friedman. Para quantificar a diminuição na qualidade espermática, as reduções dos parâmetros foram calculadas entre os pontos de tempo (F-24h/F-48h/24h-48h). Na EPD, uma maior redução na qualidade espermática foi detectada após 24 horas de refrigeração a 4°C, tanto na motilidade e na cinética espermática quanto nos índices de movimento e velocidade, em comparação com a refrigeração a -1°C. Com base nos resultados, pode concluir-se que a refrigeração dos espermatozoides felino a -1°C, até 48 horas, foi eficaz na manutenção da qualidade espermático colhidos por EEJ e EPD, e pode ser uma alternativa para a criopreservação de espermatozoides em felinos domésticos.(AU)

Aspectos econômicos e avaliação do período de viabilidade de espermatozoides ovino imunossexados e diluídos em meio de conservação à base de água de coco em pó (ACP-102c) / Economic aspects and evaluation of the viability period of immunosexed and diluted ram sperm in powdered coconut water conservation extender (ACP-102c)

Background: Sperm sexing is increasing in use because pre-determining the sex of the calf allows greater profitability and promotes significant gains in the productive systems that utilize the technique. Deployment of a low-cost and practical preservation methodol-ogy may further favor the cost-benefit ratio. Flow cytometry, the most commonly used sexing technique, has high costs and is very restricted. As an alternative, immunosexing has been studied, which uses sex-specific monoclonal antibodies. Thus, the objective of this study was to evaluate the immunosexing technique in conjunction with cryopreservation in ACP-102c and examine its economic aspects with regard to ram semen.Materials, Methods & Results: Ejaculates from two ram individuals were collected with the aid of an artificial vagina, evaluated, and submitted to the immunosexing protocol, according to the manufacturer’s recommendations, using the Monoclonal Antibody Kit specific for mammalian sperm with “Y” chromosomes (HY; HY Biotechnology, Rio de Janeiro-RJ, Brazil). After sexing, the supernatant was resuspended in the cryopreservation diluent: ACP (ACP-102c + 20% egg yolk + 7% glycerol), packaged in 0.25 mL straws, refrigerated to 4°C, stabilized for 30 min, frozen in liquid nitrogen vapors (-60°C) for 15 min, immersed in liquid nitrogen, and stored in cryogenic cylinders. The samples were thawed and evaluated for sperm kinetics both by using computerized semen analysis with SCA® software (Sperm Class Analyzer version 5.0) and subjectively comparing specimens from the two animals using conventional microscopy (40x). Plasma membrane integrity (IMP) and sperm cell morphology were evaluated by the smear staining technique...

Does resveratrol preserve the integrity of the sperm membrane in goats after thawing? / O resveratrol preserva a integridade da membrana espermática de caprinos após descongelamento?

This study aimed to determine the effects of resveratrol in the trisaminomethane (TRIS)-egg yolk extender and its optimal inclusion level for goat semen cryopreservation. Five ejaculates of three Anglo Nubian goats were used, each divided into four 200 µL aliquots for use in four treatments: 0.00 (control), 0.04, 0.08 and 0.12 mg mL-¹ resveratrol in the TRIS-egg yolk extender. We evaluated progressive sperm motility and sperm vigor post-dilution, post-cooling, and post thawing; membrane integrity (HOST); and acrosomal integrity and performed a slow thermoresistance test (STT). The data were submitted to a regression analysis at a 5% probability. There was no difference in progressive motility or sperm vigor in the post-dilution (89.5, 89.0, 88.7 and 88.3, and 4.9, 5.0, 4.9, and 4.9) or post-cooling (81.0, 82.0, 83.0, and 78.3; and 4.3, 4.3, 4.2, and 4.2) experiments (P > 0.05), or in the complementary acrosomal integrity test (42.0, 47.4, 42.2 and 38.2) (P > 0.05). However, the motility and vigor parameters decreased linearly in the post-thaw phase, as well as during the 2 hours of incubation on STT (P < 0.05). These factors increased quadratically when resveratrol was added to HOST, to an optimal level of 0.039 mg mL-¹ resveratrol for a plasma membrane integrity of 52.55% (P < 0.05). The inclusion of resveratrol was effective in maintaining sperm viability; in particular, it was effective in maintaining plasmatic membrane integrity during the cryopreservation process up to 0.039 mg mL-1, meaning that it could be an alternative to conventionally used seminal extenders in goats.

O objetivo deste estudo foi determinar os efeitos e o melhor nível de inclusão de resveratrol em meio diluidor TRIS gema de ovo para criopreservação de sêmen caprino. Foram utilizados cinco ejaculados de três bodes da raça Anglo Nubiana. Cada ejaculado foi dividido em quatro alíquotas de 200 µL, compondo quatro tratamentos: 0,00 (controle); 0,04; 0,08 e 0,12mg mL-¹ de resveratrol no diluidor TRIS gema de ovo. Foram avaliadas a motilidade espermática progressiva e o vigor espermático pós diluição, pós-resfriamento e pós-descongelamento; integridade de membrana (HOST); integridade acrossomal e teste de termorresistência lento (TTR). Os dados foram submetidos à análise de regressão a 5% de probabilidade. Não houve diferença para a motilidade progressiva e o vigor espermático, respectivamente, na pós-diluição (89,5; 89,0; 88,7 e 88,3) e (4,9; 5,0; 4,9 e 4,9) e pós-resfriamento (81,0; 82,0; 83,0 e 78,3) e (4,3; 4,3; 4,2 e 4,2) (P 0,05). No entanto, os parâmetros motilidade e vigor reduziram linearmente no pós-descongelamento, assim como durante as 2 horas de incubação no TTR (P < 0,05). Houve efeito quadrático com a inclusão de resveratrol para HOST, apresentando um nível ótimo de 0,039mg mL-¹ de resveratrol para integridade de membrana plasmática de 52,55% (P <0,05). A inclusão de resveratrol foi eficiente na manutenção da viabilidade espermática; em especial, foi eficiente na manutenção da integridade da membrana plasmática durante o processo de criopreservação até o nível de 0,039mg mL-¹, podendo ser uma alternativa na composição dos diluidores seminais de caprinos.

Does resveratrol preserve the integrity of the sperm membrane in goats after thawing? / O resveratrol preserva a integridade da membrana espermática de caprinos após descongelamento?

This study aimed to determine the effects of resveratrol in the trisaminomethane (TRIS)-egg yolk extender and its optimal inclusion level for goat semen cryopreservation. Five ejaculates of three Anglo Nubian goats were used, each divided into four 200 µL aliquots for use in four treatments: 0.00 (control), 0.04, 0.08 and 0.12 mg mL-¹ resveratrol in the TRIS-egg yolk extender. We evaluated progressive sperm motility and sperm vigor post-dilution, post-cooling, and post thawing; membrane integrity (HOST); and acrosomal integrity and performed a slow thermoresistance test (STT). The data were submitted to a regression analysis at a 5% probability. There was no difference in progressive motility or sperm vigor in the post-dilution (89.5, 89.0, 88.7 and 88.3, and 4.9, 5.0, 4.9, and 4.9) or post-cooling (81.0, 82.0, 83.0, and 78.3; and 4.3, 4.3, 4.2, and 4.2) experiments (P > 0.05), or in the complementary acrosomal integrity test (42.0, 47.4, 42.2 and 38.2) (P > 0.05). However, the motility and vigor parameters decreased linearly in the post-thaw phase, as well as during the 2 hours of incubation on STT (P < 0.05). These factors increased quadratically when resveratrol was added to HOST, to an optimal level of 0.039 mg mL-¹ resveratrol for a plasma membrane integrity of 52.55% (P < 0.05). The inclusion of resveratrol was effective in maintaining sperm viability; in particular, it was effective in maintaining plasmatic membrane integrity during the cryopreservation process up to 0.039 mg mL-1, meaning that it could be an alternative to conventionally used seminal extenders in goats.(AU)

O objetivo deste estudo foi determinar os efeitos e o melhor nível de inclusão de resveratrol em meio diluidor TRIS gema de ovo para criopreservação de sêmen caprino. Foram utilizados cinco ejaculados de três bodes da raça Anglo Nubiana. Cada ejaculado foi dividido em quatro alíquotas de 200 µL, compondo quatro tratamentos: 0,00 (controle); 0,04; 0,08 e 0,12mg mL-¹ de resveratrol no diluidor TRIS gema de ovo. Foram avaliadas a motilidade espermática progressiva e o vigor espermático pós diluição, pós-resfriamento e pós-descongelamento; integridade de membrana (HOST); integridade acrossomal e teste de termorresistência lento (TTR). Os dados foram submetidos à análise de regressão a 5% de probabilidade. Não houve diferença para a motilidade progressiva e o vigor espermático, respectivamente, na pós-diluição (89,5; 89,0; 88,7 e 88,3) e (4,9; 5,0; 4,9 e 4,9) e pós-resfriamento (81,0; 82,0; 83,0 e 78,3) e (4,3; 4,3; 4,2 e 4,2) (P < 0,05), assim como para o teste complementar integridade acrossomal (42,0; 47,4; 42,2 e 38,2) (P > 0,05). No entanto, os parâmetros motilidade e vigor reduziram linearmente no pós-descongelamento, assim como durante as 2 horas de incubação no TTR (P < 0,05). Houve efeito quadrático com a inclusão de resveratrol para HOST, apresentando um nível ótimo de 0,039mg mL-¹ de resveratrol para integridade de membrana plasmática de 52,55% (P <0,05). A inclusão de resveratrol foi eficiente na manutenção da viabilidade espermática; em especial, foi eficiente na manutenção da integridade da membrana plasmática durante o processo de criopreservação até o nível de 0,039mg mL-¹, podendo ser uma alternativa na composição dos diluidores seminais de caprinos.(AU)

QUALIDADE ESPERMÁTICA DURANTE A CURVA DE RESFRIAMENTO DO SÊMEN SUÍNO DILUÍDO EM ÁGUA DE COCO EM PÓ VISANDO SUA CRIOPRESERVAÇÃO

Abstract Semen cryopreservation is associated with low productivity results. This study aimed to test the Coconut Water Powder (ACP®-103) as a ressuspension diluent after thawing semen, also evaluate sperm quality during the cooling curve until thawing of the semen. For this, the semen was collected from 15 boars once a week, incubated at 30 ºC for 15 minutes, and afterwards, the samples were diluted in the diluent Beltsville Thawing Solution - BTS (Control) or ACP-103®, and subjected to a slow cooling curve, where the force and the motility were analyzed in each step. The thawed semen was ressuspended in its respective solvents and analyzed in the characteristics of vigor, motility, vitality, acrosome integrity and functionality of the membrane. During the analysis of vigor and motility that make up the cooling curve, and thawing, for analysis of vitality and intact acrosomal membrane, it was observed that there was no significant difference between treatments. Besides, after thawing, the BTS showed better results of sperm vigor, sperm motility and membrane functionality. However, the cooling curve and coconut water powder can be used in the protocol for cryopreservation of boar semen, as both ensured quality of sperm viability that may be used in artificial insemination.

Resumo A criopreservação seminal apresenta baixos resultados produtivos. Objetivou-se testar a Água de Coco em Pó (ACP-103®) como diluente de ressuspensão após a descongelação seminal e avaliar a qualidade espermática durante a curva de resfriamento até a descongelação do sêmen. Para isso, o sêmen de 15 reprodutores foi coletado uma vez por semana, incubado a 30 ºC por 15 minutos, e em seguida diluído em Beltsville Thawing Solution - BTS (controle) ou em ACP-103®, e submetidos a uma curva de resfriamento lenta, onde foram feitas análises de vigor e motilidade em cada passo. O sêmen descongelado foi ressuspenso em seus respectivos diluentes e analisado quanto às características: vigor, motilidade, vitalidade, integridade acrossomal e funcionalidade da membrana. Durante as análises de vigor e motilidade que compõem a curva de resfriamento, e na descongelação, para as análises de vitalidade e membrana acrossomal intacta, observou-se que não houve diferença significativa entre os tratamentos. Já após a descongelação, o BTS apresentou melhores resultados de vigor, motilidade espermática e funcionalidade da membrana. No entanto, a curva de resfriamento e o ACP-103® podem ser utilizadas no protocolo de criopreservação do sêmen suíno, visto que ambas asseguraram qualidade da viabilidade espermática.

Use of alternative extender added of fructose aiming the cryopreservation of boar semen / Utilização de diluente alternativo acrescido de frutose visando à criopreservação de sêmen suíno

This study aimed to analyze skimmed milk powder (SMP) and fructose in a new cooling curve to freeze boar semen. A total of 49 semen samples from seven boars were cryopreserved using the new curve with addition of glucose and fructose to the refrigerating diluents: Beltsville Thawing Solution (BTS + G; BTS + F) and Skimmed milk powder (SMP + G; SMP + F), totaling four experimental groups for analysis. To finish the curve, aliquots of semen were packaged in 0.5 ml straws and kept in liquid nitrogen. During the cooling curve, SMP mean spermatic vigor and motility were greater than the BTS (p < 0.05). After thawing, a decrease of spermatic force and motility in both extenders was observed, where the BTS presented spermatic vigor (2.1 ± 0.55) and motility (38 ± 21.8), presenting better results (p < 0.05). There was no statistical difference between sugars added to the BTS and SMP in spermatic force and motility (p > 0.05), although the use of fructose allowed an equalization of motility between the SMP and BTS (p > 0.05). Functionality of membrane was better preserved with the addition of fructose, in both extenders. The rate of sperm viability was significantly higher in extender containing glucose and SMP (71.8 ± 12.5). The percentage of intact acrosome was higher on the treatment containing glucose, independent of the extender (BTS + G: 81.8 ± 7.2, SMP + G: 81.4 ± 14.2). To conclude, the results suggest that the BTS is still the best option to cryopreserve and fructose could be used in boar semen cryopreservation in new cooling curve.(AU)

O presente trabalho analisou o emprego do leite em pó desnatado (LPD) adicionado de frutose em uma nova curva de resfriamento para criopreservação de sêmen suíno. Um total de 49 ejaculados, de sete varrões foram criopreservados utilizando a nova curva de resfriamento com glicose e frutose adicionada aos diluentes Beltsville Thawing Solution (BTS + D; BTS + F) e Leite em pó desnatado (LPD + D; LPD + F), totalizando quatro grupos experimentais para análises. Ao final da curva, as alíquotas de sêmen foram envasadas em palhetas de 0,5 mL e mantidas em nitrogênio líquido. Durante a curva de resfriamento, a média de vigor e motilidade espermática do LPD foi maior do que do BTS (p < 0.05). Após descongelação, observou-se queda do vigor e motilidade em ambos diluentes, com o BTS apresentando melhores resultados de vigor (2,1 ± 0,55) e de motilidade (38 ± 21,8) (p < 0,05). Entretanto, o uso da frutose permitiu equiparação dos valores da motilidade entre LPD e BTS (p > 0,05). A funcionalidade de membrana foi melhor preservada com adição da frutose, em ambos os diluentes. Os dados de vitalidade espermática foram significativamente maiores no diluente contendo glicose e LPD (71,8 ± 12,5). A porcentagem de acrossomas intactos foi maior no tratamento que continha glicose, independentemente do diluente utilizado (BTS + G: 81,8 ± 7,2, SMP + G: 81,4 ± 14,2). Os resultados obtidos indicaram que o BTS, ainda é a melhor opção de criopreservação e que a frutose pode ser utilizada para criopreservação de sêmen de varrão na nova curva de resfriamento.(AU)

Use of alternative extender added of fructose aiming the cryopreservation of boar semen / Utilização de diluente alternativo acrescido de frutose visando à criopreservação de sêmen suíno

This study aimed to analyze skimmed milk powder (SMP) and fructose in a new cooling curve to freeze boar semen. A total of 49 semen samples from seven boars were cryopreserved using the new curve with addition of glucose and fructose to the refrigerating diluents: Beltsville Thawing Solution (BTS + G; BTS + F) and Skimmed milk powder (SMP + G; SMP + F), totaling four experimental groups for analysis. To finish the curve, aliquots of semen were packaged in 0.5 ml straws and kept in liquid nitrogen. During the cooling curve, SMP mean spermatic vigor and motility were greater than the BTS (p < 0.05). After thawing, a decrease of spermatic force and motility in both extenders was observed, where the BTS presented spermatic vigor (2.1 ± 0.55) and motility (38 ± 21.8), presenting better results (p < 0.05). There was no statistical difference between sugars added to the BTS and SMP in spermatic force and motility (p > 0.05), although the use of fructose allowed an equalization of motility between the SMP and BTS (p > 0.05). Functionality of membrane was better preserved with the addition of fructose, in both extenders. The rate of sperm viability was significantly higher in extender containing glucose and SMP (71.8 ± 12.5). The percentage of intact acrosome was higher on the treatment containing glucose, independent of the extender (BTS + G: 81.8 ± 7.2, SMP + G: 81.4 ± 14.2). To conclude, the results suggest that the BTS is still the best option to cryopreserve and fructose could be used in boar semen cryopreservation in new cooling curve.(AU)

O presente trabalho analisou o emprego do leite em pó desnatado (LPD) adicionado de frutose em uma nova curva de resfriamento para criopreservação de sêmen suíno. Um total de 49 ejaculados, de sete varrões foram criopreservados utilizando a nova curva de resfriamento com glicose e frutose adicionada aos diluentes Beltsville Thawing Solution (BTS + D; BTS + F) e Leite em pó desnatado (LPD + D; LPD + F), totalizando quatro grupos experimentais para análises. Ao final da curva, as alíquotas de sêmen foram envasadas em palhetas de 0,5 mL e mantidas em nitrogênio líquido. Durante a curva de resfriamento, a média de vigor e motilidade espermática do LPD foi maior do que do BTS (p < 0.05). Após descongelação, observou-se queda do vigor e motilidade em ambos diluentes, com o BTS apresentando melhores resultados de vigor (2,1 ± 0,55) e de motilidade (38 ± 21,8) (p < 0,05). Entretanto, o uso da frutose permitiu equiparação dos valores da motilidade entre LPD e BTS (p > 0,05). A funcionalidade de membrana foi melhor preservada com adição da frutose, em ambos os diluentes. Os dados de vitalidade espermática foram significativamente maiores no diluente contendo glicose e LPD (71,8 ± 12,5). A porcentagem de acrossomas intactos foi maior no tratamento que continha glicose, independentemente do diluente utilizado (BTS + G: 81,8 ± 7,2, SMP + G: 81,4 ± 14,2). Os resultados obtidos indicaram que o BTS, ainda é a melhor opção de criopreservação e que a frutose pode ser utilizada para criopreservação de sêmen de varrão na nova curva de resfriamento.(AU)

Qualidade espermática durante a curva de resfriamento do sêmen suíno diluído em água de coco em pó visando sua criopreservação / Sperm quality during the cooling curve of swine semen diluted in coconut water extender aiming your cryopreservation

A criopreservação seminal apresenta baixos resultados produtivos. Objetivou-se testar a Água de Coco em Pó (ACP-103®) como diluente de ressuspensão após a descongelação seminal e avaliar a qualidade espermática durante a curva de resfriamento até a descongelação do sêmen. Para isso, o sêmen de 15 reprodutores foi coletado uma vez por semana, incubado a 30 oC por 15 minutos, e em seguida diluído em Beltsville Thawing Solution – BTS (controle) ou em ACP-103®, e submetidos a uma curva de resfriamento lenta, onde foram feitas análises de vigor e motilidade em cada passo. O sêmen descongelado foi ressuspenso em seus respectivos diluentes e analisado quanto às características: vigor, motilidade, vitalidade, integridade acrossomal e funcionalidade da membrana. Durante as análises de vigor e motilidade que compõem a curva de resfriamento, e na descongelação, para as análises de vitalidade e membrana acrossomal intacta, observou-se que não houve diferença significativa entre os tratamentos. Já após a descongelação, o BTS apresentou melhores resultados de vigor, motilidade espermática e funcionalidade da membrana. No entanto, a curva de resfriamento e o ACP-103® podem ser utilizadas no protocolo de criopreservação do sêmen suíno, visto que ambas asseguraram qualidade da viabilidade espermática.

Semen cryopreservation is associated with low productivity results. This study aimed to test the Coconut Water Powder (ACP®-103) as a ressuspension diluent after thawing semen, also evaluate sperm quality during the cooling curve until thawing of the semen. For this, the semen was collected from 15 boars once a week, incubated at 30 °C for 15 minutes, and afterwards, the samples were diluted in the diluent Beltsville Thawing Solution – BTS (Control) or ACP-103®, and subjected to a slow cooling curve, where the force and the motility were analyzed in each step. The thawed semen was ressuspended in its respective solvents and analyzed in the characteristics of vigor, motility, vitality, acrosome integrity and functionality of the membrane. During the analysis of vigor and motility that make up the cooling curve, and thawing, for analysis of vitality and intact acrosomal membrane, it was observed that there was no significant difference between treatments. Besides, after thawing, the BTS showed better results of sperm vigor, sperm motility and membrane functionality. However, the cooling curve and coconut water powder can be used in the protocol for cryopreservation of boar semen, as both ensured quality of sperm viability that may be used in artificial insemination.

Qualidade espermática durante a curva de resfriamento do sêmen suíno diluído em água de coco em pó visando sua criopreservação / Sperm quality during the cooling curve of swine semen diluted in coconut water extender aiming your cryopreservation

A criopreservação seminal apresenta baixos resultados produtivos. Objetivou-se testar a Água de Coco em Pó (ACP-103®) como diluente de ressuspensão após a descongelação seminal e avaliar a qualidade espermática durante a curva de resfriamento até a descongelação do sêmen. Para isso, o sêmen de 15 reprodutores foi coletado uma vez por semana, incubado a 30 oC por 15 minutos, e em seguida diluído em Beltsville Thawing Solution BTS (controle) ou em ACP-103®, e submetidos a uma curva de resfriamento lenta, onde foram feitas análises de vigor e motilidade em cada passo. O sêmen descongelado foi ressuspenso em seus respectivos diluentes e analisado quanto às características: vigor, motilidade, vitalidade, integridade acrossomal e funcionalidade da membrana. Durante as análises de vigor e motilidade que compõem a curva de resfriamento, e na descongelação, para as análises de vitalidade e membrana acrossomal intacta, observou-se que não houve diferença significativa entre os tratamentos. Já após a descongelação, o BTS apresentou melhores resultados de vigor, motilidade espermática e funcionalidade da membrana. No entanto, a curva de resfriamento e o ACP-103® podem ser utilizadas no protocolo de criopreservação do sêmen suíno, visto que ambas asseguraram qualidade da viabilidade espermática.(AU)

Semen cryopreservation is associated with low productivity results. This study aimed to test the Coconut Water Powder (ACP®-103) as a ressuspension diluent after thawing semen, also evaluate sperm quality during the cooling curve until thawing of the semen. For this, the semen was collected from 15 boars once a week, incubated at 30 °C for 15 minutes, and afterwards, the samples were diluted in the diluent Beltsville Thawing Solution BTS (Control) or ACP-103®, and subjected to a slow cooling curve, where the force and the motility were analyzed in each step. The thawed semen was ressuspended in its respective solvents and analyzed in the characteristics of vigor, motility, vitality, acrosome integrity and functionality of the membrane. During the analysis of vigor and motility that make up the cooling curve, and thawing, for analysis of vitality and intact acrosomal membrane, it was observed that there was no significant difference between treatments. Besides, after thawing, the BTS showed better results of sperm vigor, sperm motility and membrane functionality. However, the cooling curve and coconut water powder can be used in the protocol for cryopreservation of boar semen, as both ensured quality of sperm viability that may be used in artificial insemination.(AU)

Refrigeração do sêmen da garoupa-verdadeira Epinephelus marginatus / Refrigerated storage of dusky grouper Epinephelus marginatus sperm

Foram estudados diferentes diluentes no processo de refrigeração do sêmen da garoupa-verdadeira. Inicialmente, a taxa e a duração da motilidade e a concentração espermática foram avaliadas, caracterizando a qualidade do sêmen fresco. Para os testes de refrigeração a 4ºC, diferentes diluentes foram testados em atmosfera normal e modificada (100% oxigênio). O sêmen fresco apresentou concentração espermática de 3,1±0,2 x 109 células mL-1, motilidade média de 90%, permanecendo móvel, em média, por 3.060 segundos. No experimento de refrigeração, a taxa e a duração média da motilidade foram mantidas adequadas durante 144 horas para o diluente A (70%; 3100 segundos) em atmosfera normal. Na atmosfera modificada, a qualidade do sêmen caiu drasticamente durante as primeiras 24 horas, independentemente do diluente empregado, não propiciando vantagem em sua utilização. A refrigeração do sêmen da garoupa-verdadeira permite manter por até 144 horas uma apropriada qualidade espermática.(AU)

This study aimed to evaluate different extenders in refrigerated storage of dusky grouper sperm. Initially, motility rate, motility time, and sperm density were analyzed to characterize the fresh sperm quality. Different diluents were used in the refrigerated storage sperm at 4ºC in normal atmosphere and modified atmosphere (100% oxygen). The fresh sperm has a spermatozoa density of 3.1±0.2 x 109 spermatozoa mL-1, motility rate 90% and motility time of 3,060 seconds. In the experiment of refrigerated storage, the motility rate and the motility time were maintained appropriate for 144 hours for the extender A (70%; 3,100 seconds) in normal atmosphere. In the modified atmosphere, the sperm quality decreased drastically during the first 24 hours, independently of the diluent used, not propitiating advantages. The refrigerated sperm of dusky grouper is a viable alternative for the short-term storage, being possible, to maintain for up to 144 hours an appropriate sperm viability.(AU)

Refrigeração do sêmen da garoupa-verdadeira Epinephelus marginatus / Refrigerated storage of dusky grouper Epinephelus marginatus sperm

Foram estudados diferentes diluentes no processo de refrigeração do sêmen da garoupa-verdadeira. Inicialmente, a taxa e a duração da motilidade e a concentração espermática foram avaliadas, caracterizando a qualidade do sêmen fresco. Para os testes de refrigeração a 4ºC, diferentes diluentes foram testados em atmosfera normal e modificada (100% oxigênio). O sêmen fresco apresentou concentração espermática de 3,1±0,2 x 109 células mL-1, motilidade média de 90%, permanecendo móvel, em média, por 3.060 segundos. No experimento de refrigeração, a taxa e a duração média da motilidade foram mantidas adequadas durante 144 horas para o diluente A (70%; 3100 segundos) em atmosfera normal. Na atmosfera modificada, a qualidade do sêmen caiu drasticamente durante as primeiras 24 horas, independentemente do diluente empregado, não propiciando vantagem em sua utilização. A refrigeração do sêmen da garoupa-verdadeira permite manter por até 144 horas uma apropriada qualidade espermática.(AU)

This study aimed to evaluate different extenders in refrigerated storage of dusky grouper sperm. Initially, motility rate, motility time, and sperm density were analyzed to characterize the fresh sperm quality. Different diluents were used in the refrigerated storage sperm at 4ºC in normal atmosphere and modified atmosphere (100% oxygen). The fresh sperm has a spermatozoa density of 3.1±0.2 x 109 spermatozoa mL-1, motility rate 90% and motility time of 3,060 seconds. In the experiment of refrigerated storage, the motility rate and the motility time were maintained appropriate for 144 hours for the extender A (70%; 3,100 seconds) in normal atmosphere. In the modified atmosphere, the sperm quality decreased drastically during the first 24 hours, independently of the diluent used, not propitiating advantages. The refrigerated sperm of dusky grouper is a viable alternative for the short-term storage, being possible, to maintain for up to 144 hours an appropriate sperm viability.(AU)

Ácido ascórbico no diluidor para criopreservação de sêmen caprino / Ascorbic acid in extender for cryopreservation of goat semen

Objetivou-se determinar o efeito e o melhor nível de inclusão de ácido ascórbico em meio diluidor TRIS-Gema para criopreservação de sêmen caprino. Foram utilizados cinco ejaculados de três bodes da raça Anglo Nubiana. Cada ejaculado foi dividido em quatro alíquotas de 200 μL, compondo quatro tratamentos: um sem adição de ácido ascórbico (controle) e os demais com 0,0528; 0,1056 e 0,1584mg/mL de ácido ascórbico no diluidor TRIS-Gema. Avaliaram-se motilidade espermática progressiva e vigor espermático pós-diluição, pós-resfriamento e pós-descongelamento; integridade de membrana (HOST); integridade acrossomal e teste de termorresistência lento (TTR). Os dados foram submetidos à Análise de Regressão a 5% de probabilidade. Não houve diferença para motilidade progressiva e para vigor espermático, repectivamente, na pós-diluição; pós-resfriamento e pós-descongelamento, assim como para os testes complementares HOST e após 120 minutos do TTR, para motilidade e vigor, no pós-descongelamento (P>0,05). Houve comportamento quadrático com a inclusão do ácido ascórbico para integridade acrossomal (61,58%), com nível ótimo de 0,1006mg/mL de ácido ascórbico (P<0,05). A inclusão de 0,1006mg/mL de ácido ascórbico no diluidor TRIS-Gema melhorou a integridade acrossomal durante o processo de criopreservação, podendo ser uma alternativa na composição dos diluidores seminais caprinos.

The objective of this study was to determine the optimal inclusion level of ascorbic acid in TRIS-yolk extenders for cryopreservation of goat semen. We used five ejaculates of three Anglo Nubian goats. Semen from each animal was divided into four 200μL aliquots, composing four treatments: no addition of ascorbic acid (control) and 0.0528, 0.1056, and 0.1584mg/mL of ascorbic acid in TRIS-egg yolk. We evaluated motility and sperm vigor after dilution, post-cooling, and post-thawing; membrane integrity (HOST); acrosomal integrity, and slow thermoresistance test (TRT). Data were subjected to regression analysis at 5% probability. There was no difference for the progressive motility and sperm vigor, respectively, in the post-dilution, after cooling and post-thawing, as well as the additional tests HOST and after 120 minutes of TRT, for motility and force, respectively, in post-thawing (P>0.05). There was a quadratic effect with the addition of ascorbic acid to the acrosome integrity parameter, presenting a great maximum level of 0.1006 mg/mL ascorbic acid for acrosome integrity of 61.58% (P<0.05). The addition of ascorbic acid was effective in maintaining sperm viability, especially acrosome integrity during the cryopreservation process until the level of 0.1006 mg/mL, and it may be an alternative composition of seminal extenders for goats.

Ácido ascórbico no diluidor para criopreservação de sêmen caprino / Ascorbic acid in extender for cryopreservation of goat semen

Objetivou-se determinar o efeito e o melhor nível de inclusão de ácido ascórbico em meio diluidor TRIS-Gema para criopreservação de sêmen caprino. Foram utilizados cinco ejaculados de três bodes da raça Anglo Nubiana. Cada ejaculado foi dividido em quatro alíquotas de 200 μL, compondo quatro tratamentos: um sem adição de ácido ascórbico (controle) e os demais com 0,0528; 0,1056 e 0,1584mg/mL de ácido ascórbico no diluidor TRIS-Gema. Avaliaram-se motilidade espermática progressiva e vigor espermático pós-diluição, pós-resfriamento e pós-descongelamento; integridade de membrana (HOST); integridade acrossomal e teste de termorresistência lento (TTR). Os dados foram submetidos à Análise de Regressão a 5% de probabilidade. Não houve diferença para motilidade progressiva e para vigor espermático, repectivamente, na pós-diluição; pós-resfriamento e pós-descongelamento, assim como para os testes complementares HOST e após 120 minutos do TTR, para motilidade e vigor, no pós-descongelamento (P>0,05). Houve comportamento quadrático com a inclusão do ácido ascórbico para integridade acrossomal (61,58%), com nível ótimo de 0,1006mg/mL de ácido ascórbico (P<0,05). A inclusão de 0,1006mg/mL de ácido ascórbico no diluidor TRIS-Gema melhorou a integridade acrossomal durante o processo de criopreservação, podendo ser uma alternativa na composição dos diluidores seminais caprinos.(AU)

The objective of this study was to determine the optimal inclusion level of ascorbic acid in TRIS-yolk extenders for cryopreservation of goat semen. We used five ejaculates of three Anglo Nubian goats. Semen from each animal was divided into four 200μL aliquots, composing four treatments: no addition of ascorbic acid (control) and 0.0528, 0.1056, and 0.1584mg/mL of ascorbic acid in TRIS-egg yolk. We evaluated motility and sperm vigor after dilution, post-cooling, and post-thawing; membrane integrity (HOST); acrosomal integrity, and slow thermoresistance test (TRT). Data were subjected to regression analysis at 5% probability. There was no difference for the progressive motility and sperm vigor, respectively, in the post-dilution, after cooling and post-thawing, as well as the additional tests HOST and after 120 minutes of TRT, for motility and force, respectively, in post-thawing (P>0.05). There was a quadratic effect with the addition of ascorbic acid to the acrosome integrity parameter, presenting a great maximum level of 0.1006 mg/mL ascorbic acid for acrosome integrity of 61.58% (P<0.05). The addition of ascorbic acid was effective in maintaining sperm viability, especially acrosome integrity during the cryopreservation process until the level of 0.1006 mg/mL, and it may be an alternative composition of seminal extenders for goats.(AU)

ÁGUA DE COCO COMO MEIO PARA PRESERVAÇÃO SEMINAL EM PEQUENOS RUMINANTES: UM ESTUDO DE META-ANÁLISE

Os diluentes à base de gema de ovo e leite têm sido amplamente utilizados na preservação seminal, entretanto, estes apresentam riscos sanitários pela transmissão de patógenos. Portanto, novos estudos têm surgido na busca por um diluente de origem vegetal, capaz de assegurar a qualidade espermática e ao mesmo tempo eliminar o risco de contaminação apresentado por aqueles de origem animal. Em função do exposto, uma revisão meta-analítica foi conduzida para determinar o efeito da água de coco como diluente seminal para a preservação de espermatozoides de pequenos ruminantes. Quatro bases de dados foram utilizadas para realizar as buscas bibliográficas, sendo estas PubMed, Science Direct, Scopus e Web of Science. Foram obtidas 88 comparações independentes dos 09 estudos selecionados, conforme os critérios de seleção deste estudo. A diferença média ponderada (DMP) entre os tratamentos com água de coco (diluentes com inclusão de água de coco) e tratamentos controle (diluentes sem adição de água de coco) foi avaliada por meio da utilização de um modelo de efeitos aleatórios. Para avaliar a heterogeneidade, foram realizadas análises de meta-regressão e subgrupo, utilizando como covariável: tipo de água de coco, tipo de tratamento controle ao qual a água de coco foi contrastada, tipo de preservação, tempo de preservação e espécie animal. A água de coco resultou em um incremento sobre a variável motilidade total para sêmen resfriado (P < 0,05), ao passo que, para o sêmen fresco e criopreservado, não foi observado qualquer efeito significativo. Para a variável integridade de membrana, observou-se um efeito positivo para sêmen fresco (P < 0,05). Para o sêmen resfriado, foi encontrado um resultado negativo (P < 0,05). O emprego da água de coco como diluente seminal apresentou-se como alternativa viável para a preservação seminal em pequenos ruminantes.

Semen extenders based on egg yolk and milk have been widely used in seminal preservation. However, they present health risks due to the transmission of pathogens. Therefore, new studies have emerged seeking for a diluent of vegetable origin, capable of guaranteeing sperm quality and eliminating the risk of contamination presented by that of animal origin. In light of the above, a meta-analytical review was conducted to determine the effect of coconut water as a seminal extender for small ruminants sperm preservation. Studies that met the inclusion criteria were retrieved from PubMed, Science Direct, Scopus, and Web of Science. According to the selection criteria of this study, 88 independent comparisons were obtained from the nine studies included in the meta-analysis. The weighted mean difference (WMD) between treatments with coconut water (diluents including coconut water) and control treatments (diluents without the addition of coconut water) was evaluated using the random-effects model of meta-analysis. Heterogeneity was explored by meta-regression and subgroup analysis, performed using as covariate: type of coconut water, types of control treatment to which coconut water was contrasted, type of preservation, preservation time, and animal species. The overall results showed that coconut water elicited a positive effect on the total motility of sperm cells from cooled semen (P < 0.05), while for the fresh and cryopreserved semen no significant effect was observed. In addition, coconut water showed a positive effect on membrane integrity of sperm cells from fresh semen (P < 0.05). On the other hand, for cooled semen, a negative result was found (P < 0.05). Therefore, the use of coconut water as a seminal extender proved to be a viable alternative for seminal preservation in small ruminants.

USO DE DILUENTES E TEMPERATURAS ALTERNATIVAS NA CONSERVAÇÃO PROLONGADA DO SÊMEN DO VARRÃO

Abstract The use of appropriate extenders is important for the success of an artificial insemination program. The objective of this study was to evaluate the efficiency of alternative extenders for swine semen at different temperatures (17 to 10 °C). The following extenders were used: Beltsville Thawing Solution (BTS), powdered coconut water (ACP-103®), and skimmed milk powder (LPD). The 50 ejaculates were analyzed daily, in natura and after dilution, during the 5-day period of semen preservation (D0 to D4), regarding spermatic vigor and motility. Acrosome integrity and sperm viability were evaluated on D0 and D4. Data were analyzed using Mann-Whitney, Students, Tukey and chi-square tests (p 0.05). The LPD extender at 10 °C presented higher motility and sperm vigor compared to BTS and ACP until D2, and to treatments stored at 17 °C. Acrosome vitality and integrity remained higher (p 0.001) with LPD at 10 °C on D0 and D4. LPD showed to be a good extender for the swine semen at lower temperature (10 °C). Furthermore, it provided better protection to sperm cells, by allowing greater integrity and vitality of the acrosome.

Resumo O uso de diluentes adequados é importante para o sucesso de um programa de inseminação artificial. O objetivo deste experimento foi avaliar a eficiência de diluentes alternativos para o sêmen suíno, em diferentes temperaturas (17 e 10 °C). Foram utilizados os diluentes: Beltsville Thawing Solution (BTS); água de coco em pó (ACP®-103) e leite em pó desnatado (LPD). Os 50 ejaculados, foram analisados in natura e após diluição, diariamente, durante os 5 dias de conservação do sêmen (D0 a D4), quanto ao vigor e motilidade espermática. Avaliou-se a integridade do acrossoma e a viabilidade espermática no D0 e D4. Na análise estatística, foram utilizados os testes de Mann-Whitney, Students, Tukey e o qui-quadrado, com intervalo de confiança de 5%. O diluente LPD a 10 °C apresentou motilidade e vigor espermático melhores em relação ao BTS e ACP (10 °C) até D2 e aos tratamentos conservados a 17 °C. A vitalidade e integridade acrossomal, no D0 e D4, foram melhores com LPD a 10 °C, que mostrou ser um bom meio diluente para o sêmen suíno em temperatura mais baixa (10 °C), conferindo uma maior proteção à célula espermática, através de maiores taxas de viabilidade e integridade de acrossoma.

DILUIDOR QUIMICAMENTE DEFINIDO À BASE DE TRIS-CASEÍNA NA CRIOPRESERVAÇÃO DE SÊMEN CAPRINO

Diluidores de sêmen convencionais à base de leite ou gema de ovo apresentam problemas por serem produtos biológicos que possuem uma variedade de substâncias, não sendo possível conhecer a sua exata composição, além da sua capacidade contaminante e da disseminação de microrganismos patógenos. Diluidores contendo apenas componentes químicos, conhecidos em concentração, com efeitos protetores dos espermatozoides seriam, portanto, uma vantagem. Com isso, objetivou-se elaborar um diluidor quimicamente definido, à base de caseína, bem como avaliar seu efeito e eficácia no processo de congelação de sêmen de reprodutores caprinos. Para tanto, foram utilizados três bodes em idade reprodutiva e as colheitas de sêmen realizadas pelo método de vagina artificial, utilizando uma fêmea como manequim. Foram obtidos oito ejaculados por macho, totalizando 24 ejaculados. Após a colheita, os ejaculados com motilidade superior a 70% foram agrupados em pools seminais. Para congelação, foi utilizado diluidor convencional, constituindo o grupo controle (Tris-gema de ovo), assim como diluidor à base de Tris-caseína, em diferentes concentrações (CAS1: 0,125g/L; CAS2: 0,25g/L; CAS3: 0,5g/L), acrescidos com 5% de glicerol. Após diluição (200x106 espermatozoides/mL), as palhetas (0,25 mL) identificadas foram congeladas em sistema automatizado e armazenadas em nitrogênio líquido (-196 ºC). Após descongelação (37 ºC, 30 s), as amostras foram submetidas às análises de cinética (CASA), integridade e funcionalidade da membrana plasmática, integridade do acrossoma e potencial de membrana mitocondrial. Os parâmetros cinéticos não evidenciaram diferença significativa (P > 0,05), com exceção da frequência de batimento flagelar (BCF), onde o grupo CAS3 apresentou valor superior (P 0,05) ao grupo controle. Quanto às análises de integridade e funcionalidade da membrana plasmática, integridade do acrossoma e potencial de membrana mitocondrial, não se observou diferenças significativas (P > 0,05) entre os grupos avaliados. Conclui-se que o diluidor quimicamente definido à base de Tris-caseína pode ser utilizado para congelação de sêmen caprino, em virtude de preservar os parâmetros cinéticos, a integridade e funcionalidade da célula, semelhantes àqueles obtidos com diluidor convencional à base de gema de ovo.

Semen extenders based on milk or egg yolk do not have a standardized composition, which can cause variability in the results obtained, in addition for being biological material, it is able to cause contamination of semen by microorganisms. Therefore, studies on extenders containing only chemical components with protective effects on sperm are necessary. The objective of the present work was to elaborate a chemically defined extender, based on Tris-casein, and to evaluate its effect and efficacy in the goat semen freezing process. For this purpose, three goats of reproductive age were used and semen collections were obtained by the artificial vagina method and one female as dummy. Eight ejaculates were collected per male, totaling 24 ejaculates. After semen collection, the ejaculates that presented motility greater than 70% were grouped in seminal pools. For freezing, a conventional extender was used, constituting the control group (Tris-egg yolk), as well as a extender based on Tris-casein, in different concentrations (CAS1: 0.125g / L; CAS2: 0.25g / L; CAS3: 0.5g / L), added with 5% of glycerol. After dilution (200x106 sperm / mL), straws (0.25 mL) were identified and frozen in an automated system and stored in liquid nitrogen (-196 ºC). After thawing (37 ºC, 30 s), the samples were submitted to kinetic analysis (CASA), integrity and functionality of the plasma membrane, acrosome integrity and mitochondrial membrane potential. The kinetic parameters did not present significant difference (P> 0.05), with an exception of the flagellar beat frequency (BCF), where the CAS3 group had a higher value (P 0.05) than the control group. Regarding the integrity and functionality of the plasma membrane, acrosome integrity and mitochondrial membrane potential analysis, there were no significant difference (P> 0.05) between the groups evaluated. It can be concluded that the chemically defined extender based on Tris-casein presents as s a viable alternative to the conventional diluent based on Tris-egg yolk, used for freezing goat semen.