Análise da evolução do gene msp1 de Anaplasma marginale em bezerros e carrapatos e Propagação e caracterização de um isolado de Anaplasma marginale de Portugal em células IDE8

Este trabalho é composto de dois capítulos: O primeiro capítulo visou a avaliação da diversidade das sequências repetidas da proteína MSP1a de A. marginale em bovinos experimentalmente infectados e em R. microplus durante o período de 1 ano e realizou-se o reisolamento da estirpe AmRio 1 de A. marginale a partir de leucócitos. O segundo capítulo objetivou o isolamento, propagação e caracterização de uma estirpe de A. marginale de Portugal em células IDE8. Para a avaliação da diversidade de A. marginale, os bovinos foram infestados com larvas de R. microplus e posteriormente as estirpes AmRio 1 e AmRio 2 mantidas em cultivo celular foram inoculadas respectivamente no bovino 1 e no bovino 2. Posteriormente amostras de sangue foram colhidas durante 1 ano para realização de esfregaços, hematócrito, proteínas plasmáticas e a realização de seminested PCR para os genes msp5 e msp1. A partir de amostras de sangue também foram realizados isolamentos de A. marginale a partir de leucócitos. Carrapatos foram colhidos durante todo o período de estudo e suas glândulas salivares, intestinos e saliva foram submetidos à seminested PCR para o gene msp5 e msp1. Ambos os animais apresentaram estabilidade dos parâmetros avaliados e ausência de sinais clínicos, revelando uma persistência da infecção. Inclusões foram observadas em leucócitos em um esfregaço do animal 1, e foi realizado reisolamento de A. marginale nas quatro tentativas utilizando-se leucócitos para o inóculo. O animal 1 se tornou positivo para o gene msp5 a partir do dia 12 após a infecção, enquanto o animal 2 não se tornou positivo para a cepa inoculada durante todo o período de estudo analisado. As repetições em tandem avaliadas revelaram positividade para a estirpe AmRio 1 no animal 1. De 58 amostras de órgãos de carrapatos, 6 foram positivas para o gene msp5 no animal 1. No animal 2, de 20 amostras analisadas, 4 foram positivas para o gene msp5. No segundo capítulo utilizou-se eritrócitos de um bovino naturalmente infectado da região do Alentejo, Portugal, para a realização do isolamento de uma estirpe de A. marginale em células IDE8. O animal doador do inóculo foi considerado persistentemente infectado com 0,25% de rickettsemia. Observou-se inclusões características da infecção trinta e cinco dias após a inoculação em células IDE8.

This thesis consists of two chapters: The purpose of the first chapter was to evaluate the tandem repeat diversity in the major surface protein MSP1a of Anaplasma marginale in experimentally infected cattle and in Rhipicephalus microplus over the span of 1 year, and re-isolation of the A. marginale AmRio1 strain from cattle leukocytes was performed. The second chapter was aimed at isolating, propagating, and characterizing a novel Anaplasma sp. genotype from Portugal in IDE8 cells. To evaluate A. marginale genetic diversity, cattle were infested with R. microplus larvae and subsequently infected by A. marginale from tick cell cultures. The strains AmRio1 and AmRio2 were inoculated in bovine 1 and bovine 2, respectively. Subsequently, blood samples were collected over 1 year for blood smears, hematocrit, plasma proteins, and semi-nested polymerase chain reaction (PCR) for the msp5 and msp1 genes. A. marginale was also isolated from the cattle leukocytes. Ticks were collected and their salivary gland and gut DNA were tested using semi-nested PCR for the msp5 and msp1 genes. Both animals showed stability in the evaluated parameters and absence of clinical signs, showing that they had persistent infection. A blood smear from Animal 1 showed inclusions inside the leukocytes, and four attempts were made to isolate Anaplasma sp. from leukocytes for the inoculum. Animal 1 became positive for the msp5 gene on day 12 after infection, while positivity was detected in Animal 2 only 77 days after second exposure to the agent. The tandem repeats were stable when the blood and tick samples of both animals were evaluated, demonstrating the presence of the strains AmRio1 in Animal 1 and AmRio2 in Animal 2. In the second chapter, erythrocytes from a naturally infected bovine from Portugal were used for isolating Anaplasma sp. in IDE8 cells. Suggestive inclusions of infection were observed in the IDE8 cells 35 days after inoculation. The Anaplasmataceae family 16S rRNA gene from the cultures was sequenced, and showed that the isolated rickettsia was close to the A. platys species in the phylogenetic tree.

MONITORING OF NATURAL INFECTION BY BOVINE VIRAL DIARRHEA VIRUS (BVDV) IN CATTLE HERDS / Monitoramento da infecção natural pelo vírus da diarréia viral bovina (BVDV) em rebanhos bovinos

A infecção natural pelo vírus da diarréia viral bovina (BVDV) foi monitorada em três rebanhos bovinos por meio de amostras de soro sangüíneo, obtidas em várias colheitas realizadas em cada rebanho, que foram submetidas ao teste de virusneutralização (VN) para o BVDV-1 e para o BVDV-2. As amostras não reagentes a pelo menos um dos genótipos e aquelas oriundas de bovinos com menos de seis meses de idade, reagentes ou não, foram analisadas pela reação em cadeia da polimerase precedida pela transcrição reversa (RT-PCR) para a pesquisa do BVDV. Em dois rebanhos o vírus não foi detectado em nenhuma amostra e a quantidade de animais reagentes ao vírus no teste de VN, principalmente nos animais jovens, diminuiu à medida que as colheitas foram realizadas. No entanto, no terceiro rebanho, a infecção permaneceu durante o período monitorado, pois o BVDV foi detectado em dois animais persistentemente infectados (PI) e também em um animal transitoriamente infectado (TI). O sistema de criação, bem como o intenso trânsito de animais, foram favoráveis à permanência

Genetic characterization of bovine viral diarrhoea virus detected in persistently infected cattle in Southern Minas Gerais, Brazil / Caracterização genética do vírus da diarreia bovina detectada em bovinos do Sul de Minas Gerais, Brasil, persistentemente infectados

Isolates of bovine viral diarrhoea virus (BVDV) detected in serum samples of two persistently infected animals (PI) identified in a herd located in the southern state of Minas Gerais, Brazil, underwent genetic characterization trough partial nucleotide sequencing and analysis of the 5 Untranslated Region (5UTR) of the viral genome. The isolates were characterized as belonging to genotype BVDV-1, subgenotype BVDV-1b. The results of this study suggest BVDV-1b as an agent of importance in the occurrence of bovine viral diarrhoea (BVD) in the herds of the region. Moreover, the genotypic characterization of isolates of BVDV helps to better understand the epidemiology of the disease, as the genetic variability of BVDV interferes in the serological tests and has implications for the use of vaccines, whose majority is produced only with reference strains of BVDV. Therefore, the investigation on the genetic diversity of BVDV existing in Brazil is required for the improvement of the disease prevention and control measures.(AU)

Isolados do vírus da diarreia viral bovina (BVDV) detectados em amostras de soro sanguíneo de dois animais persistentemente infectados (PI), identificados num rebanho bovino localizado na região sul do Estado de Minas Gerais, Brasil, foram submetidos à caracterização genética através do sequenciamento parcial de nucleotídeos da região 5UTR do genoma viral. Os isolados foram caracterizados como pertencentes ao genótipo BVDV-1, subgenótipo BVDV-1b. Os resultados do presente estudo sugerem o BVDV-1b como um agente de importância na ocorrência da diarreia viral bovina (BVD) nos rebanhos da região. Ademais, a caracterização genotípica dos isolados do BVDV contribui para a melhor compreensão da epidemiologia da enfermidade, pois a variabilidade genética do BVDV interfere nos testes sorológicos e também possui implicações na utilização de vacinas, cuja maioria é produzida apenas com estirpes de referência do BVDV, requerendo, portanto, investigações sobre a diversidade genética do BVDV existente no Brasil para o aprimoramento das medidas de prevenção e controle da enfermidade no país.(AU)

Genetic characterization of bovine viral diarrhoea virus detected in persistently infected cattle in Southern Minas Gerais, Brazil / Caracaterização genética do vírus da diarréia viral bovina detectado em bovinos persistentemente infectados na região sul do estado de Minas Gerais, Brasil

Isolates of bovine viral diarrhoea virus (BVDV) detected in serum samples of two persistently infected animals (PI) identified in a herd located in the southern state of Minas Gerais, Brazil, underwent genetic characterization trough partial nucleotide sequencing and analysis of the 5 Untranslated Region (5UTR) of the viral genome. The isolates were characterized as belonging to genotype BVDV-1, subgenotype BVDV-1b. The results of this study suggest BVDV-1b as an agent of importance in the occurrence of bovine viral diarrhoea (BVD) in the herds of the region. Moreover, the genotypic characterization of isolates of BVDV helps to better understand the epidemiology of the disease, as the genetic variability of BVDV interferes in the serological tests and has implications for the use of vaccines, whose majority is produced only with reference strains of BVDV. Therefore, the investigation on the genetic diversity of BVDV existing in Brazil is required for the improvement of the disease prevention and control measures.(AU)

Isolados do vírus da diarreia viral bovina (BVDV) detectados em amostras de soro sanguíneo de dois animais persistentemente infectados (PI), identificados num rebanho bovino localizado na região sul do Estado de Minas Gerais, Brasil, foram submetidos à caracterização genética através do sequenciamento parcial de nucleotídeos da região 5UTR do genoma viral. Os isolados foram caracterizados como pertencentes ao genótipo BVDV-1, subgenótipo BVDV-1b. Os resultados do presente estudo sugerem o BVDV-1b como um agente de importância na ocorrência da diarreia viral bovina (BVD) nos rebanhos da região. Ademais, a caracterização genotípica dos isolados do BVDV contribui para a melhor compreensão da epidemiologia da enfermidade, pois a variabilidade genética do BVDV interfere nos testes sorológicos e também possui implicações na utilização de vacinas, cuja maioria é produzida apenas com estirpes de referência do BVDV, requerendo, portanto, investigações sobre a diversidade genética do BVDV existente no Brasil para o aprimoramento das medidas de prevenção e controle da enfermidade no país.(AU)

Monitoramento da infecção natural pelo vírus da diarréia viral bovina (bvdv) em rebanhos bovinos / Monitoring of natural infection by bovine viral diarrhea virus (bvdv) in cattle herds

A infecção natural pelo vírus da diarréia viral bovina (BVDV) foi monitorada em três rebanhos bovinos por meio de amostras de soro sangüíneo, obtidas em várias colheitas realizadas em cada rebanho, que foram submetidas ao teste de virusneutralização (VN) para o BVDV-1 e para o BVDV-2. As amostras não reagentes a pelo menos um dos genótipos e aquelas oriundas de bovinos com menos de seis meses de idade, reagentes ou não, foram analisadas pela reação em cadeia da polimerase precedida pela transcrição reversa (RT-PCR) para a pesquisa do BVDV. Em dois rebanhos o vírus não foi detectado em nenhuma amostra e a quantidade de animais reagentes ao vírus no teste de VN, principalmente nos animais jovens, diminuiu à medida que as colheitas foram realizadas. No entanto, no terceiro rebanho, a infecção permaneceu durante o período monitorado, pois o BVDV foi detectado em dois animais persistentemente infectados (PI) e também em um animal transitoriamente infectado (TI). O sistema de criação, bem como o intenso trânsito de animais, foram favoráveis à permanência da infecção nesse último rebanho. A dinâmica da infecção pelo BVDV foi variável nos rebanhos analisados, destacando a provável eliminação espontânea do BVDV no rebanho 1 e os fatores de risco relacionados à transmissão do BVDV, como a freqüente aquisição de animais de diversas procedências pelo rebanho 4, assim como a provável hipótese da infecção do rebanho 17 ter originado a partir do rebanho vizinho.

Natural infection by bovine viral diarrhea virus (BVDV) was monitored in blood serum samples of three cattle herds. The samples were drawn in several harvests from each herd and submitted to virus neutralization test (VN) against BVDV-1 and BVDV-2. The non reactive samples to at least one of the genotypes and also those collected from calves younger than six months, were analyzed by reverse transcription polymerase chain reaction (RT-PCR). In two herds, BVDV was not detected in any blood sample and the number of reactive samples to VN test, especially young animals, decreased as the blood sample harvests were conducted. However, in the third herd, the infection remained during the monitored period, because BVDV was detected in two persistently infected animals (PI) and also in one transiently infected animal (TI). The cattle breeding system and intense movement of animals were favorable to the permanence of infection in this last herd. The dynamics of BVDV infection changed in the analyzed herds, highlighting the probable self clearance of BVDV in herd 1 and the risk factors related to transmission of BVDV, such as the frequent purchase of animals from different origins for herd 4, as well as the probable hypothesis that infection of herd 17 may have originated from the neighboring herd.

Monitoramento da infecção natural pelo vírus da diarréia viral bovina (bvdv) em rebanhos bovinos / Monitoring of natural infection by bovine viral diarrhea virus (bvdv) in cattle herds

A infecção natural pelo vírus da diarréia viral bovina (BVDV) foi monitorada em três rebanhos bovinos por meio de amostras de soro sangüíneo, obtidas em várias colheitas realizadas em cada rebanho, que foram submetidas ao teste de virusneutralização (VN) para o BVDV-1 e para o BVDV-2. As amostras não reagentes a pelo menos um dos genótipos e aquelas oriundas de bovinos com menos de seis meses de idade, reagentes ou não, foram analisadas pela reação em cadeia da polimerase precedida pela transcrição reversa (RT-PCR) para a pesquisa do BVDV. Em dois rebanhos o vírus não foi detectado em nenhuma amostra e a quantidade de animais reagentes ao vírus no teste de VN, principalmente nos animais jovens, diminuiu à medida que as colheitas foram realizadas. No entanto, no terceiro rebanho, a infecção permaneceu durante o período monitorado, pois o BVDV foi detectado em dois animais persistentemente infectados (PI) e também em um animal transitoriamente infectado (TI). O sistema de criação, bem como o intenso trânsito de animais, foram favoráveis à permanência da infecção nesse último rebanho. A dinâmica da infecção pelo BVDV foi variável nos rebanhos analisados, destacando a provável eliminação espontânea do BVDV no rebanho 1 e os fatores de risco relacionados à transmissão do BVDV, como a freqüente aquisição de animais de diversas procedências pelo rebanho 4, assim como a provável hipótese da infecção do rebanho 17 ter originado a partir do rebanho vizinho.(AU)

Natural infection by bovine viral diarrhea virus (BVDV) was monitored in blood serum samples of three cattle herds. The samples were drawn in several harvests from each herd and submitted to virus neutralization test (VN) against BVDV-1 and BVDV-2. The non reactive samples to at least one of the genotypes and also those collected from calves younger than six months, were analyzed by reverse transcription polymerase chain reaction (RT-PCR). In two herds, BVDV was not detected in any blood sample and the number of reactive samples to VN test, especially young animals, decreased as the blood sample harvests were conducted. However, in the third herd, the infection remained during the monitored period, because BVDV was detected in two persistently infected animals (PI) and also in one transiently infected animal (TI). The cattle breeding system and intense movement of animals were favorable to the permanence of infection in this last herd. The dynamics of BVDV infection changed in the analyzed herds, highlighting the probable self clearance of BVDV in herd 1 and the risk factors related to transmission of BVDV, such as the frequent purchase of animals from different origins for herd 4, as well as the probable hypothesis that infection of herd 17 may have originated from the neighboring herd.(AU)

Ocorrência de animais persistentemente infectados pelo vírus da diarréia viral bovina em rebanhos bovinos nos Estados de Minas Gerais e São Paulo / Occurrence of persistently infected animals with bovine viral diarrhoea virus in cattle herds from the States of Minas Gerais and São Paulo, Brazil

A pesquisa de animais persistentemente infectados (PI) pelo vírus da diarréia viral bovina (BVDV) foi realizada em 26 rebanhos bovinos, não vacinados contra o BVDV, localizados nos Estados de Minas Gerais e São Paulo, Brasil. Utilizando uma estratégia de amostragem, de cada rebanho foram obtidas cinco amostras de sangue de bezerros, entre 6 e 12 meses de idade, e os soros sanguíneos foram submetidos ao teste de virusneutralização (VN) para o BVDV-1 e o BVDV-2. Os rebanhos que apresentaram pelo menos três das cinco amostras reagentes a um dos genótipos do BVDV, e com títulos de anticorpos superiores a 128, foram selecionados para a pesquisa de animais PI. Em três rebanhos que apresentaram tal condição, foram colhidas amostras pareadas de sangue de todos os bovinos do rebanho, com intervalo de 30 dias entre as colheitas, e o soro sanguíneo foi submetido ao teste de VN para o BVDV-1 e o BVDV-2. Nas amostras não reagentes a pelo menos um dos genótipos do BVDV e naquelas provenientes de bovinos com menos de seis meses de idade, realizou-se a pesquisa do BVDV pela reação em cadeia da polimerase precedida pela transcrição reversa (RT-PCR). Dos rebanhos analisados, foram detectados dois animais PI a partir de amostras obtidas nas colheitas pareadas provenientes de um rebanho localizado no Estado de Minas Gerais.(AU)

The research on persistently infected (PI) animals with bovine viral diarrhoea virus (BVDV) was conducted in 26 cattle herds, which were not BVDV vaccinated, located in the states of Minas Gerais and São Paulo, Brazil. Using a sampling strategy, five samples of blood were collected from 6 to 12-month-old calves of each herd, and the blood sera were tested by virusneutralization test (VN) to BVDV-1 and BVDV-2. The herds that had at least three out of five samples reacting to one of the genotypes of BVDV and antibody titers greater than 128 were selected to PI animals research. In three of the herds that matched the before-mentioned criteria, paired blood samples were collected from all its individuals considering a collection interval of 30 days. The blood sera of these samples were VN tested against BVDV-1 and BVDV-2. In samples not reacting to at least one of the BVDV genotypes and also in those collected from calves of less than six months of age, virus research was undertaken by reverse transcription polymerase chain reaction (RT-PCR). From the examined herds, two PI animals were detected in paired samples obtained from a herd located in the state of Minas Gerais.(AU)

ASPECTOS CLÍNICOS E VIROLÓGICOS DA INFECÇÃO DE BEZERROS POR UM ISOLADO BRASILEIRO DO VÍRUS DA DIARREIA VIRAL BOVINA

O vírus da diarreia viral bovina (BVDV) é considerado um importante patógeno de bovinos e está amplamente disseminado no rebanho brasileiro. A transmissão do vírus ocorre por contato direto e indireto entre animais infectados e animais susceptíveis, sendo que os animais persistentemente infectados são fundamentais na manutenção do vírus no rebanho. A reprodução experimental da infecção possibilita o estudo dos parâmetros clínicos e virais, bem como o estabelecimento de parâmetros para testes de diagnóstico, de vacinas e a determinação de medidas de controle. Com o objetivo de estudar a patogenicidade de uma amostra brasileira de BVDV-1a 241.10, quatro bovinos foram inoculados pela via intranasal com uma suspensão viral contendo 107,2 TCID50/ml. Um animal não inoculado foi mantido em contato para avaliar a transmissibilidade. Após a inoculação, os animais foram monitorados diariamente para observação de sinais clínicos. Amostras de secreções nasais foram coletadas nos dias -3 ao 15 dias pós-inoculação (pi) e sangue nos dias -2, 0, 2, 4, 6, 8, 10, 12 e 14 pi para detecção da presença viral por isolamento em cultivo celular. A contagem dos leucócitos totais foi realizada em diferentes momentos nos dias -3, 0, 3, 6, 9, 12 e 15 pi. A detecção de anticorpos foi realizada no soro em intervalos de 7 dias até o dia 42 pi. Após a inoculação não foram observados sinais clínicos evidentes, apenas secreção nasal e ocular serosa entre os dias 1 e 5 pi e tosse discreta entre os dias 2 e 4 pi. A temperatura corporal teve um leve aumento entre os dias 4 e 6 pi. O animal controle não desenvolveu nenhum dos sinais observados no grupo infectado. A detecção viral no sangue revelou a presença de viremia entre os dias 4 e 8 pi e nas secreções nasais entre os dias 1 até 10 pi. O vírus não foi isolado no sangue e secreção nasal do animal contato, demonstrando ausência da transmissão. Nos animais inoculados observou-se uma redução na contagem total de leucócitos entre os dias 3 e 12 dpi. Anticorpos neutralizantes foram detectados inicialmente no dia 14 pi em todos os animais inoculados e permaneceram até o dia 42 pi. A detecção de anticorpos anti-p80 não-estrutural ocorreu em dois animais no dia 14 pi e no dia 42 pi todos os animais soroconverteram. O animal controle não desenvolveu anticorpos em nenhum momento. Assim sendo, conclui-se que a amostra de BVDV utilizada na infecção experimental possui baixa patogenicidade e reduzida capacidade de transmissibilidade para os animais em contato. Desta forma, a disseminação da infecção pode ocorrer na população bovina de forma discreta e de difícil percepção.

The bovine viral diarrhea virus (BVDV) is considered an important pathogen of cattle and are widespread in the Brazilian herd. Transmission of the virus occurs by direct and indirect contact between infected and susceptible animals, and the persistently infected animals are essential in the maintenance of virus in the herd. The experimental reproduction of infection allows the study of clinical and viral parameters as well as setting parameters for diagnostic testing of vaccines and the determination of control measures. In order to study the pathogenicity of a sample of Brazilian BVDV-1a 241.10 four cattle were inoculated intranasally with a viral suspension containing 107.2 TCID50 / ml. One non-inoculated cattle was kept in contact with the inoculated cattle to assess the transmissibility. After inoculation, the animals were monitored daily to observe clinical signs. Samples of nasal secretions were collected on days -3 to 15 post-inoculation (pi) and blood on days -2, 0, 2, 4, 6, 8, 10, 12 and 14 pi for detection of viral presence by isolation in cell culture. The total leukocyte count was performed at different moments on days -3, 0, 3, 6, 9, 12, and 15 pi. The detection of antibodies was performed in serum at 7 day intervals until the 42 day post-inoculation. After inoculation no clinical signs were observed, only nasal and ocular serous secretion between days 1 and 5 pi and discreet cough between day 2 and 4 pi. Body temperature increased slightly between day 4 and 6 pi. Animal Control did not develop any of the signs observed in the infected group. The viral detection in the blood showed the presence of viremia between 4 and 8 days pi and nasal secretions between day 1 up to 10 pi. Virus was not isolated in the blood and nasal secretions of the animal contact, demonstrating the absence of transmission. In animals inoculated it was observed there was a reduction in total leukocyte count between day 3 up to 12 dpi. Neutralizing antibodies initially were detected on day 14 pi in all inoculated animals and remained until day 42 post-inoculation. The detection of anti-p80 antibodies occurred in two animals on day 14 post-inoculation and on day 42 post-inoculation all animals seroconverted. Animal Control did not develop antibodies at any moment. Therefore, it is concluded that the BVDV sample used for infection has low pathogenicity and reduced capacity of transmissibility for animal contact. Thus, the spread of infection can occur in the cattle population in a discreetly way and difficult perception.

Detecção do vírus da diarreia viral bovina em carrapatos Rhipicephalus (Boophilus) microplus alimentados em bovino persistentemente infectado / Detection of bovine viral diarrhea virus in Rhipicephalus (Boophilus) microplus ticks fed on persistently infected cattle

Bovine viral diarrhea virus (BVDV) is one of the main agents that cause economical losses in cattle worldwide. Congenitally infected calves that are born persistently infected (PI) to BVDV are the main sources of infection to susceptible cattle. Direct contact is the most important form of transmission, but indirect contact can also spread BVDV, not only inside herds, but also between them. Transmission of BVDV by haematophagous insects has been proven experimentally, but the role of ticks in the transmission of BVDV has never been investigated. Ticks can heavily infest cattle raised in tropical areas and Rhipicephalus (Boophilus) microplus is the most important among them. The present experiment was carried out to investigate the role of R. microplus ticks in the transmission of BVDV, experimentally infecting PI calf with ticks. Material, Methods and Results: Three calves were used in the experiment: one PI calf was identified from a natural.

Detecção do vírus da diarreia viral bovina em carrapatos Rhipicephalus (Boophilus) microplus alimentados em bovino persistentemente infectado / Detection of bovine viral diarrhea virus in Rhipicephalus (Boophilus) microplus ticks fed on persistently infected cattle

Bovine viral diarrhea virus (BVDV) is one of the main agents that cause economical losses in cattle worldwide. Congenitally infected calves that are born persistently infected (PI) to BVDV are the main sources of infection to susceptible cattle. Direct contact is the most important form of transmission, but indirect contact can also spread BVDV, not only inside herds, but also between them. Transmission of BVDV by haematophagous insects has been proven experimentally, but the role of ticks in the transmission of BVDV has never been investigated. Ticks can heavily infest cattle raised in tropical areas and Rhipicephalus (Boophilus) microplus is the most important among them. The present experiment was carried out to investigate the role of R. microplus ticks in the transmission of BVDV, experimentally infecting PI calf with ticks. Material, Methods and Results: Three calves were used in the experiment: one PI calf was identified from a natural.(AU)

MONITORING OF NATURAL INFECTION BY BOVINE VIRAL DIARRHEA VIRUS (BVDV) IN CATTLE HERDS / Monitoramento da infecção natural pelo vírus da diarréia viral bovina (BVDV) em rebanhos bovinos.

A infecção natural pelo vírus da diarréia viral bovina (BVDV) foi monitorada em três rebanhos bovinos por meio de amostras de soro sangüíneo, obtidas em várias colheitas realizadas em cada rebanho, que foram submetidas ao teste de virusneutralização (VN) para o BVDV-1 e para o BVDV-2. As amostras não reagentes a pelo menos um dos genótipos e aquelas oriundas de bovinos com menos de seis meses de idade, reagentes ou não, foram analisadas pela reação em cadeia da polimerase precedida pela transcrição reversa (RT-PCR) para a pesquisa do BVDV. Em dois rebanhos o vírus não foi detectado em nenhuma amostra e a quantidade de animais reagentes ao vírus no teste de VN, principalmente nos animais jovens, diminuiu à medida que as colheitas foram realizadas. No entanto, no terceiro rebanho, a infecção permaneceu durante o período monitorado, pois o BVDV foi detectado em dois animais persistentemente infectados (PI) e também em um animal transitoriamente infectado (TI). O sistema de criação, bem como o intenso trânsito de animais, foram favoráveis à permanência

Detecção do vírus da diarreia viral bovina em carrapatos Rhipicephalus (Boophilus) microplus alimentados e, bovino persistentemente infectado

Background:  :  :  : Bovine viral diarrhea virus (BVDV) is one of the main agents that cause economical losses in cattle worldwide. Congenitally infected calves that are born persistently infected (PI) to BVDV are the main sources of infection to susceptible cattle. Direct contact is the most important form of transmission, but indirect contact can also spread BVDV, not only inside herds, but also between them. Transmission of BVDV by haematophagous insects has been proven experimentally, but the role of ticks in the transmission of BVDV has never been investigated. Ticks can heavily infest cattle raised in tropical areas and Rhipicephalus (Boophilus) microplus is the most important among them. The present experiment was carried out to investigate the role of R. microplus ticks in the transmission of BVDV, experimentally infecting PI calf with ticks. Material, Methods and Results: Three calves were used in the experiment: one PI calf was identified from a natural outbreak; a second animal was infested with the progeny of a tick fed on the PI calf and the third was kept as a negative control, infested with negative ticks. Viral RNA investigation was performed by reverse transcription followed by polymerase chain reaction (RT-PCR) from the sera of the calves and from ticks (adult females, eggs and larvae that were the progeny of the experimentally contaminated adult females and f

Detecção do vírus da diarreia viral bovina em carrapatos Rhipicephalus (Boophilus) microplus alimentados e, bovino persistentemente infectado

Background:  :  :  : Bovine viral diarrhea virus (BVDV) is one of the main agents that cause economical losses in cattle worldwide. Congenitally infected calves that are born persistently infected (PI) to BVDV are the main sources of infection to susceptible cattle. Direct contact is the most important form of transmission, but indirect contact can also spread BVDV, not only inside herds, but also between them. Transmission of BVDV by haematophagous insects has been proven experimentally, but the role of ticks in the transmission of BVDV has never been investigated. Ticks can heavily infest cattle raised in tropical areas and Rhipicephalus (Boophilus) microplus is the most important among them. The present experiment was carried out to investigate the role of R. microplus ticks in the transmission of BVDV, experimentally infecting PI calf with ticks. Material, Methods and Results: Three calves were used in the experiment: one PI calf was identified from a natural outbreak; a second animal was infested with the progeny of a tick fed on the PI calf and the third was kept as a negative control, infested with negative ticks. Viral RNA investigation was performed by reverse transcription followed by polymerase chain reaction (RT-PCR) from the sera of the calves and from ticks (adult females, eggs and larvae that were the progeny of the experimentally contaminated adult females and f

Diarréia viral bovina(BVD) : aspectos epidemiológicos da infecção persistente, avaliação sorológica da resposta imune e caracterização molecular do virús

A ocorrência de anticorpos neutralizantes contra os genótipos do vírus da diarréia viral bovina (BVDV 1 e BVDV 2) foi verificada, pelo teste de virusneutralização (VN), em 260 amostras de soro sangüíneo de 26 rebanhos não vacinados contra o BVDV, provenientes dos Estados de Minas Gerais e São Paulo. Do total de amostras, 102 (39,2%) reagiram ao BVDV, das quais 81 (31,1 %) foram reagentes ao BVDV 1 e ao BVDV 2, sete (2,7%) reagiram apenas ao BVDV 1 e 14 (5,4%) reagiram apenas ao BVDV 2. Nos mesmos rebanhos, verificou-se também a presença sugestiva de animais persistentemente infectados (PI) por meio da pesquisa de anticorpos neutralizantes em cinco amostras de soro sangüíneo de bezerros sentinelas com idade entre 6 e 12 meses. A ocorrência de animais PI foi pesquisada em três dos 26 rebanhos, dos quais foram colhidas amostras pareadas de sangue de todos os animais do rebanho. Todas as amostras foram submetidas ao teste de VN contra o BVDV 1 e o BVDV 2, e naquelas não reagentes a pelo menos um dos genótipos, bem como nas amostras provenientes de bovinos com menos de seis meses de idade, foi realizada a pesquisa do vírus pela RT-PCR. Em um dos rebanhos foram detectados dois animais PI, cujas estirpes foram caracterizadas geneticamente como pertencentes ao subgenótipo eVOV 1 b. A infecção natural pelo BVDV foi monitorada nos três rebanhos selecionados para a pesquisa de animais PI, sendo que em dois deles constatou-se a eliminação do BVDV. No entanto, a infecção permaneceu no rebanho em que haviam sido detectados dois animais PI, pois foram diagnosticados posteriormente um animal transitoriamente infectado (TI) e novos animais reagentes ao vírus. Foram submetidos à análise estatística os resultados dos testes de VN contra o BVDV 1 e o BVDV 2, realizados em 1925 amostras de soro sangüíneo obtidas no período de execução...

The occurrence of neutralizing antibodies against to bovine viral diarrhoea virus genotypes (BVDV 1 and BVDV 2) has been confirmed by virusneutralization test (VN) in 260 samples of blood serum undertaken in the states of Minas Gerais and São Paulo, Brazil. Samples were retrieved from 26 cattle herds which were not BVDV vaccinated. One hundred and two samples (39.2%) were reagents to BVDV, or rather, 81 (31.1%) were reagents to BVDV 1 and BVDV 2, seven (2.7%) were reagents to BVDV 1 only and 14 (5.4%) were reagents to BVDV 2 only. In the same herds, the significant presence of persistently infected (PI) animais was also verified by a research involving neutralizing antibodies in five samples of blood serum in 6 to 12¬month-old calves. The occurrence of PI animais was researched in three out of 26 herds by paired blood samples of total animais in the herdo Ali samples were analyzed by VN test against to BVDV 1 and BVDV 2, and virus research was undertaken by RT-PCR in samples which were not reagent to at least one of the genotypes and in samples of less than 6-month-old cattle. Two PI animais, genetically characterized as belonging to BVDV 1 b subgenotype, were detected in one of the herds. BVDV natural infection was monitored in three herds selected for PI animais research. BVDV was eliminated in two herds. However, infection remained in the herd in which two PI animais were diagnosed, because a transiently infected animal (TI) and other virus-reagent animais were detected later on. Statistical analysis evaluated VN test results against BVDV 1 and BVDV 2 with 1925 samples of blood serum obtained during the research period. Although no significant ditterences were found between BVDV 1 reagent bovines and BVDV 2 reagent ones (p>0.05), a significant ditterence was detected among titles of antibodies from samples which were reagent to both genotypes (p<0.0001)