Involvement of mast cells, CD68+ and VEGF+ expressions in response to Himatanthus drasticus commercial latex in mice wound healing model / Envolvimento de mastócitos, expressão de CD68+ e VEGF+ em resposta ao látex comercial de Himatanthus drasticus em modelo de cicatrização em camundongos

This study aimed to evaluate Himatanthus drasticus latex in a mice wound healing experimental model. Animals were divided into four groups (n=7) according to the treatments: GI - saline 0.9% (control), GII - mineral oil (vehicle), GIII - H. drasticus commercial latex (HdCL) and GIV - H. drasticus mixed isolated fraction (MIF, 1 mg/mL). The treatments were applied topically once daily, 50 µL for 14 consecutive days. Macroscopic lesions were evaluated, considering parameters such as swelling, redness, granulation tissue and reepithelialization. VEGF+, CD68+ expressions and mast cells (Toluidin blue stain) were evaluated. HdCL induced higher contraction and exuberant granulation tissue (P > 0.05). HdCL showed a mild inflammatory process while MIF induced intense infiltrate inflammatory predominantly by lymphocytes, vascular congestion, bleeding and did not presented full reepithelialization. Reorganization of collagen fibers (red picrosirius stain) was observed. CD68+ expression and mast cells were presented as moderate, intense and mild in GI, GIII and GIV, respectively. Neovascularization occurred in all groups, while VEGF+ expression was intense in MIF in relation to HdCL. We concluded that HdCL presents wound healing potential, through modulation of mast cells, CD68+ and VEGF+ expressions that can be associated to triterpenes presence according MIF isolated from HdCL.(AU)

Objetivou-se avaliar o látex de Himatanthus drasticus em feridas induzidas experimentalmente em camundongos. Os animais foram divididos em quatro grupos (n=7): GI - salina 0,9% (controle), GII - óleo mineral (veículo), GIII - látex comercial de H. drasticus (HdCL) e GIV - fração isolada mista de H. drasticus (MIF, 1mg/mL). Os tratamentos foram aplicados topicamente uma vez ao dia (50µL), durante 14 dias consecutivos. Lesões macroscópicas, as expressões de VEGF+, CD68+ e a participação dos mastócitos (coloração azul de toluidina) foram avaliadas. HdCL induziu maior contração e tecido de granulação exuberante (P >0,05). HdCL induziu leve processo inflamatório enquanto MIF promoveu intenso infiltrado inflamatório predominantemente linfocítico, congestão vascular, hemorragia e reepitelização parcial. Observou-se reorganização das fibras colágenas (coloração picrosírius). A expressão de CD68+ e os mastócitos apresentaram-se moderados, intensos e leves em GI, GIII e GIV, respectivamente. A neovascularização foi observada em todos os grupos, enquanto a expressão de VEGF+ foi mais intensa em MIF em relação a HdCL. Conclui-se que HdCL apresenta potencial de cicatrização por meio da modulação dos mastócitos e das expressões de CD68+ e VEGF+, o que pode estar associado à presença de triterpenos de acordo com MIF isolada de HdCL.(AU)

Involvement of mast cells, CD68+ and VEGF+ expressions in response to Himatanthus drasticus commercial latex in mice wound healing model / Envolvimento de mastócitos, expressão de CD68+ e VEGF+ em resposta ao látex comercial de Himatanthus drasticus em modelo de cicatrização em camundongos

This study aimed to evaluate Himatanthus drasticus latex in a mice wound healing experimental model. Animals were divided into four groups (n=7) according to the treatments: GI - saline 0.9% (control), GII - mineral oil (vehicle), GIII - H. drasticus commercial latex (HdCL) and GIV - H. drasticus mixed isolated fraction (MIF, 1 mg/mL). The treatments were applied topically once daily, 50 µL for 14 consecutive days. Macroscopic lesions were evaluated, considering parameters such as swelling, redness, granulation tissue and reepithelialization. VEGF+, CD68+ expressions and mast cells (Toluidin blue stain) were evaluated. HdCL induced higher contraction and exuberant granulation tissue (P > 0.05). HdCL showed a mild inflammatory process while MIF induced intense infiltrate inflammatory predominantly by lymphocytes, vascular congestion, bleeding and did not presented full reepithelialization. Reorganization of collagen fibers (red picrosirius stain) was observed. CD68+ expression and mast cells were presented as moderate, intense and mild in GI, GIII and GIV, respectively. Neovascularization occurred in all groups, while VEGF+ expression was intense in MIF in relation to HdCL. We concluded that HdCL presents wound healing potential, through modulation of mast cells, CD68+ and VEGF+ expressions that can be associated to triterpenes presence according MIF isolated from HdCL.(AU)

Objetivou-se avaliar o látex de Himatanthus drasticus em feridas induzidas experimentalmente em camundongos. Os animais foram divididos em quatro grupos (n=7): GI - salina 0,9% (controle), GII - óleo mineral (veículo), GIII - látex comercial de H. drasticus (HdCL) e GIV - fração isolada mista de H. drasticus (MIF, 1mg/mL). Os tratamentos foram aplicados topicamente uma vez ao dia (50µL), durante 14 dias consecutivos. Lesões macroscópicas, as expressões de VEGF+, CD68+ e a participação dos mastócitos (coloração azul de toluidina) foram avaliadas. HdCL induziu maior contração e tecido de granulação exuberante (P >0,05). HdCL induziu leve processo inflamatório enquanto MIF promoveu intenso infiltrado inflamatório predominantemente linfocítico, congestão vascular, hemorragia e reepitelização parcial. Observou-se reorganização das fibras colágenas (coloração picrosírius). A expressão de CD68+ e os mastócitos apresentaram-se moderados, intensos e leves em GI, GIII e GIV, respectivamente. A neovascularização foi observada em todos os grupos, enquanto a expressão de VEGF+ foi mais intensa em MIF em relação a HdCL. Conclui-se que HdCL apresenta potencial de cicatrização por meio da modulação dos mastócitos e das expressões de CD68+ e VEGF+, o que pode estar associado à presença de triterpenos de acordo com MIF isolada de HdCL.(AU)

"Avaliação do efeito antitumoral de Calotropis procera(Alton)Dryand (Apocinaceae)in vitro e in vivo"

O câncer é o principal problema de saúde pública no mundo e embora avanços terapêuticos tenham sido feitos, ainda existem muitas lacunas. Nesse sentido, o objetivo do trabalho foi avaliar o efeito antitumoral de Calotropis procera, uma planta popularmente utilizada para tratar diversas doenças, especialmente relacionadas às desordens gástricas e inflamatórias. Para tal, dividimos a tese em três capítulos, sendo o primeiro uma revisão geral dos principais fitoquímicos e efeitos biológicos descritos para essa espécie vegetal. No segundo capítulo, realizamos a caracterização do extrato etanólico bruto das folhas de C. procera (CE), onde foram encontrados principalmente flavonoides, glicosídeos e cardenolídeos. Também avaliamos o potencial antitumoral de CE e das frações metanólica (MF) e acetato de etila (EAF) em células de tumor canino mamário (CMT) e osteossarcoma canino (OST). Como controle positivo foi utilizado o quimioterápico doxorrubicina. Os resultados demonstraram que o tratamento com os extratos de C. procera reduziram a viabilidade celular e proliferação de CMT e OST, refletindo no aprisionamento das células na fase G0/G1. C. procera também alterou a morfologia das células tumorais, deixando-as mais arredondadas e menores, o que é sugestivo de apoptose. De fato, mediante a análise por citometria de fluxo, foi comprovado que C. procera aumentou caspase-3, reduziu angiogênese, o processo de transição epitélio mesenquimal, e aumentou p53 nas células OST; além de reduzir PCNA nas células CMT. Por fim, no terceiro capítulo avaliamos o potencial antimetastático do extrato fenólico bruto de C. procera (CphE) em células de câncer de mama 4T1 e em tumores mamários de camundongos num modelo xenográfico. A quercetina, um dos flavonoides presentes na C. procera, foi utilizada como controle positivo. Os resultados in vitro demonstraram que CphE reduziu a viabilidade das células 4T1; os níveis de ROS; induziu apoptose; modulou as vias de crescimento celular Akt/mTOR e MAPK; reduziu migração celular; e amenizou a transição epitélio-mesenquimal. In vivo, C. procera reduziu ERK1/2 nos tumores mamários, e reduziu metástase hepática e pulmonar, através da redução de Cenpf e Twist. Todos esses resultados analisados em conjunto sugerem fortemente que C. procera apresenta um grande potencial como agente antitumoral.

Cancer is the main public health problem worldwide and although advances have been made in anticancer therapy, there are still many gaps. In this sense, our goal was to evaluate the antitumor effect of Calotropis procera, a plant popularly used to treat several diseases, especially related to gastric and inflammatory disorders. For this, we divided the thesis into three chapters. First, it was demonstrated a general review of the main phytochemicals and biological effects described for this plant. In the second chapter, it was carried out the characterization of the crude ethanolic extract of C. procera leaves (CE), where mainly flavonoids, glycosides and cardenolides were found. We also evaluated the antitumor effect of CE, methanolic (MF) and ethyl acetate (EAF) fractions of C. procera in canine mammary tumor (CMT) and canine osteosarcoma (OST) cells. As a positive control, it was used the chemotherapy drug-doxorubicin. Results demonstrated that C. procera treatment reduced the cell viability and proliferation of CMT and OST, reflecting the cell arrest in the G0/G1 phase. C. procera also altered the morphology of tumor cells, making them more round and smaller, which is suggestive of apoptosis. In fact, through flow cytometry analysis, we found that C. procera increased caspase-3, reduced angiogenesis and the mesenchymal epithelial transition, and increased p53 in OST cells; in addition to reducing PCNA in CMT cells. Finally, in the third chapter, the antimetastatic effect of crude extract phenolics from C. procera (CphE) was evaluated in 4T1 breast cancer cells and in mammary tumors of nude mice xenograft model. Quercetin - a flavonoids present in C. procera- was used as positive control. The in vitro results demonstrated that CphE reduced 4T1 cells viability and the levels of ROS, induced apoptosis, modulated Akt/mTOR, MAPK pathways, reduced cell migration, and epithelial-mesenchymal transition. In vivo, CphE reduced ERK1/2 in breast tumors, and reduced liver and lung metastasis, by reducing Cenpf and Twist. All of these results analyzed together strongly suggest that C. procera has great potential as an antitumor agent.

Micropropagação e conservação de Macrosyphonia velame (St. Hil.) Muell. Arg. em banco de germoplasma in vitro

Root extracts of Macrosyphonia velame an Apocynaceae native of Brazilian Cerrado, known as white velame have been popularly used as depurative and anti-syphilitic agent. The aim of the present research was to develop a micropropagation protocol for the in vitro conservation of M. velame in a germplasm bank. Seeds of velame collected in Sacramento, Tapira and Araxá, MG, Brazil, were used as initial explants. Nodal segments from axenic plantlets were inoculated on MS/2 medium supplemented with different concentrations (0.25, 5.0 and 1.0mg L-1) of BAP; kinetin; 2iP or TDZ. For in vitro rooting , plantlets (2cm high) were inoculated on MS/2 medium supplemented with IBA or NAA (1.0, 5.0, and 10.0mg L-1), maintained for 5, 10 and 30 days and sub-cultured to MS/2 medium for an additional thirty days before evaluating rooting. For acclimatization and ex vitro rooting plantlets were transplanted into Styrofoam boxes containing either Plantmax®, sand and soil one by one or in combinations (1:1) of sand/Plantmax®; sand/soil; Plantmax®/soil. For the in vitro conservation of M. velame in germplasm bank plantlets (3.5cm high) were inoculated on MS/2 medium supplemented with either 2% sucrose + 4% of mannitol or sorbitol; 2% sucrose + 4% mannitol or sorbitol + 2mg L-1 calcium pantothenate; 2% of sucrose + 4% of mannitol or sorbitol + 2mg L-1 spermidine. The proportion of seed germination was considered low, 33%, 4% and 2% for seeds collected in Araxá, Tapira and Sacramento respectively. Explants cultured on MS/2 medium without addition of cytokinin showed enhanced height (5.2cm), increased number of buds (8.6), proliferation of 4 shoots per bud and minimal (4%) proportion of vitrification. Plantlets acclimatized ex vitro developed better in Plantmax® substrate, most plantlets presented root formation and survival reached 40%. M. velame plantlets cultured for three months on MS/2 added with 2% sucrose + 4% mannitol + 2mg L-1 of calcium pantothenate, under germoplasma bank conditions presented 40% of survival.

A Macrosyphonia velame é uma planta medicinal do Cerrado, pertencente à família Apocynaceae, e conhecida popularmente como velame branco. Extratos de raízes de velame são utilizados pela população como depurativo e anti-sifilítico. Este trabalho teve como objetivo desenvolver o protocolo de micropropagação de M. velame, com vistas à conservação da espécie em Banco do Germoplasma in vitro. Sementes foram coletadas nos municípios de Sacramento, Tapira e Araxá, MG, e utilizadas como fonte de explantes. Segmentos nodais de plântulas axênicas foram transferidos para meio MS/2 suplementado com BAP, Cinetina, 2ip e TDZ em diferentes concentrações (0,25; 5,0 e 1,0mg L-1). Para o enraizamento, brotações com 2cm de altura foram transferidas para meios MS/2 suplementado com 1,0; 5,0; e 10,0mg L-1 de IBA ou ANA e cultivadas por 5, 10 e 30 dias, sendo em seguida subcultivadas em MS/2 por mais trinta dias e só então avaliadas quanto à formação de raízes. Na aclimatização e enraizamento ex vitro, foram utilizados substratos Plantmax®, areia e solo individualmente ou em combinações (1:1) de areia/Plantmax®; areia/solo; Plantmax®/solo. Para o estabelecimento do Banco de Germoplasma, brotações com 3,5cm foram transferidas para meio MS/2 suplementado com 2% de sacarose + 4% de manitol ou sorbitol; 2% de sacarose + 4% de manitol ou sorbitol + 2mg L-1 de pantotenato de cálcio; 2% de sacarose + 4% de manitol ou sorbitol + 2mg L-1 de espermidina. A porcentagem de germinação in vitro foi baixa, 33%, 4% e 2% das sementes coletadas em Araxá, Tapira e Sacramento, respectivamente. O meio MS/2 sem adição de citocinina promoveu a proliferação de brotos (4,0 por gema), elongação (5,2cm), número de gemas (8,6) e reduziu vitrificação (4%). Em relação aos substratos testados, as plântulas se desenvolveram melhor no Plantmax®, sendo que 40% das plântulas sobreviveram e a maioria apresentou formação de raízes. Plântulas cultivadas por três meses em meio de cultura MS/2 + 2% de sacarose + 4% de manitol + 2mg L-1 de pantotenato de cálcio, sob condições de Banco de Germoplasma, apresentaram 40% de sobrevivência.

Micropropagação e conservação de Macrosyphonia velame (St. Hil.) Muell. Arg. em banco de germoplasma in vitro

Root extracts of Macrosyphonia velame an Apocynaceae native of Brazilian Cerrado, known as white velame have been popularly used as depurative and anti-syphilitic agent. The aim of the present research was to develop a micropropagation protocol for the in vitro conservation of M. velame in a germplasm bank. Seeds of velame collected in Sacramento, Tapira and Araxá, MG, Brazil, were used as initial explants. Nodal segments from axenic plantlets were inoculated on MS/2 medium supplemented with different concentrations (0.25, 5.0 and 1.0mg L-1) of BAP; kinetin; 2iP or TDZ. For in vitro rooting , plantlets (2cm high) were inoculated on MS/2 medium supplemented with IBA or NAA (1.0, 5.0, and 10.0mg L-1), maintained for 5, 10 and 30 days and sub-cultured to MS/2 medium for an additional thirty days before evaluating rooting. For acclimatization and ex vitro rooting plantlets were transplanted into Styrofoam boxes containing either Plantmax®, sand and soil one by one or in combinations (1:1) of sand/Plantmax®; sand/soil; Plantmax®/soil. For the in vitro conservation of M. velame in germplasm bank plantlets (3.5cm high) were inoculated on MS/2 medium supplemented with either 2% sucrose + 4% of mannitol or sorbitol; 2% sucrose + 4% mannitol or sorbitol + 2mg L-1 calcium pantothenate; 2% of sucrose + 4% of mannitol or sorbitol + 2mg L-1 spermidine. The proportion of seed germination was considered low, 33%, 4% and 2% for seeds collected in Araxá, Tapira and Sacramento respectively. Explants cultured on MS/2 medium without addition of cytokinin showed enhanced height (5.2cm), increased number of buds (8.6), proliferation of 4 shoots per bud and minimal (4%) proportion of vitrification. Plantlets acclimatized ex vitro developed better in Plantmax® substrate, most plantlets presented root formation and survival reached 40%. M. velame plantlets cultured for three months on MS/2 added with 2% sucrose + 4% mannitol + 2mg L-1 of calcium pantothenate, under germoplasma bank conditions presented 40% of survival.

A Macrosyphonia velame é uma planta medicinal do Cerrado, pertencente à família Apocynaceae, e conhecida popularmente como velame branco. Extratos de raízes de velame são utilizados pela população como depurativo e anti-sifilítico. Este trabalho teve como objetivo desenvolver o protocolo de micropropagação de M. velame, com vistas à conservação da espécie em Banco do Germoplasma in vitro. Sementes foram coletadas nos municípios de Sacramento, Tapira e Araxá, MG, e utilizadas como fonte de explantes. Segmentos nodais de plântulas axênicas foram transferidos para meio MS/2 suplementado com BAP, Cinetina, 2ip e TDZ em diferentes concentrações (0,25; 5,0 e 1,0mg L-1). Para o enraizamento, brotações com 2cm de altura foram transferidas para meios MS/2 suplementado com 1,0; 5,0; e 10,0mg L-1 de IBA ou ANA e cultivadas por 5, 10 e 30 dias, sendo em seguida subcultivadas em MS/2 por mais trinta dias e só então avaliadas quanto à formação de raízes. Na aclimatização e enraizamento ex vitro, foram utilizados substratos Plantmax®, areia e solo individualmente ou em combinações (1:1) de areia/Plantmax®; areia/solo; Plantmax®/solo. Para o estabelecimento do Banco de Germoplasma, brotações com 3,5cm foram transferidas para meio MS/2 suplementado com 2% de sacarose + 4% de manitol ou sorbitol; 2% de sacarose + 4% de manitol ou sorbitol + 2mg L-1 de pantotenato de cálcio; 2% de sacarose + 4% de manitol ou sorbitol + 2mg L-1 de espermidina. A porcentagem de germinação in vitro foi baixa, 33%, 4% e 2% das sementes coletadas em Araxá, Tapira e Sacramento, respectivamente. O meio MS/2 sem adição de citocinina promoveu a proliferação de brotos (4,0 por gema), elongação (5,2cm), número de gemas (8,6) e reduziu vitrificação (4%). Em relação aos substratos testados, as plântulas se desenvolveram melhor no Plantmax®, sendo que 40% das plântulas sobreviveram e a maioria apresentou formação de raízes. Plântulas cultivadas por três meses em meio de cultura MS/2 + 2% de sacarose + 4% de manitol + 2mg L-1 de pantotenato de cálcio, sob condições de Banco de Germoplasma, apresentaram 40% de sobrevivência.

Micropropagação e conservação de Macrosyphonia velame (St. Hil.) Muell. Arg. em banco de germoplasma in vitro

Root extracts of Macrosyphonia velame an Apocynaceae native of Brazilian Cerrado, known as white velame have been popularly used as depurative and anti-syphilitic agent. The aim of the present research was to develop a micropropagation protocol for the in vitro conservation of M. velame in a germplasm bank. Seeds of velame collected in Sacramento, Tapira and Araxá, MG, Brazil, were used as initial explants. Nodal segments from axenic plantlets were inoculated on MS/2 medium supplemented with different concentrations (0.25, 5.0 and 1.0mg L-1) of BAP; kinetin; 2iP or TDZ. For in vitro rooting , plantlets (2cm high) were inoculated on MS/2 medium supplemented with IBA or NAA (1.0, 5.0, and 10.0mg L-1), maintained for 5, 10 and 30 days and sub-cultured to MS/2 medium for an additional thirty days before evaluating rooting. For acclimatization and ex vitro rooting plantlets were transplanted into Styrofoam boxes containing either Plantmax®, sand and soil one by one or in combinations (1:1) of sand/Plantmax®; sand/soil; Plantmax®/soil. For the in vitro conservation of M. velame in germplasm bank plantlets (3.5cm high) were inoculated on MS/2 medium supplemented with either 2% sucrose + 4% of mannitol or sorbitol; 2% sucrose + 4% mannitol or sorbitol + 2mg L-1 calcium pantothenate; 2% of sucrose + 4% of mannitol or sorbitol + 2mg L-1 spermidine. The proportion of seed germination was considered low, 33%, 4% and 2% for seeds collected in Araxá, Tapira and Sacramento respectively. Explants cultured on MS/2 medium without addition of cytokinin showed enhanced height (5.2cm), increased number of buds (8.6), proliferation of 4 shoots per bud and minimal (4%) proportion of vitrification. Plantlets acclimatized ex vitro developed better in Plantmax® substrate, most plantlets presented root formation and survival reached 40%. M. velame plantlets cultured for three months on MS/2 added with 2% sucrose + 4% mannitol + 2mg L-1 of calcium pantothenate, under germoplasma bank conditions presented 40% of survival.

A Macrosyphonia velame é uma planta medicinal do Cerrado, pertencente à família Apocynaceae, e conhecida popularmente como velame branco. Extratos de raízes de velame são utilizados pela população como depurativo e anti-sifilítico. Este trabalho teve como objetivo desenvolver o protocolo de micropropagação de M. velame, com vistas à conservação da espécie em Banco do Germoplasma in vitro. Sementes foram coletadas nos municípios de Sacramento, Tapira e Araxá, MG, e utilizadas como fonte de explantes. Segmentos nodais de plântulas axênicas foram transferidos para meio MS/2 suplementado com BAP, Cinetina, 2ip e TDZ em diferentes concentrações (0,25; 5,0 e 1,0mg L-1). Para o enraizamento, brotações com 2cm de altura foram transferidas para meios MS/2 suplementado com 1,0; 5,0; e 10,0mg L-1 de IBA ou ANA e cultivadas por 5, 10 e 30 dias, sendo em seguida subcultivadas em MS/2 por mais trinta dias e só então avaliadas quanto à formação de raízes. Na aclimatização e enraizamento ex vitro, foram utilizados substratos Plantmax®, areia e solo individualmente ou em combinações (1:1) de areia/Plantmax®; areia/solo; Plantmax®/solo. Para o estabelecimento do Banco de Germoplasma, brotações com 3,5cm foram transferidas para meio MS/2 suplementado com 2% de sacarose + 4% de manitol ou sorbitol; 2% de sacarose + 4% de manitol ou sorbitol + 2mg L-1 de pantotenato de cálcio; 2% de sacarose + 4% de manitol ou sorbitol + 2mg L-1 de espermidina. A porcentagem de germinação in vitro foi baixa, 33%, 4% e 2% das sementes coletadas em Araxá, Tapira e Sacramento, respectivamente. O meio MS/2 sem adição de citocinina promoveu a proliferação de brotos (4,0 por gema), elongação (5,2cm), número de gemas (8,6) e reduziu vitrificação (4%). Em relação aos substratos testados, as plântulas se desenvolveram melhor no Plantmax®, sendo que 40% das plântulas sobreviveram e a maioria apresentou formação de raízes. Plântulas cultivadas por três meses em meio de cultura MS/2 + 2% de sacarose + 4% de manitol + 2mg L-1 de pantotenato de cálcio, sob condições de Banco de Germoplasma, apresentaram 40% de sobrevivência.