Meningoencephalitis caused by Bovine alphaherpesvirus 5 in Pernambuco, Brazil / [Meningoencefalite causada pelo Bovine alphaherpesvirus 5 em Pernambuco, Brasil]

Objetivou-se descrever a ocorrência do Bovine alphaherpesvirus 5 (BoHV5) como causa de meningoencefalite não supurativa em bovinos do estado de Pernambuco, Brasil. Para tanto, 32 amostras de sistema nervoso embebidas em parafina foram obtidas de animais acometidos por doenças neurológicas atendidos na Clínica de Bovinos de Garanhuns da Universidade Federal Rural de Pernambuco (CBG-UFRPE), entre 2012 e 2016. As amostras foram analisadas quanto à presença do gene da glicoproteína C do BoHV5 por reação em cadeia da polimerase (PCR). Dois animais (6,25%) tiveram resultado positivo à PCR, e sua análise de sequenciamento indicou 100% de similaridade para o BoHV5. Os resultados histopatológicos desses dois animais revelaram lesões multifocais de meningoencefalite não supurativa associada à polioencefalomalácia, presença de corpúsculos de inclusão basofílicos, infiltração de células de Gitter e presença de manguitos perivasculares. A PCR se mostra uma importante ferramenta para diferenciação das infecções por BoHV5 de outras enfermidades neurológicas de bovinos, especialmente a raiva.(AU)

Immunogenicity in sheep of Uruguayan commercial vaccines against bovine alphaherpesvirus 1, 5 and bovine pestiviruses / Imunogenicidade em ovelhas de vacinas comerciais Uruguaias para alfaherpesvírus bovino 1, 5 e pestivírus de bovinos

The serological responses induced by four commercial inactivated Uruguayan vaccines against bovine alphaherpesviruses (BoHV)-1 and -5 and bovine pestiviruses (BVDV-1, BVDV-2, and HoBiPeV) were evaluated in sheep. Thirty-seven sheep were immunized twice (day 0 and 25) and their serum samples were tested at different intervals (days 0, 25, 40, 60, and 90) post-vaccination (PV). Among the four vaccines tested, only one (G4) could induce the production of moderate neutralizing antibody titers against BoHV-1 and -5 and BVDV-1 and -2. The G3 vaccine showed a neutralizing serological response against the bovine alphaherpesviruses only. The G1 and G2 vaccines produced extremely low levels of antibodies in a few vaccinated animals only (geometric mean titers (GMT) 2.2). Similar levels of immunological responses were induced by the G4 vaccine against BoHV-1 and -5, and titers of neutralizing antibodies induced in approximately 70% of the animals are known to confer protection (GMT > 8). For bovine pestiviruses, the vaccine stimulated response of G4 against BVDV-2 was higher compared to that against BVDV-1, and extremely low for HoBiPeV. The peak of neutralizing antibodies to BoHV-1 and BVDV-1 was observed on days 40 and 60 PV, respectively. Thereafter, a remarkably decrease in neutralizing antibody response was observed at day 90 PV. These results demonstrated that tested commercial Uruguayan vaccines did not induce a serological response of adequate magnitude and duration. Thus, it is important to periodically review formulations and compositions of commercial vaccines against bovine alphaherpesviruses and pestiviruses.(AU)

A resposta sorológica induzida por quatro vacinas comerciais uruguaias inativadas contra os alfaherpesvírus bovinos (BoHV-1 e -5) e pestivírus de bovinos (BVDV-1, BVDV-2 e HoBiPeV) foi avaliada em ovinos. Os animais foram imunizados duas vezes (dia 0 e dia 25) e o soro testado em diferentes intervalos (dias 0, 25, 40, 60 e 90) após a vacinação (PV). Dentre as quatro vacinas testadas, apenas uma (G4) apresentou títulos de anticorpos neutralizantes moderados para os BoHV-1 e -5, BVDV-1 e 2. A vacina G3 apresentou resposta somente para alfaherpesvírus bovinos. As vacinas G1 e G2 estimularam resposta somente em alguns animais vacinados. Para a vacina G4, observou-se que a resposta imunológica frente ao BoHV-1 e 5 foi semelhante e pelo menos 70% dos animais apresentaram níveis protetivos de anticorpos neutralizantes. Para os pestivírus bovinos, a vacina G4 estimulou resposta para o BVDV-2 mais elevada quando comparada com o BVDV-1, e quase que indetectável para HoBiPeV. O pico de anticorpos neutralizantes para o BoHV-1 foi observado no dia 40 PV e no dia 60 PV para o BVDV-1. Após isso, observou-se um decréscimo considerável na resposta de anticorpos neutralizantes. Os resultados demonstraram que vacinas comerciais uruguaias testadas não induziram resposta sorológica de magnitude e duração adequadas. Assim, ressalva-se a importância de rever periodicamente a formulação e composição das vacinas comerciais para alfaherpesvírus e pestivírus bovinos.(AU)

Tracheal stenosis in a Holstein cow / Estenose de traqueia em uma vaca Holandesa

Tracheal stenosis, also known as Honker syndrome, is characterized by tracheal edema and hemorrhage, leading to partial obstruction of the lumen; therefore, death. Its etiology is not yet well elucidated. A 3-year-old Holstein cow, with a history of dyspnea, and a large amount of reddish foam flowing from the mouth and nose, had died after 10 minutes of clinical signs. Macroscopic examination revealed focally extensive hemorrhage and clot organization in tracheal mucosa extending to the submucosa, surrounded by well-differentiated fibrous connective tissue. In adjacent mucosa was observed moderate multifocal inflammatory infiltrate composed by lymphocytes and plasma cells, as well as moderate squamous cell metaplasia. The bacterial culture showed growth of contaminant and environmental bacteria and the RT-PCR to detect Herpesvirus 1 (BoHV-1) and 5 (BoHV-5) was negative. To the authors knowledge, this is the first report of tracheal stenosis in South America, as well as the first report of this condition described in a Holstein cow.(AU)

A estenose traqueal, também conhecida como síndrome de Honker, caracteriza-se pela formação edema e hemorragia na traqueia, causando obstrução parcial do lúmen e consequentemente morte dos animais. Sua etiologia ainda não está bem esclarecida. Descreve-se um caso de um bovino, fêmea de aptidão leiteira, três anos de idade com manifestação clínica de dispneia, e secreção de grande quantidade de espuma avermelhada pela boca e narina, e óbito após 10 minutos de evolução do quadro. No exame macroscópico, observou-se em traqueia área focalmente extensa de coágulo circundado por tecido conjuntivo na região dorsal, em áreas adjacentes havia espessamento da mucosa causado por edema e tecido conjuntivo. No exame microscópico observou-se em traqueia, hemorragia e coágulo em organização na submucosa estendendo-se para a mucosa, circundada por tecido conjuntivo fibroso bem diferenciado. Em mucosa adjacente, observou-se infiltrado inflamatório multifocal, moderado de linfócitos e plasmócitos e metaplasia escamosa do epitélio respiratório, multifocal moderada. Verificou-se no cultivo bacteriano que houve crescimento misto abundante somente de bactérias contaminantes e bactérias ambientais. Além disso, a técnica de RT-PCR para detecção Herpesvírus tipo 1 (BoHV-1) e 5 (BoHV-5) resultou negativa. Este foi o primeiro relato ao conhecimento dos autores, de estenose traqueal na América do Sul, bem como o primeiro descrito em bovino de aptidão leiteira.(AU)

Efeito dos anticorpos maternos sobre a resposta imune induzida pela vacinação em bezerros Holandeses / Effect of maternal antibodies on vaccine-induced immune responses in Holstein calves

Objetivou-se avaliar o efeito dos anticorpos (ACs) maternos sobre resposta imune humoral induzida pela vacinação em bezerros Holandeses. Bezerros foram distribuídos aleatoriamente em quatro grupos: G1 - vacinados no D14 e D44 (n=6); G2 - vacinados no D90 e D120 (n=5); G3 - vacinados no D180 e D210 (n=8); controle: não vacinado (n=5). Utilizaram-se 5mL de vacina comercial (Cattle Master Gold FP5+L5® - Zoetis, Brasil), por via subcutânea. Foi realizada vírus neutralização (VN) no momento da vacinação, booster e 30 dias após a revacinação. Não foram observadas diferenças entre controle e G1 ou G2 para a frequência de soropositivos ou títulos de ACs contra os vírus respiratórios (P≥0,05). G3 apresentou maior produção de ACs em relação ao controle para BoHV-1 (P<0,01), BRSV (P<0,01) e BPIV-3 (P=0,02) após o booster (D240). A análise no tempo também demonstrou aumento nos títulos de ACs no G3 (P≤0,05). O perfil clínico revelou broncopneumonia apenas no grupo controle (n=4/5) entre 80-135 dias de vida. A imunidade colostral e a vacinal apresentaram perfis inversamente proporcionais, com maior produção de ACs aos seis meses de idade. Devido à precocidade da doença respiratória, estudos complementares são necessários para esclarecer o papel da resposta imune celular na vacinação diante dos ACs maternos.(AU)

This research aimed to evaluate the effect of colostral antibodies (ABs) on the humoral immune response induced by vaccination in Holstein calves. Twenty-four calves were randomly assigned into four groups: G1 - vaccinated on D14 and D44 (n= 6); G2 - on D90 and D120 (n= 5); G3 - on D180 and D210 (n= 8); Control: unvaccinated (n= 5). Commercial vaccine (Cattle Master Gold FP5+L5® - Zoetis, Brazil) was administered subcutaneously (5mL). Virus neutralization test (VN) was performed at the time of vaccination, booster and 30 days after booster to determine AB titers. No differences were observed between control and G1 or G2 for seropositive frequencies and ABs titers (P≥ 0.05). G3 showed higher AB production than control for BoHV-1 (P< 0.01), BRSV (P< 0.01) and BPIV-3 (P= 0.02) after booster (D240). Overtime analysis also exhibited increase in AB titers in G3 (P≤ 0,05). Bronchopneumonia was identified in the control group (n= 4/5) between 80-135 days of life. The colostral and vaccinal immunity presented inversely proportional profiles, with higher production of ABs at 6 months of age. Due to the precocity of respiratory disease further studies are required to clarify the role of cellular immune response to vaccination in face of maternal ABs.(AU)

Efeito dos anticorpos maternos sobre a resposta imune induzida pela vacinação em bezerros Holandeses / Effect of maternal antibodies on vaccine-induced immune responses in Holstein calves

Objetivou-se avaliar o efeito dos anticorpos (ACs) maternos sobre resposta imune humoral induzida pela vacinação em bezerros Holandeses. Bezerros foram distribuídos aleatoriamente em quatro grupos: G1 - vacinados no D14 e D44 (n=6); G2 - vacinados no D90 e D120 (n=5); G3 - vacinados no D180 e D210 (n=8); controle: não vacinado (n=5). Utilizaram-se 5mL de vacina comercial (Cattle Master Gold FP5+L5® - Zoetis, Brasil), por via subcutânea. Foi realizada vírus neutralização (VN) no momento da vacinação, booster e 30 dias após a revacinação. Não foram observadas diferenças entre controle e G1 ou G2 para a frequência de soropositivos ou títulos de ACs contra os vírus respiratórios (P≥0,05). G3 apresentou maior produção de ACs em relação ao controle para BoHV-1 (P<0,01), BRSV (P<0,01) e BPIV-3 (P=0,02) após o booster (D240). A análise no tempo também demonstrou aumento nos títulos de ACs no G3 (P≤0,05). O perfil clínico revelou broncopneumonia apenas no grupo controle (n=4/5) entre 80-135 dias de vida. A imunidade colostral e a vacinal apresentaram perfis inversamente proporcionais, com maior produção de ACs aos seis meses de idade. Devido à precocidade da doença respiratória, estudos complementares são necessários para esclarecer o papel da resposta imune celular na vacinação diante dos ACs maternos.(AU)

This research aimed to evaluate the effect of colostral antibodies (ABs) on the humoral immune response induced by vaccination in Holstein calves. Twenty-four calves were randomly assigned into four groups: G1 - vaccinated on D14 and D44 (n= 6); G2 - on D90 and D120 (n= 5); G3 - on D180 and D210 (n= 8); Control: unvaccinated (n= 5). Commercial vaccine (Cattle Master Gold FP5+L5® - Zoetis, Brazil) was administered subcutaneously (5mL). Virus neutralization test (VN) was performed at the time of vaccination, booster and 30 days after booster to determine AB titers. No differences were observed between control and G1 or G2 for seropositive frequencies and ABs titers (P≥ 0.05). G3 showed higher AB production than control for BoHV-1 (P< 0.01), BRSV (P< 0.01) and BPIV-3 (P= 0.02) after booster (D240). Overtime analysis also exhibited increase in AB titers in G3 (P≤ 0,05). Bronchopneumonia was identified in the control group (n= 4/5) between 80-135 days of life. The colostral and vaccinal immunity presented inversely proportional profiles, with higher production of ABs at 6 months of age. Due to the precocity of respiratory disease further studies are required to clarify the role of cellular immune response to vaccination in face of maternal ABs.(AU)

Effect of parenteral vaccination of newborn Holstein calves against viral agents involved in bovine respiratory disease (BRD)

Background: Newborn calves are born immunosuppressed, hypogammaglobulinemic, immunologically immature, and therefore more vulnerable to many infectious diseases. During pregnancy, the fetal-placental environment is regulated by Th2-type cytokines that neutralize Th1 responses, an important factor for immune defense against viral agents. The ingestion and absorption of colostral immunoglobulins enhance the immunity of the neonate. However, the presence of maternal antibodies might negatively affect the success of parental vaccination in the first two months of life. This study aimed to evaluate the effecacy of parenteral vaccination in newborn calves with high titers of maternal antibodies against respiratory viruses. Materials, Methods & Results: Twenty-eight Holstein calves were allocated to the vaccinated group (VAC, n = 18) or an unvaccinated control group (NVAC, n = 10). The initial vaccination with 5 mL of a commercial vaccine occurred around the 14th day of life (D14) and the booster at D35. Respiratory and diarrhea symptoms were evaluated at D12, D14, D16, D20, D31, D36, D45, D53, and D60. Blood samples were taken for leukogram, haptoglobin, and seroneutralization of BVDV, BoHV-1, BRSV, and BPI3V, at the time of vaccination at D14 (T1), at booster (D35, T2), and 21 days after the booster (D56, T3). Despite the increased prevalence of BRD during the period of the study, no calves from either group exhibited respiratory disease at D12 or D14. In subsequent assessments, the frequency of BRD increased over time in the VAC group until it reached a maximum prevalence of 38.9% (7/18) at D31. In the NVAC group, the maximum prevalence observed was 40% at D45 and D60. A comparison of the frequencies for BRD cases showed a statistical trend at D36 (P = 0.07), with a higher prevalence for the NVAC group (30%) in relation to the VAC group (5.6%). For the NVAC group, a greater number of total...

Spatiotemporal expression pattern of alpha, beta, and gamma genes during BoHV-5 infection / Expressão temporal de genes alfa, beta e gama durante ainfecção pelo BoHV-5

Bovine herpesvirus 5 is an alphaherpesvirus that causes nonsuppurative meningoencephalitis in cattle. This disease occurs naturally in either outbreaks or isolated cases, and exhibits low morbidity and high lethality. Although previous studies elucidated crucial aspects involved in the pathogenesis of the disease, there is a paucity of information regarding the molecular events contributing to infection and replication of BoHV-5. The objective of the present study was to determine the in vitro gene expression pattern of BoHV-5 (e.g., alpha, beta, and gamma genes) and host cells genes (GAPDH and 18S) over time utilizing different quantities of inoculated virus. Three BoHV-5 genes (bICP0, UL9, US4) and one structural bovine cell gene had their expression accessed by real-time PCR. While the expression of BoHV-5 genes increased during the course of infection, GAPDH gene expression decreased in the host cells, evidencing the effect of viral infection on the expression of bovine cell genes. The 18S ribosomal RNA (rRNA) gene was constitutively expressed throughout BoHV-5 infection. Our data clearly demonstrates that GAPDH gene should not be used as a reference gene in studies of BoHV-5 infection because it was influenced by viral infection. However, 18S rRNA was constitutively expressed and, therefore, is recommended for normalization of BoHV-5 infection studies in bovine cells. The expression of viral genes transcripts was not altered by increasing number of viral particles added to the culture. All viral genes included here demonstrated the same expression pattern over time and there was no difference in the expression of viral genes among the various time points. Our data show important differences comparing to classical studies regarding herpesvirus alpha, beta, and gamma genes expression. More research is necessary to improve our understanding about the BoHV-5 biology during infection. Studies employing next-generation sequencing (i.e., RNA-seq), using both in vitro and in vivo models, would be the next logical step to grasp the virus and host cell's transcriptome changes over the course of infection.(AU)

Herpesvirus bovino 5 é um alfaherpesvírus causador de meningoencefalite não supurativa em bovinos. Esta doença possui ocorrência natural em surtos ou casos isolados, associadas a baixa morbidade e alta letalidade. Embora estudos anteriores tenham elucidado aspectos relacionados a patogenia da doença, há uma lacuna de conhecimento relacionado aos eventos moleculares que contribuem para a infecção e replicação do BoHV-5. O objetivo do presente estudo foi determinar a expressão gênica in vitro de genes virais (i.e., alfa, beta e gama) e das células hospedeiras (GAPDH e 18S) durante a infecção considerando diferentes momentos de infecção e quantidade de vírus utilizado. Três genes do BoHV-5 (bICP0, UL9, US4), um gene estrutural (GAPDH) e um gene constitutivo (18S) da célula bovina tiveram suas expressões avaliadas por PCR quantitativa (qPCR). Enquanto os genes virais tiveram sua expressão aumentada ao longo do tempo de infecção, o gene hospedeiro teve sua expressão diminuída, demonstrando a ação do vírus na expressão gênica de células bovinas in vitro. O gene constitutivo 18S teve sua expressão mantida durante todos os momentos do experimento. Nossos resultados claramente demonstraram que o GAPDH não deve ser usado como gene de referência em estudos com infecção por BoHV-5 pois é influenciado pela infecção viral. Entretanto, o 18S rRNA foi constitutivamente expresso e pode ser recomendado para normalização em células bovinas infectadas pelo vírus. A expressão de mRNA viral não foi alterada pela quantidade de vírus usada. Todos os genes virais demonstraram o mesmo padrão de expressão ao longo do tempo de infecção. Nossos resultados trazem importantes diferenças comparando aos estudos clássicos que avaliaram a expressão de genes alfa, beta e gama. Mais estudos são necessários para aumentar o conhecimento da biologia molecular do BoHV-5. Estudo utilizando sequenciamento de última geração (i.e., RNA-seq), usando modelos in vitro e in vivo, aparentam ser o próximo passo lógico para acessar as alterações do transcriptoma do hospedeiro e viral ao longo do curso da infecção.(AU)

Spatiotemporal expression pattern of alpha, beta, and gamma genes during BoHV-5 infection / Expressão temporal de genes alfa, beta e gama durante ainfecção pelo BoHV-5

Bovine herpesvirus 5 is an alphaherpesvirus that causes nonsuppurative meningoencephalitis in cattle. This disease occurs naturally in either outbreaks or isolated cases, and exhibits low morbidity and high lethality. Although previous studies elucidated crucial aspects involved in the pathogenesis of the disease, there is a paucity of information regarding the molecular events contributing to infection and replication of BoHV-5. The objective of the present study was to determine the in vitro gene expression pattern of BoHV-5 (e.g., alpha, beta, and gamma genes) and host cells genes (GAPDH and 18S) over time utilizing different quantities of inoculated virus. Three BoHV-5 genes (bICP0, UL9, US4) and one structural bovine cell gene had their expression accessed by real-time PCR. While the expression of BoHV-5 genes increased during the course of infection, GAPDH gene expression decreased in the host cells, evidencing the effect of viral infection on the expression of bovine cell genes. The 18S ribosomal RNA (rRNA) gene was constitutively expressed throughout BoHV-5 infection. Our data clearly demonstrates that GAPDH gene should not be used as a reference gene in studies of BoHV-5 infection because it was influenced by viral infection. However, 18S rRNA was constitutively expressed and, therefore, is recommended for normalization of BoHV-5 infection studies in bovine cells. The expression of viral genes transcripts was not altered by increasing number of viral particles added to the culture. All viral genes included here demonstrated the same expression pattern over time and there was no difference in the expression of viral genes among the various time points. Our data show important differences comparing to classical studies regarding herpesvirus alpha, beta, and gamma genes expression. More research is necessary to improve our understanding about the BoHV-5 biology during infection. Studies employing next-generation sequencing (i.e., RNA-seq), using both in vitro and in vivo models, would be the next logical step to grasp the virus and host cell's transcriptome changes over the course of infection.(AU)

Herpesvirus bovino 5 é um alfaherpesvírus causador de meningoencefalite não supurativa em bovinos. Esta doença possui ocorrência natural em surtos ou casos isolados, associadas a baixa morbidade e alta letalidade. Embora estudos anteriores tenham elucidado aspectos relacionados a patogenia da doença, há uma lacuna de conhecimento relacionado aos eventos moleculares que contribuem para a infecção e replicação do BoHV-5. O objetivo do presente estudo foi determinar a expressão gênica in vitro de genes virais (i.e., alfa, beta e gama) e das células hospedeiras (GAPDH e 18S) durante a infecção considerando diferentes momentos de infecção e quantidade de vírus utilizado. Três genes do BoHV-5 (bICP0, UL9, US4), um gene estrutural (GAPDH) e um gene constitutivo (18S) da célula bovina tiveram suas expressões avaliadas por PCR quantitativa (qPCR). Enquanto os genes virais tiveram sua expressão aumentada ao longo do tempo de infecção, o gene hospedeiro teve sua expressão diminuída, demonstrando a ação do vírus na expressão gênica de células bovinas in vitro. O gene constitutivo 18S teve sua expressão mantida durante todos os momentos do experimento. Nossos resultados claramente demonstraram que o GAPDH não deve ser usado como gene de referência em estudos com infecção por BoHV-5 pois é influenciado pela infecção viral. Entretanto, o 18S rRNA foi constitutivamente expresso e pode ser recomendado para normalização em células bovinas infectadas pelo vírus. A expressão de mRNA viral não foi alterada pela quantidade de vírus usada. Todos os genes virais demonstraram o mesmo padrão de expressão ao longo do tempo de infecção. Nossos resultados trazem importantes diferenças comparando aos estudos clássicos que avaliaram a expressão de genes alfa, beta e gama. Mais estudos são necessários para aumentar o conhecimento da biologia molecular do BoHV-5. Estudo utilizando sequenciamento de última geração (i.e., RNA-seq), usando modelos in vitro e in vivo, aparentam ser o próximo passo lógico para acessar as alterações do transcriptoma do hospedeiro e viral ao longo do curso da infecção.(AU)

Bovine alphaherpesvirus 1 and 5 in semen from bulls presenting genital lesions under field conditions in Brazil / Alfaherpesvírus bovino 1 e 5 em sêmen de touros com lesões genitais, sob condições a campo no Brasil

Bovine alphaherpesviruses 1 and 5 (BoHV-1/5) are main pathogens of respiratory, reproductive and neurological diseases in cattle. The aim of this study was to investigate the frequency of neutralizing antibodies against BoHV-1/5 in serum samples and to detect viral DNA in semen of bulls from beef cattle farms located in RS. A total of 372 serum and semen sample from bulls were collected in eighteen farms. Serum samples were submitted to virus neutralization (VN) assay, while semen samples were used to detect BoHV-1 and BoHV-5 DNA by PCR. VN results showed that BoHV-1/5 antibodies were detected in bulls of 66.7% (12/18) of the farms, 295 (79.5%) BoHV positive bulls, 287 for BoHV-1 and 234 for BoHV-; at 43 vaccinated bulls 72.1% (31/43) showing serology negative. BoHV-1/5 DNA was detected in the semen of three bulls; one of the them presenting BoHV-1, one out three presenting BoHV-5 and one BoHV-1/5.co-infection All BoHV DNA positive samples came from animals presenting posthitis and other genital lesions at sampling. Results showed a high seroprevalence of BoHV-1/5 antibodies in bulls as well as strong evidence that these viruses are actively circulating in the cattle farms. A remarkable finding is that in the presence of clinically evident lesions in the genital tract, both BoHV-1 and 5 may found in semen.(AU)

Os alfa-herpesvírus bovinos 1 e 5 (BoHV-1/5) são importantes patógenos de doença respiratória, reprodutiva e neurológica em bovinos. O objetivo deste estudo foi investigar a frequência de detecção de anticorpos neutralizantes contra BoHV-1/5 em amostra de soro e detectar DNA viral em sêmen de touros do rebanho bovino localizado nas fazendas de gado de corte do RS. Um total de 371 amostras de soro e sêmen foi coletado de touros em 18 fazendas, 325 das quais são provenientes de touros não vacinados e 43 de vacinados. Amostras de soro foram submetidas à técnica de vírus-neutralização (VN), enquanto as amostras de sêmen foram submetidas à extração de DNA e posterior PCR (polymerase chain reaction) para detecção de BoHV-1 e 5. Os resultados da VN demostraram que anticorpos contra BoHV-1/5 foram detectados nos touros não vacinados em 66,7% (12/18) das fazendas, 295 (79,5%) touros mostraram-se positivos para BoHV, 287 para BoHV-1 e 234 para BoHV-5; e para 43 touros vacinados, observou-se que 72,1% (31/43) foram negativos na sorologia DNA de BoHV-1/5, detectado no sêmen de três touros: um deles apresentava BoHV-1, outro BoHV-5 e em um foi detectada coinfecção por BoHV-1/5. Todas as amostras positivas para o DNA viral eram provenientes de animais que apresentavam lesões de postite e outras lesões genitais. Esses resultados demonstram que há uma alta soroprevalência de BoHV-1/5 em touros, bem como uma forte evidência de que esses vírus estão circulando ativamente no rebanho bovino dessas fazendas. Um achado interessante foi a detecção de BoHV-1 e 5 em touros com lesões na região do trato genital.(AU)

Bovine alphaherpesvirus 1 and 5 in semen from bulls presenting genital lesions under field conditions in Brazil / Alfaherpesvírus bovino 1 e 5 em sêmen de touros com lesões genitais, sob condições a campo no Brasil

Bovine alphaherpesviruses 1 and 5 (BoHV-1/5) are main pathogens of respiratory, reproductive and neurological diseases in cattle. The aim of this study was to investigate the frequency of neutralizing antibodies against BoHV-1/5 in serum samples and to detect viral DNA in semen of bulls from beef cattle farms located in RS. A total of 372 serum and semen sample from bulls were collected in eighteen farms. Serum samples were submitted to virus neutralization (VN) assay, while semen samples were used to detect BoHV-1 and BoHV-5 DNA by PCR. VN results showed that BoHV-1/5 antibodies were detected in bulls of 66.7% (12/18) of the farms, 295 (79.5%) BoHV positive bulls, 287 for BoHV-1 and 234 for BoHV-; at 43 vaccinated bulls 72.1% (31/43) showing serology negative. BoHV-1/5 DNA was detected in the semen of three bulls; one of the them presenting BoHV-1, one out three presenting BoHV-5 and one BoHV-1/5.co-infection All BoHV DNA positive samples came from animals presenting posthitis and other genital lesions at sampling. Results showed a high seroprevalence of BoHV-1/5 antibodies in bulls as well as strong evidence that these viruses are actively circulating in the cattle farms. A remarkable finding is that in the presence of clinically evident lesions in the genital tract, both BoHV-1 and 5 may found in semen.(AU)

Os alfa-herpesvírus bovinos 1 e 5 (BoHV-1/5) são importantes patógenos de doença respiratória, reprodutiva e neurológica em bovinos. O objetivo deste estudo foi investigar a frequência de detecção de anticorpos neutralizantes contra BoHV-1/5 em amostra de soro e detectar DNA viral em sêmen de touros do rebanho bovino localizado nas fazendas de gado de corte do RS. Um total de 371 amostras de soro e sêmen foi coletado de touros em 18 fazendas, 325 das quais são provenientes de touros não vacinados e 43 de vacinados. Amostras de soro foram submetidas à técnica de vírus-neutralização (VN), enquanto as amostras de sêmen foram submetidas à extração de DNA e posterior PCR (polymerase chain reaction) para detecção de BoHV-1 e 5. Os resultados da VN demostraram que anticorpos contra BoHV-1/5 foram detectados nos touros não vacinados em 66,7% (12/18) das fazendas, 295 (79,5%) touros mostraram-se positivos para BoHV, 287 para BoHV-1 e 234 para BoHV-5; e para 43 touros vacinados, observou-se que 72,1% (31/43) foram negativos na sorologia DNA de BoHV-1/5, detectado no sêmen de três touros: um deles apresentava BoHV-1, outro BoHV-5 e em um foi detectada coinfecção por BoHV-1/5. Todas as amostras positivas para o DNA viral eram provenientes de animais que apresentavam lesões de postite e outras lesões genitais. Esses resultados demonstram que há uma alta soroprevalência de BoHV-1/5 em touros, bem como uma forte evidência de que esses vírus estão circulando ativamente no rebanho bovino dessas fazendas. Um achado interessante foi a detecção de BoHV-1 e 5 em touros com lesões na região do trato genital.(AU)

Infecção latente pelo herpesvírus bovino tipo 1 em búfalos (Bubalus bubalis) no Rio Grande do Sul / Bovine herpesvirus type 1 latent infection in buffalo (Bubalus bubalis) in Rio Grande do Sul

Apesar dos bovinos serem considerados os hospedeiros naturais do BoHV-1, estudos sorológicos têm sugerido que búfalos podem ser suscetíveis ao BoHV-1 e a outros alfa-herpesvírus geneticamente relacionados. O objetivo deste estudo foi detectar a presença de DNA viral de BoHV-1 em 202 amostras de gânglios trigêmeos de búfalos, pela técnica de semi-nested PCR, para detecção de um segmento do gene codificante da glicoproteína D (gD) do BoHV-1. Além disso, 242 amostras de soro foram analisadas pela técnica de soroneutralização (SN) para a detecção de anticorpos neutralizantes contra BoHV-1, BoHV-5 e BuHV. Todas as amostras clínicas foram coletadas em um matadouro na cidade de Pelotas, RS, Brasil. O DNA de BoHV-1 foi detectado em 61 (30,1%) gânglios, e os resultados da SN demonstraram que 27,6% dos animais apresentaram anticorpos contra, pelo menos, um dos vírus testados. O sequenciamento genômico e a análise de 14 amplicons confirmaram a presença do DNA do BoHV-1 nos tecidos analisados. Em resumo, os resultados indicam que o BoHV-1 está distribuído em rebanhos bubalinos provenientes da região Sul do Brasil. Entretanto, são necessárias investigações adicionais, no sentido de elucidar o papel exato dos búfalos na epidemiologia das infecções pelo BoHV-1.(AU)

Although bovines are natural hosts for BoHV-1, serologic studies in several countries have suggested that buffaloes (Bubalus bubalis) may be susceptible to BoHV-1 and other genetically related alphaherpesvirus. This study aimed to investigate the presence of BoHV-1 DNA in trigeminal ganglia from 202 buffaloes by a semi-nested PCR to amplify partially the glycoprotein D (gD) gene of BoHV-1. Additionally, 242 serum samples were tested by serum neutralization (SN) for the detection of antibodies against BoHV-1, BoHV-5 and BuHV. All clinical samples were collected in a slaughterhouse located in Pelotas, RS, Brazil. BoHV-1 DNA was detected in 61 (30.1%) of the samples and SN revealed 27.6% of the animals with neutralizing antibodies against at least one of the tested viruses. Nucleotide sequencing of 15 amplicons followed by BLAST analysis confirmed the presence of BoHV-1 DNA in the analyzed tissues. Taken together, these data indicate that BoHV-1 infection is distributed in buffaloes in southern Brazil. However, the role of buffaloes in the BoHV-1 epidemiology needs further investigation.(AU)

Infecção latente pelo herpesvírus bovino tipo 1 em búfalos (Bubalus bubalis) no Rio Grande do Sul / Bovine herpesvirus type 1 latent infection in buffalo (Bubalus bubalis) in Rio Grande do Sul

Apesar dos bovinos serem considerados os hospedeiros naturais do BoHV-1, estudos sorológicos têm sugerido que búfalos podem ser suscetíveis ao BoHV-1 e a outros alfa-herpesvírus geneticamente relacionados. O objetivo deste estudo foi detectar a presença de DNA viral de BoHV-1 em 202 amostras de gânglios trigêmeos de búfalos, pela técnica de semi-nested PCR, para detecção de um segmento do gene codificante da glicoproteína D (gD) do BoHV-1. Além disso, 242 amostras de soro foram analisadas pela técnica de soroneutralização (SN) para a detecção de anticorpos neutralizantes contra BoHV-1, BoHV-5 e BuHV. Todas as amostras clínicas foram coletadas em um matadouro na cidade de Pelotas, RS, Brasil. O DNA de BoHV-1 foi detectado em 61 (30,1%) gânglios, e os resultados da SN demonstraram que 27,6% dos animais apresentaram anticorpos contra, pelo menos, um dos vírus testados. O sequenciamento genômico e a análise de 14 amplicons confirmaram a presença do DNA do BoHV-1 nos tecidos analisados. Em resumo, os resultados indicam que o BoHV-1 está distribuído em rebanhos bubalinos provenientes da região Sul do Brasil. Entretanto, são necessárias investigações adicionais, no sentido de elucidar o papel exato dos búfalos na epidemiologia das infecções pelo BoHV-1.(AU)

Although bovines are natural hosts for BoHV-1, serologic studies in several countries have suggested that buffaloes (Bubalus bubalis) may be susceptible to BoHV-1 and other genetically related alphaherpesvirus. This study aimed to investigate the presence of BoHV-1 DNA in trigeminal ganglia from 202 buffaloes by a semi-nested PCR to amplify partially the glycoprotein D (gD) gene of BoHV-1. Additionally, 242 serum samples were tested by serum neutralization (SN) for the detection of antibodies against BoHV-1, BoHV-5 and BuHV. All clinical samples were collected in a slaughterhouse located in Pelotas, RS, Brazil. BoHV-1 DNA was detected in 61 (30.1%) of the samples and SN revealed 27.6% of the animals with neutralizing antibodies against at least one of the tested viruses. Nucleotide sequencing of 15 amplicons followed by BLAST analysis confirmed the presence of BoHV-1 DNA in the analyzed tissues. Taken together, these data indicate that BoHV-1 infection is distributed in buffaloes in southern Brazil. However, the role of buffaloes in the BoHV-1 epidemiology needs further investigation.(AU)

Serological response against bovine herpesvirus and bovine viral diarrhea virus induced by commercial vaccines in Holstein heifers

ABSTRACT: Vaccination is a strategy to the prevention and control of reproductive diseases caused by bovine viral diarrhea virus (BVDV) and bovine herpesvirus type 1 (BoHV-1), however the various compositions of commercial vaccines should be evaluated for their ability to induce protection mediated by antibodies. The objective of this research was to evaluate the production of specific neutralizing Abs against BVDV-1 and 2, and BoHV-1 induced by commercial vaccines composed by different adjuvants. Holstein heifers were vaccinated and distributed in three experimental groups: Group I (G1) was vaccinated with a commercial vaccine containing inactivated BVDV-1, BVDV-2 and BoHV-1 diluted in alum hydroxide as adjuvant (n=9); Group II (G2) was vaccinated with an product containing inactivated strains of BVDV-1, BVDV-2, BoHV-1 and BoHV-5 diluted in oil emulsion as adjuvant (n=10); Group III (G3) was vaccinated with a commercial vaccine containing inactivated BVDV-1 and BVDV-2, besides live modified thermosensitive BoHV-1, diluted in Quil A, amphigen and cholesterol (n=10); A control, non-vaccinated group (n=6) was mock vaccinated with saline. Heifers received two subcutaneous doses of 5mL of each commercial vaccine on the right side of the neck, with 21 days interval. Humoral immune response was assessed by the virus neutralization test (VN) against BVDV-1 (NADL and Singer strains), BVDV-2 (SV253 strain) and BoHV-1 (Los Angeles strain) in serum samples collected on vaccination days zero (D0), 21 (D21) and 42 (D42; 21 days after boosting). Neutralizing Abs against BVDV-1 NADL was detected only in D42, regardless of the vaccine used. Similar geometric mean titers (GMT) for BVDV-1 NADL were observed between G1 (log2=5.1) and G3 (log2=5.1). The seroconversion rate (%) was higher in G1 (78%) when compared to G2 (10%) and G3 (40%). For BVDV-1 Singer, it was also possible to detect Abs production in G1 (log2=5.8, 100% seroconversion rate) and G3 (log2=3.5, seroconversion rate = 60%), only after the booster dose (D42). Neutralizing Abs to BVDV-2 (SV253) were detected only in G3, observing 90% seroconversion associated with high titers of Abs (log2=6.7) after the 2nd dose of vaccine (D42). Heifers from G1 and G3 responded to BoHV-1 after the first dose (D21): G1 (log2=2.5, seroconversion rate = 67%) and G3 (log2=0.7, seroconversion rate = 80%). In D42, a higher magnitude response was observed in the heifers from G3 (log2=6.1, 100%) compared with G1 (log2=4.3, 100%) and G2 (log2=2.7, 60%). Based on the data obtained, it can be concluded that the commercial vaccine contained aluminum hydroxide (G1) was most effective in the induction of antibodies against BVDV-1. On the other hand, this vaccine did not induce the production of neutralizing Abs against BVDV-2. Only the heifers from G3 (Quil A, amphigen and cholesterol) generated neutralizing Abs against BVDV-2. The animals that received commercial vaccine containing oil emulsion as adjuvant (G2) had a weak/undetectable response against BVDV-1 and BVDV-2. The best protective response against BoHV-1 was observed in heifers vaccinated with the live modified thermosensitive virus.

RESUMO: A vacinação é utilizada como estratégia para a prevenção e controle das doenças reprodutivas, causadas pelos vírus da diarreia viral bovina (BVDV) e herpesvírus bovino tipo 1 (BoHV-1), entretanto, as diversas composições de vacinas comerciais devem ser avaliadas quanto a sua eficiência protetiva mediada por anticorpos (Acs). O objetivo desta pesquisa foi avaliar a produção Acs neutralizantes específicos para cepas de BVDV-1 e 2, e BoHV-1 induzida por vacinas comerciais contendo diferentes tipos de adjuvantes. Para tal, novilhas Holandesas foram vacinadas e distribuídas em três grupos experimentais: Grupo I (G1) foi vacinado com uma vacina comercial composta por cepas inativadas de BVDV-1, BVDV-2 e BoHV-1 diluídas em hidróxido de alumínio como adjuvante (n=9); Grupo II (G2) foi vacinado com produto contendo as cepas inativadas de BVDV-1, BVDV-2, BoHV-1 e BoHV-5 em uma emulsão oleosa como adjuvante (n=10); O Grupo III (G3) foi vacinado com uma vacina comercial contendo BVDV-1 e BVDV-2 inativado, além do BoHV-1 vivo modificado e termosensivel, diluídos em adjuvante contendo Quil A, Amphigem e colesterol (n=10); O Grupo Controle não vacinado (n=6) foi inoculado com solução salina. As novilhas receberam duas doses das respectivas vacinas ou solução salina (5mL), com intervalo de 21 dias, por via subcutânea, na tábua do pescoço do lado direito. A resposta imune humoral foi avaliada pelo teste de vírus neutralização (VN) contra o BVDV-1 (cepas NADL e Singer), BVDV-2 (cepa SV253) e BoHV-1 (cepa Los Angeles) em amostras de soro coletadas nos dias (D) de vacinação zero (D0), 21 dias após 1ª dose (D21)e 42 (D42; 21 dias após A 2ª dose). Os anticorpos neutralizantes contra o BVDV-1 NADL foram detectados apenas em D42, independentemente da vacina utilizada. Os títulos médios geométricos (GMT) de anticorpos foram semelhantes entre G1 (log2=5,1) e G3 (log2=5,1). A taxa de soroconversão foi maior no G1 (78%) quando comparado ao G2 (10%) e G3 (40%). Para o BVDV-1 Singer, somente após D42 foi observada a produção de Acs no G1 (log2=5,8; taxa de soroconversão de 100%) e G3 (log2=3,5; taxa de soroconversão = 60%). Os anticorpos contra BVDV-2 (SV253) foram detectados apenas nas novilhas do G3, observando-se taxa de soroconversão de 90% com altos títulos de anticorpos neutralizantes (log2=6,7) em D42. Novilhas G1 e G3 responderam ao BoHV-1 após a primeira dose (D21): G1 (log2=2,5; taxa de seroconversão = 67%) e G3 (log2=0,7; taxa de seroconversão = 80%). Em contrapartida, foi observada uma maior magnitude de resposta para as novilhas G3 (log2=6,1; 100%) em D42, em relação aos animais G1 (log2=4,3; 100%) e G2 (log2=2,7; 60%). Com base nos dados obtidos, foi possível concluir que a vacina composta por hidróxido de alumínio (G1) foi mais eficaz na produção de anticorpos contra o BVDV-1, em contrapartida esse produto não induziu anticorpos contra o BVDV-2. Apenas as novilhas do G3 (Quil A, amphigen e colesterol) geraram Acs neutralizantes contra o BVDV-2. Os animais que receberam a vacina em emulsão oleosa (G2) como adjuvante apresentaram uma resposta fraca/indetectável contra o BVDV-1 e BVDV-2. A melhor resposta protetiva contra o BoHV-1 foi observada nas novilhas vacinadas com a vacina viva modificada termosensível.

Serological response against bovine herpesvirus and bovine viral diarrhea virus induced by commercial vaccines in Holstein heifers / Resposta sorológica contra herpesvírus bovino e vírus da diarreia viral bovina induzida por vacinas comerciais em novilhas Holandesas

Vaccination is a strategy to the prevention and control of reproductive diseases caused by bovine viral diarrhea virus (BVDV) and bovine herpesvirus type 1 (BoHV-1), however the various compositions of commercial vaccines should be evaluated for their ability to induce protection mediated by antibodies. The objective of this research was to evaluate the production of specific neutralizing Abs against BVDV-1 and 2, and BoHV-1 induced by commercial vaccines composed by different adjuvants. Holstein heifers were vaccinated and distributed in three experimental groups: Group I (G1) was vaccinated with a commercial vaccine containing inactivated BVDV-1, BVDV-2 and BoHV-1 diluted in alum hydroxide as adjuvant (n=9); Group II (G2) was vaccinated with an product containing inactivated strains of BVDV-1, BVDV-2, BoHV-1 and BoHV-5 diluted in oil emulsion as adjuvant (n=10); Group III (G3) was vaccinated with a commercial vaccine containing inactivated BVDV-1 and BVDV-2, besides live modified thermosensitive BoHV-1, diluted in Quil A, amphigen and cholesterol (n=10); A control, non-vaccinated group (n=6) was mock vaccinated with saline. Heifers received two subcutaneous doses of 5mL of each commercial vaccine on the right side of the neck, with 21 days interval. Humoral immune response was assessed by the virus neutralization test (VN) against BVDV-1 (NADL and Singer strains), BVDV-2 (SV253 strain) and BoHV-1 (Los Angeles strain) in serum samples collected on vaccination days zero (D0), 21 (D21) and 42 (D42; 21 days after boosting). Neutralizing Abs against BVDV-1 NADL was detected only in D42, regardless of the vaccine used. Similar geometric mean titers (GMT) for BVDV-1 NADL were observed between G1 (log2=5.1) and G3 (log2=5.1). The seroconversion rate (%) was higher in G1 (78%) when compared to G2 (10%) and G3 (40%)...

A vacinação é utilizada como estratégia para a prevenção e controle das doenças reprodutivas, causadas pelos vírus da diarreia viral bovina (BVDV) e herpesvírus bovino tipo 1 (BoHV-1), entretanto, as diversas composições de vacinas comerciais devem ser avaliadas quanto a sua eficiência protetiva mediada por anticorpos (Acs). O objetivo desta pesquisa foi avaliar a produção Acs neutralizantes específicos para cepas de BVDV-1 e 2, e BoHV-1 induzida por vacinas comerciais contendo diferentes tipos de adjuvantes. Para tal, novilhas Holandesas foram vacinadas e distribuídas em três grupos experimentais: Grupo I (G1) foi vacinado com uma vacina comercial composta por cepas inativadas de BVDV-1, BVDV-2 e BoHV-1 diluídas em hidróxido de alumínio como adjuvante (n=9); Grupo II (G2) foi vacinado com produto contendo as cepas inativadas de BVDV-1, BVDV-2, BoHV-1 e BoHV-5 em uma emulsão oleosa como adjuvante (n=10); O Grupo III (G3) foi vacinado com uma vacina comercial contendo BVDV-1 e BVDV-2 inativado, além do BoHV-1 vivo modificado e termosensivel, diluídos em adjuvante contendo Quil A, Amphigem e colesterol (n=10); O Grupo Controle não vacinado (n=6) foi inoculado com solução salina. As novilhas receberam duas doses das respectivas vacinas ou solução salina (5mL), com intervalo de 21 dias, por via subcutânea, na tábua do pescoço do lado direito. A resposta imune humoral foi avaliada pelo teste de vírus neutralização (VN) contra o BVDV-1 (cepas NADL e Singer), BVDV-2 (cepa SV253) e BoHV-1 (cepa Los Angeles) em amostras de soro coletadas nos dias (D) de vacinação zero (D0), 21 dias após 1ª dose (D21)e 42 (D42; 21 dias após A 2ª dose). Os anticorpos neutralizantes contra o BVDV-1 NADL foram detectados apenas em D42, independentemente da vacina utilizada. Os títulos médios geométricos (GMT) de anticorpos foram semelhantes entre G1 (log2=5,1) e G3 (log2=5,1). A taxa de soroconversão foi maior no G1 (78%) quando comparado ao G2 (10%) e G3 (40%)...(AU)

Serological response against bovine herpesvirus and bovine viral diarrhea virus induced by commercial vaccines in Holstein heifers / Resposta sorológica contra herpesvírus bovino e vírus da diarreia viral bovina induzida por vacinas comerciais em novilhas Holandesas

Vaccination is a strategy to the prevention and control of reproductive diseases caused by bovine viral diarrhea virus (BVDV) and bovine herpesvirus type 1 (BoHV-1), however the various compositions of commercial vaccines should be evaluated for their ability to induce protection mediated by antibodies. The objective of this research was to evaluate the production of specific neutralizing Abs against BVDV-1 and 2, and BoHV-1 induced by commercial vaccines composed by different adjuvants. Holstein heifers were vaccinated and distributed in three experimental groups: Group I (G1) was vaccinated with a commercial vaccine containing inactivated BVDV-1, BVDV-2 and BoHV-1 diluted in alum hydroxide as adjuvant (n=9); Group II (G2) was vaccinated with an product containing inactivated strains of BVDV-1, BVDV-2, BoHV-1 and BoHV-5 diluted in oil emulsion as adjuvant (n=10); Group III (G3) was vaccinated with a commercial vaccine containing inactivated BVDV-1 and BVDV-2, besides live modified thermosensitive BoHV-1, diluted in Quil A, amphigen and cholesterol (n=10); A control, non-vaccinated group (n=6) was mock vaccinated with saline. Heifers received two subcutaneous doses of 5mL of each commercial vaccine on the right side of the neck, with 21 days interval. Humoral immune response was assessed by the virus neutralization test (VN) against BVDV-1 (NADL and Singer strains), BVDV-2 (SV253 strain) and BoHV-1 (Los Angeles strain) in serum samples collected on vaccination days zero (D0), 21 (D21) and 42 (D42; 21 days after boosting). Neutralizing Abs against BVDV-1 NADL was detected only in D42, regardless of the vaccine used. Similar geometric mean titers (GMT) for BVDV-1 NADL were observed between G1 (log2=5.1) and G3 (log2=5.1). The seroconversion rate (%) was higher in G1 (78%) when compared to G2 (10%) and G3 (40%). For BVDV-1 Singer, it was also possible to detect Abs production in G1 (log2=5.8, 100% seroconversion rate) and G3 (log2=3.5, seroconversion rate = 60%), only after the booster dose (D42). Neutralizing Abs to BVDV-2 (SV253) were detected only in G3, observing 90% seroconversion associated with high titers of Abs (log2=6.7) after the 2nd dose of vaccine (D42). Heifers from G1 and G3 responded to BoHV-1 after the first dose (D21): G1 (log2=2.5, seroconversion rate = 67%) and G3 (log2=0.7, seroconversion rate = 80%). In D42, a higher magnitude response was observed in the heifers from G3 (log2=6.1, 100%) compared with G1 (log2=4.3, 100%) and G2 (log2=2.7, 60%). Based on the data obtained, it can be concluded that the commercial vaccine contained aluminum hydroxide (G1) was most effective in the induction of antibodies against BVDV-1. On the other hand, this vaccine did not induce the production of neutralizing Abs against BVDV-2. Only the heifers from G3 (Quil A, amphigen and cholesterol) generated neutralizing Abs against BVDV-2. The animals that received commercial vaccine containing oil emulsion as adjuvant (G2) had a weak/undetectable response against BVDV-1 and BVDV-2. The best protective response against BoHV-1 was observed in heifers vaccinated with the live modified thermosensitive virus.(AU)

A vacinação é utilizada como estratégia para a prevenção e controle das doenças reprodutivas, causadas pelos vírus da diarreia viral bovina (BVDV) e herpesvírus bovino tipo 1 (BoHV-1), entretanto, as diversas composições de vacinas comerciais devem ser avaliadas quanto a sua eficiência protetiva mediada por anticorpos (Acs). O objetivo desta pesquisa foi avaliar a produção Acs neutralizantes específicos para cepas de BVDV-1 e 2, e BoHV-1 induzida por vacinas comerciais contendo diferentes tipos de adjuvantes. Para tal, novilhas Holandesas foram vacinadas e distribuídas em três grupos experimentais: Grupo I (G1) foi vacinado com uma vacina comercial composta por cepas inativadas de BVDV-1, BVDV-2 e BoHV-1 diluídas em hidróxido de alumínio como adjuvante (n=9); Grupo II (G2) foi vacinado com produto contendo as cepas inativadas de BVDV-1, BVDV-2, BoHV-1 e BoHV-5 em uma emulsão oleosa como adjuvante (n=10); O Grupo III (G3) foi vacinado com uma vacina comercial contendo BVDV-1 e BVDV-2 inativado, além do BoHV-1 vivo modificado e termosensivel, diluídos em adjuvante contendo Quil A, Amphigem e colesterol (n=10); O Grupo Controle não vacinado (n=6) foi inoculado com solução salina. As novilhas receberam duas doses das respectivas vacinas ou solução salina (5mL), com intervalo de 21 dias, por via subcutânea, na tábua do pescoço do lado direito. A resposta imune humoral foi avaliada pelo teste de vírus neutralização (VN) contra o BVDV-1 (cepas NADL e Singer), BVDV-2 (cepa SV253) e BoHV-1 (cepa Los Angeles) em amostras de soro coletadas nos dias (D) de vacinação zero (D0), 21 dias após 1ª dose (D21)e 42 (D42; 21 dias após A 2ª dose). Os anticorpos neutralizantes contra o BVDV-1 NADL foram detectados apenas em D42, independentemente da vacina utilizada. Os títulos médios geométricos (GMT) de anticorpos foram semelhantes entre G1 (log2=5,1) e G3 (log2=5,1). A taxa de soroconversão foi maior no G1 (78%) quando comparado ao G2 (10%) e G3 (40%). Para o BVDV-1 Singer, somente após D42 foi observada a produção de Acs no G1 (log2=5,8; taxa de soroconversão de 100%) e G3 (log2=3,5; taxa de soroconversão = 60%). Os anticorpos contra BVDV-2 (SV253) foram detectados apenas nas novilhas do G3, observando-se taxa de soroconversão de 90% com altos títulos de anticorpos neutralizantes (log2=6,7) em D42. Novilhas G1 e G3 responderam ao BoHV-1 após a primeira dose (D21): G1 (log2=2,5; taxa de seroconversão = 67%) e G3 (log2=0,7; taxa de seroconversão = 80%). Em contrapartida, foi observada uma maior magnitude de resposta para as novilhas G3 (log2=6,1; 100%) em D42, em relação aos animais G1 (log2=4,3; 100%) e G2 (log2=2,7; 60%). Com base nos dados obtidos, foi possível concluir que a vacina composta por hidróxido de alumínio (G1) foi mais eficaz na produção de anticorpos contra o BVDV-1, em contrapartida esse produto não induziu anticorpos contra o BVDV-2. Apenas as novilhas do G3 (Quil A, amphigen e colesterol) geraram Acs neutralizantes contra o BVDV-2. Os animais que receberam a vacina em emulsão oleosa (G2) como adjuvante apresentaram uma resposta fraca/indetectável contra o BVDV-1 e BVDV-2. A melhor resposta protetiva contra o BoHV-1 foi observada nas novilhas vacinadas com a vacina viva modificada termosensível.(AU)

Anticorpos policlonais para o imunodiagnóstico de vírus bovino / Polyclonal antibodies for the immunodiagnostic of bovine viruses

O objetivo do estudo foi produzir anticorpos policlonais para vírus bovino e testar a reatividade em imunoensaios como imunofluorescência, imunoperoxidase e slot blot. Como imunógeno utilizou-se cepas e/ou isolados dos herpesvírus bovino tipo 1, 2 e 5 (BoHV-1, BoHV-2 e BoHV-5), vírus da diarreia viral bovina (BVDV), vírus respiratório sincicial bovino (BRSV), vírus da língua azul (BTV) e vírus vaccina (VACV) amplificados em cultivo celular. Os coelhos foram imunizados em intervalos regulares e o soro hiperimune produzido foi utilizado como anticorpo primário nos imunoensaios. A diluição de trabalho para cada antissoro foi determinada por diluição seriada limitante e variaram entre 1:800 e 1:51.200. As maiores diluições foram observadas para imunoperoxidase, quando comparadas com a imunofluorescência e slot blot. Diluições menores que 1:800 foram associadas com aumento de reações inespecíficas. Os antissoros anti-BoHV-1, -BoHV-5, -BVDV e -BRSV reagiram frente a isolados heterólogos em ensaios de imunofluorescência e imunoperoxidase. Conclui-se que os antissoros produzidos possuem elevadas concentrações de anticorpos específicos para os vírus e é uma alternativa para a utilização em imunoensaios.

The objective of the study was to produce polyclonal antibodies to bovine viruses and to test the reactivity in immunoassays such as immunofluorescence, immunoperoxidase and slot blot. Bovine viral diarrhea virus (BVDV), bovine respiratory syncytial virus (BRSV), bovine herpesvirus type 1, 2 and 5 (BoHV-1, BoHV-2 and BoHV-5) blue tongue virus (BTV) and vaccinia virus (VACV) were amplified in cell culture and used to immunize rabbits. Animals were immunized at regular intervals and the hyper immune serum produced was used as primary antibody in the immunoassays. The working dilution for each antiserum was determined by limiting serial dilution and varied from 1: 800 to 1: 51,200. The highest dilutions were observed for immunoperoxidase, when compared with immunofluorescence and slot blot. Dilutions lower than 1:800 were associated with the presence of nonspecific reactions. Anti-BoHV-1, -BoHV-5, -BVDV and -BRSV antisera reacted against heterologous isolates in immunofluorescence and immunoperoxidase assays. It is concluded that the produced polyclonal antibodies have high concentrations of virus-specific antibodies and are an alternative for use in immunoassays.

Anticorpos policlonais para o imunodiagnóstico de vírus bovino / Polyclonal antibodies for the immunodiagnostic of bovine viruses

O objetivo do estudo foi produzir anticorpos policlonais para vírus bovino e testar a reatividade em imunoensaios como imunofluorescência, imunoperoxidase e slot blot. Como imunógeno utilizou-se cepas e/ou isolados dos herpesvírus bovino tipo 1, 2 e 5 (BoHV-1, BoHV-2 e BoHV-5), vírus da diarreia viral bovina (BVDV), vírus respiratório sincicial bovino (BRSV), vírus da língua azul (BTV) e vírus vaccina (VACV) amplificados em cultivo celular. Os coelhos foram imunizados em intervalos regulares e o soro hiperimune produzido foi utilizado como anticorpo primário nos imunoensaios. A diluição de trabalho para cada antissoro foi determinada por diluição seriada limitante e variaram entre 1:800 e 1:51.200. As maiores diluições foram observadas para imunoperoxidase, quando comparadas com a imunofluorescência e slot blot. Diluições menores que 1:800 foram associadas com aumento de reações inespecíficas. Os antissoros anti-BoHV-1, -BoHV-5, -BVDV e -BRSV reagiram frente a isolados heterólogos em ensaios de imunofluorescência e imunoperoxidase. Conclui-se que os antissoros produzidos possuem elevadas concentrações de anticorpos específicos para os vírus e é uma alternativa para a utilização em imunoensaios.(AU)

The objective of the study was to produce polyclonal antibodies to bovine viruses and to test the reactivity in immunoassays such as immunofluorescence, immunoperoxidase and slot blot. Bovine viral diarrhea virus (BVDV), bovine respiratory syncytial virus (BRSV), bovine herpesvirus type 1, 2 and 5 (BoHV-1, BoHV-2 and BoHV-5) blue tongue virus (BTV) and vaccinia virus (VACV) were amplified in cell culture and used to immunize rabbits. Animals were immunized at regular intervals and the hyper immune serum produced was used as primary antibody in the immunoassays. The working dilution for each antiserum was determined by limiting serial dilution and varied from 1: 800 to 1: 51,200. The highest dilutions were observed for immunoperoxidase, when compared with immunofluorescence and slot blot. Dilutions lower than 1:800 were associated with the presence of nonspecific reactions. Anti-BoHV-1, -BoHV-5, -BVDV and -BRSV antisera reacted against heterologous isolates in immunofluorescence and immunoperoxidase assays. It is concluded that the produced polyclonal antibodies have high concentrations of virus-specific antibodies and are an alternative for use in immunoassays.(AU)

Fatores de risco associados à infecção viral (BoHV-1 e BVDV) em rebanhos leiteiros mestiços com problemas reprodutivos, no município de Uberlândia, MG / Risk factors associated with viral infections (BoHV-1 and BVDV) in crossbreed dairy herds with reproductive failures, Uberlândia, MG

Com frequência, infecções virais são associadas a problemas da reprodução em rebanhos de bovinos de corte e leite de todo o mundo. Este estudo teve como objetivo avaliar variáveis de manejo que possam constituir fatores de risco da infecção por BoHV-1 e/ou por BVDV em rebanhos leiteiros com histórico de problemas da reprodução em vacas mestiças em manejo extensivo e sem histórico de vacinação prévia para o controle de IBR e BVD. Anticorpos neutralizantes anti-BoHV-1, anti-BVDV e para ambos os vírus simultaneamente foram identificados em 62,5% (165/264), 45,1% (119/264) e 31,4% (83/264), respectivamente, das amostras analisadas. Os fatores de risco associados à infecção por BoHV-1 foram rebanhos com número total de fêmeas superior a 100, presença de ordenha mecânica, não utilização de inseminação artificial na reprodução e a compra infrequente de animais. Para BVDV, os fatores de risco foram aptidão mista (leite/corte) do rebanho, presença de ordenha mecânica, ausência de quarentena para os animais recém-adquiridos, presença de piquete de parição e a não utilização de inseminação artificial. Para a infecção simultânea (BoHV-1/BVDV), a presença de ordenha mecânica aumentou o risco em 3,36 vezes, e o uso de inseminação artificial reduziu em 56% o risco de infecção nos rebanhos avaliados.(AU)

Viral infections are frequently associated with reproductive problems in dairy and beef cattle worldwide. The aim of this study was to verify managerial practices that may constitute risk factors associated with infection by BoHV-1 and/or BVDV in dairy herds with a history of reproductive disease in extensively reared dairy cows without a previous history of vaccination against IBR and BVD. Neutralizing antibodies anti-BoHV-1, anti-BVDV or both were detected in 62.5% (165/264), 45.1% (119/264), and 31.4% (83/264), respectively, in the samples analyzed. The risk factors associated with infection by BoHV-1 were herds with more than 100 cows, the presence of mechanical milking, the non-utilization of artificial insemination, and the infrequent acquisition of animals. Risk factors associated with BVDV were dual-purpose herds (milk and beef), these include the utilization of mechanical milking, absence of quarantine for newly acquired animals, the presence of picket calving, and the absence of artificial insemination. For simultaneous infections by both viruses (BoHV-1 and BVDV) the use of mechanical milking increased the chance of infection 3.36-fold while the use of artificial insemination reduced the risk of infection by 56% in these herds.(AU)

Fatores de risco associados à infecção viral (BoHV-1 e BVDV) em rebanhos leiteiros mestiços com problemas reprodutivos, no município de Uberlândia, MG / Risk factors associated with viral infections (BoHV-1 and BVDV) in crossbreed dairy herds with reproductive failures, Uberlândia, MG

Com frequência, infecções virais são associadas a problemas da reprodução em rebanhos de bovinos de corte e leite de todo o mundo. Este estudo teve como objetivo avaliar variáveis de manejo que possam constituir fatores de risco da infecção por BoHV-1 e/ou por BVDV em rebanhos leiteiros com histórico de problemas da reprodução em vacas mestiças em manejo extensivo e sem histórico de vacinação prévia para o controle de IBR e BVD. Anticorpos neutralizantes anti-BoHV-1, anti-BVDV e para ambos os vírus simultaneamente foram identificados em 62,5% (165/264), 45,1% (119/264) e 31,4% (83/264), respectivamente, das amostras analisadas. Os fatores de risco associados à infecção por BoHV-1 foram rebanhos com número total de fêmeas superior a 100, presença de ordenha mecânica, não utilização de inseminação artificial na reprodução e a compra infrequente de animais. Para BVDV, os fatores de risco foram aptidão mista (leite/corte) do rebanho, presença de ordenha mecânica, ausência de quarentena para os animais recém-adquiridos, presença de piquete de parição e a não utilização de inseminação artificial. Para a infecção simultânea (BoHV-1/BVDV), a presença de ordenha mecânica aumentou o risco em 3,36 vezes, e o uso de inseminação artificial reduziu em 56% o risco de infecção nos rebanhos avaliados.(AU)

Viral infections are frequently associated with reproductive problems in dairy and beef cattle worldwide. The aim of this study was to verify managerial practices that may constitute risk factors associated with infection by BoHV-1 and/or BVDV in dairy herds with a history of reproductive disease in extensively reared dairy cows without a previous history of vaccination against IBR and BVD. Neutralizing antibodies anti-BoHV-1, anti-BVDV or both were detected in 62.5% (165/264), 45.1% (119/264), and 31.4% (83/264), respectively, in the samples analyzed. The risk factors associated with infection by BoHV-1 were herds with more than 100 cows, the presence of mechanical milking, the non-utilization of artificial insemination, and the infrequent acquisition of animals. Risk factors associated with BVDV were dual-purpose herds (milk and beef), these include the utilization of mechanical milking, absence of quarantine for newly acquired animals, the presence of picket calving, and the absence of artificial insemination. For simultaneous infections by both viruses (BoHV-1 and BVDV) the use of mechanical milking increased the chance of infection 3.36-fold while the use of artificial insemination reduced the risk of infection by 56% in these herds.(AU)

Humoral immune response in beef heifers supplemented with mineral salt with or without the addition of rumen-protected methionine / Resposta imune humoral em novilhas de corte suplementadas com sal mineral com ou sem adição de metionina protegida da degradação ruminal

The aim of this study was to evaluate the humoral immune response in beef heifers supplemented with mineral supplementation with or without the addition of rumen-protected methionine. Forty-eight Brangus nulliparous heifers were distributed into four experimental groups with three replications each: control group without supplementation and without vaccination (CG01), control group without supplementation and with vaccination (CG02), treatment group with mineral supplementation and vaccination (TG01), and treatment group with mineral supplementation added with protected methionine and vaccination (TG02). The animals were maintained under native pasture with access to water ad libitum and the supplementation was available in high-consumption covered troughs. A supplementation period of 60 days prior to vaccinations was adopted until the first dose of a monovalent experimental vaccine inactivated for BoHV-5 was applied as a method of stimulating the immune response to evaluate the supplementation effects. After a 21-day interval, blood samples were collected to evaluate the humoral response and the second vaccine booster dose was applied following the 21-day interval for new blood samples in order to evaluate the immune response against the two-vaccination protocol. From the beginning of the experiment, the animals were weighed on the days −60, −10, 0, 21, and 42 in relation to the vaccine protocol. The experimental groups did not differ for body weight, mean daily weight gain, and body condition score after 102 days of supplementation regardless of the treatment. No animals belonging to CG01 seroconverted throughout the experiment, proving that there was no introduction of the agent (BoHV) in the studied area. When vaccinated animals were compared to the CG01 control group, statistically higher levels of neutralizing antibodies (P ≤ 0.0001) and IgG (P ≤ 0.0001) were verified 21 days after the second vaccine dose...(AU)

O objetivo deste estudo foi avaliar a resposta imune humoral em novilhas de corte suplementadas com suplemento mineral com ou sem adição de metionina protegida da degradação ruminal. Quarenta e oito novilhas nulíparas da raça Brangus, foram distribuídas em quatro grupos experimentais com três repetições cada: Grupo Controle sem suplementação e ausente de vacinação (GC01), Grupo Controle sem suplementação e com vacinação (GC02), Grupo Tratamento com suplementação mineral e com vacinação (GT01) e Grupo Tratamento com suplementação mineral adicionada de metionina protegida e com vacinação (GT02). Os animais foram mantidos em pastagem nativa com acesso à água ad libitum e a suplementação disponibilizada em cochos cobertos de alto consumo. Um período de suplementação prévio às vacinações de 60 dias foi adotado até a aplicação da primeira dose de uma vacina experimental monovalente inativada para BoHV-5, como método de estímulo da resposta imune para avaliar os efeitos da suplementação. Após 21 dias de intervalo, foram realizadas coletas de sangue para avaliação da resposta humoral e aplicada a segunda dose de reforço vacinal, seguindo o intervalo de 21 dias para novas coletas de sangue a fim de avaliar a resposta imune frente ao protocolo de duas vacinações. A partir do início do experimento, os animais foram pesados nos dias -60, -10, 0, 21 e 42 em relação ao protocolo vacinal. Os grupos experimentais, independente do tratamento, não diferiram quanto ao peso corporal, GMD e ECC após os 102 dias de suplementação. Nenhum animal pertencente ao GC01 soroconverteu ao longo do experimento, comprovando que não houve introdução do agente (BoHV) na área estudada. Quando os animais vacinados foram comparados ao grupo controle GC01, níveis estatisticamente superiores de anticorpos neutralizantes (P ≤ 0,0001) e de IgG (P ≤ 0,0001) foram observados 21 dias após a segunda dose vacinal...(AU)