Resumo
The reproductive results in sheep or goat flocks is consequence of multiple factors, including the interactions between males, and how these interactions modify the sexual behavior of other males. The present review summarizes information on the dominance relationships between rams or bucks, and how these relationships affect their reproductive outcomes. Dominance relationships affect the access of some males to estrous females, influencing the total distribution of sperm among the flock. The review provides information on how dominance relationships are established during the development period, and also after mixing previously unknown males. The period of relationships establishment is extremely stressful for rams and bucks, and destabilize the social relationships, affecting even sperm quality. Dominant and subordinate males display different strategies to impregnate females, but females also participate in mate choice decisions with proceptive behaviors, selecting subordinate males, favoring the maintenance of genetic diversity. Although a high proportion of ewes that lamb twins may be impregnated by different males, there is still scarce information on how these interactions affect the final distribution of paternities. Overall, although males interactions have important consequences on reproduction and genetic improvement, there is still the need for more knowledge on the practical consequences of social interactions.
De maneira geral, os resultados reprodutivos do rebanho são consequência de múltiplos fatores, incluindo o efeito das interações entre os machos sobre o comportamento sexual. A presente revisão resume informações sobre como as relações de dominância entre os machos afetam os resultados reprodutivos em rebanhos ovinos e caprinos. As relações de dominância modificam o acesso de machos a fêmeas no cio, e consequentemente a distribuição total de espermatozoides no rebanho. A presente revisão fornece informações sobre como as relações de dominância são estabelecidas durante o período de crescimento e após a reunião de machos previamente desconhecidos. O período em que essas relações se estabelecem é extremamente estressante para carneiros e bodes, porque além de desestabilizar as relações sociais, afeta a qualidade dos espermatozoides. Os machos dominantes e subordinados apresentam estratégias diferentes para emprenhar as fêmeas. As fêmeas também participam das decisões de escolha do parceiro com comportamentos proceptivos, selecionando machos subordinados e favorecendo a manutenção da diversidade genética. Embora uma grande proporção de ovelhas com gestação gemelar possam ter sido fecundadas por machos diferentes, ainda há poucas informações sobre como isso afeta a distribuição final das paternidades. Em conclusão, embora as interações dos machos tenham consequências importantes na reprodução e no melhoramento genético, ainda existe a necessidade da realização de mais pesquisas sobre as consequências práticas das interações sociais em pequenos ruminantes.
Assuntos
Animais , Comportamento Sexual Animal , Libido , OvinosResumo
Objetivou-se avaliar o efeito do gradiente de Iodixanol (Red Cushion®, RC) como método deproteção espermática durante a centrifugação (CE) do sêmen caprino destinado à criopreservação. Foramrealizadas colheitas de sêmen de cinco reprodutores caprinos da raça Anglo Nubiana (N= cincoejaculados/bode). Os ejaculados foram divididos em três grupos experimentais: GC (Controle); G1 (CEutilizado 1ml de RC) e G2 (foi utilizado 0,5mL de RC, misturado ao pellet espermático após a CE). Asamostras foram centrifugadas, diluídas, envasadas e criopreservadas. A cinética espermática foi avaliada porsistema computadorizado de análise (CASA) após a descongelação e pós-teste de termorresistência (TTR), efoi avaliada a integridade de membrana plasmática e acrossomal (MPAI, %). Não foram observadasdiferenças para a motilidade total (p=0,1849) avaliada pós-descongelação (GC=45,1%, G1=51,86% eG2=55,28%) ou pós-TTR (GC=10,32%, G1=11,44% e G2=13,16%), bem como para nenhum outroparâmetro cinético avaliado. Também não foram encontradas diferenças para a MPAI (GC=43,70% ±16,60; G1=36,68 ± 17,40; G2=41,72 ± 14,76; p=0,2523). Conclui-se que a utilização de Red Cushion®não promove nenhum benefício à manutenção da cinética e integridade de espermatozoides caprinossubmetidos a centrifugação previamente ao processo de criopreservação do sêmen.(AU)
The aim of this study was to evaluate the efficacy of iodixanol gradient centrifugation (RedCushion®, RC) as a method of protection of goat semen submitted to centrifugation previously tocryopreservation process. Semen were collected from five Anglo Nubian goats (n = five ejaculates/goat).The ejaculates were divided into three experimental groups: GC (Control; conventional centrifugation);G1 (centrifugation using 1ml RC) and G2 (centrifugation using 0.5 mL RC, mixed to sperm pellet beforethe cryopreservation). Samples were centrifuged (CE) at 600xg for 10 minutes, diluted, packed andcryopreserved. Sperm kinetics were evaluated using a computer assisted semen analysis (CASA) afterthawing and after thermoresistance test (TTR), and the integrity of the plasma and acrosomal membranewas evaluated (MPAI, %). No differences were observed for total motility (P =0.1849) assessed afterthawing (GC=45.1%, G1=51.86% and G2=55.28%) or post-TTR (GC=10.32%, G1=11.44% andG2=13.16%), as well as for the other kinetic parameters analyzed. Furthermore, no differences for MPAI(CG =43.70% ± 16.60; G1=36.68 ± 17.40; G2=41.72 ± 14.76; P=0.2523) were found comparing thedifferent groups. In conclusion, Red Cushion® was not able to improve the kinetics and integrity of thegoat semen submitted to the cryopreservation process.(AU)
Assuntos
Animais , Criopreservação/veterinária , Ruminantes/fisiologia , Centrifugação , Preservação do Sêmen , CinéticaResumo
Objetivou-se avaliar o efeito do gradiente de Iodixanol (Red Cushion®, RC) como método deproteção espermática durante a centrifugação (CE) do sêmen caprino destinado à criopreservação. Foramrealizadas colheitas de sêmen de cinco reprodutores caprinos da raça Anglo Nubiana (N= cincoejaculados/bode). Os ejaculados foram divididos em três grupos experimentais: GC (Controle); G1 (CEutilizado 1ml de RC) e G2 (foi utilizado 0,5mL de RC, misturado ao pellet espermático após a CE). Asamostras foram centrifugadas, diluídas, envasadas e criopreservadas. A cinética espermática foi avaliada porsistema computadorizado de análise (CASA) após a descongelação e pós-teste de termorresistência (TTR), efoi avaliada a integridade de membrana plasmática e acrossomal (MPAI, %). Não foram observadasdiferenças para a motilidade total (p=0,1849) avaliada pós-descongelação (GC=45,1%, G1=51,86% eG2=55,28%) ou pós-TTR (GC=10,32%, G1=11,44% e G2=13,16%), bem como para nenhum outroparâmetro cinético avaliado. Também não foram encontradas diferenças para a MPAI (GC=43,70% ±16,60; G1=36,68 ± 17,40; G2=41,72 ± 14,76; p=0,2523). Conclui-se que a utilização de Red Cushion®não promove nenhum benefício à manutenção da cinética e integridade de espermatozoides caprinossubmetidos a centrifugação previamente ao processo de criopreservação do sêmen.
The aim of this study was to evaluate the efficacy of iodixanol gradient centrifugation (RedCushion®, RC) as a method of protection of goat semen submitted to centrifugation previously tocryopreservation process. Semen were collected from five Anglo Nubian goats (n = five ejaculates/goat).The ejaculates were divided into three experimental groups: GC (Control; conventional centrifugation);G1 (centrifugation using 1ml RC) and G2 (centrifugation using 0.5 mL RC, mixed to sperm pellet beforethe cryopreservation). Samples were centrifuged (CE) at 600xg for 10 minutes, diluted, packed andcryopreserved. Sperm kinetics were evaluated using a computer assisted semen analysis (CASA) afterthawing and after thermoresistance test (TTR), and the integrity of the plasma and acrosomal membranewas evaluated (MPAI, %). No differences were observed for total motility (P =0.1849) assessed afterthawing (GC=45.1%, G1=51.86% and G2=55.28%) or post-TTR (GC=10.32%, G1=11.44% andG2=13.16%), as well as for the other kinetic parameters analyzed. Furthermore, no differences for MPAI(CG =43.70% ± 16.60; G1=36.68 ± 17.40; G2=41.72 ± 14.76; P=0.2523) were found comparing thedifferent groups. In conclusion, Red Cushion® was not able to improve the kinetics and integrity of thegoat semen submitted to the cryopreservation process.
Assuntos
Animais , Centrifugação , Criopreservação/veterinária , Preservação do Sêmen , Ruminantes/fisiologia , CinéticaResumo
This study aimed to determine the effects of resveratrol in the trisaminomethane (TRIS)-egg yolk extender and its optimal inclusion level for goat semen cryopreservation. Five ejaculates of three Anglo Nubian goats were used, each divided into four 200 µL aliquots for use in four treatments: 0.00 (control), 0.04, 0.08 and 0.12 mg mL-¹ resveratrol in the TRIS-egg yolk extender. We evaluated progressive sperm motility and sperm vigor post-dilution, post-cooling, and post thawing; membrane integrity (HOST); and acrosomal integrity and performed a slow thermoresistance test (STT). The data were submitted to a regression analysis at a 5% probability. There was no difference in progressive motility or sperm vigor in the post-dilution (89.5, 89.0, 88.7 and 88.3, and 4.9, 5.0, 4.9, and 4.9) or post-cooling (81.0, 82.0, 83.0, and 78.3; and 4.3, 4.3, 4.2, and 4.2) experiments (P > 0.05), or in the complementary acrosomal integrity test (42.0, 47.4, 42.2 and 38.2) (P > 0.05). However, the motility and vigor parameters decreased linearly in the post-thaw phase, as well as during the 2 hours of incubation on STT (P < 0.05). These factors increased quadratically when resveratrol was added to HOST, to an optimal level of 0.039 mg mL-¹ resveratrol for a plasma membrane integrity of 52.55% (P < 0.05). The inclusion of resveratrol was effective in maintaining sperm viability; in particular, it was effective in maintaining plasmatic membrane integrity during the cryopreservation process up to 0.039 mg mL-1, meaning that it could be an alternative to conventionally used seminal extenders in goats.
O objetivo deste estudo foi determinar os efeitos e o melhor nível de inclusão de resveratrol em meio diluidor TRIS gema de ovo para criopreservação de sêmen caprino. Foram utilizados cinco ejaculados de três bodes da raça Anglo Nubiana. Cada ejaculado foi dividido em quatro alíquotas de 200 µL, compondo quatro tratamentos: 0,00 (controle); 0,04; 0,08 e 0,12mg mL-¹ de resveratrol no diluidor TRIS gema de ovo. Foram avaliadas a motilidade espermática progressiva e o vigor espermático pós diluição, pós-resfriamento e pós-descongelamento; integridade de membrana (HOST); integridade acrossomal e teste de termorresistência lento (TTR). Os dados foram submetidos à análise de regressão a 5% de probabilidade. Não houve diferença para a motilidade progressiva e o vigor espermático, respectivamente, na pós-diluição (89,5; 89,0; 88,7 e 88,3) e (4,9; 5,0; 4,9 e 4,9) e pós-resfriamento (81,0; 82,0; 83,0 e 78,3) e (4,3; 4,3; 4,2 e 4,2) (P 0,05). No entanto, os parâmetros motilidade e vigor reduziram linearmente no pós-descongelamento, assim como durante as 2 horas de incubação no TTR (P < 0,05). Houve efeito quadrático com a inclusão de resveratrol para HOST, apresentando um nível ótimo de 0,039mg mL-¹ de resveratrol para integridade de membrana plasmática de 52,55% (P <0,05). A inclusão de resveratrol foi eficiente na manutenção da viabilidade espermática; em especial, foi eficiente na manutenção da integridade da membrana plasmática durante o processo de criopreservação até o nível de 0,039mg mL-¹, podendo ser uma alternativa na composição dos diluidores seminais de caprinos.
Assuntos
Masculino , Animais , Antioxidantes/administração & dosagem , Criopreservação/veterinária , Espermatozoides/efeitos dos fármacos , Estresse Oxidativo/efeitos dos fármacos , Estresse Oxidativo/genética , Resveratrol/administração & dosagem , Resveratrol/efeitos adversos , Ruminantes , Motilidade dos EspermatozoidesResumo
This study aimed to determine the effects of resveratrol in the trisaminomethane (TRIS)-egg yolk extender and its optimal inclusion level for goat semen cryopreservation. Five ejaculates of three Anglo Nubian goats were used, each divided into four 200 µL aliquots for use in four treatments: 0.00 (control), 0.04, 0.08 and 0.12 mg mL-¹ resveratrol in the TRIS-egg yolk extender. We evaluated progressive sperm motility and sperm vigor post-dilution, post-cooling, and post thawing; membrane integrity (HOST); and acrosomal integrity and performed a slow thermoresistance test (STT). The data were submitted to a regression analysis at a 5% probability. There was no difference in progressive motility or sperm vigor in the post-dilution (89.5, 89.0, 88.7 and 88.3, and 4.9, 5.0, 4.9, and 4.9) or post-cooling (81.0, 82.0, 83.0, and 78.3; and 4.3, 4.3, 4.2, and 4.2) experiments (P > 0.05), or in the complementary acrosomal integrity test (42.0, 47.4, 42.2 and 38.2) (P > 0.05). However, the motility and vigor parameters decreased linearly in the post-thaw phase, as well as during the 2 hours of incubation on STT (P < 0.05). These factors increased quadratically when resveratrol was added to HOST, to an optimal level of 0.039 mg mL-¹ resveratrol for a plasma membrane integrity of 52.55% (P < 0.05). The inclusion of resveratrol was effective in maintaining sperm viability; in particular, it was effective in maintaining plasmatic membrane integrity during the cryopreservation process up to 0.039 mg mL-1, meaning that it could be an alternative to conventionally used seminal extenders in goats.(AU)
O objetivo deste estudo foi determinar os efeitos e o melhor nível de inclusão de resveratrol em meio diluidor TRIS gema de ovo para criopreservação de sêmen caprino. Foram utilizados cinco ejaculados de três bodes da raça Anglo Nubiana. Cada ejaculado foi dividido em quatro alíquotas de 200 µL, compondo quatro tratamentos: 0,00 (controle); 0,04; 0,08 e 0,12mg mL-¹ de resveratrol no diluidor TRIS gema de ovo. Foram avaliadas a motilidade espermática progressiva e o vigor espermático pós diluição, pós-resfriamento e pós-descongelamento; integridade de membrana (HOST); integridade acrossomal e teste de termorresistência lento (TTR). Os dados foram submetidos à análise de regressão a 5% de probabilidade. Não houve diferença para a motilidade progressiva e o vigor espermático, respectivamente, na pós-diluição (89,5; 89,0; 88,7 e 88,3) e (4,9; 5,0; 4,9 e 4,9) e pós-resfriamento (81,0; 82,0; 83,0 e 78,3) e (4,3; 4,3; 4,2 e 4,2) (P < 0,05), assim como para o teste complementar integridade acrossomal (42,0; 47,4; 42,2 e 38,2) (P > 0,05). No entanto, os parâmetros motilidade e vigor reduziram linearmente no pós-descongelamento, assim como durante as 2 horas de incubação no TTR (P < 0,05). Houve efeito quadrático com a inclusão de resveratrol para HOST, apresentando um nível ótimo de 0,039mg mL-¹ de resveratrol para integridade de membrana plasmática de 52,55% (P <0,05). A inclusão de resveratrol foi eficiente na manutenção da viabilidade espermática; em especial, foi eficiente na manutenção da integridade da membrana plasmática durante o processo de criopreservação até o nível de 0,039mg mL-¹, podendo ser uma alternativa na composição dos diluidores seminais de caprinos.(AU)
Assuntos
Animais , Masculino , Resveratrol/administração & dosagem , Resveratrol/efeitos adversos , Ruminantes , Espermatozoides/efeitos dos fármacos , Estresse Oxidativo/efeitos dos fármacos , Estresse Oxidativo/genética , Antioxidantes/administração & dosagem , Criopreservação/veterinária , Motilidade dos EspermatozoidesResumo
O objetivo do estudo foi avaliar a influência da bipartição escrotal sobre a capacidade de termorregulação do testículo caprino, testando-se a hipótese de que animais com bipartição possuem menor temperatura testicular, maior capacidade hemodinâmica local, maior número de células germinativas e maior produção espermática. Foram selecionados 8 bodes, divididos de acordo com a conformação escrotal: G1 (n=4) animais com até 50% de bipartição; GC (n=4) grupo controle, sem bipartição. Todos foram submetidos à mensuração da temperatura retal, termografia corporal e escrotal. Exames ultrassonográficos Doppler foram conduzidos no plexo pampiniforme. Adicionalmente os animais foram submetidos à punção biópsia aspirativa testicular (PBA) e 2 ejaculados de cada reprodutor foram colhidos para avaliação espermática. Não foram observadas diferenças para os resultados da PBA, da termografia escrotal e do espermograma comparando-se os dois grupos. Na avaliação hemodinâmica apenas o IR (0,53a+-0,11 e 0,46b+- 0,06; p=0,0108) foi superior para os animais bipartidos. Conclui-se que caprinos que possuem até 50% de bipartição escrotal possuem qualidade espermática semelhante a animais não bipartidos, não possuem menor temperatura testicular e maior número de células germinativas primordiais como se supunha na hipótese inicial da pesquisa.(AU)
The objective of this study was to evaluate the influence of the bipartition of the scrotum on the thermoregulatory capacity of the goat testicle, testing the hypothesis that bucks with bipartition of the scrotum have minor testicular temperature, greater local hemodynamic capacity, more germ cells and higher sperm production capacity. Eight male goats were used and divided according to the conformation of the scrotum: G1 (n=4) animals with scrotal bipartition below 50%; CG (n=4) control group without scrotal bipartition. All the animals were submitted to the evaluation of rectal temperature and scrotal and body surface thermography. Doppler ultrasonography held at the spermatic cord region was performed. In addition, the animals underwent fine needle aspiration testicular cytology (FNAC) and two ejaculates from each buck were collected. There were no significant differences between G1 and GC for FNAC and for testicular thermography. On the hemodynamics evaluation the IR was higher for the animals with scrotal bipartition than to control group (0.53a+-0.11 and 0.46b+- 0.06; P=0.0108). In conclusion, goats up to 50% of the scrotum bipartition have the same sperm quality than the control group, and the bipartition was not related to more efficiency on the thermoregulation process or number of testicular primordial cells in this study.(AU)
El objetivo del estudio fue evaluar la influencia de la bipartición escrotal sobre la capacidad de termorregulación del testículo caprino, probándose la hipótesis de que animales con bipartición tienen menor temperatura testicular, mayor capacidad hemodinámica local, mayor número de células germinativas y mayor producción espermática. Se seleccionaron 8 machos, divididos de acuerdo con la conformación escrotal: G1 (n=4) animales con hasta 50% de bipartición; GC (n=4) grupo de control, sin bipartición. Todos ellos fueron sometidos a la medición de la temperatura rectal, termografía corporal y escrotal. Los exámenes ultrasonográficos Doppler se realizaron en el plexo pampiniforme. Adicionalmente los animales fueron sometidos a la punción biopsia aspirativa testicular (PBA) y 2 eyaculaciones de cada reproductor fueron cosechados para evaluación espermática. No se observaron diferencias para los resultados de la PBA, de la termografía escrotal y del espermograma comparando los dos grupos. En la evaluación hemodinámica sólo el IR (0,53a +- 0,11 y 0,46b +- 0,06, p = 0,0108) fue superior para los animales bipartidos. Se concluye que los caprinos que tieren hasta 50% de bipartición escrotal tienen calidad espermática similares a animales no bipartidos, no tienen menor temperatura testicular y mayor número de células germinativas primordiales como se suponía en la hipótesis inicial de la investigación.(AU)
Assuntos
Animais , Masculino , Escroto/anormalidades , Escroto/fisiologia , Regulação da Temperatura Corporal , Hemodinâmica , Ruminantes/fisiologia , Termografia/veterinária , Ultrassonografia/veterináriaResumo
O objetivo do estudo foi avaliar a influência da bipartição escrotal sobre a capacidade de termorregulação do testículo caprino, testando-se a hipótese de que animais com bipartição possuem menor temperatura testicular, maior capacidade hemodinâmica local, maior número de células germinativas e maior produção espermática. Foram selecionados 8 bodes, divididos de acordo com a conformação escrotal: G1 (n=4) animais com até 50% de bipartição; GC (n=4) grupo controle, sem bipartição. Todos foram submetidos à mensuração da temperatura retal, termografia corporal e escrotal. Exames ultrassonográficos Doppler foram conduzidos no plexo pampiniforme. Adicionalmente os animais foram submetidos à punção biópsia aspirativa testicular (PBA) e 2 ejaculados de cada reprodutor foram colhidos para avaliação espermática. Não foram observadas diferenças para os resultados da PBA, da termografia escrotal e do espermograma comparando-se os dois grupos. Na avaliação hemodinâmica apenas o IR (0,53a+-0,11 e 0,46b+- 0,06; p=0,0108) foi superior para os animais bipartidos. Conclui-se que caprinos que possuem até 50% de bipartição escrotal possuem qualidade espermática semelhante a animais não bipartidos, não possuem menor temperatura testicular e maior número de células germinativas primordiais como se supunha na hipótese inicial da pesquisa.
The objective of this study was to evaluate the influence of the bipartition of the scrotum on the thermoregulatory capacity of the goat testicle, testing the hypothesis that bucks with bipartition of the scrotum have minor testicular temperature, greater local hemodynamic capacity, more germ cells and higher sperm production capacity. Eight male goats were used and divided according to the conformation of the scrotum: G1 (n=4) animals with scrotal bipartition below 50%; CG (n=4) control group without scrotal bipartition. All the animals were submitted to the evaluation of rectal temperature and scrotal and body surface thermography. Doppler ultrasonography held at the spermatic cord region was performed. In addition, the animals underwent fine needle aspiration testicular cytology (FNAC) and two ejaculates from each buck were collected. There were no significant differences between G1 and GC for FNAC and for testicular thermography. On the hemodynamics evaluation the IR was higher for the animals with scrotal bipartition than to control group (0.53a+-0.11 and 0.46b+- 0.06; P=0.0108). In conclusion, goats up to 50% of the scrotum bipartition have the same sperm quality than the control group, and the bipartition was not related to more efficiency on the thermoregulation process or number of testicular primordial cells in this study.
El objetivo del estudio fue evaluar la influencia de la bipartición escrotal sobre la capacidad de termorregulación del testículo caprino, probándose la hipótesis de que animales con bipartición tienen menor temperatura testicular, mayor capacidad hemodinámica local, mayor número de células germinativas y mayor producción espermática. Se seleccionaron 8 machos, divididos de acuerdo con la conformación escrotal: G1 (n=4) animales con hasta 50% de bipartición; GC (n=4) grupo de control, sin bipartición. Todos ellos fueron sometidos a la medición de la temperatura rectal, termografía corporal y escrotal. Los exámenes ultrasonográficos Doppler se realizaron en el plexo pampiniforme. Adicionalmente los animales fueron sometidos a la punción biopsia aspirativa testicular (PBA) y 2 eyaculaciones de cada reproductor fueron cosechados para evaluación espermática. No se observaron diferencias para los resultados de la PBA, de la termografía escrotal y del espermograma comparando los dos grupos. En la evaluación hemodinámica sólo el IR (0,53a +- 0,11 y 0,46b +- 0,06, p = 0,0108) fue superior para los animales bipartidos. Se concluye que los caprinos que tieren hasta 50% de bipartición escrotal tienen calidad espermática similares a animales no bipartidos, no tienen menor temperatura testicular y mayor número de células germinativas primordiales como se suponía en la hipótesis inicial de la investigación.
Assuntos
Masculino , Animais , Escroto/anormalidades , Escroto/fisiologia , Hemodinâmica , Regulação da Temperatura Corporal , Ruminantes/fisiologia , Termografia/veterinária , Ultrassonografia/veterináriaResumo
Objetivou-se determinar o efeito e o melhor nível de inclusão de ácido ascórbico em meio diluidor TRIS-Gema para criopreservação de sêmen caprino. Foram utilizados cinco ejaculados de três bodes da raça Anglo Nubiana. Cada ejaculado foi dividido em quatro alíquotas de 200 μL, compondo quatro tratamentos: um sem adição de ácido ascórbico (controle) e os demais com 0,0528; 0,1056 e 0,1584mg/mL de ácido ascórbico no diluidor TRIS-Gema. Avaliaram-se motilidade espermática progressiva e vigor espermático pós-diluição, pós-resfriamento e pós-descongelamento; integridade de membrana (HOST); integridade acrossomal e teste de termorresistência lento (TTR). Os dados foram submetidos à Análise de Regressão a 5% de probabilidade. Não houve diferença para motilidade progressiva e para vigor espermático, repectivamente, na pós-diluição; pós-resfriamento e pós-descongelamento, assim como para os testes complementares HOST e após 120 minutos do TTR, para motilidade e vigor, no pós-descongelamento (P>0,05). Houve comportamento quadrático com a inclusão do ácido ascórbico para integridade acrossomal (61,58%), com nível ótimo de 0,1006mg/mL de ácido ascórbico (P<0,05). A inclusão de 0,1006mg/mL de ácido ascórbico no diluidor TRIS-Gema melhorou a integridade acrossomal durante o processo de criopreservação, podendo ser uma alternativa na composição dos diluidores seminais caprinos.
The objective of this study was to determine the optimal inclusion level of ascorbic acid in TRIS-yolk extenders for cryopreservation of goat semen. We used five ejaculates of three Anglo Nubian goats. Semen from each animal was divided into four 200μL aliquots, composing four treatments: no addition of ascorbic acid (control) and 0.0528, 0.1056, and 0.1584mg/mL of ascorbic acid in TRIS-egg yolk. We evaluated motility and sperm vigor after dilution, post-cooling, and post-thawing; membrane integrity (HOST); acrosomal integrity, and slow thermoresistance test (TRT). Data were subjected to regression analysis at 5% probability. There was no difference for the progressive motility and sperm vigor, respectively, in the post-dilution, after cooling and post-thawing, as well as the additional tests HOST and after 120 minutes of TRT, for motility and force, respectively, in post-thawing (P>0.05). There was a quadratic effect with the addition of ascorbic acid to the acrosome integrity parameter, presenting a great maximum level of 0.1006 mg/mL ascorbic acid for acrosome integrity of 61.58% (P<0.05). The addition of ascorbic acid was effective in maintaining sperm viability, especially acrosome integrity during the cryopreservation process until the level of 0.1006 mg/mL, and it may be an alternative composition of seminal extenders for goats.
Assuntos
Animais , Criopreservação/veterinária , Preservação do Sêmen/veterinária , Ruminantes , Ácido Ascórbico/administração & dosagem , Ácido Ascórbico/efeitos adversos , Antioxidantes/efeitos adversos , Estresse OxidativoResumo
Objetivou-se determinar o efeito e o melhor nível de inclusão de ácido ascórbico em meio diluidor TRIS-Gema para criopreservação de sêmen caprino. Foram utilizados cinco ejaculados de três bodes da raça Anglo Nubiana. Cada ejaculado foi dividido em quatro alíquotas de 200 μL, compondo quatro tratamentos: um sem adição de ácido ascórbico (controle) e os demais com 0,0528; 0,1056 e 0,1584mg/mL de ácido ascórbico no diluidor TRIS-Gema. Avaliaram-se motilidade espermática progressiva e vigor espermático pós-diluição, pós-resfriamento e pós-descongelamento; integridade de membrana (HOST); integridade acrossomal e teste de termorresistência lento (TTR). Os dados foram submetidos à Análise de Regressão a 5% de probabilidade. Não houve diferença para motilidade progressiva e para vigor espermático, repectivamente, na pós-diluição; pós-resfriamento e pós-descongelamento, assim como para os testes complementares HOST e após 120 minutos do TTR, para motilidade e vigor, no pós-descongelamento (P>0,05). Houve comportamento quadrático com a inclusão do ácido ascórbico para integridade acrossomal (61,58%), com nível ótimo de 0,1006mg/mL de ácido ascórbico (P<0,05). A inclusão de 0,1006mg/mL de ácido ascórbico no diluidor TRIS-Gema melhorou a integridade acrossomal durante o processo de criopreservação, podendo ser uma alternativa na composição dos diluidores seminais caprinos.(AU)
The objective of this study was to determine the optimal inclusion level of ascorbic acid in TRIS-yolk extenders for cryopreservation of goat semen. We used five ejaculates of three Anglo Nubian goats. Semen from each animal was divided into four 200μL aliquots, composing four treatments: no addition of ascorbic acid (control) and 0.0528, 0.1056, and 0.1584mg/mL of ascorbic acid in TRIS-egg yolk. We evaluated motility and sperm vigor after dilution, post-cooling, and post-thawing; membrane integrity (HOST); acrosomal integrity, and slow thermoresistance test (TRT). Data were subjected to regression analysis at 5% probability. There was no difference for the progressive motility and sperm vigor, respectively, in the post-dilution, after cooling and post-thawing, as well as the additional tests HOST and after 120 minutes of TRT, for motility and force, respectively, in post-thawing (P>0.05). There was a quadratic effect with the addition of ascorbic acid to the acrosome integrity parameter, presenting a great maximum level of 0.1006 mg/mL ascorbic acid for acrosome integrity of 61.58% (P<0.05). The addition of ascorbic acid was effective in maintaining sperm viability, especially acrosome integrity during the cryopreservation process until the level of 0.1006 mg/mL, and it may be an alternative composition of seminal extenders for goats.(AU)
Assuntos
Animais , Criopreservação/veterinária , Preservação do Sêmen/veterinária , Ruminantes , Ácido Ascórbico/administração & dosagem , Ácido Ascórbico/efeitos adversos , Antioxidantes/efeitos adversos , Estresse OxidativoResumo
Testicular degeneration is a multifactorial process increasing the concentration of prostaglandins in seminal plasma. Both increase and decrease of these hormones tend to promote loss of seminal quality. Flunixin meglumine is a potent anti-inflammatory drug capable of modulating the production of prostaglandins and is widely used in female reproduction. However, it is rarely used in males with the same objective. Therefore, this study aimed to evaluate the effects of this drug on seminal quality of male lambs and goats with spermatic characteristics unfavorable for reproduction. To this end, a total of 15 breeding animals were evaluated, of which six goats and four sheep with poor seminal quality were selected according to the criteria established by the Brazilian College of Animal Reproduction (CBRA). Three semen samples were collected from each animal. Then, the flunixin meglumine treatment was initiated and ejaculates were collected at two different periods after the drug was administered (from day 21 until day 35 and from day 49 to day 63). Macroscopic and microscopic parameters were assessed in semen samples and scrotal circumference and percentages of sperm pathologies were measured and compared between the three periods. Data with normal distribution were analyzed using ANOVA at 5% probability, and comparisons between periods within the same species were performed using the Tukey test. An improvement was observed in the analyses of mass motility, percentage motility, andsperm vigor. Scrotal circumference had no variation. Concerning sperm pathologies, an increase inthe number of normal spermatozoids was observed due to a significant reduction in minor and majordefects, and the latter remained low even after the treatment was finished. Therefore, flunixin megluminepresented beneficial effects on seminal parameters of male goats and lamb with unfavorable spermaticcharacteristics. These findings indicate this drug may be used in the treating of...(AU)
A degeneração testicular é um processo multifatorial que leva ao aumento das prostaglandinas no plasma do ejaculado, sendo que tanto seu acréscimo quanto a redução baixam a qualidade seminal. A Flunixina Meglumine é um potente anti-inflamatório, capaz de modular a produção de prostaglandinas, amplamente difundido na reprodução de fêmeas, mas pouco utilizado em machos para esse fim. Por isso, esse trabalho buscou avaliar o efeito deste fármaco sobre a qualidade seminal de machos ovinos e caprinos que apresentem quadro espermático desfavorável à reprodução. Para tanto, um total de 15 reprodutores pertencentes à Universidade Federal do Ceará foram avaliados, dos quais foram selecionados seis bodes e quatro carneiros com sêmen de baixa qualidade, segundo os critérios do Colégio Brasileiro de Reprodução Animal (CBRA). Foram realizadas três colheitas prévias de cada animal, aplicado o tratamento com Flunixina Meglumine e, em seguida, foram colhidos ejaculados de dois momentos posteriores à aplicação do fármaco (do D21 ao D35 e do D49 ao D63). Os parâmetros espermáticos de natureza macro e microscópica, assim como a circunferência escrotal e o percentual de patologias espermáticas foram comparados entre os três momentos e os dados de distribuição normal foram avaliados por ANOVA a 5% de probabilidade e as comparações entre os momentos dentro de cada espécie quando significativa foram feitas pelo teste de Tukey. Houve melhora na motilidade massal, motilidade percentual e vigor espermático. Não ocorreu variação da circunferência escrotal e, no tocante às patologias espermáticas, observou-se um aumento no número de espermatozoides normais, devido a uma redução significativa de defeitos menores e maiores, sendo que estes permaneceram menores mesmo após cessar a influência do tratamento. Assim, a Flunixina Meglumine mostrou uma ação benéfica sobre os parâmetros seminais de machos ovinos e caprinos com quadro espermático desfavorável, sugerindo a indicação do fármaco para...(AU)
Assuntos
Animais , Masculino , Ovinos/fisiologia , Ruminantes/fisiologia , Anti-Inflamatórios não Esteroides/administração & dosagem , Anti-Inflamatórios não Esteroides/análise , Análise do Sêmen/veterináriaResumo
Diluidores de sêmen convencionais à base de leite ou gema de ovo apresentam problemas por serem produtos biológicos que possuem uma variedade de substâncias, não sendo possível conhecer a sua exata composição, além da sua capacidade contaminante e da disseminação de microrganismos patógenos. Diluidores contendo apenas componentes químicos, conhecidos em concentração, com efeitos protetores dos espermatozoides seriam, portanto, uma vantagem. Com isso, objetivou-se elaborar um diluidor quimicamente definido, à base de caseína, bem como avaliar seu efeito e eficácia no processo de congelação de sêmen de reprodutores caprinos. Para tanto, foram utilizados três bodes em idade reprodutiva e as colheitas de sêmen realizadas pelo método de vagina artificial, utilizando uma fêmea como manequim. Foram obtidos oito ejaculados por macho, totalizando 24 ejaculados. Após a colheita, os ejaculados com motilidade superior a 70% foram agrupados em pools seminais. Para congelação, foi utilizado diluidor convencional, constituindo o grupo controle (Tris-gema de ovo), assim como diluidor à base de Tris-caseína, em diferentes concentrações (CAS1: 0,125g/L; CAS2: 0,25g/L; CAS3: 0,5g/L), acrescidos com 5% de glicerol. Após diluição (200x106 espermatozoides/mL), as palhetas (0,25 mL) identificadas foram congeladas em sistema automatizado e armazenadas em nitrogênio líquido (-196 ºC). Após descongelação (37 ºC, 30 s), as amostras foram submetidas às análises de cinética (CASA), integridade e funcionalidade da membrana plasmática, integridade do acrossoma e potencial de membrana mitocondrial. Os parâmetros cinéticos não evidenciaram diferença significativa (P > 0,05), com exceção da frequência de batimento flagelar (BCF), onde o grupo CAS3 apresentou valor superior (P 0,05) ao grupo controle. Quanto às análises de integridade e funcionalidade da membrana plasmática, integridade do acrossoma e potencial de membrana mitocondrial, não se observou diferenças significativas (P > 0,05) entre os grupos avaliados. Conclui-se que o diluidor quimicamente definido à base de Tris-caseína pode ser utilizado para congelação de sêmen caprino, em virtude de preservar os parâmetros cinéticos, a integridade e funcionalidade da célula, semelhantes àqueles obtidos com diluidor convencional à base de gema de ovo.
Semen extenders based on milk or egg yolk do not have a standardized composition, which can cause variability in the results obtained, in addition for being biological material, it is able to cause contamination of semen by microorganisms. Therefore, studies on extenders containing only chemical components with protective effects on sperm are necessary. The objective of the present work was to elaborate a chemically defined extender, based on Tris-casein, and to evaluate its effect and efficacy in the goat semen freezing process. For this purpose, three goats of reproductive age were used and semen collections were obtained by the artificial vagina method and one female as dummy. Eight ejaculates were collected per male, totaling 24 ejaculates. After semen collection, the ejaculates that presented motility greater than 70% were grouped in seminal pools. For freezing, a conventional extender was used, constituting the control group (Tris-egg yolk), as well as a extender based on Tris-casein, in different concentrations (CAS1: 0.125g / L; CAS2: 0.25g / L; CAS3: 0.5g / L), added with 5% of glycerol. After dilution (200x106 sperm / mL), straws (0.25 mL) were identified and frozen in an automated system and stored in liquid nitrogen (-196 ºC). After thawing (37 ºC, 30 s), the samples were submitted to kinetic analysis (CASA), integrity and functionality of the plasma membrane, acrosome integrity and mitochondrial membrane potential. The kinetic parameters did not present significant difference (P> 0.05), with an exception of the flagellar beat frequency (BCF), where the CAS3 group had a higher value (P 0.05) than the control group. Regarding the integrity and functionality of the plasma membrane, acrosome integrity and mitochondrial membrane potential analysis, there were no significant difference (P> 0.05) between the groups evaluated. It can be concluded that the chemically defined extender based on Tris-casein presents as s a viable alternative to the conventional diluent based on Tris-egg yolk, used for freezing goat semen.
Resumo
A caprinocultura brasileira é uma atividade de grande importância na produção de proteína animal, especialmente na região Nordeste, detentora de aproximadamente 90% do efetivo caprino brasileiro. As biotécnicas reprodutivas aplicadas e direcionadas a esta espécie ainda não são amplamente empregadas nos rebanhos de produção, entretanto, vemos suas aplicações em rebanhos cuja finalidade é a venda de animais de alto valor genético. Muitas das limitações das biotécnicas reprodutivas devem-se aos custos elevados e à falta de padronização na qualidade do sêmen congelado e descongelado de caprinos. Por isso, os objetivos dos estudos foram: (I) avaliar os efeitos do antioxidante anetol no diluente de criopreservação à base de água de coco em pó (ACP-101c); (II) avaliar os efeitos do extrato proteico do plasma seminal de caprinos adicionado ao diluente de criopreservação seminal à base de água de coco em pó (ACP-101c) na congelabilidade do sêmen de caprinos. Para tanto, um estudo prévio da técnica de congelação do sêmen caprino e diferentes diluentes que apresentam baixo custo e fácil preparo foi realizado. Os resultados das avaliações de cinética espermática e viabilidade demonstraram que o diluente ACP-101c apresentou resultados iguais ou superiores quando comparado aos demais diluentes. A partir desses achados, no experimento I foram utilizados 45 ejaculados caprinos diluídos em ACP-101c (tratamento controle) formulado para criopreservação adicionado de 30, 300 ou 2000 g/ml de anetol. As amostras foram descongeladas e avaliadas quanto à morfologia, cinética (sistema CASA), integridade de membranas e concentração de espécies reativas de oxigênio (citometria de fluxo). Os resultados da adição de anetol evidenciaram aumentou das anormalidades morfológicas (P < 0,05), no entanto, sem comprometer a cinética dos espermatozoides. Apesar dos demonstrados efeitos do anetol no controle na produção de ROS, não houve melhoria da qualidade do sêmen. No experimento II foram obtidas quatro frações de proteínas do plasma seminal de cabra (FPPS-A: 186 mg; FPPS-B: 329 mg; FPPS-C: 459 mg e FPPS-D; 48 mg), dentre as quais foi selecionada a fração FPPS-B, por apresentar maiores concentrações de proteínas com peso molecular equivalente a 14 - 15 kDa e 20 - 22 kDa e menores concentrações de outras proteínas, a qual foi adicionada na diluição de sêmen caprino das raças Anglo-Nubiana e Saanen. Na raça Anglo-Nubiana a concentração de 40 g/ml de FPPS-B foi superior ao controle na morfologia espermática, na cinética, na integridade da membrana plasmática e acrossoma e na população de espermatozoides com baixo potencial de membrana mitocondrial. Na raça Saanen a concentração de 10 g/ml de FPPS-B foi superior ao controle na morfologia espermática, motilidade progressiva e integridade do acrossoma. Em conclusão, o Anetol apresentou ação antioxidante no sêmen de caprino, entretanto não apresentou efeitos significativos quanto a cinética e nas maiores concentrações causou danos a morfologia espermática. Quanto a suplementação de proteínas do plasma seminal caprino ao diluente de criopreservação seminal ACP-101c demonstra diferentes efeitos positivos sobre os parâmetros seminais por raças, sendo benéfica para a conservação de todos os parâmetros de qualidade do sêmen pós-descongelamento em todos os níveis de adição para a raça Anglo-Nubiana e melhorando a qualidade cinética espermática de bodes Saanen.
Brazilian goat farming is an activity of great importance in the production of animal protein, especially in the northeast region, which holds approximately 90% of the Brazilian population. The reproductive biotechnics applied and directed to this species have not yet effectively reached a large-scale applicability in production herds, however, it has been routinely used in herds with the purpose of selling animals of high genetic value. Many of the limitations of reproductive biotechnics are due to the lack of high costs and the lack of standardization in the quality of frozen and thawed goat semen. Therefore, the objectives of the studies were: (1) to evaluate the effects of the antioxidant anethole in the powdered coconut water-based cryopreservation diluent (ACP-101c); (2) to evaluate the effects of goat seminal plasma protein extract added to powdered coconut water-based cryopreservation extender (ACP-101c) on the freezeability of goat semen. A previous study of the technique of freezing goat semen and different diluents that are low cost and easy to prepare was carried out. The results of the evaluations of spermatozoa kinetics and viability showed that the ACP extender presented equal and superior results compared to the other extenders. At the experiment I, 45 ejaculates were used, in which all were submitted to a control treatment of ACP-101c formulated for cryopreservation; control with 30, 300 or 2000 g / ml of anethole. The samples were thawed and evaluated for morphology, kinetics (CASA), membrane integrity and concentration of reactive oxygen species (flow cytometry). The results of the addition of anethole evidenced an increased morphological abnormalities (P < 0.05), however, it did not affect spermatozoa kinetics. In flow cytometry, it evidenced a control in the production of ROS, however not enough to improve the quality of the semen. In experiment II, four fractions of goat seminal plasma proteins were obtained (FPPS-A: 186 mg; FPPS-B: 329 mg; FPPS-C: 459 mg and FPPS-D; 48 mg). FPPS-B had the highest concentrations of proteins with molecular weight equivalent to 14 - 15 kDa and 20 - 22 kDa and the lowest concentrations of other proteins, and this fraction was used in this study of semen cryopreservation. In the Anglo-Nubian breed, the concentration of 40 g / ml of FPPS-B was superior to the control in sperm morphology, kinetics, plasma membrane integrity and acrosome, in the spermatozoa population with mitochondrial membrane potential. In the Saanen breed, the concentration of 10 g / ml of FPPS-B was superior to the control in sperm morphology, progressive motility and acrosome integrity. In conclusion, the Anethole showed antioxidant action in goat semen, however it did not show significant effects on kinetics and at higher concentrations caused damage to sperm morphology. How much, caprine seminal plasma protein supplementation in seminal cryopreservation extender ACP101c demonstrates different positive effects on seminal parameters by breed, being beneficial for the conservation of all post-thaw semen quality parameters at all addition levels for the Anglo-Nubian breed, and improving the kinetic quality of Saanen breed semen.
Resumo
Este estudo teve por objetivo investigar o efeito da proteína anticongelante do tipo III, adicionada ao diluidor de criopreservação de espermatozoide caprino, sobre a viabilidade espermática pós-descongelação. No primeiro experimento, 16 pares de testículos e epididimos foram obtidos em abatedouro, e transportados a, aproximadamente, 5 °C em caixa térmica em torno de 10 horas, até o recebimento e processamento do mesmo. Os espermatozoides foram recuperados e avaliados em microscópio de contraste de fase. Congelados em diluidor à base de Tris-gema de ovo, suplementado com proteína anticongelante tipo III PAC III (0; 1; 10; 100 g/mL), utilizando o sistema automatizado. Após descongelação (37 oC/30 seg), foram avaliadas cinética espermática, pelo sistema automatizado CASA, integridade de membrana plasmática e acrossomal, potencial de membrana mitocondrial e produção intracelular de ROS, por citometria de fluxo. Não houve diferença (P 0,05) entre os grupos experimentais para os parâmetros de cinética espermática, potencial de membrana mitocondrial e produção de ROS. A integridade de membrana plasmática e acrossomal de espermatozoides congelados com 100 g/mL de PAC III foi inferior (P< 0,05) ao grupo controle. O segundo experimento foi dividido em duas partes, onde foi investigado o efeito da PAC III em diluidor à base de Tris-gema de ovo (Experimento I) e Leite desnatado (Experimento II). O sêmen de quatro bodes Saanen (6 repetições) foi utilizado para formação do pool e testado nos Diluentes Tris-gema de ovo (Experimento I) ou Leite desnatado (Experimento II), ambos suplementados com concentrações da PAC III (0; 1; 10; 100 g/mL). Após a diluição (200 x 106 espermatozoides/mL), as amostras foram envasadas em palhetas (0,25 mL) e congeladas (-196 ºC). Para cada grupo, duas palhetas foram descongeladas (37 ºC por 30 s) e agrupadas para análise in vitro da cinética espermática (CASA) e da integridade de membrana plasmática e de acrossoma (microscopia de epifluorescência). Duas palhetas foram descongeladas para análise ultraestrutural dos espermatozoides por microscopia eletrônica de varredura. Não houve diferença (P 0,05) entre os grupos experimentais dos dois Experimentos para os parâmetros de cinética espermática, integridade de membrana plasmática e acrossomal. Os resultados da avaliação ultraestrutural mostraram que independente do diluidor utilizado, a PAC III danificou a membrana plasmática das células espermáticas. Baseado nos resultados do presente estudo, conclui-se que a adição da PAC III ao diluidor Tris-gema de ovo não favorece a criopreservação de espermatozoides epididimários caprinos, além disso, quando em alta concentração (100 g/mL) compromete a integridade de membrana plasmática e acrossomal dessas células. Ainda, que a PAC III, nas concentrações utilizadas, em diluidor à base de Tris-gema de ovo ou leite desnatado, não preserva a qualidade seminal de espermatozoides ejaculados caprinos.
This study aimed to investigate the effect of antifreeze protein type III (AFP III) added to cryopreservation extender of goat sperm on post-thawing sperm viability, with the objective of improving semen cryopreservation protocols. In the first experiment, 16 testicular pairs were collected in a slaughterhouse and transported at approximately 5 °C in a thermal box around 10 hours, until processing in the laboratory. Epididymis spermatozoa were recovered by washing and evaluated with phase contrast microscope. Then cryopreserved in Egg Yolk based extender , supplemented with antifreeze protein type III (0; 1; 10; 100 g/mL), using automated system. After thawing (37 C /30 sec), spermatic kinetics were evaluated by CASA automated system, acrosome plasma membrane integrity, mitochondrial membrane potential and intracellular ROS production by flow cytometry. No difference (P 0.05) was seen between the experimental groups for the parameters of spermatic kinetics, mitochondrial membrane potential and ROS production. However, the integrity of plasma membrane and acrosome of frozen sperm with 100 g/mL of AFP III was lower (P < 0.05) when compared to control group. The addition of AFP III to tris-egg yolk extender, used in the freezing of sperm obtained from the epididymis of goats, does not favor preservation of goat sperm recovered from epididymis. In addition, when at high concentration (100 g/mL) it compromises the integrity of the plasma and acrosome membrane of these cells. The second experiment was divided into two parts: Experiment I and II, where the effect of AFP III on extenders based on Tris- egg yolk and skimmed milk was investigated, respectively. The semen of four Saanen goats (6 replicates) was used for pool formation and used in Egg Tris-yolk Diluent (Experiment I) and Skim Milk Based Diluent (Experiment II), both supplemented with AFP III concentrations, obtaining the following sample groups: 0; 1; 10; 100 g/mL. After dilution (200 x 106 sperm/mL), the samples were filled in 0.25 mL straws and frozen (-196 ºC). For each group, two straws were thawed (37 ºC for 30 s) and grouped for in vitro analysis of spermatic kinetics, through CASA; and plasma membrane integrity (IMP) and acrosome integrity (IAC) by epifluorescence microscopy. Two straws were thawed for ultrastructural analysis of spermatozoa by scanning electron microscopy. No difference (P 0.05) was seen between experimental groups from the two experiments for the parameters of kinetics, plasma membrane integrity and acrosome. Except for the progressive motility that the concentration of 1 and 100 g/mL differed (P < 0.05) from each other when skim milk Based Diluent was used. The results of the ultrastructural evaluation showed that regardless the diluent used, AFP III damaged the plasma membrane of the spermatic cells in a dose-dependent manner. Based on the results of the present study, it is concluded that AFP III in the concentrations used, in extenders based on egg tris-yolk and skimmed milk, does not improve seminal quality.
Resumo
Cryopreservation of semen is of great importance for various reproductive biotechnologies such as artificial insemination (IA), In Vitro Embryo Production (PIV) and Intracytoplasmic Sperm Injection (ICSI). The objective of this work was to evaluate the stability and persistence of motility and strength of sperm, as well as changes in the plasma membrane after the addition of Ringer Lactate, sodium citrate 2.92% or TRIS solution in thawed goat semen. Semen was collected from two Alpine Brown goats, and standard procedures for cryopreservation and seminal analysis were performed. After thawing the semen, the extenders Ringer Lactate, sodium citrate 2.92% and TRIS solution were added and Thermoresistance (TTR), Supravital and Morphology Tests were carried out. In TTR, only the group received TRIS solution presented motility and strength for a longer period (90 minutes; P 0,05). No influence of the addition of the solutions was found in the morphological analysis, as well as in the Supravital Test, which showed values close to those found for motility (P> 0.05). We concluded that the addition of the solutions does not allow a large persistence of motility and strength of thawed sperm, but TRIS solution could be used for expansion of seminal doses used in vitro reproductive biotechnology.
A criopreservação do sêmen é de grande importância para diversas biotecnologias da reprodução, como Inseminação Artificial (IA), Produção de Embriões In Vitro (PIV) e Injeção Intracitoplasmática de Espermatozoides (ICSI). Avaliou-se a estabilidade e persistência da motilidade e vigor dos espermatozoides, assim como alterações da membrana plasmática, após a adição de Ringer com Lactato, citrato de sódio 2,92% ou solução TRIS ao sêmen caprino descongelado. O sêmen foi coletado de dois bodes da raça Parda Alpina, realizando-se os procedimentos padrões de análise e criopreservação seminal. Após a descongelação do sêmen, foram adicionados os diluentes Ringer Lactato, citrato de sódio 2,92% ou solução TRIS, realizando-se os Testes de Termorresistência (TTR), Supravital e Morfológico. No TTR, somente o grupo a que foi adicionada a Solução TRIS obteve motilidade e vigor por maior período (90 minutos; P 0,05). Não foi encontrada influência da adição das soluções na análise morfológica, assim como no teste Supravital, o qual apresentou valores próximos aos encontrados para motilidade (P> 0,05). Concluiu-se que a adição das soluções não permite uma grande persistência da motilidade e vigor dos espermatozoides descongelados, porém a solução TRIS poderia ser utilizada para expansão de doses seminais utilizadas em biotecnologias reprodutivas in vitro.
Resumo
A reprodução animal depende das condições nutricionais e status sanitário de matrizes e reprodutores e, para os pequenos ruminantes domésticos machos, a degeneração testicular (DT) é uma das principais responsáveis pela subfertilidade. Uma importante causa de DT é a ocorrência de estresse térmico, decorrente das altas temperaturas da região que eles vivem, assim, o presente trabalho foi realizado objetivando testar um protocolo de estresse térmico induzido por insulação testicular intermitente, que mimetizasse os efeitos do estresse térmico natural, monitorando variáveis seminais, testiculares e hormonal, correlacionando-as às imagens termais escrotais produzidas no decorrer do experimento, bem como acompanhar o processo de retorno à condição de normalidade. Para tanto, após um período de adaptação, 10 machos caprinos de 18 meses de idade foram submetidos a um protocolo intermitente de insulação testicular por quatro noites consecutivas e avaliou-se os parâmetros seminais, circunferência escrotal, e imagens termais da superfície escrotal, comparando os momentos antes, durante e após o estresse térmico induzido. Os dados obtidos foram tabulados e expressos na forma de média e erro padrão, e aqueles que não apresentaram normalidade no teste de Shapiro-Wilk foram transformados por arcoseno ou (log (x+1)) e submetidos à ANOVA a 5% de probabilidade, e comparados pelo teste de Tukey. Após a insulação testicular, não ocorreu alteração significativa nos valores de circunferência escrotal ou temperatura retal, todavia, houve redução significativa (p<0,05) na testosteronemia e parâmetros seminais avaliados. Assim, a insulação testicular intermitente se mostrou eficaz em causar um quadro de degeneração testicular em curto período de tempo, com reversão mais precoce que o observado em protocolos contínuos, e os termogramas obtidos permitiram estabelecer padrões de imagens dentro e fora da normalidade térmica da superfície escrotal, sendo uma técnica auxiliar ao exame clínico andrológico para diagnóstico de degenerações variadas que comprometem a qualidade seminal em caprinos.
Animal reproduction depends on the nutritional conditions and health status of breeders and breeders and, for small male domestic ruminants, testicular degeneration (TD) is one of the main factors responsible for subfertility. An important cause of TD is the occurrence of thermal stress, due to the high temperatures in the region where these animals live. Thus, the present work was carried out aiming to test a thermal stress protocol induced by intermittent testicular insulation that mimics the effects of natural thermal stress, monitoring seminal, testicular and hormonal variables correlating them to the scrotal thermal images produced during the experiment. Then, the process of returning to normal condition was monitored. For this purpose, after an adaptation period, 10 male goats of 18 months of age were submitted to an intermittent testicular insulation protocol for four consecutive nights and the seminal parameters, scrotal circumference, and thermal images of the scrotal surface were evaluated, comparing the moments before, during and after the induced thermal stress. The data obtained were tabulated and expressed as mean and standard error. Those that did not show normality in the Shapiro-Wilk test were transformed by arcosene or [log (x + 1)] and submitted to ANOVA at 5% probability and compared by the Tukey test. After testicular insulation, there was no significant change in relation to the scrotal circumference or rectal temperature values. However, there was a significant reduction (p <0.05) in testosteronemia and evaluated seminal parameters. Thus, intermittent testicular insulation proved to be effective in causing testicular degeneration in a short period of time, with earlier reversal than that observed in continuous protocols. In addition, the obtained thermograms made it possible to establish imaging patterns inside and outside of the thermal normality of the scrotal surface, being an auxiliary technique for the andrological clinical examination to diagnose various degenerations that compromise the seminal quality in goats.
Resumo
A eletroejaculação (EE) corresponde a uma técnica que permite a coleta de sêmen de animais domésticos e selvagens, de forma independente à libido ou período de acasalamento de cada espécie. No entanto, o procedimento de EE provoca intensa contração muscular involuntária, esforço, vocalização e decúbito ocasionado pela estimulação aguda da inervação pélvica caudal, manifestações que representam importantes indicadores de desconforto doloroso e estresse animal. Nesse contexto, o objetivo do estudo foi avaliar dois protocolos de bloqueio anestésico local e duas vias de acesso à inervação da região pélvica como alternativas para redução do desconforto e estresse durante a eletrojeculação de caprinos. Para o estudo foram selecionados 7 reprodutores mestiços da raça Anglo-Nubiano. Todos os animais passaram por 5 grupos experimentais para coleta de sêmen: G1 (grupo controle), eletroejaculação convencional sem bloqueio anestésico local; G2, EE com bloqueio ventral da inervação pélvica utilizando cloridrato de lidocaína 2%; G3, eletroejaculação com bloqueio ventral da inervação pélvica, utilizando associação de cloridrato de lidocaína 2% e citrato de fentanila; G4, eletroejaculação com bloqueio da inervação pélvica através do acesso perineal, utilizando lidocaína 2%; G5, EE com bloqueio da inervação pélvica através do acesso perineal, utilizando associação de lidocaína 2% e citrato de fentanila. Todos os reprodutores passaram pelos 5 tratamentos e com 3 repetições para cada grupo experimental. As amostras espermáticas resultantes da eletroejaculação foram submetidas à análise subjetiva de cinética, morfologia e integridade de membrana plasmática. Antes e após a EE foram avaliadas a pressão arterial, frequência cardíaca (FC), respiratória (FR), além da coleta de amostras de sangue venoso para a quantificação dos níveis de cortisol plasmático e creatinina fosfoquinase (CPK). Como parâmetros comportamentais foi observada a ocorrência de ataxia, vocalização e alteração postural de todos animais após a eletroejaculação. Não foram observadas diferenças (P<0,05) para nenhum dos parâmetros de qualidade seminal, ataxia, vocalização, FC e para as concentrações de cortisol quando comparados os diferentes grupos experimentais. Foi necessário menor número de estímulos elétricos para resultar na ejaculação dos animais do G1, que apresentaram menor concentração de CPK plasmático em relação aos grupos tratados. No entanto, maiores valores para a pressão arterial média e diastólica foram associados a pacientes que não receberam bloqueio anestésico previamente à EE. Conclui-se que os bloqueios anestésicos da região pélvica utilizando cloridrato de lidocaína associado ou não ao citrato de fentanila não permitem redução expressiva da dor e desconforto associados à eletroejaculação de caprinos, resultando no aumento do tempo para obtenção dos ejaculados e do número médio de estímulos elétricos necessários para o desencadeamento do processo ejaculatório na espéc
Electro-ejaculation (EE) corresponds to a technique that allows the collection of semen from domestic and wild animals, independently of the libido or mating period of each species. However, the EE procedure causes intense involuntary muscle contraction, effort, vocalization and decubitus caused by the acute stimulation of the caudal pelvic innervation, manifestations that represent important indicators of painful discomfort and animal stress. In this context, the objective of the study was to evaluate two local anesthetic block protocols and two access routes to the innervation of the pelvic region as alternatives to reduce discomfort and stress during electro-regulation of goats. For the study, 7 crossbred Anglo-Nubian breeders were selected. All animals went through 5 experimental groups to collect semen: G1, conventional electroejaculation without local anesthetic block; G2, EE with ventral block of pelvic innervation using 2% lidocaine hydrochloride; G3, electroejaculation with ventral block of pelvic innervation, using a combination of 2% lidocaine hydrochloride and fentanyl citrate; G4, electroejaculation with pelvic innervation block through perineal access, using 2% lidocaine; G5, EE with pelvic innervation block through perineal access, using a combination of 2% lidocaine and fentanyl citrate. All breeders went through 5 treatments and with 3 repetitions for each experimental group. The sperm samples resulting from electroejaculation were subjected to subjective analysis of kinetics, morphology and integrity of the plasma membrane. Before and after EE, blood pressure, heart rate (HR), respiratory rate (RF) were evaluated, in addition to the collection of venous blood samples for the quantification of plasma cortisol and creatinine phosphokinase (CPK) levels. As behavioral parameters, the occurrence of ataxia, vocalization and postural changes in all animals after electroejaculation was observed. There were no differences (P <0.05) for any of the seminal quality, behavioral, postural, HR parameters and cortisol concentrations when comparing the different experimental groups. A smaller number of electrical stimuli was necessary to result in the ejaculation of G1 animals, which had a lower plasma CPK concentration compared to the treated groups. However, higher values for mean and diastolic blood pressure were associated with patients who had not received anesthetic block prior to EE. It is concluded that anesthetic blocks in the pelvic region using lidocaine hydrochloride associated or not with fentanyl citrate do not allow a significant reduction in pain and discomfort associated with the electroejaculation of goats, resulting in an increase in the time to obtain ejaculates and the average number of stimuli necessary to trigger the ejaculatory process in the species.
Resumo
Cryopreservation of semen is of great importance for various reproductive biotechnologies such as artificial insemination (IA), In Vitro Embryo Production (PIV) and Intracytoplasmic Sperm Injection (ICSI). The objective of this work was to evaluate the stability and persistence of motility and strength of sperm, as well as changes in the plasma membrane after the addition of Ringer Lactate, sodium citrate 2.92% or TRIS solution in thawed goat semen. Semen was collected from two Alpine Brown goats, and standard procedures for cryopreservation and seminal analysis were performed. After thawing the semen, the extenders Ringer Lactate, sodium citrate 2.92% and TRIS solution were added and Thermoresistance (TTR), Supravital and Morphology Tests were carried out. In TTR, only the group received TRIS solution presented motility and strength for a longer period (90 minutes; P 0,05). No influence of the addition of the solutions was found in the morphological analysis, as well as in the Supravital Test, which showed values ??close to those found for motility (P> 0.05). We concluded that the addition of the solutions does not allow a large persistence of motility and strength of thawed sperm, but TRIS solution could be used for expansion of seminal doses used in vitro reproductive biotechnology.
A criopreservação do sêmen é de grande importância para diversas biotecnologias da reprodução, como Inseminação Artificial (IA), Produção de Embriões In Vitro (PIV) e Injeção Intracitoplasmática de Espermatozoides (ICSI). Avaliou-se a estabilidade e persistência da motilidade e vigor dos espermatozoides, assim como alterações da membrana plasmática, após a adição de Ringer com Lactato, citrato de sódio 2,92% ou solução TRIS ao sêmen caprino descongelado. O sêmen foi coletado de dois bodes da raça Parda Alpina, realizando-se os procedimentos padrões de análise e criopreservação seminal. Após a descongelação do sêmen, foram adicionados os diluentes Ringer Lactato, citrato de sódio 2,92% ou solução TRIS, realizando-se os Testes de Termorresistência (TTR), Supravital e Morfológico. No TTR, somente o grupo a que foi adicionada a Solução TRIS obteve motilidade e vigor por maior período (90 minutos; P 0,05). Não foi encontrada influência da adição das soluções na análise morfológica, assim como no teste Supravital, o qual apresentou valores próximos aos encontrados para motilidade (P> 0,05). Concluiu-se que a adição das soluções não permite uma grande persistência da motilidade e vigor dos espermatozoides descongelados, porém a solução TRIS poderia ser utilizada para expansão de doses seminais utilizadas em biotecnologias reprodutivas in vitro.
Assuntos
Animais , Análise do Sêmen/veterinária , Embriologia/instrumentação , Ruminantes/embriologia , Sêmen/fisiologia , Contagem de Espermatozoides , Diluição , EspermatozoidesResumo
Cryopreservation of semen is of great importance for various reproductive biotechnologies such as artificial insemination (IA), In Vitro Embryo Production (PIV) and Intracytoplasmic Sperm Injection (ICSI). The objective of this work was to evaluate the stability and persistence of motility and strength of sperm, as well as changes in the plasma membrane after the addition of Ringer Lactate, sodium citrate 2.92% or TRIS solution in thawed goat semen. Semen was collected from two Alpine Brown goats, and standard procedures for cryopreservation and seminal analysis were performed. After thawing the semen, the extenders Ringer Lactate, sodium citrate 2.92% and TRIS solution were added and Thermoresistance (TTR), Supravital and Morphology Tests were carried out. In TTR, only the group received TRIS solution presented motility and strength for a longer period (90 minutes; P 0,05). No influence of the addition of the solutions was found in the morphological analysis, as well as in the Supravital Test, which showed values ??close to those found for motility (P> 0.05). We concluded that the addition of the solutions does not allow a large persistence of motility and strength of thawed sperm, but TRIS solution could be used for expansion of seminal doses used in vitro reproductive biotechnology.(AU)
A criopreservação do sêmen é de grande importância para diversas biotecnologias da reprodução, como Inseminação Artificial (IA), Produção de Embriões In Vitro (PIV) e Injeção Intracitoplasmática de Espermatozoides (ICSI). Avaliou-se a estabilidade e persistência da motilidade e vigor dos espermatozoides, assim como alterações da membrana plasmática, após a adição de Ringer com Lactato, citrato de sódio 2,92% ou solução TRIS ao sêmen caprino descongelado. O sêmen foi coletado de dois bodes da raça Parda Alpina, realizando-se os procedimentos padrões de análise e criopreservação seminal. Após a descongelação do sêmen, foram adicionados os diluentes Ringer Lactato, citrato de sódio 2,92% ou solução TRIS, realizando-se os Testes de Termorresistência (TTR), Supravital e Morfológico. No TTR, somente o grupo a que foi adicionada a Solução TRIS obteve motilidade e vigor por maior período (90 minutos; P 0,05). Não foi encontrada influência da adição das soluções na análise morfológica, assim como no teste Supravital, o qual apresentou valores próximos aos encontrados para motilidade (P> 0,05). Concluiu-se que a adição das soluções não permite uma grande persistência da motilidade e vigor dos espermatozoides descongelados, porém a solução TRIS poderia ser utilizada para expansão de doses seminais utilizadas em biotecnologias reprodutivas in vitro.(AU)
Assuntos
Animais , Embriologia/instrumentação , Ruminantes/embriologia , Sêmen/fisiologia , Análise do Sêmen/veterinária , Diluição , Contagem de Espermatozoides , EspermatozoidesResumo
Diluidores de sêmen convencionais à base de leite ou gema de ovo apresentam problemas por serem produtos biológicos que consistem em uma variedade de substâncias, não sendo possível conhecer a sua exata composição, além da sua capacidade contaminante e da disseminação de microrganismos patógenos. Diluidores contendo apenas componentes químicos, conhecidos em concentração, com efeitos protetores dos espermatozoides seriam, portanto, uma vantagem. Com isso, objetivou-se avaliar os efeitos da adição de caseína ao diluidor de refrigeração de sêmen caprino e a produção de novo diluidor, tendo como principal agente crioprotetor, não-penetrante, a caseína. Para coleta de sêmen foram utilizados três bodes, sexualmente maduros, e as colheitas de sêmen foram realizadas pelo método de vagina artificial, e uma fêmea como manequim. O sêmen foi diluído (200x106 espermatozoide/mL), de acordo com os experimentos. Exp. I - diluidor à base de leite desnatado (LD), adicionado ou não de diferentes concentrações de caseína (0.25g/L e 0.5g/L); Exp. II - diluidor à base de leite desnatado ou diluidor quimicamente definido (QD) à base de caseína (0.5g/L). Imediatamente após a diluição, as amostras foram armazenadas em geladeira (5 °C) e analisadas após estabilização (0h) e após 24, 48 e 72 horas de armazenamento, quanto à cinética espermática (CASA) e integridade de membrana plasmática e acrossomal (citometria de fluxo). No Exp. I, observou-se que a adição de caseína não teve efeito sobre os parâmetros cinéticos, mas, após 24h, o diluidor suplementado com caseína na concentração de 0.25g/L apresentou maior percentual de gametas com integridade de membrana plasmática e acrossomal (p=0.013), quando comparado ao diluidor sem adição de caseína. No Exp. II Os parâmetros cinéticos analisados pelo CASA não apresentaram diferença significativa, com exceção da LIN (linearidade), onde, no tempo de 72h, o leite teve melhor desempenho do que o QD (p=0.016). Na integridade de membrana plasmática e acrossomal observou-se efeito fixo de tratamento (p=0.008), onde o diluidor de leite determinou maior percentual de gametas com integridade na membrana plasmática e acrossomal do que o QD. Também houve interação tratamento x tempo, no tempo 48h (p=0.007) e no tempo 72h (p=0.018), com diluidor à base de leite desnatado apresentando melhor desempenho. Conclui-se que a adição de caseína a 0.25g/L, como suplementação ao diluente à base de leite desnatado, preserva a integridade da membrana plasmática e acrossomal de espermatozoides caprinos, submetidos a 24 horas de refrigeração. Além disso, em virtude do diluidor quimicamente definido preservar a cinética de espermatozoides caprinos, após 48 horas de refrigeração, e a integridade de membrana plasmática e acrossomal, até 24 horas de refrigeração, é possível sugerir a realização de mais estudos visando ampliar os benefícios da utilização deste diluidor, em substituição ao diluidor convencional à base de leite desnatado para refrigeração de sêmen caprino.
Conventional semen extenders - based on milk or egg yolk - present problems because they are biological products that consist of a variety of substances, and it is not possible to know their exact composition, in addition to their contaminating capacity and the spread of pathogenic microorganisms. Extenders containing only chemical components, known in concentration, with protective effects of sperm would therefore be an advantage. Thus, the objective was to evaluate the effects of adding casein to the goat semen cooling extender and the production of a new extender with casein as the main non-penetrating cryoprotective agent. To collect semen, three goats were used, sexually mature, semen collections were performed by the artificial vagina method, with the help of a female as a mannequin. The semen was diluted (200x106 sperm / mL) according to the experiments. Exp. I extender based on skim milk (LD), supplemented or not with different concentrations of casein (0.25g / L and 0.5g / L); Exp. II extender based on skim milk or chemically defined extender (QD) based on casein (0.5g / L). Immediately after dilution, the samples were stored in a refrigerator (5 ° C) and analyzed after stabilization (0h) and after 24, 48 and 72 hours of storage, for sperm kinetics (CASA) and plasma and acrosomal membrane integrity (cytometry flow). In Exp. I, it was observed that the addition of casein had no effect on the kinetic parameters, but after 24h the extender supplemented with casein at a concentration of 0.25g/L showed greater integrity of the plasma and acrosomal membrane (p=0.013), when compared to the extender without the addition of casein. In Exp. II, the kinetic parameters analyzed by CASA showed no significant difference, except for LIN (linearity), where in 72h the skim milk extender performed better than the QD (p=0.016). In the integrity of the plasma and acrosomal membrane, a fixed treatment effect was observed (p=0.008), where the skim milk extender determined greater integrity in the plasma and acrosomal membrane than the QD. There was also an interaction between treatment and time, at time 48h p=0.007 and time 72h p = 0.018, with a extender based on skim milk showing better performance. It is concluded that the addition of 0.25g/L casein, as a supplement to the skim milk extender, preserves the integrity of the plasma and acrosomal membrane of goat sperm, submitted to 24 hours of refrigeration. In addition, due to the chemically defined diluter preserving the goat sperm kinetics, after 48 hours of refrigeration, and the integrity of the plasma and acrosomal membrane, up to 24 hours of refrigeration, it is possible to suggest further studies aimed at expanding the benefits of use of this extender, replacing the conventional extender based on skimmed milk for cooling goat semen.
Resumo
O processo de criopreservação causa danos aos espermatozoides, tais como o estresse oxidativo, com a formação de espécies reativas de oxigênio. O trabalho teve como objetivo avaliar a adição de diferentes concentrações de acetato de alfa tocoferol (vit. E) ao meio à base de água de coco em pó (ACP-101c). Foram realizadas oito coletas de sêmen de cinco bodes, com auxílio de vagina artificial; em seguida foram reunidos em um pool, dividido em quatro alíquotas iguais, e diluídas em um passo nos diluentes: T1 controle (ACP-101c); T2 (ACP-101c+0,5% vit.E ); T3 (ACP-101c+1% vit. E); e T4 (ACP-101c+1,5% vit. E). As amostras foram envasadas em palhetas de 0,5ml e submetidas a uma curva de refrigeração de -1,07°C/min., estabilizadas a 4°C por 1h, congeladas em vapor de nitrogênio (-60°C) e armazenadas em nitrogênio líquido (-196°C). Após a descongelação, as amostras foram avaliadas quanto aos seguintes parâmetros: motilidade total (MT), motilidade progressiva (MP), viabilidade, hiposmótico (HOST), fragmentação do DNA, e atividade mitocondrial (p<0,05). Nas amostras descongeladas, a MT no T3 (65%) foi superior ao T1 (54,5%) e T4 (55,8%), e semelhante a T2 (59,9%). A MP no T3 foi superior aos demais tratamentos, com taxa 47,3%. Na viabilidade, T3 (96,3%) foi superior ao T1 (84,6%) e semelhante aos demais tratamentos. Quanto aos parâmetros HOST e atividade mitocondrial, não houve diferença entre os tratamentos. Pode-se concluir que a criopreservação do sêmen caprino em diluente ACP-101c adicionado de 1% de acetato de alfa tocoferol (vit. E) melhora a qualidade espermática pós-descongelação, com melhores percentuais espermáticos de motilidade total, motilidade progressiva, viabilidade e integridade de DNA.
The cryopreservation process causes damage to the sperm, such as oxidative stress, with the formation of reactive oxygen species. The objective of this work was to evaluate the addition of different concentrations of vitamin E to the powdered coconut water-based medium (ACP-101c). Eight collections of five goats were performed, with the aid of an artificial vagina; then assembled in a pool, divided into four equal aliquots, and diluted in one step in the extenders: T1-control (ACP-101c); T2 (ACP-101c + 0,5% vit. E); T3 (ACP-101c + 1% vit. E); and T4 (ACP-101c + 1.5% vit. E). The samples were packed in 0.5 ml straws and subjected to a refrigeration curve of -1.07 °C/min, stabilized at 4 °C for 1 hour, frozen in nitrogen vapor (-60 °C) and stored in liquid nitrogen (-196 °C). After thawing, the samples were evaluated for the following parameters: total motility (MT), progressive motility (MP), viability, hyposmotic (HOST), DNA fragmentation, and mitochondrial activity (p < 0.05). In thawed samples, MT in T3 (65%) was superior to T1 (54.5%) and T4 (55.8%), and similar to T2 (59.9%). MP in T3 was higher than the other treatments, with rate 47.3%. In viability, T3 (96.3%) was superior to T1 (84.6%) and similar to other treatments. Regarding HOST parameters and mitochondrial activity, there was no difference between treatments. It can be concluded that cryopreservation of goat semen in ACP-101c diluent added with 1% alpha tocopherol acetate (vit E) improves post-thawing sperm quality, with better sperm motility, progressive motility, viability and integrity of DNA.